1

Genetica definiie, obiect de studiu

Genetica, definit succint, este tiina ereditii i variabilitii organismelor.
Termenul genetic provine din grecescul gennaein care nseamn a nate.
Ereditatea (latinescul hereditas = motenire) este o nsuire esenial a organismelor, care
denot asemnarea dintre prini i urmai. Indiferent de gradul de evoluie al organismelor
(procariote sau eucariote) informaia genetic este codificat n acizii nucleici (ADN sau
ARN), care intr n structura cromozomilor prinilor, iar n urma proceselor de replicaie, de
tip semiconservativ este transmis la descendeni.
Diviziunea celular, replicaia acizilor nucleici, transcripia i translaia informaiei
genetice asigur constana i continuitatea caracterelor ereditare. Ereditatea este influenat,
ntr-o oarecare msur de factorii de mediu i n urma acestor interaciuni apar deosebiri de
ordin calitativ sau cantitativ ntre indivizii aceleiai uniti sistematice, totalitatea acestora
fiind denumit variabilitate.
Variabilitatea este determinat pe de o parte de factorii genetici (mecanismele de
recombinare intra i intercromozomice, mutaiile), dar i de factorii de mediu (fizici, chimici,
biologici). Dac n primul caz putem afirma c variaiile genetice se transmit cu mare
fidelitate la urmai variaiile determinate de factorii de mediu pot provoca modificri
temporare, care de obicei nu se transmit n descenden.
Amploarea cercetrii de genetic, mai ales de genetic molecular depete orice
imaginaie.
Astfel, genetica a realizat o coeziune a tuturor tiinelor biologice, prin tratarea unitar
a sistemului ereditar.

Metodele de cercetare folosite n genetic

Simplele observaii asupra modului de transmitere a caracterelor i nsuirilor ereditare
au generat o multitudine de ipoteze care ncercau s explice n diferite moduri, ereditatea i
variabilitatea organismelor vii.
Iniierea, perfecionarea metodelor i tehnicilor de cercetare specifice au determinat
apariia i extinderea geneticei ca tiin, n rndul celorlalte tiine biologice.
Principalele metode de cercetare folosite n genetic sunt: metoda hibridologic,
metoda biometric, metoda analizei genealogice, metoda citogenetic, metoda biochimic i
biofizic, metoda ontogenetic, metoda ADN recombinat.
Metoda hibridologic const n ncruciarea dintre indivizi ce posed caractere
ereditare distincte, urmat de analiza modului de manifestare a acestora la indivizii din
diferite generaii. n generaiile segregante se analizeaz statistic modul de manifestare a
caracterelor luate n studiu. Hibridarea s-a utilizat de mult vreme ca metod de obinere a
unor forme noi, dar bazele teoretice ale acesteia au fost stabilite de Johann Gregor Mendel de
aceea metoda se mai numete analiz genetic mendelian.
Indivizii ce urmeaz a se ncrucia sunt studiai n prealabil, cteva generaii pentru a
vedea dac caracterele luate n studiu se transmit constant, cu alte cuvinte, dac organismele
sunt homozigote.
Metoda biometric aceast metod s-a extins n analiza modului de transmitere al
caracterelor cantitative n cadrul unui grup de indivizi.
Pe baza msurtorilor biometrice (mrime, talie, greutate, cantitate de lapte, numr de
ou) se calculeaz o serie de valori biometrice care dau indicaii importante privind:
interaciunea genotip mediu n exprimarea fenotipului, tipurile de interaciuni genice
corelaiile dintre diferite caractere, gradul de repetabilitate a acestora pe parcursul mai multor
generaii.
2
Metoda citogenetic studiaz componenii celulari implicai n ereditate n mod
direct (cromozomii, plastidele, mitocondriile, plasmidele) i efectul unor ageni mutageni
asupra acestor componeni.
Cercetrile de citogenetic coreleaz modificarea materialului genetic la nivel celular,
cu modificrile caracterelor ereditare ale organismelor aducnd numeroase informaii privind
activitatea genelor, grupelor de gene, a cromozomilor sau altor componente celulare.
Metoda biofizic i biochimic. Arhitectura structural deosebit de complex a
moleculelor de ADN i ARN de diferite tipuri a fost descifrat prin metode biofizice i
biochimice.
Perfecionarea microscopului electronic, izolarea componentelor prin ultracentrifugare
analizelor prin autoradiografie, microcinematografie, analiza componenei atomice,
moleculare i spaiale ale acizilor nucleici sunt realizri recente ale biofizicii i biochimiei.
Metoda biofizic i biochimic studiaz i efectul diverilor ageni mutageni asupra
materialului genetic, vorbindu-se frecvent de o genetic a radiaiilor.
Metoda ADN recombinat constituie cea mai modern metod de studiu a geneticii,
care reunete cele mai rafinate tehnici de lucru pentru izolarea moleculelor acizi nucleici, a
unor segmente din acetia i realizarea de molecule hibride. Izolarea genei, sinteza artificial a
genei, inseria genelor ntr-o serie de vectori (virusuri i plasmide), transferul genelor de la o
specie la alta sunt realizri recente ale unui nou domeniu al geneticii, ingineria genetic.
Acestui domeniu aparin i tehnicile de manipulare a celulelor, embrionilor i esuturilor care
pe medii nutritive n condiii aseptice, pot fi nmulite reproducnd fie clone celulare sau
organisme ntregi (la plante).

Materialul de cercetare n genetic

n cercetarea ereditii caracterelor o importan deosebit l are materialul cu care
experimentm. Alegerea lui se face n funcie de scopul cercetrii. Sunt cteva condiii
generale de care trebuie s inem seama n alegerea acestui material:
- s prezinte caractere distincte, uor de precizat i urmrit, la prini i la urmai.
- s aib ciclul de via scurt.
- s produc muli urmai.
- s produc mutaii uor
- s menin n descenden caracterele i nsuirile ce ne intereseaz.
Dintre mamifere, se folosesc mult oarecii, care au ciclul de dezvoltare de numai 2,5
luni i sunt destul de prolifici.
Dintre insecte, a fost folosit foarte mult musculia de oet (Drosophila melanogaster).
Aceasta se nmulete repede, muteaz foarte uor, are puini cromozomi (2n = 8), iar
n glandele salivare conine cromozomi gigantici.
O importan deosebit s-a acordat bacteriilor i virusurilor, care au ciclul de via
foarte scurt n funcii limitate, uneori numai la cea de reproducere i infeciozitate. Genetica
molecular i-a cldit descoperirile cu privire la structura macromolecular a acizilor nucleici,
procesele biochimice ce stau la baza substratului material al ereditii, structura fin a genei
folosind virusurile i bacteriile ca material de studiu.
Pentru genetica animal s-a gsit un model ideal n nematodul Caenorhabdites
elegans. .adulii au aproximativ 1mm, o generaie se realizeaz ntr-un ciclu de 3 zile, necesit
condiii simple de cretere, produce un numr mare de descendeni (200-300), indivizii sunt
alctuii din exact 959 celule, dintre care 300 de neuroni.





3
Bazele mendelismului


n anul 1865, profesorul de tiine naturale Gregor Mendel (1822 1884), cel care va
fi numit mai trziu printele geneticii prezint n cadrul Societii de Istorie Natural din
Brno, rezultatele cercetrilor sale privitoare la hibridarea plantelor. n experienele sale,
efectuate pe diferite soiuri de mazre, el a studiat statistic variabilitatea caracterelor la
descendeni, timp de 5-6 generaii i a interpretat matematic rezultatele obinute.
Gregor Mendel a elaborat teoria factorilor ereditari, sintez a celor 2 legi ale ereditii:
legea segregrii caracterelor (legea puritii gameilor) i legea segregrii independente a
perechilor de caractere (legea liberei combinaii a factorilor ereditari). La nceputul
secolului XX aceste legi au fost redescoperite de ctre Hugo de Vries (Olanda), Carl Correns
(Germania) i Erich Tschermak (Austria).

Terminologia folosit n genetica mendelian

n cercetrile sale Gregor Mendel a luat n studiu urmtoarele caractere la mazre: talia
plantelor (nalt sau pitic), culoarea pstilor (verde sau galben), suprafaa seminelor
(neted sau zbrcit), culoarea tegumentului boabelor (alb sau cenuie), poziia florilor
(axial sau terminal), forma pstilor (dreapt sau gtuit ntre semine).
Aceste perechi de caractere au fost numite mai trziu alelomorfe, din care a rezultat
termenul de alele. Determinanii ereditari au fost numii i factori ereditari (indicaii ulterior
prin noiunea de gen).
Hibridarea este ncruciarea ntre 2 indivizi care se deosebesc prin una sau mai multe
perechi de caractere. Hibridul este rezultatul hibridrii. Prinii (genitorii) se noteaz cu P
(parentes = prini), iar urmaii se noteaz cu F (filii=copii).
n funcie de numrul de perechi de caractere prin care se deosebesc prinii, exist
mai multe tipuri de hibridare: monohibridare (o pereche de caractere), dihibridare (2
perechi de caractere) etc.
n genetica modern factorii ereditari ai lui Mendel au fost nlocuii prin termenul de
gen. Gena este unitatea elementar ce deine informaia genetic a unui caracter ereditar
transmis de la prini la urmai. Gena ocup un loc precis n cromozom numit locus.
n celulele somatice, cromozomii omologi, unul de origine matern, cellalt de origine
patern vor avea i loci omologi, ocupai de gene alele. Dac alelele sunt identice (AA sau aa)
indivizii se numesc homozigoi pentru aceast pereche de caractere, iar cnd alelele sunt
diferite (Aa), indivizii sunt considerai heterozigoi.
Ereditatea mendelian presupune, n principal interaciunea dominan recesivitate
ntre genele alele; alela care se manifest fenotipic la hibrizi F
1
este dominant, iar perechea
sa, care nu se exteriorizeaz este recesiv. Hibridrile, de orice nivel, ofer posibilitatea unei
duble analize: sub aspect genotipic i sub aspect fenotipic.
Genotipul = totalitatea genelor unui individ (constituia genetic a acestuia). Noiunea
de genotip se utilizeaz i n sens restrns, numai pentru una sau cteva perechi de gene alele
(AA, Aa, aa, AaBb)
Fenotipul = totalitatea caracterelor morfologice, fiziologice, biochimice i
comportamentale ale individului, care rezult din interaciunea genotipului cu mediul.

Legile mendeliene ale ereditii

Legea segregrii caracterelor (legea puritii gameilor)
Gregor Mendel a efectuat un numr impresionant de hibridri (monohibridri,
dihibridri i trihibridri) la mazre (Pisum sativum). Segregarea caracterelor ereditare a fost
4
formulat, n urma analizei fenotipice i genotipice a unor monohibridri, dar poate fi
demonstrat i-n cazul celorlalte tipuri de hibridare.
Gregor Mendel a ncruciat o varietate de mazre cu semine galbene cu o
varietate cu semine verzi, ambele homozigote (pure din punct de vedere genetic). n generaia
F
1
au rezultat numai plante cu semine galbene. Caracterul culoare galben a fost numit
dominant, iar perechea sa culoare verde, recesiv (recessere = ascuns).
n urma autofecundrii plantelor din F
1
a rezultat generaia F
2
n care s-au obinut
2 grupe fenotipice: 75% semine galbene i 25% semine verzi, prin urmare un raport de
segregare fenotipic de 3:1.
Mendel a explicat segregarea caracterelor factorilor ereditari astfel: n celulele
somatice factorii ereditari se gsesc sub form de pereche (AA, Aa ,aa). n urma meiozei,
factorii ereditari segreg, astfel c gameii vor avea numai cte un singur reprezentant din
fiecare pereche (A sau a), deci sunt puri din punct de vedere genetic.
Prinii homozigoi (AA i AA) vor produce cte un singur tip de gamei (A sau
a). n generaia F
1
toi indivizii sunt identici fenotipic i genotipic (Aa).
Indivizii generaiei F
1,
heterozigoi, vor forma 2 tipuri de gamei pentru fiecare
sex: 50% A i 50% a. Combinarea probabilistic a gameilor de sex diferit face ca n F
2
s
rezulte 3 combinaii genotipice, 25% AA, 50% Aa i 25% aa (raport de segregare genotipic
(1:2:1) i 2 grupe fenotipice 75% semine galbene i25% semine verzi (raport de segregare
fenotipic 3:1).
Mendel a efectuat monohibridri i cu alte perechi de caractere constnd acelai
lucru: n generaia F
1
au rezultat indivizi asemntori unui printe, iar n generaia F
2
,
segregarea s-a realizat ntr-un raport de 3 dominant : 1 recesiv.
Dup redescoperirea legilor mendeliene, imediat dup anul 1900, s-au realizat
monohibridri i la diferite specii de animale. Obinndu-se rezultate asemntoare celor de la
plante, s-a demonstrat universalitatea legilor mendeliene.
n 1901, Bateson a ncruciat diferite rase de gini, care se deosebeau prin forma
crestei. Formele tip mazre i trandafir sunt dominante fa de forma simpl, iar n
generaia F
2
segregarea s-a produs n raport de 3:1. La fel, zoologul francez L. Cunot (1902)
a ncruciat oareci de culoare gri (caracter dominant) cu oareci de culoare alb (caracter
recesiv) i a obinut n F
1
numai indivizi de culoare gri. Prin mperecherea indivizilor din F
1

ntre ei, n F
2
raportul de segregare fenotipic a fost de 75% oareci de culoare gri i 25%
oareci de culoare alb, adic 3:1.

Legea segregrii independente a perechilor de caractere

Aceast lege a rezultat din observaiile efectuate de Mendel asupra modului de
transmitere a caracterelor n cursul dihibridrilor i polihibridrilor.
Experiena de dihibridare efectuat de Mendel la mazre, devenit clasic, a fost
cea n care s-a ncruciat mazrea cu bobul de culoare galben i form neted (caractere
dominante G i N) i mazrea cu bobul verde i form zbrcit (caractere recesive
determinate de alelele n doz dubl gg i nn). n F
1
toate plantele au avut boabe galbene i
form neted. n acelai timp, hibrizii din F
1
poart n genotipul lor i alelele corespunztoare
recesive, fiind GgNn.
Prin autofecundarea dihibrizilor F
1
s-a obinut generaia F
2
, cu un total de 556
boabe de urmtoarele 4 categorii fenotipice: 315 galbene i netede, 101 galbene i zbrcite,
108 verzi i netede i 32 verzi zbrcite, adic raportul de 9:3:3:1.
Rezultatele aprute n F
1
i F
2
se explic astfel: dihibrizii din F
1
, GgNn au produs
nu numai gamei GN i gn (adic caracterele parentale), ci i gamei cu o alt asociere a celor
2 gene, respectiv Gn i gN (galben - zbrcit i verde - neted). Acest lucru se ntmpl pentru
c aceste perechi de caractere ale prinilor, determinate de perechi de gene aflate pe
cromozomi diferii, se motenesc nu numai mpreun, dar i desprite, segregate. Mai mult,
5
genele respective (G i N) precum i alelele lor (g i n) se transmit nu numai independent la
descendeni, dar se produce i o asociere liber ntre ele.
Prin urmare, orice dihibrid din F
1
formeaz 4 tipuri de gamei att la sexul ct i
la sexul i anume: GN, Gn, gN i gn.
Deoarece ntlnirea fiecrui tip de gamet femel cu fiecare tip de gamet are loc
la ntmplare se obin 16 tipuri de zigoi, care grupai dup fenotip, dau 4 categorii n raport
de segregare de 9:3:3:1. Dup genotip, se grupeaz n 9 categorii n raport de segregare de
1:2:2:4:1:2:1:2:1.
Cercetrile de dihibridare la animale au dus la obinerea unor rezultate identice cu
cele obinute la plante.
Astfel, dac la bovine (Bos taurus) se urmresc 2 perechi de caractere caracterul
de culoare al prului i modul de distribuire al culorii pe corp se observ c din
mperecherea exemplarelor de culoare neagr uniform (caractere dominante) cu exemplarele
roii blate (caractere recesive) se obin n F
1
numai produi de culoare neagr uniform. Prin
mperecherea indivizilor din F
1
ntre ei, produii din F
2
prezint 4 categorii fenotipice i
anume: negru uniform, rou uniform, negru blat i rou-blat, n raport de 9:3:3:1.
Fa de fenotipurile prinilor, 2 fenotipuri sunt noi: negru blat i rou
uniform ceea ce demonstreaz asocierea independent a caracterelor.
La aceeai specie, din mperecherea indivizilor de culoare neagr fr coarne
(caractere dominante) cu indivizi de culoare roie cu coarne (caractere recesive), sunt cele
caracteristice unei dihibridri pentru F
1
i F
2
.
- n F
1
100% indivizi culoare neagr fr coarne
- n F
2
9/16 negru fr coarne (ambele caractere dominante)
3/16 negru cu coarne (1 caracter dominant, al 2-lea recesiv)
3/16 roii fr coarne (1 caracter recesiv, al 2-lea dominant)
1/16 roii cu coarne (ambele caractere recesive).
Aceleai fenomene de segregare i transmitere independent a caracterelor s-au
remarcat i n experienele de polihibridare. n acest caz de experien pentru o trihibridare,
dac prinii au genotipurile AABBCC i aabbcc, hibridul din F
1
cu genotipul AaBbCc va
forma 8 tipuri de gamei: ABC, Abc, AbC, Abc, aBc, abC, aBC, abc.
n F
2
rezult 8 fenotipuri n raport de 27:9:9:9:3:3:3:1, respectiv 64 combinaii
genotipice.

Probabilitatea i raporturile mendeliene de segregare

Pe baza legilor ereditii elaborate de Mendel se pot indica rezultatele care se
obin ntr-o hibridare. Raporturile mendeliene de segregare depind de numrul perechilor de
caractere.
Astfel, la monohibridare, raportul fenotipic n F
2
este de 3:1, la dihibridare de
9:3:3:1, la trihibridare de 27:9:9:9:3:3:3:1 i aa mai departe. ncepnd cu generaia F
3
aceste
raporturi se calculeaz inndu-se seama de homozigoia i heterozigoia indivizilor,
heterozigoii fiind singurii care segreg n descenden.
Dac se analizeaz termenii care alctuiesc raporturile de segregare se observ c
ei se obin prin ridicarea binomului (3+1) la puterea numrului perechilor de caractere (3+1)
1
,
(3+1)
2
, (3+1)
3
. Pentru n perechi de caractere, binomul se ridic la puterea n (3+1)
n
.
Odat cu creterea numrului de perechi de gene alele implicate ntr-o hibridare,
crete i numrul de clase fenotipice, genotipice i numrul combinaiilor posibile ntre
Fiecare pereche de alele, adugat la o ncruciare, mrete de 2 ori numrul claselor
fenotipice, de 3 ori numrul de clase genotipice i de 4 ori numrul combinaiilor posibile ale
gameilor produi de hibrizii din F
1
.
Numrul tipurilor de gamei, fiecare cu alt coninut genetic se calculeaz cu
formula 2
n
(n = numrul perechilor de caractere): monohibridare 2
1
2 tipuri
6
dihibridare - 2
2
4 tipuri
trihibridare - 2
3
8 tipuri
Rezultatele obinute n diferite tipuri de hibridri pot fi anticipate, dac se aplic o
regul simpl de calcul a probabilitilor: ansa apariiei concomitente a 2 fenomene
independente este egal cu produsul probabilitilor lor separate:
- la monohibridare -3/4 netede -3/4 galbene
-1/4 zbrcite -1/4 verzi


=>3/4 x 3/4 = 9/16 boabe netede i galbene
3/4 x 1/4 = 3/16 boabe netede i verzi
1/4 x 3/4 = 3/16 boabe zbrcite i galbene
1/4 x 1/4 = 1/16 zbrcite i verzi

ncruciarea analizatoare (retroncruciarea)

n ncrucirile mendeliene, fenotipul descendenelor poate fi prevzut din
genotipul prinilor, tiind care sunt genele care determin caractere dominante i care sunt
genele care determin caractere recesive.
Astfel, la oaie (Ovis aries), n cadrul rasei Merinos, prinii care posed n
genotipul lor gena pentru culoare alb dominant a lnii (A) va da numai descendeni cu ln
alb. De asemenea, prinii care posed gena pentru culoare neagr recesiv a lnii n doz
dubl (aa) vor da numai descendeni cu ln neagr.
Se pune ns ntrebarea dac este posibil s se determine genotipul unui individ
pornind de la fenotipul su.
Aceast posibilitate este deosebit de important pentru practic (n lucrrile de
ameliorare) cnd este necesar s cunoatem dac lucrm cu indivizi heterozigoi sau
homozigoi pentru un anumit caracter urmrit.
Datorit fenomenului de dominan nu se poate spune dac un individ este
homozigot sau heterozigot pentru o anumit gen dominant, deoarece sub acelai fenotip se
poate ascunde fie un genotip AA, fie Aa.
De aceea, n scopul cunoaterii exacte a genotipului unui hibrid se recurge la
retroncruciare (backcross), cnd se ncrucieaz hibridul F
1
cu un membru al generaiei
parentale (individ de tip parental).
Pentru forme parentale AA i aa, indivizii din F
1
sunt toi Aa. retroncruciarea
unui individ Aa se face cu o form parental aa (homozigot recesiv), caz n care
descendena va segrega fenotipic n 2 categorii n proporie de 1:1.
n cazul unei dihibridri, segregarea va fi n raport de 1:1:1:1.
Deci, de regul, ncruciarea analizatoare este o retroncruciare ntre un individ
cu genotip necunoscut i un individ cunoscut ca homozigot recesiv pentru gena urmrit, cu
scopul de a determina dac individul n discuie este heterozigot sau homozigot pentru o
anumit gen (testcross).
n concluzie, ori de cte ori ntr-un testcross rezult o uniformitate fenotipic,
individul de analizat este homozigot dominant i ori de cte ori rezult o segregare fenotipic
de 1:1, individul monohibrid de analizat este heterozigot.
Revenind la exemplul cu oile Merinos cu ln alb, pentru a depista berbecii cu
ln alb, dar genotip heterozigot, rspndind alela a pentru ln neagr i impurificnd
turma, este necesar s se mperecheze masculul suspect cu ln alb cu o femel homozigot
recesiv aa, deci cu ln neagr.
n cazul n care se produc n urma ncrucirii numai miei cu ln alb, se poate
afirma cu cea mai mare posibilitate c berbecul analizat este homozigot i va fi pstrat n
turm pentru reproducie.
7
Dac n urma retroncrucirii se obin miei cu ln alb, dar i mici cu ln
neagr n raport de 1:1, se poate afirma cu siguran c berbecul testat este heterozigot i el
trebuie eliminat din turm.
ncruciarea analizatoare dezvluie starea genotipic nu numai pentru
monohibrizi, ci i pentru dihibrizi sau polihibrizi.
n afar de aflarea genotipului unui individ cu fenotip dominant, testcross-ul este
extrem de util pentru a stabili dac 2 gene se plaseaz pe acelai cromozom sau pe cromozomi
diferii (fenomen de linkage).


Abateri de la raporturile mendeliene de segregare fenotipic

De regul, raporturile mendeliene de segregare din F
2
(3:1, 9:3:3:1, etc.) s-au gsit
i se gsesc n continuare potrivit previziunilor.
Totui, n plus fa de aceste raporturi, experienele efectuate dup Mendel au
relevat apariia unor categorii de fenotipuri deosebite i n alte proporii dect cele artate de
Mendel.
Aceste abateri de la raporturile mendeliene de segregare, aparente sau reale, nu
numai c nu s-au opus principiilor lui Mendel, dar s-au extins i au contribuit la dezvoltarea
geneticii mendeliene.
Principala cauz a nerespectrii a cestor raporturi mendeliene de segregare const
n interaciunea genelor.
Interaciunea genic, reprezint fenomenul prin care o gen, prin efectul su,
influeneaz n diferite grade, chiar pn la anulare, efectul unei alte gene. Unele din aceste
interaciuni se manifest numai ntre genele alele, iar altele au loc i ntre gene nealele (situate
n loci diferii).

Interaciuni alelice

Interaciunile alelice se manifest sub forma dominanei incomplete
(semidominana), codominanei, supradominanei, genelor letale i fenomenului de polialelie.

1. Dominana incomplet (ereditate de tip Zea)
Efectund experiene de monohibridare la speciile de plante Mirabilis jalapa
(barba mpratului.) botanistul german Carl Correns a obinut rezultate diferite de cele ale lui
Mendel, att n F
1
ct i n F
2
. Astfel, ncrucind un soi de Mirabilis jalapa cu flori roii (AA)
cu un soi cu flori albe (aa) el a obinut n F
1
doar plante cu flori roz, culoare intermediar
prinilor (Aa).
Prin autofecundarea hibrizilor din F
1
, Correns a realizat n F
2
trei categorii
fenotipice: 25% indivizi cu flori roii, 50% indivizi cu flori roz i 25% indivizi cu flori albe.
Deci, raportul de segregare fenotipic n F
2
este de 1:2:1 i nu 3:1. n acest caz raportul de
segregare genotipic este identic cu raportul de segregare fenotipic. Prin urmare, gena A nu
se manifest ca total dominant asupra alelei a, cele 2 gene manifestndu-se cu intensitate
egal (semidominan). Rezultate identice au fost obinute i la animale. Astfel, la ginile de
Andaluzia, unii indivizi sunt de culoare neagr, alii de culoare alb, iar alii de culoare gri
albstruie. Cei de culoare gri albstruie se obin din ncruciarea unui printe de culoare
neagr cu un printe de culoare alb. Aadar hibrizii din F
1
prezint un penaj de culoare
diferit de cea a ambilor prini. n generaia F
2
se obin 25% indivizi de culoare neagr, 50%
indivizi de culoare gri albstruie i 25% indivizi de culoare alb, n raport de 1:2:1.

2. Supradominana
8
Uneori, efectul unei gene este mai mare atunci cnd acioneaz n stare
heterozigot dect n stare homozigot dominant. Deci i la plantele i la animale exist gene
dominante care atunci cnd sunt cuplate ntr-un genotip heterozigot (Aa) au o activitate mult
superioar fa de cazul cnd acestea se gsesc n stare homozigot AA. n aceast situaie,
fenotipul heterozigotului nu va mai fi acelai cu a homozigotului dominant.
Pentru majoritatea speciilor de animale, supradominana este evident n cazul
unor caracteristici fiziologice: robustee, vigoare, viabilitate, dar i morfologice: talia.
mperecherea ntre indivizi homozigoi cu manifestri relativ slabe ale unor astfel
de caracteristici au produs hibrizi heterozigoi care au prezentat o variabilitate, o vigoare i o
productivitate superioar formelor parentale fenomenul fiind denumit heterozis.

3. Codominana
Este interaciunea dintre 2 gene alele, care n stare heterozigot, ambele sunt
funcionale, rezultnd un fenotip nou.
Aceast interaciune poate fi considerat un tip particular de dominan n care
genele A i a sintetizeaz proteine diferite ca structur i funcie, ns la indivizii heterozigoi
vor fi prezente ambele proteine, determinnd un nou fenotip.
Un exemplu clasic de dominan l ntlnim n cazul determinismului genetic al
grupelor sanguine la om i mamifere n sistemul ABO.
Cele 4 tipuri de grupe sanguine la om (O, A, B, AB) sunt determinate de 3 gene
alele notate L
A
, L
B
i l. Genele L
A
i L
B
sunt dominante asupra genei l, ns cnd se gsesc n
acelai genotip, ambele sunt funcionale, rezultnd un nou fenotip, respectiv grupa de snge
AB.
Genele letale

Alelele letale sunt mutante dominante sau recesive care n stare homozigot
provoac moartea indivizilor. Fenomenul de letalitate schimb proporia n care are loc
segregarea caracterelor n urma hibridrilor.
La ncruciarea unor oareci de culoare galben, Cuenot a obinut n F
1
, pe
lng indivizii de culoare galben i indivizi de culoare neagr, ntr-un raport de 2:1.
Explicaia dat arat c fa de raportul genotipic 1:2:1, lipsesc din
genotipuri i respectiv fenotipuri, a cror zigoi au murit nainte de natere.
oarecii de culoare galben sunt ntotdeauna heterozigoi.
Notnd: A
y
gena letal
a gena normal
O problem de letalitate ce preocup pe zootehnicieni se refer la oile brumrii
din rasele Karacul i urcan. Din mperecherea ntre ei a indivizilor din oile brumrii,
ntotdeauna rezult att miei de culoare brumrie ct i miei de culoare neagr.
Din mieii brumrii, o parte mor dup natere la diferite vrste pn la 1 an.
Deci din indivizi (homozigoi dominani) mor.
Alturi de gene letale dominante pot exista i gene letale recesive, care de
asemenea provoac moartea descendenilor. La plante, se cunosc asemenea gene recesive,
care n stare homozigot mpiedic formarea clorofilei, fr de care o plant nu poate
supravieui.
5. Polialelia (alelismul multiplu)
Acest fenomen apare n cazul cnd n exprimarea unui anumit caracter exist
mai multe gene alele dect 2, care pot fi plasate n acelai locus pe cromozom dar la indivizi
diferii.
Polialelia determin variaii ale aceluiai caracter pentru o anumit populaie
din codul aceleiai specii.
Genele alele apar prin mutaie de gene originar sau tipul slbatic, cu care
ocup acelai locus. Alela de tip slbatic se consider dominant i se noteaz cu A sau cu
9
a
*
. Seria de alele care apare prin mutaie se noteaz cu aceleai litere la care se adaug un
indice (fie cifre, fie litere) a
1
,a
2
,a
3
S-a constatat c ntr-o serie de alele raportul de dominan
(recesivitate) este determinat de ordinea apariiei lor.
Seria de alele pentru culoarea ochilor la Drosophila melanogaster a fost pus
n eviden de T. Morgan i colaboratorii si. Tipul slbatic are ochi de culoare roie
determinat de alela normal w
+
. S-a constatat c descendenii homozigoi au ochi de culoare
foarte diferit, cu o intensitate care variaz ntre rou i alb. Diferitele nuane se manifest
recesiv: w
w
rou intens; w
bl
rou sngeriu; w
ch
rou viiniu; w
h
culoarea mierii; w
p

culoarea perlei; w
i
alb filde; w alb.


Interaciuni nealelice

1. Epistazia
S-a artat c dominana poate s se manifeste ntre alelele perechi: A domin a,
B domin bb etc. Un tip aparte de relaii de dominan recesivitate poate exista i ntre
genele nealele: AA domin Bb, bb domin pe A etc.
Acest fenomen a fost numit epistazie.
Genele care inhib aciunea unor gene nealele = gene epistatice, iar genele
inhibate se numesc gene hipostatice. Pot fi epistatice i hipostatice att alelele dominante, ct
i alelele recesive. n funcie de alela epistatic, epistazia poate fi: de dominan, de
dominan recesivitate, de recesivitate.
Prin epistazia de dominan att gena epistatic ct i gena hipostatic sunt
reprezentate de gene dominante nealele. Raportul de segregare n cazul epistaziei de
dominan este de 12:3:1.
Un exemplu l ofer ncruciarea ntre oile negre Karakul i oile albe Karakal.
n F
1
se obin miei de culoare neagr heterozigoi, iar n F
2
are loc segregarea astfel: 12/16
miei negri, 3/16 miei bruni, 1/16 miei albi.
Notnd cu N gene pentru culoare neagr, cu B gene pentru culoarea brun
(comor), cu n i b alelele lor productoare a culorii albe, se pot scrie:

P NNBB X nnbb
oi negre oi albe
(N inhib B)
F
1
Nn Bb
oi negre
F
2
- 12 miei negri (ambele gene dominante: N i B sau N i b)
- 3 miei bruni B scap de sub influena N
- 1 miel alb nnbb.

Prin epistazia genei recesive se nelege aciunea unei gene recesive n stare
homozigot ce inhib aciunea genelor dominante sau recesive din alte perechi de alele; de
exemplu aa inhib pe B sau aa inhib pe bb.
Fenomenul se poate evidenia la ncruciarea unor oareci negri. Tipul albinotic este
genetic de tip slbatic, deoarece posed gena A, care ns nu se manifest din cauza prezenei
genei epistatice recesive cc care inhib formarea culorii.

P(m) AA cc X aaCC
oareci albi oareci negri
(cc inhib A)
F
1
AaCc
oareci agaati(tip slbatic)
10
F
2
: 9/16 oareci agonti (AC)
3/16 oareci negri (Caa)
4/16 oareci albi (Acc i aacc)

Deci, n acest caz epistozia s-a manifestat din partea genei cc asupra genei A.
oarecii cu genotipul Acc erau albi, deoarece gena C n stare homozigot mpiedic
producerea pigmentului.

2. Interaciunea complementar a genelor
Const n aciunea unor gene nealele, care n stare homozigot dominant
conlucreaz pentru apariia unui caracter nou. Dac una din aceste gene dominante lipsete
din genotip, caracterul nu se exteriorizeaz fenotipic.
La gini, creasta de tip mazre, ca i creasta de tip trandafir manifest
dominan fa de creasta simpl. La ncruciarea rasei Wyandotte cu creasta tip trandafir
(RRpp) cu rasa Brahma cu creasta tip mazre (rrPP), n F
1
indivizii aveau un nou tip de
creast, nuciform, rezultat din interaciunea complementar ntre cele 2 gene dominante (Rr
Pp).
Psrile hibride, ncruciate ntre ele, dau generaia F
2
n care 9/16 indivizi
aveau creast uniform (RP), 3/16 indivizi cu creast trandafir (Rpp), 3/16 indivizi cu creast
mazre (rrP) i 1/16 creast simpl (rr pp).
Deci, caracterul nou este produs numai prin aciunea comun a tuturor genelor
dominante din genotip. Aceste gene nealele, n mod separat, nu pot provoca apariia
caracterului respectiv.

3. Poligenia (interaciunea aditiv)
Const n conlucrarea mai multor gene nealele, dar echivalente dominante sau
recesive pentru exteriorizarea fenotipic a unui caracter. Asemenea caractere sunt caracterele
cantitative (producia de ou, de lapte, greutatea corporal).
Se consider c n cazul fenomenului de poligenie, genele individuale au un
efect redus asupra unui caracter i ca atare ele pot fi greu evideniate. Numai efectul
cumulativ al acestor gene produce modificri calitative evidente.
Fenotipul caracterului cantitativ, determinat de gene aditive, se manifest cu
att mai puternic cu ct este determinat de mai multe gene nealele dominante i invers.
Tot la gin ,caracterele nclat i nenclat sunt rezultate ale poligeniei.
Prin mperecherea cocoilor nclai cu gini nenclate rezult n F
1

numai indivizi nclai. Aceti hibrizi din F
1
, mperecheai ntre ei, dau n F
2
15 indivizi
nclai la 1 individ nenclat, deci un raport de 15:1, ceea ce arat c la realizarea
acestui caracter interacioneaz activ 2 gene nealele.
Un alt exemplu l constituie ereditatea culorii pielii la om, determinat de
pigmentul melanin, care variaz cantitativ la diferite rase. Caracterul de pigment din piele
este determinat de efectul aditiv al genelor P
1
i P
2
, care la negri se afl n stare homozigot
(P
1
P
1
P
2
P
2
)
- mulatri nchii 3 gene pentru pigmentare (P
1
p
1
P
2
P
2
sau
- mulatri p zii 2 gene (P
1
p
1
p
2
; P
1
P
1
p
2
p
2
; p
1
p
1
P
2
P
2
)
- mulatri deschii 1 gen (P
1
p
1
p
2
p
2
sau p
1
p
1
P
2
p
2
)
- la rasa alb genotip homozigot recesiv (p
1
p
1
p
2
p
2
)

4 Pleiotropias
Analiza modalitilor de aciune a genelor a scos n eviden i fenomenul prin
care una i aceiai gen poate s contribuie la formarea mai multor caractere. Aceste gene au
fost denumite pleiotrope.
11
La Drosophila, gena mutant vestigial- vg. care reduce mrimea aripilor,
micoreaz n acelai timp fecunditatea, reduce numrul de ou, modific poziia periorilor
de pe corp.
Gena mutant ivorg, care rspunde de culoarea deschis a ochilor, are
aciune negativ asupra tuburilor lui Malpighi i modific forma spermoteciilor.
Genele pleiotrope determin corelaiile genetice dintre diferite caractere i
menin aceste corelaii de-a lungul generaiilor.

5. Aciunea modificatoare a genelor
Exist gene cu aciune de baz n determinarea unui anumit caracter, altele
interacioneaz cu alte gene, influennd aciunea acestora.
Asemenea gene au primit numele gene modificatoare. Atunci cnd o gen
slbete expresia fenotipic a altei gene nealele se numete reductoare, iar cnd ntrete
expresia fenotipic a altei gene nealele se numete amplificatoare. Ori de cte ori acioneaz
aceste gene, ele modific proporiile mendeliene de segregare.
Astfel, exist o gen la Drosophila (tetraptera) care poate s transfere
balansierele n aripi de dimensiuni mari. O alt gen, tot la Drosophila, numit erupt
determin dezvoltarea unui tars n ochi.
La porumbel (Columba livia), tipul slbatic prezint capul lipsit de mo. Cnd
gena este prezent n stare homozigot apare i moul. Dar forma i dimensiunile moului
sunt controlate de gene modificatoare, astfel c se observ o gam variat de mouri de la un
simplu smoc de pene, pn la o glug care acoper parial sau total capul.

6. Influena factorilor externi asupra aciunii genelor
Manifestarea aciunilor genelor poate fi influenat i de condiiile de mediu,
care modific proporiile fenotipice fa de cele teoretice.
Astfel, larvele de Drosophila cu aripi vestigiale, crescute la temperaturi
ridicate, produc aripi aproape normale. Temperatura ridicat nu influeneaz genele respective
dect la o anumit vrst a larvelor, care coincide cu perioada sensibil pentru dezvoltarea
aripilor.
La iepurele de Himalaya, culoarea neagr a extremitilor este realizat de alela
c
h
.
Acest tip de iepure, crescut la temperaturi de peste 35

C este complet alb.

Crescut la temperatur n jurul a 25

C capt culoarea neagr la extremiti: bot, picioare,

urechi. Dac se smulge o poriune din prul alb i iepurele este crescut la temperaturi sub
25

C, pe acel loc va aprea pr negru.

Exist gene cu manifestare foarte variabil la influena condiiilor de mediu,
dar care afecteaz numai o parte din indivizi, aparent cu acelai genotip. Fenomenul se
numete penetran. De exemplu la cobai, o gen recesiv pn la 27,7 montri cu cap mic,
neviabili.
Uneori gene afecteaz numai o parte din organism. Gena eyeless care reduce suprafaa
ochiului la Drosophila, poate afecta numai un ochi la aceiai musculi. Alteori, influena
mediului se poate resimi n mod diferit n ceea ce privete intensitatea de manifestare a
caracterului. n acest caz, fenomenul poart numele de expresivita
\






12
Teoria cromozomic a ereditii

A fost elaborat de T.H. Morgan i colaboratorii si pentru care n anul 1933 a
fost distins cu premiul Nobel. Morgan i colaboratorii si au folosit ca material biologic,
musculia de oet (Drosophila melanogaster) insect la care s-au descris peste 500 forme
mutante.
Prin numeroase ncruciri ntre diferite mutante cu tipul slbatic sau a
mutantelor ntre ele s-a stabilit modul de transmitere a genelor pe parcursul mai multor
generaii.
n concepia lui Morgan, genele sunt plasate n cromozomi n anumite poziii
denumite loci sub form de pereche, determinnd nsuiri contrastante ale aceluiai caracter.
Prin mutaia unei gene normale (de tip slbatic) apare o gen nou, dar care
ocup acelai locus n cromozomi omologi. Acest cuplu de gene, ce determin nsuirea
normal i cea mutant a unui caracter a primit denumirea de gene alele. Gena este
considerat unitate ereditar funcional, mutaional i de recombinare genetic. Teoria
cromozomic a ereditii cuprinde 3 teze:
1 plasarea liniar a genelor pe cromozom
2 transmiterea nlnuit a genelor (linkage)
3 schimbul reciproc de gene ntre cromozomi omologi (crossing-over).

1. Plasarea liniar a genelor pe cromozomi
n experienele lui Morgan s-a artat c la Drosophila melanogaster femelele au
o pereche de cromozomi identici (XX) iar masculii, un singur cromozom X sub form de
bastona i unul neomolog, numit cromozom Y, sub forma unui bastona frnt. Descoperirea
cromozomului sexului constituie o dovad c genele sunt plasate n cromozomi. Tot la
Drosophila melanogaster s-a constatat c la unii indivizi poate lipsi un cromozom sau poate
exista un cromozom n plus. Aceasta fiind corelat cu substana unui caracter sau prezena
unui caracter constituie nc un argument c genele sunt plasate n cromozomi.
Mendel a analizat, n mod ntmpltor caractere ce sunt localizate n perechi
diferite de cromozomi, fapt ce permite segregarea i combinarea independent a caracterelor.
Morgan a urmrit ntr-un numr foarte mare de ncruciri transmiterea genelor
localizate n acelai cromozom.
S-a constatat c exist un numr mult mai mare de gene dect cromozomi, chiar
dac n unele cazuri o gen poate determina mai multe caractere. Rezultatele analizelor
genetice nu se pot explica dect dac se admite c genele sunt plasate liniar n cromozomi,
ocupnd un loc precis denumit locus.
2. Transmiterea nlnuit a genelor (linkage)
Morgan a efectuat o experien la Drosophila melanogaster s-a ncruciat o
femel cu corp gri i aripi normale(b
+
vg+/b
+
vg
+
) cu un mascul ce prezenta caracterele
mutante, corp negru i aripi vestigiale (bvg/bvg). n prima generaie au rezultat indivizi cu
corp gri i aripi normale (b
+
vg
+
/bvg). Dac un mascul din F
1
este retroncruciat cu o femel
dublu mutant homozigot, n generaia F
2
au rezultat numai 2 grupe fenotipice de indivizi (ca
n cazul unei monohibridri) n raport de 1:1 i nu 4 grupe ct ar fi trebuit s apar, n raport
de 1:1:1:1 (cazul unei dihibridri la testeross)
Rezultatele obinute au artat c genele ce determin culoarea corpului i forma
aripilor sunt plasate pe acelai cromozom i se transmit nlnuit (mpreun) la descendeni,
fenomen numit linkage.
Linkage-ul este opus, aparent, fenomenului segregrii independente a factorilor
ereditari, postulat de Mendel. Opoziia este ntr-adevr numai aparent, deoarece segregarea
independent a genelor n timpul meiozei se refer la gene aflate pe cromozomi diferii, pe
cnd linkage-ul se refer la gene plasate pe acelai cromozom.
13
Studiul linkage la cele 5000 de mutante de Drosophila studiate de Morgan
manifest tendina de a se grupa n 4 grupe: Grupa I - 141 mutante; grupa II 228 mutante;
grupa III 156 mutante i grupa IV 12 mutante.
Existena a 4 grupe de nlnuire este nc dovad c genele sunt plasate n
cromozomi i n plus exist o corelaie evident ntre lungimea cromozomilor i numrul de
gene pe care le conin.
Deci, genele localizate pe acelai cromozom se transmit la descendeni n bloc,
formnd o singur grup de linkage.
3. Schimbul reciproc de gene ntre cromozomi omologi (crossing-over)
Fenomenul prin care se realizeaz schimbul de gene alele sau segmente cromatidice resurari
ntre cromozomi omologi n timpul meiozei se numete crossing-over . Existena acestui
fenomen dovedete c likage-ul nu este ntotdeauna complet, ca atare crossing-over-ul este un
linkage incomplet.
Atunci cnd dintr-un testaross rezult 4 clase fenotipice ale cror proporii nu
sunt egale de 1:1:1:1, ci 2 clase care posed fenotipul parental mai mult de 50 din
descendeni i 2 clase fenotipice noi ,recombinate n proporie de sub 50 din totalul
descendenilor, vom avea dovada sigur c cele 2 caractere analizate sunt determinate de gene
situate pe acelai cromozom, dar nlnuire incomplet, favoriznd realizarea crossing-over-
ului.
Pentru a demonstra schimbul de gene ntre cromozomi omologi, Morgan a
folosit urmtoarea experien: a ncruciat un mascul de culoare neagr i cu aripi vestigiale
(bvg/bvg) cu o femel cu corpul gri (b
+
vg
+
b
+
vg
+
). n generaia F
1
a obinut o descenden
uniform fenotipic, cu corpul gri i aripi normale (b
+
vg
+
/bvg). Dac se retroncrucieaz o
femel din F
1
cu un mascul cu ambele caractere mutante, rezult n F
2
4 grupe fenotipice: 2
grupe fenotipice parentale i 2 grupe fenotipice noi, neateptate, n urmtoarele proporii: corp
gri-aripi normale 41,5 corp negru 41,5, corp gri-aripi vestigiale 8,5, corp negru-aripi
normale 8,5.
Se observ c raportul de segregare nu este cel ateptat de 1:1:1:1. Formele noi
rezultate, n proporie mult mai mic dect de ct cele parentale sunt determinate de schimbul
de gene ntre cromatidele vesurari ale cromozomilor omologi, fiind denumite forme
recombinate.
Raportul de segregare, deosebit de cel median se datoreaz faptului c femela
heterozigot din F
1
formeaz 4 tipuri de gamei, dou de tip parental (b
+
vg
+
i bvg) i dou de
tip recombinat (b
+
vg i bvg
+
), care se fecundeaz cu unicul tip de gamei ai masculului (bvg).
Valoarea crossing-over-ului se exprim n i se arat cu ct fora de nlnuire
a genelor este mai mic, frecvena crossing-over-ului este mai mare.
Crossing-over-ul poate fi pus n eviden numai n cazul cnd diferite perechi de
gene alele se gsesc n stare heterozigot, adic sub forma AB/ab. Atunci cnd genele sunt n
stare homozigot (AB/AB sau ab/ab) crossing-over-ul, dei poate s aib loc, nu poate fi
evideniat deoarece schimbul de segmente cromozomice identice nu d combinaii noi de
gene.

4. Tipuri de crossing-over
Crossing-over-ul este un fenomen ntmpltor ce se produce cu o anumit
posibilitate n unul sau mai multe puncte de pe cromozomi omologi.
n funcie de numrul segmentelor cromatidice ce se pot schimba ntre
cromozomi pereche, crossing-over-ul poate fi simplu, cnd se realizeaz schimbul unui singur
segment, dublu, cnd se produc 2 schimburi de segmente, caz n care trebuie s existe cel
puin 2 chiasme ntre cromozomi omologi i multiplu, cnd ntre cromozomi omologi se
realizeaz mai multe schimburi de gene.
Aa cum a fost prezentat fenomenul de crossing-over, se nelege c segmentele
ce fac schimb ntre cromozomi omologi sunt egale. Nu ntotdeauna procesul decurge astfel.
14
Se poate ntmpla ca cromatidele s se rup n puncte diferite i atunci segmentul ce se
schimb s nu mai fie egale ca lungime.
Acest tip se numete crossing-over inegal i are drept consecin dublarea sau
triplarea unei gene pe un cromozom, iar pe cellalt cromozom lipsa locilor respectivi.
Crossing-over-ul este un fenomen specific diviziunii meiotice. Destul de rar,
acest fenomen poate avea loc i n celulele somatice, n profaza mitozei, numindu-se n acest
caz crossing-over mitotic (somatic). Fenomenul apare foarte rar la plantele i animalele
superioare, ns destul de frecvent la microorganisme, la care hrile cromozomice s-au
ntocmit pe baza crossing-over-ului mitotic. Ex: s-au observat apariia unor caractere
mozaicate la femelele de Drosophila att pe corp ct i pe ochi i s-a demonstrat c fenomenul
se datoreaz unui crossing-over ntre cromatidele cromozomilor omologi n timpul diviziunii
mitotice. Acest tip de crossing-over poate avea loc att ntre cromozomii sexului ct i ntre
autozomi.

5. Factorii care influeneaz crossing-over-ul
Ca orice proces genetic i crossing-over-ul este opus influenei a 2 categorii de
factori: interni i externi. Dintre factorii interni studiai pn acum sunt: sexul, structura
cromozomilor, aberaiile cromozomilor i numerice, vrsta organismului iar dintre factorii
externi: temperatura, nutriia.
Sexul. Cercetri efectuate de Bridges (1933) la Drosophila au evideniat faptul
c la masculi fenomenul de crossing-over nu se produce sau este foarte rar. De asemenea,
lipsa crossing-over-ului a fost semnalat i la B, la sexul femel care este heterogametic (xy).
Absena crossing-over-ului la sexul heterogametic al unor specii se datoreaz
faptul c cromozomul sexului se asociaz n meioz cap la - cap n timp ce autozomii se
asociaz normal, latur pe latur. Deci ntre cromozomii sexului nu se poate produce crossing-
over-ul. Sau, de multe ori, ntre cromozomii omologi, dei fac sinaps formnd bivaleni, ntre
cele 4 cromatide nu se formeaz chiasme i deci nu se poate realiza nici crossing-over-ul.
n ce privete structura cromozomului, frecvena crossing-over-ului este
influenat de poziia centromerului i localizarea heterocromatidei.
n regiunea centromerului, frecvena crossing-over-ului este redus, datorit
faptului c genele sunt foarte apropiate una de alta.
Aberaiile cromozomilor i n special inversia i translocaia, precum i unele
tipuri de poliploidie, determin o modificare a frecvenei crossing-over-ului.
Procentul de crossing-over depinde i de vrsta organismului. Astfel, la
Drosophila, dup ce femelele au atins maturitatea sexual, n urmtoarele 2 zile frecvena
crossing-over-ului a atins valoarea maxim, iar dup 10 zile frecvena acestuia este minim.
Dintre factorii externi rol important l are temperatura. Astfel, unele regiuni de
cromozomi II de la Drosophila formeaz mai multe recombinri la temperatura de 14-16C,
iar n alte regiuni la temperatura de 25-30C.
Hrile cromozomiale
Stabilind dispunerea liniar a genelor pe cromozomi Morgan a presupus totodat
c procesul de crossing-over este att mai frecvent cu ct este mai mare distana dintre cele 2
gene luate n considerare, i invers. Prin urmare, frecvena crossing-over-ului poate reflecta
distana relativ dintre genele unui cromozom.
Hrile cromozomului constituie reprezentarea grafic a cromozomilor i a
genelor care alctuiesc diferite grupe de linkage, genele fiind plasate pe cromozomi la distane
relative exprimate n % de crossing-over.
Distanele dintre gene se exprim n uniti de recombinare, denumite i uniti
Morgan sau morganide. Fiecare unitate de recombinare corespunde cu 1% crossing-over, iar
1 crossing-over este egal cu 1 unitate de pe harta cromozomului.
De exemplu, dac la Drosophila melanogaster se consider 3 gene mutante
recesive: b corp negru; vg aripi vestigiale i c aripi ndoite, pentru a stabili distana
15
dintre ele i ordinea lor pe cromozom, se fac urmtoarele ncruciri: indivizii normali cu
indivizi ce prezint mutaiile b i c, rezultnd un procent de 27% crossing-over, indivizi
normali cu indivizi ce prezint mutaiile c i vg n urma creia a rezultat 8,5% indivizi
recombinai.
Se poate afirma c distana dintre locii b i c este de 27 uniti, iar ntre locii c
i vg distana este de 8,5 uniti.
Pentru a determina poziia genei vg fa de celelalte gene este obligatorie i a
treia ncruciare ntre indivizi normali i indivizi cer genele b i vg, caz n care frecvena
crossing-over-ului a fost de 18,5%, deci distana dintre aceti loci este de 18,5 uniti pe hart.
Gena vg este plasat ntre genele b i c, deoarece dac ar fi plasat dincolo de
gena c, ar fi trebuit s se obin un procent de crossing-over de 35,5%. (27+8,5).
Cnd ntr-un punct al cromozomului are loc un crossing-over, n vecintatea sa,
probabilitatea ca s se produc un alt crossing-over se reduce, iar fenomenul se nuete
interferen.
S-a constatat c dac distana dintre 2 gene este minim 12 uniti (morganide),
n acest segment nu mai are loc un alt crossing-over

Determinismul genetic al sexului

n cursul evoluiei au acionat 3 mecanisme de determinism genetic al sexelor
pe care le remarcm i astzi:
1 prin conjugare (fenomenul de parasexualitate la bacterii)
2 prin gene specializate, dar situate pe diveri cromozomi
3 prin gene specializate concentrate pe cromozomi specializai (cromozomi
sexuali)
1. Mecanismul de determinism sexual prin conjugare
La bacterii, cele 2 sexe nu sunt difereniate morfologic, ci se deosebesc prin
prezena sau absena unui factor de fertilitate, notat cu F.
Celulele bacteriene F
+
se consider c sunt iar cele cu F absent, deci F

sunt
considerate bacterii de tip . Bacteriile F

pot primi prin conjugare de la bacteriile F

+
o copie
a acestui factor de fertilitate.
2. Mecanismul de determinism genic al sexelor
Acest mecanism este prezent la peti i reptile.
La aceste specii, diferenierea sexual este determinat de gene specifice care
ns nu sunt plasate i concentrate pe heterozomi (crmozomi sexuali),ci pe autozomi. De
asemenea, n cadrul aceluiai mecanism, la unele reptile genele determinate ale sexelor pot fi
activate sau inactivate de temperatura mediului exterior, mai ales cea de la incubarea oulor.
De exemplu la aligatorul american Alligator mississippiensis) temperaturi sczute sub 30
0
C
produc masculi din ou, iar temperatura de peste 34
0
C produc femele, ambele sexe fiind
produse la temperaturi intermediare.
3. Mecanismul de determinism cromozomic al sexelor
Acest mecanism este caracteristic celor mai multe specii de vertebrate i
nevertebrate.
Sexele sunt separate morfologic, fiecare sex avnd structuri cromozomice
proprii.
Cei 2 cromozomi sexuali sunt notai X i Y sau Z i W. La majoritatea speciilor
de animale, cromozomii XX determin sexul femel iar cromozomii XY caracterizeaz sexul
.
n gametogenez, sexul XX formeaz un singur tip de gamei (cu cromozom
X) i este denumit sex homogametic, iar sexul XY sau XO (cnd Y lipsete) formeaz 2 tipuri
de gamei (cu cromozom X sau cu cromozom Y i fr cromozom Y) i este denumit sex
heterogametic.
16
Se cunosc 2 tipuri principale de determinri cromozomice a sexelor:
- tipul Drosophila
- tipul Abraxas
Tipul Drosophila a fost studiat mai nti la Drosophila, dar se ntlnete i la
alte insecte, viermi, molute, peti, batracieni, mamifere inclusiv omul.
n timpul meiozei la aceste organisme, toate ovulele primesc cu cromozom X,
pe cnd spermatozoizii 50% primesc cromozomi X, iar 50% cromozomi Y. Oul ce va rezulta
din fecundarea unui ovul cu spermatozoid ce posed cromozomi X va fi femel (XX), pe cnd
ovulul fecundat de un spermatozoid cu cromozomi Y va forma un mascul (XY).
Tipul Drosophila cuprinde 3 subtipuri:
- subtipul Ly gaens (clasic): posed 2 cromozomi XX iar unul X i unul Y.
- subtipul Protenar: posed 2 cromozomi XX, iar masculul un singur X
(XO). Se ntlnete la ortopere, miriapode, viermii nematozi.
- subtipul Ascaris; posed 2 cromozomi XX, iar un singur X care nu este
independent, ci ataat curtozomilor.
Tipul Abraxas numele vine de la genul de fluturi la care s-a descoperit i
studiat acest tip. n acest caz sexul femel este heterogametic XX. Femelele formeaz ovule
cu X i ovule cu Y, n timp ce masculii un singur tip de spermatozoizi care primesc cte un
cromozom X. Dup cum spermatoidul, care posed un cromozom X va ntlni un ovul cu X
sau cu Y, va lua natere un mascul (XX) sau o femel (XY).
Tipul Abraxas cuprinde i el 2 subtipuri:
- subtipul clasic, descris mai sus: XY XX.
- subtipul deficiens la sexul lipsete cromozomul Y i rmne un singur
cromozom X;posed XX.
Acest tip l ntlnim la psri, reptile, fluturi. Se mai numete i tipul pasre.

Alte tipuri de determinism cromozomic al sexelor

Au fost descrise i alte tipuri nlnuite mai rar. Astfel, se cunoate tipul cu
heterozomi multipli ntlnit la unele roztoare i marsupiale i caracterizat prin prezena mai
multor cromozomi X (X
1,
X
2
,X
3
) sau mai multor cromozomi Y notai Y
1,
Y
2
, Y
3.

De asemenea, un tip particular este ntlnit la albin (Apis melifera) la care
sexul este determinat de numrul seturilor de cromozomi. Oule fecundate produc femele
diploide (2n = 32), n timp ce oule nefecundate se divid partenogenetic pentru a produce
masculi hoploizi (n = 16). Ca urmare, la masculi spermotogeneza se realizeaz prin mitoz.
Un alt aspect particular l ntlnim chiar la Drosophila melanogaster, la care
dei este XX iar masculul XY, cromozomul Y nu este determinator de sex. Determinismul
sexual la D. nu este dat de raportul dintre numrul de cromozomi X i numrul de autozomi.
Dac se noteaz numrul seturilor haploide de autozomi cu A un diploid
normal are formula X/A = 1/2 = 0,5 iar o diploid normal are formula X/A = 2/2 = 1.
Indiferent de numrul cromozomilor Y sau de prezena sau de absena lui Y, un
raport X/A egal sau mai mic de 0,5 d masculi, iar un raport X/A egal sau mai mare dect 1
d femele. Raportul X/A situat ntre 0,5 i 1 d insecte normale din punct de vedere sexual.

Ereditatea caracterelor legate de sex

La hibridri, n general, nu are importan dac un caracter homozigot urmrit
se gsete n autozomii mamei sau tatlui.Ei nu afecteaz segregarea caracterelor n
descenden. n cazul n care aceste caractere (gene) se gsesc n cromozomii sexului,
caracterul ereditii i al segregrii este condiionat de modul de comportare al cromozomului
sexului n meioz i mai apoi n procesul fecundrii.
17
Deoarece cromozomul Y este aproape ivert-un conine gene-genele care se
gsesc n cromozomul X nu au toate perche alelic. Motenirea caracterelor care sunt
determinate de gene pe cromozomul sexului se numete ereditate leget de sex (sex linkaje).
Ex: caracterul ochi albi de la Drosophila s-a ncruciat o femel de tip
slbatic, homozigot, cu ochi de culoare roie, dat de gene w
+
de pe croozomul X (w
+
w
+
), cu
un mascul cu ochi de culoare alb, caracter recesiv dat de alela w (genotip w
Y
). n F
1
s-au
obinut numai indivizi cu ochi de culoare roie, conform principiului mendelian al
dominanei, iar n F
2
75% din indivizi au prezentat ochi roii i 25% au avut ochi albi. Deci,
raportul de segregare a fost de 3:1. Dar, indivizii cu ochi albi au fost numai de sex mascul, iar
cei 75% indivizi cu ochi roii nu au fost 1/2 i 1/2 , ci 2/3 i 1/3 .
n ncruciarea reciproc, n care s-a utilizat o cu ochi albi homozigot (ww)
i un mascul cu ochi roii (w
+
Y) nu s-au mai obinut aceleai rezultate ca la prima
ncruciare.
n F
1,
n loc de uniformitate fenotipic, s-a produs un raport de segregare de
1:1, n care toi indivizii cu ochi roii erau femele i toi indivizii cu ochi albi erau masculi. De
asemenea, n F
2
, n loc de un raport de 3:1, s-a obinut un raport de 1:1, iar n cadrul categoriei
de indivizi cu ochi roii, 1/2 erau i 1/2 .
De asemenea n cadrul categoriei de indivizi cu ochi albi, 1/2 erau i 1/2 erau
.
Din acest exemplu, rezult urmtoarele particulariti de transmitere ale
caracterelor X linkate:
1 - deoarece cromozomul X ai mamei homozigote se transmit la fii, iar unicul
cromozom X al sexului se transmite la fiice, acest fel de transmitere a
caracterelor de la mam la fii i de la tat la fiice se numete transmitere n
cruce (criss-cross).
2 o femel hetrozigot va transmite gena recesiv X linkat la 1/2 din
fiicele sale i la 1/2 din fiii si.

Ereditatea limitat de sex i ereditatea influenat de sex. Ereditatea
holandric

n cazul ereditii limitate de sex, caractere condiionate de gene autozomale
prezente la ambele sexe se manifest numai la un singur sex. De exemplu, la animalele
domestice produciile de lapte i de ou sunt caracteristice numai indivizilor de sex femel, cu
toate c i masculii poart aceleai gene autozomale.
Ereditatea influenat de sex constitue o categorie aparte. n acest caz genele
autozomale implicate sunt prezente, de asemenea, la ambele sexe, dar manifestarea lor
fenotipic este diferit fiind influenat de sex. Caracteristicile de acest tip nu sunt limitate la
un singur sex.
O gen oarecare poate fi dominant la un sex i recesiv la cellalt sex. Rasa de oi
Dorset prezint coarne att la masculi ct i la femele, n schimb la rasa de oi Suffolk, ambele
sexe sunt fr coarne.
S-a considerat c rasa Dorset deine o gen dominant C, n timp ce rasa Suffolk
deine gena recesiv c. Din ncruciarea celor 2 rase CC x cc, la indivizii din prima generaie,
masculii au coarne, iar femelele nu, dei au aceeai formul genetic Cc. Gena C este
influenat n aciunea ei de hormonii secretai de glandele sexuale. Masculii heterozigoi
castrai nu formeaz coarne.
Ereditatea holandric se refer la caractere nelegate de sex, condionate de gene
situate pe cromozomul Y. Ele se transmit exclusiv pe linie mascul i se manifest exclusiv la
masculi. Deocamdat, asfel de caractere nu au fost nc evideniate la animale.

Inversiunea sexului
18
Prin inversiunea sexului se nelage schimbarea sexului n cursul autogeniei.
Spre btrnee sexele tind s capete unele caractere ale sexului opus. Femelele de
fazan nceteaz a mai oua i se mbrac cu penaj de masculi. Ginile btrne cnt uneori ca i
cocoii. Sunt peti care la tineree se prezint ca masculi, iar la btrnee produc icre. Petele
sabie (Xiphophorus crescut n acvarii) are dimorfismul sexual distinct: masculul are o
prelungire a aripii codale n form de sabie, care la femel lipsete.
Uneori femelele btrne se transform n i le crete aripa codal. Unii
batracieni la nceput imediat dup metamorfoz sunt femele, iar mai trziu la unele ovarul se
transform n testicule, devenind masculi.
Fenomenul de inversiune poate aprea la gemenii uterini, la animale care nasc de
obicei un singur pui. La taurine, s-a artat c n cazul gemenilor uterini de sex opuse, sexul
este normal, iar cel este steril. Femelele capt tuburi seminale sterile i n plus i canale
deferente proprii organelor de reproducere a masculilor.
Aceste rudimente ale sexului mascul exist n mod normal la femele, dar ele nu se
dezvolt cnd exist o sarcin cu un singur embrion.

Bazele moleculare ale ereditii

n urm cu 3 decenii nimeni nu i-ar fi nchipuit c oamenii vor cunoate
structura genelor i modul lor de exprimare ntr-un sistem celular. ntr-o perioad scurt de
timp, s-a demonstrat c moleculele de ADN i ARN, att la organismele inferioare, ct i la
cele superioare conin n mod codificat informaia genetic pentru sinteza proteinelor. S-au
descifrat mecanismele intime care stau la baza complicatelor reacii prin care se sintetizeaz o
protein n organism, fenomene ce au fost apoi reproduse i n laborator. Natura i structura
proteinelor determin specificitatea biologic a organismelor a fiecrei specii n parte, a
organelor i esuturilor, deci a caracterelor n ultim instan..
Acizii nucleici sunt componenii cei mai importani ai celulelor vegetale sau
animale. Ei particip la procesele de diviziune celular, de cretere i difereniere celular i
determin specificitatea materiei vii.
Acizii nucleici au fost descoperii n anul 1869, cnd medicul elveian F.
Mischer a extras din puroiul chirurgical o substan pe care a numit-o nuclein. Ulterior, s-a
constatat c nucleina conine un acid organic a fost numit de Altmam, n 1899, acid nucleic.
Apoi, s-a demonstrat c nucleina este format din 2 acizi nucleici: ADN i
ARN. ADN se gsete n cea mai mare parte n nucleul celulelor iar n ARN se gsete att n
nucleu, ct i n citoplasm.
Acizii nucleici constituie alturi de alte proteine, substanele de baz din care
este alctuit cromozomul.

Identificarea rolului genetic al ADN

Cercetrile care s-au fcut la nceputul secolului XX privind proteinele i
enzimele au demonstrat marea diversitate i complexitate a acestora considerndu-se c i
genele ar fi fost de natur proteic.
Problema care se punea era dac genele care ar avea o natur proteic pot s
determine sinteza altor proteine i respectiv enzime.
Cercetrile au demonstrat c din punct de vedere chimic, un lan polipeptidic
nu poate servi la propria sa sintez, n primul rnd datorit faptului c aminoacizii nu
manifest atracie chimic pentru aminoacizi identici.
Prima ipotez a legturii dintre o gen i sinteza unei enzime a fost elaborat n
anul 1908 de ctre medicul englez Garrod, care a studiat maladiile ereditare umane ce
afecteaz metabolismul intermediar al fenilalaninei.
19
Identificarea materialului genetic a fost posibil datorit descoperirii unor
fenomene ereditare de maxim importan:
- transformarea bacterian
- transformarea la eucariote
- recombinarea genetic n cursul reproducerii sexuate la bacterii (conjugarea)
- transducia bacterian cu ajutorul virusurilor
- transmiterea informaiei ereditare de ctre ARN viral

Transformarea la procariote
n anul 1928, bacteriologul englez F. Griffith a efectuat mai multe experiene
cu pneumococi (Diplococcus pneumoniae), o bacterie care produce la mamifere boala numit
pneumonie.
Aceast bacterie se prezint sub 2 forme: un tip virulent, capsulat i un tip
nevirulent, necapsulat. Virulena bacteriei este dat deci de prezena capsulei, format din
polizaharide.
Tipul virulent, capsulat formeaz colonii netede cu S (smooth = neted), n timp
ce tipul nevirulent, necapsulat formeaz colonii rugoase notate cu R (rongh = rugos, aspru).
Dup reacia imnuologic determinat de tipul de polizaharide ce alctuiesc
capsula, exist mai multe tipuri de pneumococi S: SI, SII, SIII.
Prin mutaii spontane, tipul S d natere la forme lipsite de capsul, respectiv
tipul R nevirulent. Deci exist pneumoci de tip RI, RII, RIII. n funcie de tipul S din care
provin. Injectnd la oareci, pneumococi n diferite variante experimentale,Griffth a constatat
c:
- tipul virulent S produce boala i animalele mor.
- tipul virulent S, inactivat prin cldur, nu produce boala.
- tipul virulent R este inofensiv, nu produce boala.
- dac la oareci se inoculeaz un amestec de tip SIII inactivat prin cldur i
tipul RII nevirulent, paradoxal, animalele se mbolnvesc i mor.
De la oarecii astfel infectai, s-au izolat pneumococi vii capsulai i deci
viruleni.
Concluzia care s-a desprins a fost c pneumococii de tip RII s-au transformat
n pneumococi de tip SIII. Mutaia este exclus n acest caz, deoarece tipul RII ar fi trebuit s
muteze n tipul SII i nu SIII.
Cauza transformrii pneumococilor neviruleni n pneumococi viruleni a
rmas necunoscut, pn n anul 1944 Griffith neputnd s gseasc o explicaie plauzibil. El
a dedus doar c suspensia de pneumococi omori conine un factor rezistent de
cldur,inductor de transformare.
n anul 1944, un grup de cercettori americani O.T. Avery, C.M. Mclarty au
reluat experienele lui Griffth, cu scopul de a identifica substana chimic ce induce
transformarea. Ei au extras ADN de la pneumococii de tip SIII i l-au introdus n mediul de
cultur al pneumococilor de tip RII.
n cultur pe lng pneumococi RII au aprut i un numr mic de pneumococi
SIII dovedindu-se c agentul transformator este ADN de la tipul donor.

RII + ADN SIII 24 h RII + SIII

ADN transformator a indus pneumococilor neviruleni, necapsulai, nsuirea
de virulen de formare a acestei capsule, deci ADN are rol n transmiterea caracterelor
ereditare.
Cu ajutorul ADN s-au realizat transformri genetice i pentru alte nsuiri la
bacterii (rezultate la streptomicin) sau la alte specii de bacterii.

20

Materialul genetic al ribovirusurilor

Exist 2 categorii de virusuri, unele au ca material genetic ADN
(dezoxiribovirusuri), iar altele conin ARN (ribovirusuri). Ribovirusurile cele mai cunoscute
sunt: VMT, virusul poliomielitei al encefalitei, virusul gripal.
Rolul genetic al ARN a fost pus n eviden la VMT. Acest virus conine 6%
ARN-v i 94% proteine. S-a izolat ARN-v de proteina viral i s-au fcut infecii cu ambele
componente pe frunze sntoase de tutun.
S-a constatat c boala s-a manifestat numai la frunzele infectate cu ARN-v.

Structura molecular a ADN

Structura molecular a ADN a fost descifrat n anul 1953 de cercettorii
Watson i Crick care au studiat structura ADN prin difracie n raze X.
Cei doi cercettori au studiat ADN "n vitro", netiind dac structura lui
corespunde cu cea existent n materia vie. Tot n anul 1953, Wiekins i colaboratorii au
efectuat cercetri asupra ADN "n vitro" confirmnd structura stabilit de Watson i Crick. n
anul 1962, cei trei cercettori au fost distini cu premiul Nobel pentru medicin i biologie.

Structura chimic a moleculei de ADN
Molecula de ADN este format din uniti simple denumite nucleotide. Un
nucleotid este alctuit din trei tipuri de molecule: o baz azotat, un zahar i un radical
fosforic.
Bazele ce intr n alctuirea ADN sunt de dou tipuri: baze purinice i baze
pirimidinice.
Purina este o baz azotat alctuit dintr-un heterociclu ce cuprinde 5 atomi de
C i 4 atomi de N, iar pirimidina este o baz azotat ce deriv din inelul benzenic, cuprinznd
4 atomi de C i 2 atomi de N.
Bazele azotate purinice ce intr n constituia moleculei de ADN sunt adenina
(A) i guanina (G), iar bazele pirimidinice sunt citozina (C) i timina (T).
Zaharul component al dezoribonucleotidului se numete dezoxiriboz, fiind o
pentoz.
Radicalul fosforic are 3 hidroxili liberi care pot fi esterificai. n cazul acizilor
nucleici se esterific 2OH, deci acizii nucleici sunt fosfoidesteri.
Prin unirea unei baze azotate purinice sau pirimidinice cu un zahar rezult un
dezoxiribonucleosid, iar prin ataarea la aceasta a unui radical fosforic rezult un
dezoxiribonucleotid. Ataarea radicalului fosforic se face n mod obinuit prin intermediul C
5' al dezoxiribozei, prin pierderea unei molecule de H
2
O.
Radicalul fosforic al unui nucleotid se leag de un alt nucleotid prin C 3' al
aceluia.
Deci constituie o punte de legtur ntre nucleotizii vecini, realizndu-se un
lan polinucleotidic, cu o form de zig-zag, prin legturile de C 3'5'. Aceast structur
constituie structura primar sau monocatenar a moleculei de ADN.
La majoritatea organismelor molecula de ADN este constituit din 2 lanuri
(catene) polinucleotidice complementare, aceasta fiind structura secundar a ADN stabilit de
Watson i Crick.
Una din permisele importante pentru stabilirea structurii secundare a ADN a
fost deducerea experimental a regulii lui Chargaff (1951), conform creia pot fi definite
urmtoarele reguli cantitative:
A + G = T + C sau A/T = G/C = 1.
21
Aceste relaii dintre nucleotide a dus la concluzia c ADN este alctuit din 2
catene. Rsucirile pe care la sufer o caten sau molecula biocatenar alctuiesc structura
teriar, iar interaciunea dintre 2 sau mai multe molecule biocatenare alctuiesc structura
cuatenar a acizilor nucleici.
Watson i Crick au stabilit c macromolecula de ADN este alctuit din 2
catene polinucleotidice paralele, nfurate elicoidal n jurul unui ax comun, imaginar, o
caten avnd sens ascendent (3'5'), iar cealalt un sens descendent (5'3'). Distana dintre
2 nucleotide succesive este de 3, 4 , iar pasul elicei este 34 ceea ce corespunde la 10
nucleotide. Diametru macromoleculei de ADN este de 20.
Molecula de ADN are dimensiuni foarte mari fiind cea mai mare molecul
biologic, cu o mas molecular ce poate ajunge la 12 16 x 10
6
daltoni (1 dalton = 1/12 din
masa atomului de C).
Cele 2 catene din molecula de ADN se leag ntre ele prin puni de H
2
ce se
realizeaz ntre o baz azotat purinic de pe un lan i o baz azotat pirimidinic de pe
cellalt lan. Prin urmare, n macromolecula de ADN exist urmtoarele tipuri de legturi: A
T, T A , G C i C G. Legturile de H
2
sunt duble ntre A = T i triple ntre C G. Ele
sunt legturi slabe, dar sunt destul de numeroase de-a lungul moleculei de ADN, ceea ce i
confer stabilitate i coeziune.
Cele 2 catene polinucleotidice din molecula de ADN sunt complementare, n
sensul c ordinea nucleotidelor de pe o caten determin ordinea nucleotidelor de pe cealalt
caten.
Legturile chimice slabe, cum sunt cele de H
2
sunt eficiente numai n cazul
moleculelor complementare, cum este ADN i anume cnd o protuberan a unei molecule
intr ntr-o cavitate a altei molecule. Luate separat, moleculele pirimidinice sunt mai mici
dect cele purinice, ns cuplurile purin-pirimidin sunt de aceeai dimensiune, conferind
moleculei de ADN regularitate i stabilitate.
Macromolecula de ADN este stabilit la temperaturile fiziologice, datorit
numrului mare de legturi chimice i faptului c moleculele de baze azotate se gsesc n
interiorul moleculei, contactul lor cu apa fiind limitat.

Replicaia ADN

Una dintre nsuirile de baz ale macromoleculelor de ADN este cea de
replicaie, constituind funcia autocatalitic a materialului genetic. La eucariote, replicarea
ADN are loc n timpul ciclului mitotic i anume n perioada S a interfazei.
Watson i Crick (1953) au emis i ipoteza replicrii ADN dup tipul
semiconservativ.
Acest model de sintez const n ruperea punilor de H
2
dintre cele 2 catene
complementare. Fiecare caten servete apoi ca matri pentru sinteza unei catene noi. n
final, dintr-o molecul veche de ADN vor rezulta 2 molecule, dar care sunt noi numai pe
jumtate.
Acest model asigur o mare fidelitate n sinteza noilor molecule de ADN.
n acest proces intervin mai multe enzime:
- endonucleazele, care determin incizii n molecula de ADN i care dau
natere punctelor de start n replicare.
- primaza, care este o ARN polimeraz ce determin sinteza unui scurt lan
ribonucleotidic denumit primer sau amors. Acest segment amors se leag prin puni de H
2

de catena matri.
- ADN helicazele, capabile s desfac moleculele lungi de ADN, rupnd
legtura de H
2
dintre bazele complementare.
- ADN polimerazele, care catalizeaz formarea legturilor fosfodiesterice
ntre nucleotidele lanului monocatenar n cretere. Sunt mai multe tipuri de ADN
22
polimeraze (I,II.III), unele din ele intervenind n procesul de reparare a unor nucleotide
ncatenate greit.
- ADN ligazele, care unesc fragmentele scurte de ADN monocatenar
rezultate din sinteza discontinu.
Sinteza ADN se desfoar n 3 etape:
1). iniierea replicrii
2). alungirea (elongarea) lanului polinucleotidic
3). terminarea replicrii

1). Iniierea
Din complexul enzimatic amintit, prima enzim care acioneaz este o
endonucleaz ce determin producerea unor ntreruperi la nivelul catenelor. n aceste bree
formate ptrund ADN helicazele, care rup legturile de H
2
dintre perechile de baze,
desprind cele 2 catene i dnd natere unui ochi de sintez.
Ar trebui s urmeze aciunea ADN polimerazei. Dar nici una din ADN
polimeraze nu poate iniia singur sinteza "de novo" a ADN. Ele necesit aciunea unui
primer (iniiator) alctuit din 10 60 de ribonucleotide la procariote i 6 10 ribonucleotide
la eucariote.
Un astfel de primer are o grupare OH liber. La eucariote, replicarea ncepe n
puncte de iniiere diferite. n acest fel molecula de ADN este mprit n mai multe uniti de
replicare numite repliconi. Lungimea repliconilor este egal cu lungimea dintre 2 puncte de
iniiere iar 2 replicri ncep replicarea n momente diferite unidirecional sau, cel mai des,
bidirecional.
2). Alungirea lanului polinucleotidic
Alungirea catenei fiice se face de ctre ADN polimeraz, care se folosete de
gruparea OH liber a primerului pentru a realiza prima legtur fosfodiesteric, atand
trifosfatul nucleotidic corespunztor bazei de pe catena matri. n felul acesta, sinteza ADN
are loc prin alungirea primerului, todeauna n direcie 5'3', ncorporndu-se cte un nou
nucleotid la captul terminus cu OH liber prin respectarea complementaritii bazelor.
S-a stabilit c n replicare intervine o singur enzim esenial: ADN
polimeraza III la procariote i ADN polimeraza la eucariote.
Aceast enzim are specifitate de direcie, nu de secven de nucleotide i ca
atare ea se deplaseaz numai n dircie 3' - 5', pe ambele catene matrie, determinnd
polimerizarea noilor catene numai n direcie 5'3'.
Experienele efectuate de Okazaki (1970) au adus dovezi pentru existena unui
model discontinuu de replicare, n care noile catene sunt sintetizate pe segmente nucleotidice
mici de 100 200 nucleotide la eucariote i 1000 2000 la procariote. Aceste fragmente nou
obinute = fragmente Okazaki i sunt unite ulterior de ctre ADN ligaze spre a forma o
caten unic.
La procariote, catena care se sintetizeaz pe catena matri ca orientare 3'5' a
primit denumirea de caten conductoare, iar catena care se sintetizeaz antiparalel este
denumit caten decalat. Sinteza catenei conductoare se desfoar continuu, n timp ce
sinteza catenelor decalate se desfoar prin intermediul fragmentului Okazaki, deci
discontinuu. La eucariote, denumirile formaiunilor de la nivelul furcii de replicare sunt
diferite. n loc de catena conductoarese se folosete denumirea de caten progresiv, iar n
loc de catena decalat, denumirea de caten retrograd.
3). Terminarea alungirii
Asamblarea catenei decalate necesit ndeprtarea primerului ribonucleotidic,
nlocuirea lui cu o secven corespunztoare de ADN i legarea acestuia. ADN polimeraza
III extinde catena n cretere pn ajunge la ribonucleotidul primerului, sintetizat la iniiere.
Atunci prsete terminusul OH, lsnd n acest loc o ntrerupere, pe care ADN lingaza nu o
23
poate suda cu P de la C5' al primerului pentru c acesta este sub form de trifosfat, iar ADN
lingaza poate lega numai OH de la C3' cu un monofosfat 5'.
Acum intervine ADN polimeraza I, care ndeprteaz ribonucleotidul
trifosfatic de la captul 5' al primerului.
n felul acesta, ADN polimeraza I acioneaz la captul OH-3' prsit de
ADN polimeraza III i se mic n direcia 5', ndeprtnd ribonucleotidele primerului una
cte una i adugnd dezoxiribonucleotide la captul 3' al catenei fiice n cretere. Cnd toate
ribonucleotidele au fost eliminate, ADN lingaza poate interveni legnd gruparea OH 3' a
catenei ADN n cretere de captul 5' cu P al fragmentului Okazaki.

Replicaia acizilor nucleici la bacterii i virusuri

Celula bacterian conine un singur cromozom format dintr-o molecul de
ADN cu o lungime de aproape 1000, i de form circular.
n timpul replicaiei la bacterii, molecula de ADN i pstreaz forma
circular,iar replicaia ADN se realizeaz dup modelul semiconservativ.
Procesul de replicaie a cromozomului bacterian ncepe ntr-un punct numit
replicator, care este ataat de membrana celular ntr-o regiune numit mezozom.
La bacterii, fiecare diviziune a bacteriei este precedat de o singur derulare
complet a cromozomului circular.
La dezoxiribovirusurile cu ADN monocatenar ( x 174, S13 etc.) procesul de
replicaie decurge astfel: n momentul n care ADN monocatenar notat cu (+) ptrunde n
celula bacterian infectat, servete ca matri pentru sinteza unei catene complementare
notat cu (-). n interiorul bacteriei infectate a rezultat un ADN bicatenar, dar n continuare,
numai catena (-) servete ca matri pentru sinteza catenelor (+) ale virusului.
La ribovirusurile cu ARN-v monocatenar (F
2
), s-a constatat c dup
ptrunderea ARN-v monocatenar notat cu (+) n celule bacterian, se ataeaz de ribozomi,
pentru a declana sinteza enzimei necesare desfurrii replicaiei, respectiv ARN
polimeraza. Pe matria catenei (+) se formeaz o caten complementar notat cu (-) iar pe
matria acesteia, se formeaz un numr mai mare de molecule de ARN-v (+).
O parte din aceste molecule de ARN-v (+) se ataeaz de ribozomi,
sintetizndu-se proteinele virale, dup care are loc unirea acestora cu ARN-v, rezultnd un
numr foarte mare de fagi, ce distrug celula gazd (liza bacteriei).

Codul genetic

Dup elucidarea structurii ADN, cercettorii au fost confruntai cu problema
modului n care ADN poate servi ca matri pentru formarea proteinelor. Ciberneticianul
Gamow (1954) este primul care a descoperit legtura dintre secvena de nucleotide din ADN
i ordinea aminoacizilor din lanurile polipeptidice, emind ipoteza c n macromolecula de
ADN se gsete codificat biochimic informaia genetic necesar sintezei moleculelor
proteice.
Dac proteinele cu cei 20 AA eseniali diferii reprezint limbajul vieii,
molecula de ADN cu cele 4 baze azotate ale sale poate fi socotit ca un fel de cod pentru acest
limbaj.
n felul acesta a intrat n uz aa-zisul cod genetic. n general, unitatea de baz a
unei codificri este simbolul, iar totalitatea simbolurilor formeaz un alfabet. n cazul
alfabetului genetic, cele 4 tipuri de baze azotate reprezint simbolurile. Aceste simboluri sunt:
A pentru adenin, G pentru guanin, T pentru timin i C pentru citozin. O grupare de 2,3,4
simboluri care semnific o idee, un cuvnt se numete cuvnt de cod. Potrivit concepiei lui
Gamow, codificarea celor 20 de AA nu se poate realiza de un singur nucleotid (4' = 4) i nici
de grupe formate din cte 2 nucleotide (4
2
= 16), pentru c n ambele cazuri numrul total de
24
combinaii este mai mic dect numrul aminoacizilor. Ca urmare, el a considerat c numai
secvene de cte 3 nucleotide (4
3
= 64) pot realiza codificarea celor 20 de AA.
Grupul de cte 3 baze azotate formeaz o triplet i deoarece tripleta reprezint
un cuvnt de cod, s-a numuit codon.
La nceput, nu s-a putut explica excendentul de 44 codoni. Apoi, investigaiile
fcute de Crick i colaboratorii si au artat c acelai AA poate fi codificat de mai muli
codoni diferii.
Deoarece codul genetic pentru cei 20 AA a fost studiat pe ARN-m, a intrat n
uz ca n desemnarea codonilor s se foloseasc uracilul (U) n loc de timin (T). Din cei 64 de
codoni, 2 marcheaz nceputul sintezei unei catene polipeptidice (AUG i GUG), iar 3 codoni
sunt nonsens (UAA, UAG i UGA), care marcheaz terminarea sintezei unei catene
polipeptidice (codoni STOP). Fiecare aminoacid, cu excepia triptofanului i metioninei, este
specificat de cel puin 2 codoni diferii, civa AA sunt specificai de 6 codoni diferii
(arginina, leucina, serina). Codonii diferii care determin acelai aminoacid se numesc
codoni sinonimi.

Caracteristicile codului genetic
Codul genetic are caracteristici: este universal, degenerat, neacoperit i fr
virgule.
Prin universalitatea codului genetic se nelege faptul c un anumit codon,
codific acelai AA la orice organism, indiferent de gradul su de evoluie, de la virusuri la
om. Asta nseamn c mesajul genetic al oricrui sistem biologic poate fi tradus de
mecanismele de traducere ale oricrui alt sistem biologic. Dar, exist i excepii.
Astfel, codul genetic din mitocondrii i de la unele protozoare prezint mici
deosebiri fa de codul standard. Dovada cea mai evident a universalitii codului genetic a
fost urmtoarea: s-a izolat ARN-m ce rspunde de sinteza hemoglobinei la iepure i s-a
injectat n ovocitele de broasc. S-a constatat c n ovocitele de broasc se sintetzeaz
hemoglobina, dei n mod normal, ovocitele nu sintetizeaz niciodat hemoglobina.
Codul genetic este degenerat, n sensul c mai muli codoni codific acelai
aminoacid (codoni sinonimi).
Caracteristica de degenerare a codului genetic se mai numete redundan,
termen preluat din informatic. Redundana const ntr-un exces de informaie, ntr-un sistem,
pentru a asigura transmiterea corect a informaiei, chiar n cazul unor perturbri.
Totui exist i fenomenul invers degenerrii i anume un codon poate codifica
mai muli aminoacizi. Aa este cazul codonilor GCG care modific alanina i arginina; CGG
prolina i arginina; AGG glicina i fenilalanina i GGA glicerina i acidul glutanic.
Codul genetic este neacoperit n sensul c 2 codoni nu au nucleotide comune i
este fr virgule, ntre 2 codoni nu exist spaii sau ali codoni care s joace rolul unor semne
de punctuaie. Deci codonii sunt independeni i bazele azotate dintr-o caten de ADN se
citesc todeauna secvenial, n aceeai direcie 5'3', n grupuri de cte 3. Absena unui
nucleotid (deleie) sau adugarea altuia (adiie) schimb sensul mesajului.

Structura genei

Noiunea de gen i evoluia ei

Gregor Mendel a artat c n celule exist factori ereditari care determin
caracterele ereditare perechi n celulele somatice i sub form simpl n celulele sexuale.
Termenul de gen (genos = urma) a fost introdus de Johannsen (1903), ns nu l consider
ca pe o unitate fizic, ci ca pe un corespondent al factorilor ereditari imaginai de G. Mendel.
n concepia geneticii clasice, gena prezint 3 caracteristici de baz: unitate
funcional, unitate mutaional i unitate de recombinare.
25
Ca unitate funcional, gena este cel mai scurt fragment dintr-un cromozom, n
interiorul cruia orice modificare afecteaz acelai caracter, deci gena este cea mai mic
unitate care produce un anumit efect fenotipic.
Ca unitate mutaional, gena este cea mai mic parte dintr-un genom, care d
natere prin mutaie la alel sau alelele sale, cu caracter modificat.
Ca unitate de recombinare, gena este cel mai mic segment dintr-un cromozom,
care se poate transfera prin crossing-over i n interiorul cruia nu are loc crossing-over.
Acest mod de a defini gena s-a dovedit a fi simplist, deoarece chiar la nceputul
secolului XX s-a demonstrat c gena este o unitate genetic mult mai complex, format din
sublocusuri sau subgene.
Apogeul n concepia clasic despre gen l-a constituit "o gen = o enzim",
concept elaborat de Beadle i Tatum (1941).
Acest concept s-a perimat ns, evideniindu-se c majoritatea proteinelor
conin mai multe lanuri polipeptidice, fiecare lan fiind sintetizat separat, dup care se
produce agregarea lor ntr-o protein final.
Cercetrile lui Benzer la fagul T
4
sunt cele care au condus la o nelegere nou
a noiunii de gen, ea fiind nlocuit cu noiunea de cistron. Benzer a demonstrat c ceea ce se
considera pn atunci c este o gen, nu era o unitate de structur i funcie, ci ea putea fi
subdivizat n alte subuniti funcionale, pe care le-a denumit cistroni, de la fenomenul
biochimic cis-trans. n felul acesta, cistromul apare ca un sector de gen, sector care
sintetizeaz un anumit polipeptid, ce intr n componena moleculei de protein (enzim)
sintetizat de ntreaga gen.
Cercettori mai noi au demonstrat c unitatea mutaional este perechea de
nucleotide, care n acelai timp este i cea mai mic unitate de recombinare genetic.
Gena, n concepia geneticii moleculare este definit drept un segment din
macromolecule de ADN (sau ARN-v) format dintr-o secven anumit de nucleotide care
acioneaz ca o unitate funcional i care conine informaia genetic ce determin secvena
nucleotidelor dintr-o molecul de ARN (transcripie genetic) i respectiv, a aminoacizilor
ntr-o caten polipeptidic (translaie genetic). Benzer a denumit muton, cea mai mic unitate
a genei n care poate avea loc o mutaie, independent de alta, recon, cea mai mic unitate n
care are loc recombinarea genetic i cistron, cel mai mic segment de ADN (sau gen) care
poate funciona unitar i ale crui limite pot fi stabilite prin testul cis-trans.
Din punct de vedere funcional, genele pot fi clasificate n:
- gene structurale ce determin secvena AA ntr-o caten polipeptidic;
- gene reglatoare ce controleaz sinteza proteinelor prin intermediul unui
represor.
Represorul este un factor polipeptidic cu rol de reglare.
La eucariote, din grupul de gene structurale, fac parte o serie de gene numite
constitutive (menajere). Ele se exprim permanent pentru c ndeplinesc funcii absolute
vitale pentru toate tipurile de celule (genele pentru sinteza enzimelor respiraiei celulare).
Genele constitutive contrasteaz evident cu alt categorie de gene structurale, care se exprim
numai n celulele puternic specializate. Ele sunt reduse ca numr de aceea sunt denumite i de
gene de lux. Aa este gena pentru insulin care se exprim numai n celulele pancreasului,
dei este prezent n toate celulele din organism.
Din grupa genelor reglatoare, fac parte o serie de gene de importan vital,
care acioneaz la nceputul vieii embrio-fetale, cum sunt genele homeotice. Ele specific
factori proteici ce regleaz transcripia unor gene structurale specifice.
n genomul oricrui organism se gsesc i numeroase pseudogene. O
pseudogen este o gen nefuncional, care prezint similitudini mari cu o anumit gen
funcional cunoscut din alt locus. Datorit defectelor acumulate n structura sa, pseudogena
nu poate fi transcris.

26
Structura genei la procariote

Modelul funcional al unei gene la procariote este modelul operonului.
Exist 3 categorii de gene la procariote:
- genele structurale, genele reglatoare i genele operatoare.
Genele structurale sunt segmente din macromolecule de ADN i au rolul de a
determina secvena AA n moleculele proteice.
Genele reglatoare sunt localizate tot pe ADN i au rolul de a sintetiza represorii
specifici ce controleaz activitatea genelor structurale din subordine.
Represorul nu interacioneaz direct cu genele structurale, ci prin intermediul
celui de-al treilea tip de gene, genele operatoare sau operator. Operatorul este o gen
adiacent genelor structurale, care are posibilitatea de a se combina sau nu cu represorul,
inducnd sau blocnd funcionarea genelor structurale. Gena operatoare este un fel de
comutator chimic, care declaneaz sau nu intrarea n activitate a genelor structurale.
naintea operatorului i genelor structurale este localizat promotorul, care
iniiaz procesul de transcripie a informaiei genetice de pe genele structurale. Ansamblul
format din promotor, gena operatoare i genele structurale se numete operon, ocup un
fragment din cromozom i funcioneaz coordonat.
Cea mai important urmare a existenei operonilor formai din mai multe gene
structurale este sinteza unui ARN-m unic, comun pentru toate genele structurale (un operon
un mesager).

Structura genei la eucariote

Spre deosebire de procariote, la eucariote nu sunt reunite mai multe gene n
vederea funcionrii comune, sub forma unui operon.
Fiecare gen este independent i are propriile sale elemente de reglare.
O alt deosebire fa de procariote este faptul c gena la majoritatea
eucariotelor nu este continu, ci este alctuit din secvene cu rol informaional intercalate de
secvene cu rol informaional. Secvenele nucleotidice care specific un produs funcional:
ARN sau lanuri polipeptidice, sunt secvene exprimabile i se numesc exoni. Secvenele care
nu specific un produs, fiind neexprimabile se numesc introni. Prin urmare, alternana
exonilor i intronilor confer discontinuitatea genei la eucariote. Diverse gene de la eucariote
au un numr diferit de exoni i introni: gena globinei de la oarece are 2 introni i 3 exoni,
gena ovalbuminei de la gin: 7 introni i 8 exoni, genele proteinelor ocului termic de la
Drosophila melanogaster nu conin introni.
Pentru a se realiza fenomenul de transcripie a ARN-m, se formeaz mai nti
un ARN precursor, care determin eliminarea segmentelor neinformaionale (a intronilor),
sintetizndu-se apoi un ARN-m care copie informaia genetic numai a exonilor.

Gene suprapuse i gene sritoare

n cazul cromozomului bacterian i viral, genele sunt dispuse liniar, ntr-o
anumit ordine alctuind o singur grup de linkage.
Destul de recent, la fagul x 174 s-au descoperit aa numitele gene suprapuse,
ceea ce nseamn c o anumit secven de codoni poate fi decodificat de mai multe ori,
realizndu-se sinteza a 2 catene polipeptidice diferite. Structura genomului fagului x 174 a
fost descifrat integral, fiind constituit din 9 gene, notate A,B,C,D,E.....J. Identificarea
nucleotidelor din genomul virusului a permis delimitarea celor 9 gene, constatndu-se c
genele A i B, precum genele D i E sunt suprapuse. Gena B reprezint partea terminal a
genei A, care este mult mai mare, gena B fiind translat dintr-un punct de iniiere intern genei
A. Totui genele A i B determin sinteza a 2 proteine diferite.
27
Suprapunerea genelor nseamn pe de o parte economie de material genetic,
dar pe de alt parte poate fi i un dezavantaj, deoarece apariia unei mutaii ntr-o gen
determin modificarea i celorlalte gene suprapuse. Genele suprapuse s-au observat i la ali
fagi: S13, SV40 etc.
Genele sritoare (jumping genes) sunt acele gene care se pot include n diferite
regiuni ale cromozomului. De exemplu, la bacterii, s-au identificat segmente de ADN
alctuite din 800 2000 nucleotide care se pot nsera n diferite regiuni ale cromozomului i
pot provoca mutaii. Aceste segmente de inserie i au fost notate:IS
1
, IS
2
, IS
3
i IS
4
.
Factorul de fertilitate F
,
precum i alte plasmide prezint n structura lor
normal i fragmente IS. De exemplu, factorul F are segmentele de inserie IS
2
i IS
3
ce
determin capacitatea acestuia de a se integra n cromozomul bacterian.
Unele segmente de ADN ce determin rezistena la antibiotice pot "sri" dintr-
un locus n altul gsindu-se la nivelul unui plasmid, apoi n genomul fagului, apoi n
cromozomul bacterian i apoi iar n plasmid. Aceste gene sritoare sunt denumite transpozoni,
fiind uniti independente, n funcie de rezistena pe care o determin (streptomicina,
penicilina, kanamicin, tetraciclin etc).
La eucariote, nc din anul 1951, Barbara McClintock studiind culoarea
boabelor de porumb de-a lungul mai multor generaii a artat c anumite structuri din masa
genetic "sar" cte 1 2 generaii. Dup aproape 2 decenii s-a descoperit c este vorba despre
o gen structural ce deine informaia genetic i alte 2 tipuri de gene ce controleaz strict
elementele de disociere la nivel cromozomic.
n anul 1983, B. McClintock a primit laurii Premiului Nobel, iar pe baza
descoperirilor sale s-au formulat noi ipoteze privind geneza cancerului.
n general, se consider c transpozonii determin o mare frecven de
rearanjamente moleculare la nivelul macromoleculei de ADN (inversii, deleii, duplicaii,
inserii) cu rol esenial n evoluie i se pare, c i n procesul de citodifereniere.

Reglajul genetic al activitii genelor

Celula vie conine o cantitate mare de informaie genetic iar procesele metabolice ce au loc
funcioneaz cu o mare eficien, asigurnd economisirea la maximum a energiei.
Cantitatea mare de informaie din celulele procariotelor i eucariotelor permite
funcionarea acestora n cele mai variate condiii de mediu. n timp ce virusurile posed n
programul lor genetic 3-4 gene, bacteriile 2.000-3.000 gene, plantele i animalele superioare
au un program genetic foarte complex, constituit din cteva zeci de mii de gene.
Genele ce alctuiesc programul genetic al vieuitoarelor nu funcioneaz toate
deodat, ci intr n funcie n mod succesiv, n funcie de tipul i cantitatea de enzime i
proteine, pe msura dezvoltrii individului.
Funcionarea celulei este dependent de cele dou laturi ale metabolismului: catabolismul
(dezasimilaia), prin care o serie de substane sunt descompuse i se elibereaz i o anumit
cantitate de energie i anabolismul (asimilaia) n urma creia se sintetizeaz substane
complexe din substane simple. Fiecare etap a asimilaiei i dezasimilaiei este catalizat de o
anumit enzim, care la rndul ei este dependent de informaia uneia sau a mai multor gene.

Reglajul activitii genetice la procariote

Teoria reglajului genetic la procariote a fost elaborat de geneticienii francezi
Francois Jacob, Andr Lwoff i Jaques Monod, n anul 1961, realizare pentru care ei au fost
distini, n anul 1965, cu premiul Nobel. n aceast lucrare ei demonstreaz experimental i
practic c sinteza proteinelor i a enzimelor variaz n funcie de necesitile celulei i este
controlat genetic. F. Jacob i J. Monod au descoperit mai multe moduri de reglare genic a
sintezei proteice:
28
- inducia enzimatic;
- represia enzimatic;
- retroinhibiia enzimatic.
Inducia enzimatic este fenomenul prin care celulele produc sistemul enzimatic
necesar pentru metabolizarea substanelor care de obicei nu sunt prezente n mediu.
Proprietile enzimatice ale bacteriilor sunt influenate de mediul n care cresc,
fenomen denumit adaptare enzimatic, ceea ce confer acestor organisme posibilitatea de a
crete n medii diferite.
J. Monod (1941) a descoperit fenomenul de diauxie prin care o bacterie ce crete pe
un mediu de glucoz i lactoz, crete i se nmulete pn ce glucoza este epuizat, iar dup
o perioad de stagnare, crete din nou i se nmulete folosind ns lactoza.
Un exemplu de inducie enzimatic a fost descoperit la drojdia de bere
(Saccharomyces cerevisiae) care poate s fermenteze lactoza din lapte cu ajutorul enzimei
lactaza. Tulpinile de drojdie de bere, care au fost crescute mai multe generaii pe mediu de
lactoz, vor conine n cantitate mare enzima lactaza, iar n acest caz, fenomenul de
fermentaie ncepe foarte repede (aproximativ o or de la incubaie). n cazul unor tulpini care
nu au fost crescute n prealabil pe mediu de lactoz, fermentaia nu are loc pentru c acestor
tulpini le lipsete lactaza. Dac aceste tulpini sunt inute n continuare n mediu de lactoz,
dup aproximativ 14 ore, fermentaia se declaneaz, fapt ce arat c lactoza induce
producerea lactazei de ctre celulele drojdiei. n acest caz lactoza ce trebuie metabolizat
acioneaz ca un inductor.
n concluzie se poate afirma c inducia enzimatic este caracteristic sistemelor de
catabolism (dezasimilaie) fiind declanat de substane denumite inductori.
Represia enzimatic este un fenomen opus induciei enzimatice, prin care este
inhibat sinteza unei proteine datorit unui produs final al unui lan metabolic denumit
represor.
Fenomenul de represie enzimatic a fost pus n eviden la bacteria Escherichia coli.
Astfel, s-a demonstrat c sinteza aminoacidului triptofan este inhibat atunci cnd n mediul
de cultur se adaug cantiti mici de triptofan sau analogi ai acestuia. Represia enzimatic
este caracteristic unor sisteme enzimatice ce intervin n anabolismul unor constitueni cu rol
esenial n organism (aminoacizi, nucleotide). Represia enzimatic poate aciona asupra mai
multor proteine ce fac parte din acelai lan metabolic, prin intermediul represorului. Dac un
metabolit acioneaz asupra represorului suprimndu-i activitatea, se deblocheaz sinteza
tuturor enzimelor din acelai lan metabolic. Efectul genetic al represorului const n blocarea
uneia sau a mai multor gene prin aceasta sistarea sintezei uneia sau a mai multor proteine
specifice.
Substanele capabile s modifice efectul de represie al represorului se numesc
efectori. Efectorii pot fi inductori, cnd inhib activitatea represorului i corepresori, cnd
intensific activitatea de represie a represorului.
Retroinhibiia enzimatic denumit i inhibiia prin feed-back sau inhibiia prin
produs final este un sistem de reglare a sintezei proteice prin cantitatea de produs final. n
cazul unui lan metabolic, exist mai multe etape, fiecare fiind catalizat de o anumit enzim,
rezultnd un produs final. n cazul retroinhibiiei enzimatice, produsul final, ntr-o cantitate
mai mare dect cea normal, acioneaz asupra enzimei din prima treapt a lanului metabolic
i ntreg lanul metabolic este oprit.
Fenomenul a fost studiat la bacteria Escherichia coli. Aminoacidul L-treonin se
transform ntr-un alt aminoacid, L-izoleucin n cinci etape, fiecare fiind catalizat de ctre o
enzim.





29












Represia enzimatic i retroinhibiia enzimatic
n cazul cii metabolice ce asigur sinteza izoleucinei.

n acest exemplu, cantitatea de izoleucin poate fi reglat att prin retroinhibiie
enzimatic ct i prin represie enzimatic. Prin retroinhibiie enzimatic, izoleucina n
cantitate prea mare blocheaz activitatea primei enzime din lanul metabolic, treonin
deaminaz i ntreg lanul metabolic este oprit. Prin represie enzimatic, aminoacidul
izoleucin blocheaz activitatea tuturor celor 5 enzime din lanul metabolic. Prin urmare
sinteza izoleucinei este controlat printr-un sistem dublu, cele dou sisteme fiind
independente.
n cazurile de mai sus, produii celulari sunt controlai numai de produii finali ai
liniei metabolice respective. Sunt ns i cazuri cnd unii produi celulari sunt controlai de
produii finali ai altei linii metabolice. De exemplu, bazele azotate purinice i pirimidinice ce
intr n alctuirea acizilor nucleici sunt sintetizate de dou linii metabolice paralele, dar cele
dou linii se regleaz reciproc. Acest lucru are o mare importan deoarece cele dou grupe de
baze trebuie c fie ntr-un anumit raport n momentul replicrii acizilor nucleici. Experimental
s-a demonstrat c proporia bazelor pirimidinice este controlat de produii finali pirimidinele,
dar i de purine, astfel: pirimidinele n exces inhib prima enzim din lanul metabolic al
pirimidinelor, iar purinele n exces stimuleaz activitatea aceleiai enzime. Prin acest proces,
bazele azotate sunt sintetizate economic, exact n cantitile necesare replicrii acizilor
nucleici.

Reglajul activitii genelor la eucariote

Structura molecular a cromozomului la eucariote este mult mai complex dect la
procariote. Cromozomii eucariotelor sunt alctuii din: 13-16% ADN, 12-13% ARN i 68-
72% proteine histonice i nehistonice. La eucariote, programul genetic este alctuit dintr-un
numr foarte mare de gene (cteva zeci de mii), gene care nu funcioneaz simultan, chiar mai
mult, n unele celule difereniate, majoritatea genelor sunt inactive. Toate aceste aspecte fac
ca reglajul genetic la eucariote s fie mult mai complex, reglajul sintezei proteice realizndu-
se la nivelul genei i nu la nivelul operonilor.
Funcionarea ADN al eucariotelor ca matri pentru sinteza ARN
m
este dependent
de conformaia spaial tridimensional a nucleohistonelor. Superspiralizarea nucleohistonelor
face ca ADN s nu poat funciona ca matri pentru ARN
m
. Ca regul, cromatina condensat
nu poate fi transcris, pe cnd cromatina difuz permite ca ADN s funcioneze ca matri
pentru ARN
m
, sinteza acestuia realizndu-se n interfaz.
La eucariote, reglajul activitii genelor are loc la trei niveluri:
a) Reglajul la nivelul transcripiei, care const n cuplarea proteinelor cromozomice
cu un segment din macromolecula de ADN de pe care trebuie s se transcrie informaia
genetic i n acest caz se blocheaz sinteza ARN
m
.


30
b) Reglajul la nivelul translaiei, ce const n degradarea ARN
m
format prin
transcripie de ctre enzime denumite nucleaze, localizate de o parte i de alta a membranei
nucleare.
c) Reglajul posttranslaional ce se manifest la nivelul catenelor polipeptidice, unde
intervin o serie de factori ce mpiedic agregarea monocatenelor pentru a forma stucturi
cuaternare, tiindu-se c aceast structur este funcional.
n realizarea reglajului genetic la eucariote, un rol deosebit de important l au
proteinele cromozomice, histonele i nehistonele, care mpreun cu catena ADN i ARN
cromozomic formeaz cromatina.
Histonele sunt proteine bazice deoarece sunt bogate n aminoacizii bazici, arginina,
lizina i histidina i complet lipsite de triptofan.
Histonele asigur stabilitatea structurii cromozomului i sunt implicate n transcripia
mesajului genetic, n mod nespecific.
Nehistonele sunt proteine cromozomice foarte variate ca structur i funcie, cu o
greutate molecular cuprins ntre 10.000 i 15.000 daltoni. Din grupul proteinelor
nehistonice fac parte: ADN i ARN polimerazele, enzimele ce intervin n sinteza i
degradarea proteinelor, proteinele cu rol structural i reglator din cromozom.
Proteinele nehistonice reacioneaz n mod specific cu molecula de ADN,
determinnd transcripia difereniat a genelor n funcie de esut i de celule, determinnd ce
gene vor fi transcrise, avnd un caracter reglator specific.
Modelul de reglaj genetic la eucariote este urmtorul: proteinele nehistonice se
ataeaz n mod specific la nivelul unei gene, care n mod obinuit este represat de proteinele
histonice. ntre cele dou tipuri de proteine are loc o reacie de fosforilare, prin care se
elibereaz un radical fosforic, n urma creia complexul histon-nehiston rmne ncrcat
negativ. Acest complex este respins de molecula de ADN a crei sarcini electrice sunt tot
negative, n aceast zon, ADN eliberat de histone, putndu-se realiza transcripia ARN
m
. n
momentul n care gena respectiv nceteaz s mai funcioneze, se refac moleculele de histone
pe segmentul respectiv de ADN.
La organismele eucariote reglajul genetic se realizeaz nu numai la nivelul genelor
individuale ci la nivelul segmentelor cromozomice, a cromozomilor sau chiar a genomului.
Astfel, reglajul genetic se poate realiza i prin heterocromatinizare. Heterocromatina
este de obicei localizat n jurul centromerului i n zona satelitului cromozomului. n zona
heterocromatic, cromatina este puternic spiralizat iar ADN are o funcionalitate redus.
Heterocromatina este de dou tipuri: constitutiv i facultativ. Heterocromatina
constitutiv conine o cantitate mare de ADN repetitiv (redundant) formnd de obicei gene
nefuncionale. Heterocromatina facultativ rezult din heterocromatinizarea unor regiuni
eucromatice. Prin transferul unui segment eucromatic n apropierea heterocromatinei
constitutive, acesta se heterocromatinizeaz i invers.
Un alt fenomen este heterocromatinizarea unuia din cei doi cromozomi X de la sexul
femel al mamiferelor, formnd cromatina sexual, astfel nct, la ambele sexe funcioneaz
numai cte un cromozom X din perechea de cromozomi ai sexului. Acest fapt a fost
demonstrat la multe organisme la care sexul femel este homogametic. Heterocromatinizarea
unui cromozom X se realizeaz numai n celulele somatice, n celulele sexuale ambii
cromozomi X sunt funcionali.
Se poate constata c, n cazul acesta, reglajul genetic se realizeaz la nivelul
ntregului cromozom, deoarece toate genele de pe cromozomul X sunt inactive.
Reglajul genetic se poate realiza la unele organisme prin inactivitatea ntregului
genom sau cu ajutorul unor hormoni.
n ultim instan diferenierea celular la eucariote este tot un proces de reglaj
genetic celular, deoarece n unele celule sunt activate numai anumite gene i anume n
celulele specializate.

31
Biosinteza proteinelor

Proteinele au un rol esenial n metabolismul celular, nsi funciile materialului
genetic sunt condiionate de o serie de enzime sau proteine cu rol structural.
Enzimele particip la replicarea ADN i ARN, la transcripia informaiei genetice i
la sinteza proteinelor.
Proteinele structurale intr n alctuirea cromozomului, a membranelor celulare, a
componentelor celulare, particip la asamblarea ribozomilor.
Procesul de biosintez a proteinelor este mult mai complex dect cel de sintez a
acizilor nucleici i cuprinde dou etape importante: transcripia informaiei genetice i
translaia informaiei genetice.


Transcripia informaiei genetice

Transcripia constituie fenomenul prin care informaia genetic de pe o poriune din
catena de ADN este transcris (copiat) ntr-o molecul de ARN
m
. Transcripia mesajului
genetic din molecula de ADN pe cea din ARN
m
se face ntr-o form care servete ca matri
pentru sinteza proteinelor. Sinteza ARN
m
este catalizat de enzima ARN-polimeraza, enzim
universal ce a fost identificat n celulele bacteriene, vegetale i animale.
Mecanismul propriu-zis al transcripiei informaiei genetice din ADN n molecula de
ARN
m
se realizeaz astfel: enzima ARN-polimeraza se leag specific ntr-o poziie a
moleculei de ADN, ce corespunde cu nceputul unei gene. Legturile de hidrogen se rup pe
poriunea genei respective, segmentul respectiv de caten se rotete cu 180 n spaiu, servind
ca matri pentru sinteza catenei de ARN
m
. ARN-polimeraza asigur ncatenarea corect a
ribonucleotidelor existente n nucleu. Odat cu naintarea ARN-polimerazei de-a lungul
matriei ADN, se elibereaz treptat noua caten n citoplasm, unde se asociaz cu ribozomii
formnd complexe denumite poliribozomi.
Dup ce s-a realizat transcripia, se refac legturile de hidrogen ntre catenele
moleculei de ADN.
De o foarte mare importan este descoperirea c procesul de transcripie la nivelul
unei gene se realizeaz pe o singur caten de ADN. Aa se explic faptul c o gen deine
informaia genetic necesar sintezei unei singure proteine.
n ceea ce privete locul de pe catena de ADN unde se iniiaz procesul de
transcripie, J. D. Watson (1974) arat c ARN-polimeraza este cea care recunoate codonii
de iniiere.
Spre deosebire de ADN-polimeraza care este format dintr-un singur lan
polipeptidic, ARN-polimeraza este alctuit din cinci lanuri polipeptidice notate cu
', , ,
2
i W, fiecare cu o mas molecular diferit. Enzima poate s catalizeze formarea
legturilor dintre nucleotide, chiar dac lipsete lanul , deci acest lan nu are rol catalitic, ci
acela de a recunoate catena matri i secvena de dezoxiribonucleotide, de unde se iniiaz
transcripia. Poziia din molecula ADN unde se leag ARN-polimeraza pentru a iniia
transcripia se numete promotor. ncheierea transcripiei ARN
m
este controlat de o protein
specific numit factor .
n sens mai larg, transcripia se refer i la sinteza celorlalte dou tipuri de ARN
implicate n procesul de biosintez a proteinelor.
Acidul ribonucleic solubil sau de transfer (ARN
s
) se sintetizeaz tot pe o matri de
ADN. Fiecare tip de ARN
s
este codificat de cte o singur secven de nucleotide din ADN,
deci de cte o gen. Acidul ribonucleic ribozomal (ARN
r
) este produsul direct al mai multor
gene. Detalii despre ARN
s
i ARN
r
au fost precizate ntr-un paragraf anterior.


32
Translaia informaiei genetice

Translaia este mecanismul prin care secvena codonilor din ARN
m
este tradus ntr-
o anumit succesiune de aminoacizi ce intr n constituia unui lan polipeptidic. Realizarea
procesului de translaie implic participarea mai multor componente celulare ce alctuiesc un
aparat de translaie. Aparatul de translaie cuprinde urmtoarele elemente: diferite tipuri de
ARN
s
corespunztoare tipurilor de aminoacizi, aminoacizii, ribozomii, enzimele activatoare
ale aminoacizilor, cofactorii energetici, ATP i GTP, factori de iniiere, alungire i terminare a
sintezei lanului polipeptidic.
Pentru sinteza celular a proteinelor este necesar o anumit cantitate de energie,
formarea unei singure legturi peptidice necesitnd 0,5 kcal/mol. Aceast energie este
asigurat de acidul adenozintrifosforic (ATP) care, prin hidroliz, pune n libertate unul sau
doi radicali fosforici elibernd energia corespunztoare:

ATP + H
2
O AMP + P P + 8 kcal/mol

Sinteza proteic se desfoar concomitent cu hidroliza ATP n AMP i doi radicali
fosforici, rezultnd 8 kcal/mol, din care 0,5 kcal/mol sunt folosite pentru realizarea legturii
peptidice iar restul de 7,5 kcal/mol pentru meninerea echilibrului reaciei n favoarea sintezei
proteice i nu a hidrolizei.
O prim etap n sinteza proteinelor o constituie activarea aminoacizilor i
formarea complexului aminoacil-ARN
s
. Activarea aminoacizilor se realizeaz cu ajutorul
energiei rezultate din hidroliza ATP i n prezena enzimei aminoacilsintetaza (E). Reacia de
activare a aminoacizilor poate fi redat astfel:

AA
1
+ ATP + E AA
1
AMP E + P P

Aminoacizii, dup ce au fost activai, se pot ataa de molecula unui ARN
s
specific:

AA
1
AMP E + ARNs
1
AA
1
- ARNs
1
+

+ AMP + E

Cele dou reacii au loc succesiv, sunt catalizate de aceeai enzim
(aminoacilsintetaza) i ca atare se poate scrie reacia general:


aminoacilsintetaza
AA
1
+ ATP + ARNs
1
AA
1
- ARNs
1
+

+ AMP + P P

n urmtoarea faz complexul aminoacil-ARN
s
se ataeaz de poliribozomi, la
nivelul crora are loc iniierea sintezei lanului proteic. Ribozomul asigur de aa manier
asocierea acestor elemente nct zona anticodon a ARN
s
s poat recunoate codonul
corespunztor din ARN
m
, ducnd astfel la o descifrare corect a mesajului genetic. Dup
fixarea aminoacidului, ARN
s
devine liber putnd transporta alte molecule de aminoacid la
nivelul ribozomului. ncatenarea aminoacizilor se realizeaz de ctre enzima
peptidiltransferaza i const n realizarea legturilor peptidice ntre gruparea carboxil a unui
aminoacid i gruparea aminic a celuilalt.
Reacia de ncatenare a aminoacizilor poate fi redat astfel:

33
peptidiltransferaza
AA
1
- ARNs
1
+ AA
2
- ARNs
2
+ AA
3
- ARNs
3
+
AA
1
- AA
2
- AA
3
+ ARNs
1
+ ARNs
2
+ ARNs
3
+

ncheierea sintezei catenei polipeptidice se realizeaz cu ajutorul a doi factori
proteici care sunt activai n prezena codonilor de ncheiere UAA, UAG i UGA. Ca urmare,
catena polipeptidic se detaeaz de ribozomi i de ARN
s
care a adus ultimul aminoacid.
n ceea ce privete viteza cu care se realizeaz biosinteza proteic, exist o serie de
date att la procariote ct i la eucariote. Transcripia genei ce determin sinteza enzimei ce
intervine n producerea triptofanului la Escherichia coli are loc cu o vitez de 28
nucleotide/sec., iar translaia cu viteza de 7 aminoacizi/sec. O molecul complet de
hemoglobin uman este sintetizat n 35 secunde (gena ce determin hemoglobina conine
670 nucleotide).
n prezent s-a reuit sinteza unor substane proteice ntr-un sistem celular liber
(populaii de celule la care s-a distrus membrana celular), folosind ARN
m
artificial (M. W.
Niremberg, 1961).

Ereditatea extranuclear

Prin fenomenul de ereditate extranuclear se nelege motenirea caracterelor i nsuirilor
organismului prin elementele citoplasmatice.

Metode de evideniere a ereditii extranucleare

Ereditatea extranuclear se evideniaz prin mai multe metode:
- fecundarea unui ovul anucleat de la o specie, cu un spermatozoid de la alt specie
(merogonie);
- hibridarea reciproc;
- prin intermediul incluziunilor i organitelor citoplasmatice;
- testul heterocarion;
- segregarea nemendelian;

Fenomenul merogoniei

Prin merogonie se nelege formarea unui embrion prin fecundarea unui ovul
anucleat cu un spermatozoid normal. Din fecundarea unui ovul anucleat cu un nucleu strin,
rezult un zigot haploid, deoarece posed nucleul patern, haploid i citoplasm matern. n
astfel de cazuri, nu se obin organisme mature deoarece zigoii, din cauza perturbrii
raportului dintre nucleu i citoplasm, mor ntr-un stadiu timpuriu.
Primele indicaii asupra existenei acestui fenomen au fost experienele
embriologului T. Boveri (1899). El a folosit ovule de arici de mare pe care le-a centrifugat
puternic, astfel nct membrana lor s-a rupt, nucleul fiind expulzat. Aceste ovule anucleate au
fost fecundate cu spermatozoizi de la o specie nrudit crinul de mare. Larvele obinute erau
haploide i conineau pe lng caracterele tatlui i caracterele materne, transmise prin
intermediul citoplasmei ovulului.
n afar de metoda centrifugrii, nucleii din ovul pot fi ndeprtai i cu ajutorul
micromanipulatorului, prin operaii de microdisecie, sau cu ajutorul unei micropipete, prin
aspirare.
O alt metod folosit este distrugerea nucleilor din celul cu ajutorul ocurilor de
temperatur, a radiaiilor ionizante, a razelor ultraviolete sau a unor substane chimice.
34
Folosind unele din aceste metode I. Danielli i colab. (1957) au nlocuit nucleii de la
Amoeba discoides, cu nucleii de la Amoeba proteus. Nucleii transplantai au suferit influena
citoplasmei strine, modificndu-i forma n sensul nucleilor de la Amoeba discoides.
Cercetri interesante de acest gen s-au efectuat i cu specii din genul Triton (Triton
palmatus i Triton cristatus) de ctre Paula Hertwig (1936, 1942), V. Curry (1931) .a., n
care nucleii din ovule au fost distrui prin iradiere. Ereditatea citoplasmatic a fost pus n
eviden la embrionii provenii prin fecundarea acestor ovule cu nucleii de la alt specie.
Embrionii ns se dezvoltau numai pn n faza de blastul, apoi mureau.
Elveianul E. Hadorn (1955) a reuit s nlture acest neajuns procednd n felul
urmtor: fecundeaz ovule anucleate de Triton palmatus cu spermatozoizi de la specia Triton
cristatus. Din embrionii rezultai a desprins o poriune de epiderm i a transplantat-o pe
embrionii speciei Triton alpestris. Indivizii rezultai aveau poriunea de epiderm
transplantat asemntoare ca aspect i culoare cu cea de la Triton palmatus. Citoplasma
ovulului de Triton palmatus i-a imprimat deci caracterele epidermei transplantate, la
embrionul nou format.

Ereditatea extranuclear n hibridarea reciproc

n ncrucirile formelor ndeprtate (interspecifice i intergenerice), apare foarte
frecvent fenomenul de matroclinie, prin care se nelege transmiterea evident a unor caractere
materne. De aceea, la astfel de hibridri nu este indiferent care dintre cele dou specii
constituie forma matern sau patern.
Practica a demonstrat c la hibridarea dintre Equus caballus i Equus asinus se obin
hibrizi a cror mrime i constituie este asemntoare formei materne. Din hibridarea dintre
Equus caballus i Equus asinus rezult catrul (Equus mullus), de mrimea i
conformaia lui Equus caballus, iar din hibridarea dintre Equus asinus i Equus caballus
rezult bardoul (Equus hinnus) de mrimea i conformaia lui Equus asinus. Cei doi hibrizi se
deosebesc foarte mult ca mrime, culoare, for .a., dei, n celulele somatice au acelai
numr de cromozomi, (2n = 63).

Testul heterocarion

Prin heterocarion se nelege o celul n care, pe lng nucleul propriu, mai exist
inclus un nucleu strin. n urma includerii unui nucleu strin se formeaz un dicarion, o celul
cu doi nuclei. Fenomenul a fost pus n eviden la ciupercile inferioare, care se nmulesc
asexuat.
Realizri n aceast direcie au fost obinute de ctre R.E. Wright i J. Lederberg
(1957) la drojdia de bere, Saccharomyces cerevisiae. Dac notm, la o prim celul nucleul cu
A i citoplasma cu , iar la a doua celul nucleul cu B i citoplasma cu , dicarionul, format
prin transferul nucleului B n celula va deveni AB. n descendena acestuia vor rezulta
celulele cu A i B . Cu aceast ocazie se constat c celulele B manifest caracteristici ale
celulei A. Rezult c, aceste caracteristici sunt transmise prin citoplasma i nu de nucleu
(figura 9.1).









Schema formrii celulelor heterocarion


35
Segregarea nemendelian

Exist la drojdia de bere, Saccharomyces cerevisiae, o mutant determinat de o
gen recesiv homozigot petite i care determin formarea unor colonii mici autosterile.
Prin fuzionarea unor celule haploide mutante cu celule haploide normale se formeaz celule
heterocarion, fertile, ce se nmulesc prin nmugurire i formeaz colonii normale. n anumite
condiii celulele haploide mutante i normale pot fuziona pe cale sexuat dnd natere unei
asce cu patru ascospori haploizi, doi cu gene normale i doi cu gene mutante. Cu toate
acestea, toi cei patru ascospori, prin nmulire sexuat, au dat natere la colonii normale.
Lipsa de segregare care ar fi trebuit s se produc n raport de 1:1 dovedete c expresia
fenotipic a celor patru ascospori este de natur citoplasmatic.
Tot la drojdia de bere B. Ephrussi, H. Hottingner i H. Roman (1955) au studiat o
alt mutant denumit suppressive petite. Din fuzionarea unei celule mutante cu o celul
normal s-au obinut n descenden asce cu ascospori normali i mutani n proporie egal,
dei ambele conin acelai genotip. Aceasta dovedete c segregarea nemendelian a fost
influenat de ctre citoplasm.
Segregarea somatic se manifest n cazul nmulirii vegetative i se explic prin
distribuirea inegal a structurilor citoplasmatice implicate n determinarea unor caractere.
Aceast situaie imprim la organisme un aspect de pestri sau vrgat.
Un exemplu ni-l ofer segregarea plastidelor n cazul plantei Mirabilis jalapa var.
albomaculatus la care, plante pestrie conin plastide verzi i albe.
Acestea se repartizeaz prin mitoz n mod ntmpltor n citoplasma celulelor fiice.
Cnd din astfel de celule se formeaz celulele mam ale megasporilor i n continuare celule
sexuale, acestea vor conine proplastide verzi, albe sau de ambele tipuri. n urma fecundrii se
vor dezvolta plante verzi, albe sau pestrie.

Manifestarea ereditii extranucleare

Tipurile de manifestare a ereditii extranucleare mbrac diferite forme i ele depind
de structurile din citoplasm care poart i transmit anumite caractere.


Ereditatea prin plastide

E. Baur a studiat ereditatea culorilor mozaicate, la Pelargonium zonale. Aceast plant
posed frunze pestrie (alb-glbui cu verde). Observnd la microscop seciuni din aceste
frunze, se constat existena unor grupe de celule cu plastide necolorate n epiderma i sub
epiderma frunzei, n timp ce n partea central a ei se gsesc plastide verzi (cloroplaste). La
aceast plant pot s apar, uneori, att ramuri cu frunzele pestrie, ct i ramuri cu frunze
verzi sau albe. Executnd hibridri ntre flori de pe ramuri cu frunze diferite, el obine semine
care produc n majoritatea cazurilor plante ce au caracterele frunzelor de la forma mam.
Aceste ncruciri ne arat c transmiterea cloroplastelor la urmai se realizeaz prin
citoplasma celulei ou i ntr-o mic msur de ctre spermatie, care are o cantitate mic de
citoplasm.
C. Correns, descrie un caz de ereditate citoplasmatic la Mirabilis jalapa. Aceast
plant are ramuri cu frunze verzi, albe i mozaicate. El a efectuat polenizarea florilor de pe
ramurile verzi, albe i pestrie, cu polenul de la florile acestor trei tipuri. Plantele pe care le-a
obinut din semine au avut caracterul mamei n ceea ce privete culoarea frunzelor.
Fenomene asemntoare au fost observate la Anthirrinum sp., Plantago sp., Humulus sp. .a.




36
Ereditatea prin intermediul incluziunilor citoplasmatice

n afar de mitocondrii sau plastide, prin citoplasm se transmit i particule
submicroscopice ce au proprietatea de a se reproduce odat cu diviziunea celulei. Aceste
particule nu sunt deocamdat elemente separabile ale celulei vii, dar pot fi responsabile pentru
transmiterea unor nsuiri pe linie matern.
Un exemplu de acest fel este transmiterea din generaie n generaie a sensibilitii
Drosophilei la CO
2
. Cercettorul francez Ph. L'Hritier i colaboratorii (1937), au descoperit
linii de Drosophila sensibile la CO
2
. De obicei, Drosophila care triete n atmosfera de CO
2

rezultat n urma fermentaiilor (de fructe, struguri etc.) este rezistent la acest gaz. Pentru a
verifica ipoteza c sensibilitatea la CO
2
se transmite prin citoplasm, autorii au nlocuit
cromozomii de la aceste linii cu cromozomii normali de la mutele normale. Pentru aceasta,
au efectuat ncruciri ntre femelele sensibile la CO
2
, cu masculi rezisteni la CO
2
. Au
realizat indivizi sensibili la CO
2
. n cazul cnd s-au ncruciat masculi sensibili la CO
2
cu
femele rezistente la CO
2
au realizat indivizi normali. Femelele hibride sensibile la CO
2
au fost
din nou ncruciate cu masculi normali. Descendenii femeli au fost din nou ncruciai cu
masculi normali. Dup mai multe retroncruciri au rezultat forme materne cu nucleul de la
forma patern. Cu toate acestea, descendenele prezentau sensibilitate la CO
2
. nsuirea de
sensibilitate la CO
2
s-a transmis prin citoplasm.
Concluzia acesta a fost verificat prin metoda injectrii de hemoglobin de la
Drosophila sensibil la CO
2
la femelele de Drosophila normale. Acestea au produs indivizi
sensibili la CO
2
.
Toate acestea demonstreaz c sensibilitatea la CO
2
se transmite prin particule din
citoplasm care au fost denumite sigma.

Androsterilitatea citoplasmatic i nucleo-plasmatic

Androsterilitatea (sterilitatea mascul) este nsuirea plantelor de a nu produce polen,
sau de a produce polen steril. Fenomenul acesta a fost studiat foarte mult la porumb i are
importan pentru producerea hibrizilor simpli i dubli, obinui din ncruciarea liniilor
consangvinizate.
Se cunosc trei tipuri de androsterilitate: nuclear, citoplasmatic i nucleo-
plasmatic. Prima se cunoate de mult vreme i a fost sesizat la multe plante. La porumb,
Emerson, Beadle i Frase (1935) comunicau existena a mai mult de 25 gene ce produc
androsterilitatea.
Aceast sterilitate nu a putut fi folosit n lucrrile de ameliorare deoarece din cauza
segregrii, n descenden, apar i plante fertile.
Androsterilitatea ce se motenete pe calea citoplasmei se transmite n descenden
de ctre partenerul femel i ea se folosete n lucrrile de ameliorare. A fost descoperit la o
plant steril de porumb de Peru de ctre Rhoades (1931, 1933). ncrucind descendenele cu
aceeai form patern, nu s-a modificat n descenden caracterul de androsterilitate. S-a ajuns
la concluzia c n acest caz, androsterilitatea este determinat exclusiv de citoplasm.
Totui, Rhoades d unele date care ne arat c n unele cazuri, n urma polenizrii
libere la porumb, pot aprea n descenden i plante fertile sau parial fertile. Deci acest
caracter depinde i de genele nucleare care intr n aciune cu genele din citoplasm
(ereditatea nucleo-plasmatic).
Numeroase linii care posed polen fertil, prin ncruciare produc forme cu polen
steril. n aceste cazuri, genotipul nu influeneaz caracterul de androsterilitate, motenirea
realizndu-se pe cale citoplasmatic. Au fost totui gsite linii cu factori genotipici capabili de
a restabili fertilitatea polenului n urma ncrucirii cu forme androsterile citoplasmatic.
Tipurile de androsterilitate se deosebesc dup gradul de sterilitate i dup
comportarea lor la ncruciarea cu diferite linii fertile. Se pot obine descendene fertile,
parial fertile sau sterile.
37
Restaurarea fertilitii. Se ntlnesc rare cazuri cnd androsterilitatea la porumb se
motenete numai prin citoplasm, n mod independent fa de genotip. Exist cazuri cnd
genotipul inhib aciunea citoplasmei ce produce sterilitatea polenului, precum i cazuri cnd
din contra, citoplasma poate influena genotipul provocnd androsterilitatea nuclear.
Caracterul de androsterilitate este condiionat deci de interaciunea dintre genotip i
citoplasm. Aceast interaciune este studiat cel mai bine la tipul T (Texas).
Cercettorii Jones (1950), Rogers (1954), Eckardt (1954), Thomas i Johnson (1956),
au emis ipoteza c restabilirea fertilitii polenului la timpul Texas se datoreaz prezenei a
dou gene dominante existente la linia care restabilete fertilitatea.
















Cele trei tipuri de androsterilitate: nuclear (I), citoplasmatic (II) i
nucleo-citoplasmatic (III)

Dup comportarea lor fa de liniile sterile, liniile consangvinizate pot fi clasificate:
1. linii fixatoare de sterilitate;
2. linii restauratoare de fertilitate;
3. linii semirestauratoare de fertilitate (semifixatoare de sterilitate).
Trebuie menionat c liniile consangvinizate de porumb se comport n mod deosebit
fa de diferite tipuri de sterilitate. Uneori, aceeai linie poate fi restauratoare pentru un tip de
androsterilitate i fixatoare pentru alt tip.
Pentru a urmri comportarea plantelor fa de androsterilitate n funcie de aciunea
genelor din citoplasm i nucleu vom nota cu S gena ce produce sterilitatea, cu F gena ce
asigur fertilitatea i cu R gena restauratoare de fertilitate.
n aceast figur se poate urmri modul de aciune a genelor la cele trei tipuri de
androsterilitate.
Folosirea androsterilitii n producerea de hibrizi reduce lucrrile de castrare a
plantelor i cheltuielile de producie. Pentru producie se lucreaz la obinerea de linii
consangvine, acestea se ncrucieaz i formeaz hibrizi simpli, iar acetia din urm
ncruciai produc hibrizi dubli cultivai n producie.











38

















Schema pentru obinerea de hibrizi dubli pe baz de androsterilitate


Aparatul genetic al ereditii extranucleare

Existena unui aparat al ereditii extranucleare a fost dovedit n primul rnd prin
prezena, rolul i funciile acizilor nucleici n organitele citoplasmatice, cloroplaste i
mitocondrii. S-a admis, n general, c n citoplasm se gsesc plasmagene spre deosebire de
genele nucleare numite cromogene.
ADN din citoplasm prezint unele caracteristici care-i confer proprietatea de a
nmagazina i transmite o informaie ereditar. Pe lng ADN, organitele celulare conin i
ribozomi, enzime, ARN
r
i ARN
s
. Acestea constituie un aparat genetic care poate funciona
relativ independent fa de cel nuclear.
ADN din organite are o structur bicatenar ca i cel nuclear, dar difer prin greutate
molecular (60-70 x 10
6
dal cel din mitocondrii) i este de 100 ori mai mult n cloroplaste.
Diferene se constat i n ceea ce privete raportul de baze, timpul de denaturare i
renaturare. Din aceast cauz nu se pot obine hibrizi moleculari ntre ADN citoplasmatic i
cel nuclear. ADN din organite se replic independent de ADN nuclear.
O alt deosebire const n faptul c n cloroplaste i mitocondrii ADN are form
circular, se replic dup tipul semiconservativ, independent de ADN nuclear.
Deosebirile ADN din cloroplaste i mitocondrii fa de acel nuclear i asemnarea lui
cu ADN ntlnit la bacterii, alge albastre .a., au dus la presupunerea c aceste organite,
cndva, au dus o via independent ca procariote i cu timpul, ptrunznd n celule, au
realizat o simbioz. Ele au stabilit unele relaii cu celula, n afara creia nu mai pot exista.
Descoperirile din acest domeniu au dus la formularea unei teorii privind originea exogen a
organitelor citoplasmatice.
Tot n celul se mai gsesc i alte structuri cu rol genetic, cum ar fi particulele
Kappa, sigma i alte plasmagene, nc nelocalizate. La unele din ele a fost pus n eviden
prezena ADN. i pentru aceste structuri exist prerea c ar avea o origine exogen, dar
cercetrile care s-au ntreprins nu au lmurit complet structura i funcia unui aparat genetic
propriu.


Sisteme genetice pentru controlul reproducerii organismelor

Comportarea i transmiterea caracterelor ereditare la eucariote depind foarte mult de
modul de reproducere al organismelor. Exist dou moduri, principale de reproducere:


39
reproducerea asexuat, n care se poate include i nmulirea vegetativ i reproducerea
sexuat.

Ereditatea n cazul reproducerii asexuate i sexuate

n cazul nmulirii asexuate, n general, toate caracterele organismelor se transmit ca
atare la descendeni. Descendenele poart numele de clone sau sue. n rare cazuri, se pot
produce i modificri ereditare prin mutaii de gen, genom sau restructurrii cromozomale,
care se transmit la urmai. Acest mod de nmulire, prezint unele avantaje pentru producie,
deoarece, pot perpetua la urmai, caractere constante (pomi, vi de vie, cartof .a.).
Ereditatea n cazul reproducerii sexuate mbrac forme mai complexe, deoarece
indivizii rezultai pe aceast cale, reprezint organisme n care au loc, att o continuitate
genetic ct i o recombinare de caractere. Reproducerea sexuat se realizeaz cu ajutorul
gameilor, produi de un singur organism (hermafrodite sau monoice), sau de organisme de
sex diferit (bisexuate sau dioice).
Hibridarea sexuat constituie o important metod de analiz genetic. Cu ajutorul
acesteia, se evideniaz modul de transmitere a caracterelor de la o generaie la alta. Pentru
ameliorarea plantelor i animalelor, constituie o important metod de ameliorare deoarece se
pot ntruni ntr-un organism nou (hibrid), caracteristici ereditare, de la doi prini cu erediti
diferite.
Hibridarea ca metod de nmulire i creare de forme noi, se practic de mult timp.
Cercetri n aceast direcie, din partea oamenilor de tiin, se fac de abia de la sfritul
secolului al XVII-lea. ncepnd cu a doua jumtate a secolului al XIX-lea, n urma
descoperirii unor legi cu privire la modul de transmitere a caracterelor, hibridrile ncep s se
aplice n mod tiinific, ntocmindu-se totodat, o eviden genealogic a ascendenilor i
descendenilor.
Exist multe criterii de clasificare a hibridrilor; cele mai importante, fiind
urmtoarele:
1. innd seama de factorii care contribuie la realizarea hibridrii, deosebim:
hibridarea natural i hibridarea artificial.
2. Din punct de vedere al gradului de nrudire a formelor parentale, deosebim:
hibridarea apropiat, n care prinii aparin unor soiuri sau varieti botanice apropiate i
hibridarea ndeprtat, n care ele aparin unor specii sau chiar genuri diferite.
3. Dup numrul formelor parentale care particip la ncruciare, deosebim o
hibridare simpl (A x B), dubl (A x B) x (B x C), tripl (A x B) x C sau complex etc.
n cele ce urmeaz ne vom referi la diferite forme de hibridare, precum i la unele
forme de interes teoretic i practic.

Ereditatea n cazul unor forme particulare de reproducere

La unele plante i animale embrionul nu este rezultatul unui proces de fecundare la
care particip cei doi gamei, ci el poate lua natere din elementele nefecundate ale sacului
embrionar sau din celulele nucelei sau integumentelor, fenomen numit apomixie. Dintre
formele apomictice fac parte partenogeneza i apogamia.
Partenogeneza poate fi accidental sau permanent, haploid, cu n cromozomi sau
diploid atunci cnd celula din care ia natere embrionul este diploid. Embrionul poate s se
formeze dintr-un ovul nefecundat (ginogenez) sau dintr-o celul mascul (androgenez).
Partenogeneza duce la motenirea caracterelor numai de la printele din care a luat natere.
Starea haploid prezint unele avantaje n cercetrile de genetic deoarece genele nu au
pereche alelic, sunt hemizigote, ceea ce permite analiza lor i, totodat, prin diploidizare se
pot obine organisme perfect homozigote. Asemenea caracteristici prezint i reproducerea
apogamic cnd embrionul se formeaz dintr-o sinergid sau antipod.
40
Polispermia este fenomenul prin care o celul sexual femel este fecundat de mai
muli gemei masculi. Gameii pot fecunda celula sexual femel sau se pot resorbi n
citoplasm. Individul care se nate poart caracterele mai multor forme paterne.
Poliembrionia ia natere prin dezvoltarea unor embrioni suplimentari, fie din
celulele terminale ale proembrionului sau din sinergide i antipode n interiorul sacului
embrionar (poliembrionia de gamei), fie din celulele nucelei i integumentelor care ptrund
n sacul embrionar (poliembrionie de metamorfoz). Fenomenul este mai frecvent la citrice,
rosacee, trifoi .a. Ereditatea lor depinde att de forma matern ct i de forma patern, care
au participat la formarea zigoilor.
Xenia este fenomenul prin care nucleul spermatic care fecundeaz nucleul secundar
al sacului embrionar imprim unele caractere ale formei paterne. Un exemplu l constituie
formarea pe tiuletele de porumb a unor boabe de alt culoare dect cea a soiului matern.

Sisteme genetice pentru controlul reproducerii

Plante autogame se polenizeaz cu polen propriu, fenomen care nu afecteaz
vitalitatea plantelor i determin un grad avansat de homozigoie. Procentul de polenizare
ntre plantele autogame, n mod natural, este foarte mic. Artificial, ele pot fi hibridate prin
intervenia omului.
Plantele alogame i unele plante sau animale hermafrodite pretind o polenizare sau
fecundare strin. Modul de reproducere alogam asigur vigoarea descendenei.
La microorganisme, cum ar fi la ciuperci, contopirea hifelor haploide genetic diferite
are loc numai atunci cnd exist ntre ele diferene notate cu + i (sistem heterotalic).
Diferenele sunt condiionate de o pereche de alele ce ocup un singur locus (J.L. Brewbaker,
1964). La bacterii conjugarea nu poate s aib loc dect atunci cnd una din ele, conine un
factor de fertilitate (F
+
) i care lipsete la cea de a doua (F
-
).
La plantele superioare exist mai multe sisteme de incompatibilitate ce mpiedic
autofecundarea:
- Incompatibilitatea heteromorfic depinde de structura florii (staminele ies mult
n afar corolei sau rmn mult n interior, n timp ce, stilul se gsete la distan mare). O alt
cale const n nflorirea nesincron a inflorescenelor mascule i femele: protandrie cnd
nfloresc mai nti inflorescenele mascule (porumb) sau protoginie cnd inflorescenele
femele nfloresc primele. Alturi de aceste ci mai exist diferite complexe, cum ar fi
complexul entomofil (culoarea florii i prezena parfumului i a nectarului pentru a atrage
insectele ce transport polenul) sau complexul anemofil (prezena unor saci cu aer n polen,
pentru a putea pluti n aer).
- Incompatibilitatea genetic este dictat de o serie de gene alele care mpiedic
autofecundarea (genele autosterilitii). Acesta poate fi gametofitic sau sporofitic.
- Incompatibilitatea gametofitic - n acest caz polenul nu poate germina dac n el i
n esuturile ovarului, stilului i stigmatului se gsesc aceleai alele, de exemplu S
1
S
2
(figura
10.1.a). Cnd incompatibilitatea se refer numai la unii grunciori de polen czui pe stigmat
n timp ce alii, de pe acelai stigmat, germineaz, ea poart numele de semi-incompatibilitate.
De exemplu, polenul are constituia S
1
S
3
iar ovarul, stilul i stigmatul S
1
S
2
. n acest caz, numai
polenul S
3
germineaz i nucleul su spermatic produce fecundarea unindu-se cu S
2
(figura
10.1.b). A treia situaie o formeaz alelele compatibile care fiind heterozigote S
1
S
2
n ovar i
S
3
S
4
n polen, fecundarea este posibil (figura 10.1.c).
Sistemele genetice de incompatibilitate au fost studiate la Trifolium, Oenothera,
Prunus, Gramineae, Solanaceae .a
- Incompatibilitatea sporofitic. Acest sistem este mai puin rspndit la plante, la
circa 1/3 din ele. i n acest caz este implicat locusul S cu o serie de alele. Comportarea
polenului nu depinde de constituia genetic a polenului ci de genotipul diploid al plantei care
l produce. ntre alelele din polen i stil exist relaii de dominan i recesivitate. De
41
exemplu, dac n polen S
1
manifest dominan fa de S
2
, polenul va avea reacia alelei S
1
i
va fi capabil s germineze i s strbat stilul cu reacia S
2
. Acest sistem a fost studiat la tutun,
varz .a.












Reprezentarea grafic a reaciei autoincompatibilitate-compatibilitate
n sistemul gametofitic pentru controlul polenizrii:
a-polenizare autoincompatibil; b-polenizare semicompatibil
c-polenizare compatibil

Sistemele de alele ale incompatibilitii prezint importan pentru crearea unor noi
genotipuri. La plantele alogame, ce se reproduc prin semine nu se urmrete obinerea unor
forme autocompatibile deoarece consangvinizarea reduce vigoarea plantelor. La speciile
pomicole, care se nmulesc vegetativ se urmrete crearea unor forme autocompatibile pentru
a nu mai fi nevoie s introducem n apropiere alte soiuri bune polenizatoare. Obinerea
formelor autocompatibile se poate realiza prin mutaii n locusul S, deleia (ndeprtarea)
acestui locus i poliploidie (multiplicarea garniturilor de cromozomi).

Vigoarea hibrizilor (heterozis)

Fenomenul vigorii hibride a fost observat i descris nc din secolul al XVIII-lea
i prima jumtate a secolului al XIX-lea.
Iosef Gottlieb Klreuter (1763) a executat printre primele hibridri artificiale la
plante. ncrucind diferite specii de Nicotiana semnaleaz vigoarea sporit a descendenilor
fa de formele parentale.
Andrew Knight (1787) constat c hibrizii obinui la diferite specii pomicole, soiuri
de mazre i cartof, se caracterizeaz prin vigoare, care ntrece pe aceea a prinilor i c ea
scade treptat n generaiile urmtoare.
Fenomenul de vigoare la hibrizi a fost sesizat i la animale. Se cunoate din practic
c hibrizii obinui ntre diferite rase se deosebesc prin unele caliti fa de prini. Darwin
arat c animalele obinute prin ncruciare sunt mai viguroase, au talie i greutate mai mari.
n perioada 19081914 cercettorii americani G. H. Shull, E. M. East i H. K. Hayes
ntreprind studii asupra consangvinizrii (autopolenizrii) i hibridrii la porumb i elaboreaz
metodele de consangvinizare i hibridare la plantele agricole. Termenul de heterozis a fost
introdus de G. H. Shull n 1914, nelegnd prin el dezvoltarea luxuriant a hibrizilor din F
1
.
Heterozisul se ntlnete att la plante autogame ct i la plantele alogame. La
plantele alogame vigoarea este mult mai puternic dect la cele autogame. Acest fenomen
difer i de la plant la plant i este mai pronunat la hibridrile n interiorul speciei dect
ntre specii sau genuri. Exist ns i excepii, cum ar fi de exemplu hibrizii ntre genurile
Raphanus Brassica, Triticum Secale sau speciile Triticum dicoccum Triticum aestivum.
Dup clasificarea fcut de A. Gustafsson (1951) se deosebesc trei categorii de
heterozis:


42
a) heterozisul somatic, care se refer la creterea evident a prilor vegetative ale
plantelor;
b) heterozisul reproductiv, ce determin o dezvoltare sporit a organelor de
reproducere, a fructelor i a seminelor;
c) heterozisul adaptiv, caracterizat prin vitalitate mai mare i rezisten mai bun la
condiiile nefavorabile de via. Pentru producie, importan are aa numitul transheterozis,
care duce la un excedent de producie.
Fenomenul de heterozis prezint o deosebit importan att pentru cercetrile de
genetic ct i pentru lucrrile de ameliorare la plante sau animale. O preocupare important a
geneticii este explicarea mecanismelor intime care stau la baza lui, n scopul fixrii
heterozisului din F
1
, pentru generaiile urmtoare.

Teorii care explic fenomenul heterozis

Teoria dominanei. n anul 1910, n perioada de nflorire a mendelismului, A.B.
Bruce emite o teorie asupra naturii heterozisului, bazat pe calculele matematice, Teoria
factorilor dominani.
Conform acestei teorii, numrul total de caractere dominante, cu aciuni favorabile, n
populaiile hibride este mai mare dect la formele parentale. Teoria demonstreaz existena
unei corelaii pozitive, ntre numrul de factori dominani din genotip i gradul de manifestare
a heterozisului fenotipic. Dac de exemplu, cei doi prini ar conine cte trei perechi de
factori dominani, AABBCCddeeff x aabbccDDEEFF, hibridul rezultat va deine ase loci cu
gene dominante AaBbCcDdEeFf.
Ipoteza lui Bruce a fost mprtit i de ali cercettori.
Genele ce acioneaz favorabil sub influena seleciei naturale devin dominante, iar
genele nefavorabile, recesive. Prin autofecundare, genele recesive trec n stare homozigot.
Prin ncruciare ele devin heterozigote i inhibate de alelele dominante favorabile.
Aceast ipotez explic consecinele nefavorabile ale consangvinizrii i restabilirea
vigorii prin ncruciare, ns nu i efectul heterozis n general. Nu toate nsuirile recesive sunt
duntoare. Uneori se gsesc i forme homozigote dominante, inferioare prinilor. Aceast
teorie nu poate explica fenomenul de heterozis n cazul poligeniei (polimeriei), care se
caracterizeaz prin lipsa de dominan.
Teoria heterozigoiei. G. H. Shull (1909 1914) elaboreaz o teorie a heterozisului,
care se bazeaz pe corelaia pozitiv dintre vigoarea hibridului i gradul de difereniere ntre
gameii ce iau parte la fecundare. Diferenierea gameilor ar fi un stimulent pentru o cretere
mai intens. Din aceast cauz, teoria lui a mai fost numit ipoteza stimulrii fiziologice.
Ideile lui Shull au fost dezvoltate n lucrrile altor cercettori:
E. M. East i H. K. Hayes (1912) au admis prerea lui Shull. Ei artau c vigoarea
hibrizilor F
1
, se datoreaz revenirii organismelor la starea heterozigot. Prin ncruciarea
formelor homozigote se obine hibridul F
1
n care se acumuleaz gene dominante ce
anihileaz aciunea duntoare a alelelor recesive. n F
2
vigoarea scade n urma segregrii
genelor.
ncruciarea creeaz heterozigoia iar consangvinizarea duce la homozigoie i
descreterea vitalitii.
Sunt ns i cazuri cnd n F
1
nu se manifest fenomenul de heterozis sau micorarea
heterozigoiei nu este nsoit totdeauna de scderea productivitii. Hibrizii simpli pot depi
uneori hibrizii compleci, dei sunt mai puini heterozigoi. S-a mai constatat c, la autogame,
de foarte multe ori, hibrizii nu depesc formele parentale, homozigote. Toate aceste
fenomene nu pot fi explicate cu aceast teorie.
Urmtoarea etap a dezvoltrii ideilor lui Shull, East i Hayes a fost apariia lucrrii
lui Castle (1926), care susine c ncruciarea duce la creterea metabolismului, iar
heterozisul, ar fi urmarea diferenierii chimice din gamei.
43
Teoria nlnuirii (factorilor dominani), a fost elaborat de D.F. Jones, urmare a
dezvoltrii teoriei dominanei. Dup aceast teorie, heterozisul s-ar datora nlnuirii genelor
dominante (grupe de gene nlnuite), localizate pe diferii cromozomi.
Este ns greu de admis rmnerea n stare cuplat a factorilor dominani, care
presupune un schimb foarte mare de gene. De asemenea, deoarece genele dominante sunt
nlnuite cu cele recesive, nefavorabile, este imposibil eliminarea acestora fr ca, n acelai
timp, s nu se elimine i genele dominante.
Teoria alelomorfismului multiplu. A fost elaborat de E. M. East n anul 1936.
Aceast teorie susine c heterozisul s-ar datora influenei unor alele multiple ce determin
funcii fiziologice favorabile. O alel normal A
1
poate da natere prin mutaii alelelor A
2
,

A
3
,

A
4
Cu ct o asemenea alel este mai ndeprtat de alela normal, cu att i efectul ei ar fi
mai mare.
Dar i aceast teorie prezint dificultatea c nu poate admite aciunea genelor
normale i neag dominana i recesivitatea.
Teoria supradominanei a fost elaborat de G. H. Shull (1945 1946). Aceast
teorie este o dezvoltare a teoriei privind efectul stimulator al heterozigoiei. Din cauza aceasta,
a mai fost numit i teoria heterozigoiei propriu-zise. Autorul afirm c, n unele combinaii,
interaciunea ntre membrii aceleai perechi de alele poate duce la faptul c heterozigotul Aa
va depi ca vigoare ambii homozigoi AA i aa. Se presupune c amndou alelele
heterozigote execut funciuni ntructva diferite, completndu-se una pe alta. Heterozigoia
este determinat de o singur pereche de alele spre deosebire de vechea teorie a heterozigoiei
(a stimulrii de azi) unde heterozigoia este determinat de mai multe alele.
Teoria heterozigoiei structurale a fost elaborat de Dobzhansky. Autorul susine
c aciunea alelelor dominante favorabile asupra alelelor recesive nefavorabile poate fi
nlocuit de inversiuni. Drept argument se aduce existena a 70,3% de indivizi ce prezint
inversii heterozigote la Drosophila tropicalis, ce triete n America Central. Efectul de
heterozis produs de aceast restructurare a fost denumit euheterozis balansat n sensul c
echilibreaz polimorfismul biologic al populaiei.
Teoria homoplasmiei este susinut de N.H. Nilson (1937). Depresiunea la linii
consangvinizate s-ar datora omogenitii citoplasmei. Prin ncruciare se produce o
difereniere biochimic i funcional a ei. Aceast teorie nu are adepi, deoarece este greu de
susinut c numai citoplasma rspunde de fenomenul de heterozis.
Teoria echilibrului genetic. Ipoteza a fost elaborat de C. Bridges (1922), K.
Mather (1943) i N. V. Turbin (1961), ncercnd o sintez a celorlalte teorii.
Prin echilibru genetic se nelege complexitatea de legturi ntre factori ereditari i
mediu. Dezvoltarea fiecrui caracter ar fi determinat de influena corelativ asupra lui a
numeroi factori cu aciune diferit: unii acioneaz n mod stimulator, alii n mod inhibitor.
Caracterul apare ca o rezultant a unor tendine opuse.
Dup aceast ipotez, dezvoltarea caracterelor ar fi deci rezultatele echilibrului
genetic realizat. n cadrul acestei ipoteze diferite forme de interaciune a factorilor ereditari
menionai n ipotezele artate mai nainte sunt termenii componeni ai acestui echilibru.
Realizarea echilibrului genetic difer la plantele autogame de cele alogame. n cadrul
plantelor autogame echilibrul se stabilete n cadrul fiecrui sortiment haploid de cromozomi.
Gameii sunt echilibrai, fapt care asigur vitalitatea la descendeni. La speciile alogame
echilibrul se stabilete n relaiile dintre organisme, a genotipurilor diferite. La aceste plante,
n cazul consangvinizrii, descendena nu menine echilibrul genetic, iar vitalitatea i
prolificitatea scade. Heterozisul este un fenomen opus consangvinizrii i el apare la
organisme ca rezultat al unui echilibru genotipic optim ntre frecvenele alelelor homo i
heterozigote.
Cercetarea fenomenului de heterozis n cadrul concepiei de echilibru genetic nu
exclude posibilitatea studierii n mod izolat a diferitelor tipuri de interaciuni a factorilor
ereditari ce constituie componeni ai echilibrului genetic i care determin heterozisul.
44
n afar de aceste componente ale bilanului genetic ce determin mrimea
heterozisului, trebuie adugat i interaciunea dintre nucleu i citoplasm i ntre gene i
mediu.
Pentru a nelege cum acioneaz diferitele cauze care duc la dezvoltarea caracterelor
concrete ce manifest heterozisul este nevoie clarificarea componentele echilibrului genetic
de care depinde mrimea acestor caractere.
Teoria mitocondrial. A fost formulat de D. F. Jones (1952) i J. B. Hanson i
colab. (1960), (dup Butnaru Gallia, 1985). Cercetrile efectuate la porumb au evideniat o
corelare pozitiv ntre intensitatea heterozisului i activitatea mitocondrial. Aceste corelaii
au fost sesizate i la alte plante: sorg, gru, secar, triticale, mazre, bumbac etc.
Mitocondriile sunt implicate n meninerea homeostaziei intracelulare, n felul acesta
explicndu-se marea stabilitate fenotipic a hibrizilor, n condiii foarte diferite de mediu. Nu
se cunoate prea bine care este evoluia populaiilor mixte de mitocondrii, n celulele
organismelor hibride. Micorarea diversitii mitocondriilor, dup prerea specialitilor, ar
explica declinul multor soiuri obinute prin hibridare dup un anumit numr de generaii.
Dac aruncm o privire de ansamblu teoriilor expuse putem, desprinde urmtoarele
concluzii:
- heterozisul este un fenomen complex, la realizarea lui contribuind, n primul rnd
genotipul organismului, iar n al doilea rnd, condiiile de via;
- diferitele teorii explic numai unele laturi ale fenomenului de heterozis fr s
descopere toate cauzele;
- merit s ne oprim atenia, n primul rnd, asupra teoriei stimulrii (heterozigoiei)
i a teoriei dominanei, teorii care, de fapt, se pot completa una pe alta; cercetri multiple,
confirm prin date, cele susinute de aceste teorii.
Nu trebuie neglijate nici celelalte teorii care explic n parte sau n cazuri speciale
manifestarea heterozisului.
Importana practic a heterozisului impune o intensificare a cercetrilor teoretice i
practice n acest domeniu.

Manifestarea heterozisului

Sesizarea fenomenului heterozis a plecat de la constatarea c, n majoritatea cazurilor
indivizii obinui din ncruciri, se caracterizau printr-o vigoare sporit fa de prinii din
care au provenit. Faptul c aceast vigoare este nsoit de o cretere a capacitii de producie
la plantele agricole sau animalele domestice, a fcut ca fenomenul s fie amplu cercetat, att
n ceea ce privete cauzele lui ct i a efectelor ce le produce.
Din cercetrile de morfofiziologie s-a desprins concluzia c hibrizii se deosebesc de
formele parentale prin urmtoarele nsuiri: au embrionii de dimensiuni mai mari; au o
cretere a organelor vegetative mult mai rapid; posed o activitate mai intens a esuturilor
meristematice; au o fotosintez mai intens; posibiliti mai bune de a absorbi substanele
nutritive; capacitate mai mare de a sintetiza stimulatori de cretere.
Manifestarea vigorii hibride depinde de ereditatea celor doi prini: este mai
pronunat la hibrizii intraspecifici, la hibrizii obinui din linii consangvinizate (homozigote),
dect la hibrizii dintre soiuri sau rase.
Heterozisul se manifest i la animale, folosindu-se n producie unii hibrizi, fie ntre
rase, fie ntre linii consangvinizate (fluturele de mtase, psri, porci .a.). Produii dovedesc
o mai mare capacitate de producie (lapte, carne, ou etc.).
Fenomenul de heterozis mbrac manifestri foarte variate, el prezint o importan
covritoare pentru producie, iar aspectele privind tehnica producerii lui vor fi tratate n
cursul de ameliorarea plantelor.


45
Consangvinizarea i folosirea ei n crearea liniilor
destinate ncrucirii

Organismele alogame, fie monoice, dioice sau hermafrodite se reproduc n mod
natural prin fecundare strin. Artificial, noi putem fora aceast categorie de organisme s se
autofecundeze prin polenizare cu polen propriu, fenomen numit consangvinizare. La animale,
consangvinizarea are loc prin ncruciarea ntre indivizi cu grad de rudenie apropiat.
Consangvinizarea nu este tot una cu autofecundarea de la plantele autogame, unde constituie
un mod normal de reproducere.
Asupra plantelor alogame, consangvinizarea are urmtoarele efecte:
1. Scderea vitalitii organismelor. n urma consangvinizrii, plantele alogame i
micoreaz capacitatea de cretere. Dimensiunile lor se micoreaz att n ceea ce privete
nlimea, lungimea i limea frunzelor, diametrul tulpinii, ct i mrimea i greutatea
fructelor; de asemenea, prezint i o fertilitate sczut. La porumb, majoritatea liniilor
consangvinizate dau o producie cu mult sub cea a soiurilor din care au fost extrase.
Aceast depresiune biologic se manifest foarte intens n prima generaie
consangvin, pentru ca n generaiile urmtoare s scad i s se opreasc la o anumit limit
de stabilitate numit i minimum de consangvinizare.
Nu toate plantele rspund n acelai mod la scderea vigorii n procesul de
consangvinizare; fa de porumb la care este foarte accentuat, la secar, lucern, floarea-
soarelui este numai accentuat, iar la dovleac i mai puin.
Depresiunea biologic i gsete explicaia n faptul c, n populaia supus
consangvinizrii crete procentul de genotipuri homozigote n defavoarea celor heterozigote.
n stare homozigot, genele nefavorabile organismului i evideniaz aciunea. Aceste urmri
pot fi explicate ntr-o oarecare msur de teoria dominanei sau supradominanei.
Gradul de homozigotare a indivizilor crete odat cu repetarea consangvinizrii la
descendeni i el se poate afla calculndu-se coeficientul de consangvinizare (Cn);
Cn =
m
n
2
1
n
2

, n care:
n reprezint generaiile de consangvinizare, iar m numrul perechilor de alele care se
homozigoteaz.











Reducerea heterozigoiei i creterea homozigoiei
prin efectul consangvinizrii










46



Efectul consangvinizrii asupra heterozigoiei i homozigoiei
n funcie de numrul perechilor de alele n diferite generaii de consangvinizare

2. Desfacerea populaiei n biotipuri. Plantele alogame au o structur ereditar
heterozigot. Caracterele i nsuirile lor se gsesc n diferite raporturi, de dominan i
recesivitate. Multe din defecte sau caliti nu se pot manifesta prezentndu-se sub forma
recesiv. Prin consangvinizare, acestea devin homozigote i se manifest producnd o
desfacere a populaiei n biotipurile (liniile) componente. Dintre nsuirile recesive, ce se
manifest fenotipic, unele constituie defecte, altele din contra, sunt valoroase pentru practic
(unii indivizi posed rezisten la boli, la ger, precocitate, un coninut ridicat n protein,
grsimi .a). n afar de caracterele homozigote recesive favorabile sau defavorabile apar i
caractere homozigote dominante pozitive, care se pot folosi cu succes n ameliorare.
3. Scderea variabilitii. n prima generaie consangvin variabilitatea formelor
aprute este foarte mare. Reproduse prin autofecundare, fiecare form n parte, mai multe
generaii, variabilitatea n cadrul descendenelor scade pn se ajunge la linii consangvinizate,
care nu mai segreg, fiind foarte uniforme i stabile. Acestea sunt liniile homozigote. La
porumb se obin astfel de linii n generaiile 7 8 de consangvinizare. Nu se poate afirma ns
c s-a ajuns la o homozigoie absolut.
Liniile consangvinizate obinute, sunt difereniate genetic i destul de difereniate din
punct de vedere fenotipic. Ele nu se utilizeaz ca atare deoarece dau producii mici. Prin
ncruciarea lor se obin ns hibrizi, foarte valoroi, cu producii mari fa de formele iniiale
din care au fost extrase. La porumb, astfel de hibrizi, aduc sporuri de 50 70%.

Hibridarea sexuat indeprtat

Hibridarea ndeprtat are loc ntre specii sau chiar genuri diferite. Din cauza unor
dificulti care nsoesc aceast form de hibridare, folosirea ei este mult mai restrns fa de
hibridarea n interiorul speciei. Mai poart numele de hibridare interspecific.
Hibridarea sexuat ndeprtat se cunoate, de sute de ani, fie ca fenomen natural, fie
ca metod practic folosit de om pentru obinerea de forme noi de plante i animale.
J. Klreuter, la nceputul sec. XVIII, vorbea despre astfel de hibrizi la plante i i
numea catri vegetali dup denumirea noiunii de catr, hibrid animal obinut pe cale
artificial nainte de a se obine astfel de hibrizi la plante.
Hibridarea ndeprtat este i un criteriu pentru determinarea speciilor. n cazul cnd
nu se pot obine indivizi n urma unei asemenea hibridri sau, dei se obin sunt sterili, se
afirm c cei doi prini care au luat parte la hibridare aparin unor specii diferite. Nu trebuie
ns s considerm c hibridarea ndeprtat este singurul criteriu pentru determinarea
speciilor.
Ch. Darwin a observat c n obinerea hibrizilor ndeprtai se ntmpin greuti i a
cutat s analizeze amnunit unele condiii de care depinde uurina ncrucirii ntre formele
ndeprtate. El descrie urmtoarele situaii: - apropierea sistematic este ntr-adevr un factor
determinant n reuita ncrucirii, dar nu singurul; - sunt cazuri cnd dou varieti
aparinnd aceleai specii nu se pot ncrucia i din contra, n alte cazuri cnd dou specii
diferite, se pot ncrucia ntre ele. n cazul cnd nu se pot ncrucia, Darwin arat c:
fecundarea nu poate avea loc n cazurile cnd tuburile polinice nu pot ajunge pn la ovul din
cauza stilului prea lung; tuburile polinice nu pot strbate stigmatul de la plantele altei specii;
gametul mascul ajunge la oosfer, dar dezvoltarea embrionului nu are loc; fecundarea poate
avea loc, embrionul ncepe s se formeze, dar piere n scurt timp.
47
Observaiile lui Darwin sunt juste, dar nivelul cunotinelor din vremea lui nu i-au
permis s cerceteze i din punct de vedere genetic cauzele ce ngreuiaz realizarea hibrizilor
interspecifici. Aceasta a fost posibil mai trziu, odat cu dezvoltarea geneticii.

Obinerea i comportarea primei generaii hibride

n general, hibrizii interspecifici se obin cu greutate, iar reuita depinde n mare
msur i de speciile pe care le folosim. Exist totui anumite specii de plante care,
ncruciate, posed facultatea de a produce hibrizi fertili. n schimb, la animale, aplicarea
hibridrii ndeprtate ntmpin mai multe dificulti.
Delimitarea speciilor cu diferenieri de la una la alta, att din punct de vedere
genetic, ct i fenotipic a determinat izolarea lor sistematic i genetic i a creat dificulti la
ncruciarea dintre ele.
Aceste dificulti sunt datorate incompatibilitii de ordin genetic sau morfologic,
privind structura florii, a incompatibilitii dintre embrion i endosperm i perturbri n
formarea celulelor sexuate.
La animale, atunci cnd se obin hibrizi, defectele se manifest de obicei la unul din
sexe, n special la sexul heterogametic. La ncruciarea dintre femele de Drosophila
pseudoobscura cu masculi de Drosophila miranda, n F
1
, se obin femele sterile. n cazul cnd
se inverseaz prini, n F
2
se obin ambele sexe, dar masculii sunt anormali. La ncruciarea
dintre o femel de Bos taurus i un mascul de Bizon americanus, numai hibrizii femeli ajung
la maturitate.
Mecanismul genetic care duce la dezvoltarea numai a indivizilor de un singur sex
este mai uor de explicat dac ne gndim la diferenele de ordin genetic ce se ntlnesc la cele
dou sexe. Dei genotipul celor dou specii conine genele corespunztoare, dispoziia acestor
gene poate fi pe cromozomi diferii: la una din specii ele pot s fie situate pe autozomi, la
cealalt pe cromozomii sexuali. n afar de aceasta se pot ivi i diferene n structura
cromozomilor autozomi omologi sau ai sexului.
Cnd se obin totui hibrizi interspecifici, aspectul lor fenotipic este n general
intermediar ntre cei doi prini i numai n unele cazuri se manifest o dominan din partea
unuia din prini.
Fenomenul obinuit de vigoare, constatat la hibrizii intraspecifici caracterizeaz
uneori i hibrizii interspecifici (hibridul ntre Raphanus sativum x Brassica oleracea sau
hibridul Equus caballus x Equus asinus catrul). Adesea, o anumit grupare a genelor pe
cromozomii omologi favorizeaz aciunea genelor letale sau semiletale i atunci hibrizii sunt
letali, sau prezint fenomene de debilitate.
Unii hibrizi interspecifici, prezint i anomalii sexuale (intersexuali). Acetia, au
aspectul exterior al unui sex dar posed organe sexuale, ale celuilalt sex. De obicei ei sunt
sterili.
Fenotipul hibrizilor interspecifici depinde i de modul n care se folosesc ca mam
sau ca tat, cele dou specii, la care exist diferenele morfologice tranante ntre femele i
masculi. Catrul are conformaia foarte apropiat de cea a mamei, Equus caballus, n timp ce
bardoul (hibridul reciproc) are conformaia mamei de Equus asinus, Equus caballus fiind n
acest caz tat. Este cazul influenei citoplasmei materne, a fenomenului de matroclinie.
O caracteristic principal, destul de frecvent a hibrizilor interspecifici este
sterilitatea lor. Ea se manifest de obicei la sexul heterogametic, cu diferite intensiti i se
mparte n mai multe tipuri:
- gonadele, n cazul animalelor sau florile plantelor nu se dezvolt sau avorteaz, la
hibrid. Aceast situaie este mai frecvent la animale;
- dezvoltarea gonadelor i a florilor este normal dar, perturbrile ncep odat cu
meioza. Cele dou garnituri de cromozomi difer prin structur sau prin numr. Aceste
48
anomalii fac ca meioza s nu se poat desfura normal sau nceteaz ntr-un stadiu timpuriu,
iar n cazul n care se formeaz gamei, ei sunt improprii pentru fecundare.
Cnd ambii prini dein genomuri omoloage, dar difer prin numrul de cromozomi,
conjugarea cromozomilor n meioz decurge normal, dar n loc de bivaleni se formeaz
polivaleni. n alte cazuri, prinii dein o parte din genomuri omoloage, dar restul sunt
omoloage numai parial. Cromozomii parial omologi rmn ca univaleni. n acest caz,
celulele sexuale sunt sterile. Cnd prinii dein genomuri neomoloage, cromozomii nu fac
sinaps, repartiia la cei doi poli ai celulei este neregulat i ca atare, apar gamei sterili.
Pentru nlturarea sterilitii pot fi folosite mai multe metode: retroncruciarea individului F
1
,
cu unul din prini; multiplicarea numrului de cromozomi prin tratamente cu colchicin etc.
Aceste metode asigur genomuri care dau posibilitatea de conjugare a cromozomilor
n meioz.
Dificultile de obinere a hibrizilor ndeprtai, pot fi de ordin cantitativ i calitativ.
Diferenele cantitative se refer la numrul de cromozomi ai celor doi prini.
Atunci cnd ele depind de germinarea polenului i creterea tubului polinic, hibridarea
decurge mai bine, cnd forma matern are un numr mai mare de cromozomi dect forma
patern (de exemplu ntre speciile genului Datura, Galeopsis, Nicotiana). La o alt categorie
de plante, creterea tubului polinic decurge mai bine cnd forma matern are un numr mai
mic de cromozomi dect forma patern (de exemplu ntre speciile genului Helianthus,
Triticum, Rosa). A treia categorie o reprezint plantele indiferente privind raportul
cromozomic (de exemplu, ntre speciile genului Brassica).
Perturbri pot s apar i odat cu formarea seminelor. La plantele angiosperme
diploide, dezvoltarea normal a embrionului are loc cnd n embrion exist 2n cromozomi, n
endosperm 3n cromozomi, iar n ovar 2n cromozomi. Cnd raportul acesta se schimb din
cauza numrului modificat de cromozomi, perturbrile apar mai nti n endosperm, n care
are loc o sistare a fluxului de hran care duce la sufocarea lui. Este vorba de o sterilitate
somatoplastic care duce la moartea embrionului. Acest fenomen poate fi evitat dac n
primele stadii de dezvoltare a embrionilor ei sunt detaai i cultivai pe medii nutritive.
ntr-un stadiu mai trziu, perturbrile pot aprea n procesul de dezvoltare a
seminelor, afectnd capacitatea lor de germinare.
Diferenele calitative a genomurilor celor doi prini constituie cazuri mai frecvente.
Ele se pot produce n cazul unui numr egal de cromozomi i genomuri omoloage (A x A sau
AB x AB) sau un numr diferit de cromozomi i genomuri parial omoloage (A x AB). n
sfrit, se mai pot ntlni situaii n care numrul de cromozomi a formelor parentale s fie
egal, dar genomurile neomoloage (A x B).
Toate aceste diferene de ordin cantitativ i calitativ dintre formele parentale, produc
perturbri n procesul de fecundare sau de formare a seminelor, de dezvoltare sau de formare
a celulelor sexuale.
n meioz, n asemenea cazuri, conjugarea i segregarea cromozomilor nu decurge
normal i nu se formeaz celule sexuale sau acestea sunt sterile.

Comportarea celei de a doua generaii hibride

Se poate obine a doua generaie la hibridarea ndeprtat numai atunci cnd hibridul
F
1
este cel puin parial fertil. Cnd numai unul din sexe este steril, cel fertil poate fi ncruciat
cu printele de sex opus.
Descendena hibrizilor ndeprtai se caracterizeaz printr-o puternic segregare, care
n general nu se ncadreaz n normele mendeliene. Pot s apar forme asemntoare tatlui ,
mamei, intermediare sau aberante. n unele cazuri, n urma segregrii toi indivizii seamn
numai cu unul din prini.
n generaiile urmtoare, la hibrizii parial fertili se mrete procentul de fertilitate.
Prin repetarea unui backcross se observ o revenire evident la formele parentale.
49

Rolul hibridrii ndeprtate n evoluia speciilor

Hibridarea ndeprtat prezint importan, pentru apariia de specii noi de plante i
posibil, i de animale inferioare.
Se observ n natur, existena unor forme ce au caractere comune pentru dou
genuri sau specii diferite, cum este hibridul dintre Sorbus sibirica i Cotoneaster
melanocarpa. Acesta a motenit gustul i coloraia fructelor, forma frunzelor, culoarea
argintie a frunzelor, forma mugurilor de la Sorbus sibirica, iar structura fructului, forma
inflorescenei, caracterul pubescenei, de la Cotoneaster melanocarpa.
Ca urmare a hibridrii ndeprtate, apar uneori organisme amfidiploide (ce
nsumeaz numrul de cromozomi somatici ai prinilor), cu genotipuri echilibrate, constante
i care prin ncruciare pot reproduce tipul din care fac parte. Dac noua form se dovedete
adaptat ea se rspndete. O condiie pentru meninerea ei o constituie izolarea reproductiv
de speciile nrudite.
Orice individ obinut prin hibridarea ndeprtat este nceputul unei specii noi. Pe de
o parte, trebuie s inem seama de unele trsturi eseniale ce caracterizeaz specia autentic:
specificul morfologic, lipsa indivizilor intermediari speciilor parentale, capacitatea de a se
reproduce, fertilitatea deplin n cazul ncrucirii i izolarea reproductiv total de alte specii.
Pe de alt parte, acestor forme le lipsesc unele trsturi eseniale ce sunt caracteristice
speciilor naturale: arealul geografic, locul ocupat n relaiile biocenotice, numrul de indivizi
.a. Aa c, asemenea hibrizi nu pot fi considerai specii noi, ci mai degrab forme
specifice. O specie nou se formeaz ntr-un proces ndelungat, pe baza seleciei naturale.
Prin metoda hibridrii ndeprtate au fost sintetizate multe forme, foarte
asemntoare cu speciile rspndite n natur. Mntzing (1930) a realizat prin hibridri
ndeprtate sinteza unei forme asemntoare speciei Galeopsis tetrahit (2n = 32 cromozomi).
A ncruciat Galeopsis pubescens cu Galeopsis speciosa. Hibridul, ncruciat cu una din
formele parentale, Galeopsis pubescens, era greu de deosebit de Galeopsis tetrahit.
La plante, posibilitatea de o obine hibrizi ndeprtai difer de la un gen la altul.
Exist genuri ale cror specii se hibrideaz destul de uor (Dianthus, Triticum, Prunus, Pirus
etc.) dar i genuri a cror specii nu se hibrideaz, chiar dac sunt destul de nrudite (Liliacee,
Umbelifere, Leguminoase etc.).
Exist i genuri care se hibrideaz cu destul uurin, cum ar fi: Triticum x Secale,
Triticum x Aegilops, Raphanus x Brassica etc.
Studiul citogenetic al hibrizilor ndeprtai, ofer posibilitatea stabilirii cauzelor ce
determin sterilitatea total sau parial a acestora.
n ameliorarea plantelor, hibridrile ndeprtate, chiar dac necesit condiii de lucru
deosebite, s-au extins, deoarece ofer posibilitatea obinerii de hibrizi cu cromozomi de
adiie (Triticale) sau cu cromozomi de substituie, aceste recombinri genetice, permind o
diversificare mai mare a materialului biologic.

Noiuni de inginerie genetic

Aprofundarea cunotinelor de genetic molecular, cunoaterea structurii fine a
genelor i a cromozomilor, a deschis noi posibiliti de izolare i sintez a genelor, de transfer
de la o specie la alta, uneori chiar ndeprtate filogenetic, de cultur in vitro a celulelor i de
hibridare a acestora.
Ingineria genetic poate fi definit ca un ansamblu de metode i tehnici moderne
prin care este posibil manipularea materialului genetic la nivel celular i molecular.
La nivel celular, ingineria genetic a nsemnat extinderea hibridrilor celulare n
afara granielor determinate de specie, obinndu-se hibrizi celulari ntre diferite specii de
procariote i eucariote, ntre celule vegetale i animale.
50
La nivel molecular, ingineria genetic a nsemnat izolarea genei, sinteza artificial a
genei, realizarea ADN recombinat i transferul de gene de la o specie la alta. n sens strict,
ingineria genetic const n crearea de ADN hibrid sau ADN recombinat, derivat de la dou
specii diferite, integrarea i clonarea acestuia ntr-o celul bacterian, unde poate funciona
normal, realizndu-se n felul acesta transferul de gene, nu pe cale sexuat, ci pe baza ADN
recombinat. n felul acesta se deschide calea transformrii dirijate a ereditii organismelor la
nivel molecular, acionndu-se direct asupra bazei moleculare a ereditii.
n sens mai larg, tot ingineriei genetice i aparin i tehnicile de modificare a
structurii i numrului cromozomilor prin mutaii, putndu-se transfera fie cromozomi ntregi
de la o specie la alta, fie segmente de cromozomi, domeniu al ingineriei genetice denumit
chirurgie cromozomic. n acest domeniu, de remarcat sunt rezultatele obinute de J. G.
O'Mara (1940), care a reuit s combine caracterele a dou specii prin transferul unuia sau a
ctorva cromozomi de la diferite specii. S-a reuit transferul unor cromozomi n cadrul unor
hibridri intergenerice, gru x secar sau gru x pir, transferndu-se gene ce confer rezistena
la rugina galben i neagr de la secar i respectiv pir, la gru.
Din multitudinea de aspecte ale ingineriei genetice, vor fi prezentate aspecte privind
sinteza artificial a genei, hibridarea celular la animale i plante, haploidia prin androgenez,
importana cercetrilor de inginerie genetic.

Sinteza artificial a genei
Sinteza artificial a genelor a fost precedat de o alt mare realizare i anume sinteza
artificial a ADN de la virusul x174 de ctre Arthur Kornberg, laureat al premiului Nobel
H. G. Khorana, genetician american de origine indian, mpreun cu o echip de
cercettori din Massachusetts, a realizat n 1970, prima sintez artificial a unei gene i anume
gena ce determin sinteza unui ARN
s
ce transport aminoacidul alanina la nivelul
ribozomilor, la Saccharomyces cerevisiae. Aceast gen este destul de mic, format din 77
nucleotide, iar tehnica folosit a fost urmtoarea: s-au sintetizat pe cale chimic, segmente de
ADN formate din 10-14 nucleotide. Cu ajutorul enzimei ligaza s-au asamblat aceste segmente
rezultnd segmente bicatenare mai lungi. S-au obinut 3 segmente mai lungi cu ajutorul
enzimei polinucleotid-kinaza, care au fost legate ntre ele rezultnd segmentul de ADN,
corespunztor genei ARN
s
ce transport aminoacidul alanina la ribozomi. Aceast gen nu era
funcional biologic.
n anul 1973, geneticianul D. Agarwal, a sintetizat artificial o gen de la bacteria
E.coli, ce determin sinteza ARN
s
ce transport aminoacidul tirozina la ribozomi. Aceast
gen s-a dovedit a fi funcional biologic. n anul 1975 geneticianul A. Efstradiatis i echipa
sa de la Universitatea Harvard, au sintetizat artificial genele ce intervin n sinteza
hemoglobinei la iepure, fiind prima sintez artificial a unei gene de la mamifere. n anul
1976 H. Kster, a sintetizat gena pentru hormonul angiotensina, care regleaz tensiunea
arterial i contracia muscular la om, fiind prima gen uman sintetizat artificial.
n ultimii ani s-au sintetizat artificial genele ce determin sinteza hormonului de
cretere, somatostatina i a insulinei.
n prezent tehnica de sintez artificial a genei utilizeaz ARN
m
, care cu ajutorul
enzimei reverstranscriptaza, determin sinteza de ADN complementar i deci de gene.
Sinteza artificial a genelor prezint o importan deosebit. Dac genele sunt
inserate n virusuri sau plasmide, acestea le pot transfera n celulele bacteriene. Celulele
bacteriene vor putea sintetiza o serie de enzime, hormoni, antibiotice i, deoarece bacteriile se
pot crete uor, va fi o cale foarte eficient de producere a acestor substane. Genele
sintetizate artificial vor putea fi integrate n cromozomii celulelor, n locul genelor cu defecte,
combtndu-se astfel, cauza unor maladii ereditare i nu efectul lor.


51
Izolarea genei
A fost efectuat pentru prima dat de J. Beckwith de la Universitatea Harvard din
SUA, n anul 1969. Izolarea primei gene s-a realizat la bacteria E.coli, cu ajutorul
fenomenelor de transducie specializat i sex-ducie. Mai nti s-a izolat ntregul operon lac.
Genele care constituie acest operon sunt: genele structurale (z, a i y), gena reglatoare (i),
promotorul (p) i operatorul (o).
Prin cartarea acestui operon s-a stabilit c ordinea acestor gene n operon este: a y z o
p i.
Etapele mai importante ale izolrii genei lac sunt redate n fig.4.1. n prima etap
prin transducie specializat fagul s-a detaat de cromozomul bacteriei alturi de gena gal,
iar alturi de acesta s-a ataat un factor de fertilitate F ce coninea gene ale operonului lac. n
etapa a doua, operonul lac a fost inserat n cromozomul bacteriei, n mijlocul genei gal, iar
fagul ntr-o regiune alturat, dar separat printr-un segment din cromozom. n cea de a treia
etap s-au separat bacteriile la care s-a pierdut segmentul dintre gena lac i fagul astfel c
fagul este plasat adiacent genei lac. Fagul capt mai nti o form circular, avnd inclus
i operonul lac (etapa 5), iar n ultima etap prin iradieri cu raze U.V. fagul s-a eliberat de
cromozomul bacterian, i-a recptat forma linear avnd inclus n interiorul su operonul lac.





















Etapele izolrii operonului lac la bacteria Escherichia coli

Operaiile descrise mai sus s-au efectuat i cu un alt fag, 80, ce realizeaz
transducia specializat. ADN al fiecrui fag are o caten cu o greutate molecular mai mare
(caten grea) i o caten cu o greutate molecular mai mic (caten uoar). Prin
denaturare, catenele fagilor s-au izolat una de alta, iar prin ultracentrifugare s-au separat
catenele grele de cele uoare. Catenele grele s-au pus mpreun i prin procesul de
renaturare, ntre ele, se refac legturile de hidrogen, dar numai n zona operonului lac, acolo
unde cele dou catene au nucleotide complementare, n rest catenele rmn distanate. Cu
ajutorul enzimelor ce hidrolizeaz ADN monocatenar, s-au eliminat catenele libere, rmnnd
doar operonul lac, bicatenar.
Izolarea genelor a avut o importan deosebit pentru c a deschis calea spre studiul
aprofundat al materialului genetic in vitro, dar mai ales spre transferul de gene de la un
organism la altul.





52
Transferul de gene (transgeneza)

n natur se realizeaz pe mai multe ci: la organismele superioare, n procesul de
fecundare sau prin transducie cu ajutorul virusurilor, iar la organismele inferioare
(procariote) transferul de gene se realizeaz prin intermediul fenomenelor de transformare,
conjugare, sex-ducie i transducie.
Transferul de gene ntre speciile ndeprtate filogenetic are la baz tehnica ADN
recombinat, care const n realizarea de hibrizi moleculari ADN, ce provin de la cele dou
specii.
Perfecionarea tehnicii ADN recombinat nu a fost posibil dect dup descoperirea
unor enzime care rup molecula de ADN n anumite puncte, denumite endonucleaze de
restricie (restrictaze) i a ADN-ligazelor care resudeaz molecula de ADN, n vederea
realizrii de ADN hibrid.
Enzimele de restricie se gsesc n numr foarte mare, fiecare fiind specific unei
anumite secvene de nucleotide, deci unei gene. Recunoscnd secvena specific, restrictazele
determin tieturi la nivelul ambelor catene de ADN, fragmentnd molecula.
Restrictazele constituie adevrate bisturie biologice, cu ajutorul crora se poate
desprinde din molecula de ADN, o gen ce urmeaz a fi transferat. Genele ce trebuiesc
transferate pot fi sintetizate in vitro.
n realizarea transferului interspecific al genelor, prima problem ce trebuie rezolvat este
izolarea unei gene, prin una din tehnicile descrise i gsirea unui vector sau vehicul. Rolul
de vehicul l poate avea att ADN plasmidial, ct i ADN al unor virusuri cum ar fi, ,
SV40. n general vehiculele sunt molecule de ADN circular.
n anul 1973, A. Chang i S. Cohen, au reuit s obin plasmide hibride care
conineau genele de la dou bacterii i anume gena pentru rezistena la tetraciclin, de la E.
coli i gena pentru rezistena la penicilin de la Staphylococcus aureus.
O alt cale prin care se realizeaz transferul de gene este folosirea ca vectori a
virusurilor temperate, care la un moment dat se gsesc integrate n cromozomul bacterian, sub
form de profagi. La un moment dat, profagii se elibereaz din cromozomul bacterian i
produc liza bacteriei. n acest caz, bacteriofagii pot lua o gen din cromozomul bacteriei i la
o nou infecie o pot transfera ntr-o alt bacterie.
n anul 1971, geneticianul C. Merril a reuit s transfere gena ce rspunde de
metabolizarea galactozei de la bacteria E. coli n celulele umane. Pentru realizarea acestui
transfer s-a procedat astfel: bacteriile E .coli au fost infectate cu bacteriofagul , care se inser
adiacent genei gal din cromozomul bacterian. Se provoac liza bacteriei i se vor elibera fagi
care posed gena gal. Aceti fagi recombinai au fost introdui ntr-o cultur de celule
umane, ce proveneau de la un individ ce prezenta maladia ereditar galactosemia (lipsa genei
ce determin enzima necesar metabolizrii galactozei, n glucoz). Dup un timp s-a
constatat c celulele umane au nceput s metabolizeze galactoza. Se poate spune c
bacteriofagii se comport n mod similar cu plasmidele, putnd ncorpora n cromozom gene
strine, pe care le poate transfera n alte celule pe care le infecteaz.
Aceste transferuri de gene deschid mari perspective mai ales n cazul transferului de
gene de la plante sau animale n celulele bacteriene, care ar putea s produc pe medii relativ
simple, mari cantiti de enzime, hormoni, proteine, de care are nevoie omenirea.
n acest sens se poate meniona transferul genei ce determin sinteza ovalbuminei,
protein din oul de gin, la E. coli K12 (). S-a izolat mai nti ARN
m
ce codific
ovalbumina din ovocitul ginilor. Folosind fenomenul de complementaritate s-a sintetizat
ADN, respectiv gena ovalbuminei care a fost inclus apoi ntr-un plasmid recombinat, care
prin fenomenul de conjugare a fost transferat n celula bacterian. n urma acestui transfer,
celulele bacteriene au nceput s produc ntre 30000-90000 molecule de ovalbumin, ceea ce
reprezint n jur de 0,5-1% din cantitatea total de proteine a bacteriei. A. Riggs (citat de P.
Raicu, 1980) a reuit s transfere gena ce determin sinteza insulinei umane n pancreas, la o
53
bacterie care a nceput s sintetizeze insulina. Insulina uman este format din dou catene
polipeptidice alctuite din 21 i 30 de aminoacizi. n experiena amintit A. Riggs a folosit o
gen sintetizat artificial.
n anul 1977 s-a reuit s se transfere gena ce determin sinteza hormonului de
cretere somatostatina, produs de hipotalamus, pancreas, stomac i intestine, din celulele
umane n celulele bacteriene care au nceput s sintetizeze acest hormon.
O alt realizare a ingineriei genetice este transferul genelor ce determin sinteza
interferonului din celulele umane n celula bacteriei E.coli.
Interferonul este o protein cu rol antiviral i este produs de leucocitele umane din
snge. Cercetrile Institutului de Oncologie i Imunogenetic din Villejuif arat c
interferonul este capabil s vindece oarecii bolnavi de diferite tipuri de cancer, ce nu preau
induse de virusuri, c aceast substan stimuleaz globulele albe, denumite NK (natural
killers - celule ucigae), o linie de aprare mpotriva celulelor canceroase.
Producerea interferonului prin infectarea leucocitelor cu virusuri, pentru a stimula
fabricarea de interferon, era foarte scump i se obineau cantiti infime de substan. La
nceputul anului 1980, Charles Weismann de la Institutul de biologie molecular din Zurich, a
realizat sinteza interferonului, cu ajutorul bacteriei E. coli.
Astzi se tie c interferonul are urmtoarele funcii: inhib creterea celulelor n
general, regleaz activitile imunitare, mrete activitatea celulelor albe (ce recunosc i
distrug celulele tumorale), stimuleaz celulele macrofage ce distrug virusurile, bacteriile i
alte particule.
Se poate spune c interferonul este un mediator celular, deoarece acioneaz ca un
activator al celulelor specializate n distrugerea virusurilor i a celulelor canceroase i nu un
antibiotic antiviral.
Transgeneza, transferul de gene sau fragmente de ADN de la un organism (donor) la
altul (receptor) se poate realiza fie prin metoda direct (introducerea moleculei de ADN n
celule receptor), fie prin metode indirecte (ADN este introdus n receptor printr-un vector).
Prin metoda direct, ADN exogen poate fi transferat n celule gazd prin mai multe
tehnici: endocitoz, electroporare, microinjecie i biolistic (Butnaru Gallia, 1999).
Endocitoza presupune obinerea mai nti a protoplatilor, celule vegetale crora li s-
a ndeprtat peretele celular rigid, pectocelulozic, cu ajutorul enzimelor (pectinaza, celulaza)
sau pe cale mecanic.
ADN transformant este adsorbit la suprafaa celulelor receptoare, iar apoi este inclus
n celule. Aceast metod presupune protejarea moleculei de ADN prin includerea sa n
lipozomi, prin tratare cu polietilenglicol i fosfat de calciu i existena a mai multor molecule
de ADN transformant pentru ca transferul s se realizeze cu o frecven ct mai mare.
Electroporarea const n transferul moleculelor de ADN n protoplati cu ajutorul
unor impulsuri electrice de scurt durat sau cu ajutorul razelor laser (porare laser). Se
apreciaz c eficiena transformrii genetice este destul de mic fiind dependent de greutatea
molecular a ADN, concentraia polietilenglicolului, durata i intensitatea impulsului electric,
starea fiziologic a celulei receptor (Butnaru Gallia, 1999).
Microinjecia este o metod mult mai precis, deoarece o molecul cunoscut (ADN,
ARN, proteine) se introduce cu o microsering din sticl montat pe un micromanipulator,
ntr-un receptor (protoplast, celul animal), fixat pe o lam de sticl, n gel de agaroz.
Metodele biolistice constau n introducerea unui ADN exogen ntr-un receptor prin
intermediul aa numitului tun de particule sau cu ajutorul arcului electric.
Cu ajutorul tunului de particule, microparticule de aur sau tungsten asociate cu
molecule de ADN donor sunt direcionate ntr-o celul sau grup de celule. Celulele sau
esuturile bombardate cu aceste microparticule, crescute pe un mediu de cultur vor regenera
plante, transformate genetic.
54
Transgeneza indirect presupune izolarea unui segment de ADN (o gen), clonarea
genei respective i transferul ntr-o celul receptor prin intermediul unui vector (Butnaru
Gallia, 1999).
Gena ce trebuie transferat a primit denumirea de pasager; de obicei pasagerul,
ptruns ntr-o celul receptor este degradat de sistemul enzimatic al acesteia. Pentru a evita
aceast degradare, gena (pasagerul) se asociaz cu un vector, iar mpreun constituie o
macromolecul complex, de ADN recombinant.
Izolarea ADN de la diferite organisme procariote sau eucariote se realizeaz prin
diferite metode fizico-chimice (centrifugare, tratare cu diferite enzime etc.). Deoarece
fragmentul de ADN izolat poate conine mai multe gene este necesar fragmentarea acestuia,
pentru izolarea genei (pasagerului) ce trebuie transferat. Pentru izolarea unei gene de interes
se folosete ARN
m
al genei respective, care n prezena reverstranscriptazei se va transforma
ntr-o molecul de ADN complementar (ADN-c) monocatenar. n prezena ADN-polimerazei
I, ADN-c i va sintetiza catena complementar, devenind ADN bicatenar, care va avea
nscris informaia nucleotidic din ARN
m
.
Genele ce urmeaz a fi transferate nu vor fi funcionale dac nu au ataate
promotorul, intensificator sau atenuator ai transcripiei informaiei genetice, care intr n
structura genelor i regleaz activitatea acestora.
n procesul de transgenez sunt absolut necesare enzimele de restricie
(endonucleaze de restricie), produse n mod natural de bacterii, cu rol imunitar, respectiv de a
distruge moleculele de ADN exogen ce ptrund n acestea. Sunt cunoscute n prezent peste
500 de tipuri de endonucleaze de restricie care acioneaz ca nite bisturie moleculare,
secionnd moleculele de ADN, n secvene scurte ntre dou baze azotate adiacente
cunoscute (int).
Cele mai cunoscute endonucleaze de restricie sunt: EcoR
1
(izolat de la Escherichia
coli), Hpa I (din Haemophilus parainfluenzae), Alu I (din Arthriobacter luteus) etc.
Fiecare enzim are un mod particular, unic, de aciune, de aceia sunt nelipsite n operaiunile
de fragmentare a moleculelor de ADN.
Transgeneza necesit folosirea unui alt grup de enzime i anume ADN-ligazele, care
leag fragmentele de ADN ce trebuie transferat, de ADN al unui vector.
Trebuie avut n vedere i receptorul n care trebuie transferat ADN exogen, care
poate fi o bacterie, o celul vegetal sau animal.
ntre receptor i vector trebuie s fie o compatibilitate perfect, aa nct, un vector
este funcional numai la un anumit receptor.

Principalii vectori utilizai n transgenez

Vectorii sunt molecule mici de ADN ce ncorporeaz genele ce trebuie transferate
(pasagerul). Vectorii trebuie s aib capacitatea de a ptrunde ntr-o celul gazd, iar gena ce
trebuie transferat s fie marcat genetic cu un marker specific, pentru a putea fi recunoscut.
Ingineria genetic folosete un numr mare de vectori, funcie de pasager i de
receptor.
Plasmidele bacteriene, cromozomi miniaturali, care pot include gene strine sunt
utilizate frecvent ca vectori: plasmida pBR322, plasmida pUC, plasmida Ti, plasmida Ri .a.
Ca vectori pentru celulele vegetale, n vederea obinerii plantelor transgenice se
folosesc plasmidele Ti (tumor inducing) de la Agrobacterium tumefaciens i Ri (root
inducing) de la Agrobacterium rhizogenes.
Mrimea plasmidelor, exprimat n kilobaze (1000 de perechi de baze) este n jurul a
200 kb i pot include i transfera segmente de ADN de 8-10 kb.
Un alt grup de vectori l reprezint bacteriofagii.
Cosmidele sunt vectori hibrizi realizai ntre fagul i plasmide, combinnd
nsuirile plasmidelor i a fagului, n sensul c sunt funcionale, exprimndu-se fenotipic, fr
55
s se integreze n cromozomul celulelor gazd. Se folosesc frecvent pentru clonarea i
transferul fragmentelor de ADN de la eucariote, fragmente de aproximativ 45 kb, care n mod
normal nu pot fi incluse n fagul .
Fagii monocatenari au ca material genetic o singur caten de ADN notat
convenional cu (+). Aceast caten ptrunde n celula gazd, n momentul infeciei,
constituind matricea pentru sinteza unei catene complementare, notat cu (-). mpreun cu
catena (+) va forma o molecul bicatenar de ADN, care poate fi izolat i folosit pentru
clonarea ADN.

Realizri ale transgenezei la plante

n ultimii ani s-au realizat plante transgenice, denumite i plante modificate genetic.
Aa cum s-a specificat anterior, la plantele superioare se folosesc ca vectori ai
genelor de interes plasmidele Ti de la Agrobacterium tumefaciens, care n mod natural dau
natere la tumori i plasmidele Ri de la Agrobacterium rhizogenes, care dau natere la
rdcini filiforme.
Plasmidele Ti, datorit regiunii denumite ADN-T funcioneaz ca transpozoni
(elemente genetice mobile). Numai aceast regiune se integreaz n cromozomul celulei
gazd.
Bacteriile din genul Agrobacterium ofer singurul exemplu de inginerie genetic
natural, deoarece n urma infeciei, bacteria transfer n nucleul celulei vegetale o mic
poriune din ADN al plasmidei, care determin transformarea celulei infectate n celul
tumoral. Prin eliminarea genelor tumorale (oncogenelor) i asocierea acestei plasmide
dezarmate cu o plasmid ce conine gena de interes, clonat n bacteria Escherichia coli
se obine un vector de transformare foarte eficient pentru dicotiledonate (n condiii naturale
Agrobacterium nu atac monocotiledonatele).
Indiferent de metoda de transfer, frecvena de integrare a genelor n genomul celulei
vegetale este destul de redus. Din aceast cauz, genei de interes i este asociat o gen
marker, care permite selecia celulelor transformate. Se folosesc frecvent ca gene marker,
genele care confer rezisten la un antibiotic sau la un erbicid, care-i va permite celulei
transformate s supravieuiasc pe un mediu de cultur ce posed antibioticul sau erbicidul.
Cele mai importante plante transgenice aflate deja n cultur sunt soia Roundup
Ready, tolerant la erbicidul total Roundup (care are ca principiu activ glifosat) i porumbul
Bt, rezistent la atacul sfredelitorului (Ostrinia nubilalis), urmnd a se obine plante tolerante la
doi sau mai muli factori (rezisten la un erbicid asociat cu rezistena la o insect,
androsterilitate asociat cu rezistena la un erbicid etc.).
O alt realizare a ingineriei genetice o constituie tomatele, la care s-a modificat
procesul de coacere a fructelor, denumite Flavr Savr, fructele meninndu-i prospeimea
timp ndelungat. n acest caz, s-a folosit tehnologia ARN antisens, blocndu-se sinteza uneia
din enzimele ce degradeaz pereii celulari ai fructului sau a hormonului etilen (cel care
accelereaz procesul de coacere, aceasta fiind ntrziat).
O alt direcie a ingineriei genetice este transferul genelor nif de la plantele
leguminoase la plantele cerealiere.

Transferul genelor fixatoare de azot

Plantele din familia Leguminoase (mazrea, fasolea, bobul, soia etc.) au capacitatea
s fixeze N atmosferic cu ajutorul unor bacterii cu care triesc n simbioz. Bacteriile
fixatoare de azot ptrund n esuturile rdcinilor, formnd aa numitele nodoziti, iar din
aceast simbioz beneficiaz ambele specii: plantele obin azotul atmosferic iar bacteriile
obin de la plante compuii organici de care au nevoie. Exist i alte plante, n afar de cele
56
leguminoase, care triesc n simbioz cu bacterii fixatoare de azot: unele graminee
(Digitaria), chiar unii arbori cum ar fi aninul (Alnus).
Azotul atmosferic poate fi fixat de unele bacterii din genurile: Rhizobium,
Azotobacter, Desulfovibrio, Hydrogenomonas etc. sau de unele alge verzi-albastre.
Mecanismul fixrii azotului atmosferic a fost descifrat n 1960, n laboratoarele Du
Pont de Nemours (SUA). La bacteria Clostridium pasteurianum s-a izolat enzima
nitrogenaza, care catalizeaz fixarea azotului atmosferic. Aceast enzim este format din
dou molecule proteice, una cu greutate molecular mare (220.000 daltoni) i cealalt cu
greutate molecular mic (55.000 daltoni). Molecula mare conine atomi de fier, sulf i
molibden, iar molecula mic doar fier i sulf. Cele dou molecule sunt active mpreun i
numai n absena oxigenului atmosferic. Protejarea moleculei de nitrogenaz mpotriva
oxigenului atmosferic este asigurat de un pigment denumit leghemoglobin care se combin
cu oxigenul i protejeaz astfel enzima.
Sinteza enzimei nitrogenaza este determinat de un grup de gene notate cu nif care
sunt localizate pe cromozom alturat de gena his, ce determin metabolismul histidinei. Se
pare c este vorba de dou gene nif: una ce determin sinteza moleculei mari a nitrogenazei i
alta ce determin sinteza moleculei mici.
Transferul genelor nif de la bacteriile fixatoare de azot la altele nefixatoare se poate
realiza pe cile cunoscute de recombinare la bacterii: transformare, conjugare, sex-ducie i
transducie. Geneticianul R. Dixon de la Universitatea din Sussex (Anglia) a transferat genele
nif i his de la bacteria F+ de Klebsiella pneumoniae, la bacteria F- de E. coli.
Tot Dixon n 1974 a obinut un factor de fertilitate recombinat care includea n el i
genele nif, denumite FN 68. Acest factor de fertilitate, introdus n mediul de cultur a unor
bacterii incapabile s fixeze azotul atmosferic (ex. E.coli), a produs transformarea acestora n
bacterii fixatoare de azot.
Pentru transferul genelor nif se pot folosi ca vectori i bacteriofagii n procesul de
transducie. S. Stroicher a folosit fagul P1 pentru transferul genelor nif.
Transferul genelor nif de la o bacterie la alta a creat premisele realizrii unor
simbioze a acestor bacterii nu numai cu leguminoasele, ci i cu alte plante care nu au
capacitatea de a fixa azotul atmosferic.
n viitor se preconizeaz transferul acestor gene nif n cromozomul plantelor sau n
cromozomul cloroplastelor, situaie n care plantele nu ar mai avea nevoie de simbioze cu
bacteriile, plantele fixndu-i direct azotul atmosferic.

Hibridarea celular la plante

Hibridarea celular la plante s-a putut realiza numai dup ce s-au obinut aa numiii
protoplati, care sunt celule vegetale crora li s-a ndeprtat membrana rigid pecto-
celulozic. ndeprtarea membranei pecto-celulozice s-a realizat la nceput pe cale mecanic
iar mai trziu, dup anul 1960, prin metode chimice, folosind o serie de enzime cum ar fi:
celulaza, pectinaza, macerozima. n anul 1971, francezul J. P. Nitsch a obinut o plant
complet dezvoltat, prin regenerarea protoplatilor. n ultimii ani s-au izolat protoplati i s-au
regenerat plante ntregi la: soia, morcov, petunia, bob, mazre, gru etc.










57












Obinerea enzimatic a protoplatilor





Fuzionarea protoplatilor ridic aceleai probleme ca i fuzionarea celulelor animale:
mrirea frecvenei celulelor hibride i selectarea acestora. Pentru a mri frecvena de
fuzionare a protoplatilor se folosesc: polietilenglicolul, nitratul de sodiu, ionii de Ca la un pH
ridicat, ser proaspt de iepure etc.
Selectarea celulelor fuzionate se realizeaz prin folosirea de medii selective, care
elimin celulele nefuzionate pstrndu-le pe cele hibride. La plante s-a constatat c mediile de
cultur ce nu posed substane de cretere (citochinin i auxin) elimin celulele parentale, n
timp ce celulele hibride se pot dispensa de aceste substane.
P. S. Carlson (1972) a obinut plante hibride ntregi, prin fuzionarea protoplatilor de
la speciile de tutun, Nicotiana glauca (2n=24) i N. langsdorffii (2n=18). Plantele rezultate
erau amfiploizi ce aveau 2n=42 cromozomi, identici cu hibrizii obinui pe cale sexuat
(fig.4.4.)
Aceast metod de obinere a hibrizilor a permis ns obinerea de hibrizi celulari
ntre speciile ndeprtate filogenetic care n mod obinuit nu se pot hibrida sexuat: morcov x
tutun, porumb x ovz, porumb x soia, morcov x petunia.


























58




Hibridarea celular la plante

Un aspect foarte important este acela c protoplatii pot include molecule de ADN
strine, existente n mediu, particule strine(virusuri) i alte molecule. Fenomenul a fost numit
transgenoz, iar pe aceast cale se pot transfera gene sau chiar organite citoplasmatice de la
un organism la altul.
Din punct de vedere genetic, protoplatii prezint o serie de avantaje:
- permit nmulirea rapid a unor genotipuri valoroase;
- se pot obine hibrizi celulari ntre dou specii ndeprtate din punct de vedere
filogenetic, care nu se pot ncrucia sexuat;
- se pot obine forme cu grade diferite de poliploidie;
- se pot induce mutaii la nivelul protoplatilor haploizi sau diploizi;
- se pot transfera gene, cromozomi sau cloroplaste;
- protoplatii pot regenera plante libere de viroze.
n ultimii ani cercetrile privind hibridarea celular a luat o mare amploare, reuindu-
se hibridarea unor celule animale cu celule vegetale. n anul 1976 A. Lima de Faria (Suedia) a
reuit fuzionarea unor celule tumorale umane de tip HeLa cu protoplati de morcov, folosind
polietilenglicolul ca agent inductor.
Aceste hibridri urmresc combinarea unor genotipuri extrem de diferite, depindu-
se limitele impuse de reproducerea sexuat.

Haploidia prin androgenez la plante
Dezvoltarea partenogenetic a unui embrion sau a unei plante dintr-un microspor
haploid poart numele de androgenez iar dezvoltarea unui organism haploid dintr-o oosfer
sau un nucleu secundar al sacului embrionar se numete ginogenez.
n anul 1964 cercettorii indieni S. Guha i S. C. Maheswari au cultivat pe un mediu
artificial, antere de Datura innoxia i au obinut numeroi embrioizi. Cu doi ani mai trziu s-
au obinut plante haploide complet dezvoltate la tutun (Nicotiana tabacum) (Raicu P., 1980).
Androgeneza este de dou tipuri: direct i indirect (fig.4.5.). Androgeneza direct
const n faptul c programul normal al microsporului este deviat sub influena unor stimuli
externi, avnd loc o evoluie particular a nucleului haploid, care prin diviziuni mitotice
devine embrioid i apoi plant matur. n cazul androgenezei indirecte, se formeaz mai nti
un esut nedifereniat denumit calus, din care se pot diferenia apoi plante haploide cu diferite
grade de poliploidie.
Obinerea unor plante haploide prin androgenez este condiionat de numeroi
factori, cum ar fi vrsta anterelor, temperatura, lumina, compoziia mediului de cultur, fapt
ce a fcut ca numai la unele specii s se poat obine haploizi pe aceast cale.
Pentru genetic, haploizii obinui prin androgenez prezint o mare importan. n
primul rnd se demonstreaz c n nucleul celulelor vegetale exist toat informaia ereditar
a organismului, inclusiv programul embriogenezei, deoarece dintr-o singur celul se
regenereaz un organism ntreg.
Plantele haploide sunt pure din puncte de vedere genetic, deoarece sunt hemizigote,
existnd o coresponden complet ntre genotip i fenotip.
Prin dublarea numrului de cromozomi se obin plante diploide, complet
homozigote, aa numitele linii izogene, ntr-un timp foarte scurt, de o importan deosebit
pentru ameliorare. Dac prin metodele clasice liniile homozigote la plantele alogame se obin
n 8-9 generaii de consangvinizare, prin haploidie liniile homozigote se obin ntr-o singur
generaie.
59
La plantele haploide se manifest toate genele recesive iar mutaiile se pot detecta
foarte uor.
Haploizii s-au dovedit utili n studiile de embriogenez experimental, de citologie,
citogenetic, de mutagenez, de fiziologie i biochimie, de citodifereniere, datorit faptului















c expresivitatea genelor la plantele haploide, care sunt hemizigote, este total, ntr-o singur
generaie.

Mutaiile i mecanismul lor molecular

Noiunea de mutaie a fost introdus de Hugo de Vries (1901), nelegnd prin
aceasta, o schimbare brusc a nsuirilor ereditare. E. Baur (1919) o definete drept o
modificare ereditar care a aprut n afara hibridrii, iar E. Guyenot, o variaie brusc i
ereditar ce poate apare spontan sau sub influena unor factori experimentali.
Mutaia este o nsuire a materialului genetic i este tot att de important ca i
stabilitatea lui. Ea apare la toate organismele i alturi de recombinarea genetic este
principala surs de variabilitate.
Omul poate obine mutaii, acionnd asupra organismelor cu diferii factori
mutageni. Modificrile obinute afecteaz diferite caractere morfologice sau nsuiri
fiziologice i biochimice. Mutaia este una din metodele principale folosit n ameliorare,
pentru obinerea de soiuri sau linii noi.
Apariia spontan a mutaiilor a fost sesizat de mult, iar concepia care s-a format
asupra lor a avut un rol important n explicarea evoluiei. Evoluia, n concepia de astzi, nu
este altceva dect o rezultat a procesului de modificare ereditar a organismelor i aciunea
selectiv a mediului. Mutaia poate determina direcii de evoluie atunci cnd modificarea este
util organismului, reprezentnd un avantaj n perpetuarea speciei la care a aprut.

Clasificare mutaiilor

Mutaiile se pot clasifica n mai multe tipuri, fiecare avnd un anumit criteriu.
1. Dup modul de apariie, ele se mpart n mutaii naturale i mutaii artificiale:
- mutaiile naturale numite i spontane apar n condiiile din natur fr intervenia
omului. Datorit faptului c mediul totalizeaz o mare complexitate de factori ce influeneaz
organismul este foarte greu de precizat care sunt cauzele ce determin apariia acestor mutaii;
- mutaiile artificiale, numite i induse, sunt provocate de om cu ajutorul diferiilor
ageni mutageni.
2. Dup capacitatea de expresie fenotipic ele pot fi: mutaii mari (macromutaii) ce
se deosebesc prin caracterul lor net vizibil, uor sesizabile; mutaii mici (micromutaii), care

60
spre deosebire de primele, sunt greu perceptibile, dar mai frecvente i cu rol important n
evoluie.
3. Dup aciunea genei mutante, mutaiile pot fi: morfologice, fiziologice sau
biochimice; mutaiile morfologice afecteaz caracterele morfologice ale organismelor (form,
mrime, culoare etc.) i sunt uor detectabile; mutaiile fiziologice produc schimbri n
procesele fiziologice, (ritmul de cretere, perioada de vegetaie, rezistena la boli .a.);
mutaiile biochimice determin modificarea cantitativ sau calitativ a componenilor chimici
din organism, (substane de rezerv, principii activi, enzime etc.).
4. Dup natura substratului material al ereditii mutaiile sunt: genice,
cromozomice, de genom, citoplasmatice; mutaiile genice (punctiforme) provoac
modificarea genei fr a produce o schimbare n morfologia cromozomului. Ele se refer la
schimbrile de structur chimic. O alel se transform n alta, fr a-i schimba locus-ul n
cromozom. Cea mai mic unitate mutaional, este perechea de nucleotide, mutaie denumit
punctiform, fiind o mutaie intragenic. Mutaiile cromozomice se refer la restructurrile
ce pot avea loc n cromozom (deficien, deleie, inversie, translocaie, translaie). Mutaiile
de genom afecteaz ntregul genom sau numai un anumit numr de cromozomi (poliploidia i
aneuploidia). Mutaiile citoplasmatice se refer la modificrile pe care le pot suferi
cloroplastele i mitocondriile i odat cu ele i caracterele de care rspund.
5. Dup originea lor mutaiile pot fi: germinale i somatice. Mutaiile germinale
apar n celulele sexuale i se manifest n zigoii la a cror formare particip. Mutaiile
somatice apar n celulele somatice. Cu ct apar mai devreme n ontogenez, vor afecta o
poriune mai mare din organism. La organismele cu nmulire vegetativ ele se pot menine pe
cale vegetativ i pe cale sexuat cnd din esuturile somatice afectate se dezvolt celule
sexuale.
6. Dup direcia de manifestare a mutaiilor: mutaia direct (forward mutation) i de
reversie (back-mutation). Cnd o gen normal (de tip slbatic) se transform ntr-o alel
diferit, mutaia este direct, iar cnd o gen se retransform n tipul iniial, mutaia este de
reversie.
Frecvena acestor mutaii este diferit, mai mare pentru cele directe, comparativ cu
mutaiile de reversie.
7. n funcie de locul de plasare a genelor, mutaiile pot fi: mutaii autozomale
plasate pe autozomi, mutaii heterozomale plasate n cromozomii sexuali (manifestnd sex-
linkage) i mutaii extranucleare, ale genelor din citoplasm.
8. Dup modul de manifestare a genelor mutante, mutaiile pot fi dominante,
codominante, semidominante sau recesive. La organismele diploide, mutageneza a creat
relaii de alelism ntre gene, exprimndu-se fenotipic cele dominante, n timp ce la
organismele haploide orice mutaie se exteriorizeaz fenotipic.
9. Funcie de modul de reacie a indivizilor purttori ai unei mutaii, mutaiile pot fi
viabile, subletale i letale.
10. Un tip special de gene mutante, sunt genele mutatoare, care mresc frecvena
mutaiilor altor gene.

Detectarea mutaiilor

Mutaiile pot fi identificate, dup modificrile fenotipice ereditare sau dup
schimbrile suferite n structura sau numrul cromozomilor, indiferent dac acestea sunt sau
nu nsoite momentan de modificri fenotipice.
Cel mai uor pot fi descoperite mutaiile somatice sau cele germinale, dominante,
vizibile, care dei n stare heterozigot, apar chiar n prima generaie. Mutaiile recesive se pot
evidenia mai greu i este nevoie de o analiz genetic efectuat n mai multe generaii.
Numai n cazul cnd este homozigot, mutaia recesiv se evideniaz n prima generaie.
61
Majoritatea mutaiilor sunt recesive i pentru determinarea lor se fac hibridri i
autofecundri. Pentru Drosophila se folosesc cromozomi marcai prin gene dominante i
purttori ai inversiilor ce mpiedic crossing-over-ul.
Mutaiile fiziologice se pot sesiza uor atunci cnd sunt letale sau semiletale,
deoarece organismele ce posed astfel de mutaii se dezvolt slab sau pier. Exist ns multe
mutaii ce manifest mici schimbri n procesele fiziologice sau biochimice i sunt foarte greu
de sesizat. Este imposibil de sesizat apariia tuturor mutaiilor naturale sau artificiale orict de
minuios s-ar lucra.
La organismele diploide mutaiile dominante, foarte rare, se manifest imediat i pot
fi detectate. Mutaiile recesive se menin n genotip mai multe generaii (perioad de lag) pn
devin homozigote, moment cnd, se manifest fenotipic. Cea mai eficient metod pentru
depistarea lor este autofecundarea urmat de depistarea lor, dup un numr de generaii (M
1
,
M
2
, M
3
). Mutaiile care se produc n endosperm, cum ar fi cele care-i afecteaz culoarea
sau alte aspecte, se identific uor, prin polenizarea plantelor cu polen ce posed mutanta
respectiv i care, datorit dublei fecundri, o va manifesta. Mutaiile recesive se pot menine
numai prin autogamie i consangvinizare.
La plantele haploide, starea de hemizigoie face posibil detectarea mutaiilor chiar
din momentul apariiei lor. Aceste mutaii pot fi meninute i prin nmulire vegetativ.
Cercetri multiple s-au efectuat la microorganisme, la care mutaiile pot fi detectate
analizndu-se diferite caracteristici ale aspectului i mrimii plajelor, cerinele fa de factorii
de cretere .a. Metodele de detectare au fost elaborate de mai muli biochimiti, printre care
mai importani sunt: S. W. Beadle i E. L. Tatum (1941, 1945) pentru Neurospora crassa i J.
Lederberg (1952) pentru bacterii.
Se folosesc metode de inducere a mutaiilor care perturb sinteza unor anumii
metabolii la bacterii, ciuperci inferioare i alte microorganisme haploide. Formele parentale
sunt supuse aciunii unui agent mutagen, sunt crescute apoi pe medii minimale sau complete
i prin separarea indivizilor se obin descendene (clone), dintre care unele mutante.
La bacteriofagi, mutantele afecteaz morfologia plajelor din culturile de bacterii pe
suportul crora se reproduc.
Mutaiile cu efect letal n stare homozigot pot fi detectate foarte uor. Din
ncruciarea a doi indivizi heterozigoi, ce posed o gen letal recesiv raportul genetic de
segregare nu va fi 1:2:1 ci, 2:1 deoarece din indivizii homozigoi pentru aceast gen mor,
fie n stadiul embrionar sau post embrionar.
Pentru depistarea genelor mutante letale de pe cromozomii sexuali au fost elaborate
diferite metode numite i teste. Aa este metoda ClB elaborat de H. J. Mller care permite
recunoaterea mutaiilor letale localizate pe cromozomul X la Drosophila melanogaster.
Femelele ClB au un cromozom X normal i unul la care regiunea central a suferit o inversie
care oprete un eventual crossing-over pe aceast poriune. Pe acest cromozom se gsete o
alel mutant l i o alel dominant B (ochi bar). Alela B ndeplinete rolul de marker
(identificator). Femelele ClB au fost ncruciate cu masculi de tip normal. Dac la mascul a
aprut o mutaie letal recesiv, atunci femelele cu ochi bar vor prelua de la mam i tat cte
un factor letal. n generaia urmtoare toi masculii vor muri fie c au motenit factorul letal
ClB, fie mutaia care a aprut la cromozomul X (figura 11.1).
O alt metod pentru determinarea mutaiilor letale la Drosophila melanogaster este
i metoda Mller 5, n care se folosesc femele la care cromozomul X este marcat cu o alel
recesiv pentru culoarea apricot a ochilor. Pentru tipul Abraxas aceast metod se poate
folosi, dar n cazul de fa letalitatea se manifest la sexul femel.





62



















Testul ClB de detectare a mutaiilor letale ce afecteaz gene localizate
n cromozomul sexului X la Drosophila melanogaster



Mutaiile spontane

Apariia spontan a unor indivizi deosebii n cadrul unei populaii, cu posibiliti de
a transmite modificarea lor la urmai, a fost sesizat de foarte mult timp. Unele mutaii mai
deosebite au fost descrise n diferite lucrri. O mutaie descoperit n sec. XVI, de ctre
farmacistul german Sprenger, din Heidelberg, la planta Chelidonium majus avea frunzele i
petalele laciniate (spintecate); caracterul a aprut spontan i s-a transmis ca atare la
descendeni. Noua form a fost denumit Chelidonium laciniatum i a fost meninut prin
autofecundare. La frag, exist o mutaie descoperit de Duchesne (1763) care are frunza
compus dintr-o singur foliol, numit fragul monofil.
Darwin, n lucrarea sa Variaia animalelor i plantelor sub influena domesticirii
(1868), descrie diferite mutaii pe care le-a denumit sporturi. A descris piersicul cu fructe
netede, prunul cu fructe de culoare galben .a. La animale, citeaz numeroase mutaii: rasa
de vite Niatos, cu maxilarul superior mai scurt dect cel inferior, asemntor cinilor buldogi,
rasa de oi Ancona cu picioare foarte scurte, punul cu umeri, cu pene de culoare neagr .a.
n afara acestor mutaii, exist foarte multe exemple n literatura de specialitate:
cinii bassei, cunoscui cu 3000 de ani naintea erei noastre, merinosul de Machamp cu lna
puin ondulat, dispariia coarnelor la oi, taurine i capre, porcii solipezi, care au o singur
copit i nu se mbolnvesc de febr aftoas, rasa de oi chinez Yang-ti, fr urechi,
porumbeii rotai, gulerai, moai, fluturi de culoare neagr .a.
Un studiu sistematic al mutaiilor spontane l-a realizat Hugo de Vries (1848 1936).
El a pus bazele teoriei mutaioniste. Teoria lui ncearc s explice c evoluia se face exclusiv
pe baza mutaiilor. Lucrarea sa de baz este Teoria mutaiilor (1901 1903).
Dup De Vries, n viaa speciilor sunt anumite perioade sensibile, care fac s apar
aceste mutaii. El precizeaz ns c, nu mediul provoac propriu-zis apariia acestor mutaii.
Mutaiile sunt determinate de cauze interne, iar mediul nu face altceva dect s declaneze
apariia perioadei sensibile a speciei. Mutaiile nu substituie speciile vechi din care au aprut,
ci continu s triasc, mai departe, alturi de ele. Transformrile acestea, spune De Vries, nu

63
au o direcie bine definit fa de organism. Ele pot fi folositoare organismului dup cum pot
fi i nefolositoare, putnd chiar periclita existena speciei nou aprute.
De Vries a studiat amnunit speciile genului Oenothera, plant caracterizat printr-
un polimorfism accentuat, originar din America i care fusese introdus de curnd n Olanda,
unde lucra De Vries. El a remarcat c numeroase forme noi, erau ereditare. Unele experiene
preau s demonstreze c Oenothera lamarckiana, la origine provine din ncruciarea a dou
forme deosebite. Mai trziu, s-a demonstrat c anumite specii, cum ar fi Oenothera gigas,
sunt poliploide.
Teoria mutaiilor s-a dezvoltat prin lucrrile lui T. H. Morgan. Mecanismele
cromozomice descoperite de acesta privind transmiterea caracterelor, cuplarea i
recombinarea genelor, mecanismul de apariie a aberaiilor cromozomice, au constituit o baz
tiinific pentru fundamentarea procesului mutaional.
Procesul mutaional se caracterizeaz printr-o anumit frecven a mutaiilor. Este
rar, atunci cnd lum n considerare o singur gen i mult mai frecvent atunci cnd se iau n
considerare toate genele i toate mutaiile posibile de la un anumit organism. n primul caz
raritatea se explic prin aceea c din perechile de alele muteaz de obicei numai una singur,
iar n al doilea rnd ele sunt n majoritate recesive i nu se exteriorizeaz dect n stare
homozigot. Exist factori ce influeneaz frecvena mutaiilor spontane.
n primul rnd, frecvena mutaiilor genice, depinde de specie i de gena respectiv.
Exist unele aprecieri privind frecvena lor, calculat n raport cu numrul de gamei studiai.
Dup Wagner i Mitchell (1955) mutaiile spontane la diferii loci la porumb, sunt cuprinse
ntre 0,001 i 0,110 la 10000 gamei, iar la Drosophila ntre 0,29 i 1,5 la 10000 gamei. Dup
alte date ale unor autori, reiese c una i aceeai gen de la diferite linii de porumb muteaz
diferit. Aa de exemplu gena R
r
formeaz mutante r
r
cu frecvene diferite la aceste linii: la una
de 6,2 la 10000 gamei, la cealalt de 18,2 la 10000 gamei. Se presupune c aceste diferene
se datoreaz existenei unor gene speciale, care influeneaz frecvena mutaiilor altor gene
(gene mutatoare).
Numrul de mutaii ce se acumuleaz n celule este proporional cu vrsta lor. n
seminele plantelor care sunt depozitate un numr mai mare de ani, crete numrul de mutaii
fa de seminele de curnd recoltate. H. Stubbe a constatat la seminele de Antirrhinum majus
o cretere a procentului de mutaii de la 1,5% la 14% pentru o perioad de la 5 la 10 ani.
Astfel de observaii s-au fcut i asupra mutaiilor letale spontane, nlnuite cu sexul, n
spermatozoizii precoci i tardivi de la Drosophila melanogaster. Aceste constatri au dus la
formularea unei preri generale c, numrul de mutaii este proporional cu vrsta celulei dei
exist i excepii.
Descoperirea mutaiilor naturale cu ajutorul unora dintre metodele i tehnicile
cunoscute face posibil calculul procentului de mutante n snul unei populaii de indivizi. Este
ns foarte greu de stabilit prin acest calcul n mod exact proporia mutaiilor, din mai multe
motive:
- n primul rnd, mutaiile au aprut n decursul timpului, odat cu formarea
populaiilor i multe din ele pot fi considerate caractere normale;
- multiplicarea celulelor mutante poate fi mai lent sau mai rapid dect acea a
celulelor nemodificate;
- aciunea genelor sau a genotipurilor mutante poate fi favorabil sau letal
organismelor;
- toate acestea fac ca numrul de mutaii s sufere mereu modificri.
Numrul de mutaii, fiind foarte mare, este greu de determinat frecvena fiecreia n
parte. De aceea, se poate face o apreciere cantitativ a lor dup numrul de gamei care
posed mutaii. Aceast apreciere global se refer de fapt numai la frecvena unei singure
gene mutante sau a unei clase oarecare de mutaii. Mai trebuie adugat c mutaia germinal
nu se produce ntotdeauna n gamei, ci i n gonii, care n urma diviziunilor celulare produce
gamei mutani. Dac folosim metoda unei clase de mutaii trebuie s subliniem c mutaiile
64
letale nu reprezint o clas omogen; ele pot s apar sub influena a mai multor cauze:
mutaii genice, cromozomice, efecte de poziie etc.
n afar de factorii analizai mai sus, frecvena mutaiilor este influenat i de
hibridare; la organismele hibride, fa de cele homozigote, pentru acelai locus frecvena
mutaiilor este mai mare. De asemenea, procesul mutaional spontan este influenat i de
starea fiziologic i biochimic a organismului.

Mutaiile artificiale

Odat cu descoperirea unor factori ce pot fi folosii de om n obinerea de mutaii,
interesul oamenilor de tiin pentru studiul acestora i a efectelor pe care le produc asupra
organismelor a crescut foarte mult. Paralel cu aceste studii s-au elaborat i s-au perfecionat
metodele pentru producerea de mutaii artificiale, denumite i induse.
Dintre factorii mutageni folosii de om pentru prima dat, au fost razele X. n anul
1925, G. A. Nadson iradiind ciupercile inferioare cu raze X a obinut mutaii morfo-
fiziologice.
Aciunea mutagen a razelor X a fost demonstrat de H. J. Mller n 1927 i 1928 la
Drosophila. Rezultatele le public n lucrarea Transmutaia artificial a genei, (laureat
Nobel n 1946). Tot n aceast perioad, L. J. Stadler ntre 1927 i 1929, obine cu ajutorul
radiaiilor, mutaii la orz, porumb i tutun.
Descoperirea efectului mutagen al radiaiilor a deschis calea unor ample cercetri
tiinifice, importante att din punct de vedere teoretic, ct i practic. T. H. Morgan i coala
sa, au obinut la Drosophila peste 500 de forme mutante (figura 11.2).
Ulterior, metodele producerii experimentale a mutaiilor la plante, au fost folosite din
plin de A. Gustafsson (1954), J. MacKey (1956), H. Stubbe (1959), C. F. Konzak (1957) .a.
Dintre agenii mutageni folosii de om i mai bine studiai fac parte: radiaiile, temperatura
i unele substane chimice.

Radiaiile mutagene

Radiaiile electromagnetice au o gam de lungimi de und foarte ntins, care variaz
de la 10
-3
m ct au razele gamma pn la peste 1 m, cazul undelor hertziene. ntre aceste
limite se gsesc razele X, razele ultraviolete, razele infraroii.
Radiaiile mutagene sunt radiaiile care produc mutaii i din ele fac parte: 1) radiaii
ionizante electromagnetice (raze X i gamma); 2) radiaii ionizante corpusculare (radiaii
, protoni, neutroni, raze , diferite particule grele); 3) radiaii neionizante (raze ultraviolete).
Razele X i gamma, prin energia absorbit, provoac ionizri n esuturile plantei i
modific metabolismul celular. Razele X sunt foarte mult folosite, deoarece aparatele
Roentgen sunt uor utilizabile. Pentru iradierea cu raze gamma se folosete cobaltul
radioactiv. Razele gamma sunt mai penetrante dect razele X.
Razele Beta () sunt formate din electroni eliberai de radioizotopii de P
32
i S
35
. Cu
acetia se realizeaz soluii radioactive, n care se introduc semine uscate sau germinate.
Neutronii sunt particule neutre din punct de vedere electric, rezultai din
dezintegrarea atomilor. Ei acioneaz prin curentul dens i ionizant de protoni de hidrogen.
Efectul iradierii cu neutroni este mai puternic, cu ct elementele celulei au o structur mai
dens (plastide, nuclei i cromozomi).
Razele ultraviolete fac parte din spectrul solar invizibil, sunt constituite din fotoni,
cu o lungime de und ntre 136 i 4.000 . Absorbite n organism, transform energia lor n
reacii chimice, provocnd diferite efecte genetice. Ele au o mai mic putere de ptrundere i
sunt absorbite la suprafaa esuturilor.
n lucrrile de genetic se folosete mai frecvent aciunea mutagen a razelor X, gamma i
a neutronilor termici. Studiul i folosirea radiaiilor n genetic a dus la fundamentarea unei
65
noi ramuri a biologiei radiogenetica care n ultimul timp a cptat o amploare foarte
mare.
Efectele iradierii asupra plantelor. Efectele produse de radiaii sunt directe i
imediate. Seminele tratate cu doze maxime, de obicei nu supravieuiesc, iar embrionii lor,
cercetai la microscop conin numeroase zone de esut necrotic. Tratamentele cu doze mai
mici duc la apariia de mutaii.
Unele substane au o aciune de protecie a organismelor, diminund efectul
distructiv al razelor X, cum sunt, de exemplu, substanele reductoare din grupul sulfhidrelor.
Seminele uscate, iradiate cu raze X, ntr-un mediu de hidrogen sulfurat, nu manifest
perturbri n celulele lor, ntruct acest mediu anihileaz ntr-o msur oarecare, aciunea
radicalilor oxidani produi de radiaii.
Spre deosebire de aciunea razelor X, iradierea cu neutroni provoac tulburri mai
evidente i o sterilitate pronunat a indivizilor n descenden. S-a emis ipoteza conform
creia, neutronii ar aciona direct asupra nucleului, iar razele X asupra celorlalte elemente din
celul.
Dei plantele provenite din iradierea seminelor cu neutroni manifest tulburri
profunde, dnd natere la poriuni de esuturi necrotice, rsritul lor este mai uniform, cu un
procent ridicat de plante, deoarece n urma iradierii cu neutroni, celulele seminelor rmn
viabile ntr-o proporie mai mare i au o turgescen normal.
Razele ionizante au o influen duntoare asupra organismelor deoarece ele
descompun apa din esuturi n radicali liberi. n organismele care conin o cantitate apreciabil
de ap, supuse tratamentului cu radiaii, apa este descompus n elemente componente.
Acestea intr n aciune cu restul substanelor biologice din celule i provoac modificri
oxidante pronunate. Bacteriile ce atac plantele i animalele, supuse iradierii ntr-un mediu
cu o concentraie mai redus de oxigen, devin mai rezistente dup aciunea razelor ionizante.
Perturbrile din celulele iradiate sunt datorate i sistrii, ntr-o oarecare msur a
activitii enzimelor, care sufer o puternic oxidare.
Aciunea razelor ionizante modific i structura nucleo-proteinelor din organism.
Vom vedea mai departe c acizii nucleici, att ADN ct i ARN sufer modificri structurale
importante i determin modificri fenotipice.
Studiile citogenetice arat c n organismele iradiate, celulele i modific mersul
diviziunii. Se produc ruperi la nivelul centromerilor, cromozomilor i cromatidelor, perturbri
n formarea fusului sau aglutinarea cromozomilor.
Ruperile cromozomice duc la restructurri cromozomice, iar frecvena acestora este
proporional cu doza de radiaii. Acest lucru este valabil numai n cazul unei singure rupturi.
n cazul a dou rupturi frecvena lor este proporional cu ptratul dozei.
Ruperile cromozomice depind de faza n care se gsete celula. n ultimele stadii ale
mitozei, cromozomii nu par s sufere asemenea rupturi. n interfaz i nceputul profazei
ruptura se produce la nivelul ambelor cromatide. n profaz, fiecare cromatid poate s sufere
n mod independent aciunea radiaiilor. Numrul de rupturi este proporional cu lungimea
cromozomului. Regiunile heterocromatice sunt cele mai sensibile la rupturi.
n urma tratamentului cu radiaii sufer nu numai cromozomii ci i citoplasma
celulei. Nucleul izolat de citoplasm prin microdisecie i supus unei doze maxime de iradiere
(25.000 - 65.000 r), prezint aceleai proprieti chimice i fizice ca i nucleul extras dintr-o
celul neiradiat. Nucleul izolat de citoplasm devine radiorezistent. Dac un nucleu neiradiat
este inclus ntr-un mediu citoplasmic iradiat vor apare toate radioleziunile caracteristice, fapt
ce justific legtura dintre citoplasm i nucleu.
Seminele uscate sau umectate, se supun diferitelor doze de iradiere cu raze X, n
aparate speciale. Iradierea materialului biologic cu neutroni se face n reactori, ciclotroni i
betatroni nucleari.
Iradierea plantelor n cursul vegetaiei se face n cmpuri special amenajate n acest
scop. Plantele sunt aezate n cercuri concentrice i dup distana fa de sursa de iradiere
66
primesc diferite doze. Doza de iradiere exprim numrul perechilor de ioni ce se formeaz
ntr-un anumit volum de aer.
Unitatea de iradiere, denumit Roentgen (r) corespunde formrii ntr-un cm
3
de aer
uscat, la o temperatur de 0
o
C i la presiunea de 760 mm coloan mercur, a unui numr de 2,1
x 10
9
perechi de ioni sau ntr-un gram de aer a unui numr de 1,6 x 10
12
perechi de ioni.
Exist deja stabilit doza critic de iradiere pentru seminele unor plante de cultur.
Prin doza critic (DL 50%), se nelege doza la care supravieuiesc 50% din indivizii tratai
(tabelul 11.1).
Frecvena mutaiilor induse este mai mare n cazul tratrii seminelor vechi, pstrate
un interval de ani, dect la cele proaspete. Plantele tinere sunt mai sensibile dect cele mature,
celulele n diviziunea meiotic sunt mai sensibile dect celulele n diviziunea mitotic, iar cele
mai sensibile stadii din cursul meiozei sunt profaza avansat i metafaza.
Poliploizii sunt mai rezisteni la iradiere comparativ cu formele diploide nrudite.
Astfel, apariia mutailor clorofiliene este mai mic la speciile de gru i orz cu un numr mai
mare de cromozomi.
Organismele care au o structur ereditar heterozigot tratat cu radiaii produc un
numr mai mare de mutaii dect cele homozigote.
Mutaia este urmarea unor complicate procese morfofiziologice i biochimice n
organism, pentru care i dau concursul o diversitate de factori interni i externi. Pentru
studiul complex al acestor factori s-au ntreprins multiple cercetri, dintre care vom meniona
pe cele care prezint mai mult interes.
S-a studiat aciunea radiaiilor ionizante, n funcie de anumite temperaturi la care au
fost inute organismele nainte, n timpul i dup tratament. Aa de exemplu, scderea
temperaturii de la 20 30
o
C la 4
o
C n perioada tratamentului cu radiaii crete frecvena
mutaiilor (aberaiilor cromozomice) la Tradescantia i a translocaiilor i mutaiilor letale la
Drosophila. Aplicarea unei temperaturi ridicate (37
o
C) la o or dup iradiere, de asemeni
crete frecvena mutaiilor letale la Drosophila.
Lipsa oxigenului sau diminuarea procentului de oxigen din aer n timpul expunerii
organismului la iradiaii reduce frecvena mutaiilor letale i a translocaiilor la Drosophila, a
mutaiilor la bacterii i diferite aberaii cromozomice la diferite plante (porumb, ricin .a.).
Tratamentul combinat al razelor X cu raze ultraviolete sau cu raze infraroii sau a
substanei etilamina, duce la o cretere efectiv a mutaiilor.
Prin aciunea n complex a factorilor mutageni i a factorilor de mediu, se poate dirija
ntr-o msur oarecare obinerea de mutaii artificiale, cu valoare pentru practic. W.R.
Kaplon (1953) a descoperit c prin tratarea seminelor de orz cu bioxid de carbon i amoniac
nainte de iradiere s-a redus procentul de plante sterile. Se tie c aplicarea colchicinei nainte
de iradiere, sporete frecvena de mutaii. F. D. Amato i A. Gustafsson (1948) au tratat
semine de orz cu colchicin, dup care le-au supus tratamentului cu raze X. Prin acest
procedeu au reuit s modifice frecvena unor mutaii clorofiliene. A sczut frecvena
mutaiilor de tip albino-viridis i a crescut procentul mutaiilor de tip xantha alboviridis.
Dei s-a cercetat aciunea multipl a factorilor mutageni i a celor externi, foarte
multe rezultate rmn nc disparate fr prea multe posibiliti de generalizare. Aceasta se
datoreaz necunoaterii n suficient msur a tuturor manifestrilor care stau la baza
procesului de apariie a mutaiilor.
Pe lng semine, se pot iradia polen, muguri, tuberculi, rizomi, butai etc. n toate
aceste cazuri, se aplic doze mai mici de iradiere, n funcie de natura speciei de plante supuse
iradierii. Prin experiene s-a stabilit c, n medie, dintr-o 1000 spice de gru, apar 3-7 mai
rezistente la cdere, la boli sau mai precoce.
n lucrrile de genetic i selecie, prima generaie i generaiile urmtoare se noteaz
cu litera iniial a sursei de iradiere, indicnd anul respectiv de studiu. Astfel, generaiile
seminelor iradiate cu raze X se noteaz X
1
, X
2
, X
3
etc.; cele iradiate cu neutroni n
1
, n
2
, n
3
,
67
etc.; n ultimul timp s-a admis notarea general a generaiilor cu litera M, care reprezint
aciunea oricrei surse a factorilor mutageni (M
1
, M
2
, M
3
etc.).
Plantele din prima generaie, provenite din seminele iradiate prezint uneori
modificri teratologice, sunt sterile i au o fertilitate redus. Modificrile morfologice din
prima generaie nu se motenesc i poart denumirea de radiomorfoze. Variaiile ereditare se
observ foarte rar n prima generaie, deoarece mutaiile sunt n cea mai mare parte recesive i
se manifest numai n generaiile ulterioare. Plantele primei generaii iradiate au un pronunat
caracter de himere, deoarece se dezvolt din grupe de celule n care apar diferite leziuni i
modificri provocate de radiaii.
Experienele ntreprinse pentru obinerea unor mutante au dus la crearea de forme cu
valoare agronomic superioar la orz, ovz, mazre, soia, in, mutar alb, rapi i altele.
Radiaiile ultraviolete sunt mai puin folosite n radiogenetic, deoarece i
modificrile genetice pe care le produc sunt mai puin importante. Ele produc mai ales mutaii
genice i foarte rar restructurri cromozomice. Provoac toate tipurile de mutaii. Acioneaz
mai eficace atunci cnd lungimea lor de und este n jur de 2.600 . Razele cu aceast
lungime de und au o aciune mai mare asupra structurii moleculei de ADN, alternd structura
normal a bazelor azotate. S-a constatat c bazele pirimidinice sunt mai sensibile fa de
aciunea UV dect bazele purinice. Cu ct ne ndeprtm spre stnga sau spre dreapta acestei
lungimi de und eficacitatea lor scade. Eficacitatea razelor ultraviolete, n funcie de lungimea
de und de 2.600 , coincide de fapt cu spectrul de absorbie al ADN.
Razele ultraviolete au o aciune germicid i de aceea n doze mari, aplicate la
microorganisme omoar o parte din germeni. Microorganismele sunt ns destul de sensibile
la UV. Uneori numai simpla iradiere a mediului de cultur nainte ca el s fie nsmnat,
provoac mutaii.
Temperatura

Temperatura este un agent mutagen slab. Aciunea ei a fost sesizat n special la
Drosophila. Odat cu ridicarea temperaturii la care sunt meninute mutele, frecvena
mutaiilor crete. Creterea sau scderea treptat a temperaturii determin o cretere
nesemnificativ a frecvenei mutaiilor.
Mult mai eficace sunt ocurile de temperatur, aplicate pentru o perioad scurt de
timp. Prin tratarea larvelor de Drosophila cu temperaturi de 3638
0
C, timp de 12 14 ore,
frecvena mutaiilor letale crete de dou ori fa de cea a larvelor crescute la temperaturi
normale. Dac ocul termic este de 6
o
C timp de 25' - 40', frecvena mutaiilor crete de trei
ori fa de cea a larvelor crescute la temperaturi normale.
S-au fcut ncercri pentru a pune n eviden efectul variaiilor de temperatur
asupra mutabilitii diferitelor specii de plante i animale, dar nu s-au putut formula concluzii
generale.

Substanele chimice mutagene

Aciunea mutagen a unor substane a fost pus n eviden mai ales n ultimele
decenii. Oehlkers, n 1943 (dup Serra A. J., 1968) descoper aciunea de dezintegrare a
cromozomilor de Oenothera prin tratarea acesteia cu uretan. Cercetri sistematice fuseser
iniiate nc din 1940 de ctre C. Auerbach i J. M. Robson Primele rezultate s-au obinut prin
tratarea Drosophilei cu iperit (gaz mutar), obinndu-se peste 24% mutaii letale sex-linkate.
Ulterior s-au obinut rezultate i la plantele superioare, la ciuperci i microorganisme.
n prezent, se cunosc un numr foarte mare de substane chimice cu efect mutagen.
Dat fiind structura lor, de la cea mai simpl, la cea mai complex, este greu de clasificat dup
un anumit criteriu. Modificrile produse de ele sunt asemntoare cu cele ale mutaiilor
spontane. Nici una nu posed specificitate pentru inducerea unui anumit tip de mutaie
(tabelul 11.2.).
68
Tabelul 11.2.
Substane mutagene i eficacitatea lor la cteva specii
Nr
crt
Substana mutagen Drosophila
Cromozomi
plante
Bacterie Neurospora
1. Iperita + + + +
2. Apa oxigenat ? - + +
3. Oxizi organici + + ? +
4. Formaldehid + + + +
5. Diazometan + - ? +
6. Propiolacton ? + ? +
7. Cazein ? + + +
8. Uretan + + + -
9. Fenoli + + + -
10 Etilenimin + + ? +
11 Ceton + ? ? -
12 Epoxizi i diepoxizi + + ? +
13 Penicilin ? + ? ?
14 Carcinogene ? ? + -
15 Dezoxicolat de Na ? ? + -
16 Acriflavin ? + + ?
17 Clorur de fier - ? + ?
18 Clorur de mangan ? ? + ?
19 Clorur de aluminiu ? + ? ?

Substanele chimice se administreaz n raport cu specia de plant sau animal. De
exemplu, la Drosophila s-a acionat asupra larvelor prin soluii administrate sub form de
aerosoli. Substanele ptrund n trahee i de aici ajung n gonade. Prin contact direct cu soluia
se pot trata sporii de ciuperci, polenul, meristemele vegetale.
Aciunea acestor substane provoac n organismul n care au ptruns modificri
biochimice i fiziologice. La nivelul cromozomilor, se produc ruperi cromozomice i ca
urmare reconstrucii de diferite tipuri, corelate cu modificri fenotipice. La nivelul genei se
produc mutaii genice. ntreaga aciune a substanelor depinde de foarte muli factori pe care-i
vom analiza n cele ce urmeaz.
n primul rnd, o anumit substan poate avea o influen mutagen asupra unei
specii, iar asupra alteia s nu exercite nici un fel de influen. Aa de exemplu, apa oxigenat
exercit o influen mutagen la bacterii sau Neurospora, dar nu are nici un efect asupra
plantelor. Penicilina constituie factor mutagen numai pentru plante.
Aciunea mutagen a substanelor depinde i de stadiul de dezvoltare a celulelor
sexuate sau embrionare. De exemplu, uretanul are aciune numai asupra celulelor sexuate
mascule de Drosophila deja formate i nu influeneaz spermatogoniile.
Formaldehida acioneaz numai asupra gameilor masculi, cnd ei se gsesc n stadiu
timpuriu de dezvoltare. Asupra femelelor, indiferent de stadiul n care se gsesc, aceast
substan nu are nici o influen asupra genelor din ovule.
n afar de factorii menionai mai sus, pot exista i diferii factori exteriori, care n
combinaie cu agenii mutageni pot mri sau diminua eficacitatea lor.
Substanele chimice mutagene care provoac modificri n structura acizilor nucleici
sunt foarte variate. Exist o gam de substane, precursori ai ADN, care au o structur analog
bazelor azotate, care blocheaz formarea nucleotidelor i n consecin sinteza ADN. n
tabelul 11.3 sunt menionate cteva cu aceast nsuire. Dintre ele, azaserina s-a dovedit
eficient n blocarea bazelor purinice. Adenina induce aberaii cromozomice att la plante ct
i la animale, producnd rupturi i schimburi cromatidice.
Unii analogi ai bazelor purinice i pirimidinice pot fi ncorporai n molecula acizilor
nucleici n locul bazelor azotate normale. Ei au constituia nucleilor purinici sau pirimidinici
la care s-a adugat sau substituit anumite grupri funcionale sau atomi. Cei mai frecvent
69
folosii sunt derivaii halogenai ai uracilului (5-bromuracil, 5-cloruracil, 5-floruracil, 5-
ioduracil) sau derivai aminai ai purinei (2 amino-purina i 2,6 diamino-purina).
Derivaii halogenai ai uracilului nlocuiesc timina, un analog al acestuia. Aceasta se
vede i din constituia lor (figura 11.3.).
Bacteria Escherichi coli, fiind cultivat pe un mediu ce conine 5-bromuracil a
produs mutante, la care perechea de baze adenina-timina a fost nlocuit cu perechea guanina-
citozina, n felul urmtor: adenina-timina-adenina-5-bromuracil-guanina-5-bromuracil-
guanina-citozina. Mai nti, adenina se leag de 5-bromuracil n loc de timin, dintr-o eroare
5-bromuracil se leag de guanin n locul adeninei, iar, n final, guanina se leag n mod
normal de citozin.
n mod analog, 2 amino-purina nlocuiete adenina n ncorporare, prin mperechere
cu timina: adenina-timina-2-amono-purina-timina-aminopurina-citozina-guanina-citozina.
ncorporarea analogilor bazici a fost studiat la fagi i bacterii demonstrndu-se c
ncorporarea analogilor are loc numai ntr-o singur caten.
O alt categorie de substane (acidul nitros, hidroxilamina, hidrazina .a.) au o
aciune primar asupra acizilor nucleici acionnd fie numai asupra bazelor azotate fr a
modifica lanul glucido-fosforic, sau modific att bazele azotate ct i lanul glucido-fosforic
(alkilanii, peroxizii organici, clorura feroas .a.).
Agenii alkilani, dintre care face parte i iperita (gaz mutar) se numesc astfel,
deoarece conin un radical numit alkil (metil, etil, propil), care poate fi transferat
nucleotidelor. Majoritatea lor opresc diviziunea mitotic, de aceea sunt folosii i n
tratamentul cancerului. Ei intr n reacie cu molecula de ADN unde pot produce modificrile
urmtoare: ruperea coloanei glucido-fosforice, alkilarea bazelor purinice i pirimidinice,
depurinizarea moleculei de ADN, blocarea mitozei prin formarea unei legturi transverse
intercatenare. Efectul mutagen al agenilor alkilani a fost pus n eviden la bacterii,
Drosophila melanogaster, Neurospora crassa, Vicia faba .a. Substanele alkilante acioneaz
n perioada S a ciclului mitotic.
Acidul nitros (HNO
2
) este un agent mutagen care acioneaz asupra bazelor purinice
i pirimidinice, dezaminndu-le. Prin tratarea ARN din virusul mozaicului tutunului cu acid
nitros, se produce dezaminarea bazelor azotate i adenina a trecut n hipoxantin, guanina n
xantin iar citozina n uracil (figura 11.4.).
Aceste treceri au repercusiuni asupra blocrii biosintezei unei enzime i n consecin
asupra unei proteine.
Acidul nitros produce mutaii i la fagii T
4
, la Escherichia coli, la stafilococi .a.
Hidroxilamina (NH
2
OH) acioneaz n special asupra citozinei care face parte din
bazele pirimidinice. Ea provoac o dezaminare a citozinei i transformarea ei n uracil. A fost
experimentat asupra virusului mozaicului tutunului, asupra fagului T
4
.
Acridinele sunt colorani bazici care produc mutaii, acionnd asupra moleculelor de
ADN, dar ale cror mecanisme nu sunt ns bine elucidate.
n afar de substanele artate mai sus se mai cunosc i altele cu aciune mutagen: hidrazina,
formaldehida, clorura de mangan, peroxizi organici, ap oxigenat, clorur feroas .a.

Factorii mutageni biologici

Cercetrile care s-au efectuat n ultimii ani la microorganisme au scos n eviden c
virusurile i micoplasmele produc mutaii la plante i animale. Se cunosc ribovirusurile care
produc sarcomul la gini i leucemia la psri i mamifere. Dintre dezoxiribovirusuri pot fi
menionate: virusul poliomei sau virusul oncogen. Teoria virotic a cancerului uman ctig
tot mai mult teren. Este vorba de ribovirusuri defective care se integreaz n cromozomii
umani. Dar ptrunderea virusurilor n celul determin restructurri cromozomice, pulverizri
cromozomice. Sunt citate chiar i apariii de mutaii genice.
70
Micoplasmele, cele mai mici organisme, de dimensiuni cuprinse ntre cele mai mici
virusuri i cele mai mici bacterii, capabile i de via independent, introduse n culturi de
celule produc restructurri i pulverizri cromozomice. La nivel molecular, sinteza ADN
micoplasmic oprete sinteza ADN n celula gazd.

Mecanismul molecular al mutaiilor

Deoarece un anumit tip de secven nucleotidic este purttoarea unei anumite
informaii ereditare, orice schimbare a acesteia schimb i coninutul informaiei. n
procesul de diviziune celular, aceast schimbare se va transmite i celulelor fiice.
Se cunosc astzi unele substane chimice, care venind n contact cu organismele sau
numai cu acizii nucleici extrai din ele, modific structura acestora i fac s apar mutaii.
Schimbrile se produc n anumite regiuni ale moleculei i nu au nimic comun cu
restructurrile cromozomice ce se produc n cromozomi.
Schimbarea secvenei nucleotidelor se refer de fapt la schimbarea bazelor azotate,
acestea constituind elementul mobil. Exist mai multe modaliti de schimbare a lor:
substituia, deleia, adiia i inversia.
Prin substituie, se nelege nlocuirea unei baze purinice sau pirimidinice printr-o
alt baz purinic sau pirimidinic. Dac aceast nlocuire are loc numai ntr-o caten, odat
cu replicarea moleculei, nlocuirea se va transmite i n catena complementar. nlocuirea este
i ea de dou tipuri: a) cnd o baz purinic este nlocuit cu o baz purinic, iar una
pirimidinic tot cu una pirimidinic, ea poart numele de tranziie (de exemplu se nlocuiete
adenina cu guanina sau timina cu citozina); b) cnd o baz purinic este nlocuit cu o baz
pirimidinic sau invers, poart numele de transversie.
Deleia este pierderea uneia sau mai multor nucleotide, modificnd mesajul genetic.
Adiia este adugirea uneia sau mai multor nucleotide n cadrul secvenei iniiale.
Inversia este schimbarea ordinii unui numr de baze ntr-un segment al catenei din
molecula ADN.
Pentru a da o explicaie diferitelor tipuri de modificri structurale a ADN, Watson i
Crick au emis teoria copierii greite n procesul de replicaie a ADN. Schimbarea de secven
a unei baze va comanda n procesul de sintez baza corespunztoare cu care se va lega catena
nou, complementar. Aceast nou ordine va fi copiat i la o nou replicaie a moleculei de
ADN.
Mutaii ale acizilor nucleici s-au obinut prin aciunea cu diferii ageni mutageni, fie
asupra organismului, fie direct asupra acizilor nucleici. n cazul radiaiilor ionizante,
mecanismul de obinere a mutaiilor la nivel molecular nu este nc complet elucidat. Exist
ipoteze, care susin c acestea produc ruperi ale moleculei de ADN, urmate de realipirea
fragmentelor n diferite poziii. Razele ultraviolete cu lungimea de und de 2600 acioneaz
asupra bazelor purinice i pirimidinice. S-a demonstrat acest lucru acionndu-se direct asupra
acestor baze. S-a constatat c acestea sunt sensibile la tratamentul cu raze ultraviolete i se
descompun n mod difereniat. Temperaturi anormale pot produce alterri n molecule de
ADN: disocierea catenelor i depurinizarea catenelor de ADN.

Importana mutaiilor

n natur, supravieuiesc formele mutante care favorizeaz individul i deci i specia
creia i aparine. Ele pot constitui puncte de plecare pentru formarea de noi specii. Mutaia
are, deci, rol n evoluie.
Mutaiile artificiale se obin cu ajutorul unor metode ce depind de specie, factorul cu
care se acioneaz, momentul n care se aplic tratamentul .a. Dat fiind efectul foarte variat,
puine mutaii prezint interes pentru amelioratorul de plante sau animale. De aceea, este
necesar pentru obinerea de mutaii valoroase la plantele de cultur s se foloseasc un numr
71
foarte mare de indivizi. De multe ori se opresc drept genitori, mutante care posed multe
caractere i nsuiri defectuoase, dar care conin una, dou nsuiri valoroase. Prin hibridare i
selecie, aceste caliti pot fi transmise la descendeni, realizndu-se noi soiuri.
La animalele de producie, s-au folosit i se folosesc puin mutaiile artificiale
deoarece formele mutante, cu defecte letale cer cheltuieli care ntrec beneficiile. n general,
foarte rar s-a reuit s se obin mutante valoroase.
O importan deosebit o constituie obinerea de mutaii la microorganisme. Mutaia
i recombinarea, dup prerea unor microbiologi, sunt singurele mecanisme prin care
bacteriile pot deveni rezistente sau sensibile la antibiotice. Microorganismele ofer multiple
posibiliti de studiu al procesului mutaional, la diferite niveluri de organizare a materiei vii,
de la individ pn la molecul.
Una din direciile actuale de cercetare a mutaiilor este de a gsi posibilitile de a
induce mutaii dup dorina omului. Problema nu va putea fi rezolvat prin studierea
mutaiilor cromozomice, care nseamn schimbarea unor segmente mari, de cele mai multe ori
cu caracter letal, ci prin mutaiile punctiforme ce se produc n structura moleculelor de acizi
nucleici. Aceste schimbri modific biosinteza proteinei i n consecin fenotipul.

Mutaiile de genom

Speciile de plante i animale posed n mod obinuit un numr constant de
cromozomi, n celulele somatice 2n, iar n cele sexuale, n. Numrul de cromozomi a speciilor
eucariote variaz n limite foarte mari: Ascaris megalocephala var. univalens are 2n = 2, n
timp ce radiolarul Aulacantha 2n = 1600.
n cadrul unor genuri, s-a constatat c unele specii au un numr de cromozomi ce
reprezint un multiplu al unui numr de cromozomi de baz sau genom, care se noteaz cu x.
De exemplu, n cadrul genului Triticum, exist specii ce posed 14, 21 i 42 de cromozomi,
deci, un multiplu al genomului x = 7; n cadrul genului Rosa, speciile pot avea 14, 21, 28, 35,
42, 56 cromozomi, genomul n acest caz fiind x = 7 .a.
Celulele sexuale, coninnd cte un set cromozomic, sunt haploide. Numrul
haploid de cromozomi (n) nu corespunde ntotdeauna cu numrul de cromozomi de baz (x).
De exemplu, la Triticum monococcum x = 7 i n = 7, pe cnd la Triticum aestivum, x = 7 dar n
= 21. Cnd numrul haploid de cromozomi corespunde cu numrul de cromozomi de baz
(genomul sau numrul monoploid), numrul cromozomilor din celulele somatice corespunde
cu starea diploid a organismului, iar cnd n celulele somatice exist un multiplu al
numrului monoploid, determin starea poliploid.
Fenomenul de multiplicare a numrului de genomuri se numete poliploidie.
Poliploidia este considerat o mutaie de genom.
Exist cazuri cnd variaia numrului de cromozomi se manifest chiar la nivelul
unor esuturi diferite ale aceluiai individ. Astfel, n cazul spanacului (Spinacea oleracea)
care are 2n = 12, n celulele meristematice ale rdcinilor s-au identificat n celule cu 2n = 24,
48 i 96 cromozomi, iar la mamifere, n ficat, sunt celule cu numr dublu sau quadruplu de
cromozomi.

Clasificarea variaiilor numeric cromozomice

innd seama de multitudinea de tipuri de variaii numeric cromozomiale, este
necesar clasificarea acestora, folosindu-se nomenclatura din literatura de specialitate.
Aceast clasificare este redat n figura 13.1.
Euploidia se mparte n: monoploidie, cnd celulele somatice ce posed un numr de
cromozomi egal cu cel al genomului (x) i poliploidie, cnd celulele somatice au un multiplu
al numrului de genomuri.

72

monoploidia perisoploidia
Euploidia autopoliploidia
poliploidia artioploidia
alopoliploidia
(amphiploidia)

Variaii numeric
cromozomice

nulisomia (2n-2)
hipoploidia
monosomia (2n-1)
Aneuploidia
trisomia (2n+1)
hiperploidia
tetrasomia (2n+2)

Clasificarea variaiilor numeric cromozomice

n funcie de numrul garniturilor cromozomice poliploizii pot fi triploizi (3x), tetraploizi
(4x), pentaploizi (5x), hexaploizi (6x) etc., observndu-se c unii conin un numr par de
genomuri i se numesc artioploizi (4x, 6x, 8x etc.), iar alii un numr impar de genomuri,
denumii perisoploizi (3x, 5x, 7x, 9x etc.).
n funcie de originea garniturilor cromozomice poliploidia poate fi de mai multe tipuri:
autopoliploidia, cnd organismele posed mai multe garnituri omoloage, rezultate prin
multiplicarea genomului propriu; alopoliploidia, cnd organismul are mai multe garnituri
cromozomice, dar de origine diferit, rezultate n urma hibridrilor interspecifice.
Organismele care nglobeaz genomurile a dou sau mai multe specii, urmat de o dublare a
numrului de cromozomi, se numesc amphiploide.
Poliploidia este urmat de o mrire a cantitii de ADN per nucleu. Exist specii la care, dei
are loc o multiplicare a numrului de genomuri, cantitatea de ADN nu se modific acestea
fiind denumite pseudopoliploide.
Modificarea numrului de cromozomi dintr-o garnitur cromozomic, prin absena unuia sau
a mai multor cromozomi sau prezena n plus a unuia sau mai multor cromozomi, se numete
aneuploidie. Mrirea numrului de cromozomi n cadrul genomului se numete hiperploidie,
iar micorarea numrului de cromozomi, hipoploidie.
Aneuploidia este nsoit de modificarea cantitii de ADN per nucleu, exist ns i
fenomenul de pseudoaneuploidie, cnd numrul de cromozomi din genom variaz, ns
cantitatea de ADN rmne constant.


Monoploidia

Denumit i haploidia adevrat sau euhaploidie, const n faptul c organismele posed n
celulele somatice un numr de cromozomi egal cu numrul de cromozomi de baz sau un
genom (2n = x).
Avnd un singur genom n celulele somatice, monoploizii au o serie de caracteristici
morfologice i biologice, cum ar fi: sunt aproape complet sterili, ceea ce i face inutilizabili n
practic. Avantajul monoploizilor const n faptul c, n urma studiilor genetice, dac prezint
caracteristici avantajoase, numrul cromozomilor poate fi dublat, obinndu-se linii complet
homozigote. Dup testarea capacitii combinative a liniilor respective, unele pot fi folosite ca
73
genitori n obinerea de hibrizi. Utilizarea monoploizilor scurteaz foarte mult timpul de
obinere a liniilor total homozigote, de la 6-8 ani dup metoda clasic, la numai doi ani.
n mod natural, monoploizii apar cu o frecven redus, de la 0,01% pn la 6%, pe
urmtoarele ci:
a) ginogenez, cnd embrionii se dezvolt din oosfere nefecundate;
b) androgenez, cnd embrionii rezult din celule mascule (fr fecundare);
c) apogamie, cnd embrionii rezult din sinergide sau antipode.
Avnd n vedere importana monoploizilor, monoploidia a fost indus prin iradierea polenului
cu raze X sau UV, pentru a distruge unul din cei doi nuclei spermatici i n felul acesta,
reducndu-se posibilitatea fecundrii oosferei, crete ansa apariiei monoploizilor sau
inactivarea ambilor nuclei spermatici cu diferite substane chimice, caz n care, oosfera
nefecundat poate forma un embrion monoploid.
Din punct de vedere morfo-fiziologic, monoploizii, comparativ cu formele normale din care
au provenit, au o vigoare redus, cretere lent, grad ridicat de sterilitate.
Diviziunea mitotic la organismele monoploide prezint mari modificri, dar mai ales meioza,
pe parcursul creia, nerealizndu-se sinapsa cromozomilor, deoarece nu exist omologie ntre
cromozomi, nu se formeaz celule sexuale sau cele ce se formeaz sunt neechilibrate genetic,
ceea ce determin sterilitatea monoploizilor.
Haploidia este fenomenul de reducere la jumtate a numrului de cromozomi n
celulele somatice. Dup modul cum rezult din diploizi, tetraploizi, hexaploizi etc., haploizii
pot fi: monoploizi, diploizi, triploizi etc. Haploidia corespunde numai ntr-un singur caz cu
monoploidia, atunci cnd reducerea la jumtate a numrului de cromozomi are loc la
organismele diploide (2n = 2x).
Haploidia poate fi ntlnit ca fenomen natural, la unele Bryophitae i Talophitae, la masculii
unor insecte (albine, viespi, termite), la unele metazoare i ciuperci (Aspergillus, Fusarium
etc.) i n gametofitul plantelor superioare.
Cnd haploidia este util, este provocat prin androgenez sau prin eliminarea de cromozomi.
Haploizii i monoploizii au o deosebit importan teoretic i practic:
- avnd un singur set de cromozomi, studiul fiecrui cromozom a furnizat informaii asupra
valorii genetice a unui genom;
- din punct de vedere citologic, monoploizii ofer posibilitatea cunoaterii modului de
segregare a cromozomilor neperechi, n meioz, realizarea sau nu a sinapsei, arat gradul de
nrudire dintre specii;
- diploidizarea monoploizilor duce la realizarea liniilor complet homozigote, ntr-un timp
scurt;
- monoploizii androgeni ofer posibilitatea studiului efectului citoplasmei strine asupra
genotipului, transformarea ntr-un timp scurt a liniilor consangvine normale n linii
androsterile. n ultimul timp, studiul acestor forme preocup colective mari de geneticieni i
amelioratori, deoarece obinerea de hibrizi pe calea monoploidiei este simplificat i de scurt
durat.

Poliploidia

Primele cercetri referitoare la fenomenul de poliploidie au fost efectuate de I. I. Gherasimov
(1889) care a dublat numrul de cromozomi la alga Spyrogira, prin scderea temperaturii n
timpul metafazei.
Denumirea de poliploidie a fost introdus de G. Winkler (1916), pentru a desemna plantele ce
posedau un numr multiplicat de genomuri.
n funcie de originea garniturilor cromozomice, poliploidia poate fi de dou feluri:
autopoliploidia (autoploidia) i alopoliploidia (aloploidia).
74
Autopoliploidia este multiplicarea garniturilor de cromozomi pe seama aceluiai numr de
baz al unei specii. Multiplicarea este cauzat de tulburri n procesele de diviziune mitotic
sau meiotic i anume:
- n diviziunea meiotic, din cauza nereducerii cromatice se formeaz gamei cu acelai numr
de cromozomi, egal cu cel din celulele somatice. Un asemenea gamet diploid, n procesul de
fecundare cu un al doilea gamet, normal, haploid, va forma un zigot, respectiv un organism
triploid (2n = 3x). Dac ambii gamei sunt diploizi se va forma un organism tetraploid (2n =
4x).
- n diviziunea mitotic pot interveni cauze care s opreasc formarea fusului nuclear,
migrarea cromozomilor spre cei doi poli ai celulei ne mai avnd loc. Ca urmare, nu se mai
formeaz celulele fiice, cromozomii, n numr dublu, rmn n aceeai celul. Dac
fenomenul are loc la nceputul formrii zigotului, organismul devine tetraploid iar gameii pe
care i va forma vor fi diploizi. Acetia vor menine mai departe autotetraploidia.
- n diviziunea mitotic ntr-un singur organ, de exemplu al unei plante, se va produce la o
celul fenomenul de dublare a numrului de cromozomi. Dintr-o astfel de celul, cu un
numr dublu de cromozomi, poate lua natere o formaiune vegetativ, o ramur, care va
forma n flori gamei diploizi. Prin autofecundare vor aprea forme tetraploide.
Mai recent J. A. Serra (1968) consider ca prim factor al formrii autopoliploizilor
endomitoza, n care nu se formeaz fusul de diviziune, membrana nuclear nu se
fragmenteaz, astfel c un nucleu diploid devine 4n, 8n, 16n etc.
Se ntlnesc dou tipuri de plante autopoliploide:
Perisoploide, cu un numr impar de garnituri cromozomice (3x, 5x, 7x). Din cauza numrului
impar de genomuri repartiia echilibrat a cromozomilor n gamei nu este posibil, astfel de
plante vor produce gamei sterili, supravieuind numai prin reproducerea vegetativ.
Artioploide, cu un numr par de garnituri cromozomice (2x, 4x, 6x). La aceste plante
meioza decurge normal. Cu toate acestea, cromozomii omologi, n profaza meiozei, se
asociaz n mod diferit, formnd univaleni. Dac polivalenii au un numr impar de
cromozomi, repartiia regulat a cromozomilor la cei doi poli ai celulei devine imposibil i,
ca urmare, gameii formai sunt sterili.
Prezena sterilitii la un numr mare de plante autopoliploide a determinat pe unii autori s
considere c exist o corelaie ntre autopoliploide, sterilitate i nmulirea vegetativ a
plantelor. La genurile Chrysanthemum, Polygonum i Discorea, formele diploide nu au
rizomi, n timp ce cele tetraploide, hexaploide i octoploide au. Din cauza sterilitii ele s-au
meninut pe cale vegetativ.
Meioza la autotetraploizi este variabil, putnd decurge normal, dar existnd i posibilitatea
apariiei multor anomalii. Aceste anomalii se datoreaz prezenei n profaza I a cte patru
cromozomi omologi, deci n stadiul de zigonem vor forma sinaps patru monovaleni, nu doi
(bivaleni).
n meioza autotetraploizilor, datorit asocierii ntmpltoare a cromozomilor, are loc o
segregare fenotipic i genotipic, diferit de cea a diploizilor. La un diploid heterozigot Aa,
n F
2
segregarea genotipic este 1/4 AA : 2/4 Aa : 1/4 aa, iar cea fenotipic, dominant,
recesiv. n descendena autogam a unui tetraploid AAaa, n funcie de repartiia alelelor n
cei patru cromozomi, pentru acelai locus pot aprea cinci genotipuri: AAAA (quadruplex),
AAAa (triplex), AAaa (duplex), Aaaa (simplex), aaaa (nulliplex).
Din cauza deficienelor ce apar n meioz, autopoliploizii nu au, n general, anse de a
supravieui, aa c rolul lor n evoluie este mai puin important. Exist specii ale unor genuri
care au aprut totui pe calea autopoliploidiei: n genul Chrysanthemum, specii ce au 18, 36,
54, 72, i 90 de cromozomi, n genul Solanum, specii ce au 24, 36, 48, 60, 72, 96, 108, 120 i
144 cromozomi precum i alte specii ale genurilor Medicago, Arachis, Phleum, Festuca, Poa
.a.
Alopoliploidia (amphipoliploidia) este tipul de poliploidie care apare n urma
hibridrii ntre specii, prin adiia de garnituri cromozomice strine. Diferena dintre genomuri
75
face ca ntre garniturile de cromozomi a alopoliploizilor s nu existe omologie. Acestea sunt
diferite att ca numr de cromozomi ct i ca tip de gene. Cnd alopoliploidul nsumeaz cele
dou garnituri cromozomice somatice ale prinilor, el se numete amphidiploid.
Alopoliploizii sunt n majoritatea cazurilor sterili. Din cauza neomologiei dintre cromozomi,
n profaza meiozei fiecare cromozom se comport independent, ca univalent. n anafaza
meiozei, ei se distribuie n mod neregulat la cei doi poli, aa nct n gamei va aprea un
numr diferit de cromozomi. Gameii vor fi sterili, n afar de cazul unei omologii pariale,
cnd fertilitatea lor va fi sczut.
Alopoliploizii care nsumeaz cele dou garnituri diploide de cromozomi a celor dou specii
parentale se numesc amphidiploizi. Ei sunt fertili deoarece fiecare cromozom avnd omologul
su, are cu cine s se conjuge n meioz i formeaz bivaleni pentru cromozomii fiecrei
specii n parte.
Dac din gameii care particip la fecundare unul este haploid iar cellalt diploid, se va forma
un alotriploid. Acesta este steril deoarece cromozomii unei specii va forma bivaleni, dar a
celeilalte vor rmne univaleni i se vor distribui neuniform n meioz la polii celulei.
Amphidiploidia prezint importan att pentru meninerea ei n natur ct i pentru
activitatea practic a omului. Sunt citate n literatura de specialitate numeroase exemple
privind apariia spontan sau dirijat de om a amphidiploizilor.
L. Dicby (1912) descrie apariia unui amphidiploid, Primula kevensis (cu 2n = 36) prin
ncruciarea dintre Primula floribunda (2n = 18) cu Primula verticillata (2n = 18).
G. D. Karpecenko (1927) obine un amphidiploid Raphanobrassica (2n = 36) prin
ncruciarea dintre Raphanus sativus (2n = 18) cu Brassica oleracea (2n = 18) (figura 13.2.).
J. Gregar i F. Sansome (1930) obin un amphidiploid Phleum pratense hexaploidum (2n =
42) ncrucind Phleum pratense (2n = 14) cu Phleum alpinum (2n = 28).
A. Mntzing (1932) obine amphiploidul Galeopsis tetrahit (2n = 32) din ncruciarea lui
Galeopsis pubescens (2n = 16) cu Galeopsis speciosa (2n = 16).
H. A. Jones i A. E. Clarke (1942) ncrucind Allium cepa (2n = 16) cu Allium fistulosum (2n
= 16) au obinut amphidiploidul cu 2n = 32 (fig. 13.3.).









Amphiploidia la Allium cepa: A-cromozomii la Allium cepa;
B-cromozomii la amphiploid; C-cromozomii la Allium fistulosum
(dup Jones i Clarke, 1942)

Dac formele noi prezint avantaje pentru producie, ele pot fi utilizate ca soiuri.
Amphidiploidia natural poate constitui puncte de plecare n geneza unor specii noi, dar
numai n cazul n care ea modific ereditatea n avantajul perpeturii lor. n caz contrar, dispar
fr a lsa urme.
Alopoliploizii se pot obine din ncruciarea a dou, dar i a mai multor specii de plante. De
obicei, hibrizii dintre dou specii sunt sterili, numai cei amphidiploizi sunt fertili. Acetia,
ncruciai cu o alt specie diploid produc un hibrid alotriploid, care de asemenea este steril.
Hibridul alotriploid poate deveni fertil n cazul n care reuim s-i dublm garnitura de
cromozomi prin autopoliploidie.
n funcie de modul cum ia natere, amphidiploidia poate fi de trei tipuri: amphidiploidie
genomic, amphidiploidie segmental, autoalopoliploidia.

76
Amphiploidia genomic sau clasic este rezultatul hibridrii ntre specii cu genomuri diferite
(ex. AA x BB) i ca urmare, cromozomii uneia nu realizeaz sinapse cu cromozomii
celeilalte, planta fiind steril. Prin dublarea numrului de cromozomi a hibridului din
generaia F
1
se obin amphidiploizi fertili.
Amphidiploidia segmental este tipul de amphidiploidie care provine din hibridarea unor
specii cu genomuri parial sau complet omoloage, astfel c, dup ce se realizeaz dublarea
numrului de cromozomi, n meioz cromozomii nu se mperecheaz normal, ci formeaz
tetravaleni, trivaleni i univaleni, determinnd un anumit grad de sterilitate.
Autoalopoliploidia este fenomenul prin care se dubleaz numrul de cromozomi la un
amphidiploid. De exemplu, amphidiploidul AABB poate deveni un autoalooctoploid,
AAAABBBB.
Alopoliploidia poate determina diferite grade de sterilitate, deoarece tipurile de abateri de la
mersul normal al meiozei sunt foarte variate.


Modificrile morfologice i fiziologice
ale poliploizilor

Poliploidia atrage modificri fenotipice foarte variate. Variate ca proporie, ncepnd cu unele
foarte discrete, greu de sesizat i terminnd cu altele foarte vizibile, pn la gigantism; variate
ca efect vital, producnd debilitatea organismului sau vigoarea lui sporit. Modificrile pot
afecta ntregul organism sau numai o parte din el. La plante, tetraploizii prezint foarte
frecvent organe vegetative i de reproducere mult mai mari n comparaie cu diploizii din care
s-au format. n unele cazuri efectul este ns invers aa cum este la tomate unde tetraploizii
sunt de dimensiuni mai mici dect plantele diploide.
O caracteristic general a poliploizilor este creterea n dimensiune a celulelor. Este un
caracter dup care se poate pune n eviden gradul de poliploidie al plantelor. Stomatele, n
general, sunt mai mari la plantele tetraploide dect la cele diploide. La Crepis capilaris (2n =
6) exist o corelaie direct ntre mrimea celulelor i numrul de garnituri cromozomice ce se
gsesc n nucleul acestora.
Creterea n dimensiune a celulelor atrage dup sine, n unele cazuri, scderea numrului de
celule din esutul respectiv. Acest fapt s-a observat, de exemplu, n frunzele muchiului
Funaria.
Mrirea volumului celulelor atrage dup sine i modificarea raportului dintre substanele care
se gsesc n celule i de aici i modificri de ordin fiziologic.
Frunzele plantelor poliploide pot prezenta modificri vizibile n ceea ce privete forma lor,
mrimea sau culoarea. La tetraploizi, n general, frunzele sunt mai groase, mai late i de o
culoare mai nchis. Creterea n dimensiuni a frunzei este nsoit foarte adesea de scderea
numrului de frunze pe plant.
Creterea n mrime a ligulei la graminee, face posibil distingerea plantelor poliploide de
cele diploide normale.
Exist de asemenea, o corelaie direct ntre gradul de poliploidie a plantei i dimensiunea
grunciorilor de polen i a numrului porilor germinativi ai polenului. Pe aceast constatare se
bazeaz i una din metodele de determinare a gradului de poliploidie la plante.
Tulpinile plantelor poliploide prezint de asemenea n numeroase cazuri dimensiuni mai mari
i o ramificare mai abundent.
O alt caracteristic, poate cea mai des ntlnit a plantelor poliploide, este creterea
dimensiunilor florilor i seminelor. Paralel cu aceasta, scade numrul lor pe plant.
Toate modificrile morfologice observate la poliploizi sunt corelate de modificri fiziologice
i genetice. Faptul c poliploizii apar n natur n condiii neobinuite, la limitele de
rspndire a arealului ocupat de diferite genuri, ei sunt dotai cu anumite nsuiri de rezisten
la factorii nefavorabili.
77

Poliploidia natural i rolul acesteia n evoluie

Hugo de Vries (1901) a studiat ndeaproape specia Oenothera lamarckiana i a
constatat c ea se caracterizeaz printr-un polimorfism accentuat. Una dintre aceste forme, cu
dimensiuni foarte mari a denumit-o Oenothera gigas.
Gates, n 1909 a constatat c aceast form avea un numr dublu de cromozomi (28) fa de
specia iniial.
H. Nilsson Ehle (1935) descoper un plop gigantic, care un an mai trziu este determinat de
Mntzing ca triploid.
Scherz a observat un caz de poliploidie la via de vie, Riesling de Mosela cu 4n = 76
cromozomi fa de soiul Riesling, ce avea 2n = 38 cromozomi. Noul soi se prezint ca o
mutant cu struguri cu boabe mari, cu coacere mai timpurie i cu procent de zahr mai mare.
Navasin (1929) face o legtur ntre fenomenul de poliploidie i arealul ocupat de anumite
specii i ajunge la concluzia c poliploizii apar mai frecvent la indivizii care au depit arealul
speciei.
Prin determinarea numrului de cromozomi, s-a constatat c diferite specii ale unor genuri, nu
sunt altceva dect serii poliploide care au aprut n mod natural.
La genul Triticum, se observ c speciile au ca numr de cromozomi un multiplu de 7:
Triticum monococcum 2n = 14 cromozomi
Triticum durum 2n = 28 cromozomi
Triticum aestivum 2n = 42 cromozomi

La genul Rumex, speciile au un multiplu de 10 cromozomi:
Rumex alpinus 2n = 10 cromozomi
Rumex domesticus 2n = 20 cromozomi
Rumex patientia 2n = 30 cromozomi
Rumex cardifolius 2n = 40 cromozomi
Rumex hymenosepalus 2n = 50 cromozomi.

Poliploidia este deci foarte frecvent n natur. Totui plantele de cultur prezint mai des
cazuri de poliploidie dect cele slbatice. Aceast constatare i-a fcut pe unii cercettori s
trag concluzia c evoluia plantelor de cultur de la formele slbatice s-a fcut prin
multiplicarea numrului de cromozomi. Apariia procesului sexual a fcut ca primul zigot s
constituie prima celul poliploid (diploid), iar endospermul angiospermelor este un triploid.
A. Mntzing arat c, n general, la speciile perene exist un numr mai mare de cromozomi
dect la speciile anuale ale aceluiai gen. De aici, trage concluzia c un numr mare de specii
au provenit din forme anuale, cu un numr mai mic de cromozomi. De asemenea, el trage
concluzia c exist o corelaie pozitiv ntre numrul de cromozomi i durata vieii unei
plante. De exemplu, porumbul autotetraploid obinut pe cale experimental este peren, n timp
ce formele anuale sunt diploide. Sorgul anual (Sorgum sudanensis) are n = 10 cromozomi, pe
cnd sorgul peren (Sorgum hallepense) are n = 20 cromozomi. Formele anuale de Taraxacum
sunt diploide, n timp ce formele perene sunt poliploide. Sunt ns i excepii, cnd la speciile
perene numrul de cromozomi este egal sau chiar mai mic dect la speciile anuale.
n evoluia plantelor autogame i a animalelor care se nmulesc asexuat, un rol important l-a
jucat autopoliploidia. La plantele alogame sau la animalele ce se reproduc sexuat, acest rol l-a
jucat alopoliploidia. Tranziiile ntre auto i alopoliploidie sunt continui i de aceea este greu
s le descoperim originea. Numai autopoliploidia poate fi absolut, n timp ce la
alopoliploidie genomurile nu pot fi ntotdeauna complet diferite. Indicaii pentru descoperirea
lor le poate da analiza meiozei: dac la o specie tetraploid exist quadrivaleni n meioz,
este vorba de autopoliploidie, dac exist numai bivaleni, este prezent alopoliploidia.
Alopoliploidia a jucat n evoluie un rol mult mai mare dect autopoliploidia.
78
O dovad c ntr-adevr unele specii noi i au originea n alopoliploidizarea unor specii vechi
sunt resintezele de specii, pe care omul le poate face pe cale artificial.
A. Mntzing (1932) a resintetizat, pe cale artificial, specia Galeopsis tetrahit (2n = 32),
ncrucind Galeopsis pubescens (2n = 16), cu Galeopsis speciosa (2n = 16). Hibridul a fost
numit Galeopsis pseudotetrahit i este un alotetraploid. E. S. Mac Fadden i E. R. Sears
(1944) ncrucind Triticum dicoccoides (2n = 28) cu Aegylops squarrosa (2n = 14) au
resintetizat specia Triticum spelta (2n = 42). H. Kihara i F. Lilienfeld (1949) au resintetizat
specia Triticum aestivum (2n = 42), ncrucind speciile Triticum persicum (2n = 28) cu
Aegylops squarrosa (2n = 14). n literatura de specialitate se ntlnesc numeroase exemple de
acest fel.

Poliploidia artificial

Cunoaterea fenomenului de poliploidie a contribuit la elaborarea unor metode speciale pentru
obinerea pe cale artificial a poliploizilor. Oricare ar fi metoda, scopul este de a aciona
asupra diviziunii celulelor sau prin procesul de hibridare, pentru a provoca multiplicarea
garniturilor de cromozomi.
Nu toate plantele se comport la fel la poliploidizare. Acesta depinde de metod, specie, soi
sau chiar individ. Dau rezultate mai bune:
- plantele cu un numr mic de cromozomi;
- plantele alogame;
- plantele folosite mai mult pentru mas verde, dect pentru fructe;
- plantele ce se nmulesc pe cale vegetativ;
Poliploizii obinui pe cale experimental prezint inconvenientul de a nu putea fi folosii
imediat n producie. De obicei, au o fertilitate sczut, produc fructe puine. Muli nu sunt
rezisteni la condiiile adverse ale mediului, la atacul duntorilor sau au un ritm de cretere
lent. Unii, din contra, prezint modificri valoroase i utile pentru practica agricol i
horticol, cum ar fi de exemplu un procent ridicat de morfin la mac, de mentol la ment, un
procent mai mare de mas verde la trifoiul rou tetraploid sau un procent ridicat de zahr la
sfecla triploid.

Metode de inducere a poliploidiei. Exist astzi diferite metode pentru producerea
poliploizilor: metode chimice, fizice i biologice.
- Metoda altoirii, cost n altoirea a dou plante din genuri sau specii deosebite i apoi
secionarea locului de concretere. Din seciune apar muguri i apoi lstari, din care unii sunt
tetraploizi. Metoda a fost elaborat de H. Winkler (1916), W. A. Greenleaf (1938) la genul
Nicotiana i E.W. Lindstrom i K. Koos (1931) la tomate (dup Raicu P., 1980).
- Metoda centrifugrii plantelor a fost elaborat de D. Kostoff (1937). Ea se bazeaz pe
aciunea forei de centrifugare asupra celulelor n diviziune, fiind mpiedicai cromozomii s
migreze la polii celulei. Se aplic pe cale restrns deoarece este greoaie i d rezultate slabe.
- Metoda acionrii cu unele insecte parazite asupra vrfurilor de cretere a plantelor. Se
folosesc diferite insecte care se hrnesc prin neparea vrfurilor vegetative a plantelor.
Aciunea mecanic, nepturile, produc perturbri n diviziunea celulelor din esuturi. Metoda
se aplic pe cale restrns.
- Metoda ocurilor de temperatur se folosete cu scopul de a influena zigotul plantelor n
primele stadii ale diviziunii. A fost elaborat de L. F. Randolph (1932) i aplicat la porumb.
Imediat dup fecundare, planta de porumb a fost inut circa 24 ore la temperaturi de 44
0
C.
Nici aceast metod nu se folosete pe scar larg.
Folosirea substanelor chimice (alcaloizi, narcotice etc.) a dus la elaborarea metodelor chimice
folosite i astzi intens la obinerea poliploizilor. Acestea i manifest aciunea, fie blocnd
cromozomii n metafaz, fie oprind formarea membranelor ce ar trebui s separe celulele
aflate n diviziune. Din prima categorie fac parte n primul rnd colchicina, acenaftenul,
79
monobromnaftenul .a.; din a doua categorie fac parte, paradiclorbenzen, monoclorbenzen .a.
Dintre toate, cea mai folosit este colchicina.
A. F. Blakeslee i A. S. Avery (1937) au elaborat diferite tehnici de aplicare a tratamentului
cu colchicin la plante i au obinut rezultate remarcabile la genurile Nicotiana, Mirabilis,
Trifolium .a. n general se folosesc soluii foarte slabe de colchicin, administrate la diferite
organe sau pri din acestea.
Se pot trata semine, prin mbibarea lor n soluii de colchicin 0,02% - 0,05%, timp de 24-48
ore. Soluia de diferite concentraii poate fi administrat pe vrfurile vegetative de tulpin sau
rdcin. Cu soluie de colchicin, se pot trata i plante mici, tuberculi, butai etc. Cu ajutorul
metodelor chimice, n diferite ri, s-au obinut forme foarte valoroase care se folosesc n
cultur; n Suedia s-au obinut dou soiuri de trifoi. n Germania au fost create linii poliploide
la Galega i Seradela (plante de nutre). n Japonia se cultiv un pepene verde triploid; n
diferite ri, i la noi, se cultiv sfecl pentru zahr triploid; de asemenea, exist n cultur
forme valoroase poliploide de secar, hric, bumbac; la plante horticole rezultate bune s-au
obinut la plante ornamentale (narcise, stnjenei, dalii, cyclamen .a), pomi (mr, pr, lmi
.a) i vi de vie.


Aneuploidia

Aneuploidia numit i heteroploidie sau polisomie este modificarea numrului diploid de
cromozomi prin adugarea sau lipsa unuia sau a mai muli cromozomi. Dup numrul de
cromozomi n plus sau n minus, ea se clasific astfel:
- nulisomie 2n-2
- monosomie 2n-1
- trisomie 2n+1
- tetrasomie 2n+2
- dubl trisomie 2n+1+1

Apariia de celule aneuploide se explic prin abateri de la segregarea normal a perechilor de
cromozomi n timpul diviziunii. Ele apar att n celulele somatice ct i n cele sexuale, de
aceea aneuploidia poate fi att mitotic ct i meiotic. Mai frecvent este aceea meiotic,
bivalenii putnd fi repartizai numai ntr-o celul, iar n alta lipsind.
Cnd garnitura diploid are un cromozom n plus, aneuploidul va avea formula 2n+1, cnd va
avea un cromozom n minus va avea formula 2n-1. n alte cazuri aneuploidul 2n+1 (trisom)
mai poate primi un cromozom suplimentar i atunci va avea formula 2n+2 (tetrasomi). Dac
adugarea de cromozomi suplimentari se face n dou perechi de cromozomi atunci se
formeaz un dublu trisom 2n+1+1. Cnd se pierde o pereche de cromozomi omologi se
formeaz un nulisom 2n-2.
Primul studiu de aneuploidie la plante a fost fcut n 1924 de ctre Blakeslee i Belling la
Datura stramonium. Aceast plant are 2n = 24 cromozomi, deci un trisom, cu 24 + 1
cromozomi. Spre deosebire de plantele obinuite, avea capsulele mai mici, i epi mai mici.
Executnd diferite ncruciri au obinut 12 tipuri de trisomi, adugnd pe rnd cte un trisom
pentru fiecare pereche de cromozomi. Toate aveau fenotipuri bine distincte.
La animale, aneuploidia a fost descoperit la Drosophila de ctre Bridges. Cazul a fost citat la
capitolul referitor la ereditatea sexului, unde s-a prezentat un caz de aneuploidie datorat
nondisjunciei primare n meioz a cromozomilor sexului. Din ncruciarea drosofilei femele
cu ochi albi cu masculi cu ochi roii, au aprut forme neateptate, femele cu ochi roii i
masculi cu ochi albi. Aceasta din cauz c n urma nondisjunciei cromozomilor X au aprut
ovule ce aveau XX i altele nici unul. Primele, fecundate cu spermatozoizi normali, au produs
trisomi XXX i XXY. Zigoii cu autosomi normali dar cu un singur X sau Y au fost
monosomi, primii, masculi sterili, ultimii neviabili.
80
n aceste cercetri, Bridges a artat c se pot aduga cromozomi suplimentari i la
cromozomii autosomi. Lipsa cromozomilor mari II i III determin letalitatea, a celor din
perechea a IV-a, foarte mici, influeneaz n sens negativ insecta, fr a provoca neaprat
moartea. Dup cum se adaug un cromozom la autosomii IV sau lipsesc, aneuploidul se
numete triplo IV sau haplo IV. Modificrile acestea atrag modificri fenotipice: Drosophila
haplo IV este de dimensiuni mai mici dect tipul slbatec i cu fertilitate sczut; Drosophila
triplo IV, din contra, are dimensiunile corpului mai mari.
Astfel de forme aneuploide au fost studiate i la alte organisme, n special la plante:
ciumfaie, tutun, porumb, tomate, cereale. Foarte multe forme aneuploide nu sunt viabile sau,
unele viabile sunt mai greu de sesizat.
Cercetrile din domeniul aneuploidiei au o mare importan teoretic i deschid perspective
largi pentru ameliorarea plantelor. nlocuirea unor cromozomi duce la cunoaterea importanei
lor ereditare i a genelor ce le conin. Prin aneuploidie se schimb numrul de cromozomi dar
nu i grupele de nlnuire. Modificarea genomului, corelat cu modificrile fenotipice
constituie o cale de obinere a unor noi soiuri.
Aneuploidia ajut i la nlocuirea sau adugarea unor cromozomi de la unele soiuri de plante
de cultur, cu cromozomi de la alte soiuri ce conin gene valoroase. S-au obinut n acest sens
diferite forme de cereale superioare unora existente n cultur. La gru, s-au transmutat
cromozomi de la alte specii ce conineau gene rspunztoare de anumite nsuiri (rezisten la
boli, secet .a.) de la secar, Aegilops .a. La tutun s-au transferat cromozomi de la alte specii
apropiate pentru a imprima rezistena la viroza tutunului.
n general, se folosesc forme monosomice sau nulisomice care se ncrucieaz cu formele ce
dein calitile ce ne intereseaz din punct de vedere economic.
Pseudoaneuploidia. Este o variaie a numrului de cromozomi ce se realizeaz cu ajutorul
unui mecanism de fuzionare-fisionare a cromozomilor nsoit de un proces de translocaie
reciproc, fr s se modifice cantitatea de ADN per nucleu. Prin fisionarea centromerului
unui cromozom metacentric, submetacentric sau subtelocentric se formeaz cromozomi
acrocentrici. Prin fuzionarea a doi cromozomi acrocentrici rezult cromozomi metacentrici,
submetacentrici sau subtelocentrici.
Fenomenul a fost pus n eviden de W.R. Robertson n anul 1916. Speciile nrudite, care au
un numr variat de cromozomi, dar acelai numr fundamental (NF) de brae cromozomice
formeaz o serie robertsonian. Un exemplu bine studiat este n cadrul genului Drosophila, la
care cariotipul primar de la Drosophila virilis (2n=12) s-a transformat prin translocaia i
fuzionarea centromerilor, dnd natere la mai multe specii: D. texana (2n=10) la care au
fuzionat perechile 2 i 3 de cromozomi, D. littoralis (2n=10) la care au fuzionat perechile 3 i
4, D. americana (2n=10) la care au fuzionat perechile 2 i 3 i cromozomii X cu perechea a
IV-a.
Fenomenul aneuploidiei se poate manifesta chiar n cadrul aceleai specii, ducnd la apariia
aa-numitului polimorfism cromozomial. Acest fenomen a fost semnalat la Spalax leucodon
(orbetele), specie cu posibiliti reduse de migrare. La indivizii rspndii n Caucaz, 2n=48,
cei din Bulgaria au 2n=54, iar la noi n ar, n Transilvania au 2n=50, iar cei din Dobrogea i
Moldova 2n=56.
Aceste serii robertsoniene sugereaz existena unui proces de evoluie a cariotipului, proces
favorizat de posibilitile reduse de migrare i deci formarea de populaii distincte.

Pseudopoliploidia

Fenomenul de pseudopoliploidie este descoperit relativ recent, iar denumirea lui propus
pentru prima dat de E. Bataglia n anul 1956. Este vorba de o multiplicare a numrului de
genomuri fr dublarea cantitii de cromatin-respectiv ADN.
Fenomenul de pseudopoliploidie a fost sesizat la unele specii care posed cromozomi ce au
mai muli centromeri sau acetia sunt localizai difuz, pe toat lungimea lor. Apariia
81
pseudopoliploizilor se datoreaz regruprii substanei cromatice ntr-un alt numr de
cromozomi fr o multiplicare a ei, din punct de vedere cantitativ.
Exist specii pseudopoliploidie la genul plantei Luzula: Luzula purpurea cu 2n=6, Luzula
glabrata cu 2n=12, Luzula campestris cu 2n=12, Luzula parviflora cu 2n=24, Luzula sudetica
cu 2n=48; la genul Tatera: Tatera brantsii draco cu 2n=26, Tatera indica ceylonica cu 2n=72.
Mai ntlnim pseudopoliploizi i la genurile de plante Spirogyra, Carex, .a. sau la cele de
animale Ascaris, Thyanta (hemipter) .a.
Identificarea pseudopoliploizilor se poate face folosindu-se mai multe ci:
- ncrucindu-se speciile pseudopoliploide ale aceluiai gen se pot urmri la hibrizii F
1

cromozomii att n diviziunea somatic ct i n cea meiotic: n diviziunea somatic apare un
numr de cromozomi 2n + 2n fiecare garnitur pstrndu-i mrimea i forma cromozomilor
respectivi. De exemplu, ncrucind Luzula sudetica cu 2n = 48 cromozomi, mici, cu Luzula
campestris cu n = 12 cromozomi, obinem n F
1
un hibrid cu 2n = 30 cromozomi dintre care
24 cromozomi sunt mici i 6 mari. n meioza plantelor din F
1
cei 30 de cromozomi se conjug
n felul urmtor: la cromozomii mari se asociaz cei 24 cromozomi mici formnd 6
cromozomi mari.
- Lungimea total a cromozomilor de la speciile diploide trebuie s fie egal cu cea a speciilor
pseudopoliploide, deoarece cromozomii formelor pseudopoliploide s-au format prin
fragmentarea cromozomilor speciilor diploide.
Cea mai sigur metod pentru identificarea pseudopoliploizilor este determinarea cantitii de
ADN din celulele acestora. Multiplicarea numrului de cromozomi trebuie s fie
corespunztoare multiplicrii cantitii de ADN.
n figura 13.4. este reprezentat schematic lungimea cromozomilor unor specii diploide (a) i
lungimea cromozomilor de la dou specii pseudopoliploide (b i c), provenite prin
fragmentarea cromozomilor speciei diploide (a).










Pseudopoliploidia: a-specie diploid cu 6 cromozomi; b-specie pseudopoliploid cu 12 cromozomi; c-specie
pseudopoliploid cu 24 cromozomi
(Specia b a provenit din specia a i specia c a provenit din specia b)