TEHNOLOGIILE

MICROARRAY

DE LA CITOGENETICA CLASIC LA GENETICA MOLECULAR

Cariotipare

Cromozomi bandai GTG

Detecteaz anomalii
grosiere
Analiza se realizeaz n
microscopie optic
Ofer imaginea ntregului
genom
Rezoluie 3-5 Mb

Sonde fluorescente
Specificitate de locus
Detecteaz aberaii de
dimensiuni medii
Analiza se realizeaz n
microscopie fluorescent
Ofer imaginea unor loci
specifici
Rezoluie 60-100 kb

aCGH
a digital sau
(Cariotipare
virtual)
Echivalent unui FISH de
densitate foarte mare
Analiza se realizeaz
folosind un scaner cu laser
Ofer imaginea ntregului
genom
Rezoluie 40-200 pb
(Prin bunvoina Agilent Technologies / Agilrom Scientific)

TEHNOLOGIA MICROARRAY
Array dispunerea ordonat a unor spoturi, sub
forma unei grile, pe un suport de sticl (lam).
Fiecare spot conine repetiii multiple i identice
ale unor secvene ADN; pentru un spot dat, fiecare
secven este complementar i specific unei
secvene unice din ADN genomic al speciei de
interes.

CUM FUNCIONEAZ UN MICROARRAY?

Fragment necomplementar de
ADN marcat fluorescent

Fragment complementar de ADN

marcat fluorescent

(Prin bunvoina Agilent Technologies / Agilrom Scientific)

Secvena ADN =
sond

Fiecare spot conine un numr mare de secvene ADN identice

CE INVESTIGHEAZ TEHNOLOGIA MICROARRAY?

TRANSCRIPTOM

GENOM

ARN

PROTEOM

ARNm

ADN
protein

Intron
Exon
Polimorfism

miARN

Promotor

Alterri la nivel
cromozomial

Splicing
(Prin bunvoina Agilent Technologies / Agilrom Scientific)

TIPURI DE MICROARRAY (Agilent)

aCGH-SNP

CH3

ChIP

GX

EXON

miARN

Numr de
copii / SNP

Metilare

Factori de
transcripie

ARNm

Izoforme
ARNm

ARN de
interferen

Exploreaz
Investigheaz
Identific i
Elucideaz
Exploreaz
Obinerea de
transcripia
transcriptomul i
monitorizeaz
rolul pe care l
transcripia la
la
profile genomice
scara
genomic
modificrile
joac
scar genomic identific formele
ilustrnd
de splicing
epigenetice,
cu
interaciuniie
numrul de copii
alternativ, implicit,
roluri
protein-ADN
ADN i
rolul lor n
modificrile sale, fundamentale n n transcripie,
procese fiziologice
replicare,
cu rezoluie mare numeroase
normale i
procese celulare modificare i
Aplicaii: boli
patologice,
reparare
genetice, cancer
rspunsul la
medicamente etc.

Perspective

Obinerea de
Silenierea
profile microARN, genelor etc
explornd rolul
acestora n
reglarea expresiei
genice

(Prin bunvoina Agilent Technologies / Agilrom Scientific)

TEHNOLOGIA HIBRIDIZRII COMPARATIVE

GENOMICE BAZATE PE MICROARRAY
(array-based comparative genomic hybridization - aCGH)
Definiie:
Metod care folosete tehnologia microarray pentru a identifica, prin
compararea ADN de interes cu un ADN de referin, schimbrile cantitative
(duplicaii, deleii etc) din genom i locul specific n care acestea s-au produs.
n comparaie cu metoda CGH (hibridizarea comparativ genomic), care
folosete pentru analiz cromozomi metafazici (inta), aCGH se bazeaz pe
utilizarea unor sonde ADN pentru hibridizarea crora ADN de interes intr n
competiie cu ADN de referin.

Etapa 1

aCGH: etape

Etapa 2

ADNg de interes

ADNg de referin

Etapele 1-2: ADN genomic de interes i de referin sunt fragmentate i

marcate fluorescent.
Etapa 3:
ADN genomic este amestecat, purificat din amestecul de
marcare i pregtit pentru hibridizare.
Etapa 4:

Etapa 3

Etapa 5:
Etapa 6:

Etapa 5

Etapa 4

ADN genomic de interes i de referin sunt n competiie

pentru a hibridiza cu sondele din gril.
Semnalele fluorescente emise sunt msurate de ctre un
scaner.
n urma analizei computerizate este generat un profil
genomic/cromozomial.
Etapa 6

HIBRIDIZARE
Alterarea dozei de ADN

Fr
modificri

Pierdere de
ADN

Ctig de
ADN

Analiza
computerizat
(Genomic
Workbench)

Profil genomic/
cromozomial

Theisen, A. Microarray-based comparative genomic hybridization (aCGH). Nature Education 1(1), (2008) , prin bunvoina
Agilent Technologies/Agilrom Scientific

APLICAII ALE aCGH

Diagnostic prenatal, preimplantator.
Diagnostic n numeroase boli genetice: retard mental, cancer etc.
Stratificarea pacienilor
Monitorizarea tratamentului
Predicia supravieuirii

n oncologie