Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
9 Enterobacteriaceae
9 Enterobacteriaceae
2018
Familia Enterobacteriaceae
Genuri:
• Escherichia – specia Escherichia coli
• Salmonella
• Shigella
• Enterobacter
• Klebsiella
• Proteus
• Serratia
• Yersinia
1 / LP 7 → M
* aspecte particulare:
• Klebsiella species:
- coloniile sunt foarte mari si au tendinta de confluare ca picaturile de miere
- aceasta cultura este foarte aderenta, elastica si prezinta cameleonaj pe medii cu anumite
compozitii (= isi schimba culorile)
• Proteus species:
- bacterie foarte mobila
- poate prezenta pe mediile solide turnate in placi Petri, fenomenul de migrare = consta in
extinderea culturii sub forma unor valuri concentrice pe toata suprafata mediului de cultura (geloza-sange)
- fenomen particular = fenomenul Dienes: daca pe aceeasi placa cu geloza-sange se insamanteaza
2 sau mai multe tulpini de Proteus, acestea vor migra sub forma unor valuri concentrice, dar fara a se
suprapune → vor pastra intre ele o linie de demarcatie = linia Dienes
- pe mediul selectivo-diferential pentru bacili Gram negativi:
• exista 3 feluri de medii, cu grade diferite de selectivitate: slab selectiv, moderat selectiv si inalt selectiv
• in absenta mediilor cromogene, se recomanda utilizarea de rutina a 2 medii selectivo-diferentiale: unul
slab selectiv si unul moderat selectiv → de ex.:
→ mediul MacConkey:
* turnat in placa Petri
* culoare roz
* agentul selectiv = cristal violet
* agentul diferential = lactoza
→ mediul Istrati-Meitert:
* turnat in placa Petri
* culoare verde
* agentul selectiv = saruri biliare
* agentul diferential = lactoza
→ mediul AABTL = agar albastru de brom timol lactoza:
* turnat in placa
* culoare verde
* agentul selectiv = albastru de brom timol
* agentul diferential = lactoza
→ mediul ADCL = agar dezoxi colat lactoza:
* turnat in placa
* culoare roz
* dezoxi colat → sare biliara
→ mediul EMB = Levine = eozin metilen blue
→ mediul CLED
• mediile inalt selective se utilizeaza rar, cand este necesara depistarea unui purtator de un anumit
germen patogen sau se cauta tintit in produs un anumit germen → de ex. se utilizeaza un mediu inalt selectiv
pentru Salmonella tiphy, in cazul unei epidemii de febra tifoida sau pentru monitorizarea si sterilizarea
purtatorilor de bacili tific dupa boala
• caractere fermentative: lactoza reprezinta zaharul care permite diferentierea bacililor Gram negativi in
2 categorii:
→ lactoza pozitivi: fermenteaza lactoza, determinand schimbarea culorii coloniilor si a mediului din jur
– ex.: Escherichia coli (80% din tulpini), Klebsiella, Enterobacter (90% din tulpini)
→ lactoza-negativi: nu fermenteaza lactoza, coloniile sunt incolore si imprumuta culoarea mediului –
ex.: Proteus, Salmonella, Shigella
* pe medii roz: coloniile lactoza pozitive sunt rosii, iar coloniile lactoza negative sunt roz
* pe medii verzi: coloniile lactoza pozitive sunt galbene si ingalbenesc mediul din jur, iar coloniile
lactoza negative sunt verzi
6. Identificarea
- se poate duce pana la nivel de gen, pe baza testelor biochimice manuale
- specia se poate stabili de obicei numai prin metode moderne: sisteme automate de bacteriologie sau galerii
API (pentru bacili enterici)
* observatie: in unele situatii se poate utiliza, pe langa identificarea biochimica, si identificarea serologica,
pentru stabilirea unui sero-grup sau sero-tip → identificarea serologica se bazeaza de obicei pe reactii de
precipitare sau aglutinare
2 / LP 7 → M
- testele biochimice manuale:
a) testul TSI = triple sugar iron:
- mediu multi-test = putem sa vedem mai multe proprietati ale bacteriei pe acest test
- este o eprubeta cu un mediu turnat inclinat
- culoare rozalie
- tehnica:
• se inteapa mediul pana in profunzime, in zona dreapta
• se disperseaza cultura de jos in sus prin miscari de zig-zag pe suprafata inclinata
• se acopera cu dop steril de vata
• se incubeaza 24h la 37°C
➔ interpretare:
- daca se ingalbeneste mediul in zona dreapta (la fundul tubului) → bacteria fermenteaza glucoza (toti
germenii din familia Enterobacteriaceae fermenteaza glucoza, fiind numiti bacili Gram negativi fermentativi)
- daca din fermentarea glucozei apar bule de gaz sau mediul este dislocat si urcat in tub → bacteria
produce gaz din glucoza
- daca mediul se ingalbeneste pe zona inclinata → bacteria fermenteaza lactoza (sau zaharoza)
- daca bacteria produce H2S (hidrogen sulfurat), apar zone negre in mediu – ex. de H2S pozitiv: Proteus
si Salmonella
b) mediul MIU = mobilitate indol uree:
- mediu multi-test
- mediu turnat drept in eprubeta
- este solid
- culoare maronie deschisa
- tehnica:
• se insamanteaza prin intepare pana in profunzime cu ansa ac incarcata cu cultura de testat
• se introduce in tub o banda de indol cu capatul galben impregnat cu reactiv in jos, fara a atinge mediul
• se fixeaza banda cu un dop de vata steril
• se incubeaza 24h la 37°C
➔ interpretare:
- daca bacteria este imobila, va creste numai de-a lungul liniei de insamantare
- daca bacteria este mobila, mediul se tulbura sau bacteria se extinde
- daca bacteria produce indol, zona galbena a benzii se inroseste
- daca bacteria produce ureaza, tot mediul se inroseste
* ex:
• bacterii mobile: Proteus
• bacterii imobile: Klebsiella, Shigella
• bacterii ureaza-pozitive: Proteus, Klebsiella
• bacterie indol pozitiva: Escherichia coli (singura)
c) mediul Simmons cu citrat de sodiu:
- mediu solid
- turnat inclinat
- culoare vernil
- se insamanteaza prin intepare, de jos in sus si se incubeaza 24h la 37°C
➔ reactia pozitiva = mediul devine albastru
• ex. de bacterie citrat pozitiva: Klebsiella
• ex. bacterie citrat negativa: E. coli
- proprietate: bacteria poate folosi citratul de sodiu ca sursa de carbon
d) mediul cu malonat de sodiu:
- mediu lichid
- turnat in eprubeta
- culoare vernil
➔ reactia pozitiva = devine albastru
- proprietate: poate folosi malonatul de sodiu ca sursa de carbon
e) reactia rosu-metil:
- se utilizeaza o eprubeta cu un mediu lichid galbui = mediul Clark-Lubs
- tehnica:
• se insamanteaza
• se incubeaza 24h la 37°C
• se adauga a 2-a zi o picatura de reactiv rosu-metil
3 / LP 7 → M
➔ reactia pozitiva = apare un inel rosu persistent
➔ reactia negativa = se consuma in mediu, dispare
f) reactia Voges-Proskauer:
- se foloseste un alt tub cu mediul Clark-Lubs
- tehnica:
• se insamanteaza
• se incubeaza
• se adauga a 2-a zi in tub o picatura de solutie cupro-amoniacala (solutie bleu)
• se incubeaza inca 30 minute
➔ reactia pozitiva = aparitia unui inel rosu persistent la suprafata lichidului → inseamna de fapt ca
bacteria produce acetoina
g) reactia lysin-decarboxilazei:
- se folosesc 2 eprubete, amandoua cu un lichid violet (arata la fel, dar nu sunt la fel):
• primul = test → contine substratul enzimei = lisina
• al doilea = martor → nu are lisina
- ambele se insamanteaza si se incubeaza, a 2-a zi:
➔ reactia pozitiva = testul este violet, iar martorul este galben
➔ reactia negativa = ambele tuburi sunt galbene
h) testul fenil-alanin-dezaminaza:
- se foloseste un mediu solid, incolor, transparent, turnat inclinat
- se insamanteaza de jos in sus, se incubeaza
➔ reactia pozitiva = inverzirea mediului
7. Antibiograma
- este obligatorie, mai ales in cazul tulpinilor izolate in spital
- tulpinile ESBL = extended spectrum beta-lactamases: produc beta-lactamaze cu spectru extins care
anihileaza aceasta clasa de antibiotice
II. Diagnosticul serologic
- consta in detectia anticorpilor in serul pacientului
- se practica in cazul febrei tifoide → se pun in evidenta antigenele specifice Salmonella tiphy
4 / LP 7 → M