MECANISME BIOCHIMICE PROTEAZĂ HIV ȘI

INHIBITORI DE PROTEAZĂ
CUPRINS

grabă,
HIV ÎN ROMÂNIA
• Zilnic doi români află că au HIV,
• anual sunt depistate în jur de 700 de noi cazuri.
32% sunt femei, iar 68% bărbați,
• mai mult de jumatate dintre aceste cazuri de
infectări se realizat prin contact heterosexual
neprotejat.
• 20% dintre cazuri au fost transmise de persoane
bisexuale sau homosexuale. Urmează apoi
utilizatorii de droguri injectabile, transmiterea
marterno-fetală și alte cauze necunoscute,
• în 2020 în jur de 200 de persoane au murit în
România din cauza comorbidităților asociate
HIV.
 • Face parte din familia Retroviridae, subfamilia
CE ESTE HIV Lentiviridae și prezinta două tipuri antigenice
distincte: HIV 1, HIV 2,
• fiind un retrovirus, HIV nu poate fi îndepărtat
complet din organism pentru că acest tip de
virusuri are capacitatea de a-și înscrie codul în
codul genetic al celulei gazdă. O infectare cu
HIV duce după o perioadă lungă de incubare, de
ani, chiar zeci de ani, la declanșarea bolii SIDA ,
• are apetență pentru limfocitele CD 4, cu rol
central în imunitatea mediată celular. Receptorii
CD4 sunt folosiți ca poartă de intrare în
organism. Multe tipuri de celule au epitopul
comun cu aceste proteine în care CD4 joacă un
rol crucial: macrofagele, fibroblaștii, monocitele,
limfocitele T, limfocitele B, limfocitele NK
(natural killer); celulele endoteliale, celulele
microgliale și celulele epiteliului gastrointestinal.
Toate sunt țintele primare preferate de HIV.
MORFOLOGIA HIV • Miezul viral este alcãtuit din douã copii de ARN
genomic viral și molecule asociate ARNt, și din
proteine mature produse de gag și pol. Genomul
este flancat de douã formațiuni complet
neobișnuite pentru acizii nucleici virali, dar
caracteristice ARN-ului celular - o secvențã
repetitivã cunoscutã sub denumirea de terminație
repetitivã lungã (LTR). Genomul este localizat în
regiunea centralã a ADN-ului proviral și codeazã
cel puțin 9 proteine.
• genomul fiind conținut într-un ARN monocatenar,
și are nevoie de transcriptazã inversă pentru
transcrierea lui în ADN.
• HIV se poate gãsi și extracelular, dar durata lui de
supraviețuire, în condiții de mediu normale este
foarte micã (6 ore), fiind imperios necesarã, pentru
a fi viabil, infectarea unei CD4 pozitive sau a altor
celule cu receptori pentru virus.
MORFOLOGIA HIV
• virionii HIV sunt sferici, cu dimensiuni 80-130 nm,
înveliți, cu nucleotid central în formă de bară.
Particula virală este constituită din: anvelopă și
capsidă.
Anvelopa constă dintr-o membrană externă lipidică,
bistratificată și o membrană internă, un complex proteic
ce trimite prelungiri alcătuite din doua glicoproteine:
gp120 externă sub forma de butoni (cu rol în aderarea
de molecula CD4) și gp41 transmembranară (cu rol în
fusiunea cu membrana celulei țintă).
Capsida conține: proteina majora p24, nucleocapsida
p7/p9, genomul ARN (monocatenar, de sens pozitiv,
diploid) și cele 3 enzime: transcriptază inversă,
integrază și protează. Capsida virală este înconjurată de
o matrice proteică p17/p18.
CICLU DE REPLICARE HIV
Ataşarea HIV de celula gazdă - implică existenţa pe suprafaţa celulei a
moleculei de CD4, care reprezintă receptorul pentru HIV. CD4 se află în
cantităţile cele mai mari pe suprafaţa:
 limfocitelor T helper (numite şi limfocite T CD4 )

Fuziunea HIV şi pătrunderea în celula gazdă

 legarea gp 120 de CD4 determină o modificare conformaţională a gp 41
  permite fuziunea virusului cu membrana celulei gazdă
 anvelopa virală rămâne la nivelul membranei celulare
 restul structurii virale pătrunde în celulă

Revers-transcrierea
 necesară pentru ca materialul genetic viral (ARN) să devină compatibil cu
cel al celulei gazdă (ADN)
 prin intermediul revers-transcriptazei virale
 revers-transcrierea se realizează fără corectarea erorilor de transcriere
 o mare varietate de mutaţii
 sursa rezistenţei virale la tratament
CICLU DE REPLICARE HIV
Integrarea
 ADN-ul viral rezultat este integrat în ADN-ul cromozomial
 prin intermediul integrazei virale.

Transcripţia şi sinteza proteinelor virale

 transcripţia ADN proviral se realizează de către ARN polimeraza II
a celulei gazdă
 gradul replicării virale depinde de starea metabolică a celulei gazdă.
 proteinele virale se sintetizează sub forma iniţială a unui singur lanţ
proteic, nefuncţional
 proteaza virală scindează lanţul proteic rezultând proteinele virale
funcţionale.

Asamblarea tuturor componentelor virale

 în vecinătatea membranei celulare
 particulele virale înmuguresc la suprafaţa celulei gazdă, acoperindu-
se cu o membrană lipidică preluată de la celula gazdă.
 PROTEAZĂ HIV
• este o aspartil protează homo dimerică, fiecare
monomer fiind compus din 99 de resturi de AA cu
un acid aspartic catalitic (Asp) în poziția 25,
implicată în hidroliza legăturii pepdice, la ARN
virusuri,
• scindează poliproteinele nou sintetizate (Gag și
Gag-Pol), codificate de către genomul virusului
HIV-1, la nouă situri de clivaj, pentru a produce
proteine ​active mature (forma infecțioasă a HIV),
• poate funcționa doar ca un dimer,
• conține doi AA Asp25, unul din fiecare monomer,
care acționează împreună,
• are două clape moleculare care se deplasează la o
distanță de 7Å când se prinde de substrat.
 PROTEAZĂ HIV
MECANISM BIOCHIMIC DE ACȚIUNE
• Ca protează aspartică, HIV-1 PR dimerizat
funcționează printr-un complex al grupului aspartil,
• după legarea substratului de situs activ, AA catalitic,
Asp25 deprotonat este supus catalizei de bază,
transformând molecula de apă. Ionul hidroxil
rezultat atacă carbonul carbonilic al legăturii
peptidice, formând un intermediar cu un oxianion
tranzitoriu
• oxianionul re-formează o legătură dublă, ducând la
scindarea legăturii peptidice dintre cei doi
aminoacizi. Asp25 deprotonat inițial suferă cataliză
acidă pentru a-și dona protonul către grupa amino.
Aceasta realizează completa scindare a legăturii
peptidice.
FUNCȚII PROTEAZĂ HIV

Autoprocesare

Maturare virală
 INHIBITORI DE PROTEAZĂ
• 10 - saquinavir, indinavir, ritonavir, nelfinavir,
amprenavir, fosamprenavir, lopinavir, atazanavir,
tipranavir și darunavir
• IP blochează activitatea proteazei HIV, enzimă pe
care virusul o folosește pentru a descompune
poliproteinele cu masă mare în unități mai mici,
necesare în asamblarea de noi particule virale.
• IP acționează în stadiul foarte târziu al procesului
de replicare HIV. Când virusul infectează o celulă,
sistemele de replicare ale acesteia sunt constrânse
să producă proteine ​virale precursoare lungi
PROTEAZĂ HIV
LEGARE DE SUBSTRAT - DARUNAVIR
Aminoacids of Ligand- Types of Aminoacid Ligand- Types of
chain A protein connections s of chain B protein connections
distance (Å) distance (Å)

ASP30 3.32   GLY49 3.01 C-H

H bound
ASP25 2.92 GLY27 3.31

ASP29 2.89 ILE47 5.08  

π-alkyl
3.20 PRO81 4.99

GLY27 3.33 H bond ALA28 4.11

  3.67 C-H VAL82 3.44 π-sigma

ILE50 5.04 π-alkyl ASP30 3.31 H bound

ALA28 4.60    
 
Alkyl
VAL82 5.38

ILE47 5.07
PROTEAZĂ HIV
LEGARE DE SUBSTRAT - DARUNAVIR
MECANISM BIOCHIMIC DE REZISTENȚĂ LA IP
POTENȚIATORI FARMACOCINETICI
RITONAVIR
PROTEAZĂ HIV
LEGARE DE SUBSTRAT – RITONAVIR
Aminoacids of chain Ligand-protein Aminoacids of chain Ligand-protein Types of
Types of connections
A distance (Å) B distance (Å) connections

ALA28 4.43 ALA82 4.38

PRO81 4.39 PRO81 5.47

π-alkyl

π-alkyl
ILE47 4.90 ILE84 5.37

4.35   4.24

ALA82 4.98 ALA28 4.24

4.26   3.81 Alkyl

Alkyl
ILE50 4.43 VAL32 4.97

GLY48 3.68   5.39

C-H
ASP30 2.58 GLY27 3.05

2.64 ASP25 2.71

ASP25 H bond H bond
2.79   2.75

ARG8 3.13 π-cation GLY48 3.33

  3.39
C-H
ASP29 2.96
 
  2.80 H bond

GLY49 3.29 C-H

PROTEAZĂ HIV
LEGARE DE SUBSTRAT - DARUNAVIR
CONCLUZII
g