● Neisseria meningitidis

Sunt coci ovalari, reniformi de dimensiuni de 0,6 - 1,0 Vm dispuşi în diplo Gram negativi. În
produsul patologic (LCR) sunt intra şi extracelulari.
Habitat
- Se gasesc numai la oameni (bolnav, sau sanatoşi).
- Sunt localizaţi pe tegumente, dar mai ales în concavitatea nazala şi bucala.
Caractere morfologice
- germenii în diplo sunt înconjuraţi de o microcapsula.
- în peretele lor predomină antigenul “O”, nu mureina, fiind Gram-negativi.
- sunt germeni imobili, nesporulati.
- unele tulpini prezintă pili în momentul izolarii, acestia pot să dispară dupa 1-2 subcultivari, nu
par să aiba prea mare importantă in virulenţa germenului.

Caractere de cultură
Pe medii solide
Cerinţele nutritive sunt deosebite pentru Neisseriile patogene, eIe necesitănd factor, de creştere
speciali, de aceea se foloseşte:
- mediul Müeller-Hinton, care contine casomina-acizi în locul peptonelor din carne;
- mediul Thayer - Martin, se pot obtine culturi şi pe geloză-sânge.
- geloză – sânge, geloza -ascită;
- geloza -şocolat.
Dupa 24 ore apar colonii “S" mici cu diametrul de cca. 1 mm, transparente, alb- cenuşiu, cu
margini neregulate, cu suprafaţa neteda şi lucioasa, nehemolitice.
La purtatorii sănătoşi se pot izola colonii “R”, colonii mai mari, opace, cu margini neregulat si
suprafaţa granulara.
În mediile lichide (bulion M-N) creşte sărac dupa 2-3 zile, tulbură uşor mediul sau lăsând un
mic depozit la fund.
Ca suport energetic utilizeaza glucoza din mediu în cantităţi, mici de 2‰ .

Actiunea agentilor fizici, chimici şi biologici

▪ Temperatura optimă pentru dezvoltare este de 35-37° C, meningococul se dezvoltă mai
abundent în atmosfera umedă, cu o concentratie de C02 de 5-10% mai ales la izolarea din
produsele patologice.
▪ În pasajele ulterioare, prezenta C02 nu mai are aceeaşi importanţă.
▪ Meningococul este sensibil la variatii de pH (pH optim este de 7,2 – 7,4) moare repede
(autolizează) la uscăciune, nerezistând în afara organismului în picaturile Pflügge mai mult de 30
min.
▪ Fiind foarte sensibil la variatii de temperatura transportul LCR-ului de la patul bolnavului în
laborator pentru cultivare trebuie facut mentinându-l la 37° C.

▪ În cultură rezistă 1-2 ore la 20-25°C, autolizându-se mai rapid decât la 370 C.
▪ Însămânţarea se face pe medii încălzite. Este sensibil la actiunea fenolului 1%, a alcoolului de
700 (10-15 min), la acţiunea razelor solare, UV.
▪ Sunt sensibili la acţiunea sulfonamidelor, antibioticelor, penicilina fiind antibioticul de elecţie
in tratamentul infectiilor meningococice.

1
Caractere biochimice şi de metabolism
▪ Este un germene strict aerob, posedă, ca toţi germenii din acest gen, o catalază, o citocrom-
oxidază (se pune în evidentă astfel: se pune o colonie pe o hârtie de filtru care contine un
indicator: tetrametil-p-fenilendiaminâ, dacă germenii sunt oxidazo-pozitivi, atunci culoarea
indicatorului va vira în purpuriu în 10 sec., un viraj mai tardiv nu este caracteristic).
▪ De asemeni mai are şi enzime zaharolitice, utilizând pe cale oxidativă glucoza şi maltoza şi
nefermentand lactoza, fructoza şi zaharoza.

Caractere de patogenitate
Meningococii sunt germeni patogeni, dar cu virulenţă scăzută, 60-70% din infectiile
meningococice sunt inaparente. Cea mai frecventă localizare este cea nazală, foarte rar infecţia
poate ajunge pe cale sanguină la meninge, unde va produce meningita (1 caz la 1000).
EI poate da: rinite meningococice (cel mai frecvent), sinuzite, faringite, meningita cerebro
spinală meningococică (MCSM).
Patogenitatea se datorează in special proprietătilor sale antifagocitare date de către polizaharidul
capsular şi de lipopolizaharidul care se află în peretele bacterian.

Meningita fulminantă (sindromul Waterhouse-Friederichsen)

▪ Este o formă supraacută a infecţiei sanguine cu meningococ.
▪ A fost considerat iniţial ca o formă fulgerătoare de septicemie meningococică prin prăbuşirea
funcţiilor suprarenale datorită leziunilor hemoragice care se produc în această glandă.
▪ În această formă fulminantă, este caracteristic examenul LCR, este aproape clar, conţine un
număr mic le PMN şi un numar mare de germeni.
▪ Decesul pacientului poate surveni în 24-36 ore, dacă nu se face tratamentul corespunzător.

Diagnosticul de laborator
Este bacteriologic
▪ Produsele patologice sunt: sănge, LCR, lichid peteşial (la bolnav), exudate seroase, fragmente
de organe (de la cadavru), sau exudat faringian (la purtător).
▪ Recoltarea se face in condiţii de sterilitate.
▪ Examenul direct al produselor patologice este foarte important - LCR, aspect macroscopic este
tulbure, purulent.
▪ Proba se însămânţează pe mediile amintite, fără să conţină agenti selectivi.
▪ Se vor face frotiuri şi apoi coloratii Gram, albastru de metilen, May-Grünwald-Giemsa;
▪ În cazul uneimeningite meningococice pe frotiu se vor vedea multe PMN diplococi Gram
negativi, reniformi, intra şi extra celulari, imobili înconjurati de o capsulă comună.
▪ Amprente de organe de cadavru pot da unele indicaţii.
▪ Pentru alte produse, exudatul farirgian nu este concludent, datorită bogatei flore polimorfe unde
sunt multe Neisserii saprofite.

Însămânţarea pe medii de cultură

▪ Se folosesc mediile Müeller-Hinton, Thayer-Martin, cu supliment HYL (sânge lacat de cal 10
părţi, autolizat de drojdie de bere 1 parte, autolizat de ficat de porc 2 părţi).
▪ Însământarea din produsele patologice de la purtători sau din produsele suprainfectate, la
mediile de mai sus se adaugă supliment selectiv LCN (lincomicină, colimicină, nistatin).
▪ Se fac însământările în conditiile descrise, după 24-48 ore se fac citirile.

2
Identificarea
- Se selectează coloniile smooth, mici cu diametrul de cca. 1 mm, transparente, uşor gri.
- Se examinează biochimic pentru producerea citocromoxidazei (pe hârtie impregnată cu
tetrametil-p-fenilendiamină).
- Se fac frotiuri colorate Gram pentru prezenţa diplococilor Gram-negativi, în boabe de cafea"
faţa în faţă.
- Dacă îndeplinesc cele trei criterii înseamnă că aparţin genului Neisseria.
- Identificarea serologică de grup din culturile pure, se fac aglutinări cu seruri polivalenie şi apoi
cu monovalente, obţinându-se grupul de meningococ.
La noi cele mai frecvente sunt: A. B, C. Y şi W-135.

Metode de identificare rapidă

▪ Coaglutinarea şi latexaglutinarea (anticorpii antimeningococici sunt fixaţi pe proteina A
stafilococică respectiv pe particule de latex) se face direct din LCR.
▪ Contraimunelecroforeza efectuată în gel de agar 1% cu tampon vernal cu pH 7.8. godeurile
dinspre anod sunt umplute cu LCR iar cele dinspre catod sunt umplute cu serurile
antimeningococice, cele mai frecvente serogrupuri în zona respectivă după migrare 60-90 min, la
o intensitate de 3 mA pot fi urmărite aparitia benzilor de preciptare între godeurile cu lichid şi
seruri antispecifice.
▪ Metodele biologice moleculare.
Testarea sensibilitătii la antibiotice (antibiogramă) se face prin metoda disc-difuzimetrică pe
mediul Müeller-Hinton în atm. de CO2 la 37°C şi se citesc conform standardului indicat de
producătorul de microcomprimate.

Confirmare
Coloniile care au aparţinut genului Neisseria se vor repica pentru obţinerea culturilor pure şi apoi
se va face testare pentru fermentarea zaharurilor:
- fie se însământează pe medii: geloză cu zahar 1%, ser de cal 10%, indicator de albastru de
bromtimol, se incubează în atm. de C02 şi se examinează după 24 ore.
- fie se însămânţează pe galerii Api etc.
Fermentarea glucozei şi maltozei şi nefermentarea levulozei, lactozei şl zaharozei, confirmă
germenul in specia Neisseria meningitidis.

● Neisseria gonorrhoeae
Neisseria-gonorrhoeae sau gonococul produce infectia gonococică. Această bacterie a fost
descrisă de către Albert Neisser în 1879 în uretrite acute la bărbati şi în conjunctivita nou-
născutilor. Punerea în evidenţă a culturii de gonococ a fost în 1882 de către Leistikov şi Löeffler.
Habitat
N. gonorrhoeoe este un parazit strict pentru specia umana.
▪ Se grefează pe celulele mucoase indemne, în special pe mucoasa genitală şi accidental pe alte
mucoase: rectala, faringiana, conjunctivală.
▪ Conjunctivita care poate ajunge până la oftalmia gonococică la nou-născut este o infectie
exogenă Produsă în timpul naşterii atunci când mama are vaginită gonococică.
▪ La bărbat principala formă de boaă este uretrita gonococică, la femei vaginita şi metrita.

Caractere morfo-tinctoriale

3
▪ Sunt coci ovalari de 0,6-1,0 µm, în diplo, cu părtile concave adiacente, asemănători boabelor de
cafea.
▪ Sunt Gram negativi, imobili, nesporulaţi, înconjurati de o capsulă comună. La suprafafaţa
celulei au pili cu rol determinant în ataşarea bacteriei de celula gazdei, deci se găsesc la speciile
virulente, lipsind la cele nevirulente sau la cele din colectiile vechi.

Caractere de cultură
▪ Gonococul nu se dezvoltă pe medii simple, este germenul cel mai greu de cultivat dintre toate
Neisseriile.
▪ Se folosesc medile descrise la N. meningitidis, pentru produsele patologice se preferă mediile
cu suplimene selective (colimicină şi lincomicină câte 300 µg la 100 ml mediu final) sau
vancomicină, colistin, trimetoprim, nistatin.
▪ Este necesară o atmosferă de 5-l0% CO2, la 35-37°C.
▪ Citirile se fac după 24-48 ore. Gonococul produce colonii smooth de 0,5-1 mm, sau colonii de
tip M (mucoase), nepigmentate, transparente sau opace, nehemolitice.

Acţiunea agentilor fizici, chimici şi biologici

▪ N. gonorrhoeae este foarte sensibil în afara organismului.
▪ Este sensibil la uscăciune, moare în 1-2 ore, nefiind viabil decât in secretiile purulente umede.
▪ Este distrus de fenol 1% în 1-2 min, alcool medicinal 700 în 5-7 min.
▪ Este sensibil la variaţiile de temperatură şi de pH (optim pH de 7,2-7,8).

Caractere biochirnice
Gonococul metabolizează glucoza, dar nu maltoza. Produc citocrom-oxidaza, testul catalazei este
pozitiv.

Sensibilitatea la antibiotice
În general este sensibil la pencilină în cca. 90%, dar pot fi şi tulpini producătoare de β-lactamază,
de aceea se recomanda antibiogramă.
Caractere antigenice
▪ Are antigene somatice "O" (care se pune în circulaţie după moartea bacteriei) şi capsulare "K".

Patogenitate
▪ Bolile produse la om sunt: uretrite gonococice sau blenoragia la ambele sexe, prostatite,
epididimite la bărbaţi, cervicite, anexite, metrite la femei, conjunctivite, endocardite, artrite.
▪ Toate cazurile de îmbolnăviri debutează cu o formă acută cu simptome evidente (apare o
secretie abundentă galben-verzuie la nivel genital).
▪ Dacă tratamentul nu este corect, boala trece în forma cronică, greu de depistat şi tratat şi
adenopatie satelită.

Imunitate
▪ Imunitatea umorală este slabă, de aceea apar reinfecţii cu N. gonorrhoeae.
▪ Nu există un vaccin antigonococic cu proprietăţi profilactice.

Diagnosticul de laborator
Este bacteriologic

4
▪ Produsele patologice sunt secretiile exudative ale mucoaselor inflamate.
Aceste au aspect purulent, opace, cremoase cu o tentă gălbuie şi se desprind uşor de pe mucoasă.

Recoltarea
▪ Se face cu ansă sau cu tampoane sterile.
▪ La bărbaţi trebuie să se pătrundă cu ansa sau cu tampoane cu diametrul de 2-3 mm, pe o
distanţă de 1-2 cm de la meat.
▪ La femei recoltarea, se face din colul uterin, sau din sacul vaginal posterior, se va face cu valve
sau speculum, sterile.
▪ Din alte exudate recolta se face cu tampoane sterile.

Examenul direct din probele recoltate

▪ Se vor face frotiuri care se vor colora Gram şi albastru de metilen, apoi se vor examina cu
imersie.
▪ Frotiurile din uretrite acute conţin PMN şi coci în diplo in "boabe de cafea" intra şi
extracelulari, Gram negativi.
▪ În formele cronice prezenta în cantitate mare a florei polimorfe şi fibrină, pot masca germenii
care au provocat infectia. De aceea se va face însămăntarea pe medii de cultură.

Cultivare
▪ Se vor însămânţa pe mediile amintite cu sau fără agenţi selectivi.
▪ Incubarea se va face în conditii de CO2 5-10% 1a 370C şi în atmosferă umedă.
▪ Examinarea culturilor după 24 - 48 ore.

Identificarea
▪ Colonii mici cu diam. de 1-2 mm, transparente, uşor gri, lucioase cu margini netede, reacţia
oxidazei pozitivă m 5-10 secunde.
▪ Pe frotiuri, diplococi Gram negativ în'boabe de cafea", capsulaţi, intra şi extracelular,
▪ Testul oxidazei pe hârtie sau slide-uri impregnate cu tetrametil-p-fenilendiamină,
▪ Testul catalazei pozitiv.
▪ Galerii Api NH unde identificarea poate fi realizată în cca. 4 ore.
Confirmare
Se testează fermentarea zaharurilor N. gonorrhoeae fermentează numai glucoza