Curs 11

Reglarea activitii
enzimatice
 Enzimele = responsabile de cataliza
majoritii reaciilor biochimice. Enzimele
catalizeaz paii individuali sau multipli ai
cailor metabolice (glicoliza, glucogeneza sau
sinteza acizilor grai).
Ca o consecin a acestor secvene de
reacii, orice enzim este dependent de
reaciile precedente pentru substratul sau.
 La om:
concentraia substratului este dependent de
ingerarea de alimente. Rspunsul n
concentraia de enzim este modulat funcie de
nevoi.
Sunt cunoscute 3 mecanisme principale care
regleaz concentraia enzimelor active din
esuturi:
1. Reglarea expresiei genelor i a vitezei de
sintez a enzimelor;
2. Activitatea enzimelor proteolitice care determin
degradarea enzimelor.
3. Modificrile covalente din proenzimele inactive
care conduc la activarea enzimelor.
 Sinteza enzimelor i degradarea proteolitic =
mecanisme lente pentru reglarea concentraiei enzimelor
(ore, zile sau chiar sptmni).
Activarea proenzimelor = metod mult mai rapid de
cretere a activitii enzimatice, dar mecanismul de
reglare are un dezavantaj: nu este un proces reversibil.
Proenzimele = sintetizate din abundent, depozitate n
granule i activate covalent dup eliberarea din locurile
de depozitare.
Exemple de proenzime importante: pepsinogen,
tripsinogen i chimotripsinogen, care conduc la o
cretere a enzimelor proteolitice digestive. De
asemenea, multe proteine implicate n reaciile chimice
sunt sintetizate ca proenzime. Alte proteine importante,
ca hormonii i colagenul, sunt derivate prin modificri
covalente ale precursorilor.
 Alt mecanism de reglare a activitii enzimatice
este mprirea enzimelor n compartimente
unde accesul substratului este limitat. De
exemplu, proteoliza proteinelor celulare i
glicolipidice de ctre enzimele responsabile de
degradarea lor este controlat prin mprirea
acestor enzime n cadrul lizozomilor.
In contrast cu mecanismele de reglare, care
modific concentraia enzimei, exist un grup
important de mecanisme regulatorii care nu
afecteaz concentraia enzimei i care au o
aciune rapid i reversibil.
 Aceste mecanisme includ:
- reglarea alosteric;
- reglarea prin modificarea covalent reversibil;
- reglarea prin controlul proteinelor.
Modificarea covalent reversibil este mecanismul
major pentru reglarea rapid i tranzitorie a
activitii enzimatice. Cel mai bun exemplu este
reglarea metabolismului glicogenului n care
fosforilarea glicogen sintetazei i a
glicogenfosforilazkinazei rezult prin stimularea
degradrii glicogenului, n timp ce sinteza
glicogenului este inhibat.
 Numeroase enzime ale metabolismului
intermediar sunt afectate de fosforilare att
pozitiv cat i negativ. Aceste fosforilri covalente
pot fi reversibile datorit unei subclase separate
de enzime cunoscute sub numele de fosfataze.
Cercetri recente arat c fosforilarea aberant
a factorilor de cretere i a receptorilor
hormonali, ca i a proteinelor care regleaz
diviziunea celular, conduc la o cretere
aleatorie a celulelor i la cancer. Situsurile
uzuale pentru adiia fosfatului la proteine sunt
serina, treonina i tirozina.
Factori care influeneaz activitatea enzimelor
Temperatura crete viteza de reacie a unei
enzime, dar numai pan la un punct. Cnd se
nclzesc prea mult, enzimele pot fi denaturate.
Cnd temperatura scade enzimele i recapt
forma. Termolabilitatea enzimelor se datoreaz
faptului c sunt de natur proteic.
Concentraia substratului i produsului
influeneaz viteza de reacie. Schimbrile de
pH vor denatura enzimele prin schimbarea
formei. Enzimele se pot adapta de asemenea la
variaiile de pH.
Graficul unor enzime funcie de pH. Se observ c fiecare enzim are un interval
de pH n care este active.
Enzime alosterice
Fa de enzimele simple care interacioneaz
numai cu substratele i inhibitorii, exist o clas
de enzime care leag mici molecule importante
fiziologic i moduleaz activitatea n alte moduri
dect cele descrise mai sus. Acestea sunt
cunoscute c enzime alosterice; mici molecule
regulatorii care se leag de enzime sunt
cunoscute ca efectori. Efectorii alosterici aduc
modificri catalitice enzimelor n situsurile
alosterice i cauzeaz schimbri
conformaionale care sunt transmise prin
molecula de protein ctre situsul catalitic.
 Importana efectorilor este c atunci cnd leag
enzimele, modific proprietile catalitice ale situsului
activ al enzimelor. Cei care cresc activitatea catalitic se
numesc efectori pozitivi. Cei care reduc sau inhib
activitatea catalitic sunt efectori negativi.
Majoritatea enzimelor alosterice sunt oligomeri
(consistnd din multiple subuniti); n general ele sunt
localizate la sau n apropierea unor puncte de ramificaie
n caile metabolice. Efectorii care moduleaz activitatea
enzimelor alosterice sunt de dou tipuri. Efectorii de
activare i inhibare care se leag la situsurile alosterice
se numesc efectori heterotropici. Aceti efectori pot avea
forme chimice diverse, ncepnd cu o simpl molecul
de ion anorganic pan la nucleotide complexe ca
adenozin monofosfat ciclic (cAMP).
 In multe cazuri, substratul induce efecte
alosterice cnd se leag la situsul catalitic.
Substratele acionnd ca efectori sunt
numite efectori homotropici. Cnd
substratul este efector, poate aciona i
prin legarea de situs sau la un situs de
efector alosteric. Cnd substratul se leag
la situsul catalitic transmite un efect de
modulare a activitii altor subuniti ale
moleculei. Adesea utilizat ca model de
efector homotropic este hemoglobina.
 Sunt dou cai n care activitatea enzimatic
poate fi modificat de ctre efectori: Vmax poate
fi crescut sau descrescut, sau Km poate fi mrit
sau micorat. Enzimele al cror Km este
modificat de ctre efectori se numesc enzime tip
k i efectorul un efector tip K. Dac Vmax este
modificat, enzima i efectorul sunt de tip V.
Multe enzime alosterice rspund la efectorii
multipli de tip V i K. Hemoglobina este adesea
utilizat ca model pentru studierea interaciilor
alosterice, dei nu este strict o enzim.
 Situsurile alosterice i cele catalitice sunt
prezente n fiecare subunitate a enzimelor
alosterice. Exist o alt clas de enzime
alosterice care cuprind separat unitile
catalitice i cele regulatorii.
 Un exemplu al acestor clase de enzime este cAMP-
dependent proteinkinaza (PKA), al crui mecanism de
inactivare este ilustrat n figura.
Enzima este tetrameric, coninnd dou subuniti
catalitice i dou regulatorii. Cnd nivelul lui cAMP
(adozin monofosfat ciclic) intracelular crete, o molecul
de AMP se leag la fiecare subunitate regulatorie,
cauznd o disociere a tetramerului ntr-un dimer reglator
i doi monomeri catalitici. In forma disociat, subunitile
catalitice sunt active; ele catalizeaz fosforilarea unui
numr de enzime cum ar fi cele implicate n reglarea
metabolismului glicogenului. Subunitile de reglare nu
au activitate catalitic.