08.11.

2009

Controlul expresiei genice

REGLAREA EXPRESIEI GENICE

!!! Alegerea genei pentru transcripie !!! Activarea secvenei de ADN !!! Controlul activitii ARN-polimerazei II !!! Controlul cantitii i calitii ARNm i proteinei sintetizate

Particularitile genomului uman

Organism pluricelular: Peste 200 de tipuri de celule diferite esuturi organe

Genomul nuclear (n) 3,2 Gb ~ 35000 gene ADN genic 25% ADN extragenic 75% ADN necodant 90%

Genomul mitocondrial 16,6 kb 37 de gene

Toate celulele somatice ale unui organism sunt genetic identice (au aceeai cantitate de ADN, aceleai gene), provenind de la celula zigot prin mitoze succesive)

ADN codant 10%

Secvene unice sau n numr mic de copii 60%

Secvene moderat sau nalt repititive 40%

Clasificarea genelor nucleare

1. n dependen de produsul genic: gene de cl.I pentru ARNr gene de cl. II pentru ARNm i proteine gene de cl.III pentru ARNt, ARNr, ARNsn 2. n dependen de locul activitii: gene active n toate celulele gene active n anumite celule, esuturi 3. n dependen de perioada ontogenetic gene active pe tot parcursul vieii gene active numai prenatal gene active numai la pubertate gene active numai la adult

4. n dependen de interaciunea cu factorii de mediu; gene stabile gene plastice 5. n dependen de gradul de expresie: gene normomorfe gene hipomorfe gene hipermorfe gene amorfe 6. n dependen de numrul de copii n genom: gene unicale gene repetate n tandem sau dispersate

08.11.2009

7. n dependen de funcia produilor genici:

enzime - 31,2%; modulatori ai proteinelor sintetizate - 13, 6 % receptori; factori de transcripie; proteinele matricei intracelulare i matricei extracelulare; ansportori membranari i proteine canal; molecule semnalizare celular; hormoni; Ig.

Fiecare celul a organismului conine setul complet de gene (30-40000 perechi gene pentru 46 mol. ADNnuclear)
Expresia genic numai 10% din toate genele Expresie continu Gene ARNr Expresie temporal dependent: - de esut; - de perioada ontogenetic; - de perioada ciclului celular; - de factorii de mediu !!! Exist mecanisme de reglare a expresiei genelor

Non-expresie pseudogene

50%

Gene ARNt Gene house keeping

La procariote

!!! DAR, la eucariote: -genomul nuclear este enorm i este puternic compactizat (ADN+ proteine histone, proteine nehistone); -recunoaterea i activarea unei secvene scurte de nucleotide (unei gene) este dificil; -exist mecanisme de reglare multiple, la diferite nivele de expresie a genelor (pretranscripional, transcripional, processing ARNm, translaie, etc.): ! etapa principal la nivelul iniierii transcripiei;
! mecanismul principal interaciunea unor factori proteici la secvenele reglatoare ale acizilor nucleici; ! factorii proteici reglatori sunt produii unor gene situate la distan, pe alte molecule de ADN (factori trans-reglatori)

08.11.2009

Nivele de reglare a EG
FACTORII REGLATORI AI EXPRESIEI GENICE CIS-genici
a) Boxe pentru iniierea transcripiei b) Boxe specifice de esut c) Boxe RE induse prin hormoni, ioni, AMPc d) Enhancers, silencers

Pretranscripional decondensarea cromatinei, eliberarea ADN de histone (epigenetic, reversibil, potenial ereditar) Transcripional identificarea promotorului, formarea complexului de iniiere, rata de transcripie Posttranscripional procesarea ARNm, alegerea variantei de splicing, controlul transferului ARNm n citoplasm Translaional selectarea matriei, formarea complexuluide iniiere, controlul calitii polipeptidului, stabilitatea ARNm Posttranslaional modificarea posttranslaional a polipeptidului, direcionarea proteinelor

TRANS-genici
a) Factori proteici de transcripie generali b) Factori proteici de transcripie specifici de esut c) Factori proteici de transcripie inuctibili d) Enh, sil.

EPI-genici
(negenetici) a) Modificarea histonelor (metilare, acetilare, fosforilare, ubiquitinare b) Metilarea ADN c) Variaii n configuraia ADN

Etapele expresiei genelor de clasa II

ADN P E I E I E I E T

Reglarea la nivel pretranscripional

1. Modificarea histonelor: -metilarea H3 (Lys4) expresie activ a genei -metilarea H3 (Lys9) atenuarea transcripiei -acetilarea histonelor relaxarea cromatinei, facilitarea transcripiei -dezacetilarea histonelor condensarea cromatinei, inactivarea transcripiei -fosforilarea H1 supracondensarea cromatinei -defosforilarea H1 decondensarea cromatinei 2. Metilarea ADN (insulele 5MeCpG, frecvent n promotor) inactivarea transcripiei. !!! Metilarea ADN dezacetilarea histonelor represia transcripiei 3. Modificri n configuraia ADN: helixul B helix Z represie genic (excepie promotor)

Transcripie proARNm Processing-ul ARNm ARNm

7MeGppp
AAAAAAAAAAAAA

..........

Transferul RNP n citoplasm Translaie

7MeGppp
AAAAAAAAAAAAA

..........

Protein

Conformaia proteinei

Control pretranscripional
Controlul la distan a expresiei genice: !!! Organizarea funcional a cromozomilor n domenii cromatidiene cu expresiei genic diferite, evitnd efectul activator sau inhibitor a Enhancerilor sau Silencerilor unei gene asupra altor gene. 1) Efectul de poziie a genelor pe cromozom 2) Reglarea coordonat a expresiei genelor (LCR- locus control region)
crs.16

Control expresiei temporale i spaiale ale genelor globinelor

crs.11

Sac vitelin

Ficat

Mduva roie a oaselor i splin

08.11.2009

Reglarea la nivel transcripional

Exemplu metilare - demetilare

!!! Activarea genei prin inducie hormonal i transducie !!! Interaciunea factorilor proteici trans reglatori cu secvenele cis-reglatoare ale promotorului (selectarea promotorului la genele cu mai muli promotori) !!! Formarea complexului de iniiere a transcripiei: !!! Reglarea activitii ARN polimerazei: - direcionarea; - alegerea +1 - alegerea catenei transcrise !!! Controlul ratei de transcripie

08.11.2009

Factorii de translaie i mecanismul lor de aciune

Iniierea eIF-2 - Activeaz complexul Met-ARNtmet eIF-3 - Asigur unirea subunitii 40S la CAP-ul ARNm eIF-4A - Recunoate CAP-ul i asigur denaturarea palindroamelor din secvena lider a ARNm eIF-4B - Asigur stabilitatea moleculei ARNm i previne formarea buclelor eIF-5 - Este o GTP-az ce asigur unirea subunitii 60S la complexul de iniiere eIF-6 - Previne legarea prematur a subunitii 60S la subunitatea 40S

Elongarea eEF-1 - Asigur unirea aminoacil-ARNt la ribozom; eEF-1 - Asigur hidroliza GTP; eEF-2 - Asigur translocarea ribozomului; Terminarea Factorii de terminare sunt nc puin studiai la eucariote, dar mecanismul general este asemntor procariotelor RF-1 - Recunoate codonii STOP UAA i UAG RF-2 - Recunoate codonii STOP UGA i UAA RF-3 - Asigur specificitatea RF-1 i RF-2.

08.11.2009