MINISTERUL EDUCAȚIEI ȘI CERCETĂRII AL REPUBLICII MOLDOVA

UNIVERSITATEA DE STAT DIN MOLDOVA

GRĂDINA BOTANICĂ NAȚIONALĂ (INSTITUT)
„ALEXANDRU CIUBOTARU”

CONSERVAREA FITODIVERSITĂȚII PLANTELOR

RARE DIN FAM. AMARYLLIDACEAE L. PRIN
VITROCULTURĂ

Conducător științific: Ciorchină Nina, dr., conf. cercet.

Realizat de: Ghereg Melania, drd. Anul IV

Chișinău, 2023
Scopul: Elaborarea tehnologiilor de multiplicare ale speciilor rare
din fam. Amaryllidaceae întru conservarea lor in situ și ex situ prin
vitroculturi.
 Prelevarea materialului inițial donator din habitatele naturale
ale speciilor studiate;
 Evidențierea explantului pentru inoculare și sterilizarea
acestuia;
 Întocmirea compoziției mediului pentru inițierea proceselor de
micropropagare ale plantelor în cultura in vitro;
 Microclonarea și micropropagarea fiecărei specii, descrierea
protocolului multiplicării;
 Studierea particularităților anatomice și biochimice ale speciilor
cercetate;
 Înființarea unei colecții în Grădina Botanică Națională (Institut)
„Alexandru Ciubotaru”;
 Reintroducerea plantelor în habitatele naturale.
 OBIECTELE DE STUDIU

Încrengătura
Regnul Plantae Clasa Liliopsida Ordinul Asparagales
Magnoliophyta

Familia Amaryllidaceae

Genul Sternbergia
Genul Leucojum 1. St. colchiciflora
Genul Galanthus
1. L. aestivum
1. G. nivalis
2. G.plicatus
3. G. elwesii

Leucojum aestivum L.

Sternbergia colchiciflora Galanthus plicatus Galanthus elwesii

Galanthus nivalis L.
Waldst. & Kit. Bieb. Hook.
 ACTUALITATEA
Capacitatea de formare a bulbilor este scăzută. Dezvoltarea plantelor din semințe durează cinci
Rata de înmulțire nu este satisfăcătoare deoarece, sau mai mulți ani până când au capacitatea de a
se formează 1-2 bulbi pe an. produce flori și semințe.

Sunt specii de plante rare cu grad ridicat de

vulnerabilitate, incluse în Cărțile Roșii ale Europei
și R. Moldova, precum și în listele IUCN.

Au proprietăți medicinale (conțin alacaloizi toxici: Sunt colectate intens pentru decorarea
Defrișările pădurilor și distrugerea
tazetina, licorina, galantamina etc. care au efecte grădinilor, balcoanelor.
habitatelor naturale
antimicrobiene, imunostimulatoare, antivirale)
Inițierea in vitro reprezintă o alternativă a regenerării speciilor de plante rare și pe cale de dispariție,
dat fiind faptul că de obicei materialul vegetal este limitat. Prelevarea unor cantități mici de țesut din
plantă nu dăunează populațiilor in situ.

Identificarea locului de creștere al

speciilor cercetate în habitatul Colectarea materialului donator Sterilizarea explantelor
natural

Inocularea explantelor Multiplicarea in vitro Înrădăcinarea plantulelor in vitro

Transferarea și aclimatizarea la
Plantarea în teren deschis
condiții ex vitro

Figura __Schema introducerii plantelor rare în cultura in vitro

1. Prelevarea materialului inițial donator din habitatele naturale ale speciilor studiate

4
3

1 2 2

Figura _. Deplasări expediționale pentru

prelevarea materialului donator

(1 – G. nivalis, s. Dobrușa, r. Șoldănești;

2 – G. plicatus, s. Capaclia, r. Cantemir;
3 – L. aestivum, s. Sărata-Răzeși, r. Leova;
4 – St. colchiciflora, s. Mereni, r. Anenii
Noi).
3 4
 2. Evidențierea explantului pentru inoculare și sterilizarea acestuia

A B C
Figura __ Tipuri de explante testate pentru inițierea in vitro (A – semințe, B – fragmente de frunze, C – bulbi)

Viabilitatea explantelor
în urma sterilizării

100

Semințe Fragmente de frunze

Bulbi
 I-a Etapă (Zona nesterilă) A II-a Etapă (Zona sterilă)

Colectarea explantului de la planta-donor Imersarea în Etanol (70%) - 1 min.

Îndepărtarea solului și a impurităților,cu plasare sub un jet de apă Clătirea cu apă distilată autoclavată
curgătoare (5-6 ore)

Plasarea în Clorură de mercur (0,1%), urmată de clătiri cu apă

Plasarea materialului vegetal în soluție cu antibiotic {Denumirea} distilată autoclavată

Spălare cu detergent din comerț (Fairy), urmat de clătiri până la

dispariția spumei. H2O2 (0,3%) - 15 min.

Spălare cu Tween 20, urmat de clătiri până la dispariția spumei

Clătiri succesive cu apă distilată autoclavată

Menținerea în soluție de KMnO4 (0,05%) - 20 min. Plasare pe medii nutritive.

Clătirea cu apă distilată

Figura __ Schema de asepsizare a materialului vegetal cu reagentul sterilizant

optim (Clorura de mercur, 0,1%)
 Inocularea și micropropagarea
Materialul vegetal pentru inițierea culturii in vitro a constat din bulbi de cca 0,5-1,0 cm
în diametru și au fost inoculați pe mediul de bază Murashige and Skoog, 1962 (MS), cu
doze moderate de fitohormoni. Astfel au fost concepute variante de mediu cu
componentele din mediul de bază și adaos suplimentar de fitohormoni BAP
(benziladenină), ANA (acid –naftilacetic) în concentrații diferite și 2,4D.
După inocularea bulbilor pe variantele de mediu, probele au fost păstrate în condițiile
camerei de creștere, la o temperatură de 26 0C și umiditate atmosferică de cca 85%, în
lipsa luminii – condiții asemănătoare celor naturale.
După trei săptămâni de la inocularea explantelor pe mediile nutritive, a fost observată
oxidarea slabă a bulbilor, fără a fi afectată starea acestora.

Nr. Varianta Compoziția

ord

1 V1 MS-50%, lipsit de regulatori

2 V2 MS-100%, lipsit de regulatori
3 V3 MS-100%+BAP ()+NAA()
4 V4 MS-100%+BAP()+NAA()
5 V5 MS-100%+BAP()+NAA()
6 V6 MS100%+2,4D+Kinetină
 Studierea particularităților anatomice ale speciilor cercetate

1
1
2 2

3 3
4 4

G. nivalis G. plicatus

1 1
2
2
3
3
4 4

L. aestivum St. colchiciflora

Figura_. Secțiune transversală prin limbul foliar (x10), 1 - epiderma superioară, 2 – țesut
palisadic, 3 – țesut lacunar, 4 – epiderma inferioară .
 Studierea particularităților biochimice ale speciilor cercetate

Denumirea sp. KMnO4 Tanine

Tanine, fenoli
2
G.n 1,9 0,8314 1

G.p 1,95 1,03925 0

a lis tu
s
um r a
iv a it v iflo
L.a. 2,0 1,2471 .n lic c
G .
p
a es chi
G l
L. Co
S.c 2,1 1,6628 .
St

Nr Denumirea Masa Masa %de

. sp. inițială uscată apă Conținutul de apă în bulbi
1 G. nivalis 1,81 1,04 42,54 80
40
2 G. plicatus 1,2 0,5 58,33
0
is s ra
3 L. aestivum 10,68 2,22 79,21 al tu um o
ni
v
lic
a tiv cifl
. p es hi
4 S. 7,97 3,17 60,23 G G
. a lc
L. co
colchiciflora S.
Înființarea unei colecții în Grădina Botanică Națională (Institut) „Alexandru
Ciubotaru”

A B C

D
Figura __ Colecția de plante rare din fam. Amaryllidaceae în teren deschis
(A- G. plicatus, B- G. nivalis, C- St. colchiciflora, D- L. aestivum)
Concluzii
1. Au fost evidențiate nișele naturale ale speciilor studiate și prelevat materialul
inițial donator;
2. Pentru inocularea speciilor de plante rare din fam. Amaryllidaceae, din
explantele testate (bulb, semințe, fragmente de frunză), a fost
evidențiat/identificat bulbul, stabilit regimul de sterilizare;
3. Pentru inițierea proceselor de micropropagare ale plantelor în cultura in vitro
rezultate optime au fost obținute la utilizarea mediului ....____;
microclonarea și micropropagarea fiecărei specii, descrierea protocolului
multiplicării;
4. studierea particularităților anatomice și biochimice ale speciilor cercetate;
5. Crearea/înființarea unei colecții în Grădina Botanică Națională (Institut)
„Alexandru Ciubotaru”;
6. reintroducerea plantelor în nișele naturale.
Cercetările au fost realizate în cadrul proiectului în derulare:
20.80009.7007.19 Introducerea şi elaborarea tehnologiilor de
multiplicare şi cultivare prin tehnici convenționale şi culturi in
vitro a speciilor de plante lemnoase noi
Mulțumesc pentru atenție!!!
 OBIECTELE DE STUDIU

Galanthus nivalis L. Galanthus plicatus Galanthus elwesii Hook.

Bieb.

Leucojum aestivum L. Sternbergia colchiciflora

Waldst. & Kit.
Sunt specii de plante rare cu grad
ridicat de vulnerabilitate, incluse în
Cartea Roșie a R. Moldova, și în
listele IUCN.
Dezvoltarea plantelor din semințe
durează cinci sau mai mulți ani
până când au capacitatea de a
produce flori și semințe.

Se inmultescprin
bulbi

Importanță
Au rol decorativ medicinală
 Organe de înmulțire
Dezvoltarea plantelor din semințe Capacitatea de formare a bulbilor este
durează cinci sau mai mulți ani până scăzută. Rata de înmulțire nu este
când au capacitatea de a produce flori satisfăcătoare deoarece, se formează 1-
și semințe. 2 bulbi pe an.

Figura __. Sternbergia colchiciflora Figura __. Leucojum aestivum

(Semințe) (Bulb)
Studiul anatomic

Figura _ G. nivalis – secțiune transversală

prin limbul foliar (A-x10, B- 40),
1 - epiderma superioară; 2 – țesut palisadic;
3 – țesut lacunar; 4 – epiderma inferioară .

Figura _ G. plicatus – secțiune transversală

prin limbul foliar ( A -x10, B- x 40),
1 - epiderma superioară; 2 – țesut palisadic;
3 – țesut lacunar; 4 – epiderma inferioară .

Figura 2 _ L. aestivum - secțiune transversală prin

limbul foliar (×10)1 – epiderma superioară; 2 – țesut
palisadic; 3 – țesut lacunar; 4 – epiderma inferioară.

Figura 2. _ St. colchiciflora – secțiune transversală prin

limbul foliar (x10), 1 - epiderma superioară; 2 – țesut
palisadic; 3 – țesut lacunar; 4 – epiderma inferioară.
 ACTUALITATEA

Galanthus nivalis L. Galanthus plicatus Bieb.

Sternbergia colchiciflora
Leucojum aestivum L. Waldst. & Kit.

Figura __.Gradul de vulnerabilitate al speciilor studiate pe teritoriul Republicii

 Au proprietăți medicinale (conțin
alacaloizi toxici: tazetina, licorina,
galantamina etc. care au efecte
antimicrobiene, imunostimulatoare,
antivirale).
Sunt specii de plante rare cu Capacitatea de formare a
grad ridicat de bulbilor este scăzută.
vulnerabilitate, incluse în Rata de înmulțire nu este
Cărțile Roșii ale Europei și satisfăcătoare deoarece,
R. Moldova, precum și în se formează 1-2 bulbi pe
listele IUCN. an.

Importanța Dezvoltarea plantelor

speciilor din fam. din semințe durează
Amaryllidaceae cinci sau mai mulți ani
Au rol decorativ până când au
capacitatea de a
produce flori și
semințe.
Au fost efectuate cercetări privind selectarea unui mediu nutritiv potrivit pentru inocularea
speciilor de plante rare din fam. Amaryllidaceae, fiind studiate particularitățile de
regenerare a inoculilor. În acest scop au fost testate diferite variante ale mediilor nutritive
MS (Murashige Skoog) suplinite cu regulatori de creștere BAP (benzilaminopurină) în
concentrație de 0,1 mg/l și