2. Imunogenetica transplantului de organe.

Cuvinte cheie: complex major, HLA, celule T, rejet, coss-match, tipizare, anticorpi, donator, recipient;
Complexul major de histocompatibilitate. Antigenele leucocitare umane-HLA. Alorecunoaterea. Imunitatea umoral i celular.
Activarea celulelor T. Citochinele. Formele de rejet (hiperacut, acut, cronic). Testele de histocompatibilitate, reacia cross-match.
Tipizarea antigenelor HLA-A,B,C,DR,DQ. Anticorpi preexisteni. Lista de ateptare a recipienilor (Waiting list).
Tratamentul imunosupresiv n transplantul de organe
Cuvinte cheie: tratament imunosupresiv, Ciclosporina A, corticosteroizi, citostatici, anticorpi monoclonali, anticorpi policlonali,
protocol imunosupresiv, tratament antirejet.
Agenii imunosupresivi convenionali. Ciclosporina A, mecanismul de aciune, metodele de administrare i monitorizare a
medicamentului, efectele secundare, diagnosticul i tactica de tratament. Corticosteroizii, mecanismul de aciune, efectele adverse.
Azathioprina, modul de aciune, efectele secundare. Protocoale imunosupresive contemporane utilizate n transplantul de organe.
Anticorpii policlonali i monoclonali (OKT-3, ATG, ALG). Alte noi medicamente imunosuprsive Tacrolimus (Prograf),
Micophenolatul de mofetil (CellCept), Sirolimus, Daclizumab, etc. Tratamentul rejetului acut, tardiv, cronic i refracter.
Celulele T sunt implicate in raspunsul imun mediat celular si includ celulele T helper CD4+, celulele T supresor CD8+ si celulele T
citotoxice.
analizorul automat pe principiul citometriei in flux cu fluorescenta utilizand LASER semiconductor si focusare hidrodinamica.
Concentrat leucocitar de afereza (CL)
Definitie
Produs sanguin labil constituit esential din granulocite n suspensie n plasma, obtinut prin afereza practicata pe donator unic.
Proprietati
Principala functie a granulocitelor este fagocitoza bacteriilor.
De regula. suspensiile granulocitare sunt preparate pentru un pacient determinat si se administreaza imediat. Daca o depozitare intermediara e inevitabila, aceasta
va fi facuta la +20 C - +24 C pentru maximum 24 ore. Plachetele si leucocitele pierd viabilitatea rapid la +4C . Formeaza microagregate, care sunt prezente n
cantitate considerabila deja dupa 3-4 zile de stocare a sangelui integru si mult mai mult n concentratele de globule rosii.

Aceste microagregate pot trece prin filtrele dispozitivelor de transfuzie obisnuite. Sunt susceptibile de a antrena o reducere a functiei pulmonare, obstruand
capilarele pulmonare, fenomen care poate avea importanta clinica n timpul transfuziilor masive.

Extractia plachetelor n timpul prepararii produselor sanguine reduce formarea microagregatelor. De asemenea, saracirea n leucocite prin scoaterea nvelisului
leucoplachetar reduce frecventa reactiilor transfuzionale febrile si contribuie la obtinerea eliminarii unei mari parti a leucocitelor n caz de folosire a fibrelor
prevazute pentru acest efect.
Metode de preparare
Leucofereza cu ajutorul separatorului de celule, cu centrifugare in mod continuu sau discontinuu. Pentru a mbunatati randamentul, se recurge n mod curent la
premedicatia donatorului (steroizi). Se poate mbunatati de asemenea randamentul, adaugnd un agent de sedimentare a eritrocitelor, cum ar fi hidroxietilamidon,
dextran cu greutate moleculara mica sau gelatina fluida modificata.
Etichetarea
Eticheta fiecarui recipient va purta aceleasi specificatii ca si pentru CE (concentratul eritrocitar). Informatiile suplimentare ulterioare pot fi trecute pe punga sau pe
recipientul ce contine unitatea (cutie):
volumul suspensiei si numarul scontat de granulocite,
data (ziua si ora) prepararii,
data (ziua si ora) expirarii;
indicatia ca produsul sa fie transfuzat imediat;
Conservare si stabilitate
Acest preparat nu se preteaza la stocare si trebuie transfuzat ct mai repede posibil dupa prelevare. Daca nu se poate evita stocarea, perioada de conservare
trebuie sa fie limitata la 24 de ore la o temperatura ntre +20C si +24C. Testarea pretransfuzionala : Aceiasi ca si pentru CE si (n laboratoare specializate)
compatibilitatea dupa sistemul HLA.
Testarea pretransfuzionala
nainte de comanda - determinarea n spital CE al grupului OAB/Rh a pacientului
nnainte de livrarea componentului din Institutia Serviciului de snge OAB/Rh, anticorpilor eritrocitari al pacientului, teste de compatibilitate (OAB/
Rh, antiglobulinic indirect (Coombs) , fenotipare). La copii de vrsta pana la 4 luni adaugator se efectueaza compatibilitatea ntre eritrocitele
donatorului si serul mamei.
n spital nnainte de transfuzie - proba la compatibilitate dupa grup (OAB) si proba cu jelatina de 10% (Rh) ntre eritrocotele donatorului si serul
pacientului .
Transport
Unitatea trebuie transportata pna la utilizator ntr-un recipient la o temperatura de +24C.
Indicatii
Concentratele de granulocite pot fi utilizate la pacientii care sufera de neutropenie severa si cu soc septic dovedit, n paralel cu administrarea unui tratament
antibiotic adecvat.
Precautii
Contaminarea cu globule rosii fiind importanta, se recomanda efectuarea unei probe de compatibilitate. La bolnavii imunodeprimati granulocitele trebuie expuse
unei doze adecvate de radiatii ionizante nainte de transfuzie.
Efecte secundare
Aceiasi ca si la CE.
suprancarcare circulatorie,
aloimunizari mpotriva antigenelor HLA si eritrocitare,
risc de transmitere a sifilisului, atunci cnd sngele total a fost conservat mai putin de 96 ore la +4 C,
risc de contaminare virala (hepatit, HIV etc): se poate produce chiar dupa o selectie riguroasa a donatorilor si a testelor de depistare,
risc, n rare cazuri, de contaminare cu protozoare (de exemplu paludism),
dezechilibre biochimice n cazul transfuziilor masive, de exemplu hiperpotasemie.

Tehnica Dynal SSP pentru tipizarea HLA
Este aplicata in laboratorul Synevo pentru determinarea HLA-B27, marker pentru spondilita ankilopoietica.
Dynal SSP este o tehnica PCR ce utilizeaza primeri cu secventa specifica pentru tipizarea HLA. Produsul Dynal SSP consta in amestecuri de primeri,
fiecare continand una sau mai multe perechi de primeri specifici, precum si o pereche de primeri de control (specifici pentru o secventa nonalelica din
proba, care functioneaza ca un control intern al PCR, verificand eficienta procesului). Dynal SSP este bazat pe principiul ca un set de primeri cu o
complementaritate perfecta cu proba poate fi utilizat mult mai frecvent si mai eficient decat seturile de primeri cu una sau mai multe nucleotide
necomplementare la capatul 3. Specificitatea sistemului de tipizare este parte a procesului de amplificare, iar procesarea post-amplificare este redusa
la maximum. In cazul in care are loc amplificarea, identificarea alelelor tinta se face prin electroforeza in gel de agaroza.
Interpretarea rezultatelor obtinute poate fi facuta rapid cu ajutorul unui program de interpretare - Dynal SSP Tool, care furnizeaza o a doua opinie dupa
interpretarea manuala, reducand astfel riscul unor erori umane.