Proprietile proteinelor

Obiectivele:
1. Proprietile fizico-chimice ale proteinelor
2. Masa molecular, metode de deteminare
3. Solubilitatea proteinelor, factorii ce o influeneaz.
4. Proprietile soluiilor proteice (coloizi). Factorii de stabilizare n soluie a substanelor coloidale.
5. Starea soluiilor coloidale sol, gel, xerogel. Exemple.
6. Sarcina electric a proteinelor. Punctul i starea izoelectric.
7. Denaturarea proteinelor, agenii ce provoac denaturarea. Ce modificri sufer structura proteinei la denaturare.
8. Coagularea proteinelor. Factorii care previn coagularea.
9. Metodele de studiere a componenei calitative i cantitative a proteinelor a) hidroliza b) cromatografie c)
electroforeza d) salifiere e) dializa f) gel-filtrare
Proprieti fizico-chimice

Mas molecular
Solubilitatea proteinelor
Proprietile amfotere
Denaturarea
Sarcina electric a proteinei
Mas molecular a proteinelor
proteinelor
este comparativ cu alte substane mare: intre 10.000 i 40.000.000 Daltoni.
se determin prin diferite metode:
prin calcul cu ajutorul compoziiei chimice cunoscute: Ex:
Prin analiza de sedimentare
Prin studierea presiunii osmotice
Prin difuzia luminii
Prin cromatografia de excludere molecular
Masa molecular a diferitelor proteine. Solubilitatea proteinelor
Variaz n limite mari:
- Proteinele globulare prezint grade diferite de solubilitate,
- cele fibrilare sunt insolubile n ap.

Solubilitatea este deteminat de:

prezena gruprilor funcionale hidrofile pe suprafaa moleculei proteice a resturilor AA (cu sarcini electrice
(COO ; NH3) i de grupri polare (OH, SH) care interacioneaz cu dipolul de ap.) Grupa COO fixeaz 4 molecule H2O,
NH2- -3; iar OH i NH cte l2.

de particularitile de organizare (proteinele globulare se dizolv mai bine fa de cele fibrilare)

-

Solubilitatea este influenat de

PH-ul mediului, care modific sarcina electric a proteinei
Temperatur
de proprietile solventului (ex:apa pur, soluii saline slabe;).Prezena srurilor metalelor uoare Na Cl, MgCl2,
Na2SO4, care:
la concentraii mici mresc solubilitatea proteinelor
la concentraii mari scad solubilitatea proteinelor i ele precipit. Acest proces se numete salifiere.

Proprietile soluiilor proteice

Proteinele sunt substane macromoleculare, de aceea formeaz soluii coloidale.

Spre deosebire de soluiile coloidale obinuite, soluiile proteice nu necesit prezena stabilizatorului. Soluiile
proteice sunt stabile i cu timpul nu se precipit.
Soluiile proteice posed proprieti caracteristice soluiilor coloidale:

Proprietile optice(efectul Tindal)

Vitez de difuzie mic.

Viscozitate mare
Proprieti osmotice
pot forma geluri

Proprietile optice

Soluiile proteice concentrate posed opalescen specific. La iluminarea lateral a soluiei proteice raza de
lumin n ea devine vizibil., formnd conul de lumin, numit efectul Tindal. Acest efect de dispersie a luminii se explic
prin difracia razelor de lumin de ctre particulele n soluie.

Capacitatea proteinelor de a dispersa lumina este folosit:

- la determinarea cantitativ a proteinelor prin metoda nefelometric
- la studierea microscopic a structurilor celulare.

Soluiile proteice posed absorban n limitele spectrului ultrafiolet, caracterizat de prezena in ele a resturilor
aminoacizilor fenilalanina, tirozina i triptofan. Fenilalanina i tirozina are absorbana maxim la lungimea de und 280
nm, iar triptofanul - 254 nm.
Vitez de difuzie mic.
mic.
Difuzie deplasarea spontan a moleculelor substanei dizolvate datorit gradientului de concentraie( de la zone
cu concentraii mai mare spre cele cu concentraie sczut).

Viteza de difuzie a proteinelor depinde mai mult de forma moleculei, dect de masa ei. Repartizarea intracelular
a proteinelor din locul de sintez (ribosomi) are loc prin difuzie. Deoarece viteza de difuzie e mic are loc limitarea vitezei
proceselor dependente de funciile proteinelor difuzabile n sectorul respectiv.

Viscozitate mare

e dependent de masa i forma moleculelor. Mrirea concentraiei proteinei conduce i la mrirea viscozitii
soluiei (se mresc forele de coeziune ntre moleculele proteice).

Proteinele fibrilare sunt mai vscoase comparativ cu cele globulare.

Viscozitatea e dependent de:

temperatur- t0 - viscozitatea

prezena electroliilor (ex. srurile de Ca2+ mresc viscozitatea prin formarea punilor de Ca2+)
Proprieti osmotice
proteine fiind macromolecule nu difundeaz prin membrane semipermiabile, pe cnd micromoleculele trec prin
asemenea membrane. Acest proces e folosit n practic pentru purificarea soluiilor proteice de amestecuri
micromoleculare, numit dializ.

proprietatea de a forma geluri

Proteinele prezint coloizi liofili, i deci pot forma geluri. Particulele coloidale de protein interacioneaz ntre
ele i apare o structur reticular intern din care cauz viscozitatea soluiei crete. Formarea de gel se observ la
coagularea sngelui (formarea reelei de fibrin).

Proprietatea de a forma geluri

Proteinele prezint coloizi liofili, i deci pot forma geluri. Particulele coloidale de protein interacioneaz ntre
ele i apare o structur reticular intern din care cauz viscozitatea soluiei crete. Formarea de gel se observ la
coagularea sngelui (formarea reelei de fibrin).

Formarea gelului depinde de :

concentraia soluiei (odat cu creterea concentraiei);
temperatur (la scderea temperaturii);
concentraia ionilor de hidrogen (n punctul izoelectric se observ o vitez maxim de formare a gelului);
prezena electroliilor (Ionul SO42- contribuie n mod preferat la transformarea solului n gel).

Xerogel
este gelul secat (uscat) - lipsit de ap.
se capt prin Secare liofil a soluiilor coloidale
Secarea liofil const n ndeprtarea apei n vid din soluia coloidal ngheat.

se pstreaz un timp mai ndelungat ceea ce prezint importan practic n industria de preparare a
medicamentelor de origine proteic.

Ex: deferite proteine (albumina, gama-globulinele i altele).

Stabilitatea soluiei proteice e determinat de 2 factori:

sarcina electric determin respingerea moleculelor proteice ncrcate pozitiv sau negativ.
membrana apoas care ndeprteaz moleculele proteice una fa de alta impedicnd agregarea i precipitarea

lor.

Sarcina electric este determinat de componena AA:

dac predomin AA acizi (glu,asp) sarcina sumar a proteinei va fi negativ

2. dac predomin AA bazici (Liz,Arg) sarcina sumar a proteinei va fi pozitiv

Sarcina electric este influenat de pH mediului:

n ap aminoacizii se comport ca vetiriioni
n mediu acid sarcina sumar va fi pozitiv
n mediu bazic sarcina sumar va fi negativ

Datorit acestui fapt la trecerea unui curent electric n soluie, AA vor migra n mediu acid spre catod(-), iar n mediu
alcalin spre anod(+).
Punct izoelectric
- E ste o valoare a pH-ului la care suma sarcinilor pozitive este egal cu suma sarcinilor negative (migrarea proteinelor
sau a AA ntr-un cmp electric este nul)
se noteaz pHi i este diferit pentru fiecare aminoacid sau protein.

n aceast form se exercit fore de atracie reciproce ntre gruprile COO- i - NH3+; are loc o
aglomerare a moleculelor din soluie i solubilitatea devine minim.
pHi

Pentrui AA neutri se afl ntre pH 6-7

Pentrui AA bazici se afl n mediu bazic
Pentrui AA acizi se afl n mediu acid
Sarcina proteinei

La un pH mai acid ca valoarea pHi proteina capt o sarcin pozitiv (cation) i migreaz spre catod(-);
la PH mai mare ca pHi proteina capt o sarcin negativ i migreaz spre anod(+)
Membrana apoas (apa fixat)

Se formeaz la interaciunea grupelor ionogene ce fixeaz dipolii de ap. Grupa COO fixeaz 4 molecule H2O,
NH2- -3; iar OH i NH cte 2.
Proprietile apei fixate
1. moleculele apei legate au o dispunere mai compact, ce o apropie de un corp solid
2. proprietile ei de solvent sunt reduse
3. nghea la temperaturi joase( -40C)
4. constanta dielectric (fora de atracie dintre ionii ncrcai opus) este de 2,8, pe cnd la H2O obinuit este de 8
Denaturarea proteinelor
este distrugerea nivelurilor superioare de organizare ale moleculei proteice (secundar, teriar, cuaternar) n afar de
structura primar cu pierderea proprietile fizico-chimice i biologice ale proteinei.

Agenii denaturani se mpart n fizici i chimici.

1. factorii fizici: mperatura, presiunea, radiaiile ultraviolete i ionizante.
2. factorii chimici : acizi, bazele, solvenii organici, detergenii, amidele, srurile metalelor grele.

Trsturile proteinei denaturate:

pierderea activitii biologice

micorarea solubilitii
schimbarea formei i mrimii moleculelor
creterea reactibilitii unor grupe
pierderea capacitii de a se cristaliza
Substanele ce pot mpedica denaturarea

soluii de glucide
glicerina
a. grai
Pentru a evita denaturarea proteina se pstreaz la rece, n soluii concentrate de sruri la un pH anumit

Renaturare (renativare).
(renativare).
- este restabilirea structurii i activitii biologice a proteinei la nlturarea agentului denaturant.
Metodele de studiere a componenei calitative i cantitative a proteinelor

a) hidroliza (ruperea unei legturin ordinare cu adiia unei molecule de ap)

b) cromatografie
c) electroforeza
d) salifiere
e) dializa
f) gel-filtrare
Cromatografie

- este identificarea i separarea

aminoacizilor.

Principiul: Metoda este bazat pe diferena coeficientului de repartiie a aminoacizilor n ap i solvent organic
(butanol), care nu se amestec cu apa. Viteza migrrii aminoacizilor pe hrtie este direct proporional cu gradul de
dizolvare n butanol.
Electroforeza
- este metoda de separare a particulelor ce posed sarcin (proteine) ntr-un cmp electric

Direcia migrrii Pr depinde de pH-ul mediului; Pr fiind electrolii amfoteri n mediul acid ele posed sarcin
pozitiv i se mic spre catod, n mediul bazic posed sarcin negativ migreaz spre anod.

Separarea Pr din serul sanguin La pH-ul 8,6 -8,9 n cmpul electric continuu Pr serului posed sarcina negativ i
vor migra spre anod cu o vitez care depinde n aceeai msur de mrimea sarcinii electrice i de masa molecular a
particulelor. n rezultat se separ
Albumine(care agung primele),apoi globulinele care se separ n fracii: 1, 2; i n final -globulinele.
Salifierea
- este metoda de precipitare a proteinelor din soluie la aciunea conentraiilor mari de sruri neutre (sulfatul de
amoniu, clorura de sodiu i al.)
este un proces reversibil.
Mecanismul salifierii se reduce la dehidratare macromoleculelor proteice i nlturarea sarcinii electrice.
Asupra vitezei de precipitare a proteinelor prin salifiere acioneaz un ir de factori ca hidrofilitatea proteinei, masa
molecular, sarcina electric; de aceea salifiere diferitelor proteine are loc n concentraii diferite de sruri.
De exemplu, albuminele se precipit n soluie saturat de sulfat de amoniu, pe cnd globulinele - n soluie semisaturat
de aceeai sare.
Dializa proteinelor

Dializa (din grecete dialisis - separare) se numete procesul de separare a substanelor macromoleculare i soluiilor
coloidale de substane micromoleculare cu ajutorul membranelor semipermeabile (celofan, pergament, colodiu i al.);
Posednd un diametru mare moleculele proteice, coloizii, substanele macromoleculare nu pot trece prin porii acestor
membrane spre deosebire de substanele micromoleculare i sruri.