Curs 3 Neisseria - Curs 3 Sem II 2018

NEISSERIA
CURS 3 SEM II 2018

NEISSERIA- TAXONOMIE
ORDIN: NEISSERIALES
FAMILIA: NEISSERIACEAE
GENURI:
 NEISSERIA
 EIKENELLA,
 KINGELLA,
 alte 32 genuri
GENUL NEISSERIA- GENERALITATI
• Majoritatea reprezentantilor genului Neisseria sunt coci Gram negativi, dispusi
in perechi, cu fetele adiacente apaltizate, “in boabe de cafea” sau “reniformi”,
• componente celulare facultative: capsula (N. meningitidis), pili (N. meningitidis
si N. gonorrhoeae),
• polizaharid capsular (N. meningitidis)- cu peste 12 serogrupuri diferite,
• N. flavescens, N. sicca, N. subflava- specii producatoare de pigment galben,
• speciile genului Neisseria sunt strict aerobe, cresc la temperaturi 35- 37 grd C,
• N. meningitidis si N. gonorrhoeae- specii pretentioase, sensibile la factori
nefavorabili din mediu: temperaturi extreme, uscaciune, conditii de aciditate,
alcalinitate,
• oxidazo- pozitive, catalazo- pozitive
GENUL NEISSERIA- GENERALITATI
• Neisseria spp.- produc acizi din oxidarea carbohidratilor,
• N. meningitidis, N. gonorrhoeae- patogeni exclusiv umani,
• secventierea 16SrRNA- a demonstrat relatia intre Neisseriaceae si
Moraxellaceae,
• genul Neisseria prezinta 28 specii.
GENUL NEISSERIA
EPIDEMIOLOGIE. TRANSMITERE.
Neisseria gonorrhoeae
• produce gonoreea (boala cu transmitere sexuala),
• infecteaza mucoase, ca: uretra, cervix, rect, faringe, conjunctiva oculara,
• specie patogena (omul- unica gazda),
• grupa de varsta afectata= adultii tineri (20- 24 ani)
• perioada de incubatie : 1-14 zile, cu o medie de 2-7 zile,
• incidenta crescuta in tari subdezvoltate economico- social, in curs de
dezvoltare: Africa, America Latina,
• infectia cu N. gonorrhoeae – asociata infectiei HIV (grupe de risc:
consumatorii de droguri iv, sex neprotejat, parteneri multipli, homo-
heterosexuali),
• la femei: utilizarea contraceptivelor hormonale- cresc riscul infectiei,
EPIDEMIOLOGIE. TRANSMITERE.
Neisseria meningitidis
•Este printre putinele specii patogene care determina un proces infectios, ce evolueaza de la bacteriemii
oculte, cu evolutie rapida, la forme clinice fulminante de sepsis fatal.
• patogen exclusiv uman,
• rol dublu: comensal si patogen invaziv,
• 10% din populatie este colonizata oro- faringian cu N. meningitidis,
• copiii mici sunt colonizati in procent redus; adolescentii si tinerii in proportie de 30%,
• transmiterea se face prin picaturi de saliva si contact direct,
• factori de risc pentru declansarea bolii invazive: deficit de properdina, deficiente ale functiilor biologice
ale complementului, asplenia, fumatul, sarutul etc,
• serogrupuri circulante in SUA: B, C, Y (91%); Europa: B; Africa: A,
• 1990- 2000: incidenta crescuta a serogrupului C in Europa: vaccin conjugat anti- serogrup C (scadere
dramatica a nr de imbolnaviri),
• Europa, Australia: vaccin bazat pe proteine antigenice recombinante din membrana externa (a inlocuit
vaccinul glicoconjugat anti- serogrup B- antigenicitate scazuta, reactii autoimune impotriva tesuturilor
proprii)
Factori de virulenta
- In structura membranei externe la bacteriile Gram negative: lipopolizaharid (LPS), proteine,
fosfolipide,
N. meningitidis, N. gonorrhoeae: lipseste Ag somatic “O”: lipooligozaharide (LOS),
EFECTE: influenteaza aderenta bacteriana si creste rezistenta la efectul bactericid al serului
uman normal,
1. LOS N. gonorrhoeae:
•stimuleaza raspunsul imun,
• activeaza complementul,
• stimuleaza producerea de citokine,
• induce liza PMN si a celulelor epiteliale,
• induce producerea de α- TNF (tumor necrosis factor): distrugeri tisulare si afectiuni inflamatorii
pelvine,
• autoliza bacteriana in vivo si in vitro: fragmente libere de peptidoglican= efecte toxice pe
mucoasa genitala, intensifica raspunsul inflamator.
2. Fimbrii (pili):
Structuri proteice (pilina), imunogenice, cu rol in aderenta bacteriana la suprafata mucoaselor si
initierea infectiei,
 celule susceptibile a lega gonococul: celule epiteliale vaginale, bucale, celule amniotice,
eritrocite, neutrofile, celule spermatice,
 impiedica fagocitoza la nivelul PMN,
3. Proteinele de membrana externa (OMPs) (POR I- PORA/ PORB):
- proteine din structura porinelor (A sau B, niciodata ambele),
 eludeaza raspunsul imun umoral si celular,
 scad asocierea leucocitelor,
 confera rezistenta bacteriana fata de efectul bactericid al serului uman normal,
 impiedica liza bacteriilor inglobate in PMN, prin blocarea fuziunii fagozom- lizozom si diminua
distrugerea oxidativa a acestora.
4. Opa Proteins (Protein II) - proteine ale membranei externe
 potenteaza aderenta mediata de pili la suprafata mucoasei,
 faciliteaza invazia celulelor epiteliale ale mucoasei,
 izolatele bacteriene de la nivelul cervixului femeilor aflate in perioada ciclului menstrual sau de la
nivelul situsurilor normal sterile (sange, lichid articular) sunt lipsite de proteine Opa,
5. IgA1 proteaza: lizeaza IgA1:
- factor de virulenta,
- favorizeaza atasarea gonococilor la suprafata mucoasei si invazia secundara,
- permite supravietuirea intracelulara, prin modificarea enzimatica a proteinei intracelulare LAMP1,
implicata in fuziunea fagozom- lizozom,
- declanseaza eliberarea de citokine proinflamatorii din monocitele umane,
- activeaza CD4- CD8 Limfocite T,
- creste producerea de interferon γ si TNF.
6. Plasmide: purtatoare ale genelor de antibiorezistenta (beta- lactamaze).
1. Polizaharide capsulare:
Tulpinile de N. meningitidis sunt incapsulate: 13 serogrupuri capsulare,
 sunt descrise serogrupurile: A,B,C,D,H,I, K, L,W125, X,Y,Z,29E,
 contin acid N- acetyl - neuraminic (acid sialic),
 polizaharidul capsular impiedica fagocitoza si distrugerea bacteriilor
intracelulare,
 capsula permite supravietuirea bacteriilor in pasajul lor prin sange
(bacteriemie) si in timpul invaziei SNC,
 reduce aderenta la celulele epiteliale; bacteriile incapsulate adera mai
putin decat cele neincapsulate.
2. LPS/ LOS
3. Fimbrii/ pili,
4. Proteine ale membranei externe/ proteine din structura porinelor- PorA si PorB:
 impartite in 5 clase (1-5):
 clasele 2 si 3 sunt similare cu PorA si PorB de la gonococ,
 induc apoptoza celulara, invazia celulelor epiteliale, facilitand infectia.
5. Proteinele Opa si Opc (din membrana externa): aderenta la mucoasa, invazia celulelor
epiteliale, sunt tinta pentru antiorpii bactericizi,
6. Proteine care leaga fierul (Iron binding/ acquisition proteins): favorizeaza achizitia
fierului din transferina, lactoferina, hemoglobina/ haptoglobina (mucoase, sange/
bacteriemie), accentuand invazia, procesul infectios,
- meningococii poseda o proteina de suprafata/ HmbR care permite internalizarea bacteriei
in hematie, extrag hemoglobina, leaga fierul.
7. Proteaza IgA1
8. Plasmide
INFECTII DETERMINATE DE
NEISSERIA MENINGITIDIS
1. MENINGITA MENINGOCOCICA,

 omul: singura gazda naturala a meningococului,
 5- 10% din populatie este purtatoare (in naso-
faringe) de meningococ,
 bacteriemie,
 strabate bariera hemato- encefalica,
 meningita cerebro-spinala,
 febra, redoare de ceafa, coma, rush purpuric,
petesii, coagulare intravasculara (CID).
Meningita meningococica cu eruptie
purpurica
Meningita meningococica cu eruptie
purpurica
INFECTII DETERMINATE DE NEISSERIA
MENINGITIDIS
2. PURPURA FULMINANS

(SDR. WATERHOUSE FREDERICHSEN):
 meningococemie fulminanta,
 implicata endotoxina in tulburari hemodinamice,
 activarea procesului de coagulare intravasculara
(CID),
 febra mare, rush hemoragic, soc,
 sechele meningo- encefalitice, la copii, necroze
extremitati, deces etc
PURPURA FULMINANS
SDR.WATERHOUSEFREDERICHSEN
Implicarea endotoxinei in tulburari
hemodinamice,
ALTE MANIFESTARI CLINICE
rinofaringite,
otite,
conjunctivite,
bronsite,
pneumonii,
bronhopneumonii,
artrite,
pericardite etc.
DIAGNOSTIC DE LABORATOR IN
INFECTII MENINGOCOCICE
I. PRELEVARE PROBE- REGULI GENERALE:
 In urgenta, inainte de administrarea tratamentului cu
antibiotice,
 Respectarea regulilor de asepsie, antisepsie,
 Recipiente sterile, unica utilizare.
I. PRELEVARE PROBE:
1. LCR:
- punctie lombara,
 tuburi sterile,
 2-5 ml (copii),
 5-10 ml (adulti),
 unde si daca este posibil, insamantare la patul
bolnavului, pe medii incalzite la 37ºC,
I. PRELEVARE PROBE:
2. HEMOCULTURA:
 minim 2 hemoculturi,
 Volum: 10 ml (adult), 1-3 ml (copil),
 Insamantare pe medii bifazice sau flacoane speciale
pentru sisteme automate
3. ASPIRAT PETESIAL, BIOPSIE CUTANATA:

- Insamantare la patul bolnavului
I. PRELEVARE PROBE:
4. SITUSURI ANATOMICE CU FLORA
BACTERIANA ASOCIATA:
- Exudat faringian, nazal (bolnavi, purtatori,
contacti),
- Sputa, aspirat bronsic.
II. TRANSPORT:
 IMEDIAT (sange, LCR), la 37 ºC,
 Medii de conservare si transport: Stuart, Amies
(exudat nazal sau faringian),
 Meningococii f. sensibili la conditiile de mediu
extern: UV, uscaciune,TºC ,
 La temperatura ambianta se lizeaza in 2 ore,
 Liza mai rapida in prelevat, la 37ºC, decat la
temperatura camerei,
 Nu se pastreaza la frigider sau termostat.
EXAMEN BACTERIOLOGIC DIRECT
IN MENINGITA MENINGOCOCICA
III. EXAMEN MACROSCOPIC LCR:
- tulbure, purulent (chiar clar, in functie de stadiul
infectiei),
- consistenta,
- culoare,
- miros.
IV. EXAMEN CITOBACTERIOLOCIC:

a) Ex. citologic cantitativ
- Nr. elemente nucleate / mm cub,
b) Ex. citologic calitativ (frotiu AM, Giemsa):
- prezenta PMN neutrofile, limfocite, macrofage si
raportul lor %,
c) Ex. microscopic (frotiu Gram)/ sediment:
- diplococi Gram (-) reniformi, “in boabe de cafea”,
intra- si extraleucocitari,
! LCR clar (debutul meningitei): necesita diagnostic
diferential cu meningita TBC (b. Koch), virala,
micotica (Cryptococcus neoformans).
Frotiu Gram din sediment LCR
V. DETECTIE ANTIGENE SOLUBILE DIRECT

IN SUPERNATANT LCR:
* Reactie de latex- aglutinare (identificarea prezentei
N. meningitidis in LCR si serogrupul implicat in
patogenia meningitei,
* Teste imunologice de umflare a capsulei,
* Identificarte cu Ac fluorescenti (I.F.) direct din
produs,
* Imunelectroforeza (IEF),
* PCR (multiplex, real time etc.)
Detectie rapida de antigene solubile in supernatant
LCR (N. meningitidis grup A, B, C, Y, W135 etc.)
IN INFECTII MENINGOCOCICE
VI. CULTIVARE: germeni pretentiosi,
* Produsele normal sterile se insamanteaza pe medii
ca:
* BHI agar- 5-10 % sange berbec,
* Mueller Hinton +/- 5-10% sange berbec,
* Geloza Columbia- chocolat,
* Produsele pluribacteriene (exudat faringian, nazal,
sputa etc) se insamanteaza pe medii selective:
* Thayer Martin (lincomicina, colistin)
* Sange pentru hemoculturi:

 Flacoane cu mediu bifazic,
 Flacoane standard, FAN aerobe- anaerobe, uz
pediatric pentru sisteme automate (BACTEC,
BacT/ALERT etc)
- Se inoculeaza pentru fiecare hemocultura o pereche
de flacoane (aerob si anaerob)
Cultivare
in sistem automat
* Sange pentru hemoculturi:
VII. CONDITII DE INCUBARE:
 temperatura: 37ºC,
 atmosfera: aeroba cu 5% CO2,
 timp: 18- 24- 48 ore,
 umiditate,
 Pentru hemoculturi:
* incubare 7 zile, cu “treceri oarbe” pe medii de
cultura solide, neinhibante,
* in sistem automat, pozitivarea hemoculturii
produce semnal luminos sau sonor.
VIII. IDENTIFICARE
a) Caractere microscopice:
coci Gram (-) reniformi, in diplo, capsulati, nesporulati,
b) Caractere culturale:
 Colonii “S”, “M”
 colonii netede, rotunde, margini regulate,
stralucitoare, nepigmentate, translucide, untoase, usor
gri, nehemolitice,
Caractere culturale:
c) Caractere biochimice:
* Metabolizarea carbohidratilor:
glucoza si maltoza, nu si lactoza, zaharoza
(G+, M+, L-, Z-)
* Produc citocrom- oxidaza
(reactia oxidazei+),
* Sisteme comerciale de diagnostic rapid: API, Microscan,
Vitek
METABOLIZAREA CARBOHIDRATILOR
G+, M+, Z-, L-
REACTIA CATALAZEI +
REACTIA OXIDAZEI +
d) Caractere antigenice:
 12 serotipuri,
 13 serogrupuri,
 cele mai importante, serogrupurile:
A, B, C, D, X, Y, Z, W
* reactii de aglutinare pe lama cu seruri polivalente,
* aglutinare in tuburi cu seruri monovalente
e) Antibiograma:
 Pentru tulpinile de N. meningitidis izolate din infectii
sistemice (sange, LCR) se recomanda determinarea
valorilor CMI (metoda cantitativa):
* E- test, Vitek, Microscan etc
 Testarea tulpinilor izolate din alte prelevate se face de
rutina prin metoda difuzimetrica standard:
* Mediul Mueller Hinton cu sange berbec 5-7%,
 Pentru penicilina G si ampicilina:
* discuri de 2UI, 2 µg ( diferentiaza tulpinile sensibile/ S de
cele moderat rezistente/ R).
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR IN INFECTII PRODUSE DE
NEISSERIA GONORRHOEAE
 Neisseria gonorrhoeae- patogen exclusiv uman,

1. produce gonoreea (gonorrhoea): boala cu transmitere
sexuala:
= infectie purulenta a mucoasei uretrale la barbat si a
endocervixului la femei,
 nu face parte din flora bacteriana normala,
 un anumit procent din persoanele infectate sunt
asimptomatice,
 se manifesta si sub forma de infectii rectale sau faringiene
 La barbat: afectarea ascendenta a prostatei, veziculelor
seminale, epididim, fibroza, stricturi uretrale,
 La femei: salpingite, fibroze, sarcini extrauterine,infertilitate
etc.
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR IN INFECTII PRODUSE
DE
2. Alte tipuri de infectii:

* Infectii diseminate:
- artrite septice,
- leziuni cutanate (papule, pustule hemoragice),
- tenosinovite,
- rar: endocardite,meningite, osteomielite,
* Conjunctivita acuta la nou nascut,
* Infectii cu localizari si manifestari atipice la bolnavii
HIV+
DE
DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC DIRECT:

1. Recoltarea prelevatelor:
 reguli generale,
 la barbat: secretie uretrala (“picatura matinala”),
 la femeie: secretie col uterin, glande Bartholin),
 secretie conjunctivala, lichid sinovial, urina,
secretie rectala, exudat faringian etc.
 hemocultura
DE
2. Transport:
- imediat la temperatura corpului (37ºC),
- medii de conservare si transport,
3. Examen macroscopic,
4. Examen microscopic: Frotiuri (AM, Gram)
- prezenta celulelor inflamatorii (PMN neutrofile),
- prezenta cocilor Gram (-) in diplo, reniformi, intra si
extraleucocitari,
* Uretrita acuta gonococica: prezenta a numerosi coci
Gram (-) in diplo, intraleucocitari, frotiu cu aspect de
“celule burate” cu bacterii.
DE
DE
3. Cultivare:
- medii incalzite,
- medii neselective (produse normal sterile): geloza
sange, geloza chocolat
- medii selective, inhibitorii (vancomicina,
cotrimoxazol, colistin, nistatin) /Thayer Martin,
4. Incubare:
- temperatura: 37ºC,
- atmosfera aeroba, cu 5-10% CO2,
- umiditate,
- timp: 24-48-72 ore
DE
Mediul Thayer Martin pentru cultivarea secretiei uretrale

DE
5. Identificare:
a) caractere microscopice (Frotiu Gram din colonie izolata):
coci Gram (-) in diplo, reniformi, +/- structura capsulara,
nesporulati
b) caractere culturale:
- colonii tip”S”, “M”,
DE
c) Caractere biochimice:
 metabolizarea carbohidratilor: gonococul metabolizeaza
glucoza, dar nu si maltoza:
* G+, M-, L-, Z-,
* R. oxidazei+
* Testul catalazei +
DE
Reactia catalazei +, Reactia oxidazei +

DE
* Identificare rapida din cultura pura (pe baza

caracterelor biochimice):
 sisteme comerciale pentru identificarea
exoenzimatica a tulpinilor de N. gonorrhoeae:
*API, Vitek, Microscan, Minitek etc.,
- galerii API NH – identificare in 4 ore.
DE
d) Identificare pe baza caracterelor antigenice:

* Testul DFA (Direct Fluorescent Antibody):
 anticorpi monoclonali care recunosc proteina I de pe
membrana externa a gonococului,
(se efectueaza un frotiu care se acopera cu reactiv
DFA, se incubeaza 15 min, se examineaza la
microscopul cu fluorescenta)
* Reactii de co- aglutinare,
* Reactii imunoenzimatice (Ac policlonali/ ELISA)
DE
e) Metode de biologie moleculara:

 direct din prelevat,
 din cultura pura,
 sonde nucleotidice,
 PCR
DE
f) Antibiograma:
 Difuzimetrica Kirby Bauer (MH sange),
 CMI (E- test),
 unele tulpini cu rezistenta la penicilina
 rezistenta codificata cromosomial sau plasmidic,
 ß- lactamaza tip TEM (Test nitrocefin)

Curs 3 Neisseria - Curs 3 Sem II 2018

Încărcat de

Informații document

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Curs 3 Neisseria - Curs 3 Sem II 2018

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

NEISSERIA

CURS 3 SEM II 2018

1. MENINGITA MENINGOCOCICA,

2. PURPURA FULMINANS

3. ASPIRAT PETESIAL, BIOPSIE CUTANATA:

IV. EXAMEN CITOBACTERIOLOCIC:

V. DETECTIE ANTIGENE SOLUBILE DIRECT

* Sange pentru hemoculturi:

 Neisseria gonorrhoeae- patogen exclusiv uman,

2. Alte tipuri de infectii:

DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC DIRECT:

Mediul Thayer Martin pentru cultivarea secretiei uretrale

Reactia catalazei +, Reactia oxidazei +

* Identificare rapida din cultura pura (pe baza

d) Identificare pe baza caracterelor antigenice:

e) Metode de biologie moleculara:

S-ar putea să vă placă și