26.02.

2015

Cromozomii umani
• reprezintă substratul morfologic al E şi V;
• nivelul supramolecular de organizare a materialului genetic
(ADN + proteine histone + proteine nonhistone + ARN)

• reprezintă structuri dinamice ca formă, aspect, grad de

compactizare, activitate genetică:
• crs mono – sau bicromatidian;
• cromatină sau cromozom;
• activ pentru transcripţie sau inactiv.

• crs se autoreproduc prin replicarea ADN ce îi constituie numai

în perioada S a interfazei.

• crs reprezintă grupuri de înlănţuire a genelor:

- fiecare crs conţine un număr anumit de gene;
- fiecare genă are o poziţie fixă pe cromozom – locus;
- genele unui cromozom formează grupuri lincage, ce de
regulă, se transmit în bloc, înlănţuit

• setul diploid de crs a unui individ formeză cariotipul:

23 perechi: 22 perechi autozomi +
1 pereche gonozomi (XX sau XY).
Cromozomii pereche = cromozomi omologi 3

1
 26.02.2015

Originea gonosomilor

lungimea relativă şi
repere de identificare a

absolută a crs
cariotipului

poziţia centromerului =
constricţia primară - c

prezenţa constricţiilor
secundare – h

prezenţa sateliţilor - s

Studiul cromozomilor se poate realiza în:

• Metafază prin colorare omogenă sau în benzi
• Prometafază prin colorare în benzi
• Interfază prin hibridare cu sonde moleculare
marcare fluorescent

2
 26.02.2015

• Cromozomii au o structură neomogenă:

- Secvenţe codificatoare şi necodificatoare;
- Segmente de eucromatină şi heterocromatină,
- secvenţe unice şi repetitive;
- Secvenţe bogate în GC şi AT;
- Secvenţe transcrise şi netranscrise;
- segmente bogate în proteine acide şi bazice.
!!! Acestea explică originea benzilor cromozomiale

• Anomaliile de număr sau de structură a crs se manifestă prin

anomalii multiple de dezvoltare – sindroame crs
plurimalformative
7

Structura cromozomului metafazic.

Repere cromozomiale

Forma cromozomului metafazic depinde de POZIŢIA

CENTROMERULUI
8

p x100
Ic  p  q

3
 26.02.2015

Cariotipul uman

10

CLASIFICAREA CROMOZOMILOR
După lungime: După formă: După tip:
-Mari -Metacentrici -Autozomi
-Medii -Submetacentrici -Gonozomi
-Mici -Acrocentrici

După prezenţa altor Grupe:

repere:
A 1-3 E 16-18
-Cu h pe braţul p
B 4,5 F 19,20
-Cu h pe braţul q
C X, 6-12 G 21, 22, Y
-Cu sateliţi
D 13-15
11

Cariotipul uman şi formula

cromozomială
46,XX
46,XY
47,XXY
45,X
47,XY,+21
45,XY,-21
46,XX,5p-

12

4
 26.02.2015

Cariotipul uman şi formula

cromozomială
46,XX,13ps++
46,XY,13ph-
46,XX,16ph+
46,XX,16qh++
46,XY,16p+
46,XY,16q-

13

Când putem presupune o anomalie crs de NR

sau de structură ?
• Anomalii de dezvoltare mutiple – sindrom
plurimalformativ
• Anomalii de sexualizare
• Anomalii de reproducere
– Nou născut mort plurimalformat
– Avorturi spontane repetate
– Sterilitate primară

ETAPELE CARIOTIPĂRII

1. Colectarea sîngelui pentru a obţine celule nucleate

(!!! leucocitele sîngelui periferic au nuclee în interfază)

5
 26.02.2015

2. Obţinerea culturii de celule în diferite perioade ale mitozei

37º Cel în

Cel C diferite
faze ale
sâgelui Peste 72 ore mitozei
+ mediu 72 ore
de
creştere

3.Pregătirea cromozomilor pentru microscopie

Citostatic -
colhicină
Sol hipotonică

Celule în
diferite
faze ale
mitozei
Stoparea Sedimentarea Dispersarea
metafazei celulelor cromozomilor

4. Colorarea şi microscopia preparatului cromozomic

Colorare

Lamă cu cel fixate Lamă cu plăci metafazice

6
 26.02.2015

5. Analiza cariotipului

Decuparea Realizarea
Fotografierea
cromozomilor cariogramei =
plăcii metafazice cariotipului

7
 26.02.2015

45,X

47,XX,+18

69,XXX

8
 26.02.2015

47,XXY

46,XX,5p-

47,XX,+13

9
 26.02.2015

47,XX,+21

Tehnici de citogenetică – de analiză a

cariotipului:
Pentru identificarea anomaliilor de număr – analiza
cromozomilor metafazici cu colorate omogenă.

Pentru identificarea anomaliilor de număr şi de structură –

analiza cromozomilor metafazici cu colorare diferenţiată Q, G,
R; analiza cromozomilor prometafazici cu colorare diferenţiată
Q, G, R.

Pentru identificarea polimorfismului cromozomial – analiza

cromozomilor metafazici cu colorare diferenţiată C, T.

29

Studiul cariotipului uman

Analiza crs Analiza crs Analiza crs

metafazici prometafazici interfazici

Colorare Colorare colorare în Testul Metode

uniformă în benzi benzi cromatinei molecular
G,Q,R,C,T G, R sexuale citogenetice
X şi Y FISH, mFISH
SKY
CGH

*** NR benzi pentru setul haploid: 300-400 m / 550 pm / 850p

10
 26.02.2015

Colorarea cromozomilor
Omogenă Diferenţiată, în benzi

G Q R C T

Benzile G+ = Q+ = R –
Benzile G- = Q- = R +

Nomenclatura benzilor

Cromozomul
braţe
regiuni
benzi
subbenzi

4p22.2
5q13.4
9p21.3

1p35

1p22

1q23

1q41

46,XY,del(1)(p11-p34)

11
 26.02.2015

46,XY,del(1)(p11-p34)

46,Y,del(X)(q12.1-q24.3)

Cariotip

Normal Normal cu Aneuploid Poliploid Cu aberaţii

polimorfisme cromosomiale

46,XX 46,XX,9qh+ 47,XX,+21 69,XXX 46,XX,1q-

46,XY 46,XY,16qh- 45,XY,-12 69,XXY 46,XY,16p+
46,XX,14s++ 48,XXXY 46,X,r(X)
45,X 46,XY,del(5p)
46,XX,t(12,22)

12
 26.02.2015

Utilizarea tehnicii
FISH în analiza
Cromosomul 4 Stabilirea crs. X şi 18 Stabilirea crs. X, Y şi 18

cromosomială
Stabilirea crs. 18 şi 21 Stabilirea crs. 18 şi 21
37

46,XX 47,XX,+21

47,XX,+21 47,XX,+21

13
 26.02.2015

SKY

Cariotip normal 46,XX Fenotip

46,XY normal

Polimorfisme Crs D şi G – variaţii ph sau s: Fenotip

Crs 1,9,16,9,Y – variaţii qh normal

Anomalii de număr Trisomii – 47,XXX; 47,XXY; 47,+21; Fenotip

47,+13; 47,+18; 47,+8 patologic
Monosomii – 45,X
Anomalii de structură inv Fenotip
echilibrate t normal
rob

Anomalii de structură del Fenotip

neechilibrate dup patologic
r
i

??? polimorfisme
• p şi q – conţin segmente cromozomiale
codificatoare şi necodificatoare
• p+ sau p- - anomalii
• q+ sau q- - anomalii
• c mai mare sau mai mic – polimorfism
• t mai mare sau mai mic – polimorfism
• h+ sau h- - polimorfism
• s+ sau s- - polimorfism

14
 26.02.2015

Testul cromatinei sexule

Testul cromatinei sexule X = testul Barr - vizualizarea crs X inactiv,
heterocomatinizat pe nucleele interfazice ale celulelor somatice

Testul cromatinei sexule Y = testul F – vizualizarea a 2/3 din braţul

qY pe nucleele interfazice ale celulelor somatice sau ale
spermatozoizilor

Cromozomul X ~2000 gene: Cromozomul Y ~ 300 gene:

•gene structurale somatice
•gene reglatoare feminizante;
•gene structurale feminizante;
•gene structurale masculinizante
• gene reglatoare masculinizante
• pseudogene
• !!! Braţul q conţine heterocromatină
constitutivă

!!! Important
• Cromozomul X – este indespensabil celulei somatice ♀ şi
♂:
• În cel 46,XX – este activ numai un X
• În cel 46,XY – este activ şi X şi Y
• În cel 47,XXX - este activ numai un X
• În cel 47, XXY- este activ numai un X şi un Y
• În cel 48, XXXY- este activ numai un X şi un Y
• Cromozomul Y – este obligator pentru ♂

15
 26.02.2015

De ce? Există o explicaţie?

Dimorfismul sexual - echilibrat
• Caractere sexuale primare - diferite
• Caractere sexuale secundare - diferite
• Caractere somatice - asemănătoare

45,X 47,XXY

Regiunile crs X şi Y
I – regiunea pseudoautosomală (PA) cu
gene comune şi pe crs X şi pe crs Y:
- Xpter
- Ypter
II – regiunea crs X cu gene specifice
numai X
III – regiunea crs Y cu gene
masculinizante
IV – regiunea crs Y (2/3Yq) cu secvenţe
necodificatoare – heterocromatină
constitutivă

16
 26.02.2015

Concluzii:
• La persoanele 46,XX:
– Sunt active genele celor 22 perechi autosomi;
– Sunt active genele unui crs X + genele regiunii PA
Xpter a celui de-a doilea crs X
• La persoanele 46,XY:
– Sunt active genele celor 22 perechi autosomi;
– Sunt active genele unui crs X + genele regiunii PA
crs Y (Ypter) + genele de ♂ ale crs Y (Yp şi 1/3Yq
pericentromeric)
• Rol: controlul dozelor genelor somatice la ♀ şi
♂ + controlul diferenţierii sexuale
!!! Dimorfism sexual echilibrat

Mecanisme moleculare implicate în

lyonizare (inactivarea crs X)
• X q13 - centru de inactivare a crs X (XIC) - gena XIST (450
Kb) :
• gena XIST - promotor cu trei regiuni:
– regiunea activatoare;
– regiunea de stabilizare a ARN – XIST la nivelul crs
inactiv;
– regiunea inhibitoare asupra regiunii activatoare.
• regiunea codificatoare - codifică ARN care rămâne
asociată cu crs inactivat genetic
• capătul 3' al genei - reglează numărarea cromozomilor şi
determină care X (♀sau♂) rămâne activ.

17
 26.02.2015

!!! Gena XIST este o genă atipică –

a pierdut potenţialul de codificare proteică
Funcţia genei XIST (X inactivation specific transcript)
• La nivel molecular – codifică sinteza ARNm-XIST;
• La nivel celular – inactivarea unui crs X
– ARNm – XIST rămâne ataşat la crs inactiv 
– Dezacetilarea H1 
– Heterocromatinizarea crs X
• La nivel de organism – controlul dozelor genelor X-
lincate materne şi paterne  controlul dezvoltării
organismului feminin

Amprentarea genomică
(sau imprinting-ul parental)
• Mecanism de reglare a activitaţii transcripţionale şi
expresiei fenotipice a unei gene din perechea de alele
• reprezintă represarea permanentă, dependentă de
originea parentală:
– a unei gene ♀ sau ♂
– a unui cromozom ♀ sau ♂
– a genomului ♀ sau ♂
• modificări epigenetice în cursul gametogenezei şi/sau
embriogenezei precoce
• Ex: genele X-lincate la ♀; diferite gene autosomale (s.
Angelman, s. Prader-Willy)

46,XX 46,XY

Crs Y
Crs X – activ Crs X – neactiv Crs X – activ Braţ p - activ
eucromatinizat heterocromatinizat eucromatinizat Braţ q - inactiv

Corpuscul Barr
Corpuscul F
 = 1μm
 = 0,25 μm

18
 26.02.2015

Testul Barr
Cromatina sexuală X:
- reprezintă cromozomul X inactiv, heterocromatină facultativă,
în celulele somatice 46,XX;
- se prezintă sub forma unui corpuscul Barr de 1m în nucleii
interfazici ai celulelor somatice;
- testul Barr este util în identificarea nr de crs X în celulele somatice:
NR crsX = nr corpusculilor Barr + 1 (un crs X activ).
46,XX – 1 corpuscul Barr
46,XY – 0
47,XXX – 2
47,XXY - 1
45,X – 0
48,XXXX – 3
!!! Explicaţia originii cromatinei X – ipoteza M. Lyon (1961)

Testul F
Cromatina sexuală Y:
- reprezintă braţul q al crs Y, heterocromatină constitutivă (2/3q), în cel.
somatice 46,XY sau în spermatozoizii 23,Y;
- se prezintă sub forma unui corpuscul F (fluorescent) de 0,25m în
nucleele interfazice;
- testul F este util în identificarea crs Y (determinarea prenatală a
sexului):
NR crsY = NR corpusculilor F
46,XX – 0
46,XY – 1
47,XYY – 2
47,XXY - 1
48,XXYY – 2
46,X,i(Yp) – 0
46,X,i(Yq) – 1 (0,5m)

19