MICROBIOLOGIA I BIOTEHNOLOGIA

STUDIUL INFLUENEI COMPUILOR COORDINATIVI AI

Cu(II) ASUPRA PRODUCTIVITII CIANOBACTERIEI
SPIRULINA PLATENSIS
Ludmila Batr*, Aurelian Gulea**, Victor apcov**, Valeriu Rudic*
*Institutul de Microbiologie i Biotehnologie, AM
**Laboratorul Chimia Coordinativ, USM
Introducere
n ultimii ani n calitate de obiecte biotehnologice snt valoricate tot mai intens
microorganismele fotosintezatoare, cum sunt microalgele i cianobacteriile [6-8].
Cercetrile de explorare biotehnologic a cianobacteriilor i microalgelor, desfurate
n Laboratorul de Cercetri tiinice Ficobiotehnologie al Universitii de Stat
din Moldova i laboratorul Ficobiotehnologie al Institutului de Microbiologie i Biotehnologie al Academiei de tiine a Moldovei, de rnd cu abordarea unor probleme
legate de optimizarea mediilor, parametrilor i condiiilor de cultivare sunt consacrate soluionrii unor astfel de aspecte importante, ca precutarea cilor noi de reglare
cantitativ i calitativ a metabolismului microalgal i cianobacterian spre sporirea
ecacitii producerii de biomas i de intensicare a sintezei principiilor bioactive,
componente ale acesteia.

109

Unul dintre cele mai explorate obiecte biotehnologice n ultimii ani este cianobacteria Spirulina platensis. Numeroase rezultate ale cercetrilor, publicate n literatura de specialitate, au demonstrat faptul c, cultivarea spirulinei n prezena unor
compui coordinativi permite obinerea unei biomase nu numai cu un coninut prognozat de principii bioactive, dar i cu un coninut nalt de bioelemente cu efecte sanogene
[1,2,7,14,15].
Cu toate c spirulina a servit ca obiect de studiu n numeroase cercetri biotehnologice
i biomedicale, mai rmn neexplorate i alte posibiliti de modicare a potenialului ei
biosintetic, ind precutate noi modele de producere a biomasei, evidenierea unor noi
stimulatori, studierea condiiilor i parametrilor optimi de cretere i dezvoltare etc.
Scopul investigaiilor: Studiul ecacitii utilizrii unor compui coordinativi ai Cu
(II) n calitate de reglatori ai creterii i dezvoltrii cianobacteriei Spirulina platensis.
Materiale i metode
Obiectul cercetrilor a fost tulpina cianobacteriei Spirulina platensis CNM-CB-02
surs de substane bioactive, depozitat n Colecia Naional de Microorganisme
Nepatogene a Institutului de Microbiologie i Biotehnologie al AM. Spirulina platensis a fost cultivat pe mediul lichid SP-1 cu o componen echilibrat de macro i
microelemnete [9]. Drept stimulatori ai creterii i dezvoltrii au fost utilizai compuii
coordinativi ai Cu(II) care difer dup natura ligandului (tab.1) suplimentai la mediul
de cultivare n concentraii de 2,00, 4,00 i 6,00 mg/l. Compuii coordinativi ai Cu (II)
au fost sintetizai de ctre cercettorii din laboratorul Chimia Coordinativ al USM
i oferii cu amabilitate de profesorul univ. A. Gulea.
Tabelul 1. Compuii coordinativi ai Cu(II) utilizai la cultivarea spirulinei
Compusul
[Cu (L1-H)H2O(NO3)]

[Cu (L2-H)H2O(NO3)]

[Cu (L3-H)H2O(NO3)]

CuL(NO3)2

110

Ligand

Cu(L-H)NO3

CuL32(NO3)2

Cu L1(Sfz) H2O

Cu L2(Sfz) 3H2O

Cu(L-2H)

Cultivarea spirulinei s-a efectuat n baloane Erlenmeyer a cte 250 ml cu 100 ml

suspensie de spirulin la o temperatur de 300C i iluminarea de 2000 3000 luci n
primele 2 zile i de 3000 4000 luci n urmtoarele zile ale cultivrii.
Productivitatea spirulinei n a 6a zi de cultivare s-a determinat fotocolorimetric
[11] cu recalculul masei celulare la biomasa absolut uscat (BAU) [8,10,11].
Rezultate i discuii
Rezultatele cercetrilor descrise n literatura de specialitate privind inuena unor
compui ai cuprului asupra creterii i dezvoltrii cianobacteriilor i microalgelor au
scos n eviden faptul c stresul, provocat de prezena n mediul de cultivare a unor
concentraii nalte de cupru, induce la cianobacterii i microalge dezvoltarea diferitor
mecanisme de protecie celular, unele specii manifestnd toleran nalt fa de acest
metal [3,4,12,13].
Astfel la expunerea culturii de Scenedesmus sp. timp de 48 ore la concentraii de
2,5-10 microM de cupru s-a constat o diminuare a creterii i dezvoltrii culturii, valorile productivitii ind n mod direct dependente de concentraia utilizat. Odat cu
diminuarea creterii i dezvoltrii s-a semnalat o micorare a activitii fotosintetice i a
respiraiei. De asemenea s-a observat o scdere a coninutului de proteine, carbohidrai

111

i pigmeni fotosintetici ca urmare a proprietilor toxice manifestate de ctre cupru

[12].
Alte cercetri ntreprinse au fost axate pe studierea toxicitii cuprului la diatomea
Thalassiosira weissogii n biomasa creea s-a obinut un coninut mai nalt de tiol i
cistein cu implicare posibil a lor n mecanismele de detoxicare. La expunerea timp de
96 ore a microalgei Tetraselmis chuii unor concentraii de 0,10-20,00mg/l de cupru s-a
observat o diminuare a creterii i dezvoltrii culturii, mai intens exprimat n primele
24 ore de cultivare [13].
Prezena n mediul de cultivare a microalgei Chlamydomonas reinhardtii a unor
concentraii excesive de cupru a accelerat sinteza intracelular a alfa tocoferolului
implicat n protecia membranelor celulare, ind totodat semnalat o cretere a
coninutului de superoxiddismutaz i proteinkinaz ciclin-dependent [4]. Creterea
peroxidrii lipidice, a coninutului de carotenoizi i activitii superoxiddismutazei
a fost semnalat n cazul cultivrii microalgei Chlorella vulgaris n prezena unei
concentraii de 3,00 microg ml(-1) de cupru, ind accelerat sinteza catalazei, ascorbat
peroxidazei i a glutation reductazei nregistrndu-se un coninut mai sporit cu 35% de
prolin [3,13].
Administrarea unor concentraii de 1mg/l de sulfat sau clorur de cupru n
mediul de cultivare al algei Scenedesmus obliquus a dus la diminuarea semnicativ
a productivitii, precum i a coninutului de proteine, semnalndu-se distrugeri ale
legturilor peptidice a proteinelor histonice [12].
Alte cercetri ntreprinse au demonstrat c algele verzi Pseudokirchneriella
subcapitata i Chlorella vulgaris cultivate n prezena unor concentraii nalte de Cu
(II) au dus la apariia unui stres oxidativ, ind urmat de diminuarea productivitii i
micorarea cu 12 % a activitii fotosintetice [13].
Pentru alga cianot Enteromorpha compressa a fost identicat o cretere a
activitii ascorbat peroxidazei asociat i cu o sporire a coninutului de glutation odat
cu creterea concentraiei de cupru n mediul de cultivare [5].
La cianobacteria Spirulina platensis, la concentraiile de 0,05-0,2mg/l de Cu(II) s-a
modicat coninutul intracelular de prolin, malonildialdehid i superoxiddismutaz
ca urmare a stresului oxidativ provocat de prezena n mediul de cultivare a unor
concentraii sporite de cupru, ind astfel activate mecanismele de protecie celular.
Rezultatele cercetrilor privind inuena compuilor coordinativi ai Cu (II) asupra
productivitii tulpinii Spirulina platensis CNM-CB-02 sunt prezentate n tab. 2 i
gura 1.
Analiza rezultatelor obinute a demonstrat c odat cu creterea concentraiei de
compui coordinativi n mediul de cultivare productivitatea spirulinei scade. Astfel c
cele mai mari valori ale productivitii s-au obinut n cazul administrrii concentraiei
minime de compus (2,00 mg/l). Compuii [Cu(L2-H)H2O(NO3)], [Cu(L3-H)H2O(NO3)],
i Cu(L-H)NO3 au manifestat o aciune toxic mai pronunat, astfel nct valorile
productivitii sunt cu pn la 44% mai mici fa de proba martor, iar la concentraii
ce ntrec 2,00 mg/l au nregistrat proprieti toxice pronunate, cultura meninndu-se
viabil doar primele 48 ore de cultivare.

112

Tabelul 2. Productivitatea spirulinei la cultivare n prezena unor compui coordinativi ai Cu (II)

Compusul
coordinativ
[Cu (L1-H)
H2O(NO3)]
[Cu (L2-H)
H2O(NO3)]
[Cu (L3-H)
H2O(NO3)]
CuL(NO3)2

Cu(L-H)NO3

CuL32(NO3)2
Cu L1(Sfz) H2O
Cu L2(Sfz) 3H2O

Cu(L-2H)
Martor

Concentraia
mg/l

Productivitatea
g/l, XtSx

%M

2
4
6
2
4
6

1,00 0,02
0,90 0,02
0,80 0,04
0,84 0,04
-

117,64
105,88
94,11
98,82
-

2
4
6
2
4
6

0,48 0,02
1,00 0,02
0,80 0,03
0,66 0,04

56,47
117,64
94,11
77,64

2
4
6
2
4
6

0,80 0,02
1,04 0,03
0,88 0,04
0,88 0,02

94,11
122,35
103,52
103,52

2
4
6
2
4
6
2
4
6

0,80 0,02
0,64 0,02
0,64 0,03
0,90 0,03
0,80 0,02
0,66 0,03
0,80 0,04
0,66 0,03
0,64 0,02

94,11
75,29
75,29
105,88
94,11
77,64
94,11
77,64
75,29

0,85 0,02

100

Toxicitatea compuilor cercetai poate determinat att de atomul central de cupru, ct i de natura liganzilor n componena crora intr radicalul fenil care de rnd cu
cuprul poate manifesta proprieti toxice. n structura ligandului compusului [Cu(L3-H)
H2O(NO3)], este prezent i radicalul metoxi -OCH3 care de asemenea poate manifesta
o toxicitate nalt, ntruct la administrarea compusului n concentraii mai mari de 2,00
mg/l este toxic. n cazul administrrii acestui compus productivitatea se menine la
nivelul valorii experimental- iniiale (0,48 g/l), chiar i dup 6 zile de cultivare.
Pentru compusii CuL1(Sfz)*H2O, CuL2(Sfz)*3H2O i Cu(L-2H) productivitatea se
menine la nivelul probei martor doar la administrarea concentraiei de 2,00 mg/l, ind
n descretere odat cu creterea concentraiei compusului, astfel, nct la administrarea
lor n concentraia de 6,00 mg/l productivitatea coboar cu 24,71-22,36% fa de proba
martor.

113

Figura 1. Productivitatea spirulinei la cultivare n prezena compuilor coordinativi

ai Cu(II)
1 - [Cu (L1-H)H2O(NO3)]
2 - [Cu (L2-H)H2O(NO3)]
3 - [Cu (L3-H)H2O(NO3)]

4 - CuL(NO3)2
5 - Cu(L-H)NO3
6 - CuL32(NO3)2

7 - Cu L1(Sfz)*H2O
8 - Cu L2(Sfz)*H2O
9 - Cu(L-2H)

Compuii [Cu(L1-H)H2O(NO3)], CuL(NO3)2, i CuL32(NO3)2, ind administrai n

concentraii de 2,00 mg/l, sporesc cu 17,64-22,35% productivtatea spirulinei atingnd
n a 6-a zi de cultivare valori de 1,00-1,04g/l. Odat cu creterea concentraiei de compus coordinativ are loc descreterea valorilor productivitii, dar care totui nu sunt
cu mult mai diminuate dect valorile probei martor, cu excepia CuL(NO3)2 care n
concentraii de 6,00 mg/l diminueaz productivitatea cu 22,36%.
Astfel, n urma cercetrilor efectuate pot formulate urmtoarele concluzii:
Compuii coordinativi:[CuL32(NO3)2 i Cu(L1-H)H2O(NO3)] n concentraii de pn
la 4,00 6,00 mg/l stimuleaz creterea i dezvoltarea spirulinei, productivitatea ind
cu 17,64-22,35% mai mare ca n proba martor, atingnd n a 6-a zi de cultivare valori
de 1,00-1,04g/l.
Odat cu creterea concentraiei compuilor coordinativi CuL(NO3)2,, CuL1(Sfz)H2O,
CuL2(Sfz)3H2O i Cu(L-2H) are loc descreterea productivitii cu peste 24,71% fa
de proba martor.
Compuii coordinativi [Cu(L2-H)H2O(NO3)], [Cu(L3-H)H2O(NO3)], i Cu(L-H)
NO3 manifesta o aciune toxic mai pronunat, astfel nct valorile productivitii sunt
cu pn 44% mai mici fa de proba martor chiar i la administrarea compusului n
concentaii minime (2,00 mg/l).
Bibliograe:
1. Chiriac T. Biotehnologia cultivrii spirulinei i obinerii produselor cu coninut prognozat de
zinc i principii bioactive valoroase. Autoreferatul tezei de doctor n biologie, 2003, 23 p.
2. Ciumac D. Studiul modicrii componenei biochimice a cianobacteriei Spirulina platensis la
cultivarea n prezena compuilor coordinativi ai Cr(III). Autoreferatul tezei de doctor n biologie, 2008,
26 p.

114

3. Jiunn-Tzong Wu, Ming-T. Hsieh, Lai-Chu Kow. Role of proline accumulation in response to
toxic copper in Chlorella sp. (Chlorophyceae) cells.//Journal of Phycology. 1998. V. 34 p. 113-117.
4. Masatoshi Usui, Satoshi Tanaka, Hitoshi Miyasaka, Yoshimi Suzuki and Yuzo Shioi. Characterization of cysteine protease induced by oxidative stress in cells of Chlamydomonas sp. strain W80.//
Physiologia Plantarum. 2007 V.131, N.4, p.519526.
5. N. Ratkevicius,J. A. Correa A. Moenne. Copper accumulation, synthesis of ascorbate and activation of ascorbate peroxidase in Enteromorpha compressa from heavy metal-enriched environments in
northern Chile.//Limnol. Oceanogr., 2003, V.48, Nr.1, p. 179188.
6. Rudi L. Sinteza orientat a acizilor grai de ctre cianobacteria Spirulina platensis (Nordst.)
Geitl. CNM-CB-01 i microalga Porphyridium cruentum (Nag) CNM-AR-01 i procedee de obinere a
preparatelor lipidice. Autoreferatul tezei de doctor n biologie, 2006, 24 p.
7. Rudic V, Bulimaga V., Chiriac T., Ghelbet V., Turt V., ova V., Mereacre V., Prodius D.,
Ciumac D. Productivitatea i activitatea biosintetic a tulpinii cianobacteria Spirulina platensis CNM-CB03 la cultivarea n prezena unor compui coordinativi noi ai Fe (II) // Analele tiinice ale USM. Seria
tiine chimico-biologice. Chiinu: CEP USM, 2005, p. 183-186.
8. Rudic V. Aspecte noi ale biotehnologiei. Chiinu, 1993, 140 p.
9. Rudic V., Dencicov L. Optimizarea mediului nutritiv pentru cultivarea spirulinei. //Analele tiinice ale Universitii Al.I. Cuza din Iai, Seria Biologie, 1991, v. 37, p. 91-94.
10. Rudic V., Gudumac V., Bulimaga V., Dencicov L., Ghelbet V., Chiriac T. Metode de investigaii n cobiotehnologie. CE USM, 2002, 61p.
11. Rudic V., Gudumac V., Gulea A. Metoda de determinare a biomasei absolut uscate de spirulin.
Brevet de invenie, nr. 1078/92.08.788(RO).//Buletin de Invenii i Mrci. 1997.- Nr.6.
12. Sowik J., Pawlaczyk-Szpilowa M. Interaction between Scenedesmus obliquus and the Heavy
Metals Copper and Lead.//Acta hydrochimica et hydrobiologica,Vol.7, Nr.5 , p.503509.
13. Stefanie Knauert, Katja Knauer. The role of reactive oxygen species in copper toxicity to two
freshwater green algae, 2008. Vol.44, Nr. 2, p.311-319.
14. Zosim L. Biotehnologia cultivrii spirulinei i obinerii produselor cu coninut prognozat de er
i alte substane bioactive valoroase. Autoreferatul tezei de doctor n biologie, 2007, 22 p.
15. ., ., .
Spirulina platensis, .// Analele tiinice USM, Seria tiine chimico-biologice, Chiinu, 2006, p. 163165.

REGLAREA PROCESULUI DE BIOSINTEZ A STEROLILOR LA

DROJDII PRIN ACIUNEA UNDELOR MILIMETRICE DE INTENSITATE JOAS
Agaa Usati, Elena Molodoi, Anatol Rotaru,
Taisia Moldoveanu, Tamara Borisova
Institutul de Microbiologie i Biotehnologie al A..M
Introducere
Aciunea undelor milimetrice de intensitate joas asupra diferitor obiecte biologice
se cerceteaz intens n ultimii 20-25 ani. Sinteza rezultatelor experimentale publicate,
permite de a elucida unele aspecte fundamentale ale activitii vitale i a mecanismelor
de interaciune a undelor milimetrice de intensitate joas cu celulele vegetale sau animale [6,8].
n baza studiilor efectuate au i elucidate mecanismele de aciune a undelor milimetrice de intensitate joas asupra organismelor fotosintetizante i formulate cteva
principii de baz [7,14]. Totodat, elaborarea unei teorii fa de problema modelrii i

115