UNIVERSITATEA AL. I.

CUZA IAI FACULTATEA DE FIZIC

Rezumatul tezei de doctorat

SINTEZA I CARACTERIZAREA UNOR SISTEME

HIBRIDE DE POLIMERI HIDROSOLUBILI I MEDICAMENTE/NANOPARTICULE CU APLICAII N BIOMEDICIN

Conductor tiinific, Prof. Dr. Dana Ortansa Dorohoi

Doctorand, Daniela Angelica Bndar (cs. Pricop)

Iai 2012 Universitatea Al. I. Cuza Iai

n atenia .. V facem cunoscut c n data de 18 februarie 2012, ora 10, n amfiteatrul L1, doamna Daniela Angelica Bndar (cs. Pricop) va susine, n edin public, teza de doctorat:
SINTEZA I CARACTERIZAREA UNOR SISTEME HIBRIDE DE POLIMERI HIDROSOLUBILI I MEDICAMENTE/NANOPARTICULE CU APLICAII N BIOMEDICIN

n vederea obinerii titlului tiinific de doctor n domeniul fundamental tiine Exacte, domeniul Fizic. Comisia de examinare a tezei:
Prof. Univ. Dr. Dumitru LUCA,

Preedinte Facultatea de Fizic, Universitatea Al. I. Cuza, Iai Prof. univ. dr. Dana Ortansa DOROHOI Conductor tiinific Facultatea de Fizic, Universitatea Al. I. Cuza, Iai CP. I Dr. Valeria Harabagiu Referent Institutul de Chimie Macromolecular Petru Poni, Iai Prof. Univ. Dr. Viorica IMON Referent Facultatea de Fizic, Universitatea Babe-Bolyai, Cluj-Napoca Prof. univ. dr. Viorel MELNIG Referent Facultatea de Fizic, Universitatea Al. I. Cuza, Iai V invitm pe aceast cale s participai la edina public de susinere a tezei de doctorat.

Cuprins
Introducere Cap I. Stadiul actual al cunoaterii n domeniul materialelor polimere inteligente i a obinerii de nanoparticule Bibliografie Cap II Metode de caracterizare a materialelor nanofazice, suprafeelor si filmelor II.1 Voltametrie ciclic II.2 Determonarea distribuiilor de dimensiuni prin mprtierea dinamic a luminii II.3 Determinarea potenialului Zeta pentru dispersiile coloidale II.4 Microscopie electronic de transmisie II.5 Microscopia de for atomic AFM II.6 Microscopie optic II.7 Difracia radiaiei X II.8 Determinri calitative i cantitative prin metode spectrale Bibliografie Cap III.Obinerea unor vezicule transportoare de medicamente pe baz de lipid i chitosan III.1 ncapsularea unor medicamente specifice n vezicule lipidice III.1.1 ncapsularea clorurii de magneziu n vezicule lipidice III.1.2 ncapsularea ketoprofenului in vezicule lipidice II.1.3 ncapsularea dexketoprofenului n vezicule lipidice II.1.4ncapsularea tramadolului n vezicule lipidice II.1.5 ncapsularea hidrocloridului hidrat n vezicule lipidice III.2 Caracterizarea in vivo a cineticii de eliberare a medicamentelor de ctre vezicule lipidice stabilizate n chitosan i compararea cu eliberarea in III.3 Evaluarea in vivo a medicament sistemele de vivo

proprietilor sistemelor de polimeri hidrosolubili trapai cu

IV.3.1 Cinetica de fixare si eliberare controlat a compuilor sintetizai (in vivo) IV.3.2 Testarea biocompatibilitii medicamentelor ncorporate n vezicule IV.3.3 Cercetarea efectelor medicamentelor ncorporate n vezicule, pe modele nociceptive Bibliografie Cap IV.Obinerea i caracterizarea unor sisteme de nanoparticule metale nobile , n medii apoase de polimeri amfifilici hidrosolubili IV.1 Sinteza nanoparticulelor de metale nobile IV.1 Sinteza nanoparticulelor de platina IV.2 Sinteza nanoparticulelor de argint IV.3 Sinteza nanoparticulelor de aur IV.2 Caracterizarea structural a nanoparticulelor obinute IV.3 Analiza comportamentului sistemelor de nanoparticule de Au n chitosan n raport cu diferii factori IV.3.1 Analiza stabilitii n timp a soluiilor de chitosan cu nanoparticule de au IV.3.2 Analiza comportamentului soluiilor de chitosan cu nanoparticule de aur nclzite IV.3.3 Analiza comportamentului soluiilor de chitosan cu nanoparticule de aur ngheate IV.3.4 Analiza comportamentului soluiilor de chitosan cu nanoparticule de aur sub aciunea unor activatori IV.3.4 Analiza comportamentului soluiilor de chitosan cu nanoparticule de aur sub aciunea radiaiei din spectrul vizibil IV.4 Evaluarea in vivo a proprietilor sistemelor de nanoparticule de metale nobile

IV.4.1 Evaluarea proprietilor antibacteriene ale nanoparticulelor in vivo pe diferite medii de cultur IV.4.2 Efecte induse de nenoparticulele de metale nobile Bibliografie Concluzii generale Lucrri publicate

Cap I. Stadiul actual al cunoaterii n domeniul materialelor polimere inteligente i a nanoparticulelor metale nobile
Medicina modern a fcut pai considerabili n nelegerea necesitii compatibilizrii medicamentului cu esutul. Practica a artat c de multe ori corpul percepe medicamentul ca pe un duman i se comport n consecin. Un domeniu de interes pentru aplicaiile din biomedicin, se ocup cu mbuntirea eficacitii medicamentelor n medii biologice, folosind nanotehnologia, n scopul dimensionrii acestora la nivel nanometric i creterea bio -disponibilitii lor. n ultimii ani au fost dezvoltate o varietate de tehnici n eliberarea controlat a medicamentelor i n aplicaii legate de funcionalizarea nanoparticulelor de metale nobile. Interesul medical, n potenialul acestor nanomateriale, este motivat de capacitatea lor de a interaciona individual cu biomoleculele i cu celulele. i ntrun caz i n cellat nu exist nc informaii suficiente referitoare la impactul acestora asupra sntii organismelor i a mediului nconjurtor. Rspunsul transportatorilor de medicamente, la stimulii mediului biologic, este condiionat de nivelul de stabilitate al soluiilor coloidale care-i conin. Aceast stabilitate depinde de mbuntirea proprietilor de suprafa a coloizilor, realizat prin acoperirea cu polimeri i care induc ntre acetia procese repulsive. Dac inem cont c stabilitatea sistemelor coloidale, att sub form de vezicule lipidice ct i sub form de nanoparticule, este influenat de diferii factori cum ar fi pH-ul, temperatura, fora ionic, dimensiunea particulei, etc. ne putem atepta ca interaciunile ce au loc ntre polimeri i coloizi (vezicule sau nanoparticule) s fie extrem de complexe. Stabilirea nivelului de stabilitate a soluiilor coloidale este definit n acord cu valoarea medie a potenialului Zeta . Acesta indic dac particulele dintr-un lichid tind sau nu s aglomereze, urmnd s precipite, sau prezint acel nivel de dispersivitate care s la permit interaciunea cu mediul biologic. Obinerea veziculelor lipidice Studiile au artat c folosirea n medicaii a transportatorilor de medicamente sub form de vezicule, avnd dimensiuni nanometrice, este mai puin toxic. Veziculele sunt structuri sferice formate prin auto-asamblarea moleculelor amfifile de fosfatidilcolin n soluie apoas. Celula vie pare s -i fi autoansamblat membrana dintr-un bistrat lipidic dup aceeai strategie. Pentru a obine vezicule, filmul lipidic de fosfatidilcolin, este hidratat cu diferite soluii (medicament) care,

de altfel, vor deveni coninutul veziculelor. Trecerea sistemului, din starea de bistrat lamelar n starea de vezicule, are loc ca urmare a creterii entropiei sistemului, care le determin autoansamblarea, mpachetndu-se unele n altele sub form de vezicule multilamelare de diferite dimensiuni.

Fig. 5 Formarea veziculelor lipidice din uniti individuale de form cilindric.

Pentru a produce mici vezicule unilamelare i cu dimensiuni nanometrice (15 - 50 nm), se folosete o baie de ultrasunete (figura 5). Ultrasonarea fragmenteaz aleatoriu veziculele multistrat, n ceea ce am putea numi vezicule unilamelare [24], a cror dimensiuni depind de amplitudinea semnalului ultrasonor. Adugarea chitosanului n soluiile de vezicule cu medicament conduce la modificarea dimensiunii i morfologiei veziculelor unilamelare, pr ovocnd creterea stabilitii acestora. Obinerea nanoparticulelor de metale nobile Metodele de sintez a nanoparticulelor au fost inspirate din natur, utiliznd faze suport polimerice. De exemplu, este bine cunoscut c n procesele de biomineralizare, proteinele i polizaharidele pot aciona ca suport pentru structurarea materialelor anorganice la nivel nanometric. Aceste faze suport s-au folosit pentru obinerea de nanoparticule bine definite i cu o distribuie ngust.

Nanoparticulele din metale nobile se pot obine prin sinteza electrochimic a nanostructurilor mono i bimetalice [33 - 35] i i gsesc aplicaii n domenii ce includ cataliza [35], sisteme de stocare a datelor, dispozitive electronice noi, chemo i biosenzori electrochimici [34], senzori refractometrici i de fluorescen. Folosirea efectului ultrasunetelor n electrochimie [37] mbuntete mult transportul de mas, modificndu -i viteza i, de asemenea, modificnd mecanismul reaciei electrochimice. Sinteza nanoparticulelor de aur n soluii apoase de chitosan a pus n eviden faptul c acesta devine agent de stabilizare i reducere datorit controlului nucleaiei. Dimensiunea nanoparticulelor de aur formate variaz n funcie de concentraia i masa molecular a chitosanului. Stabilitatea acestor soluii, este asigurat prin adsorbia moleculelor de polimer la suprafaa nanoparticulelor, producandu-se automat scderea tensiunii interfazice, datorit interaciunii ntre faza dispersat i mediul de dispersie. Cap II. Metode utilizate de caracterizare a materialelor nanofazice, suprafeelor i filmelor Una din caracteristicile fundamentale ale coloizilor de dimensiuni nanometrice, este raportul foarte mare suprafa -volum, care duce la apariia unor proprieti fizice sau chimice noi. Problema care se pune este de a determina exact aranjamentul n polimer i modificrile ce apar la nivel local n cadrul nanostructurilor. Caracterizarea soluiilor coloidale obinute a constat n: analiz structural, mezofazic, nanofazic i a proprietilor optice i de stabilitate . II.3 Determinarea Potenialului Zeta pentru dispersiile coloidale Analiza proprietii de stabilitate a soluiilor co loidale s-a realizat prin msurarea potenialului Zeta. Aceast tehnic const n mprtierea unui fascicul de lumin laser, incident prin centrul unei celule ce conine proba, sub un unghi de aproximativ 13 pentru a fi detectat i comparat cu fasciculul laser de referint. Potenialul Zeta se calculeaz din mobilitatea electroforetic a coloidului , a crui spectru de frecvene va fi analizat cu un software. Stabilitatea soluiilor coloidale este definit n acord cu o valoare medie a potenialului Zeta (tabelul 1) care indic dac particulele dintr-un lichid tind sau nu s floculeze [8]. Particulele care au potenialul Zeta mai pozitiv dect +30 mV sau mai negativ dect -30 mV, sunt n mod obinuit, considerate stabile. Msurarea distribuiilor de dimensiune i a stabilitii soluiilor coloidale a necesitat utilizarea unui aparat Malvern Zetasizer Nano ZS, model Zen-3500.

II.4 Microscopia electronic de transmisie (TEM) i Microscopia de for atomic (AFM) Imaginile micrografiilor TEM i AFM pentru nanoparticulele de Au, Ag i Pt au fost fcute cu un microscop Phylips CM 100 i n modul semicontact cu un dispozitiv Solver pe filme subiri. Aceste analize au avut drept scop analiza morfolofic a nanoparticulelor i evaluarea gradului de acoperire cu polimer. n TEM, tunul electronic trimite un fascicul de electroni accelerat spre cele dou lentile condensor, unde este focalizat [11]. Cmpul asociat unei lentile electrostatice, sub form de diafragm metalic circular, modific viteza electronilor, att n mrime ct i n direcie. Pentru a putea concentra cmpul magnetic n vecintatea axei optice, se utilizeaz lentilele magnetice sub form de solenoizi, coaxiali cu fasciculul electronic. Cmpul magnetic al lentilei modific direcia micrii electronilor, nfurnd" traiectoria lor n jurul axei optice, fapt ce produce rotaia imaginii electronice n raport cu obiectivul. Proba este plasat n apropierea lentilei electromagnetice obiectiv. Imaginea format de obiectiv se numete prima imagine intermediar i servete drept obiect pentru lentila electromagnetic intermediar. Apoi, aceast ultim imagine, este mrit de lentila electromagnetic proiector, care va forma imaginea final a obiectului pe un ecran fluorescent. n ceea ce privete realizarea schiei topografice a suprafeei probei, efectuat prin AFM, s-a folosit un aparat Solver Pro 7M. Imaginea este obinut prin msurarea fore de interaciune, n care fora repulsiv este influenat de densitatea total a electronilor din jurul unui atom. n timpul deplasrii vrfului de a lungul suprafeei probei, fora de interaciune pune uor n micare un cantilever. Componentele de baz ale unui AFM sunt vrful ascuit montat pe cantilever, sistemul de detecie pentru msurarea devierii cantileverului, traductor ul piezoelectric pentru micarea sondei n raport cu proba, sistem ul de feedback pentru meninerea constant a devierii prin reajustarea nlimii sondei i sistemul imagistic pentru convertirea punctelor nregistrate ntr-o imagine. Devierea cantileverului este amplificat cu ajutorul unui fascicul laser ce cade pe spatele cantileverului i este reflectat spre un detector cu fotodiod. II.6 Microscopie optic. Microscopie n cmp ntunecat (DF) Vizualizarea nanoparticulelor de metale nobile a fost posibil prin DF datorit efectului de plasmon, care s-a creat la interaciunea nanoparticulelor cu lumina, i care extinde dimensiunea aparent a acestora cu peste 100 nm. Cmpul ntunecat este obinut prin iluminarea probei sub un unghi oblic, astfel nct razele nedifractate s nu poat fi colectate de lentilele obiectiv. Efectul de cmp ntunecat poate fi obinut rapid, din cmpul luminos, prin rotirea

condensorului, astfel nct s fie captat de obiectiv doar lumina difractat de prob [13] i s-a realizat utiliznd un microscop inversat Nikon Eclipse Ti. II.7 Difracia radiaiei X Structura micro- i nano- fazic, ca i dimensiunile medii ale cristalitelor au fost investigate pe pulberi liofilizate prin difracie de radiaie X cu un difractometru Shimadzu XRD 6000, utiliznd radiaia CuK (1,54060 ) care opereaz la 40 kV i 30 mA. Difracia radiaiei X este o metod folosit n principiu pentru evaluarea constantei de reea, d a unei probe cristaline [14, 15]. Datorit lungimii de und mici, relativ la cea din lumina vizibil, radiaia X poate interaciona cu planele atomice din structura intern a materialelor. Picurile de difracie a radiaiei X sunt obinute prin interferena constructiv a fasciculului monocromatic mprtiat [15]. Utiliznd legea lui Bragg, putem prezice unghiurile de difracie. Lrgimea picurilor este dat de ecuaia lui Scherrer [14]. II.8 Determinri calitative i cantitative prin metode spectrofotometrice Determinarea structurii moleculare prin spectroscopie IR Pentru a confirma existena legturilor ntre polimer i nanoparticule au fost investigate spectrele FTIR ale sistemelor de nanoparticule din metale nobile n cei doi polimeri. Spectroscopia n domeniul (IR) este cea mai potrivit metod de identificare a prezenei gruprilor funcionale polare din structura moleculelor compuilor organici. Spectrometrul IR clasic este un aparat n care radiai a electromagnetic furnizat de o surs este separat n dou fascicule: un fascicul de referin i unul care trece prin prob [17]. Msurnd absorbia radiaiei ca funcie de frecven, se obine spectrul de absorbie ce poate fi considerat ca o amprent molecular i care este utilizat pentru identificarea compuilor i gruprilor funcionale. Spectrele FTIR au fost nregistrate ntre 4000 i 400 cm-1 cu un spectrofotometru Tensor 10 Bruker. Amplificarea semnalului de spectroscopie Raman la suprafa (SERS) Pentru a obine informaii despre structura molecular i dinamica strii electronice excitate a nanoparticulelor de Au, s-a folosit o tehnic de mprtiere Raman la rezonan. Acest fenomen se obine pentru moleculele adsorbite pe suprafaa nanoparticulei i care determin amplificarea semnalului Raman cunoscut, n literatura de specialitate, sub numele de SERS (spectroscopie Raman amplificat de suprafa). mprtierea Raman la rezonan, are loc atunci cnd

fotonul incident are o energie egal cu energia unui nivel de vibraie al moleculei aflate n stare excitat. n urma ciocnirii inelastice se vor produce linii Raman cu intensiti foarte mari (106) fa de difuzia Raman normal. Spectrele Raman au fost obinute cu un microscop inVia Raman, Renishaw, avnd un laser cu o singur lungime de und (633 nm). Identificarea unor specii moleculare prin spectroscopie UV-Vis Analiza proceselor de mbtrnire a soluiilor de chitosan cu nanoparticule de aur s-a realizat prin spectrofotometrie de absorbie molecular UV-Vis utiliznd un spectrofotometru Hitachi U2001. Msurtorile se bazeaz pe absorbia radiaiilor electromagnetice n domeniul de lungimi de und 200 - 1100 nm de ctre speciile absorbante, de nanoparticule de aur n soluii de chitosan. Spectroscopia de absorbie molecular const n aceea c se iradiaz proba de analizat cu radiaii de lungimi de und diferite (UV -Vis) i se nregistreaz spectrul de absorbie (intensitatea radiaiei funcie de lungimea de und) [33]. CONTRIBUII PERSONALE Scopul acestui studiu a vizat 1. Obinerea n condiii blnde a unor soluii coloidale de dimensiuni nanometrice cu o bun dispersitate sub form de: - vezicule lipidice ncrcate cu medicament i stabilizate n chitosan, - nanoparticule din metale nobile sintetizate n polimeri biocompatibili. 2. Evaluarea proprietilor acestor materiale att sub aciunea unor stimuli reactivi (temperatura-nclzire/rcire, pH-ul n procese de dializare, activatori chimici, radiaie luminoas) ct i n studii in vivo n interaciune cu esutul biologic pe medii de cultur, la eliberarea n medii gastrice sau n snge ca i la trecerea de bariera hemato-encefalic. Cap III. Obinerea unor vezicule transportoare de medicamente pe baz de lipid i chitosan Obinerea n condiii blande a soluiilor coloidale , se refer la ab ilitatea de a controla morfologia diferitelor domenii, n copolomerii bloc, prin reglarea echilibrului hidrofilic/hidrofobic. n acest studiu s-a analizat obinerea de vezicule lipidice, de dimensiuni nanometrice, ncrcate cu diferite medicamente care s poat fi stabilizate cu un polimer care s suporte pH-ul fluxului sanguin i s

asigure un control optim al eliberrii medicamentului. Medicamentele ncapsulate n veziculele lipidice de fosfatidilcolin au fost clorura de magneziu, ketoprofenul, dexketoprofenul, U50488 (hidroclorid hidratul) i tramadolul. Prepararea s-a realizat prin hidratarea filmul lipidic uscat, dup evaporarea solventului, cu o soluie de ap distilat i medicament. Dup ce a fost supus ultrasonrii timp de 20 min, pentru a obine vezicule unilamelare, soluia de lipid a fost combinat cu o soluie de 0,5% chitosan [5]. Pentru a aduce soluia de vezicule lipidice, cu medicament stabilizat n chitosan, la un pH neutru, aceasta a fost dializat timp de 10 de ore.

Fig. 22 Etapele de preparare a veziculelor lipidice simple LV i a veziculelor crcate cu ketoprofen i stabilizate n chitosan CKLV.

S-a observat c formulele obinute nu au prezentat eliberri de medicament n primele minute de dup administrare, ceea ce indic faptul c prin ultrasonare, ntreaga cantitate de medicament a fost ncapsulat n vezicule. Chitosanul a determinat rigidizarea membranelor i a permis ncrcarea lor cu sarcin pozitiv. Ca urmare, n toate sistemele analizate, chitosanul a fcut posibil creterea stabilitii veziculelor, corespunznd criteriilor soluiilor suspendate. Procesul de dializare, necesar aducerii soluiilor la un pH fiziologic, a condus la diminuarea stabilitii veziculelor, datorit proceselor de protonare / deprotonare. III.3 Evaluarea in vivo a proprietilor sistemelor de polimeri hidrosolubili ncrcai cu medicament Cinetica de eliberare a medicamentelor de ctre sistemele de vezicule lipidice stabilizate cu chitosan a artat c eliberarea ketoprofenului din vezicule lipidice se face ntr-un ritm mai lent fa de creterea concentraiei, la dizolvarea unei cantiti de cristale solide pure de ketoprofen n acelai mediu de eliberare. i eliberarea, n snge, a medicamentului din veziculele lipidicese, se face cu ntrziere fa de medicamentul nencorporat. n snge, concentraia maxim de medicament, eliberat din vezicule, se menine cu cteva ore n plus i efectul se prelungete fa de medicamentul neancorporat.

%
25 100

Concentratie molara (mol/L) x 10

Concentratie Plasmatica (g/mL)

90 80 CKL Ket cristale 70 60 50 40 30 5 20 10 0 0 5 10 15 20 25 30 35 0 40

60

**
50 40

20

** **

KET CKL

15

30 20 10 0 0 2 4 6 8 10

10

Timp (ore)

Timp (ore)

Fig. 32 Profilul de eliberare in vitro a ketoprofenului din veziculele stabilizate, comparativ cu un coninut echivalent de cristale solide pure de ketoprofen dizolvat n acelai mediu de eliberare.

Fig. 33 Variaia n timp a concentraiei de ketoprofen n snge, la oarecii tratai att cu vezicule cu medicament ct i cu o soluie simpl de ketoprofen.

n studiile de biocompatibilitate nu s-au constatat modificri semnificative la nivelul testelor hemoleucogramei, pentru animalele care au primit veziculele lipidice stabilizate cu chitosan i ncrcate cu oricare din medicamentele utilizate. Graficele obinerii efectului maxim posibil, pentru toate soluiile ncorporate n vezicule lipidice stabilizate n chitosan, au artat c: - procesul de eliberare al medicamentelor se produce n acelai timp; - intensitatea efectului scade fa de substanele nencorporate; - maximul de efect, se obine aproximativ n acelai timp (cam la 4 ore) dup administrarea oricrei soluii; -efectul medicamentelor ncorporate se prelungete n acelaii interval de timp. Corobornd efectele medicamentelor ncorporate, cu nivelul de medicament eliberat n snge la diferite momente de timp, din testele de comportament i testele de nocicepie, s-a putut realiza o corelaie relativ sub aspect somatic.
Tabel 17 Corelarea efectelor medicamentelor eliberate din vezicule lipidice Vezicule Atingerea Meninerea nivelului Prelungirea cu medicament nivelului maxim maxim eliberrii Ket. eliberat n snge 2 ore 4 ore 10 ore Efect ket. n tail flick 2 ore 6 ore 12 ore Efect ket. n writhes 3 ore 1 ora 8 ore Efect magneziu 6 ore 2 ore 12 ore

Se observ o bun corelare ntre obinerea concentraiei maxime de medicament n snge i inducerea unui efect antinociceptiv, semnificativ statistic,

doar n testul tail-flick. La nivel gastric, n testul Writhes, efectul ntrzie o or iar la nivelul sistemului nervos, din cadrul testului de comportament, ntarzie cu 4 ore. Fenomenul se datoreaz instabilitii chitosanului, ce acoper veziculele cu medicament, la pH-urile specifice acestor medii de eliberare. Efectul produs de analgezice n snge, s-a meninut maxim cea mai lung perioad de timp (6 ore) urmat de opioide, la care efectul s-a meninut maxim (4 ore), deoarece chitosanul, la pH-ul ridicat al sngelui, devine mai puin solubil, permind o mai lent destrmare a veziculelor. La nivel abdominal, efectul antinociceptiv al veziculelor cu medicament, n testul Writhes, s-a meninut maxim (1 - 2 ore) indiferent de medicamentul folosit, deoarece chitosanul devine mai solubil permind eliberarea mai rapid a medicamentului.

Cap IV.Obinerea i caracterizarea unor sisteme de nanoparticule metale nobile n medii apoase de polimeri amfifilici hidrosolubili n acest capitol este prezentat sinteza, caracterizarea i evaluarea in vivo a proprietilor nanoparticulelor din platin, argint i aur. Aceste nanoparticule fac obiectul unor aplicaii medicale, ce necesit obinerea lor printr -un proces de nucleaie, n condiii blnde, asiguranduli-se o bun dispersabilitate, prin reducerea n ageni de stabilizare. Evaluarea proprietilor nanoparticulelor in vivo s-a fcut urmrind efectul antibacterian pe culturi de bacterii i inducerea unor procese neurotoxice la nivelul sistemului nervos. IV.1 Sinteza nanoparticulelor de metale nobile Pentru sinteza nanoparticulelor de platin i argint , s-a utilizat o celul electrochimic alctuit din doi electrozi. Prin reducere la catod se formeaz atomi zero valenti provenii din disoluia oxidativ a anodului. Prezena electrolitului, alctuit din soluia de precursor i polimer, permite formarea de microdomenii de reacie restricionat pentru nanoparticulele ce se formeaz. Nanoparticulele de platin acoperite cu poliamidhidroxiuretan PAmHU, s-au obinut printr-o metod sonoelectrochimic [2, 4] care are avantajul controlului dimensiunii nanoparticulelor ce se formeaz n microdomeniile polimerului. Nanoparticulele de argint, acoperite cu poliamidhidroxiuretan, s-au sintetizat prin electrosintez n regim galvanostatic, pentru densiti de curent de 6,25 mA/cm2 (AgI) i 1,56 mA/cm2 (AgII), la temperatura camerei, sub agitare puternic i n atmosfer de azot. Timpul optim pentru sintez a fost de 15 min. Nanoparticulele de Au au fost obinute prin reducere n soluii de chitosan

cu diferite mase moleculare [7]. Prepararea soluiilor precursor, pentru fiecare din cele 4 tipuri de chitosan, s-a fcut amestecnd 2, 4, 6, 8 i 10 ml HAuCl4 3H2O 103 M cu 38, 36, 34, 32 i respectiv 30 ml de chitosan 0,1%; sub agitaie cu ultrasunete . Caracterizarea structural a nanoparticulelor a artat c nanoparticulele de platin au dimensiunile cristalitelor cuprinse n domeniul 10 - 42 nm i o stabilitate situat pe pragul de dispersie pentru densiti de curent 0,6 mA/cm2 1,2 mA/cm2. Dimensiunile, mai mari, obinute prin AFM sugereaz c nanoparticulele sunt acoperite cu macromolecule de PAmHU ca urmare a interaciunii ntre polimer i nanoparticule, conform studiilor FTIR. Sistemele coloidale prezint un nivel acceptabil de stabilitate conform valorilor medii ale potenialului Zeta. Nanoparticulele de argint, mpachetate n polimer par a avea o stabilitate mai bun pentru dimensiuni mai mari (100nm). Nanoparticulele de aur prezint o anumit dinamic a dimensiunilor, de la civa zeci de nm pn la cteva sute de nm, ca urmare a procesului de maturare Oswald i o multitudine de forme, puse n eviten att prin DF ct i prin TEM. Prin AFM s -a observat c nanoparticulele sunt acoperite cu chitosan i prin analiz FTIR s-au identificat gruprile funcionale care permit interaciunea cu polimerul.

0.20
PG MMW LMW OSL

0.15

0.10

545 2

tea de

aur (m

555 8

L)

Lung

Canti ta

550

imea

de un

540

d (n

0.05 530 535

m)

Absorbanta (u.a.)

Fig. 69 Spectrele UV-Vis-NIR ale chitosanului PG pentru toate concentraiile de precursor HAuCl4.

Fig. 70 Micrografia obinut prin microscopie optic DF, evideniaz faptul c nanoparticulele de Au au geometrii diferite, deoarece plasmonii acestora sunt colorai diferit.

Soluiile proaspt sintetizate se afl pe pragul de dispersie, urmnd ca prin mbtrnire n timp s li se mbunteasc nivelul de stabilitate.

10

IV.3 Analiza comportamentului sistemelor de nanoparticule de Au n chitosan n raport cu diferii factorii externi Supuse proceselor de mbtrnire n timp , soluiile de nanopatricule de Au acoperite cu chitosan (meninute la 23C), au fost analizate spectral UV-Vis-NIR la intervale de 2, 3, 4, 7, 8 i respectiv 11 luni, i determinate distribuiile de dimensiuni i de potenial Zeta la 2, 3, 7 i 11 luni dup sintez.
Absorbanta (u.a.)

Absorbanta (u.a.)

Absorbanta (u.a.)

530

2MMW 1luna 2luni 3luni 4luni 7luni 526 0,0 8luni 531 524 11luni 530 537 520

2LMW 1luna 2 luni 3 luni 4luni 7luni 8luni 11luni

524,5

530 521

629 638 638

Lungimea de unda (nm)

400

600

800

2PG 1luna 2luni 3luni 4luni 7luni 8luni

535
0,0

532 532

400

600

800

Lungimea de unda (nm)

0,0 400 600 800

Lungime de unda (nm) Fig. 78 Spectrul UV-Vis pentru toate soluiile de chitosan cu concentraii mici de aur.

Soluiile cu cea mai ndelungat stabilitate, de 11 luni, s -au dovedit a fi cele care conin concentraii mici de precursor de aur, indiferent de masa molecular a chitosanului. Soluiile cu concentraii medii de precursor de aur au avantajul c-i pot pstra forma i dimensiunea medie a nanoparticulelor, n polimerul cu mas mic i mare molecular. Stabilitatea acestor soluii scade odat cu creterea concentraiei de precursor de aur. Soluiile coloidale meninute la temperatura de 500C ntr-o etuv termostatat, au fost analizate spectral i li s-au determinat distribuiile de dimensiune i potenial Zeta, fiind apoi analizate prin TEM i spectroscopie Raman[10].
300000
1571,8

300000

300000 250000 200000 150000 100000

1515 2132,5 2917,6 1570 2118 2945 6PG m 6PG inc

250000

250000

Intensitate u.a.

Intensitate u.a

200000

200000
6MMW m 6MMW inc

150000
2918,5

150000

100000

100000
1571,8

Intensitate u.a.

6LMW m 6LMW inc

50000

603,6 659,5

50000 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500

50000 0 500 1000

1599,7

1500

2000

2500

3000

3500

500

1000

1500

2000

2500

3000

3500

Deplasare Raman (cm-1)

Deplasare raman (cm-1)

Deplasare Raman (cm-1)

Fig. 89 Spectre Raman pentru soluiile 6PG, 6MMW i 6LMW la concentraii mari de aur.

11

S-a observat c cu ct masa molecular a chitosanului este mai mare (PG) cu att soluiile prezint o mai bun stabilitate, odat cu creterea timpului de nclzire. Supuse procesului de nclzire, sistemele coloidale tind , n primele ore, s-i creasc progresiv intensitatea modului transversal la 530 nm, fapt ce indic o mbuntire a mediului dielectric n imediata vecintate a nanoparticulelor [12]. Acest lucru duce la i atomii din metalul nanoparticulelor, fenomen pus n eviden i de intensificarea semnalului Raman [13], mai ales la soluiile cu cea mai mare concentraie de precursor de aur. Soluiile coloidale supuse la o temperatur constant de -20 0C, n cicluri de cte 20 min n care au atins starea solid prin ngheare i apoi au fost readuse n stare lichid prin dezgheare la temperatura camerei tot n 20 min, au fost analizate spectral, li s-au efectuat msurtori de potenial Zeta, distribuii d e dimensiune i micrografii TEM [10]. S-a observat c, cu excepia probelor ce conin chitosan PG, toate celelalte au suferit procese de destabilizare mai rapid. Pierderea stabilitii a fost motivat, n toate cazurile, de creterea brusc a dimensiunilor clusterilor de nanoparticule, lucru dovedit i de pierderea culorii soluiilor i existena precipitatului depus pe fundul flaconului. Cu ct masa chitosanului scade cu att maximul de absorbie scade mai repede, ceea ce dovedete c succesiunea unui numr de congelri i decongelri conduce la degradarea stabilitii soluiilor care au suferit o cretere a vscozitii i determin precipitarea nanoparticulelor aglomerate [15].

Fig 99 Spectrul de absorbie pentru soluiile 6PG, 6MMW i 6LMW la ngheare.

O proprietate care se manifest, de altfel i la nclzirea soluiilor coloidale, este stabilitatea mai mare a chitosanului mare molecular. Aceasta pare s

12

fie motivat de faptul c dup legarea nanoparticulelor de aur se micoreaz intensitatea vibraei legturii N-H, fcndu-o mai flexibil [16]. Soluiile coloidale amestecate cu activatori (acid Formic i bufer Tris) , supuse unui proces de oxidare electrochimic n regim galvanostatic la un curent de 0,25 mA timp de 10 min, au fost analizate spectral n UV-Vis-NIR dup 30 minute i n final prin DF i RAMA.
0.4

Absorbance (a.u.)

Intensitate (u.a.)

0.2

2LMW MaetorB 10mL 2LMW+1mL Ac. Formic 10mL 2LMW+1mL Ac. Formic (2) 10mL 2LMW+1mL Ac. Formic (3) 10mL 2LMW+1mL Ac. Formic (4) 10mL 2LMW+1mL Ac. Formic (5)

80000

60000
2LMW m 2LMW +Ac Formic

40000
2134 1584 2907 2924

20000
0.0

235,5 1524 2142

0
400 600 800 1000

500

Deplasare Raman (cm-1)

1000

1500

2000

2500

3000

3500

Wavelength (nm)

(a) (b) Fig. 102 Modificarea absorbanei (a) i semnalului Raman (b) a sol. 2LMW n ac. formic.

Procedura de oxidare electrochimic, a probelor, s -a repetat de nc 4 ori, la intervale de 24 de ore. S-a observat o scdere a absorbanei, nsoit i de o deplasare spre lungimi de und mai mari. Soluiile proaspt preparate nu au prezentat creteri ale absorbanei, ci mai curnd mici scderi nsoite de deplasri spre lungimi de und mai mari. n final dispariia semnalului Raman pune n eviden tocmai scderea activitii optice a soluiilor cu nanoparticule supuse proceselor oxidative. Fenomenul poate fi datorat adsorbiei/absorbiei de hidrogen la nivelul nanoparticulelor de aur [18 - 20] n urma oxidrii electrochimice. Se induc astfel schimbri structurale n masa de substa i rezult o activitate metastabil ce se menine i dup eliminarea hidrogenului [21 - 22]. Odat cu mbtrnirea acestor soluii, are loc o reorganizare structural lent, care conduce la stri mai puin active. Au fost supuse iradierii, n spectrul vizibil, probe de nanoparticule de aur epuizate prin mbtrnire n timp, n scopul reactivrii efectelor de Plasmon Rezonant i SERS. S-a ales timpul optim de iradiere a probelor de 20 min, distana optim de 15 cm de lampa cu halogen i au fost termostatate la temperatura de 25 0C. S-a observat intensificarea efectului LPR (Local Plasmon resonance) i SERS.

13

Cretea semnalului Raman sugereaz o nbuntire a relaiei (interaciei intime) mediu-polimer i nanoparticule. Soluiile care conin chitosani, cu mase mici i medii moleculare, prezint cel mai puternic semnal Raman. La toate soluiile cu chitosan cu mas mare molecular, acest fenomen este mai slab.
0,7 0,6 0,5
2LMW 1exp 2exp 3exp 5exp 6exp 7exp 8exp 9exp 10exp 11exp 12exp 13exp 14exp 16exp test 2 17exp 18exp 19exp 20exp 800 21exp 22exp

250000

200000

2LMW m 2LMW Viz

Intensitate (u.a.)

525

Intensitate u.a.

0,4 0,3 0,2

525 614

150000
1546,5 2910 2123,4

100000

0,1 0,0 400

50000
1578

523

2134

2921

614

600

500

1000

1500

2000

2500

3000

3500

Lungime de unda (nm)

Deplasare Raman (cm-1)

(a) (b) Fig. 110 Spectrul de absorbie (a) i spectrul Raman (b) pentru soluia 2LMW aflat sub aciunea luminii.

IV. 4 Evaluarea in vivo a proprietilor sistemelor de nanoparticule metale nobile Pentru nceput au fost evaluate proprietaile nanoparticulelor de argi nt introduse n medii de cultur bacterian. S-a urmrit modul n care efectul antibacterian este influenat de dimensiunea acestora (29 nm la Ag I i 23 nm la Ag II), de concentraia (10, 30, 60 g/ml n mediu) i modul n care prezena polimerului modific aciunea nanoparticulelor n mediile biologice [25].
4,0

3,0
3,5

2,5

3,0

Densitate optica

Densitate optica

2,0 1,5 1,0 0,5 0,0 0 5 10 15 20 25 30

Control
AgI (1g/ml) AgI (5g/ml) AgI (5g/ml) AgII (1g/ml) AgII (5g/ml) AgII (5g/ml)

2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 0,0

Contro
AgI (1g/ml) AgI (5g/ml) AgI (50g/ml) AgII (1g/ml) AgII (5g/ml) AgII (50g/ml)

35

40

45

50

10

20

30

40

50

Timp (ore)

Timp (ore)

Fig. 129 Dinamica de cretere a curbei bacteriene n mediu LB cu E. coli pentru diferite mrimi i concentraii ale nanoparticulelor de argint

Fig. 130 Dinamica de cretere a curbei bacteriene n mediu LB cu S. aureus. pentru diferite mrimi i concentraii ale nanoparticulelor de argint.

14

Prin microscopie DF i SEM s-au pus n eviden prezena nanoparticulelor de argint n mediul de cultur i inducerea unor modificri n morfologia celulei. Acest studiu a artat c nanoparticulele de Ag au efect antibacterian chiar i la concentraii mai mici dect cele din literatur. Polimerul de acoperire PAmHU a permis o cretere cu 10 ore a ratei de inhibiie a mediului bacterian, datorit asigurrii unei mai bune dispersii a nanoparticulelor. Eficiena bactericid a soluiilor coloidale crete cu scderea dimensiunii nanopart iculelor, aderena la suprafaa bacteriei fiind datorat proprietilor de suprafa.
Control Ag I, 10 g/mL Ag II, 10 g/mL

d e f Fig. 131 Micrografiile SEM prezint efectele nanoparticulelor Ag I 29 nm i Ag II 23 nm asupra morfologiei celulelor de E. coli (a, b, c) i S. aureus (d, e, f).

Totui mecanismul major prin care nanoparticulele de argint au manifestat proprieti antibacteriene eficiente, pare a fi datorat formrii de aglomerri i ancorrii la suprafaa celulei bacteriene, ceea ce ne determin s credem c dispersia nanoparticulelor n polimer se menine chiar i n formele aglomerate. Studiul i propune, de asemenea, s evalueze biocompatibilitatea nanoparticulelor de Ag administrate intraperitoneal la oareci i a efectele produse de nanoparticulele de Au (AuNP) la imunizarea obolanilor tratai cu tulpini bacteriene test ca i asupra reactivitii imune a obolanilor n condiii de stres. S-a folosit o tulpin test (LPS, 250 micrograme) de endotoxin lipopolizaharid bacterian comun, produs de bacteriile Gram negative.

15

Dup administrarea nanoparticulelor de AgI la concentraii de 5 g/ml, 10 g/ml i polimer (grupului de control), n analizele de laborator s-a observant ca nu au aparut diferene semnificative a formulei elementelor leucocitare, GOT, GPT i a nivelurilor de LDH, nici a parametrilor imunitari (OC, PC, BC. ). Nanoparticulele de Au cu dimensiuni mai mici AuNP1 au contracarat efectul toxic indus de LPS (figura 135), prin creterea nivelului anticorpilor.

Fig. 135 Nivelul anticorpilor n a 9-a zi, postimunizate cu (LPS, 250 g/kg) la administrarea AuNP1 i AuNP2.

Fig. 137. Indicele de fagocitare in vitro al neutrofilelor circulante n a 9-a zi postimunizate cu (LPS) la administrarea AuNP1 i AuNP2.

Amble dimensiuni de nanoparticule au produs diminuarea indicelui de fagocitare in vitro a neutrofilelor circulante la loturile imunizate cu LPS (figura 137). n urma inducerii stresului electric, s-a constat o diminuare a titrului anticorpilor la animalele imunizate cu LPS i tratate cu AuNP1 i AuNP2, sugerndu-se c nanoparticulele de aur nu pot contracara efectele factorului de stres i a LPS (figura 138). Rezultate experimentale similare au fost observate i n cazul aplicrii edinelor de stres prin izolare individual n tub (figura 139), ns efectele sunt mai pronunate.

Fig. 138 Nivelul anticorpilor evaluat n a 4-a zi postimunizate cu (LPS, 250 g/kg) la administrarea AuNP1 i AuNP2, pentru animalele supuse stimuluilui electric

Fig.139 Nivelul anticorpilor n a 4-a zi postimunizate cu (LPS, 250 g/kg) la administrarea AuNP1 i AuNP2, pentru animalele supuse izolrii.

16

Studii de comportament i modificri neurocomportamentale , la oareci, au sugerat producerea unor efecte neurotoxice sub aciunea nanoparticulelor de argint. Acest lucru a putut fi evaluat prin investigarea histopatologic a creierului de obolan supus tratamentelor cu nanoparticule de Ag. De asemenea rezultatele de limitare a toxicitii induse de LPS, de ctre nanoparticulele de Au mpachetate n chitosan, la obolanii de laborator, au sugerat investigarea efectului acestora asu pra creierului i a ficatului. S-a constatat, la oarecii tratai cu nanoparticule de Ag, cum coeficienii creierelor au sczut semnificativ fa de lotul de control [28]. Putem spune c nanoparticulele de Ag induc degradri ale structurilor nervoase implicate n procesele memoriei, n loturile tratate cu nanoparticule de Ag, indiferent de dimensiunea acestora.

Fig. 144 Imagini de microscopie optic n DF indic formarea de aglomerri de nanoparticule de Ag n creierul de obolan (a) comparativ cu controlul (b)

Fig. 145 Histopatologia creierelor. Control (A), Ag I 5 g/ml (B), Ag I 10 g/ml (C), Ag II 5 g/ml (D), Ag II 10 g/ml (E). Sgeile indic clivajul neuronal indus de tratamentul cu nanoparticule de argint.

17

n cazul oarecilor tratai cu nanoparticule de Au de dimensiuni mai mari AuNP2 i LPS, ficatul a crescut semnificativ raportat la greutatea corporal, comparativ cu controlul. S-a constatat de asemenea o scdere semnificativ a greutii creierului n raport cu greutatea corporal numai n cazul LPS + AuNP2 comparativ cu controlul. Cu toate acestea n grupurile tratate cu LPS i cu ambele tipuri de AuNP nu au fost observate modificri patologice semnificative n creier.

AuNP1(n insert Controlul) (a)

AuNP (b)

Fig. 146 Imaginile de microscopie optic n DF indic formarea de aglomerri de nanoparticule AuNP2 n creierul de obolan (b) comparativ cu AuNP 1 unde se observ foarte puini plasmoni (a) i comparativ cu controlul (n insert).

Fig. 147 Histopatologia esuturilor cerebrale la obolanii masculi Wistar tratai cu LPS dup expunerea la AuNP1 i AuNP2. A. control; B. LPS; C. LPS + AuNP1; D. LPS + AuNP2.

18

Concluzii generale
n aceast lucrare mi-am propus s obin n condiii blnde, vezicule de dimensiuni nanometrice i nanoparticule platforme n biomedicin. Pentru a mpiedica procesul de absorbie a proteinelor opsonice pe suprafaa acestor transportatori a fost necesar stabilizarea lor prin polimerizarea unor monomeri biocompatibili. Am ales un polimer sintetic PAmHU cu proprieti biodegradabile i chitosanul, un biopolimer cationic, care poate interaciona att cu bistratul lipidic al veziculelor ct i cu membranele anionice ale celulelor. Pentru ajustarea pH-ului, la nivel fiziologic, toate sistemele coloidale au fost dializate, stabilitatea acestora fiind medie acceptabil pentru aplicaiile propuse. Caracterizarea formulrilor obinute a artat c veziculele sunt stabile datorit polimerului de acoperire, carea a rigidizat structurile veziculelor i a creeat o ncrcare cu sarcin pozitiv a acestora. Studiul efectelor in vivo a veziculelor cu medicament a pus n eviden urmtoarele: procesul de eliberare se prelungete n timp fa de substana nencorporat; momentul eliberrii medicamentului este controlat de comportamentul chitosanului la diferitele pH-uri ale mediilor biologice (efectul la nivel gastric s-a obinut cu ntrziere fa de obinerea maximului de concentraie din snge, de asemenea efectul sedativ obinut la nivelul sistemului nervos dup administrarea de magneziu ncorporat n vezicule, a suferit intrzieri i mai mari).

Caracterizarea nanoparticulelor a artat c acestea sunt acoperite cu polimer i prezint o bun stabilitate. Studiul comportamentului soluiilor coloidale de aur supuse unor factori fizici externi (nclzire, rcire) a artat c soluiile sufer n timp un proces de oxidare care se manifest mai rapid la ngheare i care n fina l poate fi considerat un proces de mbtrnire mai lent. Sub aciunea unor formulri chimice, nanoparticulele sufer un proces de oxidare care destabilizeaz foarte rapid structura sistemului coloidal. Prin iradiere n vizibil, am reuit s ntrziem procesul de oxidare n soluiile coloidale, provocnd intensificarea efectului LPR.

19

Evaluarea in vivo a efectelor nanoparticulelor de Ag i Au a artat c: - att nanoparticulele de argint ct i cele de aur n cei doi polimeri prezint o bun biocompatibilitate cu organismul. - creterea activitii antibacteriene, datorit prezenei polimerului de asociere n soluiile cu nanoparticule de argint, a permis obinerea unor rezultate superioare pentru soluii de nanoparticule cu dimensiuni i concentraii mai mici dect cele studiate n literatur. Mai mult dect att s-a observat c argintul cu dimensiunea medie de 23 nm este mult mai activ dect argintul de 29 nm. - soluiile cu nanoparticule de aur n chitosan acioneaz mpotriva toxicitii induse de (un factor nociv) LPS, fapt demonstrat prin analiza detaliat a parametrilor hematologici i a unor metabolii n serul animalelor experimentale. Sub aciunea celor dou forme de stres, nanoparticulele de aur, nu au putut contracara efectele supresive i ale activrii sistemului simpatic prin administrarea LPS. - soluiile cu nanoparticule de argint (23 nm i 29 nm) n PAmHU au prezentat efecte neurotoxice asupra creierului de obolan. Ambele soluiil de aur n chitosan nu au produs efecte neurotoxice, chiar dac la aurul de 22,22 nm s-au manifestat uoare modificri la nivelul indicelui ficatului i al creierului. Evaluarea histopatologic a creierelor n vederea determinrii neurotoxicitii induse de nanoparticule, a artat modificri sub form de clivaj local al neuronilor n cazul nanoparticulelor de Ag n PAmHU i lipsa total a modificrilor patologice n cazul nanoparticulelor de Au n chitosan. Comparnd comportamentul nanoparticulelor de metale nobile n cei doi polimeri se poate spune c: Nanoparticulele stabilizate n chitosan prezint modificri de comportament la interaciunea cu mediul n care ajung, datorit comportamentului diferit al chitosanului n funcie de pH. Nanoparticulele de metale nobile stabilizate n PAmHU sau n chitosan au produs efecte semnificativ diferite pentru dimensiuni aproape comparabile, att n mediile de cultur ct i n testele pe obolani.

20

Lucrri tiinifice
Lucrri publicate ISI 1. M. Stefan, L. Hritcu, M. Mihasan, Daniela Pricop, Irina Gostin, R-I. Olariu, Simona Dunca, V.Melnig, Enhanced antibacterial effect of silver nanoparticles obtained by electrochemical synthesis in poly(amidehydroxyurethane) media, Journal of Materials Science: Materials in Medicine, Volume 22, Issue 4 (2011), Pages 789-796, DOI 10.1007/s10856-011-4281-z, ISSN:0957-4530 (print version). ISSN: 1573-4838 (electronic version), Article;ISI Factor 2.325 (2010) Influence Score 0.597 Laura Obreja, Dana Pricop, N. Foca, V. Melnig, Platinum nanoparticles synthesis by sonoelectrochemical methods, Materiale Plastice, 47(1), 2010, p. 42 - 47. ISSN 0025/5289. L. Hritcu; M. Stefan; Daniela Pricop; Anca Neagu; M. Mihasan; Liliana Tartau; V. Melnig, Small size chitosan-capped gold nanoparticles attenuate LPS - induced toxicity after repeated administration in laboratory rats, Materials Science and Engineering C, 2011 (Impact factor 2,407), Influence Score 0,61 (trimisa spre publicare ). D. Bndar, C. Ionescu, V. Melnig, Study of Aging and Thermal Stability of Gold Nanoparticles functionalized with Chitosan in aqueous solutions , J. Colloid. Interf. Sci. (trimis spre publicare)

2.

3.

4.

Abstracte publicate n reviste ISI 5. L. Tartau, D. Bindar, D. Ciubotariu, V. Melnig, Evaluation of poly(amidehydroxyurethane) coated silver nanoparticles influence on morphine-induced place preference in rats, Conference:24th Congress Meeting of European-College-of-Neuropsychopharmacology Location: Paris, FRANCE Date: SEP 03-07, 2011, Sponsor(s): European Coll Neuropsychopharmacol,Source:European Neuropsychopharmacology Volume: 21 Supplement: 3 Pages: S267-S267, Published: SEP 2011, Impact Factor: 4,201; AIS 1,208 (2010). http://dx.doi.org/10.1016/S0924977X(11)70416-3(Influence Score 1,5779) L. Tartau, D. Bindar, V. Melnig, The effects of ketoprofen and dexketoprofen soft matter vesicles in an experimental pain model in mice , European Neuropsychopharmacology, Vol 20 Supplement 3, 2010, p. S276 - Papers of the 23rd Congress Meeting of European-College-ofNeuropsychopharmacology, AUG 28-SEP 01, 2010 Amsterdam, Netherlands,

6.

21

7.

8.

ISSN 0924-977X. (Abstract) Impact Factor: 4,201; AIS 1,208 (2010). http://dx.doi.org/10.1016/S0924-977X(10)70359-X (Influence Score 1,5779) Daniela Bndar, Ana Garlea, Liliana Tartu, Viorel Melnig, Design of magnesium chloride soft vehicle carrier, Magnesium Research 22(3) 2009, p. 185S, ISSN 0953-1424 (Abstract) (Impact Factor: 1.246 (2009))( Influence Score 0,267). Liliana Taru, Daniela Bndar, Raoul Vasile Lupuoru, Viorel Melnig, The effects of magnesium soft matter vesicles carrier in a nociceptive model in mice, Magnesium Research 22(3) 2009, p. 212S, ISSN 0953-1424 (Abstract) (Impact Factor: 1.246 (2009)) (Influence Score 0,267) .

Publicaii non-ISI publicate 1. Liliana Tartau, Daniela Bindar, V. Melnig, Morphologic analysis and in vivo subacute toxicity evaluation of nanovesicles encapsulating the K-opioid agonist U50488, Acta Chemica Iasi, Vol 18(2) 2. A. Cazacu, D. Bndar, L. Taru, L. Hricu, M. tefan, L. Ni, C. Ionescu, V. Nica, G.Rusu, M. Dobromir, V. Melnig (2011): Effect on nerve structures of functionalized gold-chitosan nanoparticles obtained by one pot synthesis. Analele tiinifice ale Universitii Alexandru Ioan Cuza, Seciunea Genetic i Biologie Molecular, XII(1), pg.45-51. 3. D. Bndar, A. Grlea, L. Taru, V. Melnig, Acetaminophen entrapped in soft matter vesicles design based on nociceptive model in mice , Academic Journal of Manufacturing Engineering, vol.8 Issue 1, 2010, pp. 12-17 ISSN 15837904.B+ 4. D. Pricop, M. tefan, M. Mihasan, L. Hricu, R. Olariu, V. Melnig, Antibacterial activity of silver nanoparticles obtained by electrochemical synthesis, The 16th International Conference the Knowledge-Based Organization: Applied Technical Sciences and Advanced Military Technologies, November 25-27 2010, Sibiu, Romania, Conference Proceedings Book Series: Knowledge Based Organization International Conference Volume: 7, ISSN 1843-6722. ISI Thomson Reuters Conference Proceedings Citation Index.B+ 5. D. Bndar, L. Taru, A. Grlea, L. Ni, V. Melnig, Effects of magnesium soft matter vesicles carrier on the behavioral manifestations in mice , Romanian Journal of Biophysics, vol. 20, nr. 1, p. 23 35, 2010.B+ 6. L.Taru, R.V. Lupuoru, D.Bndar, V.Melnig, Experimental researches on the effects of nano-vesicles encapsulating ketoprofen in a visceral pain model in mice, Therapeutics Pharmacology and Clinical Toxicology, Volume XIV, Number 2, June 2010, pp. 113-117.B+

22

7.

8.

L.Taru, C.E Lupuoru., D.Bndar, V.Melnig, Biocompatibility investigation and in vivo evaluation of ketoprofen entrapped in lipid vesicles , Annals of the Romanian Society for Cell Biology, Volume XVIII, Issue 2, December 2010.B+ D. Bndar, A. Grlea, L. Taru, A. Chiriac, L. Ni, V. Melnig, Effect of acetaminophen soft matter vesicles carrier in a somatic pain model in mice , Annals of the Romanian Society for Cell Biology, Vol. XIV, Issue 2, p. 256260, 2009 .B+

Participri la conferine/congrese internaionale i naionale: 9. D. Pricop, M. tefan, M. Mihaan, L. Hricu, R. Olariu, V. Melnig Antibacterial activity of silver nanoparticles obtained by electrochemical synthesis. The 16th International Conference the Knowledge-Based Organization: Applied Technical Sciences and Advanced Military Technologies, November 25-27 2010, Sibiu, Romania (prezentare oral). D. Bndar, A. Grlea, L. Taru, A. Chiriac, V. Melnig, Acetaminophen entrapped in soft matter vesicles design based on nociceptive model in mice effects correlation, The 2nd International Conference on Polymers Processing in Engineering, Galai, 22 23 octombrie 2009 (prezentare oral). L. Tartau, D. Bndar, R. V. Lupusoru, V. Melnig , The effects of magnesium soft matter vesicles carrier in a nociceptive model in mice International magnesium symposium, Romania, The XII th International Magnesium Symposium 22-25 Septembrie 2009 Iasi (prezentare oral). L.Taru, L.V. Lupuoru, D.Bndar, V. Melnig, Experimental Reseaches on the effects of tramadol soft matter vesicles in a somatic pain model in mice . Post.Satelite to the 46-th EUROTOX Meeting, Inovation Trough Nanotechnology and Nanomaterials- Current Aspect of Safety Assesment and Regulation, 22-24 april 2010, Dresden Germany (prezentare orala) L.Taru, D.Bndar, V.Melnig, Experimental researches on the effects of original tramadol loaded nanoparticulate formulations in visceral nociception , Joint meeting of 2-nd Hungarian Symposium on Neurostimulation, Hungarian Pain Society and Teaching course on Neuromodulation for Central and Eastern Europe , Greece and Israel, 30sept -2oct 2010, Pecs Hungary.(prezentare orala) L. Taru, C. E. Lupuoru, D. Bndar, V. Melnig Biocompatibility investigation and in vivo evaluation of ketoprofen entrapped in lipid vesicles Al XXVIII Simpozion Stiintific SRBC 9-12 Iunie 2010 , Constana (prezentare oral).

10.

11.

12.

13.

14.

23

15. L. Taru, C.E. Lupuoru, D.Bndar, V.Melnig, Designul, evaluarea toxicitii acute i studierea eliberrii in vivo a ketoprofenului trapat n nano -vezicule lipidice, , A XXVIII-a Sesiune Anuala a SRBC, 9-12 iunie 2010, Constana (prezentare oral) 16. L. Taru, R.V. Lupuoru, D. Bndar, V Melnig, In vivo release and visceral antinociceptive effect evaluation of ketoprofen loaded vesicles in mice 11-th International Congres of Clinical Pharmacology, Therapeutics and Toxicology 8-11 June Oradea 2010 (prezentare oral). 17. V. Melnig, L. Obreja A. Garlea, D. Bndar, Quantum nanoparticles effects used for biological application. The X-th National Coference of Biophysics CNB 2009 1-3 october 2009 Cluj (prezentare orala). 18. V.Melnig, N.Foca, L.Obreja, D. Pricop Size-controled synthesis of monodisperse platinum nanoparticle by sonoelectrochemical methods . 3-rd International Confertence Biomaterials & Medical Devices BioMed 2008, 13-16 november 2008 Bucuresti Participri cu poster 1. L. Taru, D. Bndar, V. Melnig The effect of ketoprofen and dexketoprofen soft matter vesicles in an experimental pain model in mice ,The 23rd ECNPCongres, Amsterdam, The Netherlands, 28 august-1 september 2010 (poster). 2. L. Taru, R.V. Lupusoru, D. Bndar, C. Lupusoru, V Melnig Experimental researches on the effects of tramadol soft vesicles in a somatic pain model in mice Inovation through nanotechnhology and nanomaterialsDresden 22-24 April 2010 (poster). 3. D. Bndar, A. Garlea, L. Tartau, V. Melnig, Design of magnesium chloride soft vehicle carrier, 12th International Magnesium Symposium, Iasi 22-25 septembrie 2009 (poster). 4. D. Bndar, A. Grlea, L. Taru, A.Chiriac, L Nit, V Melnig, Eeffect of acetaminophen soft matter vesicles carrier in a somatic pain model in mice The 15 th International Scientific Conference Land Force Academy 26-28 November 2009 Sibiu (poster). 5. D. Bndar, A. Grlea, L. Taru, A. Chiriac, L. Ni, V. Melnig, Soft vesicle carrier containing magnesium chloride self-assemble characterization, NanoRomania International Workshop Iasi, 2-5 iunie 2009 (poster). 6. A. Grlea, D. Pricop, V. Melnig, M. I. Popa, Paracetamol Nanocontainers Obtained in Cationic Polymer-Surfactant Self-Assembling Matrices, 8th International Conference on Physics of Advanced Materials, Iasi, 4-7 iunie, 2008 (poster).

24

L.Taru, D.Bndar, V.Melnig, Mophologic analysis and in vivo subacute toxicity evolation of nano-vesicles encapsulating the k-opioid agonist U50488, 1-er Colloque Franco-Romain de Chimie Medicinale, Iasi 07-08 oct 2010 (poster) 8. M. Viorel, . Marius, H. Lucian, M. Mihan, C. Irina, D.Pricop , Antibacterial activity of silver nanoparticles obtained by electrochemical synthesis in Poly(amide-hydroxyurethane) media. Al III-lea Congres Internaional i a XXIX-a sesiune anual a S.R.B.C., 8-12 iunie 2011, Arad 9. D. Bndar, L. Taru, A. Grlea, L. Ni, V. Melnig, Effects of magnesium soft matter vesicles carrier on the behavioral manifestations in mice, National Conference on Biophysics, Cluj-Napoca, 1-3 octombrie 2009 (poster). 10. D. Bndar, A. Grlea, L. Taru, A. Chiriac, L. Ni, V. Melnig, Soft vesicle carrier containing magnesium chloride self-ansamble characterization, Romanian Society of Pure and Applied Biophysics (RSPAB), Xth edition. Cluj Napoca 1-3 october 2009 (poster). 11. A. Cazacu, L. Ursu, D. Pricop, L. Hricu, S. Marius, V. Melnig, Silver nanoparticles plasmon resonant applications in biological microscopy, Conferina Naional de Fizic CNF 2010 - Iai 23-25 septembrie 2010, Rezumatele Lucrarilor p.174 (poster) 12. D. Bndar, A. Grlea, L. Taru, A. Chiriac, V. Melnig, Efectele acetaminofenului transportat in vezicule moi in modelul somatizari durerii la soareci, 21-22 octombrie 2009, Bucuresti (prezentare poster) 7.

Contract de cercetare PN II Idei cod 1996 nr. 509/2008: Sinteza in conditii blande prin nanodimensionarea particulelor metalice in matrice de copolimeri bloc amfifilici de nanoparticule active biologic - platforme in bioinginerie

25

Bibliografie selectiv
1. 2. 3. 4. 5. 6. D.D. Lasic, Elsevier, New York, 1998. El-Sayed, I. H.; Huang, X.; EL-Sayed, M. A. Nano letters, 5, 821, 2005 Mie G (1908) Ann Phys 25:377 El-Sayed MA (2001) Acc Chem Res 34:257 Kreibig U, Vollmer M (1995) Optical properties of metal clusters, Vol. 25. Springer, Berlin P. Buseck, J. M. Cowley, L. Eyring eds., High resolution transmission electron microscopy and associated techniques, New York, London, Amsterdam, Oxford University Press 1988). Douglas B. Murphy Fundamentals Of Light Microscopy And Electronic Imaging, a John Wiley & Sons, Inc., Publication. D. Cullity, Elemnts of X-Ray Diffraction, Reading, Addison-Wesley Publishing Co. Inc., 1978. J. P. Glusker, M. Lewis, M. Rossi, Crystal Structure Analysis for Chemists and Biologists, VCH Publishers, New York, 1994. R. Griffiths, J. A. De Haseth, Fourier Transform Infrared Spectrometr, Wiley, N York, 1986 J. R. Ferraro, K. K. Krishnan, Practical Fourier Transform Infrared Spectroscopy: Industrial and Laboratory Chemical Analysis, Academic Press, San Diego, 1990. R. K. Poole, Uldis Kalnenieks (2000) Introduction to light absorption: visible and ultraviolet spectra, n Michael. G. Gore (ed.), Spectrophotometry and Spectrofluorimetry Oxford University Press Grlea, A., M.I. Popa, V. Pohoa, V. Melnig, Ibuprofen/ketoprofen entrapment in chitosan based vesicle carrier, Rom. J. Biophys, 2007, 17, 157-168. Daniela Bndar, Ana Garlea, Liliana Tartu, Viorel Melnig, Design of magnesium chloride soft vehicle carrier, Magnesium Research 22(3) 2009, p. 185S, ISSN 0953Taru L., Lupuoru C.E., Bndar Daniela, Melnig V., Biocompatibility investigation and in vivo evaluation of ketoprofen entrapped in lipid vesicles, Annals of the Romanian Society for Cell Biology, Volume XVIII, Issue 2, December 2010 Snchez-Carpena, J., Domnguez-Hervella, F., Garca, I., Gene, E., Bugarn, R., Martn, A., Toms-Vecina, S., Garca, D., Serrano, J.A., Roman, A., Marin M, Mosteiro ML. Comparison of intravenous dexketoprofen and dipyrone in acute renal colic. Eur J Clin Pharmacol. 63 (8):751-60, 2007 Zippel, H, Wagenitz, A., A multicentre, randomised, double-blind study comparing the efficacy and tolerability of intramuscular dexketoprofen versus diclofenac in the symptomatic treatment of acute low back pain. Clin Drug Investig, 27 (8):533-43, 2007. Jimnez-Martnez, E., Gasco-Garca, C., Arrieta-Blanco, J.J., Gomez del Torno, J., Bartolome Villar, B.. Study of the analgesic efficacy of Dexketoprofen Trometamol 25mg. vs. Ibuprofen 600mg. after their administration in patients subjected to oral surgery. Med Oral, 9 (2):143-8, 138-43, 2004. L.Tartau, D. Bindar,V.Melnig, The effects of ketoprofen and dexketoprofen soft matter vesicles in an experimental pain model in mice, European Neuropsychopharmacology, Vol 20 S.3- Papers of the 23rd ECNP Congress,p. S276, ISSN 0924-977X Obreja, l., Foca, N., Popa, M. I., Melnig, V., Analele Univ. Al. I. Cuza, 7, 2008, p. 31. Cismaru, l., Hamaide, T., Popa, M., Materiale Plastice, 44(3), 2007, p. 243.

7. 8. 9. 10. 11. 12.

13. 14. 15.

16.

17.

18.

19.

20. 21.

26

22. Laura Obreja, Daniela Pricop, Neculai Foca, Viorel Melnig, Platinum nanoparticles synthesis by sonoelectrochemical methods, Materiale Plastice, 47 (1) pg.42-47 2010 23. Obreja, L., Foca, N., Popa, M. I., Melnig, V., Analele Univ. Al. I. Cuza, 7, 2008, p. 3 Obreja L, Dorohoi DH, Melnig V, Foca N, Nastuta A (2008) Poly(amidehydroxyurethane) templated Fe3O4 and Ag nanoparticles galvanostatic assay synthesis. Mater Plast 3: 261-2641 24. Melnig, V., Ciobanu, C., J Optoelectron Adv Mater, 7(6), 2005, p. 2809. 25. Ana Cazacu, Daniela Bndar, Liliana Taru, Lucian Hricu, Marius tefan, Loredana Ni, Cezar Ionescu, Valentin Nica, George Rusu, Marius Dobromir, Viorel Melnig (2011): Effect on nerve structures of functionalized gold-chitosan nanoparticles obtained by one pot synthesis. Analele tiinifice ale Universitii Alexandru Ioan Cuza, Seciunea Genetic i Biologie Molecular, XII(1), pg.45 -51 26. Bndar Daniela, Cezar Ionescu , V. Melnig, Study of Aging and Thermal Stability of Gold Nanoparticles functionalized with Chitosan in aqueous solutions, J. Colloid. Interf. Sci. (trimis spre publicare) 27. M. Baia, F. Toderas, L. Baia, J. Popp, S. Astilean, Chem. Phys. Letters 422, 127, 2006 28. Panacek A, Kevitek I, Prucek, R, Kolar M, VecerovaR, Pizorova M, Sharma VK, Nevena T, Zeboril R. Silver colloid nanoparticles: synthesis,characterization, and their antibacterial activity 29. Ming-Hua Hoa, Pei-Yun Kuoa, Hsyue-Jen Hsieha, Tzu-Yang Hsienb, Lein-Tuan Houc,Juin-Yih Laid, Da-Ming Wanga, Preparation of porous scaffolds by using freezeextraction and freeze-gelation methods Biomaterials 25 (2004) 129138) 30. L.D. Burke, A.M. O'Connell, A.P. O'Mullane, J. Appl. Electrochem. 33 (2003) 1125. 31. B. Bozzini, G. Giovannelli, S. Natali, Scr. Mater. 43 (2000) 877. 32. O'.M. Bockris, Z. Minevski, Int. J. Hydrogen Energy 25 (2000) 747. 33. J. Das, S. Patra, H. Yang, Chem. Commun. (2008) 4451 34. Hyun Ju Kang, Srikanta Patra, Jagotamoy Das, Abdul Aziz, Jinkyung Jo, Haesik Yang Effect of aging on the electrocatalytic activity of gold nanoparticles H.J. Kang et al. / Electrochemistry Communications 12 (2010) 12451248 35. Lucian Hritcu; Marius Stefan; Daniela Pricop; Anca Neagu; Marius Mihasan; Liliana Tartau; Viorel Melnig, Small size chitosan-capped gold nanoparticles attenuate LPS induced toxicity after repeated administration in laboratory rats - trimisa spre publicare in Materials Science and Engineering C. 36. D. Pricop, M. tefan, M. Mihasan, L. Hricu, R. Olariu, V. Melnig, Antibacterial activity of silver nanoparticles obtained by electrochemical synthesis, The 16th International Conference the Knowledge-Based Organization: Applied Technical Sciences and Advanced Military Technologies, November 25-27 2010, Sibiu, Romania, Conference Proceedings Book Series: Knowledge Based Organization International Conference Volume: 7, ISSN 1843-6722. ISI Thomson Reuters Conference Proceedings Citation Index 37. Garner J.P., Mason G.J., Behav Brain Res. 2002; 136(1):8392. 38. L. Hritcu, A. Ciobica, L. Gorgan, 2009, Nicotine-induced memory impairment by increasing brain oxidative stress. Cent. Eur. J. Biol., 4(3), 335 342.

27