Metode de laborator utilizate pentru aprecierea eficienei decontaminrii

Se urmrete eficiena decontaminrii suprafeelor i eficiena decontaminrii aerului. I Eficiena decontaminrii suprafeelor se apreciaz prin teste : chimice, bacteriologice, micologice i biologice (Decun i col. 1991, Bazgan, 1993, Antonescu i col. 1990). I.1. Testele chimice determin prezena urmelor de substane decontaminante pe suprafeele supuse decontaminrii, la anumite intervale de timp de la efectuarea decontaminrii. Aceste teste se recomand pentru verificarea efecturii decontaminrii i a uniformitii de dispersie a substanei decontaminante. I.2. Testele bacteriologice pot fi grupate n dou mari categorii: calitative i cantitative. Testele calitative sunt directe i indirecte. Testele bacteriologice directe urmresc decelarea microorganismelor patogene de pe suprafaa supus decontaminrii prin nsmnri pe medii de cultur speciale sau prin tehnici de colorare complexe. Schliesser T (1985) folosete microorganisme de referin, care sunt aprobate pentru a fi utilizate n scopul caracterizrii capacitii bactericide a unor substane ct i pentru controlul curent al eficienei decontaminrii de necesitate. Aceste test-organisme sunt : Staphilococcus aureus, Streptococcus faecium, Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis, Mycobacterium avium, Candida albicans, oochiti de Eimeria tenella ou neembrionate de Ascaris suum. Aprecierea eficienei decontaminrii profilactice se face prin teste bacteriologice indirecte, care evideniaz prezena unor bacterii cu semnificaie de indicatori sanitari sau reducerea numrului de microorganisme de pe suprafeele supuse decontaminrii (test bacteriologic cantitativ). n ara noastr, pentru controlul eficienei decontaminrii a fost oficializat testul coli, care urmrete punerea n eviden a prezenei Escherichiei coli pe mediul Levine ( Legea sanitarveterinar nr. 60/ 1974). Acest test nu reflect ndeajuns eficiena decontaminrii, deoarece colibacilii sunt sensibili la aciunea substanelor decontaminante i sunt distrui naintea altor germeni patogeni (bacilul tuberculozei, bacilul paratuberculozei, bacteriile sporulate, virusuri fr pericapsid) (Decun i col. 1991). Recoltarea probelor se face din minimum zece zone, n cazul adposturilor de tip gospodresc i de cel puin 20 de suprafee n cazul adposturilor de mare capacitate din complexele zootehnice (70 % din probele recoltate trebuie s fie de pe suprafeele care vin n contact cu animalele).

n vederea recoltrii probelor, se pregtesc tampoane de sanitaie (Ts). Tamponul se face din vat sau tifon rsucit pe o tij de aluminiu, introdus n eprubet de 180/ 18. pe aceast tij se confecioneaz un dop din vat hidrofug. n eprubet se introduc 10 ml soluie fiziologic i apoi se sterilizeaz prin autoclavare. Un numr egal de eprubete conin cte 10 ml soluie neutralizant corespunztoare substanei decontaminante: - 1% amoniac (pentru formaldehid) 0,1% acid acetic (pentru soda caustic, soda calcinat i var) 1% hiposulfit de sodiu (pentru varul cloros) Tween 80 soluie 3% sau lecitin din ou soluie 0,3% (pentru srurile de amoniu cuaternar). Soluiile neutralizante se introduc n eprubete de 180/ 18, se nchid cu dop de cauciuc i se sterilizeaz prin autoclavare. Recoltarea probelor se face din punctele cele mai suspecte sub raportul cureniei mecanice, reprezentative pentru adpost ( jgheaburi, adptori, pardoseal, grtare, perei, s tlpi, atc.). La flacr se scoate tamponul din eprubeta cu soluie fiziologic i se terge timp de 1 -2 minute o suprafa de 100 cm2, delimitat de un ablon ptrat cu latura de 10 cm. Dup tergerea suprafeei, tamponul se introduce n eprubeta cu soluie fiziologic. n laborator, se omogenizeaz energic i se nsmneaz prin inundare pe mediu Levine repartizat n plci Petri. Excesul de lichid se aspir cu pipeta Pasteur, iar plcile se incubeaz 48 ore la 37oC. Decontaminarea este apreciat ca eficient dac pe mediul Levine nu se dezvolt colonii de Escheriachia coli (violet nchis cu reflexe metalice aurii - verzui). Prezena coloniilor de E.coli din unele probe impune refacerea decontaminrii pariale, iar dac probele pozitive provin din locuri diferite se va reface decontaminarea n totalitate. Antonescu i Radu 1990, Decun i col. 1991, Bazgan i rc 1992, propun detectarea prezenei bacteriilor coliforme pe suprafeele decontaminate prin introducerea testului bacteriilor coliforme modificat (TBCM). Acest test a fost omologat i generalizat ncepnd cu 1 mai 1993. Se nsmneaz n condiii aseptice 1 ml din proba de sanitaie ntr-un tub cu 10 ml mediu Kessler- Swenarton sau bulion- bil- lactoz- verde briliant (B.B.L.V.) i tub de fermentare (Durhan). Incubarea tuburilor nsmnate se face la 37oC, timp de 48 ore. Este considerat pozitiv proba care a produs cel puin 1/10 gaz din volumul tubului de fermentare, iar mediul s-a tulburat. Testul bacteriilor coliforme modificat se aplic n decontaminrile profilactice generale.

Pentru verificarea eficienei decontaminrii de necesitate n tuberculoz, febr aftoas i alte boli, produse de germeni mai rezisteni dect E.coli, se recomand testul stafilococilor (T.S.). Stafilococii au o sensibilitate fa de decontaminante foarte asemntoare cu bacilul tuberculozei. Testul stafilococilor a fost propus din 1969 de Toi. (citat de Decun 1995). Pentru ara noastr testul stafilococilor este propus de ctre Decun i col. (1991), Lungeanu (1991) i Bazgan (1992), iar ncepnd cu 1 mai 1993 este omologat i generalizat n Romnia. Recoltarea probelor de sanitaie din adposturi se va efectua dup cel puin dou ore i cel mult 24 de ore de la efectuarea decontaminrii. Probele recoltate se transport la laborator n cel mult dou ore, iar nsmnrile se execut n aceeai zi. Cu ajutorul unei pipete sterilizate se agit i se preseaz tamponul de vat din eprubeta cu soluia fiziologic, se aspir 1 cm 3 de suspensie care se introduce ntr-o plac Petri sterilizat. Agarul Chapman se rcete la temperatura de 4243oC i se toarn n plcile nsmnate. Plcile se introduc n termostat la 37oC, 24 ore i apoi se examineaz. Coloniile de stafilococi sunt mici, rotunde, opace, cu marginile perfect netede. Cele din profunzimea mediului sunt discoidale, fr excrescene.(Decun 1995). Se consider c decontaminarea a fost eficient dac pe mediul Chapman nu au crescut colonii de stafilococi. Dac decontaminarea nu este corespunztoare se recomand refacerea decontaminrii, dup refacerea cureniei mecanice, insistnd asupra suprafeelor de unde s-au recoltat probele pozitive. Methling i col. 1983, Drouin i col. 1984, 1988, Bazgan i col. 1992 recomand aprecierea eficienei decontaminrii adposturilor de pui broileri utilizarea testului enterococilor. Recoltarea probelor de sanitaie se face n acelai condiii ca la testul coli. n acest scop se folosete agarglucoz- azid de sodiu- trifenil tetrazol clorur (agar Slanetz- Bartley) repartizat n plci Petri. Se fac dispersii cu tamponu8l de sanitaie, pe sectoare, pentru obinerea de colonii izolate. Cutiile Petri nsmnate se incubeaz la 44oC timp de 48 ore. Coloniile de enterococi sunt rotunde, cu marginea regulat, cu aspect mucos, de culoare roz, rou nchis. Mediul Slanetz s-a dovedit a fi 100% selectiv pentru enterococi, deoarece coloniile nu sunt invadante. Pentru testul enterococilor se poate utiliza i geloza cu citrat azid de sodiu- bilesculin. Decun i Oprin (1989); Decun i col. (1991) au realizat un mediu de cultur deshidratat, cu nsuiri selective fa de enterobacterii, recomandat pentru controlul microbiologic al eficienei decontaminrii n condiii de ferm ct i pentru aprecierea eficienei decontaminrii apei, denumit

test microbiologic de teren (T.M.T). Mediul conine : pepton, extract de carne, fosfat dipotasic, tiosulfat de sodiu, sruri biliare i citrat de fier, ingrediente care permit evidenierea enterobacteriilor care produc hidrogen sulfurat din metabolizarea aminoacizilor cu sulf (Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Salmonella, unele tipuri de E.coli). Evidenierea acestora semnific o contaminare de natur fecal. Mediul are capacitatea de a neutraliza clorul rezidual din apa clorinat. Mediul deshidratat i mbibat n hrtie de filtru, este introdus n eprubete n condiii aseptice. Recoltarea probelor de sanitaie se face cu o compres de tifon sterilizat umectat cu ser fiziologic, de pe o suprafa de 50 cm2, apoi se introduce n eprubeta cu mediu deshidratat. Se toarn ap distilat n eprubet, astfel nct s depeasc nlimea hrtiei de filtru. Eprubetele se incubeaz la temperatura camerei (20-26oC) sau la termostat (37oC) 24 ore. n cazul probelor pozitive se nnegrete coninutul eprubetei i are aspect tulbure. Pentru a se evidenia dezvoltarea bacteriilor coliforme fecale, fr a fi asociate cu enterobacterii productoare de hidrogen sulfurat, se folosete reactivul Ehrlich- Kovacs, pentru identificarea produciei de indol. Testul microbiologic de teren poate semnala o poluare fecal ridicat a apei. Testul numrului total de germeni mezofili aerobi (N.T.G.M.A) i a numrului total de micromicei (N.T.M.) se execut dup protocolul indicat de Direcia sanitar - veterinar din M.A. pentru controlul eficienei decontaminrii halelor pentru psri. Recoltarea probelor se face la 1824 ore dup decontaminare, folosind tampoane sterilizate, inute n eprubete, care nainte de folosire se umezesc prin introducerea n fiecare eprubet a cte 1 cm3 soluie fiziologic sterilizat. Se recolteaz minimum 50 de probe: cte 10 probe de pe adptori, hrnitori i eleveuze i c te 5 probe de pe pereii laterali, guri de admisie, aeroterme i pardoseal. Recoltarea se face prin tergerea unei suprafee de 100 cm2 din punctele alese, apoi tamponul se introduce n eprubet, care se individualizeaz prin numere. Paralel pe un caiet se consemneaz locul recoltrii, corespunztor fiecrui numr. nsmnarea probelor se execut prin tergerea tamponului pe suprafaa gelozei Plate Count repartizat n plci Petri pentru determinarea NTGMA, apoi pe suprafaa gelozei Sabouraud cu antibiotice (cloramfenicol) pentru micromicei. Pe o plac Petri se pot nsmna 6 probe, dup delimitarea a 6 zone triunghiulare, nscriind cu un creion dermatograf numrul probei pe sectorul nsmnat. Incubaia se face timp de 24- 36 ore la 37oC
o

pentru NTGMA i 4-5- zile la

temperatura de 25- 30 C pentru micromicei. Dup incubaie se numr coloniile corespunztoare fiecrei probe (Drghici 1991).

Eficiena decontaminrii pentru locul recoltrii se apreciaz astfel: Pentru NTGMA: decontaminare corespunztoare: - absena coloniilor - 1- 50 colonii decontaminare necorespunztoare: - peste 50 colonii - colonii numeroase - colonii confluente - cultur n gazon. Pentru NTM: decontaminare corespunztoare: - absena coloniilor - 1- 10 colonii Decontaminare necorespunztoare: - peste 10 colonii - colonii numeroase - colonii confluente - cultur n gazon Eficiena decontaminrii pe hal se apreciaz astfel: dac numrul probelor necorespunztoare nu depete 30% inclusiv, att pentru NTGMA ct i pentru NTM, decontaminarea halei corespunde normelor admise. Decontaminarea este necorespunztoare dac numrul probelor pozitive depete 30%, indicnd aceeai situaie pentru ntreaga hal. n acest caz se impune repetarea decontaminrii pariale, cnd probele necorespunztoare privesc numai ustensilele din hal, sau refacerea decontaminrii ntregii hale, cnd probele necorespunztoare se repartizeaz pe toate suprafeele supuse decontaminrii; Dac se dezvolt colonii de Escherichia coli, Pseudomonas sau Salmonella, se repet decontaminarea i controlul eficienei acesteia. (Drghici 1991). Aprecierea calitii decontaminrii finale n unitile asanate de tuberculoz bovin. Testul de sanitaie pentru evaluarea decontaminrii finale n tuberculoza bovin are trei etape: testul stafilococic (T.S.); testul bacililor acido- alcoolo- rezisteni (T.B.A.A.R.) biotestul pe cobai (B.T.C) (Antonescu i col 1990, Lungeanu 1993, Bazgan i col. 1994, Lungeanu i col. 1995) Testul stafilococic (T.S.) se folosete dup fiecare decontaminare final din cadrul celor 3-4 decontaminri finale i pentru toate obiectivele nchise. Tampoanele de sanitaie recoltate dup ultima decontaminare final se pstreaz la frigider. Testul bacililor acido- alcoolo- rezisteni (T.B.A.A.R) se practic dac testul stafilococic este negativ dup ultima decontaminare final.

Materialele supuse examinrii sunt resturile lichide (RL), solide(RS) sau cele recoltate cu ajutorul tampoanelor de sanitaie (Ts) n cantiti de 200 g, 200 ml sau 20 tampoane din fiecare zon prestabil din obiectiv. Zonele sunt: 1. pat (stand) (corespunztor locurilor a 15 animale) 2. iesle i adptori (corespunztor locurilor a 15 animale) 3. suprafee interioare (perei n special din spatele animalelor; stlpi de susinere la nlimea de 30-40 cm de la pardoseal; pervaze, ferestre, alee furajare) 4. sistemul de evacuare a dejeciilor din interiorul obiectivului (rigol, canal de evacuare, raclei, lanuri de acionare) 5. utilaje (remorci, crue, roabe etc.) 6. padocuri (pardoseal, stlpi, umbrare, rigole, adptori, iesle) 7. fos 8. ci de acces 9. lptrie i punct de tiere (pardosea, sifoane de scurgere, perei, pervaze, ferestre, recipieni, utilaj mic) 10. platform de gunoi sau bazine de decantare; 11. comasatul Ts de la testul stafilococic negativ determinat dup ultima decontaminare final Dac se constat c RS i RL sunt insuficiente i reprezint cca. , , , sau 1/1, din cantitatea necesar datorit lipsei de material de analizat, se poate compensa cu 5, 10, 15 respectiv 20 teste de sanitaie (Ts). De asemenea, se pot recolta resturi din orice alt punct suspect. Resturile solide (RS) se introduc n baloane de sticl sterilizate cu capacitate de cel puin 500 ml peste care se adaug ap distilat sterilizat n cantitate care s depeasc cu 3-5 cm nlime materialul recoltat. Se agit bine pentru omogenizare, apoi se filtreaz prin plnii acoperite cu tifon pentru reinerea impuritilor grosiere. Flacoanele cu filtratul se las n repaus timp de o or, fr s se agite. Se scoate o parte din supernatant n aa fel ca pentru fiecare RS s rmn cca. 75 -100 ml filtrat n balon. Acest filtrat se centrifugheaz la 3000 ture/ minut, timp de 30 de minute, n cupe cu capacitatea minim de 100ml. Lichidul supernatant se elimin i se adaug alt RS din aceiai zon din alt obiectiv pn la epuizarea RS din zona stabilit din toate obiectivele. Dup nlturarea supernatantului, se adaug cca. 10 ml ap distilat sterilizat, se omogenizeaz prin barbotare cu pipeta depozitul, apoi se centrifugheaz n mod identic i se nltur supernatantul. Cu

o ans de sticl cu vrful n U, se racleaz uor ntreaga suprafa a sedimentului, recoltnd stratul superficial de culoare mai deschis ntr-o eprubet cu 1 ml ap distilat. n aceast eprubet, pentru fiecare 1 ml suspensie se introduc cte 5 ml soluie 5% hidroxid de sodiu i 5 -6 picturi soluie apoas de albastru de bromtimol 2 sterilizat i se agit pentru omogenizare, apoi se termostateaz 30 minute la 37oC cu agitare din 10 n 10 minute. Se ajusteaz pH-ul la 7- 7,2 cu soluie de acid sulfuric 15% pn la apariia culorii verde deschis, apoi se verific cu hrtie indicatoare sau cu un aparat de precizie. Coninutul din eprubet se centrifugheaz la 3000 ture/ minut, timp de 30 minute i apoi se nltur supernatantul. Peste depozitul din eprubet se introduc 3 ml ser fiziologic glicerinat 5% (glicerin neutr) obinndu-se resturi prelucrate (RP) sau proba de lucru (PL). Resturile lichide (RL) se prelucreaz ca i RS cu diferena c nu se mai adaug ap distilat i se elimin faza de omogenizare. Lichidul rmas dup descrcarea tampoanelor de sanitaie (Ts) se introduce peste RS di zona respectiv nainte de prelucrare sau se prelucreaz ca RL. Resturile prelucrate se controleaz bacteriologic. Se fac cte dou frotiuri din fiecare rest prelucrat, din care unul se coloreaz prin metoda Ziehl- Neelsen, iar cellalt frotiu se coloreaz la rece cu auramin- rodamin. Frotiurile se examineaz n lumin clasic i respectiv n lumin fluorescent. T.B.A.A.R. (Testul bacililor acido- alcoolo- rezisteni) este negativ cnd nu se identific bacili acido- alcoolo- rezisteni n frotiu, TBAAR este pozitiv i se impune refacerea ultimei decontaminri finale la grupa de obiective de la care s-au evideniat bacilii. Dup refacerea decontaminrii finale, se recolteaz noi probe de sanitaie din obiectivele vizate, care vor fi prelucrate i examinate. Rezultatul negativ la toate RP permite efectuarea testului de sanitaie prin bioprob pe cobai. Acest test se bazeaz pe sensibilitatea i receptivitatea cobaiului fa de Mycobacterium bovis. Bioproba pe cobai din resturile comasate (RC) se execut dup decongelarea i constituirea inoculelor (I) astfel: - I1= RC1+RC4; I4= RC9+ RC5 I2= RC2+RC3 I3=RC6+RC7+RC8

I5= RC10+ RC11

Se iau cte 2 ml din fiecare RC, iar restul de prob de lucru se pstreaz la congelator timp de 12 luni de la constituirea lor, drept contraprob. Pentru acest test se folosesc numai cobaii care au avut reacii la tuberculinare, realizat cu cel puin cinci zile nainte.

Din fiecare inocul se injecteaz subcutanat n pliul drept al iei, cte 3 cobai cu 0,5 ml inocul fiecare. Dup inoculare cobaii vor fi bine hrnii i ngrijii timp de 90 de zile de la data inoculrii. Dup 21 de zile de la inoculare, se controleaz prin palpare, apariia nodulului la locul unde a fost inoculat i hipertrofia limfonodului ingvinal drept. Dac aceste modificri sunt prezente, unul din animalele respective din fiecare lot de 3 cobai va fi sacrificat pentru cercetarea leziunilor i pentru examenul bacterioascopic. La 40 de zile de la inoculare se efectueaz tuberculinarea cobailor, intradermic, cu 0,1 ml tuberculin bovin diluat 1/5 (1000UT) pe latura toracelui. Reacia pozitiv este evident prin apariia unui edem de minimum 5 mm diametru nsoit de eritem. O reacie foarte intens se caracterizeaz prin apariia unei zone de necroz central. n cazul instalrii alergiei tuberculinice, se sacrific unul dintre animale din grupurile unde a aprut alergia, pentru examenul bacterioscopic i morfopatologic. Restul cobailor sunt lsai pn la 90 de zile de la data inoculrii, cnd sunt sacrificai i examinai anatomopatologic i bacterioscopic. Dac n primele 35 de zile mor cobai inoculai, acetia sunt examinai anatomopatologic i bacterioscopic. Cnd moartea nu se datoreaz tuberculozei se inoculeaz un numr egal de cobai din inoculul respectiv n cel mult 10 zile de la moartea celor inoculai anterior. Aceti cobai sunt urmrii separat, nu se mai controleaz clinic sau alergic i se sacrific odat cu ceilali cnd primii cobai inoculai mplinesc 90 de zile. Inoculele se pstreaz la congelator la -18oC, timp de 12 luni de la data lurii probelor. Biotestul pe cobai este pozitiv n cazul prezenei modificrilor caracteristice n tuberculoz la un singur cobai, indiferent de perioada de apariie a acestora i sunt prezeni bacilii alcooloacido- rezisteni n frotiurile colorate Ziehl- Neelsen, realizate din organele cu leziuni. Biotestul pe cobai este negativ atunci cnd sunt absente leziunile caracteristice tuberculozei (sau neconfirmarea bacterioscopic a tuberculozei) la toi cobaii inoculai. Rezultatul pozitiv la unul sau mai multe inocule impune refacerea decontaminrii finale la toate obiectivele att din interior ct i din exterior, precum i reluarea procesului de biosterilizare n platforma de gunoi prin refacerea acesteia. Dup refacerea decontaminrii se recolteaz probe i se reiau aciunile de la testul acido- alcoolo- rezistenilor. Recoltarea probelor se face dup un timp minim de contact (de aciune) a substanelor decontaminante de 6 zile. Testul de sanitaie prin bioprob pe cobai negativ corelat cu respectarea msurilor de profilaie general, permite avizarea repopulrii unitii cu efective indemne.

n cazul unor viroze, cum este febra aftoas, testele bacteriologice pentru aprecierea eficienei decontaminrii nu sunt eficiente, deoarece unele decontaminante au efect antibacterian foarte bun, dar sunt puin active fa de virusuri. Pentru controlul eficienei decontaminrilor de necesitate finale se recomand practicarea bioprobei pe viel. Aprecierea eficienei decontaminrii generale n cazul evoluiei unor boli cu difuzibilitate mare se poate face prin utilizarea animalelor santinel. Psri, purcei i alte specii de animale, libere de anticorpi specifici, fiind lsate s circule libere ntr-un obiectiv, sunt urmrite clinic i serologic. n acest scop se folosesc un numr de cel puin 10 animale la vrsta la care sunt mai receptive la infecia specific. Durata desfurrii testului trebuie s fie de 3 pn la 5 ori mai mare dect perioada de incubaie a bolii asanate (Lungeanu i col. 1995). Se recomand cel puin un lot santinel cu 10 animale pentru 10 obiective interioare destinate creterii animalelor. Testul este negativ dac nu apar semne clinice i modificri specifice bolii sau nu se produce seroconversia la nici un animal din lotul santinel. n perioada de carantin profilactic se poate urmri un lot unic de animale de la repopulare n direcia infeciei specifice de care a fost asanat unitatea.

Eficiena decontaminrii aerului

Se apreciaz folosind teste bacteriologice i micologice cantitative i calitative, nainte ct i dup decontaminare. Numrul total de bacterii aerobe mezofile/ m3 de aer se determin prin metoda sedimentrii gravitaionale. Cutiile Petri cu geloz Plate Count se expun n locurile unde urmeaz s se efectueze determinarea, timp de 5-10-15 minute, n funcie de ncrctura microbian din aer (ncrctura microbian mare- timp redus de expunere). Cutiile Petri cu mediile de cultur solide repartizate se mpacheteaz n hrtie, se aduc n adpost i se etaleaz pe coala de hrtie care a fost folosit pentru mpachetat, cu partea deschis a capacului n jos, astfel nct microorganismele s sedimenteze numai pe suprafaa mediului de cultur. Dup expunere, se noteaz pe capacul plcii locul de recoltare i timpul de expunere i apoi se introduc n termostat la 37oC timp de 24 de ore. Dup incubaie, se numr coloniile dezvoltate i se reporteaz la m3 de aer, prin aplicarea formulei Omelianski:

UFC/ m3 = 63662 x N/ D2 x t
n care, 63662= coeficient empiric, propus de Omelianski N= numrul de colonii pe ntreaga plac Petri D= diametrul plcii n cm t = timpul de expunere n minute. Numrul total de micromicei/ m3 de aer se determin n mod asemntor, dar se folosete ca mediu de culotur geloza Sabouraud, Czapek- Dox sau geloza cu extract de cartof i zaharoz. Mediile fiind adiionate cu antibiotice. Incubaia cutiilor Petri se face la 25oC timp de 3-5 zile. Stafilococii din aer se determin pe mediu hiperclorurat Chapman, la 37oC. Se gsesc n mod constant n aerul adposturilor de animale ntru-ct au o rezisten crescut. Coloniile galbene manito- pozitive sunt cercetate mai departe pentru elucidarea testelor de patogenitate (coagulazopozitivitatea). Pentru izolarea stafilococului coagulazo- pozitiv se folosete mediul Baird Parker. Se incubeaz la 37oC pentru 48 ore. Testul este completat prin cercetarea catalazei i coagulazei care apare liber n mediu. Coloniile apar negre, lucioase, rotunde, convexe, nconjurate de zon

10

opac alb glbuie. Mediul Baird- Parker este alctuit din: agar 2%, glbenu de ou, telurit de potasiu, glicin, piruvat de sodiu. Streptococii Viridans i beta hemolitici se cultiv pe geloz- snge 5-10 % sau geloz- azid de sodiu. Bacteriile coliforme se cultiv pe geloz Levine, Endo, Istrati- Meitert, la 37oC.

11