Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
ro
Microbiologie
CUPRINS
MICROBIOLOGE GENERALA
1. Obiectul de studiul al microbiologiei
2. Caractere generale i poziia microorganismelor n lumea vie
2.1. Prionii
2.2. Virusurile
2.3. Bacteriile
2.4. Cyanobacteriile (algele albastre-verzi)
2.5. Protozoarele
2.6. Ciupercile
MICROBIOLOGIA SOLULUI
2
6
7
8
12
23
23
24
26
27
33
41
53
56
58
61
62
62
68
MICROBIOLOGIE GENERAL
Microbiologia este o tiina relativ tnr, datorit faptului c din lipsa mijloacelor
de investigaie, oamenii de tiin s-au ocupat n primul rnd de vieuitoarele vizibile.
Existena microorganismelor ca ageni etiologici ai unor boli, era ns bnuit nc din
antichitate.
Hipocrat (400 .e.n.) ntemeietorul medicinei, considera doi factori responsabili de
aceste boli: unul intrisec, reprezentat de contribuia bolnavului i altul extrinsec, constnd
dintr-o alterare necunoscut a aerului care devine nociv.
Aceast prim ipotez asupra etiologiei bolilor infecioase a persistat mult vreme
sub forma teoriei miasmelor (gr.miasma = emanaie putred, murdrie).
Varon (100 .e.n.), considera c alterarea aerului (gr. malaria = aer ru) este
determinat de animale foarte mici, invizibile care ptrund n organism prin gur i prin nri.
Fracastor (1488-1553) intuiete foarte corect una dintre caracteristicile eseniale
ale bolilor produse de microorganisme i anume contagiozitatea lor. El arat c "infecia este
aceeai pentru cel care a primit-o i pentru cel care a dat-o" i c ea este produs de "particule
mici i imperceptibile" care trec de la un organism bolnav la altul sntos.
Antony Leeuwenhoek (1632-1723) reuete descoperirea microorganismelor
folosind ca microscop un sistem de lentile biconvexe de construcie proprie, cu o putere de
mrire de 40-275 x. El observ protozoare, alge, nematozi, levuri i bacterii pe care le descrie
i deseneaz n lucrarea sa "Arcana naturae ope microscopiorum detecta" (Tainele naturii
descoperite cu ajutorul microscoapelor (1675). Dei, descoperirile lui Leeuwenhoek au strnit
admiraia i interesul oamenilor de tiin, studiul microorganismelor a rmas n continuare
empiric, constituind doar o preocupare a amatorilor de curioziti ale naturii. n felul acesta se
acumuleaz numai date disparate cu privire la forma, structura, mrimea i distribuia n
natur a acestor microorganisme.
K. Linnaeus, celebru botanist, n opera sa "Systema naturae" (1735) ncearc o
sistematizare a vieuitoarelor cunoscute, reunind toate microorganismele ntr-un grup denumit
semnificativ "Chaos".
Terehovski, folosind pentru prima dat metode experimentale, public n anul 1775
lucrarea " De Chao infusorii Linnaei" n care demonstreaz c fiinele foarte mici, observate
n diferite infuzii bogate n substane organice, cresc, se divid i se mic datorit unor fore
interne proprii, ajungnd la concluzia c aceste organisme sunt adevrate animale n
miniatur.
Louis Pasteur (1822-1895) savant francez, prin lucrrile sale stabilete principiile
care stau i azi la baza acestei tiine.
Primele cercetri ale lui Pasteur au fost legate de fenomenul asimetriei moleculare.
La acidul tartric racemic, compus inactiv pentru lumina polarizat, demonstreaz c este un
amestec echimolecular de acid dextrogir i acid levogir, ale cror cristale sunt de forme
asimetrice i enantiomorfe. De asemeni, a observat c dac n amestecul racemic, inactiv din
punct de vedere optic se dezvolt un mucegai (Penicillium glaucum) soluia devine optic
activ, deviind de ast dat spre stnga planul luminii polarizate. Mucegaiul degradeaz
izomerul dextrogir lsndu-l intact pe cel levogir, care astfel poate fi izolat n stare pur.
Aceast descoperire pe lng faptul c furniza un procedeu simplu de separare a izomerilor
optici a demonstrat i intervenia unei caracteristici fizice, ca disimetria molecular n
fenomenele chimice ale vieii dar, mai ales a atras atenia lui Pasteur asupra unui fenomen
spre care se va ndrepta n continuare curiozitatea lui de cercettor: microorganismele produc
transformri ale substanelor organice printr-o activitate selectiv foarte specific.
Cercetrile lui Pasteur asupra fermentaiei vinului i berii l-au condus la urmtoarele
concluzii fundamentale:
1. fermentaiile sunt procese biologice determinate de aciunea unor
microorganisme anaerobe, deci fermentaia este via fr aer;
2. fiecare fermentaie este produs de un anumit tip de microorganism care este
specific n sensul c determin o anumit transformare a mediului pe care crete;
4
Procariote
Bacterii
Cyanobacterii
Nucleul
fr membran
Compoziia chimic a membranei fr steroli (cu excepia
citoplasmatice
micoplasmelor)
Sistemul respirator
n
membrana
citoplasmatic
Ribozomii
70 S
Curenii citoplasmatici
abseni
Reticulul endoplasmatic
absent
Tipul de diviziune
direct (sciziparitatea)
Poziia microorganismelor n lumea vie
7
Eucariote
Alge, Fungi, Protozoare,
Plante, Animale
cu membran
conine steroli
mitocondrii
80 S
prezeni
prezent
Mitoz
1. Boala "Kurru". Aceasta este prima semnalat i cel mai bine studiat. A fost
depistat la un trib local n Papua - Noua Guinee. Dup interzicerea consumului de carne, n
stare proaspt, aceast boal a fost eradicat.
2. Boala Creutsfeldt-Jacob.
Agentul infecios
Astzi se consider c agentul infecios este o molecul proteic cu greutatea
molecular de 27 kilodaltoni, alctuit dintr-un lan de 240 de aminoacizi i care prezint o
configuraie spaial asemntoare unui metru de tmplrie parial destins.
Aceast protein a fost izolat din creierul tuturor cazurilor bolnave studiate. Surpriza
a sosit n momentul studierii n paralel (la oi) a creierului la animale sntoase i care prezint
o protein celular similar. Lanul de aminoacizi este identic cu excepia unui singur
aminoacid (schimbat).
Proteina celular normal prezint o configuraie spaial asemntoare unui resort.
Specialitii din biochimie consider c prin schimbarea unui singur aminoacid din lan nu se
poate modifica configuraia spaial. n acelai timp proteina infecioas rezist la atacul
proteazelor celulare.
Se consider c procesul infecios se desfoar astfel: celula prepar proteina celular
normal care se acumuleaz n lizozomi, acetia o transport la exteriorul celulei i n
momentul n care aceast protein ptrunde din nou n celul este degradat de proteaze.
n cazul proteinei infecioase aceasta se acumuleaz n lizozomi n mod continuu pn
cnd acetia "crap". Enzimele din interiorul lor degradeaz componentele celulare i n final
ntreaga celul nervoas.
n locul acesteia rmne un orificiu. Din acest motiv, dup un
timp creierul atacat arat ca un burete (cu numeroase orificii). n stadiul final al bolii, creierul
degenereaz complet, avnd dimensiunea unei nuci.
Studiile cele mai ample sunt efectuate la animale, la om ele fiind extrem de puine,
deoarece boala poate fi studiat numai dup moartea individului.
2.2. VIRUSURILE
Virusurile reprezint o categorie specific de ageni infecioi, structural i fiziologic
fundamental diferii de oricare dintre microorganismele cunoscute (Zarnea G., 1983).
Morfologia virusurilor
Din punct de vedere morfologic virusurile pot aparine urmtoarelor tipuri principale:
form cilindric-alungit sau de bastona (virusul mozaicului tutunului); form sferic
(izometric), sferoidal (virusul gripal), form paralelipipedic (virusul variolei), form de
cartu sau obuz (virusul piticirii galbene la cartof), form de mormoloc, spermatozoid sau
cirea cu coad (unii bacteriofagi). Dimensiunile virusurilor 17 nm - 2500 nm.
Structura virusurilor
Dei diferitele virusuri se deosebesc mult ca form i dimensiuni ele sunt constituite
dup principii comune. Particula viral matur (virionul) este alctuit din dou componente
eseniale: genomul viral i capsida, precum i un constituient accesoriu, nveliul extern.
Genomul viral este reprezentat n mod obinuit printr-o molecul de acid nucleic
(ADN sau ARN, niciodat ambele). Genomul viral poart informaia genetic necesar
replicrii n sensul sintezei constituienilor virali i a precursorilor lor.
Capsida viral (gr. "Kapsa" = cutie), acoper genomul fiind alctuit din subuniti
proteice denumite capsomere. Capsomerele sunt constituite din molecule proteice aezate n
mod regulat, formnd n ansamblu structura specific a virusului. Capsida protejeaz
materialul genetic.
9
12
Fagii maturi sunt eliminai prin intermediul unor pori care se formeaz n membrana
citoplasmatic, bacteria nefiind lizat, aceasta continu s se divid un timp, ulterior
coninutul celular trece la exterior prin porii deschii de virioni.
Cianofagii
Au form asemntoare cu bacteriofagii T-impar. Genomul este reprezentat de ADN
d.c. de 13,2 m.
Micovirusurile
Sunt virusuri care atac fungii, fiind cunoscute i sub denumirea de micofagi.
Structura micovirusurilor.
Cel mai bine studiat este virusul care infecteaz specia Penicillium chrysogenum, care
se prezint sub forma unor mici particule poliedrice cu de 33-41 nm. Genomul este
reprezentat de o molecul de ARN d.c.
La fungi virusurile sunt n general latente, celulele se dezvolt mai lent, dar nu lizeaz
constant. Micovirusurile au fost evideniate i n sporii fungilor.
Transmiterea micovirusurilor n general se face n urma plasmogamiei (heterocarioza).
Rolul bacteriofagilor n sol
Coloniile de bacterii cultivate pe medii artificiale n zonele unde sunt atacate de
bacteriofagi apar ca nite zone clare "plaje" de liz, iar n suspensii bacteriene atacul fagilor
produce limpezirea mediului datorit lizei bacteriilor parazitate care dispar.
Din astfel de suspensii de bacterii lizate se pot obine prin ultra filtrare suspensii de
bacteriofagi. O proprietate deosebit a unor tulpini de fagi, este capacitatea de a tri n unele
celule bacteriene fr a provoca moartea acestora, dar elibernd n afar noi particule virale.
Astfel de fagi sunt denumii "bacteriofagi temperai", iar celulele bacteriene ce-l gzduiesc se
numesc "celule lizogene".
Importana bacteriofagilor din sol const n faptul c influeneaz ecologia bacteriilor
gazd, distrugnd speciile de bacterii "lizosensibile", modificnd uneori echilibrul microbian.
Rspndirea virusurilor din sol este influenat de capacitatea humusului i argilelor
de a absorbi i imobiliza particulele de virus. Se tie n acest sens c solurile argiloase i
bogate n humus adsorb mai mult particulele de virus de ct cele nisipoase. De aici rezult i
posibilitatea rspndirii difereniate a unor boli virotice ale plantelor i ai bacteriofagilor n
natur.
Importana agricol a bacteriofagilor este puin cunoscut nc. Existena
bacteriofagilor a fost demonstrat nc din anul 1927 de ctre A. Grigne, fiind dovedit n
solele cultivate cu plante leguminoase. Densitatea lor maxim este n zona rizosferic i n
nodozitile mature sau la nceputul mbtrnirii.
Rspndirea bacteriofagilor nu este influenat prea mult de condiiile din sol. Astfel
au fost identificai n soluri cu pH ntre 5,2-9,3, ct i n soluri care au suferit ngheul iernii.
2.3. BACTERIILE
Sunt organisme unicelulare cu o structur complex care au un metobolism propriu
datorit unui aparat enzimatic complex ce le asigur desfurarea proceselor vitale. n linii
generale bacteriile au o serie de caractere generale ce pot fi sistematizate astfel:
Nucleul celulei bacteriene este de tip procariot, adic lipsit de membran, iar
afinitile tinctoriale nu sunt deosebite fa de citoplasm.
Bacteriile au un polimorfism accentuat, putnd mbrca mai multe aspecte
morfologice ca forme sferice, cilindrice, spiralate sau helicoidale, filamentoase i ptrate.
13
flageli.
Micarea la speciile mobile este asigurat de organite speciale, numite cili sau
Bacteriile sunt lipsite de clorofil, dar unele grupe au pigmeni sintetizani i ca atare
pot folosi energia luminoas.
Altele i procur energia necesar sintezelor celulare i altor manifestri vitale,
dezintegrnd diverse substane chimice prin intermediul proceselor fermentative, fiind din
acest punct de vedere, organisme chimiosintetizante (Chemotrofe).
Se nmulesc prin aciziparitate, dar se cunosc la unele grupe i forme de conjugare
de tip parasexuat, cu formare de celule sexuate de sens diferit; forma de sciziparitate rmne
ns forma esenial de reproducere.
Bacteriile pot forma spori, ce constituie un mijloc de conservare a speciei, la unele
grupe.
Morfologia bacteriilor
Din punct de vedere al formei exterioare se disting cinci tipuri de baz, dup cum
urmeaz:
- bacterii sferice denumite coci, cu genul principal Coccus;
- bacterii cilindrice sub form de bastona drept sau uor curbat din care face parte
genul Bacillus;
- bacterii spiralate sau elicoidale, n care se cuprind trei categorii de germeni i anume:
vibrionii, spirilii i spirocheta;
- bacterii filamentoase, cu celule alungite n care se cuprind actinomicetele;
- bacterii ptrate, sunt foarte rare, ntlnite n apele saline.
Dup forma celulelor i modul de grupare n urma procesului de diviziune, bacteriile
se mpart n urmtoarele tipuri i subtipuri morfologice:
Bacteriile sferice sau cocii, au form sferic, ovoidal, sau elipsoidal, cu cele dou
diametre aproximativ egale. n funcie de poziia celulelor fiice dup diviziune, cocii prezint
urmtoarele moduri de grupare:
Cocul simplu, izolat, la care celulele rmn independente dup diviziune (ex.
Micrococcus ureae).
Diplococul, la care diviziunea se face dup planuri succesive paralele, celulele
rezultate rmnnd grupate cte dou (ex. Diplococcus pneumoniae).
Streptococul, la care diviziunea se face dup planuri succesive paralele, iar celulele
rezultate formeaz lanuri de lungimi variabile (ex. Streptococcus lactis).
Tetracocul, la care planurile de diviziune sunt perpendiculare unele fa de altele, iar
celulele rezultate sunt dispuse cte 4 la un loc (ex. genul Gafkia).
Sarcina, la care planurile de diviziune sunt orientate dup cele trei direcii ale spaiului
i reciproc perpendiculare unul pe altul, rezultnd o grupare de celule sub form de cub (ex.
Sporosarcina ureae).
Stafilococul, la care planurile succesive de diviziune sunt dispuse n mai multe
direcii, iar celulele rezultate se grupeaz ca un ciorchine (ex. Staphyllococcus aureus.
Bacteriile cilindrice, cunoscute sub denumirea de bacili au form de bastonae, cu
raportul ntre cele dou axe foarte diferit, de la forme cu aspect filamentoase, pn la unele cu
aspect aproape sferic. Unele dintre bacteriile cilindrice au proprietatea de a forma spori.
Bacteriile spiralate, sunt elicoidale cuprind trei subtipuri morfologice:
Vibrionul, n form curbat, cu un singur tur de spir.
Spirilul, n form de spiral cu mai multe ture de spir, rigide ca un baston.
Spirocheta, sub form de spiral cu mai multe ture de spir dar flexibile, care se poate
strnge i relaxa.
Bacteriile filamentoase, au ca prototip actinomicetele, microorganisme cu asemnri
morfologice cu fungii, cu particularitatea de a forma hife, cu tendin de ramificare, de unde i
aspectul lor de miceliu.
14
mare, parcurgnd ntr-o secund o distan de la 10 pn la 40 ori mai mare decat diametrul
longitudinal al bacteriei.
Aparatul fimbrial. Fimbriile sunt formaiuni filamentoase prezente pe suprafaa
bacteriilor imobile sau mobile, n numr mare, de ordinul sutelor (100-400). Ele au o poziie
radial i sunt mai scurte ca cilii; nu servesc la micare ci au rol de fixare pe diferite substrate
solide sau pe hematii, pe care le aglutineaz.
Fimbriile sunt de natur intracelular deoarece dup ndeprtarea peretelui celular,
rmn fixate pe protoplati.
Pilii sunt, dup Ottow, apendice filamentoase care au un canal prin care se face
transferul cromozomului bacterian de la celula mascul (F+) la celula femel (F-), fiind
denumite i "pili de sex".
Peretele celular
Este invizibil sau foarte greu vizibil la microscopul fotonic i reprezint aproximativ
20 % din greutatea uscat a celulei i 25 % din volumul ei.
Peretele celular are rol:
- de susinere mecanic;
- asigur individualitatea morfologic;
- ofer protecie fa de ocul osmotic;
- particip la procesul de diviziune celular;
- conine receptori de virus;
- mediaz schimbul de substane cu mediu.
Peretele celular este absent la micoplasmatale.
Coloraia Gram permite clasificarea bacteriilor dup peretele celular n dou mari
categorii: Gram+ (violet) i Gram- (rou). ntre cele dou categorii exist diferene mari de
compoziie chimic i anume:
1. Peptidoglicanul (mureina) este prezent la majoritatea bacteriilor, fiind de mai multe
tipuri moleculare: 80-90 % laG+; 10-20 % la G-.
2. Acizii teichonici sunt foarte abundeni la bacteriile Gram+.
3. Acizii lipoteichonici sunt ntlnii la bacteriile Gram+ asociai la membrana
citoplasmatic dar se gsesc i n peretele celular.
4. Acizii teichuronici sunt caracteristici bacteriilor Gram+.
5. Lipopoliozidele caracterizeaz bacteriile Gram- i sunt responsabile de primul
control al permeabilitii celulare. Bacteriile Gram- sunt n general mai rezistente la inhibitori
(peniciline, colorani) dect cele Gram+.
6. Acizii grai se gsesc sub forma unor lanuri lungi la nivelul peretelui celular la
actinomicete i la bacteriile coryneforme.
Membrana citoplasmatic, acoper citoplasma bacteriilor i o separ de faa intern a
peretelui celular. Are o grosime de 7,5 nm i este constituit din dou straturi fosfolipidice.
Analiza chimic a membranei evideniaz trei tipuri de molecule: lipide, proteine i
glucide. Proteinele reprezint peste 50 % din total.
Membrana citoplasmatic este o barier osmotic de permeabilitate care regleaz
ptrunderea n celul i eliminarea selectiv a diferitelor substane.
Ea menine n celul o concentraie ridicat de macromolecule, molecule mici i chiar
ioni mpedicndu-le difuzarea n mediu dei concentraia extracelular este mai mic. Conine
permeazele care asigur transportul activ n interiorul celulei a unor substane organice polare
din mediu.
Membrana citoplasmatic are rol n creterea i diviziunea celular; la nivelul su ia
natere semnalul care declaneaz iniierea replicrii cromozomului bacterian.
n sfrit, membrana citoplasmatic este suportul enzimelor care particip la sinteza
ATP (la eucariote aceste enzime se afl n mitocondrii).
16
Mezozomii sunt formaiuni care deriv din membrana citoplasmatic sub forma unor
invaginri, legate de ADN celular. Aceste organite celulare joac un rol important n
diviziunea nucleului i n formarea septului care separ cele dou celule fiice.
La bacteriile purpurii mezozomii conin pigmeni clorofilieni.
La bacteriile fixatoare de N2, nitrogenaza care este inhibat de O2, este protejat de
mezozomi.
La bacteriile nitrificatoare numeroasele invaginri ale membranei citoplasmatice
mresc suprafaa de schimb enzimatic.
Citoplasma, este un sistem coloidal constituit din sruri minerale, compui solubili de
natur lipoproteic, nucleoproteine, lipide i ap. Are un pH cuprins ntre 7-7,2.
Citoplasma poate fi caracterizat ca un complex de stri fizice ntr-o continu
transformare, n funcie de starea fiziologic i vrsta celulei.
Ribozomii sunt formaiuni citoplasmatice, sferice. O celul bacterian conine n
medie 18.000 ribozomi de tip 70 S, cu un diametru de 10-30 nm. Fiecare ribozom se disociaz
n dou subuniti, 30 S i 50 S. Fiecare subunitate 50 S este legat de o subunitate 30 S prin
intermediul legturilor ARN - protein i protein-protein.
Ribozomii 70 S joac un rol precis n cursul traducerii lanurilor de ARN n proteine.
Materialul nuclear ("nucleul") este constituit dintr-un cromozom format de o bucl de
ADN aflat n suspensie, n citoplasm. Lungimea acestuia este mare, ajungnd la Escherichia
coli la 1 mm, ceea ce implic o rsucire foarte accentuat.
Plasmidele sunt considerate material genetic extracromozomial, fiind independente de
nucleu.
Plasmidele nu sunt indispensabile pentru viaa celular dar pot aduce un avantaj
selectiv. Ele poart informaia pentru degradarea unor substraturi i pentru rezistena la
antibiotice.
Replicarea plasmidelor se produce n dou momente diferite: atunci cnd celula se
divide i atunci cnd se produce procesul de conjugare.
Bacteriile pot conine mai multe plasmide. Escherichia coli, de exemplu, posed pe
cromozom 1 sau 2 plasmide conjugate i 10-15 plasmide neconjugate.
Vacuolele sunt formaiuni sferice care apar n citoplasm n faza de cretere activ a
celulelor bacteriene. n interiorul lor se gsete ap sau gaz.
Cele cu ap au rol n meninerea presiunii osmotice n raport cu mediul extern, iar cele
cu gaz au rol de flotaie.
Incluziunile sunt formaiuni inerte care apar n citoplasm la sfritul periodei
exponeniale de cretere a celulei. Ele pot fi formate din glicogen, amidon, carbonat de calciu
i fosfat anorganic.
Sporul bacterian este o formaiune care deriv din celula vegetativ a bacteriilor, n
anumite condiii de via. Sporul este o form de conservare a speciei la condiiile
nefavorabile de mediu i concentreaz ntr-un volum redus toate componentele eseniale ale
celulei din care provine.
Form sporului poate fi sferic sau oval.
Dispunere sporului n celula vegetativ poate fi central, subterminal, terminal sau
lateral.
Dup modul de formare, structur i rezisten la factorii de mediu, sporul bacterian
poate fi de mai multe tipuri:
1. Endosporul (sporul propriu-zis) apare n interiorul unei celule vegetative numit
"sporangiu" i prezint o mare rezisten la condiiile nefavorabile de mediu, n special la
variaiile temperaturii. O celul vegetativ poate forma un singur endospor.
Bacteriile susceptibile de a produce endospori aparin genurilor: Bacillus, Clostridium,
Desulfatomaculum, Sporosarcina, Sporolactobacillus, Thermoactinomyces.
17
18
Timpul
(minute)
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
200
Numr de
diviziuni
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
surs organic de carbon sunt denumite bacterii de fermentaie iar cele care utilizeaz o surs
organic de azot mai sunt denumite bacterii de putrefacie.
n concluzie, autotrofele prin sintezele lor genereaz substana organic plecnd de la
compui minerali simpli, pe cnd heterotrofele nu-i pot realiza sintezele proprii dect dac
dispun de substane organice pe care le descompun pn la produi mai simpli i pe care i
utilizeaz n metabolismul lor.
Respiraia microorganismelor
Dup exigenele fa de oxigenul molecular, microorganismele se grupeaz n patru
tipuri respiratorii:
1. Microorganisme strict (obligatoriu) aerobe care folosesc O2 ca acceptor final de H,
avnd nevoie de prezena continu a oxigenului atmosferic.
2. Microorganisme strict (obligatoriu) anaerobe, care nu se pot dezvolta n prezena
oxigenului molecular, putnd fi cultivate numai pe medii srcite n O2. Ele nu dispun de
enzimele respiratorii din categoria citocromilor.
Anaerobioza lor strict const n faptul c, n prezena O2, care se comport ca
acceptor final de H, se formeaz peroxidul de hidrogen, care este toxic i nu ap.
3. Microorganisme facultativ anaerobe, care sunt capabile s-i orienteze
metabolismul spre respiraie sau spre fermentaie, n funcie de disponibilitile de O2 i care
au n mod obinuit un metabolism anaerob fr a fi ns sensibile la prezena O2.
Unele microorganisme de acest tip respirator (levurile) pot trece de la un metabolism
aerob la unul anaerob, n funcie de condiiile de mediu.
4. Microorganismele microaerofile, au nevoie de o concentraie de O2 mai mic dect
aceea din aerul atmosferic. Aceast particularitate se datoreaz sensibilitii unora dintre
enzimele lor la condiiile de oxidare puternic.
Grupe particulare de bacterii
Bacteriile glasogene
Apa chimic i biologic, pur, poate rmne n stare lichid pn la -40oC. Supus la
temperaturi inferiore lui zero grade, ea nu nghea dect n prezena nucleelor glasogene.
Aceste nuclee pot fi reprezentate de particulele minerale care provoac congelarea ncepnd
de la -10oC. La temperaturi situate ntre -10oC i zero, gheaa nu se formeaz la plante dect
n prezena bacteriilor specifice care, posed n membran, nucleele glasogene.
Suele bacteriene n cauz, aparin speciilor Pseudomonas syringae i Erwinia
herbicola; ele pot fi saprofite (epifite) sau parazite pe organele plantelor n cauz (frunze,
flori, fructe). Procentul de nuclee glasogene este ridicat la Ps. syringae (60 %) i mai mic la
E. herbicola (1-5 %). Puterea glasogen a bacteriilor se exprim "in vitro" sau n "in vivo" pe
organele plantelor. Pe de alt parte suele inductoare de ghea se multiplic abundent pe
organele necrozate prin nghe, ceea ce le ofer un avantaj selectiv considerabil.
Cnd o suspensie de bacterii glasogene este pulverizat pe frunze, apar simptomele
ngheului cu ofilirea ireversibil, dac ele sunt plasate (inute) 1 or la -5 oC, pe cnd plantele
martor netratate cu bacterii rmn imune la toate alterrile vizibile.
La via de vie s-a observat o corelaie ridicat ntre numrul de bacterii glasogene
prezente pe muguri i pierderile cauzate de frig la temperaturi apropiate de 0oC. Bacteriile
glasogene care provoac nghearea au fost observate la plante foarte diverse (pin, cire,
piersic, prun, cais, forsiia, fasole, porumb, tomate, cpun).
Suele bacteriene active, datorit capacitii de a induce formarea gheii, prezint o
gen specific care codeaz o protein foarte particular n membrana lor.
Proteina este format din 1200 de aminocizi cu o structur repetitiv foarte accentuat.
21
Compus din 1200 de aminoacizi, acest polipeptid comport repetiii n mai mult de
100 exemplare. Reducerea numrului de repetiii n lanul polipeptidic reduce activitatea
glasogen.
Alte proteine care au o structur repetitiv sunt prezente de asemenea, n sngele a
numeroase specii de animale din regiunile polare, unde ele au un efect antigel.
Bacteriile glasogene joac un rol important n practic deoarece provoac nghearea
n primvar a numeroase plante, n special pomii fructiferi i via de vie. Bineneles c se
ncearc stoparea aciunii acestor bacterii pe diferite ci (tratamente chimice cu antibiotice,
pulverizri cu ap, fumigaii, folosirea bacteriofagilor, a microorganismelor antagoniste,
aplicarea de polimeri care limiteaz schimburile termice cu exteriorul etc.).
n ultimii ani s-a obinut prin inginerie genetic sue neglasogene de Ps. syringae, care
aplicate pe plante inhib dezvoltarea speciilor glasogene
n sens pozitiv specia Ps. syringae glasogen este utilizat pentru obinerea zpezii
artificiale (Snow max).
Micoplasmele
Micoplasmele reprezint un grup particular de bacterii lipsite de perete celular, la care
celula este delimitat de o membran lipoproteic, cu o compoziie chimic asemntoare
celulei animale.
Sunt considerate cele mai mici organisme capabile de cretere autonom pe medii
acelulare.
Micoplasmele sunt grupate n clasa Mollicutes (moli = moale, pliabil i cute = piele),
cu dou genuri:
- Mycoplasma, a crei cretere este dependent de prezena sterolilor n mediu.
- Acholeplasma, care se dezvolt independent de steroli.
Morfologie. Datorit lipsei peretelui celular, micoplasmele au o plasticitate natural
foarte mare, fiind descrise mai multe tipuri morfologice ca: sferice-cocoidale, diplococi,
filamentoase.
Cu toate acestea, cultivate n condiii de mediu bine definite, fiecare specie are o
morfologie caracteristic, nct polimorfismul acestora nu trebuie confundat cu pleomorfismul
care implic obligatoriu existena a mai mult de o form celular distinct, n cursul vieii
unui organism.
Micoplasmele sunt Gram-negative. Dimensiunile lor variaz de la 125-250 nm la
formele sferice, pn la 150 m la cele filamentoase.
Lipsa peretelui celular este rspunztoare de instabilitatea morfologic i de alte
proprieti cum ar fi:
- sensibilitatea osmotic;
- rezistena la antibioticele care acioneaz asupra sintezei peretelui celular
(penicilina);
- tendina de ptrundere i cretere n profunzimea mediilor;
- capacitatea de a traversa filtrele bacteriene.
Multiplicarea micoplasmelor se poate realiza la aceeai specie prin diviziune,
nmugurire i fragmentarea filamentelor.
n condiii naturale micoplasmele sunt parazite, instalarea lor n diferite organisme
fiind uurat de natura chimic a membranei similar membranelor gazdei.
Micoplasmele produc peste 40 de boli la plante dar i la animale i om.
Actinomicetele
Actinomicetele constituie un grup mare de bacterii filamentoase, Gram pozitive,
caracterizate printr-o mare varietate morfologic.
22
23
2.4. CYANOBACTERIILE
(ALGELE ALBASTRE-VERZI)
Sunt organisme procariote care folosesc apa ca donator de electroni i n prezena
luminii produc oxigen. Mecanismul lor fotosintetic este identic cu cel al algelor eucariote.
Celulele prezint un perete rigid, multistratificat, asemntor cu cel de la bacteriile
Gram-negative. Peretele celular poate fi acoperit la exterior cu o teac gelatinoas sau
fibroas. Cele mai multe Cyanobacterii sunt mobile ntr-un anumit stadiu de dezvoltare, avnd
o mobilitate de tip glisant, asemnndu-se cu bacteriile filamentoase glisante de tip Beggiatoa.
Pigmenii fotosintetizani sunt reprezentai numai de clorofila "a" i deficobiliproteine
(alloficocyanina, ficocyanina i uneori ficoeritrina). n citoplasm se observ vacuole cu gaze
ce au rol de flotaie.
Unele cyanobacterii sunt unicelulare, iar altele filamentoase, formnd lanuri mai
lungi.
Cyanobacteriile sunt strict fotoautotrofe i nu se pot dezvolta numai n prezena
substanelor organice, nu au nevoie de vitamine ca factori de cretere, iar ca surs de azot
folosesc azotaii, srurile de amoniu, iar unele specii folosesc azotul molecular, fiind fixatoare
de azot (Nostoc i Anabaena).
Sunt mult rspndite n sol, n apele dulci i ape srate din mri i oceane. Sunt mai
tolerante fa de condiiile extreme nefavorabile dect algele eucariote.
Ele constituie primele organisme ce populeaz rocile dezagregate, participnd la
procesul de solificare i favorizeaz dezvoltarea n masa lor mucilaginoas a unor bacterii
fixatoare de azot ntre care Azotobacter i Clostridium.
Dintre cyanobacterii mai rspndite n natur sunt genurile Gloeocapsa i
Chroococcus care sunt organisme unicelulare. Alte grupe sunt filamentoase ca, Oscillatoria i
Lyngbia. Genurile Nostoc i Anabaena ce au capacitate de a fixa azotul molecular triesc n
solurile umede din orezrii, unde asigur N2 necesar plantelor.
2.5. PROTOZOARELE
Sunt organisme unicelulare la care se cunoate un anumit ciclu evolutiv i care
reprezint vieuitoare complete i independente, fiind cuprinse n ncrengtura Protozoa, regn.
Protista..
Celula unui protozor se compune din protoplasm, n care se gsesc incluziunile
granulare, condriozomii, precum i diferite substane de rezerv. De asemenea, se gsesc unul
sau mai muli nuclei cu forme i structuri diferite.
Ca substane de rezerv n celulele de protozoare s-au descoperit; amidonul,
glicogenul, leucozina, grsimi i substane proteice de rezerv cum este volutina.
nmulirea protozoarelor se face pe cale asexuat prin mprirea celulei n dou pri
aproape egale, n urma crui proces apar dou celule fiice. nmulirea sexuat are loc dup
mai multe diviziuni simple, prin conjugare ntre gamei. n urma contopirii gameilor iau
natere zigoii care n condiii neprielnice se transform n zigochiti sau chiti de repaus care
au o mare rezisten la temperaturi nefavorabile, concentraii mari de sruri solubile,
uscciune sau acumulare n mediul ambiant a unor factori nocivi. La revenirea condiiilor
favorabile, din zigochiti apar indivizi obinuii.
n sol sunt rspndite protozoare din urmtoarele clase: Rhizopoda, Sarcodina,
Mastigophora (Flagelata) i Infusoria (Cilliata).
Din clasa Sarcodina cele mai rspndite genuri sunt: Negleria, Amoeba.
Clasa Mastigophora (Flagelata) are n sol forme autotrofe ct i heterotrofe. Cele
autotrofe posed n celule cromatofori. Ca reprezentani avem genurile Bodo, Euglena.
24
Clasa Infusoria (Ciliata) cuprinde protozoare care se mic cu ajutorul a numeroi cili
care sunt excrescene protoplasmatice. Din acest grup ca reprezentani citm: Paramoecium,
Balantiophorus i Colpoda.
Rolul protozoarelor n sol este secundar fa de cel al bacteriilor i ciupercilor. Ele
sunt n majoritate prdtori ce se hrnesc cu bacterii i se gsesc n sol ntre 10.000 pn la
cteva sute de exemplare la grmul de sol. Ca microprdtori protozoarele contribuie la
diminuarea numrului de bacterii n sol.
n acelai timp s-a constatat c prin moartea lor protozoarele pun la dispoziia
microorganismelor surse nutritive care stimuleaz creterea numrului acestora n sol.
n unele experiene cu Azotobacter n culturile la care s-au adugat protozoare
(Colpidium colpoda), s-a fixat mai mult azot dect la culturile martor.
Se trage de aici concluzia c protozoarele fagocitnd bacteriile, formeaz colonia s
produc mai multe celule tinere care sunt mai active n fixarea azotului molecular. Pe de alt
parte se presupune c protozoarele ar elimina n mediu de cultur unele substane stimulatoare
pentru dezvoltarea bacteriilor.
Dup ali autori n afar de aciunea indirect asupra biologiei solului, protozoarele ar
contribui i la formarea humusului.
2.6. CIUPERCILE
Ciupercile reprezint un grup numeros la care se cunosc cca. 100.000 de specii, fiind
cuprinse n regnul Fungi.
De asemeni, ele constituie o component important a microflorei solului la care s-au
identificat peste 170 de genuri i peste 800 de specii. Frecvena lor n sol variaz ntre 8.000 i
1.000.000 de indivizi pe gramul de sol.
Ciupercile au un rol important n natur participnd n descompunerea substanelor
organice; formeaz asociaii sub form de micoriz cu rdcinile plantelor; produc substane
antibiotice participnd n acest fel la antagonismul microbian i la reglarea echilibrului
biologic n sol.
Morfologia ciupercilor
Aparatul vegetativ este un tal cu o constituie variat iar, complexitatea acestuia crete
pe msura evoluiei filogenetice. Astfel, la ciupercile din subncrengtura Mastigomycotina
aparatul vegetativ este o celul nud - gimnoplast sau o asociere de gimnoplati ce formeaz
un plasmodiu.
La ciupercile din Zigomycotina aparatul vegetativ cu aspect filiform este un
sifonoplast, neseptat, format din hife simple sau ramificate.
La ciupercile din subncrengtura Ascomycotina, Basidiomycotina i
Deuteromycotina, aparatul vegetativ poate fi unicelular, sub form de dermatoplast ca la
Saccharomycetaceae, iar la majoritatea este un tal filamentos pluricelular, format din hife
septate.
Talul ciupercilor poate fi filamentos la ciupercile microscopice, sau masiv la unele
ciuperci din subncrengtura Basidiomycotina, formnd corpuri de fructificare de dimensiuni
vizibile cu ochiul liber (carpofori).
Reproducerea ciupercilor
Ciupercile se pot reproduce pe mai multe ci i anume:
- vegetativ, prin fragmente de tal sau prin nmugurire;
25
26
microbiologia solului
substan nutritiv pentru plante; el determin cele mai importante proprieti ale solului. Ca o
consecin a procesului de alterare a prii minerale a solului i de descompunere a materiei
organice, se pun n libertate o serie de elemente ca: N,P, S, Mg, K, Ca, Fe, Al, Mn, Na, etc.,
din acestea o parte ajung n soluia solului, unde sunt asimilate de ctre plante, iar o alt parte
s fixeaz n sol prin fenomene de reinere constituind un rezervor de elemente nutritive.
Partea lichid sau soluia solului este reprezentat prin apa din sol, n care se gsesc
dizolvate substane minerale i organice n stare de dispersie ionic, molecular sau coloidal.
Importana fazei lichide a solului const n aceea c ea conine elemente nutritive n
form accesibil plantelor i microorganismelor, adic sub form de sruri solubile care
disociaz n anioni i cationi.
n urma proceselor de reinere, pe suprafaa particulelor coloidale ale fazei solide se
creeaz o rezerv de elemente nutritive absorbite, care se elibereaz n soluie pe msura
consumrii lor de ctre organismele vii. Cantitatea global de sruri nutritive din soluia
solului este n general, suficient pentru satisfacerea cerinelor trofice ale plantelor superioare
i ale microorganismelor de 1,1-2,5 grame la litru.
Din punct de vedere calitativ se poate constata n soluia solului, existena pe lng
foarte numeroasele elemente minerale i a microelementelor necesare n cantiti extrem de
mici ca: Br, Li, I, Co, Ni, Cr, Pb, V, Zn, Cu, Ag, Au.
Compoziia soluiei solului este valabil depinznd de condiiile climatice, de
activitatea microorganismelor, etc. n ceea ce privete soluia solului, pentru dezvoltarea
microorganismelor, o importan deosebit o prezint activitatea osmotic a fazei lichide. n
general, presiunea osmotic de 3-6 atmosfere, dup Miustin, pe care o posed celulele marii
majoriti a microorganismelor, este suficient pentru dezvoltarea normal a acestora n
soluri, funcie de gradul de aprovizionare a acestora.
Astfel, n podzoluri presiunea osmotic este de 0,4-1,4 atmosfere, n cernoziomuri este
de 2,5 atmosfere iar n solurile srturoase presiunea osmotic a fazei lichide ajunge la 12-15
atmosfere; aici se pot dezvolta numai microorganisme care au o presiune osmotic a celulelor
ntre 12,5 i 16 atmosfere.
Partea gazoas a solului este reprezentat de aerul care ocup spaiile libere lsate de
ctre ap. Compoziia aerului din sol se deosebete de cea a aerului atmosferic prin raportul
cantitativ ntre gazele obinute. Astfel, oxigenul se gsete n cantitate mai mic dect n
atmosfer, datorit faptului c este consumat n activitatea microorganismelor i n respiraia
rdcinilor plantelor superioare. De aceea procentul de oxigen n aerul solului scade fa de
circa 21% n atmosfer, la numai18-20%.
Procentul de CO2 n aerul din sol este de cel puin 10 ori mai mare dect n aerul
atmosferic (0,15-0,65% n sol, fa de 0,03% n atmosfer), datorit eliberrii lui sub aciunea
de descompunere exercitat de microorganisme asupra substanelor organice.
Cantitatea de azot din aerul solului variaz puin de la 76-79%, fa de aerul
atmosferic unde este de 79%.
Consumul de azot molecular din aerul solului este foarte redus, el fiind folosit numai
de ctre unele microorganisme azotofixatoare. n unele soluri, n special n cele mltinoase,
n aerul solului se pot gsi i produsele gazoase ale metabolismului bacterian ca: NH3, CH4,
H2S, i H.
Compoziia aerului din sol nu difer totui prea mult fa de cea a aerului atmosferic,
datorit schimbului permanent, care este n funcie de permeabilitatea solului, aceasta din
urm fiind determinat de porozitatea necapilar a acestuia.
Reacia solului
Dezvoltarea normal a microorganismului depinde nu numai de elementele chimice
necesare desfurrii normale a metabolismul acestora ci i de unele condiii fizico-chimice,
dintre care cea mai important este reacia solului.
Majoritatea microorganismelor se dezvolt optim la un pH apropiat de neutru (pH =
7). Dar reacia solului variaz n funcie de tipul de sol, de la pH = 4 n podzoluri-soluri acide
29
pn la pH = 9 n soloneuri, care sunt soluri srturoase. Fiecare tip de sol are o reacie
caracteristic pe care i-o menine datorit capacitii de tamponare determinat n principal
de complexul coloidal al solului. n funcie de reacia i tipul de sol, microorganismele se
gsesc rspndite difereniat n funcie de capacitatea lor de a rezista la reacii extreme, foarte
acide sau alcaline.
Formarea solului
Procesul de formare a solului ncepe imediat ce roca ia contact cu mediul extern, cu
agenii fizici i chimici, precum i cu aciunea microorganismelor vii.
Caracteristica principal a solidificrii const n acumularea materiei organice i a
humusului, care determin capacitatea de reinere a substanelor nutritive. Elementele chimice
eliberate n urma alterrii, cu tendina de a fi splate (levigate), spre structurile mai adnci ale
rocii detagregate i alterate. Pe de alt parte organismele vii plantele superioare i
microorganismele se opun acestui proces, ducnd la reinerea i chiar acumularea substanelor
minerale n partea superioar a solului sub form de materie organic i de humus.
n cursul solidificrii, n esen se ntlnesc o serie de procese n urma crora ia
natere solul ca sistem complex i biologic n care se desfoar permanent fenomene
contradictorii, de al cror echilibru depind proprietile solului.
Astfel, n toate solurile se desfoar procesul de alterare a unor minerale primare i
secundare concomitent cu formarea altor minerale secundare caracteristice; descompunerea
resturilor vegetale i animale paralel cu sinteza acizilor humici; levigarea substanelor n
paralel cu bioacumularea; procesul de acumulare a apei n sol i pierderea ei prin evaporare i
prin transpiraia plantelor; absorbia energiei solare ce duce la nclzirea solului, paralel cu
iradierea i deci pierderea acestei energii.
n felul acesta intervenia organismelor vii asupra rocii dezagregate, marcheaz
nceputul procesului de solidificare i aduce modificri importante n marele circuit geologic
ce se desfoar n natur. Intervenia organismelor face ca peste marele circuit geologic s se
suprapun micul circuit biologic care este de sens contrar cu primul. Ca rezultat al acestui
proces, descompunerile substanelor organice i minerale sunt nsoite de intense procese de
sintez organic, efectuate de organismele vii.
Astfel se acumuleaz diferitele elemente necesare nutriiei plantelor i n special,
azotul, element important care lipsete din rocile iniiale.
Compoziia chimic a solului
Raporturile ntre microorganisme i sol sunt determinate de compoziia chimic a
acestuia n comparaie cu aceea a litosferei, a rocilor de origine (tabelul 7).
Tabelul 7
Compoziia chimic a litosferei n % pn la
adncimea de 10 m n unele soluri
Denumirea
elementelor
Oxigen
Siliciu
Aluminiu
Fier
Calciu
Mangan
Sodiu
Potasiu
Hidrogen
Carbon
Fosfor
Litosfer
46,29
27,61
7,81
5,40
3,77
2,68
2,36
2,40
0,21
0,22
0,10
Podzol
Cernoziom
Cantitatea n %
69,7
76,1
13,4
15,2
4,3
5,6
0,7
2,6
1,1
2,2
1,2
1,3
3,0
3,3
2,2
4,6
0,39
1,10
30
Magneziu
Sulf
Clor
0,08
0,03
0,01
1,1
-
2,2
-
33
2. CIRCUITUL AZOTULUI
Azotul este un element esenial pentru existena vieii n biosfer, deoarece este inclus
n structura tuturor proteinelor i a acizilor nucleici. Dei este prezent n natur n cantiti
foarte mari, se gsete aproape invariabil n forme inaccesibile direct, plantelor i animalelor.
Circuitul azotului n natur se desfoar pe parcursul a mai multor etape care implic
desfurarea unor multiple activiti biochimice, unele au loc n anaerobioz iar altele n
prezena oxigenului.
Aceste etape sunt:
fixarea N2;
amonificarea;
nitrificarea;
denitrificarea.
I. Fixarea azotului molecular se poate realiza pe cale abiotic i biotic.
Pe cale abiotic fixarea se realizeaz prin iradieri, descrcri electrice i prin
intermediul precipitaiilor.
Pe cale biotic fixarea azotului molecular este un proces lent i continuu prin care, sub
aciunea a peste 100 genuri de bacterii diferite, azotul gazos atmosferic este convertit la forme
fixe (NH4-, NO3-, NO2-), care sunt folosite de plante i introduse n forme organice utiliznd
energia obinut prin fotosintez.
Bacteriile care particip la aceast fixare au fost grupate astfel:
- bacterii fixatoare de N2 libere aerobe;
- bacterii fixatoare de N2 libere anaerobe;
- bacterii fixatoare de N2 care triesc n asociaie cu plantele.
n cazul celui de-al treilea grup n funcie de relaia care se stabilete ntre cei doi
parteneri, ntlnim trei tipuri de simbioz:
simbioza Rhizobium - leguminoase;
simbioza Actinomicete - neleguminoase;
simbioza asociativ.
II. Amonificarea, const n mineralizarea azotului proteic pn la NH3.
III. Nitrificarea cu cele dou trepte intermediare: nitritarea i nitratarea n care are loc
oxidarea NH3 pn la nitrii respectiv nitrai.
IV. Denitrificarea este procesul prin care are loc reducerea azotului nitric pn la azot
molecular, ncheindu-se n acest mod circuitul azotului.
Toate procesele desfurate pe parcursul celor patru etape sunt mediate numai de
bacterii, cu excepia unei etape premergtoare amonificrii, proteoliza n care pot aciona i
microfungii.
n timp ce n ecosistemele naturale, circuitul azotului este un proces echilibrat, n
sensul c pierderile de azot din sol sunt compensate de procesele de fixare, n sistemele
supuse procesului de agricultur, pierderile depesc ritmul de nlocuire.
Dac rezervele de azot din sol sunt limitate, fapt ce duce la apariia unor frecvente
dezechilibre ntre nevoia de azot i posibilitatea de a o satisface, din contr, rezerva de azot
atmosferic, este practic inepuizabil, calculele artnd c aceasta ar putea asigura necesarul
pentru cel puin 800.000 ani. Din pcate aceast imens cantitate este inaccesibil, direct,
organismelor vii i mai cu seam plantelor superioare.
n cursul ultimilor decenii datorit nevoilor crescnde de hran pentru o populaie n
permanent dezvoltare, cantitile de ngrminte chimice cu N2 aplicate au crescut continuu.
Dei o perioad de timp, ngrmintele chimice cu N au ndreptit speranele rezolvrii i pe
viitor a satisfacerii nevoilor nutritive pentru populaie, criza energetic a ultimilor ani i
apariia unor efecte secundare nedorite, a impus reconsiderarea acestei posibiliti.
34
Azotul atmosferic este convertit, industrial n NH3 prin procedeul Haber. Reacia are
loc la temperaturi ridicate de cca. 500oC i la o presiune de 300-600 atmosfere, ceea ce
presupune un consum ridicat de energie de cca 22.000 kcal/kg.
n acelai timp excesul de ngrminte chimice cu azot are efecte negative asupra
mediului i uneori asupra omului prin produsele vegetale pe care acesta le consum.
Creterea coninutului n protein la plante sub influena ngrmintelor cu azot are
loc n limita potenialului genetic al speciei sau soiului. De aceea excesul de azot duce la o
serie de deranjamente i la acumularea de azot nitric n plante. Aceste acumulri n plantele
furajere sau alimentare provoac intoxicaii grave ce pot duce chiar la moartea individului.
La copii, nitraii, sunt redui la nitrii care fiind absorbii de snge reduc capacitatea
acestuia de a transporta oxigenul prin formarea metahemoglobinei.
La aduli, nitraii sunt convertii la nitrosamin care, de asemenea este otrvitoare.
Folosirea n doze excesive a azotului duce la splarea acestuia i la mbogirea n
nitrai a pnzei de ap freatic care poate fi utilizat ca ap potabil sau n adpatul
animalelor.
De asemenea, utilizarea intensiv a ngrmintelor chimice duce la creterea
coninutului solului n unele elemente (Zn, Pb, Ni, Cr etc.) care anterior se gseau n forme
solubile doar ca urme.
Creterea concentraiei acestora peste o anumit limit, avnd efecte toxice asupra
plantelor i microorganismelor (Davidescu, 1974).
Datorit crizei energetice i efectelor secundare ale ngrmintelor chimice cu N, o
atenie tot mai mare se acord n ultimul timp mecanismelor naturale de fixare a azotului n
sol i n special fixarea biologic.
Prin procesele de fixare biologic sunt introduse n sol cantiti foarte mari de azot.
Microorganismele fixatoare de azot posed un complex enzimatic denumit nitrogenaz
capabil s activeze tripla legtur a moleculei de azot, care poate fi astfel redus la amoniac.
Procesul se desfoar la o temperatur relativ sczut de 15-40oC frecvent ntlnit n
sol i la presiune atmosferic normal.
n funcie de numeroi factori, dar mai ales de planta de cultur, cantitatea de azot
atmosferic fixat biologic variaz ntre limite foarte largi.
Legat de acest aspect, n anul 1971 Hank a sintetizat rezultatele din literatura de
specialitate pentru diferite ecosisteme, astfel:
- culturi de cmp 7-28 kg N/ha;
- angiosperme i alte plante neleguminoase 7-114 kg N/ha;
- leguminoase 73-865 kg N/ha;
- pdure 58-594 kg N/ha;
- puni 13-99 kg N/ha;
- ape 70-250 kg N/ha.
Fenomenul de fixare a azotului de ctre microorgansime a fost pus n eviden n anul
1888 de ctre Berthelot. Acesta a urmrit n paralel variaia azotului n vase cu sol nesteril i
n vase cu sol steril, constatnd c n solul nesteril coninutul n azot crete, pe ct vreme n
vasele cu sol sterilizat nu.
Fixarea N2 de microorganisme libere aerobe
n anul 1901 Beijerinck reuete izolarea din sol a dou specii de bacterii, care au
capacitatea de fixare aerob a azotului molecular.
Ulterior, cercetrile au evideniat existena i a altor specii capabile s realizeze acest
proces.
Dintre cele mai cunoscute specii putem enumera:
- Azotobacter chroococcum;
- Azotobacter vinelandii;
- Azotobacter agile;
35
- Azotobacter insigne;
- Azotobacter macrocytogenes;
- Azotobacter mobile;
- Azotobacter fluminensis;
- Beijerinckia indica;
- Derxia gummosa;
- Rhodospirillum sp.;
- Rhodopseudomonas sp.
Dintre acestea cele mai rspndite i mai cunoscute sunt cele din genul Azotobacter.
Bacteriile din genul Azotobacter sunt rspndite n natur mai ales n solurile
cultivate, bogate n humus cu reacie neutr i se gsesc rar n solurile acide, podzolice,
turboase i mltinoase.
Morfologia lor este foarte variabil n funcie de condiiile de mediu, fapt ce explic
descrierea la un moment dat a numerose specii separate care ulterior au fost considerate ca
sinonime.
Dintre speciile genului Azotobacter cea mai rspndit i mai eficace este Azotobacter
chroococcum.
Azotobacter chroococcum prezint o serie de aspecte morfologice considerate ca
fcnd parte dintr-un ciclu de evoluie corelat cu vrsta.
n funcie de vrsta coloniei celulele apar difereniat:
1. Celule tinere, au aspect de bastonae groase de 2 x 4 m, cu capetele rotunjite,
izolate sau n perechi.
2. Celulele adulte, sunt sferice sau ovale ca nite coci mari de 2 x 1,2 m, coninnd
numeroase granulaii constituite din lipide, volutin, glicogen etc.
3. Celulele btrne care apar n a 5-a zi de dezvoltare a culturii, sunt aproape sferice i
au dimensiuni mai mici de 1,5 x 1,3 m. n condiii nefavorabile de mediu apar chitii.
Chitii sunt prevzui cu un perete gros, format din dou straturi i apar prin
modificarea celulelor adulte sau a celulelor btrne. Acetia mai poart numele de
macrochiti.
Citoplasma lor este constituit din protein concentrat.
Chistul este o form latent, de rezisten a germenului, care sub aceast form se
menine viabil mai multe luni sau chiar ani. Prin germinare, din chiti iau natere celule tinere
care reiau ciclul descris.
n condiii de cultur pe medii lichide Azotobacter formeaz un vl gros la suprafa,
albicios, care cade treptat la fund, formeaz un depozit dens albicios i care mai trziu devine
brun-negru.
Pe mediile solide formeaz colonii lucitoare, la nceput incolore, vscoase, cu tendina
de scurgere prin glisare pe suprafaa mediului. Cu timpul ele se coloreaz n brun-negru,
datorit pigmentului melanic.
Bacteria se dezvolt la temperatura cuprins ntre 9-35oC i la un pH ntre 5,8-8,5,
fiind foarte sensibil la aciditate sub pH=5,8.
Este strict aerob, Gram negative i oxideaz complet hidraii de carbon pn la CO2,
fr a produce n mediu metabolii intermediari. n condiii optime fixeaz aproximativ 20 mg
N2 pentru fiecare gram de glucide oxidate.
Randamentul fixrii este variabil de la o tulpin la alta, dup natura sursei de carbon.
Deosebirile dintre diferitele tulpini constau n viteza aciunii lor, unele fiind n stare s fixeze
n 3 zile 100 % din concentraia final, n timp ce altele realizeaz fixarea ntregii cantiti
numai dup 12 zile.
36
37
3. CIRCUITUL CARBONULUI
Dac a fost relativ uor s se dea o descriere, destul de schematic e drept, a ciclului
azotului n sol, nu este la fel de simplu pentru circuitul carbonului; acesta din urm nu are
verigile bine individualizate care ale primului.
Mai nti trebuie s artm c sursele de carbon introduse n sol sunt numeroase:
carbonul mineral al CO2 atmosferic i carbonaii telurici, urmeaz apoi carbonul organic al
vegetalelor i animalelor sub forme multiple, de la glucide simple pn la substane
polimerizate ca celuloze sau cu structuri complexe ca lignina.
Metabolismul acestor forme diverse este mult diferit n sol din mai multe cauze i
anume:
- datorit nsi structurii substanelor carbonate;
- datorit florei multiple zimogene care acioneaz asupra acestor substane.
Aceste diferene se traduc prin viteza de atac diferit i prin produii de metabolism
intermediari obinui. Dac n adevr produii finali ai oxidrii i mineralizrii carbonului
organic sunt n mod constant CO2 i H2O ( i CH4 n condiii de anaerobioz), produsele
intermediare sunt foarte variate, sub form de acizi organici i zaharuri, mai mult sau mai
puin complexe.
De fapt, mineralizarea carbonului organic este n mod excepional realizat ntr-o
singur etap i ca regul general, numeroase grupuri de bacterii i ciuperci intervin n mod
succesiv pentru a ajunge la produse simple terminale.
Acest ciclu al carbonului este complicat nc prin faptul c substanele hidrocarbonate
sunt totdeauna asociate n proporie variabil cu substane azotate (proteice), lipide, precum i
cu lignina, cerurile, rinile, taninurile, etc. Proporia relativ a acestor diverse substane
modific n mod profund metabolismul produilor hidrocarbonai.
Metabolismul mai variaz i n funcie de structura fizic i chimic a solului, de clim
(temperatur, umiditate), de sistemul de cultur, etc.
Ultimul factor ce complic situaia este acela c n acelai timp cnd substanele
hidrocarbonate sunt degradate, mineralizate, microorganismele realizeaz sinteza, pentru
propriul lor corp, a unor produi ca hemiceluloza.
Este ca atare dificil de tiut care sunt produii intermediari de degradare i care sunt
cei de sintez. n orice caz, att unii ct i alii se pot combina pe cale chimic sau fizic ntre
ei, precum i cu ali compui din sol pentru a forma substanele de rezerv humic.
42
43
Celuloza
%
28,5
25,43
37,27
Pentozani
(hemiceluloze)
13,52
21,33
21,67
Lignina
%
28,25
20,40
21,21
Grsimi i
cear
2
2,02
0,67
37,67
31,50
14,70
1,37
30,56
23,54
15,13
0,77
Proteine
%
9,31
4,30
3
2,11
3,50
Celuloz
%
18,06
26,9
30,59
36,26
Pentoze
%
16
21,18
22,71
22,90
Lignin
%
9,9
11,8
18
17,1
Grsimi i
ceruri
2,4
2,6
1,7
1,26
N total
%
2,5
1,76
1,01
0,24
produii finali CO2 i ap. Etapele intermediare sunt ns diferite, n funcie de umiditatea,
aeraia i temperatura solului, care condiioneaz intervenia fie a bacteriilor aerobe, fie a
celor anaerobe sau a ciupercilor.
n cazul atacului bacterian aerob se formeaz pe parcurs acizii piruvic, lactic, acetic,
acetaldehida iar ca produi finali CO2 i H2O.
n cazul interveniei ciupercilor aerobe se produce pe parcurs acizi gluconic, citric,
oxalic, fumaric, succinic, etc.
Atacul bacteriilor anaerobe are ca rezultat intermediar formarea de acizi volatili ca
acidul lactic, hidrogenul, metanul i CO2.
n urma aciunii fungilor anaerobi se produc acid fumaric i alcool.
Aceste procese au fost urmrite n condiii de laborator dar n natur situaia este mult
mai complex, deoarece produii intermediari formai sunt fie metabolizai imediat de ctre
alte grupe de microorganisme, cum este cazul la Azotobacter care utilizeaz alcoolii, i acizii
organici pentru sinteza proprie a compuilor si celulari, fie mineralizai complet pn la CO2
i H2O.
n ceea ce privete produii solubili n ap, a fost studiat problema zaharozei care este
descompus de flora zimogen. Mai nti intervine B.megaterium care formeaz acid oxibutiric i apoi prolifereaz genul Pseudomonas care utilizeaz acest acid eliberat de primul,
producndu-se i aici o reacie n lan.
Reaciile de degradare sunt n mod cert cuplate cu cele de sintez, cci produsele mai
simple rezultate sunt folosite de anumii germeni pentru constituirea capsulei gomoase,
format din substane poliozide cu greutate molecular ridicat de tipul hemicelulozelor.
Degradarea hemicelulozelor
Cantitatea hemicelulozelor n resturile vegetale variaz ntre 6-30% din greutatea
uscat, n funcie de specie i vrsta plantei.
Hemicelulozele sunt polizaharide ce nsoesc celuloza n esuturile vegetale i care
sunt grupate n pentozane i hexozane. Din pentozane fac parte:xilanul format din resturi de
xiloz i arabanul din resturi de arabinoz. Din hexozane fac parte mananele constituite din
resturi de manoz, glucomananele alctuite din resturi de glucoz i manoz i galactamanele,
formate din resturi de galactoz i manoz.
Degradarea hemicelulozelor
Dintre hemiceluloze, galactanele sunt mai rezistente la atacul microbian, n timp ce
xilanele i mananele sunt mai repede metabolizate, fiind descompuse de o flor nespecific.
Viteza de descompunere a acestor substane depinde de cantitatea de azot accesibil i
n timp se produce n mod ealonat i n ritm diferit.
Astfel, n paiele de ovz care conin circa 23% hemiceluloz, se descompun n primele
4 zile 10% apoi 8,5% n urmtoarele 4 zile i numai 4,50% n cele 8 zile care urmeaz.
Microorganismele care descompun hemiceluloza se succed ntr-o anumit ordine
ncepnd cu bacilii nesporulai, bacilii sporulai i cocobacilii.
Aproape constant apare i Azotobacter care nu este capabil s atace direct
hemicelulozele, dar folosete produii intermediari de metabolism formai de celelalte grupe
de bacterii.
Dintre ciuperci s-au identificat n acest proces Zygorhynchus, Cuninghamella,
Rhizopus, Trichoderma, Humicola, Aspergillus niger i A.fumigatus.
Actinomicetele au fost identificate de asemenea ca fiind active n descompunerea
hemicelulozelor.
Unele bacterii polifage, sunt capabile s atace i hemicelulozele. Printre acestea se
numr: Alcaligenes sp.,Pseudomonas sp.,B. Circulans i Sporocytofaga myxococcoides care
este o bacterie celulolitic autentic.
45
49
50
4. Reducerea fierului trivalent. Acest produs se datoreaz unor bacterii facultativ sau
obligat anaerobe ca B. circulans, B. polymyxa, Enterobacter aerogenas, Clostridium
butyricum, etc.
Aceasta n prezena substanelor organice ca glucoza, reduc fierul trivalent la Fe 2+, Fe
trivalent servind ca acceptor de electroni.
Mai sunt capabile de reducerea Fe trivalent i unele ciuperci din sol. Toate aceste
microorganisme fier-reductoare sunt chimioorganoheterotrofe.
Trebuie s menionm c oxidarea Fe2+ i reducerea Fe trivalent n sol se poate
produce i fr participarea direct a microorganismelor (fig.32).
13. Microorganismele din sol i circuitul fosforului
Fosforul este un element absolut necesar vieuitoarelor i intr n compoziia acizilor
nucleici, a unor proteine, a unor compui macroergici (ATP), a fosfolipidelor, a
fosfozaharidelor, a fitinei, etc.
Ciclul fosforului redat n fig.33 se desfoar n mai multe faze, dup cum urmeaz:
1. Mineralizarea fosforului organic se desfoar n paralel cu mineralizarea
compuilor organici cu N (amonificarea) sub aciunea acelorai microorganisme. Unul dintre
microorganismele foarte active n mineralizarea P organic este Bacillus megaterium var.
phosphaticus.
n urma mineralizrii P se elibereaz sub form de ortofosfat solubil, asimilabil de
ctre plante i microorganisme; n acelai timp ns ortofosfatul solubil poate trece n
ortofosfai de Ca, Fe, Al, Mg, Cu i Ni care sunt insolubili.
Compuii organici cu P reprezint 15-85% din cantitatea total de P din diferite soluri.
ntre compuii organici cu P ai solului predomin fitina i acizii nucleici. Fitina este de
origine vegetal, iar acizii organici provin de la microorganisme, plante i animale. Fitina
constituie ntre 10-80% din cantitatea total de P organic din soluri. Ea este sarea de Mg i Ca
a acidului fitic, iar descompunerea ei hidrolitic este catalizat de fitoz.
2. Mobilizarea ortofosfailor insolubili este procesul de solubilizare a fosfatului
tricalcic, a ortofosfailor de Fe, Al, Mg, Mn, Cu, Ni, ce are loc sub aciunea acizilor produi
de microorganisme i de cei excretai de rdcinile plantelor. Aici intr acizii azotos i azotic
produi de microorganismele nitrificatoare, acidul sulfuric produs de microorganismele
sulfoficatoare, acidul carbonic i acizii organici produi de microorganisme, precum i de
rdcinile plantelor.
Dintre acizii organici acidul 2-ceto-D-gluconic joac un rol deosebit n solubilizarea
ortofosfailor insolubili. Mai contribuie la solubilizare i acizii citric, succinic, malic, oxalic,
tartric, lactic, precum i acizii humici.
3. Transformarea meta-, piro- i polifosfailor este realizat sub aciunea unor bacterii
ca Pseudomonas fluorescens, Sporocytophaga cauliformis i a unor ciuperci ca Aspergillus i
Penocillium. Aceste reacii sunt catalizate de enzime, dar ele pot avea loc i sub aciunea
aciditii, iar transformarea meta- i pirofosfailor poate fi catalizat i de MnO2
4. Oxidarea fosfailor i hipofosfailor are loc sub aciunea unor microorganisme
aerobe i este de asemenea catalizat de enzime.
5. Reducerea ortofosfailor este produs de microorganisme aerobe, reacia respectiv
fiind de natur enzimatic,.
n prezena nitrailor i sulfailor , reducerea ortofosfailor este inhibat, deoarece
nitraii i sulfaii sunt utilizai mai uor ca acceptori de electroni.
Schema general a transformrilor fosforului n sol este redat n fig. 33 dup
Cosgrove.
52
56
57
Raporturi antagoniste
Antagonismul const n relaii n care un microorganism sau un fag exercit o aciune
defavorabil asupra unui alt microorganism. Fenomenul apare cnd un organism secret n
mediu produse ale activitii vitale care inhib dezvoltarea altui organism sau l omoar.
n sol apar urmtoarele aspecte de antagonisme ntre microorganismele care l
populeaz:
- Antagonismul microbian propriu-zis, care se realizeaz prin:
Concuren pentru sursa de hran, ce apare cnd dou specii au necesiti nutritive
asemntoare. Specia cu o cretere rapid mpiedic dezvoltarea speciei cu cretere lent. De
exemplu, la nceputul descompunerii resturilor vegetale i animale, bacteriile se dezvolt
abundent, n timp ce actinomicetele nu se dezvolt. Dup epuizarea substanelor uor
asimilabile, bacteriile mor. n locul lor apar actinomicetele care se multiplic rapid,
consumnd resturile organice care nu au fost descompuse de bacterii.
Modificarea mediului prin produi metabolici. De exemplu, acidul lactic i acidul
butiric, produi ai bacteriilor de fermentaie, acioneaz asupra tuturor microorganismelor
asociate i, astfel mpiedic multiplicarea bacteriilor de putrefacie. Tot aici, trebuie menionat
i fenomenul de antibioz, cnd antibioticul produs de un microorganism poate elimina
dezvoltarea altor organisme din sol. De exemplu, Streptomyces grisseus produce
streptomicin, care inhib activitatea bacteriei Bacillus subtilis.
Parazitismul este fenomenul prin care un fag sau un microorganism se dezvolt pe
seama i n dauna altui microorganism. Dup cum s-a mai menionat, fagii paraziteaz
bacterii, actinomicete, cianobacterii i ciuperci, al crui mecanism a fost, de asemenea, descris
anterior.
Sunt i bacterii i actinomicete care lizeaz alte bacterii, respectiv ciuperci sau alge.
Bacteriile micolitice sunt mixobacterii sau tulpini de Bacillus i Pseudomonas, iar
actinomicetele micolitice sunt streptomicete i nocardii.
Liza la cianobacterii i la algele verzi este efectuat de mixobacterii i alte bacterii,
precum i de unele tulpini de streptomicete.
Sunt i cazuri cnd att parazitul ct i gazda sunt ciuperci. De exemplu, Penicillium
vermiculatum este parazit pe Rhizoctonia solani. Aceasta din urm poate fi parazit la rndul ei
pe alte ciuperci, de exemplu pe Mucor recuvus.
Prdtorismul (predaia) este un act de agresiune cnd un microorganism (agresor)
atac pe un altul (prada) pe care l captureaz, ingereaz i diger.
De exemplu, bacteriile sunt o hran a protozoarelor (protozoarul Rhizopoda consum
n timpul existenei sale circa 40.000 de bacterii). Prin aceasta, ns, nu se reduce numrul
bacteriilor, ci se poate, uneori, mri intensitatea proceselor fiziologice ale bacteriilor. Astfel
de relaii pot fi considerate ca relaii de simbioz. Sunt i ciuperci prdtoare care consum
animale mici, bacterii prdtoare, protozoare, metazoare i chiar bacteriofagi.
Studiul raporturilor antagoniste dintre diferii reprezentani ai micropopulaiei solului
prezint interes n sensul dirijrii lor pentru protecia plantelor cultivate, excluznd astfel
mijloacele chimice de combatere, care prezint multe neajunsuri.
Simbioza (mutualismul)
Simbioza este o form de convieuire ntre dou sau mai multe specii i const ntr-o
nutriie ncruciat: fiecare simbiont produce un metabolit pe care nu-l poate produce cellalt.
n formele ei superioare, simbioza const i ntr-o ptrundere morfologic reciproc a
ambilor parteneri (ex. lichenii). Uneori, n relaiile simbiotice se pot observa i trsturi
parazitare. Simbioza poate ave loc ntre parteneri aparinnd unor grupe diferite de
microorganisme i anume:
a) ntre diferite bacterii, de exemplu, simbioza dintre bacteriile denitrificatoare i cele
fixatoare de azot, pe de o parte i bacteriile celulolitice, pe de alt parte. (Simbioza const n
schimbul de surs de C i energie i de surs de N).
58
Prima zon, numit "rizosfera intern" (rizosfera propriu-zis), are o raz de 0-0,5
cm. Ea cuprinde microorganismele de la suprafaa rdcinilor.
A doua zon, numit ''zona periradicular", cuprinde microorganismele care se
gsesc la o distan de 0,5 cm de rdcin.
A treia zon sau "rizosfera extern" ("edatosfera") cuprinde microorganismele care
se gsesc la o distan mai mare de 0,5 cm de rdcin.
Prezena mai multor microorganisme (n special bacterii) n rizosfer dect n solul
nerizosferic (fr rdcini), se numete efect rizosferic. Intensitatea efectului rizosferic la
bacterii se exprim prin raportul R/S (rizosfer/sol nerizosferic) care, n general este de 5:10
(la actinomicete, ciuperci, alge i protozoare R/S este ntre 2 i 3).
Numrul bacteriilor n rizosfer este influenat de urmtorii factori:
- Distana dintre suprafaa rdcinii i particulele de sol. Pe suprafaa rdcinii se
gsesc cele mai multe bacterii.
- Zonele rdcinii. Solul din jurul perilor radiculari conine mai multe bacterii dect
cel din jurul celorlalte zone ale rdcinii.
- Distana dintre zonele rdcinii i suprafaa solului. Zonele rdcinilor mai apropiate
de suprafaa solului au o rizosfer mai bogat n bacterii dect zonele rdcinilor, de pe
aceeai plant, care se gsete la adncime.
- Specia plantei. n rizosfera gramineelor perene se gsesc mai multe bacterii dect la
cele anuale, iar la lucern i trifoi mai multe dect la leguminoase.
- Faza de vegetaie. Flora bacterian din rizosfer crete n cursul dezvoltrii plantei,
ajungnd la o valoare maxim n perioada nfloritului, dup care scade evident.
- Coninutul solului n substane nutritive. n solurile fertile, raportul R/S este mai mic
dect la solurile srace.
Efectul rizosferic se manifest nu numai sub aspect cantitativ (numr de
microorganisme), ci i calitativ, fapt ce const n modificarea echilibrului dintre diferite grupe
de microorganisme din sol.
n rizosfera plantelor predomin bacteriile nesporogene, bastonaele Gram-negative
din genurile Pseudomonas, Flavobacterium, Achromobacter i Agrobacterium (n rizosfera
unor plante se dezvolt i Rhizobium, Azotobacter, Azospirillum .a.).
Relaiile dintre rdcinile plantelor i microorganismele din rizosfer
Aportul plantelor. Rdcinile influeneaz, din punct de vedere mecanic, structura
solului, elibereaz CO2, secret metabolii cu aciune energetic, enzimatic, care activeaz
sau inhib creterea lor, lsnd resturi de esuturi care sunt utilizate ca hran de
microorganismele din sol.
Bacteriile din rizosfer sunt acelea care utilizeaz excreiile radiculare i substanele
provenite din exfolierea esuturilor radiculare. Excreiile radiculare conin: aminoacizi,
vitamine, acizi organici simpli, zaharuri, baze azotate, enzime, glucozide .a.
Bacteriile cu un potenial ridicat de sintez a substanelor biologic active din rizosfer,
cu o mare capacitate de nmulire i capabile s se hrneasc cu produsele de eliminare ale
rdcinilor, ca i acelea care prin metabolismul lor produc substane ce inhib nmulirea
altora, ajung dominante n structura microbiologic a rizosferei.
Cantitatea i calitatea produilor eliminai de rdcinile plantelolr sunt determinate, pe
lng baza ereditar, i de unii factori externi, dintre care menionm: condiiile de nutriie,
umiditatea, lumina, pH-ul, temperatura, aeraia i altele care condiioneaz buna cretere i
dezvoltare a plantelor i, n special, a sistemului radicular.
Aportul bacteriilor const n urmtoarele:
- mbuntesc condiiile nutritive ale plantelor prin mineralizarea compuilor
organici, producnd N, P, K, S, Ca etc. sub form accesibil plantelor.
- Stimuleaz creterea plantelor prin fitohormonii pe care i produc i care sunt
absorbii de rdcinile plantelor. Principalele specii microbiene care au aceast capacitate
sunt: Pseudomonas sinuosa, P. fluorescens, P. desmoliticum, Bacillus mesentericus flavus .a.
60
61
Microbiologia fermentaiilor
- biosinteza a diferite substane chimice (alcooli, acid acetic, acid lactic, acid citric,
aceton, antibiotice);
- producerea pe cale fermentativ a unor alimente (produse lactate, brnzeturi) a unor
buturi alcoolice (vin, bere) i a furajelor nsilozate;
- obinerea de produse folosite n industria textilelor (fibre de in, cnep prin topire).
Microbiologia industrial mai studiaz i aplic metodele de combatere a alterrilor
microbiene a alimentelor cu ajutorul conservrii prin refrigerare, sterilizare, fermentaii i alte
procese tehnice.
1. Fermentaia alcoolic
Alcoolul etilic sau etanolul (CH3CH2OH) se obine prin fermentarea complet, n
special de ctre unele drojdii, a diferite zaharuri, urmat de separarea prin distilare i
purificare a alcoolului obinut. Fermentaia alcoolic este una din cele mai importante
fermentaii industriale, deoarece alcoolul este ntrebuinat curent n industria alimentar,
chimic, farmaceutic, a parfumurilor i cauciucului.
Materiile prime folosite la fabricarea alcoolului sunt ieftine, abundente n natur i
sunt grupate astfel:
- materii prime amidonoase, rezultate din cartof, porumb, orz, secar, care se pot
utiliza dup transformarea hidrolitic a amidonului din compoziia lor n zaharuri mai simple,
fermentabile de ctre levuri;
- materii prime zaharoase, provenite din sfecla pentru zahr sau trestia de zahr,
sucurile de fructe, melasa rezultat ca deeu de la fabricarea zahrului i leiilor sulfitice ce
rezult ca deeu de la fabricarea celulozei, cu coninut sczut de 1-5 % zahr;
- materii prime celulolitice, rezultate din industria hrtiei ca lemnul i stuful, care prin
fierbere cu acizi sub presiune se hidrolizeaz cu formarea de hidrai de carbon mai simpli,
fermentabili.
nainte de folosirea lor n fermentaiile industriale, amidonul, celuloza i hemiceluloza
trebuiesc hidrolizate sau convertite n zaharuri cu molecule relativ simple i fermentabile. n
acest scop se folosesc fie preparate enzimatice, ca malul de cereale, sau enzime de natur
microbian, provenite de la bacterii i mucegaiuri, fie anumite substane chimice ca acizii
diluai, sau aciunea asociat a unora din aceti ageni.
Microorganismele care produc fermentaia alcoolic a zaharurilor sunt reprezentate de
ciuperci n principal din genul Saccharomyces i unele bacterii ca, Thermobacterium mobile,
B. macerans, Sarcina ventriculi, Bacillus acetosetilycus etc.
Fermentaia alcoolic poate fi spontan, produs de drojdiile slbatice, prezente n
natur, sau dirijat prin introducerea n materialul de fermentat a unor sue de drojdii
selecionate, ce au capacitate superioar de fermentaie.
Temperatura optim de activitate este de 28-32oC.Tulpinile selecionate au capacitatea
de a suporta concentraii mari de alcool i de a consuma cantiti mari de hidrocarbonate
pentru sintezele lor proprii.
Aceste drojdii au un echipament enzimatic foarte bogat, graie cruia obin n mediu
anaerob energia necesar manifestrilor vitale, prin procesul de fermentaie alcoolic a
hidrailor de carbon, dup relaia global:
C6H12O6
2CH3-CH2OH + CO2
2. Utilizarea microorganismelor n vinificaie
Vinul este o butur alcoolic nedistilat, cunoscut din cele mai vechi timpuri, care se
obine prin fermentaia alcoolic a mustului de struguri. Fermentaia mustului, obinut prin
zdrobirea strugurilor recoltai la maturitate, se face n vase speciale deschise, sub aciunea
drojdiilor din flora natural sau a unor tulpini selecionate.
Pe struguri, n must i respectiv n vin, exist un numr nsemnat de microorganisme,
bacterii i ciuperci care iau parte la procesul de fermentaie, avnd fie un rol pozitiv n cazul
63
fermentaiilor normale, fie un rol negativ, de "mbolnvire" a vinului, cnd declaneaz unele
procese fermentative care duc la efecte nedorite.
Levurile
Levurile sunt ciuperci microscopice care au capacitatea de a produce fermentaia
caracteristic a mediilor ce conin zaharuri (levere = a ridica). Ele sunt grupate din punct de
vedere sistematic n subncr. Ascomycotina, fam. Saccharomycetaceae i n subncr.
Deuteromycotina (Fungi imperfeci), fam. Cryptococcaceae.
Rspndirea levurilor
Levurile sunt larg rspndite n natur, ele se ntlnesc n sol, ape, pe plante, flori,
fructe etc.
Solul este considerat rezervorul principal al levurilor, unde numrul lor este n medie
de 250.000 celule pe gramul de sol.
n general, se ntlnesc n stratul superficial cuprins ntre 2-10 cm iar n solurile
podgoriilor pn la 30-40 cm, att ca forme vegetative ct i forme de rezisten.
Levurile apar pe boabe n timpul maturrii acestora i sunt rspndite de insecte (n
special Drosophylla sp.) prin intermediul particulelor de praf i nu n ultimul rnd odat cu
stropii provocai de ploi.
Levurile ce se gsesc pe struguri aparin la mai multe specii, proporia dintre ele fiind
diferit n funcie de mai muli factori: condiiile climatice, starea de sntate a recoltei,
coninutul n zahr al mustului etc.
Principalele levuri ntlnite n vin
Levuri sporogene
Saccharomyces ellipsoideus (Sacch. cerevisiae), prezint importana cea mai mare
pentru fermentaia mustului. Levurile acestei specii au form elipsoidal sau globuloas.
La fermentarea mustului prezint un randament ridicat realiznd n medie 1 ml alcool
pur din 1,7 g zahr i rezist pn la concentraii de 16 % vol. alcool, uneori chiar mai mult.
Temperatura optim este de 20-25oC i suport concentraii de pn la 250-300 mg/l
SO2 total.
Dup declanarea fermentaiei ele pun stpnire rapid pe mediu pentru ca la sfritul
procesului numrul lor s scad foarte mult.
Saccharomyces oviformis. Se prezint sub form oval, uneori rotund. Aceast levur
este specific regiunilor calde unde strugurii realizeaz concentraii ridicate n zahr. Prezint
acelai randament n alcool dar are o putere alcooligen mai mare dect Sacch. ellipsoideus
depind uneori 18 % vol. alcool.
Specia devine dominant spre sfritul fermentaiei i suport concentraii de pn la
300 mg/l SO2 total i 100 mg/l SO2 liber.
Este considerat o bun levur de finisaj la prepararea vinurilor seci, obinute din
musturi bogate n zahr. n schimb trebuie inactivat sau nlturat din vinurile demiseci,
demidulci i dulci, ntruct majoritatea accidentelor de refermentare se datorete acestei
specii.
Saccharomyces acidifaciens (Sacch. bailii).
Specie rezistent la concentraii mari de SO2, putndu-se dezvolta pn la concentraii
de 12 % vol. alcool. Provoac mbolnvirea vinurilor demiseci i dulci sulfitate.
Contaminarea este facilitat de proprietatea ei de a fermenta cu uurin fructoza
lsnd neatins glucoza.
Cum majoritatea levurilor fermenteaz mai nti glucoza n vinurile dulci-licoroase
zahrul restant este constituit n principal din fructoz.
Saccharomyces chevalieri, se aseamn sub raporul activitii fermentative cu
Saccharomyces ellipsoideus dar sunt puin ntlnite n vinuri.
64
66
n unele pivnie acest mucegai se dezvolt pe perei ntr-un strat gros cu aspect de
catifea i datorit capacitilor sale de a purifica aerul i de a regla umiditatea atmosferic,
realizeaz condiii deosebite pentru maturarea i nvechirea vinurilor.
Botryotinia fuckeliana prezint ca form conidian Botrytis fuckeliana i produce
"putregaiul cenuiu al strugurilor".
Aceast boal apare la intrarea n prg i este favorizat de crparea sau rrirea
pieliei boabelor, producia n unii ani putnd fi diminuat cu 60-90 %.
Vinurile obinute din strugurii atacai de aceast ciuperc sunt slab alcoolice,
neplcute la gust, cu miros specific de mucegai i care se mbolnvesc uor.
n unele toamne secetoase, cu diminei nelipsite de rou apare aa numitul "putregai
nobil", care conduce la obinerea unui must de nalt calitate.
n acest caz scade mult coninutul boabelor n ap i crete concentraia n zahr (de la
200-220 pn la 400-500 g/l).
Producia scade mult, uneori cu peste 40 %, dar se obin vinuri cu o arom buchet
deosebit i foarte plcut.
Bacteriile vinului
Bacteriile prezint o mare importan pentru calitatea vinurilor. Unele dintre ele n
anumite condiii pot contribui prin activitatea lor la mbuntirea acesteia; cele mai multe pot
provoca vinurilor transformri nedorite i chiar mbolnviri grave.
n perioada recoltrii strugurilor pe pielia boabelor, pe lng levuri i mucegaiuri se
gsesc i bacterii, dar pot fi ntlnite de asemenea n crame i pivnie, ndeosebi pe suprafaa
intern a butoaielor i cisternelor n care se fermenteaz mustul sau se pstreaz vinul i care
nu au fost corect curate i ntreinute.
Dup procesele pe care le declaneaz, bacteriile au fost grupate n:
- bacterii lactice;
- bacterii acetice.
Bacteriile acetice
Sunt microorganisme aerobe, se ntlnesc att pe strugurii sntoi ct i pe cei
vtmai, precum i n musturi sau vinuri, mai ales cnd sunt pstrate n vase incomplet pline.
Bacteriile acetice care se dezvolt n vin formeaz la suprafaa acestuia un vl sau o
pelicul care uneori poate fi alburie, subire, aproape transparent cu reflexe irizante i care
poate urca rapid pe pereii vasului.
Alteori acest vl este mai gros, uleios, hidrofob i se coloreaz pe msura mbtrnirii
n brun.
ntr-un al treilea caz vlul format atinge mai muli milimetri grosime, este vscos, greu
de desfcut i care cu timpul cade la fundul vasului, cunoscut i sub numele de cuib de oet.
Genul Acetobacter
Acest gen grupeaz specii cu celule sub form de bastonae dispuse izolat, n perechi
sau lanuri ce sunt imobile sau prevzute cu cili dispui peritriche.
Speciile genului Acetobacter produc oxidarea etanolului pn la acid acetic, la un pH
de aproximativ 4, precum i a acidului acetic a lactaiilor i aminoacizilor. Ciclul Krebs este
prezent i activ. Se dezvolt la temperaturi cuprinse ntre 5-42oC, cu un optim de 30oC.
Speciile cele mai importante sunt:
- Acetobacter aceti;
- Acetobacter pasteurianus;
- Acetobacter peroxydans.
Genul Gluconobacter
Cuprinde bacterii asemntoare din punct de vedere morfologic cu speciile genului
Acetobacter.
67
68
BIBLIOGRAFIE
1.Anghel I., Toma M., Voica C., Cojocaru I. - Biologia i tehnologia drojdiilor, Vol. I 1989, Vol. II - 1991, Vol. III - 1993. Ed. Tehnic, Bucureti.
2. Buchanan R.E., Gibbons N.E. - Bergeys manual of determinative Bacteriology , Ed.
Wiliams.
3. Eliade Gh., Ghinea L., tefanic Gh. - Microbiologia solului, Ed. CERES, Bucureti,
1975.
4. Eliade Gh., Ghinea L., tefanic Gh. - Bazele biologice ale fertilitii solului. Ed. CERES,
Bucureti, 1983.
5. Hatman M. - Microbiologie - Lucrri practice, Universitatea Agronomic Iai - Centrul de
multiplicare, Iai, 1990.
6. Hatman M., Ulea E. - Microbiologie - Curs, Universitatea Agronomic Iai - Centrulde
multiplicare, Iai, 1993.
7. Kiss t., tefanic GH., Pasca Daniela, Drgan-Bularde Zborovschi, Crian R. Enzimologia mediului nconjurtor, Ed. CERES, Vol. I - 1991, Vol. II, 1993.
8. Mihescu Gh., Gavril L. - Biologia microorganismelor fixatoare de azot, Ed. CERES,
Bucureti, 1989.
9. Papacostea P. - Biologia solului. Ed. tiinific i Enciclopedic, Bucureti, 1976.
10. Zarnea Gh. - Tratat de microbiologie general, Ed. Academiei Romne, Bucureti, Vol.
I - 1983, Vol. II - 1984, Vol. III - 1986, Vol. IV - 1990,Vol.V - 1994.
69