DIAGNOSTICUL

VIRUSOLOGIC
 Diagnosticul virusologic consta in:
1. Recoltarea si prelucrarea produselor
patologice ;
2. Examinarea directa a virionilor la
microscopul electronic ;
3. Izolarea virala ;
4. Identificarea antigenelor virale specifice ;
5. Identificarea secventelor genomice
specifice ;
6. Confirmarea serologica .
 1.Recoltarea si prelucrarea
produselor patologice
Produsele patologice variaza in functie de patogenia
infectiei virale:
in cazul afectiunilor cailor respiratorii superioare:secretii
nazale,tampon faringian,spalatura nazo-faringiana
(v.gripale,paragripale,adenovirusuri,enterovirusuri);
afectiuni ale cailor respiratorii inferioare:sputa,aspirat
bronsic ;
afectiuni eruptive:lichid vezicular,tampon
faringian,fecale,sange
(v.variolic,herpetic,enterovirusuri,rujeolic,rubeolic);
afectiuni ale sistemului nervos central:LCR,sange
,fecale,tampon faringian,saliva
(enterovirusuri,v.herpetic,v. rabic) ;
hepatite :sange,materii fecale.
Transportul produselor la laborator se face
la temperatura joasa,in recipiente cu
gheata sau cu zapada carbonica.
In laborator,produsele se amesteca cu
mediile de conservare ce contin ioni
minerali,vitamine,aminoacizi,indicatori de
ph.
In final,produsele se centrifugheaza timp de
30 de minute la 5000 rot./min.,pastrandu-
se supernatantul=“produs prelucrat”
2.Examinarea directa a virionilor
cu ajutorul microscopului optic nu se pot
vizualiza decat virionii din familia
Poxviridae ;

imunoelectronomicroscopia aduce insa

informatii importante-se folosesc anticorpi
marcati cu substante electronoopace care
recunosc specific celulele infectate ;
 3.Izolarea virala
Izolarea se face pe sisteme celulare vii(culturi
celulare,ou embrionat de gaina,animale de
laborator),urmarindu-se efectele virus-specifice

1.CULTURILE CELULARE-reprezinta substrate de

celule eucariote intretinute in vitro in conditii
adecvate de nutritie,temperatura,ph.
 Culturile celulare
-in functie de tesutul sursa,culturile celulare se
impart in:

culturi primare provenite din tesuturi de animale

adulte normale ;
culturi diploide ,tesutul de origine fiind embrionul
sau fatul uman ;
linii celulare continue sau tumorale,tesutul de
origine fiind o tumora.
 Efectele virus –specifice sunt :
efectul citopatic-reprezentat de
modificarile morfologice celulare
consecutive multiplicarii virusurilor
citopatogene ;
efectul hemaglutinant-particulele de virus
eliberate in mediul culturii celulare ,se
absorb pe suprafata eritrocitelor
,determinand aglutinarea lor ;
efectul hemadsorbant-consta in atasarea
hematiilor pe suprafata virusurilor care nu-
si manifesta efectul citopatogen ;
efectul transformant-apar fenomene de
cancerizare in vitro ;
incluziile virale-evidentiate prin coloratii
speciale sau prin metode
moderne(imunofluorescenta) .
 Inocularea
2.Oua embrionate-inocularea se face
intraamniotic si intraalantoidian .

3.Animale de laborator-inocularea se face

subcutanat(soarecii nou-
nascuti),intracerebral(soarecii
adulti),intranazal(dihori sau
soareci),intraperitoneal .
4.Identificarea antigenelor specifice
Reactia de imunofluorescenta-se bazeaza pe
proprietatea fluorocromilor de a se lega de
imunoglobuline,fara a le modifica proprietatile
imunologice,iar legarea lor de un antigen
corespunzator confera complexului Ag-Ac
fluorescenta ;
Reactia de inhibare a hemaglutinarii-in prezenta
serului imun specific de tip,efectul hemaglutinant
al virusului nu se mai produce ;
ELISA-se bazeaza pe reactia imuna Ag-Ac
in care elementul cunoscut(Ac specifici)
este fixat pe un suport solid de polistiren
iar unul dintre elementele reactiei numit
conjugat este cuplat cu o enzima
(peroxidaza) ;
Radioimunanaliza-consta intr-o reactie de
competitie intre doua antigene pentru
acelasi anticorp .
 5.Identificarea secventelor
genomice specifice
Tehnica Southern-blot compara
fragmentele ADN rezultate dint-o secventa
lunga,clivata cu enzime de restrictie
(endonucleaze care scindeaza dublul
helix) ;
Tehnica Spot hybridization poate
determina si prezenta unei secvente
genomice virale specifice in situ,in probe
recoltate direct din organismul infectat ;
PCR sau tehnica de amplificare genica-a
revolutionat detectia patogenilor
bacterieni,virali,fungici ; in reactii in
lant,catalizate de polimeraza ADN,se
amplifica exponential o secventa “tinta” din
acidul nucleic care urmeaza a fi detectat .
 6.CONFIRMAREA SEROLOGICA
In cadrul diagnosticului serologic se pun in
evidenta Ac din serul de testat in prezenta Ag
viral standard ;
Reactiile Ag-Ac utilizate sunt :
a) reactia de seroneutralizare-consta in incubarea
amestecurilor dintre dilutii binare din serul de
testat si antigenul viral standard si apoi
inocularea la gazda sensibila ; reactia pozitiva
consta in absenta efectului virus specifica
asupra gazdei ;
 b) reactia de fixare a complementului -
indica prezenta sau absenta Ac fixatori de
complement (calitativa) sau stabileste titrul
Ac in serul de cercetat si cresterea lor in
dinamica (cantitativa);

c)reactia de hemaglutinare pasiva-prezenta

Ac (specifici Ag) in serul de cercetat este
urmata de formarea unor retele,cu
prinderea hematiilor si aparitia aspectului
de hemaglutinare.