Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
VARIOLA (smallpox)
Variolizare
1% vs. 25% mortalitate Imunitate pe viata
Cowpox-Vaccinia
1800- Vaccinare obligatorie copii Marea Britanie 1930-ultimul caz indigen in Marea Britanie 1940-ultimul caz indigen in Statele Unite 1958- programul OMS de eradicare Octombrie 1977: Ultimul caz din lume (Somalia) 1980- eradicarea variolei
Jenner, 1796
Dimensiunea virusurilor
Exceptie- Virus gigant 650nm (780nm cu fibrilele de pe suprafata) denumit Mimivirus (de la Mimicking Microbe) ce infecteaza amoebae, nou patogen uman asociat pneumoniilor?
Mimivirus a fost izolat prima data in 2003, din apa din turnurile de racire in cursul unei epidemii de pneumonie din Anglia In 2008 a fost identificat un virofag ce infecteaza Mimivirus, denumit sputnick
1892- Dimitri Ivanovski -virusul mozaicului tutunuluiMartinus Willem Beijerinck contagium vivum fluidum 1898- Loeffler si Frosch- virusul febrei aftoase. 1909-Landsteiner si Popper-virusul poliomielitic
1949 - Enders, Weller si Robins introduc culturile de celule ca substrat pentru propagarea virusurilor
Microscopia electronic
(a) Adenovirus. (b) Rotavirus. (c) Influenza virus (courtesy of George Leser). (d) Vesicular stomatitis virus. (e) Tobacco mosaic virus. (f) Alfalfa mosaic virus. (g) T4 bacteriophage. (h) M13 bacteriophage.
USA
Cornell University Ithaca, NY, USA
USA
Rockefeller Institute for Medical Research Princeton, NJ, USA
USA
Rockefeller Institute for Medical Research Princeton, NJ, USA
b. 1887 b. 1891 b. 1904 d. 1955 d. 1987 d. 1971 Tobacco mosaic disease virus can be crystallized in the same way as proteins and enzymes
SUMAR
STRUCTURA VIRUSURILOR.
Virusurile nu contin dect o singur specie de acid nucleic: ADN (dezoxiribovirusuri) sau ARN (ribovirusuri). Acidul nucleic constituie genomul, depozitarul infectivittii virale. Genomul viral este protejat de un nvelis proteic numit capsid. Capsida rezult din asamblarea unor subunitti numite capsomere care se asociaz potrivit regulilor de simetrie icosaedric sau helicoidal. Adesea genomul si capsida alctuiesc un ansamblu numit nucleocapsid. Capsida este nconjurat la unele virusuri de un al doilea nvelis numit anvelop sau peplos. Anvelopa este dublu codificat: de genomul viral si de genomul celulei gazd. Aceasta nseamn c n cursul eliberrii virionilor din celulele infectate ei includ n anvelop structuri codificate de genomul viral si structuri proprii membranei celulei infectate Genomul viral codific proteine structurale care alctuiesc nvelisurile genomului (capsida si anvelopa) responsabile de antigenicitatea virala si proteine reglatorii sau cu functie enzimatic, importante in cursul replicarii virale. Numrul proteinelor codificate de genomul virusurilor este foarte diferit: de la numai dou la virusul hepatitei delta la cteva sute la herpesvirusuri sau poxvirusuri.
STRUCTURA VIRUSURILOR
ASAMBLAREA CAPSOMERELOR
SIMETRIE ICOSAEDRICA
SIMETRIE HELICOIDALA
VIRUSURI ADN
Mimivirus -ADNds liniar 1,2Mb-cel mai mare genom viral descris pana in prezent, mai mare ca genomul unor bacterii
Familii representative Picorna-, Calici-, Astro-,Flavi-, Toga-viridae Orthomixo-, Paramixo-, Arena-, Rhabdo-, Bunya-viridae Retro-viridae REO-viridae: (Orbivirus, rotavirus, reovirus) Parvo-viridae Papova-, Adeno-, Herpes-, Pox-viridae
ADNds RT
Hepadna-viridae
RT- cu reverstranscriptaza, ce sintetizeaza ADN pe matrita ARN, inversand fluxul normal al informatiei genetice. Pentru detalii privind clasificarea consultati Index Virum: www.life.anu.edu.au/viruses
Vaccinia virus. (A) Electron micrograph of purified virus, negative stain (Westwood et al., 1964). (B) Electron micrograph of a purified virion, whole mount, negative stain (Wilton et al., 1995). (C) Freeze etch electron micrograph of a purified virion (Nermut, 1973).(D) Deep etch electron micrograph of a purified virion (Heuser, 2005).(E) Atomic force micrograph of a purified virion (Malkin et al., 2003). (F) Cryoelectron micrograph of a whole mount preparation of purified virions (Griffiths et al., 2001).
SUMAR
Virusurile se deosebesc de bacterii prin: parazitism exclusiv intracelular datorat dependentei de sursele de energie ale celulei (virusurile nu au mitocondrii) si de mecanismele de sintez proteic (virusurile nu au ribozomi) ale celulelor parazitate;-->mecanism de nmultire diferit de microbi -numit replicare viral si cultivare numai pe substraturi celulare vii talia mic, de 100 - 1000 ori mai mic dect a microbilor; virusurile se msoar n nanometrii (10-9 metri)--ultrafiltrabilitate si vizualizare in microscopie electronica. N.B. Singura exceptie par a fi virusurile din familia virusurilor largi nucleocitoplasmatice ADN (poxviridae, iridoviridae, asfarviridae, phycodnaviridae si mimiviridae). organizare simpl dictat de codificarea informatiei genetice de o specie unic de acid nucleic: ARN la ribovirusuri si ADN la dezoxiribovirusuri
http://www.virology.net/Big_Virology/BVHomePage.html
Departamentul de Microbiologie si Imunologie al Universittii de Medicin din Tulane, New Orleans, SUA
Preparate colorate cu efecte citopatice determinate de virusuri n culturi celulare: http://www.uct.ac.za/depts/stannard/cpe.html Please advise your students: Don't watch TV - listen to medical podcasts ! http://freemedicalpodcasts.com
3. Diagnosticul serologic
Izolarea virusurilor
3 sisteme de izolare Culturi de celule Ou de gin embrionat Animalul de laborator
AVANTAJE
DEZAVANTAJE
Cost / etica
O.G.E.
Cost
CULTURI DE CELULE
CELULE TRANSFORMATE
1. conin gene implicate n imortalizarea n vitro (cultivare nr. infinit pasaje) modificari cromozomiale => cariotip aneuploid; 2. se multiplic haotic, cerine nutritive foarte sczute (se multiplic la concentraii foarte sczute de SFV), glicoliza anaerob = sursa principala de energie. 3. membran celular modificat n compoziie (absena fibronectinei => scaderea adeziunii intercelulare 4. nu au inhibitie de contact, se dispun dezordonat diferit de esutul din care deriv 5. inoculare la animale => TUMORI 6. modificarea morfologiei (rotunde, refrigente) 7. au antigene de suprafa diferite de N codif. de virus /celule gazda=> neoantigene 8. aglutineaz uor cu lectinele (antigene vegetale) 9. modificarea mesageri secunzi (AMPc)
Echipament de laborator
Hote cu flux laminar pentru obtinerea, si propagarea culturilor de celule si izolarea virala
INCLUZIONAR
INCLUZII INTRANUCLEARE
1. SUSPICIUNEA CLINICA
La sugari si copiii mici semnele principale sunt febra 38.5 C asociata cu iritabilitate si pulsarea fontanelei
IZOLARE
80%-90% Enterovirusuri
10
20% alte
virusuri:VZV; V.
URLIAN; HSV; CMV; V. PARAGRIPALE
Este
important de notat ca enterovirusurile se excreta saptamani la rand, dar sansele de izolare scad. Se recomanda recoltarea a 2 - 3 probe de la pacient la interval de 24-48 ore ** Sansa de izolare din acest produs creste cnd participarea meningiana este evidenta. Acest lucru se traduce prin pleiocitoza (cresterea numarului de celule limfo-monocitare in LCR).
RSN:
IDENTIFICAREA VIRUSURILOR=VIRUS NEUTRALIZARE TITRAREA ANTICORPILOR= REACTIA DE SERONEUTRALIZARE
VIRUSNEUTRALIZARE
VIRUS NECUNOSCUT ANTICORPI CUNOSCUTI=SER IMUN DE REFERINTA
SERONEUTRALIZARE
TITRU DE ANTICORPI NECUNOSCUT VIRUS CUNOSCUT = TULPINA DE REFERINTA
ETAPE RSN
1. TITRAREA INFECTIVITATII VIRALE 2. BLOCAREA INFECTIVITATII VIRALE 3. DEMONSTRAREA NEUTRALIZARII INFECTIVITATII VIRALE
1.
Insamantare pe celule susceptibile dupa adsorbtie, 1h la 37, se acopera cu agar Restrictia raspandirii virusului determina liza focalizata a monostratului celular vizibila sub forma plajelor, PFU
Metoda plajelor
HERPES VIRUSURI:
HSV1 HSV2 VZV,EBV,CMV
Lichid vezicular Biopsie cerebrala LCR SALIVA, AMPRENTE DERMICE, CORNEENE, BIOPSIE CEREBRALA LCR SANGE SALIVA, BIOPSIE CEREBRALA LCR
V. RABIC ARBOVIRUSURI
TOGAVIRUSURI FLAVIVIRUSURI BUNYAVIRUSURI POSTINFECTIOASE: V. RUJEOLOS V. URLIAN V. GRIPALE VVZ
PCR IF
Culturi celulare
PCR IF
NU
NEUROVIROZE
Poliovirus- receptor CD155 gp TM din super familia Ig stabilire jonctiuni intercelulare la nivel celule epiteliale; posibil implicat in RIU intestin subtire
Invazie SNC prin : 1. Transport axonal retrograd 2. Traversare BHE 3. Transport prin macrofage infectate
POLIOMIELITA
Boala majora (0.1 0.5%)-polio spinala sau bulbara -paralizii acute flasce
prin leziuni de neuron motor periferic
Sindromul Post-polio
1 in 200-1000 cazuri in infectia cu virusul salbatic la copii 1 in 75 cazuri in infectia cu virusul salbatic la adulti
Polio bulbara
Rata mortalitatii 25% copii 1530% adulti
1909
- poliomielita poate fi tansmis la maimutele superioare prin filtrat de mduv spinal (Landsteiner,K., and Levaditi C. La
transmission de la paralysie infantile aux singes. C. R. Soc. Biol. 1909, 592-594).
1949- cultivarea virus polio pe culturi de celule nonneuronale- Enders, Robbins, Weller- 1954 Nobel
VACCINURI VIRALE
VACCINURI INACTIVATE VACCINURI VII ATENUATE
Virusuri antigenic inrudite cu agentul etiologic al virozei umane, dar nevirulente pentru om (vaccinia) Tulpini virale natural atenuate( Max Theiler) Atenuare in laborator sub selectia presori fizici, chimici, biologici Virusul neatenuat in doze mici sau asociat cu anticorpi specifici/administrat pe cai de inoculare diferite
VACCINURI ANTIPOLIO
Vaccin antipolio inactivat -SALK 1952National Foundation for Infantile Paralysis -1938
Franklin D. Roosevelt - Al 32-lea presedinte SUA 1933 1945
VIRUS
VACCIN
Incident Cutter 120,000 doze - 40,000 polio abortiva, 56 polio paralitica , 5 decese
-Baza moleculara a atenuarii distincta pentru fiecare serotip -Numar mic de mutatii disting tulpina atenuata Sabin de serotipul natural virulent (11 substitutii nucleotidice pt tip 3, 8 pt tip 2 si cel
putin 56 pt tip 1)
IRES
1988 - 350 000 cazuri in 125 tari endemice 2006 1874 cazuri in 4 tari
2 luni 4 luni
6 luni 12 luni 4 ani** 7 ani (in cls. I) 9 ani (in cls. a III-a) 14 ani (in cls. a VIII-a)
Simultan Simultan
Simultan Simultan Campanii scolare Campanii scolare Campanii scolare
Enterovirusuri:
Polioviruses 1, 2, 3 Coxsackie A1-24/ B1-6 ECHO - 33 (Enteric cytopatogenic human orphans) Enteroviruses 68-71
Virusurile ECHO produc uneori epidemii extinse de meningite aseptice. Astfel, n vara anului 1999 o epidemie cu virusul ECHO 33 de peste 5000 cazuri a afectat judetele din Moldova extinzndu-se ulterior si n restul trii. Cazurile s-au datorat consumului apei infectate sau scldatului n ape contaminate si au prevalat la grupa de vrst 5-15 ani. Impactul economic al meningitelor virale (meningite aseptice sau cu lichid cefalorahidian clar) este considerabil fiind estimat la cheltuieli n jur de 5000 $ per caz (costuri directe) si 8 zile de inactivitate (costuri indirecte). n 90% din cazuri aceste meningite sunt de etiologie enteroviral. Cheltuielile directe sunt mai mari pentru cazurile pediatrice si deriva din administrarea empirica a antibioticelor si ngrijirea cazurilor cu deshidratare severa n serviciile de reanimare.
Virusul rabic
Virusul rabic (lyssavirus) face parte din familia Rhabdoviridae virusuri ARNss cu polaritate negativ n form de glont. Virusul rabic salbatic este numit "de strada" si are o incubatie variabila; pasaje repetate la aceiasi specie stabilizeaza si scurteaza incubatia, tulpinile fiind etichetate ca "virus rabic fix". Leziunile citopatice sunt exclusiv intraneuronale, citoplasmatice si au aspectul unor incluzii granulare numite corpii Babes Negri. Tulpinile de virus fix dau incluzii mici. Corpii Babes Negri predomina n neuronii din cornul Ammon din hipocamp si n celulele Purkinje din cerebel. Aceste leziuni corespund situsurilor replicarii virale. In celulele glandelor salivare virusul se replica si se elibereaza prin nmugurire la nivelul membranei celulare ceea ce reprezinta o adaptare eficienta pentru propagarea infectiei la o noua gazda. n afara neuronilor si celulelor glandelor salivare antigenul rabic mai poate fi evidentiat n cornee, piele, mucoasa bucala - elemente care au valoare diagnostica. Patogenia infectiei este conditionat de diseminarea septinevritic centripet a virusului de la nivelul plcutelor neuromusculare periferice ctre SNC. Din SNCvirusul se propag centrifug pe calea filetelor senzitive (septinevritic) si se secret n saliv.
Antigene rabice
1885 -Pasteur -atenuare virus rabic prin pasaje repetate intracerebral la iepure (L.Pasteur: Methode pour prevenir la rage morsure. C.R. Acad Sci,
101, 765)
1887- Babes si Puscariu -metoda romneasc de vaccinare antirabic cu virus fix -atenuat prin pasaje la cobai si prin cldur. (V.Babes: Ann. Inst. Pasteur 1889, 7, 384). 1894- Babes recomand utilizarea serurilor de la animalele imunizate cu virus fix pentru tratamentul rabiei dup musctur
(V. Babes: Romnia Medical, 1894, p. 467-469).
Vaccinarea la om - vaccin inactivat preparat pe culturi de celule diploide umane (vaccinoterapia Pasteur) Administrarea de IgG in jurul plagii muscate (seroprofilaxia Babes). Vaccinarea animalelor domestice (obligatorie) si salbaticevaccinuri vii atenuate- cu mutatii si deletii n proteina G- uz veterinar
vaccin antipolio
http://www.post-polio.org/
Cello J, Paul AV, Wimmer E: Chemical synthesis of poliovirus cDNA: generation of infectious virus in the absence of natural template. Science 2002, 297:1016-1018. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=A bstract&list_uids=12114528- sintetizare virus polio in laborator
ORTHOMYXOVIRIDAE
HA - hemaglutinina
NA - neuraminidaza Nucleocapsida helicoidala (ARNss -, segmentat) anvelopa transcriptaza
Matrice
tip A, B, C : NP, M subtipuri: HA si NA 16 tipuri de HA si 9 de NA tip/subtip/ loc, an izolare/nr. pasajeA/H5N1/Guangdong/1996/1
HEMAGLUTININA
SA-2-6-Gal beta
Aviar (trahee sau epiteliu SA-2-3-Gal beta intestinal), ecvin Porcin, trahee porcin; SA-2-3-Gal beta si prepelit SA-2-6-Gal beta REASORTANTI
Endocitoza mediata de receptor schimbari conformationale cu expunerea peptid de fuziune N-terminal HA2- -complex ribonucleoproteic transportat in nucleu
de FDA pe 23 Octombrie 2009, pt utilizare in cazuri severe, spitalizate in care ceilalti inhibitori de NA sunt neutilizabili (rezistenta la Oseltamivir , imposibilitatea administrarii Zanamivir)
V. Gripale A: VARIABILITATE
DRIFT ANTIGENIC- mutatii punctiforme- EPIDEMII
Pandemii gripale
1918-H1N1 gripa spaniola -20-50 milioane decese Virus aviar 1957- H2N2 gripa asiatica-1-2 milioane decese reasortant 1968- H3N2 gripa Hong Kong -700,000 decesereasortant 1977- H1N1 gripa ruseasca-re-emergenta
Influenza A H1N1/2009 6 Minigene de la tulpinile porcine Nord America (reasortant 1998 suin/aviar/uman) si 2 de la tulpinile porcine izolate in Europa/Asia Aceste tulpini au coexistat pentru mai mult de 10 ani Reasortarea actuala probabil la porc- gazda ramane totusi necunoscuta (supraveghere insuficienta; infectie asimptomatica la porc, reasortare recenta?)
30% 6.5% (4.5% - 8%) per saptamana 15% din cazuri clinic aparente 2% din cazuri clinic aparente 0.1% - 0.2% (pana la 0.35%) 12% din forta de munca
80
45 decese asociate cu cazuri confirmate de laborator de H1N1/pandemic 2009 in 13 tari in perioada 21- 27 Octombrie. Numar total de decese confirmate din Aprilie 2009 in 27 tari EU si 4 EFTA 317. Ukraina a raportat 12 decese cauzate de pneumonii regiunea Ternopol alte 6 decese in regiuni invecinate
SHIFT ANTIGENIC- Modificri conformationale n structura hemaglutininei pentru traversarea barierei de specie
Toate virusurile gripale umane au singur reziduu bazic de arginin la nivelul sitului de clivare a hemaglutininei. Achizitia unor aminoacizi bazici suplimentari la acest nivel, duc la o conformatie asemntoare virusurilor aviare HPAI (situri de clivare multiple) si permit si altor proteaze n afara tripsinei s cliveze hemaglutinina, ceea ce duce la alterarea tropismului tisular (cu posibilitatea afectrii tesutului cerebral, miocardic si vaselor de snge) si la cresterea virulentei. O serie de mutatii punctiforme afecteaza legarea la receptori si cresc legarea de reziduri sialozidice specifice mamiferelor
V.GRIPAL 1918
Caracteristica
LD50/Soarece Pierdere greutate ziua 5 Mortalitate ziua 9 Patologie pulmonara Expresia genelor tisulare
1997- H5N1 - Hong Kong - 1,5 milioane psri; 18 cazuri umane/6 decese
Decembrie 2003- cazuri letale gripa H5N1 la feline mari Thailanda, continua in octombrie 2004 -147/441 tigrii 2004--H5N1- Coreea de Sud, Vietnam, Cambodia, Laos, Japonia, Thailanda, Indonezia, China, Hong Kong
2005-iulie-august Rusia , Kazakstan , Mongolia octombrie- decembrie-Turcia, Romania), Croatia , Kuwait, Ukraina China, Indonezia, Vietnam, Cambodia, Turcia (cazuri umane)
Transferul tulpinilor nalt patogene H5N1 din Asia ctre Estul Europei este atribuit rutei psrilor deasupra Eurasiei continentale sau de-a lungul litoralului Mrii Arctice.
2006- Iraq, Nigeria, Azerbaijan, Egipt, India, Franta (februarie-I data in UE), Niger, Albania - pasari domestice Bulgaria, Greece, Italy, Slovenia , Iran, Austria, Germania, Franta, Ungaria, Slovacia, BosniaHerzegovina, Georgia, Suedia, Elvetia , Serbia-Muntenegru, Polonia- pasari salbatice lebede, rate 2008-2009 China, Indonezia, VietNam, Egipt, Thailanda, Iraq, Turcia-cazuri umane
Aprilie 2005- extinderea spectrului de gazda la pasari salbatice - 6,345 pasari din specii diferite mor in citeva saptamini in regiunea marilor lacuri (Qinghai Lake) din China centrala- se extind in n Siberia, Caucaz, Balcani.
VACCIN INACTIVAT CU VIRUS INTREG SAU SUBUNITAR (1931-izolare in OGE, 1940- vaccin inactivat)
- Virus izolat in OGE, lichid alantoidian imbogatit, particule virale centrifugate in gradient de densitate pentru concentrare si purificare, inactivare cu formaldehida sau -propiolactona +/_ tratare cu detergent si purificare HA si NA- vaccin trivalent - Petrescu si colab., 1980 - NIVGRIP- administrarea intranazal a vaccinului inactivat preparat cu virusul ntreg prioritate romneasc.
Fiecare doz de vaccin contine hemaglutinina corespunztoare a 10 bilioane de virioni n cazul cultivrii virusului pe OGE (15 ug per 0.5 ml) . Cantitatea de neuraminidaz nu este standardizat -protein labil n cursul procesului de preparare si stocare a vaccinului.
PB2 PB1 PA HA NA NP M NS
PB2 PB1 PA HA NA NP M NS
Reasortant
virus cu 6 gene PR8, dar HA si NA tulpinii circulante
PB2 PB1 PA HA NA NP M NS
36 luni 1 or 2
6 luni 1 or 2
4 ani 1 or 2
Inactivat
0.5 mL siringa
0.5 mL siringa
<1.0
0 24.5 0
4 ani 1 or 2
18 ani 18 ani 1 1
2--49 ani 1 or 2
Virus reasortant A/California/7/2009 NYMC X-179A (New York Medical College), distribuit de CDC
cultivat pe celule Vero 7,5 micrograme HA per doz de 0,5 ml . Focetria (Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l)- Antigene de suprafa ale virusului gripal (hemaglutinin i neuraminidaz) din tulpina: A/California/7/2009 (H1N1) v (X-179A) cultivata n OGE 7,5 micrograme HA per doz de 0,5 ml -adjuvant (MF59C.1) Pandemrix (GlaxoSmithKline Biologicals S.A)- Virus gripal fragmentat, inactivat, coninnd HA din tulpin similar virusului A/California/7/2009 (H1N1) (X-179A) cultivata n OGE echivalent cu: 3,75 micrograme** per doz de 0,5 ml- adjuvant AS03
GRUPE DE RISC
Persoane cu risc nalt de complicatii copii < 2 ani (rate de spitalizare de 2.3 ori > ca cei 2- 4 ani, acesrtia la randul lor sanse de 20% mai frecvente complicatii) adulti > 65 ani femeile gravide n trimestrele II si III de sarcin, 2 saptamani postpartum inclusiv dupa pierdere sarcina pacienti institutionalizati adulti si copii cu boli cardiace (cu exceptia HTA) si pulmonare cronice (inclusiv astm), boli metabolice (inclusiv diabet zaharat), disfunctii hepatice, renale, hematologice , imunosupresie (inclusiv cei HIV pozitivi) Obezitate (BMI 30-35), mai ales obezitate morbida (BMI )>40 n
Persoane care pot transmite infectia gripal celor cu risc de complicatii personalul medico-sanitar angajatii institutiilor psihiatrice si cei ce ngrijesc bolnavi cronici membrii familiilor persoanelor la risc
Persoane la care vaccinarea poate fi recomandat persoane care cltoresc n zone cu epidemii de grip persoane implicate n servicii comunitare esentiale copiii din gradinite si scoli, studentii, militarii
UP TO DATE
http://ec.europa.eu/health/ph_threats/com/Influenza/h1n1_en.htm http://ec.europa.eu/health-eu/newsletter/influenza/1/newsletter_en.htm http://www.emea.europa.eu/influenza/vaccines/home.htm http://www.euro.who.int/surveillance http:// www.cdc.gov/flu/weekly http://www.ecdc.eu.int/ http://www.oie.int Organizatia Mondiala Pentru Sanatatea Animala
www.virology.ro- INSTITUTUL DE VIRUSOLOGIE St. S. Nicolau date despre debutul pandemiei www.who.int/csr/disease/avian-influenza http://www.efsa.eu.int/science/- The European Food Safety Authority http://europa.eu.int/comm/food/animal/diseases/controlmeasures/avian/ avain_influenza_22092005.pdf Taubenberger et al in Nature ( VOL. 437 October 6th 2005 ) http://www.nature.com/news/2005/051003/full/437794a.html http://www.nature.com/news/2005/051003/full/nature04230.html Tumpey et al in Science (2005; 310: 77-80).
HERPESVIRIDAE
gr. herpein
Proteine virale deja sintetizate: -inhiba sinteza proteinelor celulare, - inhiba mecanismele de aparare celulara -stimuleaza expresia genelor virale.
Centers for Disease Control and Prevention's Public Health Image Library (PHIL), identification nr #1878.
GENOMUL HERPESVIRUSURILOR
Genomul este ADNds, liniar, asamblat ca un toroid care circularizeaz cu usurint. Fiecare spir ADN contine dou componente L (long) si S (short) mrginite de secvente repetate inverse. Componentele L si S pot face rocada producnd forme lineare izomere care explic ntre altele latenta
HERPESVIRIDAE
ALPHAHERPESVIRINAE- Neuronii senzitivi din rdcina
posterioar a nervilor spinali si nucleii senzitivi ai nervilor cranieni
HERPES SIMPLEX 1 (HSV1) HERPES SIMPLEX 2 (HSV2) VARICELO-ZOSTERIAN (VZV)
gp C=receptoriglicosaminoglicani gpD =co-receptori (nectine, HVEM-herpes virus entry mediator, 3OS heparansulfat -forma
modificata a heparan sulfat sub influenta 3-O sulfotranferaza enzima prezenta in creier)
-proteina "DNA-binding" Oct-1 n celulele nou infectate - activare specifica a unor promotori virali
ADN-ul viral ---ARN polimeraza II celulara----sinteza ARNm pt 3 specii de proteine: alfa (IE)si beta (E) (reglatorii, enzimatice, timpurii) si gama (L) (structurale, tardive).
Sinteza ADN- Rolling circle concatemeri clivati in monomeri in cursul asamblarii nucleocapsidei
LATENTA
Deficiente in transportul moleculelor alfa-TIF din citoplasma catre nucleul neuronilor -blocheaza infectia HSV productiva Fixarea unor proteine celulare cu actiune represoare, la nivelul secventelor din ADN-ul viral care controleaza expresia genelor .
-factor de transcripie virional (VP16/ alfa TIF-trans-inducing factor) -proteina "DNA-binding" Oct-1 n celulele nou infectate - activare specifica a unor promotori virali
LATENTA
- Dou gene IE (ICP 4 si ICP 27) conditioneaz propagarea HSV 1 numai n celule
permisiv, fiind transactivatori ai genelor asociate cu infectia litica. - O singura zona a genomului viral este functionala in timpul latentei- situata in secventele repetitive ale genomului si codifica un numar inca necunoscut de molecule de ARN, denumite LATs (Latency Associated Transcript) , care nu vor fi traduse in proteine Expresia LAT in neuroni inhiba expresia unor gene litice (ICP4 si timidin kinaza), prin modificari ale histonelor ce convertesc portiuni din ADN viral in forme neproductive
Elemente din jurul genei pt ICP4 leaga o proteina - NRSF- factor de silentiere neuronala restrictiva (element represor al transcriptiei REST Repressor Element Silencing Transcription Factor)- duc la blocarea unor gene imediat timpurii stabilirea latentei. Forme truncate ale NRSF sunt produse in neuroni si controleaza selectiv expresia unor canale pentru neurotransmitatori
LAT interfera cu mecanismele naturale ale mortii celulare
GINGIVOSTOMATITA HERPETICA
HERPES FACIAL
HERPES GENITAL
Episoade recurente
adulti imunocompetenti: F -20% (8-80%); M-15% (5-50%)
HERPES NEONATAL
1988 -PREMIUL NOBEL PENTRU MEDICINA NOI PRINCIPII TERAPEUTICE Sir James W. Black, Gertrude B. Elion , George H. Hitchings
ACYCLOVIRAnalog nucleozidic purinic aciclic , derivat din guanin- activ in forma trifosforilata
Supresia herpesului genital prin terapia cu acyclovir: Numarul mediu de episoade de herpes genital per persoana per an
VARICELA
VARICELA (LEZIUNI PROGRESIVE, IN VALURI - MACULE, VEZICULE, CRUSTE)-vs RUJEOLA (ERUPTIE MACULO-PAPULARA)
VACCIN VIU ATENUANT MMR measles, mumps, rubella (rujeola, oreion, rubeola) administrare la 12 luni
Reactivarea virusului varicelo- zosterian latent = zona zoster- eruptie herpetica pe traseul unui nerv
BETAHERPESVIRINAE
CITOMEGALIC (CMV) HUMAN HERPESVIRUS 6 (HHV6) HUMAN HERPESVIRUS 7 (HHV7) Transmiterea materno-fetal a CMV majoritar la primoinfectia in sarcina:
Prenatal-teratogen determin malformatii congenitale severe (microcefalie, retard mental, chorioretinit, anomalii osoase);
Perinatal - determin boala cu incluzii citomegalice a nou nscutului (hepatosplenomegalie, icter, anemie hemolitic);
Postnatal infectie asimptomatic sau asemntoare mononucleozei
INFECTIA CU CMV
La imunosupresati infectii primare si reactivari simptomatice: CMV POST-TRANSFUZII: mononucleosis-like CMV +SIDA: RETINITE/ encefalopatii CMV POST- TRANSPLANT : PNEUMONIE letalitate ridicata>85% Hepatite, colite, encefalite
TRATAMENT
GANCICLOVIR Cytovene
CIDOFOVIR- RETINITA CMV
FOSCARNET
MONONUCLEOZA INFECTIOASA
EPSTEIN BARR (EBV)- GAMAHERPESVIRINAE
LATENTA- EXPRESIA PROTEINELOR VIRALE TIMPURII: FACTORI DE CRESTERE AUTOCRINI PT. LIMFOCITELE B RECEPTORI AI FACTORILOR DE CRESTERE ACTIVATORI AI UNOR ONCOGENE CELULARE
3. Date epidemiologice: cale transmitere, contact infectant, per. incubatie, vaccinuri 4. Diagnostic etiologic = detectia markerilor virali:
antigene virale (ag) anticorpi antivirali (anti) acid nucleic viral
Hepatita B
anti-HBc totali
AgHBs
anti-HBc IgM
anti-HBs
12
16
20 24
28
32 36
52
100
IgM anti-HBc
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36
52
Years
Incubare ser pacient 1h la 37C Spalare Incubare CONJUGAT 30min la 37C Spalare Incubare SUBSTRAT 20 min la t.camerei Citire la spectrofotometru => D.O., MN, MP, C.O.
IgG
10
11
12
13
saptamana
Diagnostic hepatita acuta A = detectie Ac anti VHA IgM (ELISA de captura)
ELISA de captura
ETAPE
SUBSTRAT + 1. Incubare ser pacient 1h la 37C 2. Spalare 3. Incubare conjugat 30 min la 37C 4. Spalare IgM 5. Incubare substrat 20 min la t. camerei
Anti-IgM
6. Citire la spectrofotometru
HEPATITE VIRALE
Infectioasa HEPATITA VIRALA
A
NANB
Transmitere E Enterica
C B
Transmitere D Parenterala
Virusuri hepatitice F,G Coxackie, EBV, CMV, arbovirusuri
Serica
100
Soursa:
102
104
Digestiv Contact personal direct Sange (rar postransfuzional, IDU) (e.g., injection drug use, r 6 8 1010 10 10
TITRUL/ml
Incubatie: medie 25 zile (limite 15-50 ) Icter: <6 ani <10% 6-14 yrs 40%-50% >14 yrs 70%-80% Complicatii: hepatita fulminanta; colestaza(rare)- vindecare completa regula in hepatita A
simptomatologie
IgG
In Romnia, peste 80% din copiii sub 10 ani au trecut prin infectie
10
11
12
13
saptamana
profilaxie specific: vaccin inactivat profilaxie nespecific: igien personal sau gamaglobuline la contacti
femei gravide 15-25% - avorturi sau nasteri premature: 12 30% - moartea ftului in utero: 25%; -decesul mamei prin hepatit fulminant: 25%
Epidemii hidrice extinse n subcontinentul indian si n America Central Rata de atac: 1-15%; adulti (3 30%); copii (0.2-10%). Transmitere interpersonala minima Nu exista vaccin- eficienta Ig din sangele donatorilor din zone neendemice?
Hepatita E o zoonoz ?
Un nou virus desemnat swine VHE a fost identificat la porci Porcii peste 3 luni din unele cresctorii prezint anticorpi, desi nu au semne clinice. Porcii <3 luni care au anticorpi prezint semne minime de inflamatie hepatic - sugereaz evolutia unei infectii clinic inaparente. Virusul crosreactioneaz cu anticorpii VHE umani. Gena orf2 a VHE porcin are 80% similitudini cu gena VHE uman iar proteina codificat peste 90% asemnare n secventa de aminoacizi. Aparitia unei xenozoonoze? -n msura n care xenotransplantarea organelor de porc la om va deveni posibil.
Genomul VHB este ADN partial dublu catenar cu o spir lung (L, negativ) si una scurt (S, pozitiv). Pe spira lung se gsesc genele ce codific proteinele VHB: Antigenul de suprafa AgHBs mediaz atasarea la receptorii celulari si este implicat n virusneutralizare- Codificat de gena S- cu trei componente: preS1+preS2+S; Antigenul de centru AgHBc (gena c) care prin clivare produce AgHBe (marker de infectivitate); Reverstranscriptaza , ADN polimeraza, si proteinkinaza VHB(gena P-pol) Factori transactivatori ai unor gene celulare (gena x, implicat n cancerizare).
Dup completarea secventei spirei scurte, pe matrita ADN ds se sintetizeaz o copie ADN circular relaxat (DNAccc - DN closed covalent circular) care este transferat n nucleu n form episomal, neintegrat cromozomial. Pe acest ADN se sintetizeaz un ARN relaxat, numit ARN pregenomic. Acesta serveste fie ca ARNm pentru sinteza proteinelor virale, fie ca matrit pentru reverstranscriptaza care va sintetiza genomul progen.
cccDNA
Precore/core
Caracteristic pentru VHB este sinteza disproporionat ntre particulele virale complete (particulele Dane) cu genom ( 108 ) si cele vide (1014).
In serul bolnavilor se gsesc diferite forme ale VHB: particulele omogene, sferice de 42 nm care reprezint virionul complet (numite particule Dane) si particule neomogene, sferice sau filamentoase, (cu diametrul de 22 nm) constituind structuri lipsite de ADN si de infectivitate.
Lapte matern
80
80
60
Infectia cronica <5 ani, 30%-90% >5 ani, 2%-10% 60 Cronicizare prematura : 15%-25% Mortalitate datorita bolii hepatice cronice
40
40
.5%-1%
20 Simptomatologie 20
1-6 luni
7-12 luni
1-4 ani
VACCINARE Engerix B (SKB) 0 2 - 6 months (10 ug / 20 ug). IG SPECIFIVCE ANTI VHB- la 48 ore de la expunere; nou nascuti din mame AgHBs/Ag HBe pozitive. ALTE MASURI Triaj donatori, precautii universale
> 20,000 IU/mL > 20,000 IU/mL ADN VHB (> 105 (> 105 copii/mL) copies/mL) Histologie
Normal/moder
Activa
eliminarea unor subseturi de limfocite Tc sensibilizate (prin antigene care induc tolerant) blocarea functiilor LTc si APC prin sinteza exagerat de IL10 viremia nalt nu se asociaz cu transaminaze crescute lipsa citopatogenittii VHB. Immune Tolerance
Pierderea efectului tolerogen precipit liza imun indus a hepatocitelor infectate Generarea limfocitelor T citotoxice specifice infectiei VHB citoliza- mecanism imun mediat
Immune Clearance
Reactivation Phase
<
><
HBeAg-/anti-HBe+ (precore/core promoter variants) > 2000 IU/mL < 2000 IU/mL
>
ALT
Normal/mild CH
Inflamatie
Normal/mild CH
Moderate/severe CH
Hepatita B Cronica activa, cu AgHBe negativ la pacienti cu mutante precore/core Variantele precore previn sinteza AgHBe - sunt determinate de mutatia nonsens G1896A inltur
un semnal indispensabil ncapsidrii
Mutantele core sintetizeaz numai un produs truncat care nu este detectat de trusele ELISA pentru AgHBe/antiHBe. Cele mai frecvente mutatii sunt: A1762T si G1764A. Mutatiile duble reduc si productia viral cu peste 20%. Variantele core promoter previn initierea traducerii Sunt determinate de mutatii punctiforme la codonul start ATG. In majoritatea cazurilor, devin prevalente nc nainte de seroconversia anti HBe 6-15% -remisiuni spontane definitive (rata anual 0,5%)
Prognosticul mai rezervat dect n hepatitele cronice AgHBe pozitive att n ceea ce priveste probabilitatea cirozei ct si a carcinomului hepatic primitiv (CHP).
Evolutia Hepatitei B
400 milioane infectii cronice 500 000- 1 milion decese/an
1. Hepatita cronica persistenta asimptomatica 2. Hepatita cronica Activa simptomatica 3. Ciroza hepatica 4. Carcinom Hepatocelular
2 miliarde de infectii curente sau vindecate 4 milioane infectii acute/an 300-400 milioane infectii cronice
25% decedeaza datorita cirozei sau CHP - 1 milion de decese /an 60-80%~din cauzele de CHP 930, 000
Europeans ~ 2 million Asians
~ 400,000 South Americans HBsAg Prevalence > 8% - High 2-8% - Intermediate < 2% - Low
OMS global-VHB a 10-a cauza de mortalitate VHB este al doilea agent carcinogen dupa tutun VHB este de 100 ori mai contagios ca HIV
~ 350,000 Africans
Centers for Disease Control. Hepatitis B fact sheet. Available at: http://www.cdc.gov/hepatitis. 2008. Mahoney FJ. Clin Microbiol Hepatitis B statistics 1. WHO. Hepatitis B. 2002. 2. Maynard JE, et al. In: Viral Hepatitis and Liver Disease. New York: Alan R. Liss, Inc. 1988. 3. CDC. Epidemiology & prevention of vaccine-preventable diseases. The Pink Book. 8th ed. 4. CDC. MMWR. 2001;50:RR-11
Adefovir dipivoxil/ Hepsera 2002 analog nucleotidic; este fosforilat de kinaze celulare la metabolitul activ adefovir difosfat; activ si pe tulpinile VHB rezistente la LAM Entecavir/ Baraclude deoxiguanin analog nucleozidic de 2005
2006
Medicamente de prim intenie: adefovir, entecavir, peginterferon; *Entecavir pentru mutante LAMRez doza crete la 1 mg/zi
Transaminaze
AgHBe
ADN VHB
Fibroz
Formele
PrezentTrateaz
replicative ale genomului viral rmn n nucleul hepatocitelor infectate sub forma ADN ccc, - recderi la ntreruperea terapiei sau n conditii de imunosupresie.
VIRUSUL HEPATITIC C- FLAVIVIRIDAEAdsorbtia complex de receptori: CD 81, receptorul scavenger B I (SR-B I); moleculele HEPACIVIRUS
de adeziune DC-SIGN Si L SIGN, claudina 1 si receptorii pentru LDL- Susceptibilitatea crescut a vrstnicilor cu leziuni de ateroscleroz Traducere IRES mediata procesarea unui precursor poliproteic larg clivat ulterior de peptidaze semnal SP si proteaze virale in 10 proteine virale . Replicarea VHC - n zone alterate ale endoteliului citoplasmic - alctuiesc reteaua /nodul replicativ (membranous web); morfologic determin incluzii intracitoplasmice cu aspect spongios.
Eliberarea la nivelul polului apical al hepatocitului structur cu bogat continut LDL- celulele depletate de insulele membranare lipidice (rafturi) sunt slab productive n particule virale infectante
NS4A si p7 sunt viroporine- molecule proteice mici (n jur de 100 aminoacizi) extrem de hidrofobe care oligomerizeaza formnd pori n membranele celulelor infectate prin care virusurile se pot elibera n mediul extracelular- induc apoptoza.
Regiuni hipervariabile la capatul 5 -frecventa extrem de mare a mutatiilor intr-o secvent de 27 codoni care codific partial proteina E2 a anvelopei
Rata replicarii: 10 trilioane virioni/zi; Titruri plasmatice > 10 milioane copii ARN VHC/ml
rata mutatiilor 105 per nucleotid per ciclu; la fiecare sit din genom produc 105 mutatii punctiforme
HETEROGENITATE VIRALA 6 genotipuri majore -20-48% diferente Cvasispecii-SECVENTA CONSENS- 2-10%-diferente escape mutants
proteaza HCV NS3/4A cliveaza molecule adaptator ce intervin in caile de semnalizarea dependente de TLR si RIG I
Ecranarea antigenicitatii virale de lipoproteine plasmatice determina seroconversia tardiva, ntre 4 i 10 sptmni post-infectie. Aceast fereastr serologic mentine riscul transmiterii VHC prin transfuzii.
Virus
HTLV: donatii HIV: donatii
fereeastra serologica
51 zile (32-72) 22 zile (6-38)
risc rezidual
1,56/1 milion de 2,03/1 milion de 9.7 /1 milion de 15.8/1 milion de
75 zile (37-87) RiscHBV: Reduc Cost rezidual erea Per test donatii prin testare risculu (USD) acizi i nucleici
9.12 42.4% 30
2.72
1.48
72.0% 200
27.3% 27.3% 50.0% 5 50 200
2.03
1.48 1.01
TRANSMITERE VHC
PARENTERAL Transfuzii /transplant de la donator infectat IDU Rapid dupa initierea administrarii de droguri 30% prevalenta dupa 3 ani >50% dupa 5 ani de 4 x mai frecvent ca HIV Hemodializa Leziuni accidentale in md spitalicesc/nonspitalicesc Incidenta medie 1.8% dupa intepatura ac/obiect taios Transmitere dupa expunere oculara sau piele aparent fara leziuni rar Prevalenta 1-2% personal medicosanitar (< populatia generala) 10 ori mai scazut ca HIV PERINATAL Transmitere doar de la mame HCV-RNA pozitive la nastere Rata medie de infectie 6% Mai ridicata (17%)la coinfectie cu HIV Fara asociere cu mod nastere/alaptare Copii infectati asimptomatici, evolutie buna, hepatita severa rara
PATOGENIE- CLINICA
Incubatie medie 6-7 saptamani (226 ) Icter <20%) Rata caz fatalitate Scazut Cronicizare >85% Hepatita cronica activa 10%-60% Ciroza <5%-20% Mortalitate prin bola cronica hepatica 1%-5%
Absena rspunsului la tratament -30% din pacieni -chiar dac se nregistreaz scderea nivelului ncrcrii virale sub tratament nu se produce niciodat dispariia virusului din organism- recderea este regul.
Denumire VEVR Rspuns virusologic foarte rapid RVR Rspuns virusologic rapid EVR Rspuns virusologic timpuriu CVR Rspuns virusologic complet LVR (slow responderi) Rspuns virusologic lent
Criterii Scadere >1.4 log10 HCV ARN la 24 ore ; recul viral dupa 7 zile? HCV ARN nedetectabil la 4 saptamani ; predictor RSV <2 log declin in HCV ARN la 12 saptamani; predictor non RSV HCV ARN nedetectabil la 12 saptamani indica sansa maxima de RSV , nu exista risc recderi dup terminarea curei. HCV ARN nedetectabil intre 12-24 saptamani ; frecvent recderi dup terminarea tratamentului
RIBAVIRINA
800-1200 mg n 2 prize zilnic
IFN
PEG-IFN alpha-2b (PEG-Intron; ScheringPlough)- 1.5 mg/kgcorp o dat pe sptmn.
PEG-IFN alpha-2a (PEGASYS; Roche)- 180 g odat pe sptmn.
Imunomodulator Creste rata de mutatii VHC (viral fitness) Mutageneza letala a VHC Scade frecventa reculului viral Accentueaza apoptoza celulelor infectate
Antiviral Imunomodulator
stimuleaz activitatea citolitic a limfocitelor CD8 contribuie la limitarea accesului intralobular al limfocitelor implicate n rspunsul inflamator. cresterea markerilor de activare a macrofagelor (exemplu, CD 69); cresterea activittii celulelor NK si armarea perforinelor; adugarea ribavirinei creste rspunsul antiinflamator prin scderea citokinelor IL-2 si IL12 si cresterea IL-10.
Interferon (IFN)
Inhibata de E2 VHC
Inductia PKR
Activarea RN aza L
HBsAg
RNA HDV
Titru
IgM anti-HDV + IgM anti HBc HDV RNA AgHBs; ADN VHB
Ac antiHBs
Ac anti-VHD totali
Timp dupa
Titru
Timp dupa
Asociatia American pentru studiul bolilor hepatice http://www.aasld.org/netFORUMAASLD/eweb/docs/update Centrul pentru Controlul si Profilaxia Bolilor CDC Atlanta http://www.cdc.gov Clinical Care Options for Hepatitis http://www.clinicalcareoptions.com/hepatitis.aspx Medscape Hepatitis Resource Center http://www.medscape.com/resource/hbv Projects In Knowledge, Advanced Certificate Program in the Management of Chronic Hepatitis http://www.projectsinknowledge.com/1712 Viral Hepatitis Serology A-E: CDC-sponsored http://www.cdc.gov/ncidod/diseases/hepatitis/serology/
Hepatologie 2009 www.HepatologyTextbook.com Versiunea in limba romanahttp://www.fb4d.com hepatologie 2009 Versiunea in limba romana.
Traducerea a fost asigurata de colectivul Disciplinei de Virusologie, UMF Carol Davila Institutul de Virusologie St. S. Nicolau 285, sos. Mihai Bravu, Bucuresti Romania Tel/fax +40213242590
DIAGNOSTIC SEROLOGIC
ETAPE 1. Incubare ser pacient 1h la 37C 2. Spalare 3. Incubare conjugat (Ac anti IgG uman x enzima)- 1h la 37C 4. Spalare 5. Incubare substrat 20 30 min la temp camerei
2. Spalare 3. Incubare conjugat 30 min la 37C 4. Spalare 5. Incubare substrat 20 min la t. camerei
Ac Anti-IgM
6. Citire la spectrofotometru
TESTE DE CONFIRMARE
Tehnica
WESTERN BLOT
1. SDS-PAGE
2. BLOT (transfer) 3. DETECTIA ANTICORPILOR
Antiviral antibody
color
gp160 gp120
p66
p55 p51
gp41
p31 p24
WESTERN BLOT
NEGATIV
! Ferestra serologica
risc rezidual al transfuziei = 2/1 milion
INDETERMINAT
repeta la 6-8 saptamini alt test de confirmare
Ag p24- 1.48/1 milion ADN proviral1.48/1 milion ARN HIV 1.01/1 milion
HIV/SIDA
Human Immunodeficiency Virus
173
Regulation of Retroviral Infections World Foundation for AIDS Unit, Institut Research and Prevention Pasteur Paris, ,Paris, France France
b. 1947
b. 1932
174
1981- primele cazuri AIDS (sindrom de imunodeficienta umana dobandita ) raportate in SUA la homosexuali tineri, anterior sanatosi 1981-83- grupe de risc, AIDS- boala transmisa parenteral, sexual (hetero si homosexual), materno-fetal 1983 - se stabileste etiologia virala a bolii prin izolarea virusului - tulpina numita LAV (Lymphadenopathy Associated Virus) - Luc Montaigner, Institutul Pasteur din Paris / tulpina numita HTLV III (Human T-cell Leukemia Virus III) - Robert Gallo, Bethesda, SUA/tulpina ARV AIDS associated retrovirus (J. Levy, San Francisco, SUA) 1985 cele 3 tulpini sunt demonstrate a apartine aceluiasi virus redenumit HIV (Human Imunodeficiency Virus), Familia RETROVIRIDAE, GEN LENTIVIRINAE
Argumente SIV-HIV:
Similitudini in organizarea genomului Inrudire filogenetica Prevalenta in gazda naturala Areal geografic Cai plauzibile de transmitere
HIV-1 N Camerun
1992 - 1993 - variantele genomice ale HIV1-M sunt ncadrate n 8 clade (A-H), Media distantei intercladale este de aproximativ 27%, izolatele din aceeasi clada nu se deosebesc decit prin176 11% din nucleotide.
1999 - se descopera rezervorul natural al HIV1 SIV cpz- provenit de la o subspecie din Africa Centrala, Pan troglodites troglodites 2006- identificare v. la cimpanzei care traiesc in salbaticie in sud Camerun
3 transferuri distincte ale SIV cpz de la aceeasi specie: Pan troglodites troglodites
Gao.F et al, Nature, 1999, 397, 436-41Weiss RA, Wrangham RW, Nature, 1999, 397, 385-6. 177 Keele, BF, 2006 Science www. sciencexpress.org
Gp160-precursor
GENOMUL HIV: 1.Gene structurale: env (anvelopa-gp120, gp41) gag :antigene de grup: (capsida, matricea, nucleocapsida;) pol: cx polimerazic-(reverstranscriptaza, integraza, proteaza) 2.Gene reglatorii(rev, tat, nef) 3. Gene accesorii (de maturare)
Gp120superficiala P66-Rt
P55-Rt
Western
178
CELULE TINTA IN INFECTIA HIV- celule CD4 pozitive : limfocitele T helper macrofage celule foliculare dendritice (CFD)
179
Co-Receptori?
CD8+ Cells
CXCR4
180 celule Th nave si de memorie
Tropism HIV
Tulpini R5 M-trope Asociate cu transmiterea HIV
Tulpini R5/X4 Dual-trope
Forma modificata a CCR5- Deletie 32 bp Alela prezenta in forma homozigota- pacienti expusi dar neinfectati HIV Heterozigota- supravietuitori de lunga durata (non-progresori, lent progresori)
Polimorfism populational
In stadiile timpurii ale infectiei, tulpini:
Macrofagotrope
Nonsincitizante
rata replicativa scazuta
sincitizante
rata replicativa inalta
182
183
CRESTEREA LOGARITMICA
NUCLEU
In fiecare zi circa 10 miliarde de virioni Pol II rata mare de erori 1:2,000-10,000 INTEGRAZA 9749 nucleotides genom HIV LTR FIECARE virion progen poate avea cel putin o mutatie!
Tat, rev
CITOPLASMA
184
integraza
ADN proviral
Reverstranscriptaza virala
LTR HIV
ADN celular
COFACTORI
ARN HIV
Proteine celulare implicate in replicarea HIV: -TRIM5 (TRIpartite Motif) la primate intervine in degradarea cx de reverstranscriere in proteazomi
PROTEINE
MATURARE- ASAMBLAREELIBERARE
187
INHIBITORI DE INTEGRAZA
INHIBITORI DE PROTEAZA
188
Inhibitorii Fuziunii
CD4
Native Trimer
TNX-355
Fuzeon (Enfuvirtide)
Source: www.trimeris.com
Inhibitorii proteazei virale (PI)-blocheaza clivarea precursorului gag-pol n:- proteine structurale gag(p24, p17, p7) si pol- enzime virale (RT-aza, intrgraza si proteaza p32 nssi). Sunt medicamente active ca atare-blocheaz maturarea si inhib infectivitatea virionilor progeni att n celulele infectate activ ct si n cele infectate cronic, penetrarea lor intracelular fiind bun (inclusiv n macrofage si celule foliculare dendritice - CFD). De rezerva- Inhibitorii fuziunii (Fuzeon), antagonistii coreceptorilor CCR5 (Maraviroc, vicriviroc) si inhibitorii integrazei (Raltegravir)
191
December 2009
1.4 million
[1.2 1.6 million]
850 000
310 000
1.5 million
Caribbean
850 000
[700 000 1.0 million]
240 000
[220 000 260 000]
3.8 million
[3.4 4.3 million]
2.0 million
[1.8 2.2 million]
22.4 million
[20.8 24.1 million]
Oceania
59 000
[51 000 68 000]
Estimated number of adults and children newly infected with HIV, 2008
Eastern Europe Western & Central Europe & Central Asia North America
55 000
[36 000 61 000]
30 000
35 000
110 000
Caribbean
75 000
[58 000 88 000]
20 000
[16 000 24 000]
280 000
[240 000 320 000]
170 000
[150 000 200 000]
1.9 million
[1.6 2.2 million]
Oceania
3900
[2900 5100]
25 000
[20 000 31 000]
13 000
20 000
87 000
Caribbean
59 000
[46 000 71 000]
12 000
[9300 14 000]
270 000
[220 000 310 000]
77 000
[66 000 89 000]
1.4 million
[1.1 1.7 million]
Oceania
2000
[1100 3100]
<100
[<100]
<100
[<100]
20 000
Caribbean
16 000
[11 000 23 000]
11 000
[7400 16 000]
15 000
[7600 24 000]
140 000
[91 000 200 000]
31 000
[22 000 40 000]
1.8 million
[1.0 2.5 million]
Oceania
1500
[<1000 2600]
December 2009
Fereastra serologica
Virionii provin din celule CD4+ infectate recent, activate si in curs de diviziune Raspuns citotoxic eficient Productia de novo de limfocite CD4+ compenseaza liza produsa direct de virus si cea CD8 indusa
CD4
ARN HIV
Walker BD, Goulder PJ. AIDS. Escape from the immune system. Nature. 2000;407:313-4. Catedra de Virusologie UMFCarol Davila- 2009
3. ARC Pierdere masiva de celule CD4+ celule tinta pentru replicarea virala Celulele Dendritice prezinta antigenele HIV pe masura ce sunt activate
Evolutia infectiei HIV Replicare viral masiv n tesutul limfoid, Depletia limfocitelor T CD4+ infectate, Hiper-reactivitate imun generalizat. Catedra de Virusologie UMF Carol Davila- 2009
MODEL PENTRU EXPLICAREA ACTIVARII SI TUROVERULUI CRESCUT AL LT CD8 + Distrugerea GALT permite translocarea produse microbiene liganzi TLR in circulatia sistemica
Atragerea celulelor efectorii la siturile privilegiate ale replicarii HIV disfunctionalitati in ciclul celular si cresterea apoptozei
Expunerea celulelor imunocompetente la liganzi TLR determina activarea hiper-activare imuna APC si TCR si secretie masiva citokine
Cresterea expresiei CD69 pe suprafata LT CD8+ determina retinerea acestora in gg limfatici- activarea CD4+ efectorii si de memorie cu intrare ciclu celular si apoptoza
Anti-HIV Strategies
Highly
Active AntiRetroviral Therapy
HAART: 2NRTI+ 1 PI 2NRTI+ 1 NNRTI
Catedra de Virusologie UMF Carol Davila- 2009
Highly
Expensive AntiRetroviral Therapy
PROFILAXIA TRANSMITERII MATERNO-FETALE Delivery Plasma HIV RNA Levels and Perinatal Transmission in WITS, 1990-1999
Blattner W. XIII AIDS Conf, July 2000, Durban S Africa (LBOr4)
40
% Transmission
32% 21%
30 20
11%
10
6% 1%
<400 4003000 3000- 40000- >100000 40000 100000
Newborn
2mg/kg q 6
ZDV syrup hr x 6 wk
Target: Intrapartum
Target: Postpartum
ACTG 076: Three part ZDV regimen Transmission rate 25% (placebo) to < 8% (ZDV)
HIVNET 012 in Uganda - 200 mg oral nevirapine at onset of labor + 2 mg/kg oral nevirapine given to infant within first 3 days. Transmission rate 25% (placebo) vs. 13% (NVP)
C-section
Protective effect of C/S - Risk of transmission 50%< Elective C/S + ARV - Risk of transmission 87%<
Catedra de Virusologie UMF Carol Davila- 2009
Adrese de Internet utile celor interesati de diagnosticul, tratamentul si prevenirea infectiei HIV
http://hivatis.org/atisnew.html (HIV AIDS Treatment Information Service) http://www.actis.org (AIDS Clinical Trials Information Service) si de aici prin - http://www.actis.org/relatedwebs.html o suita de alte situri grupate pe capitole de interes (prevenie, transmitere, vaccinuri, infectia HIV pediatric, reagenti pentru diagnostic, etc.), http://hivinsite.ucsf.edu/InSite extrem de complexa baza de date a Universittii din California, San Francisco, cu statistici de ultim or si informatii despre preventie, transmitere, terapie, cercetri multidisciplinare. http//www.medscape.com/Home/Topics/ID/AIDS.html- o adresa indispensabil tuturor specialistilor implicati n tratarea pacientilor HIV pozitivi. http://www.cdc.gov/std/program- pentru preventia bolilor transmisibile sexual (STD), a TBC si SIDA http://www.atdn.org/access/drugs.html-date actualizate despre medicamentele antiretrovirale
Catedra de Virusologie UMF Carol Davila- 2009
AMPLIFICAREA SEMNALULUI
B-DNA (branched DNA)
B-DNA
Amplifies signal
PCR
Amplifies a Targeted Sequence
Chromosome
Target Amplification
1 cycle = 2 Amplicon
No. of Cycles 1 2 3 4 5
2 cycle = 4 Amplicon
3 cycle = 8 Amplicon
4 cycle = 16 Amplicon
5 cycle = 32 Amplicon
6 cycle = 64 Amplicon
6 20 30
RT- PCR
Reverstranscriere
+ PCR
DETECTIA AMPLICONULUI
Electroforeza in gel de agar colorare cu bromura de ethidiu si comparare cu markeri de GM cunoscuta
Hibridizare cu sonde moleculare marcate complementare si apoi detectie (+/spectrofotometrica)
Hibridizare
Avidin-horseradish peroxidase (Av-HRP conjugate) Biotin Tetramethylbenzidine (TMB) Substrate
BSA
Microwell Plate
Addition of Substrate
Hydrogen Peroxide
MOLECULARE
TESTE CANTITATIVE -Rt-PCR -b-DNA TESTE DE GENOTIPARE Secveniere nucleotidic, RFLP, LiPA
Diagnostic HPV
1. Detectia prezentei virusului / Demonstrarea infectiei active - detectia ADN-ului viral din leziune 2. Decelarea genotipului de virus implicat in infectie
Genotipare HPV :
Linear Array HPV (CE-IVD); Roche 37 genotipuri
6, 11, 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 40, 42, 45, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 58, 59, 61, 62, 64, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73 (MM9), 81, 82 (MM4), 83 (MM7), 84 (MM8), IS39, and CP6108. Inregistrat in UE bazat pe PCR urmat de hibridizarea acizilor nucleici
Snge - 3-5 ml prin punctia venoasa aseptica, pe anticoagulant. Virusuri frecvent izolate: virusuri care disemineaza viremic si agentii etiologici ai febrelor hemoragice. Materiile fecale - 4-8 g in solutie de Mg SO4 (stabilizeaza infectivitatea enterovirusurilor). Virusuri frecvent izolate: enterovirusuri, rotavirusuri, calicivirusuri, mai rar adenovirusuri enterice. Secretii nazo faringiene a) spalatura nazo faringiana se obtine cu ajutorul unor tampoane cu coada (sterile) introduse in cornetul nazal inferior. b) aspiratul nazofaringian se obtine folosind un speculum nazal prin administrarea a 3 ml ser fiziologic in nari cu o seringa atasata la un tub de plastic. c) lavaj traheobronsic se obtine prin bronhoscopie in conditii speciale de catre personal calificat Virusuri frecvent izolate: virusurile gripale A si B, virusurile paragripale, adenovirusuri, rhinovirusuri, coronavirusuri, virusul respirator sincitial, v.rujeolos, v. rubeolos, v. urlian. Lichid cefalorahidian (LCR) - 5-6 ml prin punctie rahidiana, inainte de inceperea tratamentului. Virusuri frecvent izolate: virusul rabic, unele arbovirusuri.
PRODUSE PATOLOGICE
PRODUSE PATOLOGICE
Saliva. Se recolteaza saliva de langa ductul Stenon cu tampon steril. Frecvent este limitata la diagnosticul infectiei rabice. Lichid vezicular - Colectarea lichidului din vezicule, bule, pustule se face dupa dezinfectia prealabila a regiunii cutanate sau mucoase. Se perforeaza vezicula cu un ac atasat la o seringa de tuberculina sau cu ajutorul unei pipete. Virusuri frecvent izolate: HSV I, HSV II si VZV. Urina -100 ml - orice specimen urinar obtinut prin abstinenta de la mictiune timp de 2 ore este adecvat pentru diagnosticul virusologic. Virusuri frecvent izolate. V. citomegalic, v. rujeolos. Tampoane vaginale, lavaj cervico-vaginal, tampon uretral de la nivelul colului uterin si uretrei (atat la femeie cat si la barbat); cu tampoane sterile, respectiv periuta citologica (pentru uretra masculina), fara toaleta prealabila a regiunii. Virusuri frecvent izolate: virusuri herpetice si papilomavirusuri; diagnostic BTS, uretritelor, leziunilor veziculare si hiperplazice genitale. Biopsia tisulara. Fragmente de organ recoltate n ctiva ml de solutie salina + ser de vitel 10% + antibiotice n concentratiile folosite n culturile de celule.
2. Detectia directa a :
Particulelor virale EM , IEM Antigene virale ELISA, IF Genom viral PCR; Rt-PCR
3. Teste Serologice:
a. Ac virus- specifici tip IgM b. seroconversia in ac virus- specifici tip IgG
Diagnosticul serologic
pe prob unic de ser - anticorpi antivirali de tip IgM (rspunsul imun primar) - ELISA de captur pe probe pereche de ser
- proba I - la debut - proba II - la 2-3 sptmni
Dem. virusului/componente
Suspiciunea de viroz
IMUNITATE ANTIVIRALA
Raspunsul imun nespecific (innascut)
Efectori umorali: interferoni Efectori celulari: celule NK
ROLUL INTERFERONILOR
PAMPs -pathogenassociated molecular patterns
Legati de membrana-Toll like receptors (TLR3) Citoplasmatici RIG-I- gena inductibila de acid retinoic (DEAD-box protein 58 )- motivul conservat Asp-GluAla-Asp (DEAD)- ARN helicaza- implicata in legarea si alterarea structurii secundare a ARN
Efectele biologice ale IFN: - antiviral, mai ales pe v. ARN, - anticelular inhib diviziunea celulelor normale si canceroase, - imunomodulator stimuleaz sau inhib actiunea altor citokine.
Sinteza de IFN
IFN cuplat la receptori (o categorie de receptori pentru IFN alfa/beta, alt categorie de receptori pentru IFN gama) recruteaz tirozinkinaze din familia Janus care fosforileaz proteinele citoplasmatice STAT care odata fosforilate, migreaz n nucleu activnd genele inductibile de interferon
JAK- Janus kinase ( "Just another kinase") ;STAT -signal transducer and activator of transcription ISGF3 -IFN-stimulated gene factor 3 (contine STAT1, STAT2 si un alt factor de transcriptie-IRF9 ISRE -IFN-stimulated response element ;ISGs -IFN-stimulated genes; GAS -gamma activated sequence
siRNA (small interfering RNAs) ARNds 21-23 bp, )+ molecule proteice -helicazelor si nucleazelor
Andrew Z. Fire
1/2 of the prize USA Stanford University School of Medicine Stanford, CA, USA b. 1959
Craig C. Mello
1/2 of the prize USA University of Massachusetts Medical School Worcester, MA, USA b. 1960
siRNAs inductori puternici ai IFN si altor citokine inflamatorii in vivo and in vitro
CELULE IMUNOCOMPETENTE
RECEPTORI LIMFOCITARI
Limfocite B- receptori - imunoglobuline de suprafata
ACTIVAREA LIMFOCITELOR B
CLASELE DE IMUNOGLOBULINE
Efectorii rspunsului imun celular: APC-antigen presenting cells-Celule foliculare dendritice (CFD ) si Macrofage Limfocitele T helper (CD4+) Limfocitele T citotoxice (CD8+)
CFD
Proteinele virale (mai ales cele din anvelop sau capsid) nu sunt recunoscute ca atare de TCR, clivare n peptide, unele cu rol determinant n protectie - epitopi dominanti
Peter C. Doherty
1/2 of the prize Australia St. Jude Children's Research Hospital Memphis, TN, USA b. 1940
Rolf M. Zinkernagel
1/2 of the prize Switzerland University of Zurich, Institute of Experimental Immunology Zurich, Switzerland b. 1944
"for their discoveries concerning the specificity of the cell mediated immune defence"
MOLECULE CMH
ROLUL LIMFOCITELOR Th
Exist dou subseturi de celule Th, dupa profilul citokinelor sintetizate: Th1 - IL2 si interferon gama regleaza RI celular Th2 - IL-4, IL-5 , 6, 10 regleaza RI umoral
Ag Ag Ag
APC
Th2
Th1
IL2 + IFN gama Tc cell
Granulocyte
B cell
Macrophage
NK NK cell
ROLUL LIMFOCITELOR Tc
Tc cell
Perforin polymerizes Ca++
Perforin monomers
Tc cell
Granzymes
Polyperforin channels
Target cell
Target cell
LIMFOCITE T CITOTOXICE
MACROPHAGE
VIRUSURI SI CANCERE
RETROVIRIDAE-ONCOVIRINAE HEPADNAVIRIDAE- VHB HERPESVIRIDAE- EBV; HHV8 PAPOVAVIRIDAE-PAPILOMAVIRINAE
273
PAPILOMAVIRUSURI
Expresia genelor L1 si L2 limitata la keratinocitele diferentiate din stratul extern
E4 implicat in eliberare disruptia citoskelet E5 destabilizeaza expresia multor proteine membranare-inclusiv CMH- previne distrugere celule infectate de LTc 274
Expresia genelor E1 si E2 necesara replicarii Woodman et al. Nature Reviews Cancer 7, 1122 (January 2007) | doi:10.1038/nrc2050 si mentinerii ADN viral in stare epiomala.
LCR-Controlul expresiei genelor virale contine enhanceri care pot fi activati de factori celulari sau virali
P53 -factor de transcriptie activeaza expresia p21, un inhibitor al complexului ciclinelor. Control progresie ciclului celular in toate fazele
Rb previne intrarea celulei in faza S. Rb nefosforilat se leaga de factor de transcriptie E2F si previne activarea gene necesare pentru sinteza ADN
277
activare necontrolata a genelor implicate in sinteza ADN (c-myc si c-fos, ADN polimeraza).
278
16, 18, 31, 33, 35, 39, LGSIL; HSIL ; cancer 45, 51, 52, 56, 58, 59, alte
68, 73, 82 cancer cap-gat
280
INFECTIA HPV
Incubatie variabila (2->6 luni) Infectie asimptomatica posibila (latenta) Localizareuretra, penis, scrot, vulva, vagin, cervix, perineu, perianal (autoinoculare sex nonpenetrativ) Infectie multipla posibila 74% -persoane 15-24 ani
281
Papiloma virusuri se gasesc la > 95% din femeile cu cancer de col uterin
Harald zur Hausen 1/2 of the prize German Cancer Research Centre Heidelberg b. 1936
282
Progresia de la infectia HPV persistenta la cancer invaziv 10-15 ani. Leziuni cervicale pre-invasive gradate pe baza aspect HP CIN 1 -CIN 3 (cea mai scazuta probabilitate de regresie spontana)
Screening
La 3 ani de la inceperea vietii sexuale/ sau la 21 ani Citologie Pap conventionala sau in faza lichida +/- testare ADN HPV
Incidenta cancer cervical pre-PAP 30- 40/100 000 post PAP 8.8/ 100 000 (cca 75% reducere), de 15 x< cancer de san
LSIL(low-grade squamous intraepithelial cells) displazie usoara, CIN I (Cervical intraepithelial neoplasia) - Colposcopie si biopsie HSIL(high grade squamous intraepithelial cells), displazie moderata/severa, CIN II/III,carcinom in situ- Colposcopie si biopsie si/sau chiuretaj endocervical Tratament cu LEEP, crioterapie, laser, conizatie sau histerectomie
283
RECOMANDARI OMS
Screening anual nu este recomandat la nici o grupa de varsta Screening periodic femei >30 ani; Pentru grupa de varsta 2549 ani screening o data la 3 ani Daca screeningul nu se poate realiza periodic varsta optima este intre 35- 45 ani; Pentru femei cu varsta> 50 de ani screening o data la 5 ani Screening nu este necesar pentru femei >65 ani daca ultimele 2 frotiuri PAP au fost negative
284
CANCER DE COL UTERIN 270 000 decese/an 70% din cazuri datorate HPV 16, 18
285
Vulva, vagina
Anus Mouth
40
90 3
80
92 95
0.12
0.23 0.07
Oro-pharynx
12
89
0.05
286
GARDASIL Merck-cvadrivalent- genotipurile HPV 16/18; HPV 6/11 3 doze 0, 2 ,6 luni-acceptat iunie 2006 de FDA si septembrie 2006 de EMEA (vaccinare fete virste 9-15 ani) introdus in UE (27 tari)- din octombrie 2007 si alte tari din regiunea europeana OMS (Bosnia si Herzegovina, Croatia, Islanda, Israel, Liechtenstein, Norvegia, Rusia, Serbia, Elvetia, FYR Macedonia, Turcia.) . Protectie impotriva displaziei cervicale si vulvare de grad inalt, cancer cervical si papiloame genitale produse de infectia cu HPV 6, 11, 16, 18
CERVARIX
288
ROMANIA Scaderea varstei medii la inceperea vietii sexuale 1 din 5 adulti tineri > 1 partener sexual in ultimele 3 luni 58,9% din barbati si 52,9% din femei utilizeaza prezervativul la primul contact sexual sau in cursul activitatii sexuale curente
289
290
100% din femeile vaccinate cu varste 1126 ani au dezvoltat un raspuns umoral cu titru inalt de VACCINAREA NUluna a anticorpi (de 10- 10 000ade orisi>apoi constant cel INLOCUIESTE SCREENINGULdecat in infectiile naturale) varf in 7 a declin pana in luna 18 a putin 5 ani) CITOLOGIC/VIRUSOLOGIC PERIODIC SI NU TREBUIE SA
292
293
Rb P53 cicline
G1
Stabilitate genica
294
CAPACITATE CITOTOXIC FOCALIZAT NUMAI ASUPRA CELULELOR CANCEROASE Deletia structurilor care leag receptorul natural si redirectionarea adsorbtiei ctre proteine exprimate de celulele canceroase- Adenovirus delta -24 RDG Mutante virale cu gene timpurii deletate - Selectia unor mutante virale care se replic numai n celulele tumorale care au alterat expresia unor antioncogene. Mutante virale dependente de promotori activi doar intra-tumoral ( Adenovirus reglat de PS; adeno si herpesvirusuri reglate de
Doi vectori virali HSV-1- G207 and NV1020, cu multiple mutatii (ce aduc gena pt TK sub controlul unui alt promotor) si nu au capacitate de replicare in celulele ce nu se divid Infectie virala litica genereaza expresia genelor pentru TK si sensibilizeaza celulele canceroase la ganciclovir (trialuri faza i/II pt gliom si cancer colorectal cu metastaze hepatice )
Mutante adenovirale cu genele timpurii deletate ex: ONYX-015- adenovirus ce nu exprima proteina E1B se replica doar in celule deficiente in expresia p53 Primul adenovirus oncolitic a nceput s fie aplicat pe scar larg n China din 2005 pentru tratamentul carcinomului nazofaringian. Adenovirusurile oncolitice sunt folosite experimental si n tratamentul unor glioame sau unor tumori hepatice. Efectul este sinergic n cazul administrrii simultane de citostatice.
297
298
3. PLATOU -Maturarea proteinelor virale -Asamblarea acizilor nucleici cu proteinele structurale -Eliberarea virionilor progeni
2. CRESTERE LOGARITMICA -Sinteza de proteine virale timpurii: (rol enzimatic si in edificarea incluziilor) -sinteza de noi acizi nucleici virali -sinteza de noi proteine virale structurale
ADSORBTIA
CORECEPTORI
Internalizare prin fuziune-v. anvelopatefactori de fuziune prin endocitoza mediata de receptori- v. Neanvelopate
Dupa Endocytosis, Edited by Ira Pastan and Mark C. Willingham, Plenum Press, N.Y., 1986
INCLUZII
Venkatraman Ramakrishnan 1/3 of the prize United Kingdom MRC Laboratory of Molecular Biology Cambridge, UK b. 1952
Thomas A. Steitz 1/3 of the prize USA Yale University New Haven, CT, USA; Howard Hughes Medical Institute b. 1940
Ada E. Yonath 1/3 of the prize Israel Weizmann Institute of Science Rehovot, Israel b. 1939
CLASIFICAREA BALTIMORE
I: virusuri ADN ds (Adenoviruses, Herpesviruses, Poxviruses) II : virusuri ADN ss (Parvoviruses) III: : virusuri ARN ds ( Reoviruses) IV: : virusuri ARNss (+) ( Picornaviruses) V: : virusuri ARN SS() (Orthomyxoviruses, Rhabdoviruses) VI: : virusuri ARN ss RT (Retroviruses) VII: : virusuri ADNds-RT ( Hepadnaviruses)
MATURARE-ASAMBLARE-ELIBERARE
In maturare si asamblare intervin chaperoni -dirijeaza asamblarea post-translationala, impachetarea proteinelor si previn agregarea in structuri nefunctionale a lanturilor proteice nou sintetizate. -sunt implicati in transportul transmembranar
ELIBERARE-INMUGURIRE
SUMAR
Replicarea virusurilor se desfsoar n trei faze succesive. ECLIPSA ( adsorbtie, internalizare si decapsidare)
Adsorbtia este urmarea cuplrii unor proteine virale superficiale (liganzi sau antireceptori) de receptori situati pe membrana celular. Acestia sunt de nalt afinitate (ce induc si modificari conformationale in virionii adsorbiti) si uneori si de joas afinitate (co-receptori) Internalizarea se realizeaz fie prin viropexie (endocitoz), fie prin fuziunea anvelopei virale cu membrana celular Decapsidarea este un proces simultan cu internalizarea n care intervin determinant proteaze celulare. Absenta acestor proteaze fac celula nesusceptibil sau partial permisiv la infectia viral
FAZA DE CRESTERE LOGARITMIC ( sinteza proteinelor timpurii, sinteza genomurilor progene , sinteza proteinelor tardive (structurale)
fidelitatea replicrii este mai mare la virusurile ADN comparativ cu virusurile ARN. In plus, virusurile mai complexe sunt mai stabile fizic dect virionii mici.
FAZA DE PLATOU (maturare, asamblare si eliberare a virionilor progeni din celula infectat)
Asamblarea este guvernat de legile simetriei care tind s asigure soliditatea particulei virale ca element cu minim energie liber. Uneori, n procesul de asamblare intervin proteinele chaperon (petitor) care dirijeaz capsomerele virale spre areale ale membranei celulare unde se asambleaz virionii progeni. Acestia din urm se elibereaz prin nmugurire (n cazul virusurilor anvelopate) sau prin citoliz (n cazul virusurilor neanvelopate).
http://www.virology.net/Big_Virology/BVFamilyGroup.html
http://www.virology.net/Tutorials.html.-puteti nvta replicare viral,- nu trebuie dect s v decideti dac vreti s fiti pentru cteva minute un poliovirus, un coronavirus sau chiar HIV! Dac nu stiti ceva sunteti rapid trimisi la studiu, ctre foarte multe situri specializate
Aceleasi informaii, n versiuni mai sofisticate se obtin de la: http://www2.tulane.edu si www.virology.science.org/jov. (Jov este sintagma pentru Journal of Virology)
VIRUSURI SI CANCERE
The Nobel Prize in Physiology or Medicine 2009 Elizabeth H. Blackburn, USA Carol W. Greider, USA Jack W. Szostak, USA for the discovery of how chromosomes are protected by telomeres and the enzyme telomerase
VIRUSURI SI CANCERE
Premiul Nobel pentru medicina sau fiziologie
1966-Peyton Rous, USA -"for his discovery of tumour-inducing viruses 1911descopera virusul sarcomulyui Rous
c-onc
Gene reglatorii
ONCOGENE VIRALE-v-onc
--fara introni -Nu sunt sub actiunea reglatorie a promotori celulari -Mutatii sau deletii ce altereaza produsul proteic -Produs v-onc e exprimat fuzionat cu alte proteine virale
PROTO-ONCOGENELE
Codifica proteine implicate in controlul cresterii si diferentierii celulare
Oncogenele RAS (K-RAS, N-RAS, and H-RAS,) sunt activate prin mutatii punctiforme in mai mult de 20% din cancerele umane (prevalent in cancer pancreatic, pulmonar si de colon)
Factori de crestere:sis~PDGF
Receptori pentru factori de crestere: EGFR, HER2/neu erb B/receptori hormonali: erb-A Mesageri secundari: PTK mb: src PTK solubile, citoplasmatice: ras Factori de Transcriere: jun,fos, myc
VIRUSURI SI CANCERE
RETROVIRIDAE-ONCOVIRINAE HEPADNAVIRIDAE- VHB HERPESVIRIDAE- EBV; HHV8 PAPOVAVIRIDAE-PAPILOMAVIRINAE
Human T cell lymphotropic virus -1 (HTLV-1)-Adult T cell leukemia, Sezary T-cell leukemia Mouse mammary (Africa, Caribbean, Japanese Islands) tumour virus Simian foamy virus Human T cell lymphotropic virus -2 (HTLV-2)Hairy cell leukemia
Endogenous retroviruses (ERV) -8% of human DNA represents fossil retroviral genomes, + LINE elements (long interspersed elements)and other retrotransposons
Catedra de Virusologie UMFCarol Davila- 2009
ONCOVIRUSURI
Genom ARN
TRANSFORMANTE in vitro si rapid oncogene in vivo au oncogene replicare defectiva NON-TRANSFORMANTE in vitro si lent oncogene in vivo nu au oncogene ACTIVARE INSERTIONALA
Rt
ADN proviral
Integraza
Integrare in genom celular
cofactori activatori
genom ARN +PROTEINE
ONCOVIRUSURI TRANSFORMANTE in vitro, rapid oncogene in vivo Unele retrovirusuri au gene suplimentare-v-onc Rous Sarcoma Virus
LTR U5 GAG POL ENV U3 LTR
SRC
LTR
RETROVIRUSURI NON-TRANSFORMANTE nu au oncogene virale, dar integrarea Provirusului ADN se realizeaza intotdeauna langa o protooncogena, care trece sub controlul promotorului transcriptional viral- activare aberanta
Genom ARN
U5
GAG
POL
ENV U3
R
Integraza Integrare
in cazul tumorilor ALV se integreaza in genom celular INTOTDEAUNA in ACELASI LOC- linga C-myc! ONCOGENEZA PRIN ACTIVARE INSERTIONALA
HEPADNAVIRIDAE- VHB
CHP - a 5-a localizare ca frecven a bolii canceroase i a 3-a ca mortalitate Incidena anual a CHP, 500 000 cazuri jumtate din CHP sunt asociate infeciei persistente cu VHB purttorii cronici de AgHBs au un risc de 25-37 x > de CHP
Proces multifactorial:
China: 500,000 - 1 milioane cazuri noi de CHP/an; Taiwan: RR CHP de 217 x > la purtatori cronici AgHBs Incrcarea viral; genotipul B peste 50% din cazurile CHP n Taiwan Factori alimentari- aflatoxina B1- metabolit al ciupercii Aspergillus flavus care contamineaz hrana vegetal -substane care rup helixul ADN. In Europa, 90% din CHP dupa ciroza avansate Coinfecia cu VHC, HIV Obezitatea, diabetul,alcoolism
Genomul viral poate induce deleii n genomul hepatocitar la situl de integrare--gene care afecteaz ciclul celular, viabilitatea celular sau cascade de semnalizare membran nucleu Amplificarea genica a unui segment de ADN ce contine protooncogena-supraexpresia proteinei Translocatii cromozomiale ce aduc proto-oncogena sub controlul unui promotor diferit- expresie aberanta
Genom ADN Proteinele reglatorii codificate ARNm de genele X si pre S2hiperexpresia unor inhibitori ai apoptozei genom ADN si ADNccc integrat
RNA polymerase II
Reverstranscriptaza
HERPES VIRUSURI
Epstein-Barr Virus Limfom Burkitt Carcinom Nasofaringean Boala limfoproliferativa Transforma limfocitele B umane in vitro
HIPEREXPRESIA UNOR PROTEINE VIRALE TIMPURII: FACTORI DE CRESTERE AUTOCRINI PT. LIMFOCITELE B RECEPTORI AI FACTORILOR DE CRESTERE ACTIVATORI AI UNOR ONCOGENE CELULARE
LIMFOM BURKITT- Latenta cu antigene virale asociate EBNA - Epstein Barr nuclear antigens Boala limfoproliferativ post transplant. antigene asociate LMP latent membrane proteins,
myb
myc
myc
fes
Catedra de Virusologie UMFCarol Davila2009