Curs de Biofizică

Vă rugăm: gândiţi!

4
Prof.dr. Cipriana Ştefănescu
Disciplina de Biofizică
şi Fizică medicală
 Metode
electrokinetice:
electroforeza,
electrofocalizarea,
imunoelectroforeza
 I. Electroforeza şi
aplicaţiile sale pentru
diagnostic

03/18/24 3
I.1.Principiul fizic al electrof
orezei
 Metoda de separare prin migrarea particulelor
încărcate electric în câmp electric

+ -
Electrozi
+- ++ -+
-- --
+ -
+ +

03/18/24 4
 Forţe care acţionează asupra
particulei în câmp electric:
+ pH _
+ Ze Fe _
Ff
+ + _
+ _
+ _

 Fe = Ff ZeE
v=
 ZeE= 6rv 6π rη
 Explicarea termenilor:
 F = forţa electrică
e

 Ff = forţa de frecare
 Ze = sarcina electrică a particulei
 Fe = ZeE  E = intensitatea câmpului electric
 η = viscozitatea mediului
 Ff = 6rv  r = raza particulei
 v = viteza particulei
 FACTORI DE DEPENDENŢĂ
AI VITEZEI PARTICULEI :


sarcina electrică (pH-ul mediului)

raza particulei (deci dimensiunile)


viscozitatea mediului

intensitatea câmpului electric
 Electroforeza = migrare
diferenţială în câmp electric, deci
posibilitate de separare a:

 AMINOACIZILOR
 PEPTIDELOR
 PROTEINELOR
 ACIZILOR NUCLEICI
03/18/24 9
 I.2.Dispozitivul

03/18/24 10
 pipetă

deplasare

tampon l

Electro-
fore-
grama:

Schema electroforezei
03/18/24 12
 II.3. Electroforeza
proteinelor serice

03/18/24 13
 Electroforeza
proteinelor serice
- separarea proteinelor în 5 fracţiuni.

03/18/24 14
 Electroforegrama normală

03/18/24 15
Benzile proteice separate pot fi cuantificate
prin densitometrie sau fotocolorimetrie
 Electroforegrama normală - valori:

Albumine 54-66%
Alfa-1 globuline 2-4%
Alfa-2 globuline 6-12%
Beta- globuline 8-14%
Gamma globuline 13-22%

03/18/24 17
 Aplicaţie:
electroforegrama patologică
(exemple):

03/18/24 18
03/18/24 19
 Normal

 Boala hepatică:
pacient în vârstă de 46 ani, diagnosticat cu
ciroză hepatică, secundară abuzului
cronic de alcool. Decedează 5 luni după
acest rezultat.
 Normal

 Pattern inflamator acut:

gamma diminuate, alfa2 mare
 Electroforegramă urinară

Electroforeza urinara este tehnica de electie pentru identificarea

de proteinei Bence-Jones, la pacienţii cu mielom multiplu.
Acesta trebuie să fie întotdeauna efectuata în comparatie cu
electroforeza serica, astfel încât rezultatele sa poata fi
comparate direct.
 II. Alte tehnici
electrokinetice:
 Focalizareaizoelectrică
 Imunoelectroforeza

03/18/24 24
 Normal

 Gammapatie policlonală
Secundar unor boli cronice. Ex.: secundar sarcoidozei
Focalizarea izoelectrică: electroforeză în gradient de pH,
migrarea şi separarea depinde doar de pI (punctul izoelelctric)
Principiul fizic:
Dacă un amestec de proteine este supus unei electroforeze în gradient
de pH fiecare proteină va migra până în locul unde pH-ul mediului
corespunde pH-ului său izoelectric (când proteina va avea sarcină
globală nulă).

03/18/24 27
03/18/24 28
 Imunoelectroforeza

Principiul fizic:
 2 etape:

 1. electroforeza

 2. imunodifuzia.

03/18/24 29
 = ELECTROFOREZA + IMUNODIFUZIE
 = separarea unui amestec de antigeni

1) elctroforeza în gel
2) + amestec de anticorpi : Reacţie Ag –Ac
+imunodifuzie
 Imunoelectroforeza (rezultate)

 Grosimea şi poziţia
arcurilor de
precipitare.

 Aplicaţie frecventă:
gamapatie monoclonală.

03/18/24 31
 Marti !
La multi ani!