Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
FIZIOLOGIA
APARATULUI
DIGESTIV
LUCRĂRI PRACTICE
EDITAT DE COLECTIVUL DISCIPLINEI
SUB REDACŢIA PROF.UNIV.DR. MARIA IANCĂU
2009
Autori:
Iancău Maria
Badea Daniela
Sfredel Veronica
Iancu Ionela
Romanescu Florin
Bălşeanu Tudor-Adrian
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
CUPRINS
Introducere............................................................ 9
5
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
6
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Bibliografie............................................................ 107
7
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
INTRODUCERE
10
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
FIZIOLOGIA GLANDELOR
SALIVARE
Saliva este un
amestec al produselor de
secreţie ale celor trei perechi
de glande salivare mari
(parotide, submaxilare şi
sublinguale) reprezentând
aproximativ 99% din totalul
secreţiei şi ale numeroase
glande mici diseminate în
mucoasa orală, aproximativ
1%.
Glanda parotidă
(glandă seroasă) produce o
salivă fluidă, bogată în
Figura 1.1. Localizările glandelor fermenţi (amilaza salivară),
salivare mari saliva de masticaţie şi de
digestie, reprezentând circa 25% din totalul secreţiei salivare,
în repaus.
Glanda submaxilară (glandă mixtă, sero-mucoasă)
produce o salivă sero-mucoasă, ce umezeşte limba, înlesnind
simţul sapid - saliva de gustare (cca. 70% din secreţia
salivară).
11
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
12
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
13
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
14
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
15
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Roluri fizice:
îmbibă, înmoaie alimentele, ajută masticaţia,
aglutinează alimentele triturate, formând bolul
alimentar;
lubrefiază bolul alimentar şi ajută astfel deglutiţia;
prin solubilizarea alimentelor, permite funcţionarea
simţului gustului (sapid) - numai substanţele
dizolvate în apă pot ajunge la receptorii gustativi,
pentru a-i excita;
ajută vorbirea;
curăţă gura;
asigură senzaţia de confort, prin umezirea
permanentă a gurii; în cazul febrei, în deshidratări,
la administrarea de atropină, apare o senzaţie
dezagreabilă, de uscăciune a gurii.
Rol de eliminare:
metale grele (Pb, Hg, Bi) sau I, As, KSCN
(sulfocianat de potasiu - cale de detoxifiere a
organismului);
alcaloizi (morfina), antibiotice, alcool etilic;
uree, acid uric (la persoanele cu gută sau cu
afecţiuni renale), glucoză ( în cazul în care glicemia
≥ 200-300 mg/ml);
virusuri (poliomielită, hepatită, rabie, parotidită
epidemică).
16
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
17
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Principiul metodei:
Se evidenţiază activitatea amilazei salivare, de scindare
a amidonului preparat până la stadiul de maltoză, trecând prin
stadii intermediare de dextrine, prin adăugare de soluţie Lugol
(iod iodurat 1‰).
În prezenţa soluţiei Lugol, amidonul dă culoarea
albastră; pe măsură ce se digeră, culoarea virează spre violet
(amilodextrina), roz-roşu (eritrodextrina) şi apoi incolor
(acrodextrina şi maltoza).
18
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
amilază
amidon preparat amilodextrină + maltoză
(fiert sau copt) + H2O
amilază
+H2O
eritrodextrină + maltoză
amilază
+H2O
acrodextrină + maltoză
amilază
+H2O
maltoză
Schema acţiunii de scindare a amidonului
de către amilază
Materiale necesare:
6 eprubete, pipete, stativ
salivă nativă
soluţie 1% de amidon fiert, solubil
soluţie Lugol
soluţie NaOH 20%
soluţie sulfat de cupru
bec de gaz.
Tehnica de lucru:
Se ia un stativ cu 6 eprubete (vezi tabelul nr.1.1.). În
fiecare eprubetă se pun 2-3 ml soluţie 1% de amidon fiert,
solubil, peste care se adaugă câte o picătură de soluţie Lugol.
Astfel, conţinutul fiecărei eprubete capătă culoarea albastră.
19
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Amidon
2-3 ml 2-3 ml 2-3 ml 2-3 ml 2-3 ml 2-3 ml
fiert
Soluţie 1 1 1 1 1 1
Lugol picătură picătură picătură picătură picătură picătură
fiartă şi
Salivă - nativă nativă nativă nativă
răcită
Incolor
+
Culoare albastru albastru violet roz-roşu incolor
Reacţia
Trommer
20
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Rezultate:
eprubeta 1: culoare albastră (martor)
eprubeta 2: culoare albastră (enzimă inactivă)
eprubeta 3: culoare violet (amilodextrină)
eprubeta 4: culoare roz-roşu (eritrodextrină)
eprubeta 5: incoloră (acrodextrină)
eprubeta 6: incoloră, efectuarea reacţiei Trommer
determinând apariţia unui precipitat roşu cărămiziu
(oxid cupros).
Principiul metodei:
Calciul, conţinut în salivă, sau în alte lichide biologice
sub formă de săruri, formează, la pH = 12, cu indicatorul
complexonometric murexid (sare de amoniu a acidului
purpuric sau indicator complexonometric I), un compus solubil,
de culoare roşie.
Prin tratarea cu o soluţie diluată de EDTA (Ac.
Etilendiaminotetraacetic sau complexon III ), ca urmare a
distrugerii compusului murexid - Ca2+ (roşu), se formează
21
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Materiale necesare:
salivă (sau alt lichid biologic)
cristale de murexid
soluţie de EDTA
soluţie de NaOH 2N
apă bidistilată
eprubete, pipete, stativ.
Tehnica de lucru:
Se recoltează într-un vas 1-2 ml de salivă, se diluează
cu 5 ml apă bidistilată (care nu mai conţine calciu), se adaugă
5 ml de NaOH 2N şi 3 - 4 cristale de murexid. Se agită soluţia
şi se obţine o coloraţie roz-roşie (în cazul în care soluţia
conţine calciu). Se adaugă progresiv, picurând, soluţie de
EDTA până ce se obţine o coloraţie violetă, dată de murexidul
rămas liber în soluţie.
22
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Rezultate:
La finalul reacţiei, conţinutul eprubetei se colorează
violet.
Principiul metodei:
Ditizona, în soluţie de tetraclorură de carbon sau
cloroform, are o culoare verde; în contact cu saliva
impurificată cu o sare mercurică, va căpăta o culoare
portocalie, prin formarea ditizonatului mercuric.
Reactivul este foarte sensibil, dar dă reacţii pozitive cu
mai mulţi ioni: Pb, Ag, Zn, Cu.
Limita de recunoaştere pentru Hg este de 0,25 μg
cantitate totală în soluţia cercetată.
Materiale necesare:
soluţie cloroformică (sau în tetraclorură de carbon)
de ditizonă
soluţie de azotat mercuric
salivă nativă
eprubete, pipete, stativ.
Tehnica de lucru:
Se recoltează într-o eprubetă 1-2 ml salivă, peste care
se adaugă 1ml soluţie azotat mercuric, pentru a se realiza
situaţia în care saliva recoltată ar conţine mercur (ar fi
recoltată de la persoane ce lucrează în mediu toxic cu
mercur). Se pipetează apoi 2 ml soluţie cloroformică de
ditizonă (verde) şi se agită.
23
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Rezultate:
Prin formarea ditizonatului mercuric, apare culoarea
portocalie în partea inferioară a eprubetei.
Materiale necesare:
soluţie de sulfit de sodiu
soluţie de azotat sau acetat de Pb
salivă nativă
pipete, stativ, eprubete.
Tehnica de lucru:
Într-o eprubetă se recoltează 1-2 ml de salivă normală,
ce se impurifică prin adăugarea a 1-2 ml de soluţie de sare de
plumb (ca şi când ar fi recoltată de la o persoană ce lucrează
în mediu toxic cu Pb). Se adaugă apoi 2 ml de sulfit de sodiu.
Rezultate:
Apariţia unui precipitat alb, de sulfit de Pb, indică
prezenţa plumbului în salivă.
Principiul metodei:
Soluţiile apoase de cromat de potasiu formează cu
sărurile de plumb din salivă un precipitat galben ca lămâia, de
24
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Materiale necesare:
salivă nativă
soluţie de cromat de potasiu (K2CrO4)
soluţie de azotat sau acetat de Pb
pipete, stativ, eprubete.
Tehnica de lucru:
Într-o eprubetă, peste 2 ml de salivă normală, se
adaugă 1-2 ml soluţie de sare de Pb; pentru evidenţierea
plumbului, se adaugă apoi 2 ml de cromat de potasiu şi se
agită conţinutul.
Rezultate:
Apariţia unui precipitat galben de cromat de Pb, indică
reacţia pozitivă.
Principiul metodei:
Sărurile stanoase (clorura stanoasă), în mediu puternic
alcalin (KOH), se oxidează şi trec în săruri stanice. Sarea
stanică astfel obţinută – tetrahidroxistanitul dipotasic
K2Sn(OH)4 , în mediu alcalin, reduce ionul de Bi3+ din salivă,
aducându-l în forma metalică pură, ce apare ca un precipitat
negru, în partea inferioară a eprubetei.
Limita de evidenţiere a bismutului este de 1 μg.
Arseniul, stibiul şi plumbul nu dau această reacţie, deci se
poate decela bismutul şi în prezenţa plumbului.
25
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Materiale necesare:
salivă
soluţie proaspătă de clorură stanoasă (SnCl2)
soluţie de KOH
soluţie de Bi clorurat sau azotat
pipete, stativ, eprubete.
Tehnica de lucru:
Într-o eprubetă cu 0,5 ml clorură stanoasă proaspătă se
adaugă încet şi se agită, o soluţie de KOH, numai până la
dizolvarea completă a precipitatului format iniţial
(tetrahidroxistanitul dipotasic). Se adaugă apoi 1-2 ml de
salivă, impurificată în prealabil cu 2 ml sare de bismut
(mimând saliva recoltată de la o persoană care lucrează în
mediu cu Bi sau face tratament pe bază de Bi).
Rezultate:
Se observă apariţia de particule negre, ce se depun
încet în partea inferioară a eprubetei (precipitat negru).
2-
Punerea în evidenţă a altor anioni prezenţi în salivă (SO 4 şi
-
HCO3 )
Materiale necesare:
eprubete, pipete, stativ
soluţie acid clorhidric 10%
soluţie clorură de bariu 5%
acid acetic.
Tehnica de lucru:
2-
Anionii de SO4
Se pun într-o eprubetă 2-3 ml salivă fiartă şi filtrată. Se adaugă 2-3
picături HCl 10% şi câteva picături clorură de bariu. Apare un precipitat alb
de sulfat de bariu.
3-
Anionii de HCO
Peste 2-3 ml salivă nativă se adaugă într-o eprubetă 1-2 picături
acid acetic. Apar bule gazoase de CO2.
26
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Reacţia salivei
Materiale necesare:
- hârtie indicatoare
- pensetă.
Tehnica de lucru:
O fâşie de hârtie indicatoare este înmuiată în salivă. Se compară
culoarea obţinută cu scala de culori a hârtiei indicatoare.
27
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
28
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
29
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
la administrarea de medicamente
parasimpaticolitice (atropina, scopolamina)
în stări de deshidratare a întregului organism (febră,
transpiraţii abundente, hemoragii, vărsături, diarei
profuze, diabet insipid).
Suprimări totale şi permanente ale secreţiei pot apare
la menopauză, în caz de paralizie facială periferică, în boala
Mikulicz (hipertrofia bilaterală a glandelor salivare), boala
Gugerot-Sjögren (scleroza glandelor salivare şi lacrimale),
lipsa congenitală a glandelor salivare sau a canalelor lor.
Alte modificări pot fi întâlnite la nivelul mucoasei bucale
sub formă de inflamaţii ale gingiilor, limbii (gingivite, glosite,
stomatite). Acestea apar mai ales la muncitorii ce lucrează în
medii toxice cu Hg, Pb, Cd (fabrici de oglinzi, de termometre,
acumulatori cu Pb, ţevi şi alte piese de plumb, la vopsitori ce
vopsesc cu miniu de Pb, tipografi, mineri, muncitori din
combinate chimice), sau la cei ce iau tratament cronic pe bază
de Bi sau unele antibiotice. La aceste persoane, pe lângă
simptomatologia specifică fiecărei intoxicaţii, pot apare iritaţii
gingivale şi orale, datorită eliminării acestor substanţe în
salivă.
Gingivita mercurică se caracterizează printr-o dungă
cenuşie pe marginea gingiilor, la baza dinţilor (lizereu
gingival), o puternică iritaţie şi salivaţie abundentă; gingivita
bismutică produce un lizereu albastru-cenuşiu, iar cea
saturnină (intoxicaţie cu Pb) o dungă albastru-cenuşie.
Mai apar gingivite şi stomatite în avitaminoze ale
complexului B, prin lipsa de fier din organism, în infecţii orale
microbiene, virotice, fungice, mai ales la cei cu maladii
hematologice (agranulocitoză, leucemii), tratamente
îndelungate cu antibiotice, defecte imunologice. Aceste leziuni
nu sunt datorate salivaţiei modificate sau glandelor salivare, ci
unor cauze generale extrasalivare.
30
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Calculii salivari
Calculii salivari (sialoliţii: „sialon‖=salivă, „litos‖=piatră)
apar rareori şi aproape exclusiv în canalul Wharton. Calculii
sunt formaţi din săruri anorganice (carbonaţi şi fosfaţi acizi de
calciu).
1.4. ÎNTREBĂRI
31
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
32
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
FIZIOLOGIA STOMACULUI
Stomacul este un
organ cavitar, plasat între
esofag şi duoden.
Prezintă o porţiune
verticală, formată din
fundul şi corpul
stomacului, care este
considerată stomacul
acid, deoarece glandele
de aici secretă HCl şi
pepsinogen în cantitate
mare. Funcţia motorie a
Figura 2.1. Localizarea regiunilor acestei porţiuni este
gastrice diminuată, având mai ales
rol de depozitare. Porţiunea
orizontală (antrul piloric şi canalul piloric) este considerată
stomacul alcalin, glandele de aici secretând mucus şi
gastrină în cantitate mare. Activitatea motorie del la acest
nivel se caracterizează prin mişcări de amestecare şi
propulsie a alimentelor.
Stomacul are trei funcţii majore:
Secretorie, mucoasa gastrică conţine celule
glandulare care sintetizează şi secretă substanţe
33
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
34
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
LOCUL UNDE SE
SUBSTANŢA ROLUL
SECRETĂ
-solubilizează proteinele, formând -celulele oxintice sau
acidalbuminele, pregătindu-le pentru parietale, marginale
Acidul Clorhidric digestie ale glandelor gastrice,
(HCl) -conferă pH-ul optim pentru acţiunea situate mai ales în
enzimelor gastrice; stomacul acid.
-acţiune bactericidă
-favorizează transformarea Fe3+ în Fe2+
absorbabil
-enzimă proteolitică -celulele peptice,
-hidrolizează proteinele, solubilizate în principale, ale
prealabil de acidul clorhidric, glandelor gastrice, sub
Pepsina
transformându-le în peptide mai mici formă inactivă, de
-la adult, în absenţa labfermentului, pepsinogen.
realizează digestia proteinelor din
lapte.
-enzimă proteolitică -celulele peptice,
-prezentă numai în secretia gastrică a principale (chief cells)
Labfermentul sugarului ale glandelor gastrice.
-în prezenţa ionilor de Ca transformă
cazeina în paracazeinat de Ca
-enzimă proteolitică -celulele principale ale
-acţiune lichefiantă asupra câtorva glandelor gastrice.
Gelatinaza
proteoglicani, în special asupra
gelatinei.
-enzimă lipolitică -celulele principale ale
Lipaza -hidrolizează lipidele fin emulsionate glandelor gastrice.
din lapte, frişcă, maioneză.
-amestecul unei glicoproteine numită -celulele mucoase de
mucină cu apa suprafaţă, mai ales de
-protecţie mecanică şi chimică a la nivelul glandelor
mucoasei gastrice. pilorice.
-formează un gel alcalin, care se
dispune pe suprafaţa epiteliului gastric,
Mucus
realizând protecţia împotriva digestiei
mucoasei de către pepsină şi HCl.
-alături de HCO3- formează bariera
alcalină, protectoare a mucoasei
gastrice
-lubrefiază alimentele.
-favorizează absorbţia vitaminei B12 -în celulele oxintice,
(ciancobalamina) parietale ale mucoasei
-formează un complex cu această gastrice, alături de
vitamină, care este absorbit în HCl.
intestinul subţire
Factor intrinsec -când factorul intrinsec este absent sau
în cantitate mică, apare deficitul de vit.
B12, care determină anemia
megaloblastică Biermer, numită şi
anemia pernicioasă.
35
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
LOCUL UNDE SE
SUBSTANŢA ROLUL
SECRETĂ
37
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Figura 2.2.
Experimentul ―Prânzul fictiv‖ al lui I.P. Pavlov. Fistula gastrică, combinată cu
esofagostomie.
Oe – esofagul secţionat şi deschis la exterior (esofagotomie şi esofagostomie)
pentru recoltarea alimentelor înghiţite (alimentele nu ajung în stomac).
S – stomac cu fistulă gastrică cronică Basov;
C – canulă gastrică, prin care se scurge sucul gastric secretat în timpul prânzului
fictiv.
Alte modele presupun separarea, izolarea unor porţiuni
din stomac, cu realizarea unor ‖pungi‖, la care se poate păstra
inervaţia vagală pentru evidenţierea ambelor mecanisme ale
secreţiei gastice (nervos şi umoral) sau pot fi denervate, în
acest caz putându-se studia doar mecanismul umoral.
38
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Figura 2.3.
Modelul de "mic stomac" imaginat de I.P. Pavlov, numită şi "punga lui Pavlov", sau
"punga inervată vagal". Permite obţinerea sucului gastric produs atât prin mecanism nervos
(vagal), cât şi umoral.
Principiul metodei:
Aciditatea sucului gastric se neutralizează cu o soluţie
de hidroxid de sodiu 0,1N, în prezenţa reactivului Töpffer-
Linossier (un amestec de indicator Töpffer şi fenolftaleină,
care are culoarea galben - portocalie).
HCl liber colorează reactivul în roşu, când pH-ul soluţiei
este cel mult 2,9; la pH 3, reactivul capătă culoarea portocalie,
iar la pH 4 culoarea devine galbenă, indicând neutralizarea
HCl liber. În prezenţa fenolftaleinei, până la o valoare a pH-
ului de 7, soluţia este incoloră şi devine roşu-violetă la un pH
de 9 -10 (ceea ce indică momentul neutralizării HCl
combinat).
39
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Materiale necesare:
pipete
balon Erlenmeyer
biuretă
suc gastric
soluţie NaOH 0,1 N
reactiv Töpffer-Linossier.
Tehnică:
Într-un balon Erlenmeyer se introduc 10 cm3 suc
gastric şi 3-4 picături din reactivul Töpffer-Linossier.
În prezenţa reactivului Töpffer-Linossier, sucul gastric se
colorează în roşu, datorită prezenţei HCL, ceea ce indică un
pH mai mic de 2,9.
Se titrează apoi cu soluţie de NaOH 0,1 N, până când
culoarea virează spre portocaliu şi apoi spre galben. În acest
moment se opreşte titrarea şi se notează cu N1 numărul de
mililitri de NaOH utilizaţi la titrarea acidităţii libere.
Se continuă titrarea până la apariţia culorii roşu-violet
(la pH 9-10), când s-a neutralizat cantitatea totală de acid,
inclusiv a celui legat (se trece mai întâi prin coloraţia galben
deschis). Se notează cu N2 numărul de mililitri din soluţia
de NaOH 0,1N, utilizaţi la titrarea aciditătii totale.
Număr mililitri NaOH folosiţi pentru neutralizarea HCl
combinat = N2 – N1.
Rezultate:
Rezultatele se exprimă în grame acid clorhidric la 1000
3
cm suc gastric sau în mEq/l.
Pentru exprimarea în grame HCl la 1000 cm3 de suc
gastric se înmulţesc: cm3 NaOH 0,1N consumaţi cu
echivalentul gram al unui cm3 dintr-o soluţie de HCl 0,1N
(0,00365g) şi cu 100.
Pentru exprimarea în mEq/L:
40
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Exemplu calcul:
CNaOH x VNaOH = CHCl x VHCl
CNaOH = 100 mEq gram/L (concentraţia soluţiei de NaOH
utilizată la titrare)
VNaOH = N (nr. de ml NaOH utilizaţi în titrare)
CHCl = concentraţia de HCl din sucul gastric – necunoscuta
noastră
VHCl = 10 mL (numărul de mL de suc gastric utilizaţi)
Înlocuind cu valorile din exemplu, obţinem următoarea relaţie:
Valori normale:
Corect este să exprimăm aciditatea sucului gastric prin
debitul orar bazal de HCl (DOB), care reprezintă cantitatea
de acid clorhidric secretată de stomac, într-o oră, în condiţii
bazale (fără stimularea secreţiei), având o valoare de 1,5- 2,5
mEq/L.
41
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Principiul metodei:
Reactivul Gűnsburg, în prezenţa acidului clorhidric liber,
prin încălzire şi evaporare, dă o coloraţie roşu-carmin. Scopul
lucrării este de a evidenţia acidul clorhidric liber din sucul
gastric, atunci când nu poate fi dozat, deoarece se află în
cantităţi foarte mici. Prezenţa lui ne dovedeşte că funcţia
secretorie a mucoasei gastrice nu este complet compromisă.
42
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Materiale necesare:
suc gastric proaspăt (prin păstrare, HCl se
volatilizează)
reactiv Gűnsburg (soluţie de vanilină şi fluoroglucină
în alcool)
capsulă de porţelan
sursă de foc.
Mod de lucru:
Într-o capsulă de porţelan se pun câte 2-3 picături din
soluţiile alcoolice de vanilină şi fluoroglucină. Se adaugă 2-3
picături din sucul gastric de examinat. Se încălzeşte lent
conţinutul până la evaporare.
Rezultate:
Apariţia culorii roşu-carmin ne indică prezenţa acidului
clorhidric liber şi faptul că mucoasa gastrică mai are potenţial
secretor.
Lipsa culorii ne arată compromiterea totală a capacităţii
secretorii a mucoasei gastrice.
Principiul metodei:
Evidenţierea acidului lactic se bazează pe proprietatea
oxiacizilor de a da reacţii de culoare cu sărurile ferice.
43
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Materiale necesare:
suc gastric
reactiv Uffelman (conţine clorură ferică şi are o
culoare albastru-violetă)
pipete
stativ.
Tehnica de lucru:
Se efectuează folosind 2 eprubete: martor şi probă.
Rezultate:
în eprubeta 1, martor (fără acid lactic), nu se modifică
culoarea
în eprubeta 2, probă, apare culoarea galben-verzuie,
datorită formării lactatului feric.
Principiul metodei:
Se realizează hidrolizarea unui substrat, respectiv a
unei cantităţi de cazeină în soluţie, de către pepsina din sucul
gastric, într-un interval de timp şi la o temperatură standard
Materiale necesare:
suc gastric
ser fiziologic
soluţie acidă de cazeină 1‰, încălzită la 37°C
44
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Tehnica de lucru:
Eprubeta 1 Eprubeta 2
martor probă
Soluţie acidă de 10 ml 10 ml
cazeină 1‰
Suc gastric - 1ml
Ser fiziologic 1ml -
Termostat 38°C 15 min 15 min
Soluţie de acetat de 1ml 1ml
sodiu 20%
Tabelul nr. 2.6. Substanţele introduse în eprubetele de reacţie
Rezultate:
se ştie că, în prezenţa acetatului de sodiu, cazeina
precipită;
apariţia precipitatului, în eprubeta martor, dovedeşte
fapul că, în această eprubetă, cazeina nu a fost
hidrolizată, prin lipsa enzimei;
în eprubeta probă, soluţia este clară, deoarece
pepsina a acţionat şi a hidrolizat cazeina.
45
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Principiul metodei:
Laptele coagulează, în prezenţa labfermentului şi a
ionilor de calciu, rezultând paracazeinatul de calciu, insolubil.
Această reacţie are loc în două etape:
prima etapă (enzimatică): sub acţiunea
labfermentului, la un pH 4,5-5,5 şi la o temperatură
de 37°C, cazeinogenul din lapte se transformă în
paracazeină (cazeogen), solubilă.
a doua etapă (chimică): sub acţiunea ionilor de
Ca2+, paracazeina se transformă în paracazeinat de
calciu (cazeum), insolubil.
Materiale necesare:
soluţie labferment 1%
lapte proaspăt
5 eprubete, stativ
termostat setat la 37°C
soluţie de oxalat de K 10%
soluţie de clorură de Ca 10%.
Mod de lucru:
Eprubeta Eprubeta Eprubeta Eprubeta Eprubeta
1 2 3 4 5
Lapte proaspăt 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml
Sol. oxalat de K - - 1 ml 1 ml 1 ml
Labferment 1 ml - 1 ml 1 ml 1 ml
Labferment inactivat - 1 ml - - -
(fierbere)
Sol. clorură de Ca - - - 1 ml -
Termostatare 37°C 30 min 30 min 30 min 30 min 30 min
Fierbere - - - - 1 minut
Sol. clorură de Ca - - - - 1 ml
46
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Rezultate:
47
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
48
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
2.4. ÎNTREBĂRI
49
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
50
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
FIZIOLOGIA PANCREASULUI
Pancreasul este o
glandă anexă a tractului
digestiv, fiind situată
retroperitoneal, la nivelul
vertebrelor L1 - L2. La
mamifere, pancreasul are
o dublă secreţie: exocrină
şi endocrină. Sucul
pancreatic este produsul
de secreţie al pancreasului
exocrin. Secreţia
Figura 3.1. Localizarea pancreatică în endocrină este produsă de
raport cu duodenul insulele Langerhans şi
este reprezentată de hormonii: insulină, glucagon,
somatostatină, polipeptid pancreatic, gastrină, etc. Structura
histologică a pancreasului este asemănătoare cu cea a
glandelor salivare, fiind reprezentată de celule acinoase şi de
un sistem canalicular, care se termină într-un canal principal
Wirsung şi, uneori, într-un canal accesoriu Santorini. Canalul
Wirsung se varsă în duoden la nivelul ampulei Vater, în
vecinătatea canalului coledoc. Secreţia exocrină a
pancreasului are două componente:
Secreţie hidrelatică (hidrolatică), bogată în apă şi
bicarbonat de sodiu, cu o cantitate redusă de
51
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
52
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
53
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Recoltarea experimentală:
Se realizează fistule pancreatice permanente, pentru a
recolta sucul pancreatic direct din canalul Wirsung.
Recoltarea sucului pancreatic la om:
În mod curent, sucul pancreatic este recoltat prin tubaj
duodenal cu sonda Einhorn, introdusă 60 – 70 cm, până în
duoden. Prin această metodă se recoltează suc duodenal,
care este un amestec de suc gastric, pancreatic, intestinal şi
bilă. Pentru a obţine un suc pancreatic cu o compoziţie cât mai
pură se întrebuinţează sonde cu dublu sau triplu lumen (în
54
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Principiul metodei:
Cazeina (substrat proteic) este hidrolizată până la
aminoacizi, sub influenţa tripsinei, la temperatură de 37oC.
Cazeina nehidrolizată va căpăta un aspect tulbure, prin
adăugare de soluţie alcool - acid.
Materiale necesare:
stativ cu eprubete
pipete
soluţie NaCl 9‰
produs biologic: suc pancreatic
soluţie de cazeină 1‰
soluţie alcool - acid (acid acetic glacial şi alcool)
soluţie tampon
termostat reglat la 37oC
ceas de laborator
Tehnica de lucru:
În 10 eprubete se fac diluţii crescânde din lichidul de
cercetat (suc pancreatic). Se procedează astfel: în prima
eprubetă se pun 2 cm3 de suc pancreatic, în celelalte câte 1
cm3 de soluţie de NaCl 9‰. Din prima eprubetă se ia 1 cm 3 şi
55
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Eprubeta 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
suc 2
- - - - - - - - -
pancreatic cm3
Soluţie
NaCl 9‰ 1 1 1 1 1 1 1 1 1
-
(ser cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3
fiziologic)
Din prima eprubetă se ia 1 cm3 suc pancreatic şi se pune în eprubeta a 2-a, se amestecă şi
din acest amestec se ia 1 cm 3 şi se trece în eprubeta a 3-a, ş.a.m.d.
soluţie de
2 2 2 2 2 2 2 2 2 2
cazeină
cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3
1‰
Soluţie
tampon 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
(pH = 7,8 - cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3
8)
Se agită toate eprubetele şi se lasă la termostat, la 37oC, timp de o oră.
alcool – 2–3 2–3 2–3 2–3 2–3 2–3 2–3 2–3 2–3 2–3
acid pic pic pic pic pic pic pic pic pic pic
56
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Rezultate:
Rezultatul se exprimă în unităţi triptice. Unitatea
triptică este cantitatea de enzimă capabilă să hidrolizeze 1
mg de cazeină, într-o oră, la 37 oC.
Exemplu: În eprubeta nr. 4, cantitatea iniţială de 1 cm3
suc pancreatic sau duodenal, a fost diluată la 1/8, hidrolizând
2 mg de cazeină. Tripsina conţinută într-un cm3 de suc
pancreatic nediluat va fi 8 x 2 = 16 unităţi triptice.
Principiul metodei:
Dozarea activităţii proteolitice a tripsinei se poate face
şi prin dozarea produşilor rezultaţi prin hidroliza proteinelor,
până la aminoacizi, realizată prin activitatea enzimei, în
condiţii standard de temperatură (37 oC) şi timp de acţiune.
Aminoacizii sunt substanţe amfotere, deoarece posedă
atât funcţie bazică (amino), cât şi funcţie acidă (carboxil).
Substanţele amfotere, la punctul izoelectric, disociază în mod
egal funcţiile acide, respectiv bazice. În mediu mai acid decât
punctul izoelectric, disociază funcţia bazică, iar în mediul mai
alcalin decât punctul izoelectric, disociază funcţia acidă.
Metoda de dozare Sörensen se bazează pe
proprietatea generală a aldehidelor de a reacţiona cu -NH2
(radicalul amino, radical bazic) din molecula aminoacizilor,
dând astfel naştere la compuşi numiţi baze Schiff. În acest fel,
aminoacidul rămâne numai cu funcţia carboxil liberă,
comportându-se ca un acid obişnuit, care disociază doar H+,
aciditatea putând fi titrată volumetric, cu soluţie NaOH 0,1N.
Tripsina acţionează în mediu alcalin (pH = 8 - 8,8), deci
aminoacizii rezultaţi din acţiunea ei se află într-un astfel de
mediu. Înaintea blocării funcţiei amino cu o formaldehidă,
trebuie procedat la neutralizarea mediului; în caz contrar, o
parte din funcţiile carboxil ale bazelor Schiff vor reacţiona cu
57
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Materiale necesare:
lichid de digestie triptică
fenolftaleină sol 1 %
formol neutralizat
NaOH 0,1N
HCl 1%
balon Erlenmeyer, biuretă, pipete
Tehnica de lucru:
Există 3 faze:
Faza 1: neutralizarea mediului alcalin. În balonul
Erlenmeyer se pun 5 cm3 lichid de digestie triptică,
se adaugă 2 – 3 picături din soluţia de fenolftaleină.
Lichidul având o reacţie alcalină, fenolftaleina se
colorează în roşu-violet (pH peste 8). Cu o pipetă se
adaugă picătură cu picătură HCl 1%, agitând de
fiecare dată, până când culoarea roşie a devenit roz
palid.
Faza 2: legarea funcţiilor amino. Se adaugă
acelaşi volum (5 cm3) de aldehidă formică
neutralizată 40%, formându-se baze Schiff,
aminoacizii transformându-se în acizi. Culoarea roz
dispare imediat, fenolftaleina în mediul acid fiind
incoloră.
Faza 3: titrarea acizilor rezultaţi (baze Schiff). Se
titrează cu soluţie NaOH 0,1N picătură cu picătură,
până când lichidul din balon îşi recapătă culoarea
slab roză.
58
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Rezultate:
Se exprimă fie în unităţi triptice în sucul pancreatic, fie
în grame de glicocol sau de alanină % sau ‰ (în funcţie de
greutatea moleculară a acestor aminoacizi).
Unitatea triptică reprezintă (în acest caz) numărul de
cm3 de NaOH 0,1N, necesar pentru neutralizarea
aminoacizilor (ca baze Schiff), rezultaţi dintr-o substanţă
proteică, digerată timp de o oră la 37oC şi la pH=8, sub
influenţa unei cantităţi determinate de suc pancreatic (1 cm 3).
Exemplu: s-au utilizat pentru titrare 4 cm3 NaOH 0,1N.
Greutatea moleculară a glicocolului este 75 grame.
Greutatea moleculară a alaninei este 89 grame.
Dacă la 1 cm3 NaOH 0,1N corespund 0,0075 grame
glicocol, respectiv 0,0089 grame alanină, la 4 cm 3
NaOH 0,1N vor corespunde:
0,0075 4
x1 0,0300
1 grame glicocol sau
0,0089 4
x2 0,0356
1 grame alanină.
Principiul metodei:
Se titrează acizii graşi liberi, rezultaţi prin acţiunea
lipazei în condiţii standard, cu soluţie NaOH 0,1N, în prezenţa
fenolftaleinei.
Materiale necesare:
suc pancreatic (duodenal)
59
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
ulei de măsline
alcool 96o
fenolftaleină soluţie 1%
soluţie NaOH 0,1N
balon Erlenmeyer, biuretă, pipete
termostat reglat la 37oC
ceas de laborator
Tehnica de lucru:
Se efectuează, folosind 2 baloane Erlenmeyer:
Martor: Într-un balon Erlenmeyer se pun 10 cm 3 ulei
de măsline şi 2 cm3 suc pancreatic. Peste acest
amestec se adaugă 10 cm3 alcool 96o, pentru a
inactiva enzima şi câteva picături de fenolftaleină.
Conţinutul balonului nu se va colora. Amestecul este
titrat cu NaOH 0,1N până la apariţia culorii roz.
Probă: Într-un balon Erlenmeyer se pun 10 cm 3 ulei
de măsline şi 2 cm3 suc pancreatic. Nu se adaugă
alcool. Se pune amestecul timp de o oră, la 37oC la
termostat. După scoaterea de la termostat, se
adaugă 10 cm3 de alcool 96º, pentru a inactiva
enzima şi a opri reacţia. Acizii graşi liberi, rezultaţi
prin activitatea lipazei pancreatice, sunt titraţi cu
soluţie NaOH 0,1N, în prezenţa fenolftaleinei, până
la apariţia culorii roz.
Rezultate:
Diferenţa dintre numărul de cm3 de NaOH 0,1N, utilizaţi
la titrarea probei şi a martorului, reprezintă activitatea lipazică
din cei 2 cm3 de suc pancreatic.
Valori normale: 50 – 60 cm3 NaOH 0,1N la 100 cm3
suc pancreatic.
60
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Principiul metodei:
Activitatea amilazei pancreatice se apreciază prin
capacitatea ei de a hidroliza amidonul, în condiţii standard, în
produşi intermediari (dextrine) şi finali (maltoză), evidenţiaţi cu
ajutorul soluţiei Lugol.
Materiale necesare:
ser sanguin sau urină
soluţie NaCl 9‰
soluţie amidon 1‰
soluţie Lugol (iod – iodurat 1%)
stativ cu 10 eprubete
pipete
termostat reglat la 37oC
Tehnica de lucru:
Eprubeta 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Urină sau
2
ser - - - - - - - - -
cm3
sanguin
Soluţie
NaCl 9‰ 1 1 1 1 1 1 1 1 1
-
(ser cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3
fiziologic)
Din prima eprubetă se ia 1 cm3 de urină şi se pune în eprubeta a 2-a, se amestecă şi din
acest amestec se ia 1 cm3 şi se trece în eprubeta a 3-a, ş.a.m.d.
Soluţie de 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2
amidon cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3
o
Se agită toate eprubetele şi se lasă la termostat, la 37 C timp de 30 de minute.
Dupa termostatare, eprubetele se răcesc.
soluţie
Lugol. 1–2 1–2 1–2 1–2 1–2 1–2 1–2 1–2 1–2 1–2
(picături)
2 u.W. x 32 = 64 u.W.
62
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Valori Normale:
Amilazemie 16 – 32 u.W./cm3 ser sanguin
Amilazurie 16 – 64 u.W./cm3 urină
63
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
64
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
65
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
3.4. ÎNTREBĂRI
66
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
67
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
FIZIOLOGIA FICATULUI
69
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
70
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
71
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
74
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Pigmenţii biliari
Sunt cei care dau coloraţia galben-verzuie,
caracteristică bilei şi sunt reprezentaţi predominant de
bilirubină şi urobilinogen. Ei reprezintă produşii de degradare
ai hemoglobinei, provenită din hematiile distruse în procesul
de hemoliză fiziologică.
Odată ce eritrocitele îmbătrânite sunt sechestrate şi
lizate, hemoglobina este catabolizată rapid. Aminoacizii sunt
eliberaţi prin proteoliză şi apoi neutralizaţi sau metabolizaţi.
Grupul hem este catabolizat de un sistem oxidativ microzomal,
inelul porfirinic fiind convertit în pigmenţi biliari, care sunt
eliminaţi prin ficat. Fierul, eliberat în cursul catabolismului
hemului, este iniţial încorporat în feritină (proteina de depozit),
în final fiind transportat la precursorii eritrocitari medulari de
către transferină, o proteină plasmatică ce leagă fierul.
Bilirubina este produsă în macrofage, prin
catabolismul enzimatic al fracţiunii hem din diverse
hemoproteine. 80% din bilirubina circulantă derivă din
eritrocitele îmbătrânite, care la sfârşitul vieţii lor normale, de
aproximativ 120 de zile, sunt distruse de celulele
reticuloendoteliale. Oxidarea hemului generează biliverdină,
care este metabolizată în bilirubină. Restul de 15-20% din
75
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
76
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Colesterolul
Se găseşte în bila hepatică în concentraţie de 80-180
mg%, iar în cea colecistică în cantităţi de 10 ori mai mari.
Colesterolul biliar este în cea mai mare parte produsul de
sinteză al celulelor hepatice şi doar într-o mică proporţie este
de provenienţă sanguină.
Colesterolul, ajuns în intestin împreună cu bila, este în
parte transformat în coprosterol sub acţiunea florei bacteriene
şi eliminat prin fecale, iar în parte, este reabsorbit în
segmentele proximale ale colonului şi ajunge din nou la ficat.
Bila mai conţine fosfolipide, dintre care menţionăm
lecitina, care în combinaţie cu sărurile biliare şi colesterolul,
împiedică formarea de calculi de colesterol.
77
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Principiul metodei:
Sărurile biliare produc scăderea tensiunii superficiale a
picăturilor de grăsime, la nivelul contactului lor cu apa,
fracţionându-le în picături mai mici şi determinând astfel
emulsionarea.
Materiale necesare:
bilă sau soluţie de săruri biliare
ulei de măsline
apă distilată
pipete
eprubete
stativ.
Tehnica de lucru:
Se efectuează folosind 2 eprubete: martor şi probă.
78
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Eprubeta 1 Eprubeta 2
martor probă
Soluţie săruri biliare - 3-4 ml
Apă distilată 3-4 ml -
Ulei de măsline 1 ml 1 ml
se amestecă, prin se amestecă prin
agitare, conţinutul agitare conţinutul
eprubetei eprubetei
Rezultate:
Eprubeta 1, martor: se evidenţiază două straturi
nemiscibile.
Eprubeta 2, probă: se formează o emulsie stabilă.
Principiul metodei:
Floarea de sulf în pulbere fină, presărată la suprafaţa
apei sau urinei normale, se menţine la suprafaţă. În cazul în
care apa sau urina conţin săruri biliare, ea cade în porţiunea
inferioară a vasului, în 2-3 minute, prin scăderea tensiunii
superficiale.
Materiale necesare:
soluţie săruri biliare sau urină (care conţine săruri
biliare)
floare de sulf în pulbere fină
pahare Berzelius.
Tehnica de lucru:
Se efectuează folosind două pahare Berzelius: martor
şi probă.
79
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Rezultate:
Paharul 1-martor: floarea de sulf se menţine la
suprafaţa lichidului
Paharul 2-probă: floarea de sulf nu se menţine la
suprafaţa lichidului şi cade în porţiunea inferioară a paharului,
datorită acţiunii de scădere a tensiunii superficiale a sărurilor
biliare.
Principiul metodei:
Sărurile biliare au proprietatea de a solubiliza acizii
graşi, rezultaţi din hidroliza lipidelor sub influenţa lipazei, la
nivelul duodenului şi de a forma împreună cu aceştia
complecşi coleinici, care reprezintă una dintre formele de
absorbţie a lipidelor, la nivelul intestinului. În laborator, vom
utiliza ca lipid, săpunul, iar în locul lipazei, vom folosi acidul
sulfuric.
Materiale necesare:
soluţie săruri biliare sau bilă diluată
acid sulfuric diluat
80
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
soluţie săpun
eprubete
pipete
stativ.
Tehnica de lucru:
Într-o eprubetă se introduc 5-6 ml soluţie diluată de
săpun, peste care se adaugă câteva picături de acid sulfuric
diluat, care hidrolizează grăsimile, desfăcându-le în acizi graşi
şi glicerol. Se observă apariţia unui precipitat, datorită faptului
că acizii graşi nu sunt hidrosolubili şi precipită în porţiunea
inferioară a eprubetei. Se adaugă apoi 3-4 ml soluţie de săruri
biliare.
Rezultate:
După agitare, se remarcă solubilizarea precipitatului de
acizi graşi format anterior, ceea ce ne indică acţiunea
hidrotropă a sărurilor biliare.
Reacţia Pettenkofer
Principiul metodei:
Reacţia se bazează pe proprietatea sărurilor biliare ca,
în prezenţa acidului sulfuric concentrat, să dea cu oximetil-
furfurolul un compus colorat în roşu. Sub influenţa acidului
sulfuric, zaharoza se desface în levuloză şi glucoză. Din
levuloză, prin eliminarea a trei molecule de apă, va rezulta
oximetil - furfurolul, care, împreună cu acidul colic din sărurile
biliare şi, în prezenţa acidului sulfuric concentrat, va forma un
produs colorat în roşu.
81
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Materiale necesare:
soluţie acizi biliari (bilă diluată de 3-4 ori)
soluţie zaharoză 10 %
acid sulfuric concentrat
eprubete
stativ.
Tehnică de lucru:
Într-o eprubetă cu 4-5 ml soluţie de acizi biliari sau bilă
diluată, se adaugă 0,5-1 ml soluţie de zaharoză 10% şi se
amestecă bine. Înclinând uşor eprubeta, se adaugă cu
precauţie 3-4 ml acid sulfuric concentrat, astfel încât să nu se
amestece cu soluţia din eprubetă, ci să formeze un strat
compact în porţiunea inferioară a eprubetei. În tot acest timp,
eprubeta se ţine sub un jet de apă rece, evitând astfel
încălzirea ei.
Rezultate:
Agitând foarte uşor eprubeta, fără a omogeniza
conţinutul, la limita de separare dintre acidul sulfuric, situat în
partea de jos şi amestecul de bilă şi zaharoză, apare un inel
roşu - violaceu.
Reacţia Udranszky
82
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Principiul metodei:
Se evidenţiază prezenţa pigmenţilor biliari în urină,
utilizând tinctura de iod. Urina care conţine bilirubină, se
colorează în verde, în prezenţa iodului din tinctura de iod.
Materiale necesare:
bilă diluată sau urină icterică
tinctură de iod
pipete
eprubete
stativ.
Tehnica de lucru:
Într-o eprubetă se introduc 10 ml bilă diluată sau urină
icterică. Cu o pipetă efilată se lasă să curgă, în porţiunea
inferioară a eprubetei, 2 ml tinctură de iod.
Rezultate:
Se observă apariţia unui inel verde, la nivelul suprafeţei
de contact dintre urină si tinctura de iod, ceea ce ne indică
prezenţa bilirubinei în lichidul de cercetat. Proba este extrem
de simplă, fiind folosită uzual în practica medicală, însă nu
este strict specifică, acest inel apare şi după administrarea de
antitripsină.
Reacţia Gmelin
Principiul metodei:
Evidenţiem prezenţa pigmenţilor biliari în urină,
cunoscând faptul că bilirubina se colorează în verde, prin
83
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Materiale necesare:
bilă diluată sau urină icterică
amestec format din acid azotic concentrat şi nitrit de
sodiu
pipete
eprubete
stativ.
Tehnica de lucru:
Într-o eprubetă se introduc 10 ml bilă diluată sau urină
icterică. Cu o pipetă efilată se lasă să curgă încet, în porţiunea
inferioară a paharului, 1-2 ml amestec format din acid azotic
concentrat şi nitrit de sodiu.
Rezultate:
La limita de separare dintre cele două lichide apar mai
multe inele colorate în verde, albastru, violet, galben, roşu,
datorită oxidării inegale a pigmenţilor biliari. Prezenţa inelului
verde la limita de separare dintre cele două lichide ne indică
existenţa în lichidul de cercetat a bilirubinei, care se oxidează
la biliverdină.
Reacţia Rosenbach
Principiul metodei:
Se evidenţiază prezenţa pigmenţilor biliari în urină,
cunoscând faptul că bilirubina se colorează în verde, prin
oxidarea la biliverdină, în prezenţa acidului azotic.
Materiale necesare:
bilă diluată sau urină icterică
84
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Tehnica de lucru:
Pe o hârtie de filtru, aşezată pe o placă de porţelan, se
lasă să cadă 2-3 picături din soluţia de cercetat. În mijlocul
petei formate pe hârtie se adaugă o picătură din amestecul
format din acid azotic concentrat şi nitrit de sodiu.
Rezultate:
În mijlocul picăturii de acid, respectiv la limita de
separaţie dintre cele două lichide de pe hârtie, apar cercuri
concentice colorate în galben, roşu, albastru, violet şi la
exterior verde. Prezenţa inelului verde, la limita de separare
dintre cele două lichide de pe hârtie, ne indică existenţa în
lichidul de cercetat, a bilirubinei, care se oxidează la
biliverdină.
Reacţia Franke
Principiul metodei:
Se evidenţiază prezenţa pigmenţilor biliari în urină,
cunoscând faptul că bilirubina se colorează în verde intens, în
prezenţa albastrului de metilen.
Materiale necesare:
bilă diluată sau urină icterică
soluţie de albastru de metilen 2‰
pipete
eprubete
stativ.
85
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Tehnica de lucru:
Într-o eprubetă se introduc 5 ml bilă diluată sau urină
icterică, apoi se adaugă picătură cu picătură soluţie de
albastru de metilen.
Rezultate:
Soluţia se va colora în verde intens, indicând prezenţa
bilirubinei, care prin oxidare s-a transformat în biliverdină. În
absenţa bilirubinei, soluţia rămâne albastră.
Principiul metodei:
Se evidenţiază prezenţa pigmenţilor biliari în urină,
cunoscând faptul că bilirubina precipită, în prezenţa clorurii de
bariu, sub formă de bilirubinat de bariu. Acesta este apoi
oxidat de amestecul dintre acid sulfuric şi bicromat de potasiu,
la biliverdinat de bariu, de culoare verde.
Materiale necesare:
bilă diluată sau urină icterică
soluţie de clorură de bariu 10%
soluţie de bicromat de potasiu 4%
soluţie de acid sulfuric 20%
pipete
eprubete
pâlnie
hârtie de filtru
stativ.
Tehnica de lucru:
Într-o eprubetă se introduc 5 ml bilă diluată sau urină
icterică, apoi 10 ml soluţie clorură de bariu 10%. După agitare,
apare un precipitat de bilirubinat de bariu, de culoare galbenă,
86
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Rezultate:
Se observă, pe hârtia de filtru, apariţia unor zone
concentrice de culoare verde, de biliverdinat de bariu, în
punctele unde a fost picurat reactivul oxidant.
Valori (mg/dl)
Bilirubina totală:
Prematuri: 1 zi 6
Prematuri 2 zile 8
Prematuri 3-5 zile 15
La termen: 1 zi 6
La termen: 2 zile 7
La termen 3-5 zile 12
Copii şi adulţi 0,8-1
87
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
88
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
4.4. ÎNTREBĂRI
89
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
90
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Tunica musculară
a tubului digestiv
(exceptând porţiunea
iniţială şi terminală a lui)
este reprezentată de
musculatură netedă.
Muşchiul neted, denumit
astfel datorită lipsei
striaţiilor transversale,
este alcătuit din fibre mici,
în mod obişnuit de 1-5 µm
diametru şi 20-500 µm
lungime.
Ţesutul muscular
neted din componenţa
unui anumit organ diferă,
în general, de cel din alte
organe prin: dimensiuni,
Figura 5.1. organizare (de exemplu,
dispunere în tunici,
straturi, etc.), răspunsul la
diferiţi stimuli, inervaţie, funcţii şi este împărţit în două tipuri
majore, în funcţie de tipul excitaţiei:
91
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
De reţinut:
Muşchiul neted are filamente groase şi subţiri, care nu sunt
aranjate în sarcomere; de aceea nu apare striat ci neted.
Tipurile de muşchi neted:
muşchiul neted multiunitar:
se găseşte în iris, muşchii ciliari ai cristalinului şi vase
deferente;
se comportă ca unităţi motorii separate;
nu are sau are foarte puţine sinapse electrice (joncţiuni
gap) între celule;
este bogat inervat, contracţia este controlată în principal
de către sistemul nervos vegetativ
m. neted unitar:
este cel mai frecvent şi este prezent în uter, tract gastro-
intestinal, ureter, vezică urinară
are activitate spontană (unde de contracţie lente) şi
prezintă de asemenea o activitate ritmică (pacemaker)
modulată de hormoni şi neurotransmiţători; se poate, de
asemenea, contracta în urma unor stimuli mecanici
(tracţiune, lovire).
94
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
miozinei.
depolarizarea membranei celulare deschide canalele de Ca2+
voltage-gated în faza ascendentă (upstroke) a potenţialului de
2+
acţiune şi Ca pătrunde în celulă, ca urmare a gradientului
2+
electrochimic, crescând concentraţia intracelulară de Ca
2+
([Ca ]).
Ca , care intră în celulă poate determina eliberarea
2+
2+
suplimentară de Ca în sarcoplasmă din reticulul
2+ 2+
sarcoplasmic, prin canale de Ca ―Ca -gated‖. Hormonii şi
2+
neurotransmiţătorii pot, de asemenea, elibera direct Ca în
2+
sarcoplasmă prin intermediul canalelor de Ca IP3 (inozitol
1,4,5-trifosfat)-gated.
creşte concentraţia intracelulară a calciului.
Ca se leagă de calmodulină. Complexul Ca -calmodulină
2+ 2+
95
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Principiul metodei:
Un muşchi neted de broască (stomac), preparat cu
atenţie, se fixează la o peniţă ce înscrie pe un kimograf o
secusă, obţinută prin stimulare electrică.
Materiale necesare:
broască
ace de seringă, pentru spinalizarea broaştei
ace cu gămălie, necesare montajului
planşetă, pentru fixarea broaştei
kimograf Marey
cheie Morse, pentru stabilirea circuitului electric
sârme subţiri (liţă), pentru legături electrice
sursă de curent alternativ, pentru stimulare
vată
aţă
capsulă de porţelan
ser fiziologic pentru broască (soluţie NaCl 6‰)
foarfecă
pense
cronograf.
Tehnică de lucru:
Se spinalizează broasca, prin introducerea unui ac de
seringă, vertical, prin articulaţia atlas - axis, la intersecţia liniei
ce uneşte porţiunea posterioară a petelor auditive (timpan) cu
96
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Figura 5.2.
Rezultate:
După câteva secunde de la oprirea excitaţiei, muşchiul
circular al stomacului începe să se contracte, astfel înscriind
pe cilindrul kimografului o curbă, cu o fază ascendentă, de
98
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Principiul metodei:
Preparatul obţinut chirurgical (fragment de intestin),
este montat într-o baie de organ izolat şi legat de o peniţă, ce
înscrie pe cilindrul unui kimograf variaţiile de lungime.
99
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
seringi
aţă
ace cu gămălie
kimograf Marey sau sisteme de înregistrare cu
transductori specializaţi
substanţe active (acetilcolină, atropină, adrenalină)
Tehnică de lucru:
Un fragment de intestin de 2-4 cm (ileon terminal de
cobai sau de iepure, duoden de şobolan), menţinut de la
recoltare într-o cutie Petri cu ser fiziologic, este legat de cele
100
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Rezultate:
Pe muşchiul neted intestinal, introdus în baia de organ
izolat, se observă:
101
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Figura 5.6.
efect contractil, determinat de acetilcolină; tot un
efect contractil poate fi dat şi de: histamină,
bradichinină, pilocarpină, ionii de potasiu etc. Aceste
substanţe intensifică şi activitatea spontană a ansei
intestinale (fig. 5.7).
Figura 5.7.
102
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
Figura 5.8.
Figura 5.9.
103
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
4.3. ÎNTREBĂRI
Figura 5.10.
105
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
BIBLIOGRAFIE
106
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
107
Lucrări practice Fiziologia aparatului digestiv
108