REZONANTA

PLASMONICA DE
SUPRAFATA - SPR

PROIECT BIOCHIMIE MEDICALA

PETRESCU-MIRON GEROGIANA
GRUPA 1431B – ANUL III
CUPRINS

1. APLICATII ALE BIOSENZORILOR BAZATE PE SPR

1. APLICATII BIOMEDICALE
2. HTC-HIGH THROUGHPUT SCREENING (PROIECTIE DE MARE
VITEZA)
3. CERCETARI PROTEOMICE
2. ANALIZA CELULARA SI DETECTIA BAZATA PE
CELULE
3. EXPERIMENTE IN LABORATOR
4. BIBLIOGRAFIE
APLICATII ALE BIOSENZORILOR
BAZATE PE SPR
APLICATII BIOMEDICALE:

• SPR bazat pe biosenzori se dovedeste a fi una dintre

cele mai bune metode pentru studierea si monitorizarea
afinitatii legaturilor formate intre biomolecule si principala
metoda de screening a moleculelor tinta pentru
medicamente.
• Senzorii de tip SPR sunt din ce in ce mai utilizati in studiul
a diferite entitati biologice precum ADN-ul, ARN-ul,
proteinele, carbohidratii, lipidele si celulele din domeniul
de cercetare al biochimiei
EXEMPLE DE APLICATII BIOMEDICALE

1. ANALIZA DE INTERACTIUNI:

Interactiuni antigen-anticorp
Interactiuni de tipul ligand-receptor kinetic
Reactii de tip enzime-substrat
Monitorizarea in timp real a manipularii ADN-ului (hibridizari kinetice,
modificari enzimatice, separarea lanturilor de ADN) si ARN-ului
(studierea aptamerilor-elemente de recunoastere promitatoare, cu
stabilitate chimica buna, selectivitate inalta fata de tinta, ce pot fi
modificati chimic usor, cu avantaje mai multe fata de anticorpi; rol
important in detectia imunoglobulinei umane IgE, proteinei C reactive
si RBP4-proteina de retinol 4 de legatura si a biomarkerilor bentru
diabet)
EXEMPLE DE APLICATII BIOMEDICALE
2. STUDII IN SCHIMBARILE CONFORMATIONALE SI
DETECTIA MUTATIILOR

 tehnica SPR este folosita mai mult ca o metoda

complementara de studiu a schimbarilor conformationale

aceasta a fost utilizata pentru a monitoriza tranzitiile structurale

in interactiunile proteine-molecule mici si proteine in diferite
conditii de mediu sau in inducerea apoptozei (proces prin care
celulele declanseaza autodistrugerea ca raspuns la un anumit
semnal)

O alta aplicatie bazata pe SPR este utilizarea acesteia in

detectia mutatiilor prin combinarea SPR-ului cu alte tehnici
conventionale
HIGH-THOUGHPUT SCREENING (HTC)

Aceasta aplicatie a SPR-ului este extrem de utilizata in

descoperirea si producerea de noi medicamente.

In ciuda beneficiilor excelente a SPR-ului, biosenzorii SPR

au limitari destul de mari in inabilitatea lor de a suporta
analize complexe multiple.
CERCETARI PROTEOMICE
• In domeniul proteomicelor, metodele pentru identificarea
si analiza biomarkerilor a castigat din ce in ce mai multa
atentie de-a lungul anilor, avand ca si consecinta evolutia
acestora.
• Identificarea si detectia biomarkerilor care provoaca boli
sunt importante pentru anticiparea anumitor boli si implicit
evitarea operatiilor si a altor tratamente medicamentoase
scumpe pentru pacienti.
• Biosenzorii spr au fost folositi cu succes in gasirea
biomarkerilor a numeroase boli, precum cancerul ovarian,
pancreatic si de san, precum si a bolilor neurologice si
pancreatice.
ANALIZA CELULARA SI DETECTIA
BAZATA PE CELULE
SPR nu este avantajoasa numai pentru faptul ca are
capacitati de imagistica ce pot fi redate in timp real, nefiind
tabelate ci joaca un rol foarte important si in depistarea
schimbarilor din celule, precum fiziologia acestora,
interactiunile de la suprafata celulei
Aceasta monitorizeaza raspunsul celular, adeziunea
celulara si produsul celular, precum si depistarea celulelor
cancerase si a celulelor bacteriene.
Prin receptia stimulilor de la moleculele reactive,
celulele mama raspund corespunzator. Aceste raspunsuri
induc schimbari in semnalul dat de SPR.
 SPR joaca un rol foarte important in detectarea celulelor si a
biomarkerilor cancerosi astfel:

Prima abordare este bazata pe producerea de biomarkeri de

cancer folosind anticorpi monoclonali imobilizati pe suprafata
senzorului.
A doua abordare masoara direct raspunsul celular raportat la
cantitatea analizata, apoi celulele canceroase sunt „plantate”
direct pe suprafata de detectie si sunt „cultivate”. Solutiile
continand stimulii sunt trecute peste celule iar raspunsul
acestora este masurat in timp real de catre SPR.
Aceste strategii au fost utilizate cu succes in detectia si
diagnoza celulelor maligne tumorale in experimentele cu celule
ovariene prelevate de la hamsteri.
EXPERIMENTE DIN LABORATOR
Imunosenzor conceput pentru a determina un marker cardiac la
nivel de urmă, peptidă natriuretică de tip B (BNP), utilizând un dispozitiv
microfluidic combinat cu un sistem senzor de rezonanță a suprafeței
portabile de suprafață (SPR):

Soluția de soluție BNP a fost introdusă în microcanal după o imunoreacție cu anticorp marcat
cu acetilcolin-esterază (conjugat), și numai conjugatul nelegat a fost prins pe suprafața
imobilizată de BNP în canalul de curgere. Apoi, compusul tiol generat de reacția enzimatică cu
conjugatul prins a fost acumulat pe un film subțire de aur situat în aval în microcanal pentru a
monitoriza schimbarea unghiului SPR în timp real. S-a realizat un interval de concentrație
detectabil de 5 pg / mL-100 ng / mL prin monitorizarea schimbării unghiului SPR, care acoperă
intervalul de detectare necesar pentru concentrațiile de BNP găsite în sânge. Acest succes a
rezultat din utilizarea unei structuri de dispozitiv microfluidic în formă de T, care împiedică
scurgerea soluției de probă peste filmul de aur utilizat pentru detectarea SPR. S-a reușit să se
măsoare nivelele de peptidă BNP (15 fg) în decurs de 30 de minute de când procedura cu
ajutorul imunosensorului este mai simplă decât o imunotestare multistep, prin utilizarea
simultană a unei reacții enzimatice marcate și monitorizarea în timp real a acumulării
enzimatice a produsului în dispozitiv microfluidic. S-a folosit procedeul pentru a detecta BNP
seric prin utilizarea de probe în ser uman și s-a obținut o recuperare satisfăcătoare pentru
probele tratate termic pentru a denatura esteraza din ser înainte de imunoreactionare.
BIBLIOGRAFIE
• https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ac060480y
• https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S000634
9510012671
• https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/nl050074e
• https://www.mdpi.com/1424-8220/15/5/10481/htm#B4-
sensors-15-10481