C.

Reparatia ADN
p/u Pastrarea IG A. Replicarea ADN
= dublarea ADN
= dublarea IG
p/u TRANSMITEREA IG
A
B
B. Realizarea IG
1.
2. ADN(gene)
1.
preARNs
3.
2.
ARNm, t, 40S, 60S
3.
ARNm pe 80S
4.
4.

5. Polipeptid
5.
Proteina
 Nucleul - functii
1) Păstrează ~ 98% din MG celular:
46 mol ADN compactizate;
compactizarea funcţională a ADN:
– eucromatina – MG activ pentru transcripţie;
– heterocromatina – MG inactiv pentru transcripţie.

2) Regleaza toate activitatile celulei

Controlul calităţii IG Controlul activităţii Controlul transmiterii

• ADNul compactizat, celulei prin expresia IG de la cel la cel:
asociat cu proteine diferenţiată a genelor:
 Micşorează, • Controlul
indirect, • transcripţia replicării ADN 
posibilitatea genelor dublării exacte a
accesului
f.mutageni codificatoare de IG
• Conţine diverse proteine, de ARNr,
de ARNt • Controlul
sisteme de desfăşurării
reparaţie a ADN • controlul mitozei / meiozei
 Micşorarea processing-uli şi
ratei de mutaţii exportului ARNului
în citoplasmă;
 Organizarea nucleului
• Anvelopa nucleară:
– membrana nucleară externă – LPG
• spaţiul perinuclear
– membrana nucleară internă – LPG
• lamina nucleară – din proteine lamine A, B, C
– complexul porului nuclear – din proteine nucleoporine
• Cromatina (ADN+histone+nonhistone+ARN)
– eucromatina
– heterocromatina
• Nucleolii (ADN+histone+nonhistone+nucleoline+ARNr+proteine
ribozomale + RNP60S şi RNP40S)
• Carioplasma
– partea labilă (sucul nuclear+enzime nucleare)
– Nucleoscheletul –proteine nucleoplasmine – matrine
– Transportine: exportine şi importine - karyopherine
 profaza
CROMATINA CROMOZOMII
telofaza

• Cromatina – materialul genetic parţial compactizat în

timpul interfazei celulei;
• Cromozomul – materialul genetic maximal
compactizat în timpul mitozei.
• Organizarea moleculară a cromatinei sau crs:
– 30% ADN +
– 40% proteine histone +
– 25% proteine nehistone +
– 5% ARN
ADN cromozomial – ce deţine, păstrează,
transmite şi realizează IG;
• Mol. lungi liniare;
• heterogene:
– Secvenţe codificatoare (gene):
• Active - transcrise;
• Neactive - netranscrise.
– Secvenţe necodificatoare structurale:
• telomerii, centromerii, sateliţii;
– Secvenţe necodificatoare reglatoare – spaţiatori de
gene, En, Sl,...
 gena insulinei Gena ARNr Gena miozinei Gena ARNt

Transcripţie

Processing

ARNm ARNr metARNt

insulina
 Reprezentarea aceluiaşi fragment de cromozom în diferite celule (A, B, C).
E – eucromatina,
Hc – heterocromatina constitutivă,
Hf – heterocromatina facultativă
 Clasificarea funcţională a
cromatinei:
• Eucromatina: • Heterocromatina:
- segmente active • segmente inactive
transcripţional; transcripţional,
- conţine ADN codant • conţine:
- Gene structurale (~ 3804 • ADN necodant;
housekeepeng gene)
- Gene ARNr
• ADN codant netranscris în
momentul dat sau celula
- Gene ARNt
dată;
• poate fi constitutivă şi
facultativă.
 Heterocromatina
• Constitutivă:
– Conţine secvenţe de ADN
necodificatoare, repititive;
– Reprezintă regiunile
• centromerice
• telomerice
• sateliţi
• spaţiatori ai genelor.
• Facultativă:
• Conţine secvenţe de ADN
codant, inactive;
• Se poate transforma în
eucromatină;
• Poate fi autosomală şi sexuală;
• Intervine în:
• Diferenţierea celulară;
• Diferenţierea sexuală;
• Reglarea ontogenezei;
• Reglarea ciclului celular;
• Adaptarea celulei la
condţiile mediului
 Proteinele histone:
• Globulare
• Bazice, bogate în Liz şi Arg;
• Există 5 clase: H1, H2A, H2B, H3, H4
• Funcţia:
– compactizarea ADN – nivelul nucleosomic
– reglarea nespecifică a expresiei genice

Tipul Amonoacizii Nr.

Configuraţia proteinei
histonelor reprezentativi aminoacizi
H1 Liz 215 NH2 COOH
H2A Leu, Liz 129 NH2 COOH
H2B Ser, Pro, Liz 125 NH2 COOH
H3 Arg, Cis 135 NH2 COOH
H4 Arg, Liz 102 NH2 COOH
Proteinele histone
ADN + histone =
nucleosom

a. Miezul nucleosomic:
2H2A
octamer 2H2B
histonic 2H3
2H4
b. 200p.n. ADN nucleosomic
c. H1 – stabilizează
complexul DNP
 Proteine nehistone
• Proteine extrem de heterogene;
• Enzime nucleare:
– p/u replicare (ADN-pol., ADN-ligaza, Topoiz.);
– p/u reparaţie (endonucleaze, ADN-pol., ADN-ligaza);
– p/u transcripţie (ARN-pol, …);
– p/u processing-ul ARN (ARN-azeribozime);
– p/u biogeneza 40S, 60S (ARN-pol, ribozime,nucleoline)
• Proteinele scafoldului (SAP,…)
Helix-Turn-Helix

Zinc finger
Nucleul în diferite etape ale ciclului
celular
 Nivele de compactizare a
MG
• I nivel – nucleosomic = filament de
cromatină;
• II nivel – solenoid = fibra de cromatină;
• III nivel – bucle
• IV nivel – cromosomului metafazic
 Nivele de
compactizare a MG se
deosebesc prin:
- gradul de “scurtare” a firului
de ADN;
- grosimea f. de cromatină;
- mecanism de formare;
- grad de activitate
transcripţională;
- perioada ciclului celular.
2 nm

11 nm

30 nm

300 nm

700 nm

1400 nm
 I nivel - filamentul de
cromatină:
• Filamentul polinucleozomic de 11nm;
• Gradul de compactizare – x6 ori;
• Mecanismul de formare:
– interacţiunea ADN- cu proteinele histone bazice+
• Transcripţia ADN este posibilă.
I nivel - filamentul de
cromatină 10 nm
 Modificarea histonelor:
• metilarea H3 (Lys4) – expresie activă a genei
• metilarea H3 (Lys9) – atenuarea transcripţiei
• acetilarea histonelor – relaxarea cromatinei,
facilitarea transcripţiei
• dezacetilarea histonelor – condensarea
cromatinei, inactivarea transcripţiei
• fosforilarea H1 – supracondensarea cromatinei
• defosforilarea H1 – decondensarea cromatinei
 II nivel – solenoidul
• Fibra de cromatină de 30 nm;
• Gradul de condensare – x40 ori;
• Mecanismul de formare:
– Fosforilarea H1  superspiralizarea
filamentului polinucleosomic – câte 6
nucleosomi per spiră;
• Transcripţia ADN-ului este blocată.
Solenoid
Filamentul de cromatină

Solenoid – 30 nm

Fibra nucleosomică
– 10 nm
 III nivel - bucle

• Buclele = cromomere, 300nm grosime;

• Grad de compactizare – x600-1000 ori;
• Mecanism de formare:
– Ancorarea fibrei de cromatină de 30nm la axul
proteic – scaffold;
– interacţiune specifică SAR – SAP – scaffold
• Transcripţia genelor este blocată
!!! SAR (MAR) - (Scaffold /Matrix
Associated Region) – situsuri specifice
de ADN responsabile de ancorarea
fibrei de cromatină la scaffold - axul
proteic cromozomial;
!!! scaffoldul - axul proteic cromozomial
!!! SAP (Scaffold Associated Protein) -
proteine situs specifice ce
interacţionează cu scaffoldul şi fibra de
cromatină.
 IV nivel –
cromozom metafazic

• Grad maximal de compactizare – x10000ori;

• Grosimea cromatidei ~700nm;
• Mecanismul de formare:
– Fosforilarea lamininei --- disocierea anvelopei nucleare;
– Fosforilarea totală a H1 – condensarea cromatinei,
plierea buclelor în jurul axului cromozomial.
• Transcripţia este blocată
 Perioadele ciclului celular şi
nivelul de organizare a MG
• Interfaza:
– Perioada G1 presintetică; Nivel I,II,III
– Perioada S – sintetică;
– Perioada G2 – postsintetică;
• Mitoza:
– Profaza
– Metafaza Nivel IV
– Anafaza
– Telofaza
 Profaza
Prometafaza
Interfaza
Metafaza
Telofaza
Anafaza
 Clivarea
Replicare
centromerului
+
Perioada S Anafaza
• Centromer = constricţie primară
Centromerul
 Centromerul
• Segment de heterocromatină constitutivă
– Secvenţe de ADN repetitiv, bogate în perechi A/T +
– Proteine histone
• Histona H3 este substituită cu CENP-A
– P. coezina - asigură lipirea cromatidelor surori până
în anafază
• Funcţii:
– Uneşte cromatidele surori
– Asigură formarea kinetocorilor
– Intervine în interacţiunea cu fusul de diviziune
– Reglează segregarea crs în timpul mitozei / meiozei
 Centromerul participă la unirea
cromatidelor-surori după replicaţie
 Telomerul
• Segment de heterocromatină constitutivă
de la capetele crs:
– Secvenţe de nucleotide bogate în G/C repetate
în tandem (la H. sapiens – [TTAGGG]n) cu
lungimea de 3-20 kb 
– formează bucle la capetele ADN crs
– Proteine telomerice TFR1, TFR2, telomeraza
• Funcţii:
– Asigură rezistenţă ADN crs la atacul
exonucleazelor
– Previne scurtarea cromozomilor în timpul
replicaţiei
– Previne fuzionarea cromozomilor
(individualizează cromozomii)
 Etapele expresiei genelor ARNr
ADN P +1 18S 5,8S 28S T

Transcripţie
proARNr

Processing (autosplicing)

18S 5,8S 28S

ARNr
Asamblarea 40S şi 60S

18S + 33 proteine = 40S 28S + 5,8S + 5S + 49 proteine = 60S

 Nucleolul –
regiunea nucleară responsabilă de biogeneza
ribozomilor:
• transcripţia genelor ribozomale cu sinteza
ARNr precursor (45S);
• Processingul ARNr 45S cu formarea a trei
fracţii de ARNr: 5,8S + 18S + 28S;
• Asamblarea complexelor RNP:
– ARNr 18 S + 33 proteine ribozomale = RNP40S –
subunitatea ribosomală mică;
– ARNr 28 S + ARNr 5,8 S + ARNr 5 S + 49
proteine ribozomale = RNP60S – subunitatea
ribozomală mare
 Organizarea moleculară a
•
nucleolului:
Organizatorul nuclelolar – secvenţe de ADN cu
gene p/u ARNr;
• ARNr: transcripţi primari 45S; ARNr 5S, ARNr
5,8S, ARNr 18S, ARNr 28S;
• RNP 40S şi 60S
• Proteine histone;
• Proteinele aparatului de sinteză şi processing a
ARNr;
• Proteine ribozomale.
 Transportul prin porii nucleari
• Import (din citosol în
nucleu):
– Proteine histone
– Proteine nonhistone
– dNTP, NTP
– Proteine ribozomale
• Export (din nucleu în
citosol):
– ARNm
– ARNt
– ARNsc
– RNP 40S; RNP 60S