FOSFATAZELE Fosfatazele sunt monoesteraze nespecifice care catalizeaz reacia de hidroliz a esterilor fosforici (glicerofosfai, fenil-fosfat disodic, para-nitrofenolfosfat

etc.) elibernd acidul fosforic i fenolul sau alcoolul respectiv. Ecuaia reaciei de hidroliz poate fi reprezentat astfel: R-OPO3H2 + H2O R-OH + H3PO4 n funcie de pH-ul optim de aciune, fosfomonoesterazele se clasific n: - fosfataze alcaline: (pH= 9-10,4); - fosfataze acide cu pH=5,0-6,0 sau cu pH = 3,4 4,2. Fosfataza alcalin Fosfatza alcalin: prezint maximum de activitate la pH 9-10,4; este activat de ionii de Mg2+ ; este larg rspndit n oase (n osteoblati), mucoasa intestinal, celulele tubilor renali, ficat (n celulele ce delimiteaz canaliculele biliare), n celulele glandei mamare i placentei. Are un rol important n formarea tesutului osos, regenerarea tesutului hepatic, in procesele de contracie muscular, n absorbia intestinal, particip n diferite reacii biochimice din metabolismul glucidelor, lipidelor, nucleoproteidelor). Determinrile de rutin efectuate n clinic msoar de fapt rezultatul activitii mai multor izoenzime de provenien hepatic, osoas, renal, precum i cele eliberate din peretele intestinal sau placent. Izoenzima predominant este cea hepatic, cu excepia perioadelor de cretere a scheletului. Scopurile determinrii activitii fosfatazei alcaline : detectarea i identificarea afeciunilor scheletice caracterizate de activitatea osteoblastic intens; detectarea leziunilor locale hepatice determinnd obstrucie biliar, cum sunt tumorile sau abcesele; suplimentarea informaiilor date de alte teste enzimatice referitoare la funcia hepatic; diagnosticul diferenial al afeciunilor hepatice; depistarea metastazelor hepatice sau osoase n tumorile de diverse etiologii; monitorizarea rspunsului la terapia cu viramina D a rahitismului datorat carenei vitaminice. Determinarea activitii enzimatice a fosfatazelor alcaline cu para-nitrofenilfosfat Principiul metodei: Prin aciunea fosfatazelor alcaline asupra p-nitrofenilfosfatului este pus n libertate p-nitrofenolul intens colorat n galben n mediu alcalin. Activitatea enzimei este proporional cu intensitatea coloraiei. Calcul: EP/ES X 27,55 = U/l Valori de referin aduli 20-48 UI/l copii 38-138 UI/l gravide (ultimul trimestru) 28-115 UI/l Variaii fiziologice: sugarii, copiii i adolescenii au valori de pn la 3 ori mai mari dect adulii datorit formrii scheletului i creterii osoase. Creterea fiziologic a valorilor fosfatazei alcaline n sarcina tardiv se datoreaz izoenimei placentare. n perioadele postprandiale indeosebi dup prnzuri bogate n glucide i lipide se constat o cretere a activitii enzimatice datorit izoenzimei intestinale. 1

Semnificaie diagnostic: 1.Valori crescute se constat n: 1. afeciuni osoase cu activitate osteoblastic intens: boala Paget (osteita deformant); tumori sau metastaze osteoblastice; hiperparatiroidism (mobilizarea calciului i fosforului din oase); rahitism; osteomalacie. Nivelul fosfatazei alcaline de provenien osoas nu este modificat n cazul osteoporozei de involuie sau n leziunile osoase din mielomul multiplu. 2. afeciuni hepato-biliare: colestaz intra- i extrahepatic (crete sinteza hepatic i nu retenia); determinarea activitii fosfatazei alcaline este testul care permite diagnosticul diferenial dintre icterul obstructiv (valori crescute) i cel hemolitic (valori normale). n hepatita viral i ciroz apar valori de dou mai mari fa de cele normale; neoplasm; n ingestia cronic de alcool, fosfataza alcalin poate avea valori normale sau crescute, dar sunt constant crescute GGT, GOT i bilirubina; n absena sarcinii sau a unei boli osoase, creterea nivelului seric al fosfatazei alcaline refelct lezarea funciei excretorii hepatice. 3. afeciuni ale tractului digestiv: malabsorbie sever, infarct intestinal. 4. hiperfosfatazemia familial benign, extrem de rar (cu determinism genetic). 5. dup administrarea prelungit a unor medicamente, ca de exemplu antiepileptice sau anticoagulante. !!! Valoarile fosfatazei alcaline interpretate izolat pot crea confuzii de diagnostic. Determinarea GGT reprezint un test suplimentar, util pentru a confirma originea hepato-biliar a fosfatazei alcaline crescute n prezena unor valori normale ale transaminazelor. 1. Valori sczute se observ n: hipofosfatazemie familial; hipotiroidism; deficit de zinc, de magneziu; nanism hipofizar (activitatea osteoblastic este deprimat); anemie perinicoas; deficit de vitamin C. Determinarea activitatii enzimatice a fosfatazei acide serice prin metoda cu paranitrofenolfosfat Fosfatazele acide exist n cantiti mari n prostat i n cantiti mult mai mici n ficat, eritrocite, plachete sanguine i esut osos. Scopul determinrii: Detectarea carcinomului prostatic extins dincolo de capsula prostatic activitatea ei este crescut la 80% dintre pacienii cu carcinom metastatic al prostatei. Principiul metodei: p-Nitrofenolul este hidrolizat sub aciunea fosfatazei producnd acid fosforic i pnitrofenol de culoare galben; intensitatea culorii este proporional cu activitatea enzimei. Izoenzima prostatic este inhibat de tartrat, n timp ce izoenzimele eritrocitare i trombocitare nu sunt. 2

pH-ul optim de aciune este de 5-5,5. Nu sunt activate de ionii de Mg2+; sunt inhibate de fluoruri i oxalai. Fosfataza acid prostatic maxim 3,6 UI/l

Valori de referin: Fosfataza acid total Ser: 4,7-13,5 UI/l pentru brbai 5,0 11,0 UI/l pentru femei

Semnificaie diagnostic: 1. Valori crescute: Fosfataza acid seric este crescut n carcinomul prostatic cu metastaze valori sunt de 3-15 ori mai mari dect cele normale; carcinomul trebuie s invadeze capilarele sanguine, canalele limfatice sau alte esuturi, nainte ca valoarea activitii enzimei n ser s creasc; un cancer prostatic ce nu a depit capsula prostatic nu determin creterea valorilor enzimei n ser, iar scderea valorilor dup tratament indic eficiena acestuia. n prezent, se utilizeaz numeroase tehnici imunologice bazate pe anticorpi monoclonali izoenzimatici ai fosfatazaei acide prostatice in scopul detectrii precoce un carcinom prostatic, astfel de teste fiind de 1000 de ori mai sensibile dect determinrile activitii enzimatice propriu-zise. Uneori, fosfataza acid prostatic poate crete n unele boli osoase (boala Paget, cancerul de sn cu metastaze osoase). Fosfataza acid nonprostatic crete n sfingolipidoze (boala Gaucher) - Termenul generic de sfingolipidoze desemneaz un ansamblu de boli moleculare, respectiv, de enzimopatii cu caracter ereditar. Se manifest prin acumularea n esuturi de diferite sfingolipide (sfinfomieline, cerebrozide, sulfatide, gangliozide) genernd boli specifice. n contextul patologiei moleculare, substratul acestor dereglri l reprezint deficiena de sintez sau de activitate a anumitor enzime lizozomale implicate n procesul de catabolizare a sfingolipidelor. 2. Valorile sczute nu au semnificaie diagnostic n practica medical.

Ornitin-carbamil trabsferaza (OCT) OCT catalizeaz transferul unei grupri carbamil de la carbamil-fosfat la ornitin ntr-un stadiu iniial al ciclului de formare a ureei. Aceast reacie are loc n ficat, acolo unde este localizat aceast enzim. Cu excepia unor concentraii sczute n intestin, enzima este practic absent n alte esuturi. Cu toate c este cel mai sensibil i mai specific test pentru diagnosticarea afectrii hepatocelulare chiar i dect GOT sau GPT, determinarea activitii ei n ser nu este o analiz de rutin. Scopul determinrii activitii OCT: este o metod de elecie pentru diagnosticarea obstructei acute, intermitente a ductului biliar comun; este utilizat pentru diagnosticul diferenial ntre afectarea hepatocelulara i afectarea altor organe, deoarece exist n cantiti infime n alte organe. Valori de referin: 1-6 U/l. Implicaii clinice: valorile crescute ale OCT reflect aproape ntotdeauna necroza hepatocelular; creteri de 10-200 ori peste valoarea normal apar n hepatita viral acut; creteri uoare sau moderate apar n colecistita acut, ciroz, icter obstructiv, carcinom metastatic; hepatotoxicitatea alcoolului este demonstrat de valori crescute ale OCT; rar, valorile crescute pot indica enterite, infarct intestinal extins, eliberarea masiv a enzimelor din esutul necrozat. 3

5-nucleotidaza 5-nucleotidaza catalizeaz hidroliza fosfatului din poziia 5 a componentului pentozic din nucleotid; este prezent n toate esuturile, dar mai ales n membranele capilarelor biliare i sinusoidale hepatice. Dei are o distribuie tisular larg, creterile sunt asociate cu afeciunile hepatobiliare. Principala importan a msurrii 5-nucleotidazei este de a confirma originea hepatic a unui nivel crescut al fosfatazei alcaline la copii, la femeile gravide sau n acele situaii n care poate fi prezent o afeciune osoas concomitent. Totui, in afeciunile hepatice, nivelurile 5-nucleotidazei nu evolueaz ntotdeauna n paralel cu cele ale fosfatazei alcaline, iar lipsa unei creteri nu exclude o origine hepatic a unui nivel crescut al fosfatazei alcaline. Aceasta enzim are valori normale n timpul sarcinii, post-partum i in afeciunile osoase i, de aceea, determinarea activitii ei poate contribui la diagnosticul diferenial al afectrii hepatocelulare aprute n timpul sarcinii. Activitile n ser ale 5-nucleotidazei i LAP (leucin-aminopeptidazei) cresc n paralel cu valorile fosfatazei alcaline n cazul afectrii hepatocelulare de tip obstructiv.
Tabel 1.Niveluri ale activitatii unor enzime in diferite stari

Enzima PAl 5-nucleotidaza LAP GGT

Obstructia biliara Crescut Crescut Crescut Crescut

Sarcina crescut normal crescut normal

Afectiuni osoase crescut normal normal normal