CROMATOGRAFIA

Principiu:
-metoda de

 identificare
 purificare
 si dozare

a unor compusi folosind 2 faze:

 stationara (solid/lichid)
 si una mobila (gaz/lichid)

tehnica bazandu-se pe diferentele dintre

 masa moleculara
 incarcarea electrica
 conformatia
 solubilitatea
 sau afinitatea

compusilor de analizat.

AVANTAJE:

1. Putere mare de rezolutie

-separa substantele intre ele, obtinandu-se substante cromatografice pure

2. Sensibilitate mare
-capabila sa detecteze cantitati mici de substanta
COMPONENTE:

1. Faza mobila
 este gaz/lichid care transporta substanta de analizat prin faza stationara

2. Faza stationara
 este structura prin care trec substantele de analizat, separandu-le.

CLASIFICARE IN FUNCTIE DE FAZA MOBILA:

1. Gaz cromatografia
 se aplica compusilor volatili
 se foloseste in criminalistica
 (sange, droguri, explozivi,etc.)

2. Lichid cromatografia

3. Cromatografia lichidelor supercritice

 faza mobila este un lichid adus la temperatura critica si nu se poate spune daca
este un lichid sau gaz

CLASIFICAREA LICHID CROMATOGRAFIEI IN FUNCTIE DE SUPORTUL FAZEI

STATIONARE:

1. Pe coloana
 faza stationara se gaseste intr-o coloana de sticla
2. Pe hartie
 faza stationara se gaseste intr-un filtru subtire aflat pe un suport inert
3. Pe strat subtire
  faza stationara este un strat subtire absorbant aflat pe placi de sticla, plastic,
aluminiu

A. CROMATOGRAFIA PE COLOANA
 Faza stationara se gaseste intr-o coloana de sticla!!

CLASIFICARE IN FUNCTIE DE TIPUL FAZEI STATIONARE:

1. Faza stationara este un gel

 cromatografie de excludere moleculara

2. Faza stationara este un material organic absorbant

 cromatografie de absorbtie

3. Faza stationara este o rasina schimbatoare de ioni

 cromatografie de schimb ionic

1. Cromatografie de excludere moleculara (gel-filtrare)

PRINCIPIU:

 metoda de identificare, purificare si dozare a unor compusi folosind 2 faze:

 stationara (solid,gel)
 si una mobila (lichid)

tehnica bazandu-se pe diferentele dintre dimensiunile substantelor, gelul din coloana

avand rol de „sita moleculara”.
ELUTIE= procedeu chimic prin care o substanta este eliberata de pe absorbantul ei.

ELUANT= solutia cu care se face spalarea

ELUAT= solutia rezultata dupa elutie.

!!! la prima elutie, eluatul contine substante de dimensiuni mari,

intrucat substantele de dimensiuni mici sunt absorbite in gel, fiind

nevoie de mai multe elutii pentru a fieliberate din gel.

2. CROMATOGRAFIE DE SCHIMB IONIC

PRINCIPIU:

-metoda de identificare, purificare si dozare a unor compusi folosind 2 faze:

 stationara (solid)

 si una mobila (lichid)

tehnica bazandu-se pe stabilirea de legaturi ionice intre sarcinile electrice ale

substantelor de analizat si sarcinile de semn opus din rasina schimbatoare de ioni.

-pentru a desface aceste legaturi, se foloseste un ELUANT cu afinitate mai mare pentru

sarcinile din rasina.

-se foloseste pentru

 purificarea proteinelor

 si analiza apei.

3. HPLC (Cromatografie de inalta performanta in faza lichida)

-Faza mobila trebuie pompata cu presiune mare printr-o coloana de metal care contine

o rasina insolubila foarte densa.

AVANTAJE:

- rezolutie mare

- reproductibilitatea mare

- refolosire coloana

- viteza analizei mare

- analiza de concentratii foarte mici de substanta necunoscuta

DEZAVANTAJE:

- procedura laborioasa

- scump.
B. CROMATOGRAFIA PE STRAT SUBTIRE
PRINCIPIU:

metoda de identificare, purificare si dozare a unor compusi folosind 2 faze:

 stationara (solid)

 si una mobila (lichid)

tehnica bazandu-se pe principii de absorbtie,schimburi de ioni si separare moleculara.

AVANTAJE:

- viteza analizei mare

- analiza de concentratii foarte mici de substanta necunoscuta

Faza stationara este o placa cromatografica pe strat subtire cu utilizare directa

(sticla, gel)!!!!

Etape:

1. Pregatire tanc cromatografic

 Intr-o cuva de sticla, se pune un strat de 0,5-1 centimetri de solvent (faza mobila).
 Pe pereti se aplica o hartie imbibata cu solvent, iar apoi cuva se inchide etans cu
uncapac de sticla.
 se lasa 30 minute pentru ca solventul sa satureze atmosfera.
2. Aplicare proba

 Pe marginea laterala a placii, la 2 centimetri de marginea inferioara, se fac

2depresiuni cu un creion.
 Folosind un tub capilar, se aplica probele la distanta egala pe linia rezultata din
unirea celor 2 depresiuni.

!!! o proba va fi martorul, care contine substante cunoscute!!!!

3. Developare

 Dupa aproximativ o ora de la introducerea placii in tanc, aceasta se scoate si

semarcheaza frontul solventului (nivelul cel mai inalt la care a ajuns solventul pe
placa).
 Placa se lasa la uscat la aer.

4. Vizualizare

 Se folosesc agenti de vizualizare (reactivi de culoare).

 Pentru compusi incolori se foloseste o lampa UV.

5. Interpretare rezultate

Se observa 2 tipuri de substanta:

- impure (mai multe pete pe traseul cromatografic)

- pure (o pata pe traseul cromatografic)

Retention factor (Rf)= raportul dintre distanta parcursa de substanta

si distanta parcursa de solvent.

!!fiecare substanta are Rf ei!!! (se gaseste in tabele).