Laborator Nr.

3
A efectuat:
Masterandul an. I, TPCM
.........................................

TEMA: Determinarea AAT prin metoda ABTS*+

Cation radicalul de ABTS (ABTS*+, 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-
sulphonic acid) este produs prin reacția dintre ABTS (soluție de 7 mM) șe persulfatul de
potasiu (2,45 mM concentrație finală), timp de 12-16 ore la întuneric la temperatura camerei.
Soluția de ABTS*+ (2,2’-azino-bis-(3-etilbenztiazolin-6-sulfonic acid)) obținută este diluată
cu etanol de 70% pînă la A=0,700±0,020 măsurată la 734 nm. Introducerea a 30 µl de
antioxidant la 3 ml de ABTS*+ trebuie să producă o inhibiție de 20-80% față de soluția
inițială. Curba de calibrare se construiește după standartul Trolox (concentrațiile variază între
0-15 mM), absorbanța fiind măsurată la 734 nm la 1 și 6 min după amestecare.

Calcule

Capacitatea antioxidantă este definită drept valoarea diferenţei dintre absorbanţa la t

= 0 min şi t = 1 min împărţit la absorbanţa t= 0 min. Corecţia se face după blank (Soluție de
ABTS și apă dist.).
Activitatea antioxidantă totală (AAT) va fi determinată conform ecuației:
AAT= (At0 – At1min) - (At0b – At1minb)
At0 At0b
At0b=0,7; At1minb=.......
unde At0, At1min sunt absorbanțele soluției la 0 și la 1 min respectiv a probei testate, iar
At0b, At1minb sunt absorbanțele soluției probei martor la 0 și 1 min. Corecția se face după
soluția martor (în loc de antioxidant se adaugă 30 µl de apă distilată).
 Prin metoda TEAC (Capacitatea antioxidantă în echivalenţi Trolox ) se reflectă
abilitatea antioxidanţilor de a dona atomi de hidrogen pentru scindarea cation-radicalului
ABTS•+, care are maximile de absorbţie la 734, 645, şi 815 nm, comparativ cu Troloxul, un
analog hidrosolubil al vitaminei E. TEAC se defineşte ca concentraţia soluţiei de Trolox cu un
potenţial antioxidant echivalent a 1 mM de concentraţie a compusului supus investigării

Capacitatea antioxidantă în echivalenţi Trolox (TEAC) corespunde concentraţiei

(mmol/l sau mg/l) de Trolox, care are aceeaşi activitate cu concentraţie unitară de compus
testat.
Rezutate:
1.Determinarea activității antioxidante a extractului de antociani:
Amestecul reagent constă din:

a) 3ml soluţie ABTS* + 0,1 ml H2O, se determină absorbanţa soluţiei la 734nm la

fiecare 1 minută în decurs de 6 minute (proba martor).

b) 3ml soluţie ABTS* +0,1 ml antioxidant se determină absorbanţa soluţiei la 734nm la

fiecare 1 minut în decurs de 6 minute pentru fiecare extract de antioxidant.

Cu rezultatele obţinute se determină concentraţia antioxidantului în conformitate cu

concentraţia Troloxului.
 Pentru proba martor au fost determinate valorile At0b=0,7; At1b=0,626; absorbanța inițială
a probei testate este At0=0,7; absorbanțele probei cercetate la intervalele de timp 1, 3 și 6
minute se includ în tabelul 1 și în fig.1.
Tabelul 1. Determinarea absorbanței extractului de antociani cu cation-radicalul ABTS*+
în funcție de timp.
Timpul, min 0 1 3 6
Absorbanța, extr. 0,700
Nr1, nm
Absorbanța,extr. 0,700
Nr.2 nm
Absorbanța, extr. 0,700
Nr3, nm

0.8
0.7
0.6
Absorbanța

0.5
0.4
0.3 Series1

0.2
0.1
0
0 2 4 6 8
Timpul, min

Fig. 1. Curba variației absorbanței extractului de antociani cu ABTS*+ funcție de timp

2.Determinarea AAT a soluțiilor Trolox

 Să se determine absorbanța soluțiilor de trolox de diferite concentrații la diferite
intervale de timp, prin aceeași metodă, iar rezultatele au fost incluse în tabelul 2. Indiferent de
concentrație la 0 min avem absorbanța 0,700.

Tabelul 2. Absorbanța soluției de Trolox cu ABTS*+ la intervalele de timp respective

Timpul, min 1 3 6
Absorbanța, nm
C1trolox=0,50 mM
C1trolox=0,250 mM
C2trolox=0,125 mM
C3trolox=0,050 mM
C4trolox=0,010 mM

Utilizănd datele din tabel se construiește graficul variației absorbanței soluțiilor de Trolox de
diferite concentrații în funcție de timp.
0.75

0.7

0.65
Absorbanța

0.6 C1

0.55 C2
C3
0.5
C4
0.45

0.4
0 1 2 3 4 5 6 7
Timp, min

Fig. 2. Graficul variației absorbanței soluțiilor de Trolox de diferite concentrații în funcție de

timp (Metoda ABTS)

Ulilizînd formula de mai sus să se determine AAT a soluțiilor de Trolox de diferite

concentrații și să se construiască curba de calibrare :
AAT= (At0 – At1min) - (At0b – At1minb)
At0 At0b
 Fig. 3. Curba de calibrare pentru Trolox prin metoda ABTS•+

3. Știind AAT a extractelor analizate să se determine din curba de calibrare pentru Trolox
Capacitatea antioxidantă în echivalenţi Trolox (TEAC) pentru fiecare extract.

Concluzi: