Metode cromatografice

- din limba greacă: chroma „culoare” și graphein „a scrie”;

- 1901, botanistul rus Tvet: separare pigmenti vegetali pe o coloana
umpluta cu carbonat de calciu, eluent: eter de petrol;
- 1941, Martin si Synge: separarea aminoacizilor pe o coloana
umpluta cu silicagel saturat cu apa, faza mobila: cloroform si
alcool n-butilic.
 CROMATOGRAFIE
CLASIFICARE
Principiu Faza Faza Metoda
Tip echilibru
de separare mobila stationara cromatografica
Adsorbtia Solid de gaze
Gaz Solid-Gaz
(competitia intre (coloana) (GC/GSC)
adsorbantul solid si pe coloana (LC)
faza mobila) Solid
de lichide de inalta
(coloana)
performanta (HPLC)
Lichid Solid-Lichid
Solid pe strat subtire (TLC)
(suprafata
plana) pe hartie (PC)
Partitia
(competitia intre faza de gaze (GC/GLC)
stationara lichida si
Gaz Gaz-lichid
faza mobila)
Lichid de fluide supercritice (SFC)
(coloana)
Lichid-lichid de lichide (LC)
Lichid de lichide de inalta
Lichid-lichid
performanta (HPLC)
 CROMATOGRAFIE
CLASIFICARE
Principiu Faza Faza Metoda
Tip echilibru
de separare mobila stationara cromatografica
de schimb ionic
Schimbul ionic (IEC)
(competitia intre faza
Solid
stationara solida rasina Lichid Solid-Lichid de schimb ionic
(coloana)
schimbatoare de ioni si faza de inalta performanta
mobila) (IC/HPIC)

de gaze (GC/GLC)
Gaz-lichid
Permeatia de fluide supercritice (SFC)
(competitia intre faza Gel
Lichid Lichid-lichid de lichide (LC)
stationara lichida matrice (coloana)
polimerica si faza mobila) de lichide de inalta
Lichid-lichid
performanta (HPLC)
SISTEMUL CROMATOGRAFIC
Schema de principiu a unui gaz-cromatograf
 SISTEMUL CROMATOGRAFIC
Faza mobila (eluent, gaz purtator) – ce rol are?
Care dintre gazele urmatoare pot fi folosite in GC: aer
comprimat, hidrogen (H2), argon (Ar), azot (N2), heliu (He),
dioxid de carbon (CO2)? Ce avantaje sau limitari prezinta?
aer comprimat: NU; contine O2, gaz reactiv.
hidrogen (H2): DA; risc de explozie.
argon (Ar): DA; nu si pentru HRGC.
azot (N2): DA.
heliu (He): DA.
dioxid de carbon (CO2): DA; in special pentru SFC.
De ce sunt necesare gaze de puritate ridicata (99, 995%)?
• Gaze inerte;
• Impuritati organice cresc semnalul de fond al
detectorului, ceea ce conduce la scaderea sensibilitatii.
 SISTEMUL CROMATOGRAFIC
Sistemul de injectie – ce rol are?
Ce alta functie indeplineste?
Mentine presiunea si debitul in coloana in timpul
introducerii probei.
Previne patrunderea aerului in coloana.
Tipuri de injectoare: cu/fara splitare;
on-column;
regim isoterm/programat.
 SISTEMUL CROMATOGRAFIC
Cuptorul – ce rol are?
Ce caracteristici trebuie sa indeplineasca?
Spatios.
Control precis al temperaturii.
Raspuns rapid – exactitatea programului de temperatura.
Masa termica mica – racire rapida.
Regim isoterm sau programat.
SISTEMUL CROMATOGRAFIC
Coloana ≡ inima cromatografului – ce rol are?
Principiul Cromatografiei
 CROMATOGRAFIE
PICUL CROMATOGRAFIC

tR

h
tM
A

tR, - timp de retentie: timpul in care apare maximul unui pic din
momentul introducerii probei;
tM, - timp “mort”: timpul in care eluentul si componentele care nu
interactioneaza cu faza stationara parcurg distanta pana la detector;
h - inaltimea picului; A - aria picului; w – latimea picului.
 CROMATOGRAFIE
PARAMETRII CHEIE: factorul de capacitate, k
(capacitatea fazei stationare de a retine un solut)

t R  tM t '
k  R
tM tM
 CROMATOGRAFIE
PARAMETRII CHEIE: Numar de talere teoretice
(capacitatea de separare a fazei stationare)
Coloana ca o serie de
talere teoretice

w1/2 - latimea picului la 50% din inaltimea

acestuia;
n - nr. de talere teoretice (adimensional);
N - nr. de talere teoretice efective
(adimensional)
h - inaltimea echivalenta a unui taler
2
teoretic (HETP);
 tR 
2
 tR  L
n  5,54     16    ; h ( HETP )  H - inaltimea echivalenta a unui taler
 1/2 
w w n teoretic efectiv (HEETP);
2 2
 t R'   t R'  L L - lungimea coloanei.
N  5,54     16    ; H ( HEETP ) 
 1/2 
w w N
 Test 1
• Q1. Care sunt deosebirile intre cromatografia de gaze,
respectiv de lichide si cromatografia plana?
• A1. GC si LC: separare in coloana;
TLC sau PC: separare pe suprafete plastice, metalice sau
din sticla acoperite cu silice.
• Q2. Ce avantaje prezinta cromatografia plana prin
comparatie cu cea de gaze sau lichide?
• A2. GC si LC: proba este injectata in coloana si nu se poate
sti daca toti componentii au fost eluati si detectati;
TLC sau PC: exista metode de vizualizare a tuturor
componentilor separati pe suprafata plana.
 Test 1
• Q3. Sa se completeze tabelul de mai jos folosind datele din
cromatogramele de mai jos si sa se aprecieze debitul optim.
A B C D
L
µ, cm/min
tM
tR
t R'
w1/2
k
n
N
h
h