PREPARATE

MICROSCOPICE
CATEDRA DE MICROBIOLOGIE
LP 3
COLORATII DIFERENTIALE
COLORATIA ZIEHL - NEELSEN
INDICATII:
- colorarea la cald a micobacteriilor din
prelevate patologice sau culturi
COLORATII DIFERENTIALE
COLORATIA ZIEHL - NEELSEN
Reactivi:
1. Solutie de fucsina fenicata Ziehl
2. Solutie decoloranta: amestec acid
alcool (H2SO4 + alcool etilic 95)
3. Solutie recoloranta: albastru de metilen
COLORATII DIFERENTIALE
COLORATIA ZIEHL - NEELSEN
Procedura:
1. Se aseaza lama cu frotiul fixat pe un
suport metalic
2. Se acopera frotiul din abundenta cu sol.
de fucsina fenicata
3. Se lasa 15, timp in care se fac 3 treceri
cu flacara becului de gaz Bnsen pe sub
lama de sticla, astfel incat sa incalzim
colorantul pana la emitere de vapori.

COLORATII DIFERENTIALE
COLORATIA ZIEHL - NEELSEN
Atentie! Colorantul nu trebuie sa ajunga la
fierbere!
Daca colorantul se evapora sau se usuca
pe lama, trebuie sa adaugam colorant
proaspat!
4. Se spala frotiul din abundenta cu apa de
robinet

COLORATII DIFERENTIALE
COLORATIA ZIEHL - NEELSEN
5. Se decoloreaza frotiul cu amestec acid
alcool 2
6. Se spala cu apa de robinet
7. Recolorare cu sol. albastru de metilen 1

COLORATII DIFERENTIALE
COLORATIA ZIEHL - NEELSEN
Citire si interpretare:
- bacilii acido alcoolo - rezistenti (BAAR)
apar rosii stralucitori
- celulele inflamatorii, celulele de
descuamare sau celulele tisulare, bacteriile
neacido alcoolo rezistente se vor
colora in nuante de albastru
COLORATII DIFERENTIALE
COLORATIA KINYOUN
INDICATII:
Coloratie la rece a micobacteriilor din
prelevate patologice sau culturi
COLORATII DIFERENTIALE
COLORATIA KINYOUN
Reactivi:
A. Solutie de fucsina fenicata Kinyoun
B. Solutie decoloranta de acid alcool
(HCl + alcool etilic 95)
C. Solutie recoloranta: albastru de metilen
COLORATII DIFERENTIALE
COLORATIA KINYOUN
Procedura:
1. Colorare la rece cu sol. de fucsina fenicata
Kinyoun 5
2. Spalare cu apa de robinet
3. Decolorare cu amestec acid alcool 30
4. Spalare cu apa de robinet
5. Recolorare cu albastru de metilen 1
6. Spalare cu apa de robinet.
COLORATII DIFERENTIALE
COLORATIA KINYOUN
Citire si interpretare:
- bacilii acido alcoolo - rezistenti (BAAR)
apar rosii stralucitori
- celulele inflamatorii, celulele de
descuamare sau celulele tisulare, bacteriile
neacido alcoolo rezistente se vor
colora in nuante de albastru

COLORATII SIMPLE
Coloratia cu albastru de metilen: 2
Coloratia cu albastru de metilen, varianta
Wayson: 10
COLORATII NEGATIVE
1. Coloratia negativa cu tus de India
Principiu:
particulele colorate nu pot penetra capsula
bacteriilor sau levurilor, care apare necolorata
pe fondul colorat al preparatului
Indicatii:
depistarea Cryptococcus neoformans,
depistarea capsulei bacteriene in primoculturi,
urmarirea reactiei de umflare a capsulei etc.
COLORATII NEGATIVE
Citire si interpretare:
Bacteriile si levurile capsulate apar
inconjurate cu un halou clar pe fondul
uniform intunecat al preparatului.
COLORATII NEGATIVE
2. Coloratia negativa cu nigrozina
COLORATII FLUORESCENTE
Coloratia cu auramina rhodamina
Principiu:
Structuri speciale, lipoidice, asociate peretelui
unor bacterii confera rezistenta la decolorarea
protoplastului prin solutii de acizi sau/si alcool.
Bacteriile care nu poseda asemenea structuri
sunt decolorate si trebuie recolorate pentru a
putea fi observate.
Endosporii bacterieni, ascosporii, chistele unor
protozoare (ex. Cryptosporidium) sunt de
asemenea acidorezistenti gratie invelisurilor lor.

COLORATII FLUORESCENTE
Invelisurile unor microorganisme
(micobacterii,endospori, chiste de
Cryptosporidium etc.) sunt impermeabile si
pentru colorant, care trebuie sa actioneze
in solutii concentrate fie la cald, fie in
prezenta unor detergenti.
COLORATII FLUORESCENTE
Indicatii:
Triajul frotiurilor din prelevate patologice
pentru depistarea rapida a bacililor
tuberculozei.
COLORATII FLUORESCENTE
Reactivi:
1. Solutie coloranta cu Auramina O
Rhodamina B
2. Solutie decoloranta (HCl conc. + alcool
etilic 95)
3. Contracolorant: KMnO4
COLORATII FLUORESCENTE
Procedura:
1. Colorare cu sol. Auramina O
Rhodamina B 15
2. Spalare cu apa de robinet
3. Decolorare cu acid alcool 2
4. Spalare cu apa de robinet
5. Contracolorare cu KMnO4 2
6. Spalare cu apa de robinet
COLORATII FLUORESCENTE
Examinare la microscopul cu fluorescenta
cu obiectivele de 20x si 40x, asociate cu
oculare de 10x.
COLORATII FLUORESCENTE
Citire si interpretare:
Bacilii acido alcoolo rezistenti se
coloreaza fluorescent stralucitor in galben
portocaliu cu Auramina O Rhodamina
B.
Contracolorarea cu KMnO4 face fondul
frotiului negru eventual numai cu resturi celulare
cu fluorescenta galbena slaba.

ALTE TIPURI DE COLORATII
1. Coloratia May Grnwald Giemsa
(aprecierea celularitatii)
2. Coloratia pentru Fe. (hemosiderina,
sangerari tisulare)
3. Coloratia PAS (depistarea fungilor se
coloreaza in rosu)
4. Coloratia cu albastru de toluidina (pentru
Pneumocystis carinii, P.jirovecii)
ALTE TIPURI DE COLORATII
5. Coloratia cu SUDAN III pentru lipide
6. Coloratii imunocitochimice, reactii
peroxidaza antiperoxidaza
etc.