Patotipuri enterice Escherichia coli,

Salmonella spp., Shigella spp,

Yersinia enterocolitica
Specii bacteriene patogene enterice implicate in etiologia bolii
diareice acute (BDA)

COPROCULTURA
 SINDROMUL DIAREIC INFECTIOS

 Entitate clinica caracterizata prin:

 scaune frecvente
 consistenta redusa
 pierderi mari de lichide
 dezechilibre hidroelectrolitice
 tulburari hemodinamice
 risc de deces
 Sindrom febril
 Fenomene digestive
 DIAGNOSTICUL DE LABORATOR
MICROBIOLOGIC IN INFECTIILE CU
LOCALIZARE DIGESTIVA.
DIAGNOSTICUL BACTERIOLOGIC DIRECT

1. RECOLTARE si TRANSPORT:
* Tipuri de prelevate:
- materii fecale,
- lichid de varsatura,
 aliment,
* mediu de conservare si transport: Carry Blaire
2. EXAMEN MACROSCOPIC (scaune frecvente, moi, apoase, cu
mucus, striuri de sange, culoare si miros caracteristic)
 COPROCULTURA

3. EXAMEN MICROSCOPIC (preparat proaspat, frotiuri AM, Gram)

4. CULTIVARE in vederea IZOLARII (colonii izolate, dispersie corecta)
4.1. Imbogatire: selenit acid de sodium, mediu Rappaport,
- timp de incubare in etapa de imbogatire: 18- 20 ore,
- raport 1/10 intre volumul de materii fecale si volumul de mediu de imbogatire
(1 ml scaun + 9 ml mediu lichid/selenit),
4.2. Medii de cultura
- diferentiale : geloza lactozata (AABTL), CLED (geloza lactozata cu thiosulfat de sodium/ pentru inhibarea
migrarii proteusului), medii cromogene,
- medii de cultura solide selectiv – diferentiale:
*slab selective: MacConkey, MacConkey cu sorbitol (SMAC),
*moderat selective: ADCL, Kektoen, SS, CIN Agar,
*inalt selective: Wilson Blair (izolare Salmonella typhi),
* CIN agar (Yersinia ent)
 COPROCULTURA

5 Conditii de incubare: 24- 48 ore, 37°C,

6. Identificare;
* caractere microscopice: bacilli Gram (-),
nesporulati, necapsulati,  
* caractere culturale: diferite, in functie de specie
(speciile patogene, sunt, in genaral, Lactozo- negative, cu sau
fara H2S, ...)
 Patotipuri enterice de Escherichia coli

1. EPEC (E. coli enteropatogen),

2. EHEC/ VTEC (E. coli enterohemoragic, E. coli
producator de verotoxine),
3. ETEC (E. coli enterotoxigen),
4. EIEC (E. coli enteroinvaziv),
5. EAggEC (E. coli enteroagregativ),
6. DAEC (E. coli enteroaderent difuz)
Patotiputi enterice de Escherichia coli
 E. coli enteropatogen (EPEC)
 Boala diareica acuta / BDA la copii 0-5 ani,
 rol si in diareea cronica,
 nu implică intervenţia de enterotoxine (termolabile (LT) sau
termostabile (ST) descrise la ETEC),
 nu prezinta caracterul de invazivitate celulară descrisă la Shigella şi
EIEC,
 produc la pacienţi leziunea histologică numită “ataşare-
distrugere”(attachement- effacement) a vilozităţilor intestinale, în
urma aderării lor la enterocite.
 E. coli enterohemoragic
EHEC/ VTEC/ STEC

 Produce colita hemoragica si sindromul hemolitic uremic (HUS:

trombocitopenie, anemie hemolitica si insuficienta renala),
 EHEC (enterohemoragic)/
 VTEC (verotoxigenic E. coli)/
 STEC (shiga toxin E. coli),
 Serogrupul dominant in infectiile umane: O157:H7,
 Mecanism patogenetic: Verotoxina (VT) actioneaza similar toxinei
Shigella dysenteriae (Shiga),
* Verotoxina VT = Shigella like toxin (SLT: Sxt1 si Sxt2),
 Teste in vivo: enterotoxicitate pe ansa ligaturata de iepure,
 Teste in vitro: actiune citotoxica pe culturi celulare Vero si HeLa
 E. coli 0157:H7
 E. coli 0157:H7 agentul etiologic al diareei hemoragice.
 Prin producerea de enterotoxina shiga-like.
 Agent etiologic al sindromului hemolitic-uremic.
 E. coli enterotoxigen / ETEC

in tari in curs de dezvoltare,

conditii precare de igiena si alimentatie defectuoasa,
manifestari clinice asemanatoare holerei,
* Cunoscuta sub denumirea de “diareea turistilor”,
plasmide CFA I – CFA IV: codifica fimbrii cu rol in
aderenta, numiti factori de colonizare,
enterotoxine termo- labile (LT) si termostabile (ST),
LT: ↑ cAMP intracelular: hipersecretie de apa si
cloruri,
hipermotilitate si diaree apoasa,
 E. coli enteroinvaziv/ EIEC

 Mecanismul de actiune este similar Shigellei,

 doza infectanta este mult mare decat la Shigella spp
(EIEC declanseaza mai greu boala),
 EIEC este endocitata,
 mecanism prin invazie intracelulara,
 multiplicare in enterocit,
 inhiba sinteza proteinelor celulare si distrugerea celulei,
 invazie prin polul lateral al celulei, la enterocitele din jur,
 scaune tipice cu puroi si sange (ca in dizenterie)
 Escherichia coli enteroagregativ/ EAggEC
Escherichia coli enteroaderent difuz/ DAEC
* EAggEC:
 celulele bacteriene adera agregativ de culturile celulare HEp2,
 aderenta agregativa se datoreaza pililor codificati plasmidic,
 configuraţie in “grămezi de cărămizi”.
 mecanism de actiune prin elaborarea unei enterotoxine,

* DAEC:
 caracteristica prezenta fimbriilor de suprafaţă la aceste tulpini,
 genele care codifică fimbria numită F1845, se găsesc atât în
cromosom, cât şi în plasmid.
 Patotip intestinal E. coli- caractere culturale:

 Colonii de tip “S”, lactozo (+)/ lactozo (-) (CLED)

 Colonii sorbitol (-)/ SMAC
 Esherichia coli patotip EHEC

INSAMANTARE PE
E. coli O157:H7
Mediu cromogen

CHROMagar™ O157
 Escherichia coli - caractere biochimice:

- Caractere biochimice:
 TSI: G +; L, Z +/- ; H2S -, gaz +/ -
 MIU: mob +/ -; I +; U –
 MILF: mob +/ -; I +; Liz +/-, FenAla-
 Citrat Simmons –
 ONPG +
 EHEC O157:H7
Identificare serologica (reactive de aglutinare)

IDENTIFICARE SEROLOGICA
 Identificarea serologica

Reactia de aglutinare directa pe lama

 COPROCULTURA
pentru Diagnostic Salmonella spp

Definitie Genul Salmonella:

 cuprinde bacili Gram (-),
 mobili,
 fermenteaza glucoza cu producere de gaz,
 produc lizin- decarboxilaza,
 produc H2S (cu unele exceptii),
 folosesc citratul ca unica sursa de carbon (cresc pe mediu
Simmons cu citrat),
 NU produc: indol, ureaza, fenilalanindeaminaza.
 Salmonella spp-
aspecte microscopice si culturale (HEKTOEN,
Wilson Blair)

Colonii Lactozo (-), H2S(+)

 Identificare biochimica pe baza
proprietatilor exoenzimatice ale
genului Salmonella
MEDIUL SUBSTRATUL MODUL DE OBSERVATII
COMPORTARE
GLUCOZA ACID (galben-
(partea dreapta) fermentarea -
TSI glucozei))
LACTOZA- ALCALIN
ZAHAROZA (culoarea mediului,
(partea inclinata) roz – rosu, -
nefermentarea
lacozei si/ sau
zaharozei)
GAZ din + Salmonella typhi
fermentareaglucozei cu rare exceptii nu produce gaz
+ S. typhi poate fi
H2S cu rare exceptii neproducatoare de
H2S
MOBILITATE +
MIU INDOL -
UREE -
LIZIN – + (-)
MILF DECARBOXILAZA La S. paratyphi A
FEN-ALA -
TSI: Methyl Red
Coloana: culoare galbena positiv
(fermentarea glucozei) Citrat positiv
G(+):
mascata de producerea de
H2S (++)
Gas (+)
Panta: culoare rosie
(L-, Z-)

Indole negativ
Ureaza negativa
 Reactii biochimice caracteristice grupului
Salmonella

Test sau substrat Rezultat

+ , cu gaz
Glucoza exceptie Salmonella typhi/ gaz (-)
Lactoza -
Zaharoza -
Rosu metil +
Voges Proskauer -
Lizin – decarboxilaza +, (exceptie S. paratyphi)
Arginin – decarboxilaza +/ (+)
Ornitin- decarboxilaza +, (exceptie S. typhi)
Citrat Simmons d
Malonat de Na -
Fenilalanin- deaminaza -
ONPG -
Legenda : - reactie negativa,
+ reactie pozitiva,
(+) reactie tardiv pozitiva,
d diferite reactii
 Identificare pe baza caracterelor antigenice/
latex –aglutinare
(Identificare serogrup, serotip)
 Antigenul somatic O, alcătuit din
fractiuni antigenice, este rezistent
la căldură şi alcool. Prin studiile
de cross-absorbtie s-au
individualizat 67 de structuri
antigenice diferite care sunt
folosite pentru identificare
serologică.
 Antigenele flagelare H sunt
proteine labile termic situate la
nivelul cililor. Se cunosc peste 50
de antigene H care pot de
asemenea să fie subtipate ca
antigene partiale.
 Febre enterice
(Febra tifoida cu Salmonella typhi, paratyphi)
Diagnostic bacteriologic indirect, imunologic:

1. Reactia Widal – inlocuita cu Reactia Serica Calitativa/ ASC

2. Seroreactia Vi.
1. a. Reactia Widal:
- evidentiaza prezenta Ac anti- “O” si anti- “H”,
- utilizeaza suspensie de Salmonella vie,
* 3 mari inconveniente:
- nu diferentiaza titrul aglutininelor anti- H de aglutininele anti- O,
- risc mare de contaminare (Ag vii),
- nu poate fi standardizata.
Reactia serologica WIDAL

Antibody detection
(T h e W i d a l t e s t)
 Febre enterice
(Febra tifoida cu Salmonella typhi, paratyphi)
Diagnostic bacteriologic indirect, imunologic:

1.b. Reactia ASC:

- reactie calitativa si, in acelasi timp, cantitativa,
- evidentiaza separat titrul aglutininelor anti-O si anti- H,
- se efectueaza cu antigene separate Ag “O” si Ag “H”, standardizate si inactivate.
 * TEHNICA:
- dilutii ser de bolnav 1/ 10 si 1/ 100, peste care se adauga Ag “O”,
- serie separata de dilutii de ser, la care se adauga Ag “H”,
- la prima citire (2 ore la 52ºC si 30 min la temperatura camerei) se apreciaza
nivelul de anticorpi anti- “H”,
- dupa 24 ore incubare la 52ºC si 30 min la temp camerei, se face citirea finala: se
apreciaza anticorpii anti- “O”,
 Febre enterice
(Febra tifoida cu Salmonella typhi, paratyphi)
Diagnostic bacteriologic indirect, imunologic:

- Reactia ASC pune in evidenta anticorpii in dinamica, in serul bolnavilor cu febra

tifoida si paratifoida.
- Anticorpii incep sa apara din a 2-a saptamana si cresc in timp.
* la persoane nevaccinate, care nu au facut boala :
- titrul Ac anti- “O” = 1/ 40,
* persoane vaccinate:
- Ac “O”: 1/80,
- Ac “H”: 1/ 250,
* bolnavi (variabil, in raport cu saptamana de boala ): peste 3 saptamani de boala:
- Ac “O”: 1/500,
- Ac “H”: 1/ 1000.
•In seroreactia Vi apar titruri mari de anticorpi anti- Vi, la purtatorii de Salmonella typhi,
- Titrul de diagnostic: ≥ 1/ 40.
 DIZENTERIA BACILARA
BDA cu Shigella spp.
DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC DIRECT

bacterii strict adaptate omului

 întotdeauna patogene
 întâlnite la:
 bolnavi,
 convalescenti
 purtătorilor aparent sănătoşi (sigmoid)
 Singurele animale care pot fi gazde accidentale
sunt primatele captive care vin în contact cu
oamenii.
GENUL Shigella

 Sunt bacili Gram negativi,

neciliati, necapsulati şi
nesporulati.
Genul Shigella- clasificare:

Antigenul somatic “O” stă la baza împărtirii în 4 grupe

antigenice şi a acestora, în serotipuri:

 Grupul A: Shigella dysenteriae (12 serotipuri)

 Grupul B: Shigella flexneri (6+2 serotipuri)

 Grupul C: Shigella boydii (18 serotipuri)

 Grupul D: Shigella sonnei (1 serotip care prezintă 2 faze

antigenice S şi R)
 DIZENTERIA BACILARA
DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC DIRECT
Coprocultura pentru Shigella spp

Inocularea prelevatelor (medii selective)

 mediul ADCL, variante ale mediului Leifson sau Hektoen,
 mediul SS (izolare Salmonella- Shigella),
 mediul MacConkey.
Ca inocul se vor folosi cu predilectie mucozitatile cu sange,
iar in lipsa acestora, se va face o suspensie de materii fecale in
ser fiziologic tamponat, in proportie de 1/ 5, din care se depun
2 – 3 picaturi la 1 cm distanta de marginile placii.
Dispersia se face cu ansa, pentru obtinerea de colonii izolate.
Aspecte culturale ale genului Shigella, pe
diferite medii de cultura
(selectiv- diferentiale)

Genul Mediul Mediul Mediul Mediul Mediul

(Specia) Leifson/ MacConkey Istrate- SS Wilson-
ADCL Meitert Blair
Colonii 1- 2 Colonii 1–2 Colonii 1-2 Colonii 1-2
mm, semi- mm, semi- mm, relativ mm, semi-
transparente, transparente, transparente, transparente,
in culoarea rotunde, netede, rotunde, Nu creste
Shigella mediului, in culoarea culoare suprafata
suprafata mediului. verde. umeda,
umeda, cu usor
centrul usor bombate,
bombat. in culoarea
mediului.
MacConkey agar- colonii lactozo (-), H2S(-)
Hektoen enteric (HE) agar-
colonii lactozo (-), H2S (-)
 DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
DIRECT
- Incubarea placilor se va face la 37ºC, timp de 20 – 48 ore.
Aspecte culturale: colonii lactozo- negative, fara producere de
H2S

Identificare pe baza caracterelor exoenzimatice:

- medii politrope: TSI, MIU, MILF, cu banda pentru indol.
Identificarea pe baza caracterelor biochimice
(medii politrope: TSI, MIU, MILF)
a genului Shigella

Mediul Substrat Modul de Observatii

comportare
Acid (galben – -
Glucoza (partea fermentarea
dreapta) glucozei)
Alcalin (culoarea -
mediului-
Lactoza, zaharoza nefermentarea
TSI lactozei si
zaharozei)
Exceptie :
Formare gaz din - unele tulpini de
glucoza Shigella flexneri 6
H2S - -
Mobilitate - -
MIU Indol +/- -
Uree - -
Lizin- - -
MILF decarboxilaza
Fenil- - -
alanina
TSI: Methyl Red Voges-Proskauer Citrat negativ
Glucoza (+) positive negativ
Lactoza (-)
H2H (-)
Gaz (-)

Nitrat pozitiv
Ureaza negativa Indole negativ
 Identificarea serologica

Identificarea prin aglutinare cu seruri anti- Shigella, se

efectueaza, de preferinta, cu culturile dezvoltate pe
mediul TSI.
In cazul in care se obtin reactii pozitive la aglutinarea
pe lama, cu serul polivalent, se trece la o identificare de
serotip.
Identificare prin reactia de aglutinare pe lama
GENUL YERSINIA
DEFINITIE, ÎNCADRARE
 Enterobacterii cocobacilare, colorate
bipolar, ciliate în functie de
temperatura
 Nepretentioase
 Cuprinde 11 specii,dintre care 3
sunt patogene pentru om:
- Yersinia pestis
- Yersinia pseudotuberculosis
- Yersinia enterocolitica.
 Sunt agenti etiologici ai unor zoonoze.
Se transmit accidental la om.
- Yersinia pestis este agentul patogen
al pestei bubonice şi pestei pulmonare
- Yersinia pseudotuberculosis şi
Yersinia enterocolitica pot determina
gastroenterite severe cu formare de
abces local (bloc pseudoapendicular)
şi deces prin peritonită
 Yersinia enterocolitica
Yersinia pseudotuberculosis

se gasesc in tractul digestiv al omului si al unor animale:

pasari, animale domestice, animale de ferma/ porci.
produc imbolnaviri sporadice toamna si iarna, ceea ce
sustine influenta temperaturii asupra patogenitatii
tulpinilor,
au capacitatea de a se inmulti la +4ºC, ceea ce face
posibila multiplicarea lor in alimente pastrate la frigider
 DIAGNOSTICUL BACTERIOLOGIC AL
INFECTIILOR PRODUSE DE GENUL
YERSINIA
Definitie:
- bacili scurti, Gram (-), colorati bipolar,
- nesporulati,
- catalaza (+),
- oxidaza (-),
- au gazda naturala animalele.
Caractere morfotinctoriale

 Yersinia enterocolitica: 
este un cocobacil cu capetele
rotunjite, Gram negativ, cu cili
peritrichi la 28°C, neciliat la 37°C,
necapsulat.
 Diagnosticul etiologic

 este un examen bacteriologic si consta in izolarea si identificarea

germenului din materii fecale.
 in practicarea coproculturii pentru Yersinia enterocolitica trebuie avute
in vedere 2 caracteristici majore ale speciei si anume:
 necesitatea cultivarii la temperatura camerei (25 - 30ºC),
 incubarea mai lunga, in medie 48 ore.
 aceste caracteristici conditioneaza exprimarea fenotipica a unor
proprietati biologice ale speciei, cum ar fi: caracterele culturale,
antigenice, biochimice si de patogenitate.
 Tehnica coproculturii
 McConkey, CIN agar:
• MacConkey nu contine zaharoza, coloniile sunt verzi/ Lactozo (-) (Yersinia
enterocolitica fiind zaharozo (+);
• placile sunt incubate la 37 grd C timp de 48 de ore sau, se recomanda incubarea 24
ore la 37 grd C si, in continuare, inca 24 ore la temperatura camerei,
• Hektoen: contine zaharoza : coloniile apar galbene (Z+) si, desi sunt lactozo (-), pot
fi gresit interpretate ca si colonii lactozo pozitive/ saprofite, deci ar putea scapa
diagnosticului,
 Tehnica imbogatirii:
• mediul Rappaport – Konforti modificat,
• selenit acid de sodiu modificat,
• imbogatire la rece (1- 3 saptamani la +4ºC),
 Caractere de cultură

 
 Toate speciile de Yersinia sunt aerobe,
 Tolerante la concentratii de sare > 5%
 Capabile să se dezvolte în limite largi de temperatură
(4-43°C) multiplicându-se şi la temperatura frigiderului. 
Yersinia enterocolitica:
aspect culturale pe mediul inhibitor CIN- agar

Cefsulodin-irgasan-novobiocin (CIN) agar:

colonii roz, translucide, cu centrul intens colorat 
 Caractere biochimice pe medii politrope:

Medii politrope TSI, MIU cu incubare 20 – 48 ore la 25- 30ºC (temperatura

camerei) si, respectiv, 20 ore la 37ºC.
 TSI:
- degradarea glucozei (G+) si zaharozei (Z+) cu virarea consecutiva in galben atat
a partii drepte, cat si a celei inclinate,
- lipsa producerii de H2S,
- lipsa formarii de gaz,
 MIU :
- testul ureazei (+) la temperatura camerei si la 37ºC,
- mobilitate slab (+) la 20 ore si intens (+) la 48 ore de incubatie la temperatura
camerei si (-) la 37ºC,
- indol (-) la 20 ore, dar dupa 36- 48 ore, in tubul incubat la temperatura camerei,
reactia poate fi (+) pentru unele tipuri biochimice.
  
Identificare serologica – Yersinia enterocolitica

 Culturile cu caracterele biochimice pe mediile politrope si

colonii caracteristice pe MacConkey/ CIN agar: se testeaza
prin aglutinare pe lama cu seruri aglutinante anti- «O:3» si
anti «O:9»,

 Rezultatul unei aglutinari pozitive, corelat cu caracterele

biochimice mentionate, confirma diagnosticul de Yersinia
enterocolitica serotip O:3, respectiv O:9.
ANTIBIOGRAMA
 ampicillin
amoxicillin/clavulanic acid
tetracycline
ANTIBIOGRAMA trimethoprim/sulfamethoxazole
ceftriaxone
gentamycin
ciprofloxacin
Tratament

În gastroenteritele cu Salmonella spp.:

– boala este autolimitată
– se evită antibioterapia pentru a preveni prelungirea fazei
de purtător al acestor pacienţi
– in forme clinice medii, grave, insotite de bacteriemii
(infectii sistemice), antibioterapie conform antibiogramei