PRACTICA HPLC - ELEMENTE HARD-SOFT,

OPTIMIZARE ŞI APLICAŢII
Componentele principale ale HPLC
- sistemul de introducere al probei -

Cu buclă internă

Cu buclă externă
(volum de injecţie
controlat din seringă)
Componentele principale ale HPLC
- injector cu buclă externă -
 Componentele principale ale HPLC
- sisteme de distribuţie a fazei mobile -

Pompe cu acţiune reciprocă

Avantaje:
- utilizare continuă
- eliminarea pulsaţiilor
- volum mort mic – adaptabil la schimbări
rapide în compoziţia fazei mobile
 Componentele principale ale HPLC
- sisteme de distribuţie a fazei mobile -

Pompe tip seringă şi de presiune constantă

Avantaje:
- preţ scăzut
- capacitate de lucru la presiune înaltă
- stabilitatea debitului de solvent
 Componentele principale ale HPLC
- sisteme pentru gradient de solvent -
 Componentele principale ale HPLC
- detectori -

Caracteristicile unui detector ideal:

● Senzitivitate foarte bună

● Stabilitate şi reproductibilitate bună

● Răspuns linear pe cât mai multe ordine de

mărime
● Volum intern cât mai mic

● Timp de răspuns mic şi independent de debit,

schimbări de temperatură sau presiune

● Versatilitate şi uşurinţă în exploatare

● Răspuns similar la analiţi sau selectiv pe clase

● Nedistructiv
Componentele principale ale HPLC
- detector UV / VIZ -
Componentele principale ale HPLC
- detector tip diode-array -
Componentele principale ale HPLC
- detectori de fluorescenţă -
Componentele principale ale HPLC
- detector electrochimic -
Componentele principale ale HPLC
- detector refractometric -
 Componentele principale ale HPLC
- alte tipuri de detectori -

Detector cu desolvatare pe curea pentru

Detector cu sursă laser FID, ECD sau FT-IR
Componentele principale ale HPLC
- coloana cromatografică -
 Coloana cromatografică
- interacţia cu faza staţionară -
 Coloana cromatografică
- interacţia cu faza staţionară -
 Coloana cromatografică
- interacţia cu faza staţionară -

Mod de operare LC Materiale Faza mobilă Interacţie

Cromatografie cu fază normală Silica gel n-Hexan/s.p. Adsorbţie

Cromatografie cu fază inversă Silica-C18(ODS) MeOH/apă Hidrofobic
Cromatografie de excluziune sterică Porous polymer THF Permeaţie prin gel
Cromatografie de schimb ionic Ion exchange gel Sol tampon Schimb ionic
Cromatografie de afinitate Packings with ligand Sol tampon Afinitate
 Coloana cromatografică
- influenţa polarităţii solventului -
 Coloana cromatografică
- seria eluotropă pentru solvenţi -
 Coloana cromatografică
- influenţa dimensiunii particulei -
 Coloana cromatografică
- influenţa dimensiunii particulei -
 Coloana cromatografică
- influenţa polarităţii fazei mobile -
 Coloana cromatografică
- izocratic comparativ cu gradient -
 Coloana cromatografică
- izocratic comparativ cu gradient -
 Coloana cromatografică
- comparaţie cu tehnic GC -
 Coloana cromatografică
- separarea izomerilor optici -
 Analiza HPLC

Eluţie

Gradient
Recondiţionare

X timp
Date analitice
Purificarea probei