Explorarea

metabolismului
proteic
Disciplina de Fiziopatologie
UMF Tg Mures
 ROLUL PROTEINELOR
Suport plastic pentru tesuturi (keratina,
colagen, elastina etc)
Meninerea echilibrului acido-bazic, prin
caracterul de tampon
Intervin in procesul de coagulare (factorii
coagularii) si in fibrinoliza (plasminogenul)
Intervin in apararea organismului nespecifica
(complementul) si specifica (anticorpi)
Rol de enzime: lipaza, amilaza, tripsina,
transaminaze etc
Rol de hormoni: insulina, STH, glucagon,
prolactina, renina-angiotensina-aldosteron
 ROLUL PROTEINELOR
Transportul unor compusi:
albumina leaga compusi endogeni (bilirubina)
sau exogeni (acid acetilsalicilic, lidocaina,
diazepam)
prealbumina transporta tiroxina (T4)
transcortina transporta cortizol
transcobalamina transporta vit B12
ceruloplasmina transporta cuprul, transferina
transporta fierul
lipoproteinele transporta lipide
 Metode de investigare a
proteinelor din lichidele biologice
(ser, urina, LCR, lichid de punctie)
Metode cantitative
Spectrofotometrie
Refractometrie
Metode calitative
Electroreza proteinelor/electrofocusare
geometrica
Imunelectroforeza
Imunodifuziunea Mancini
Reactia Ouchterloni
 Refractometria
metod fizic utilizat pentru
determinarea concentraiei proteice din
lichide pe baza indicelui refractrometric

cu ajutorul unui tabel de conversie, in

functie de valorile indicilor de refracie
determinai, se calculeaz concentraia
proteinelor din proba analizat
 Concentraia proteinelor, corespuztoare
indicilor de refracie obinui prin refractometrie
la temp de 20C
Indice de refracie Concentraia proteinelor Indice de refracie Concentraia proteinelor
(mg /dL) (mg /dL)
1.3419 3.60 1.3468 6.10

1.3426 3.79 1.3472 6.29

1.3427 3.98 1.3479 6.67

1.3431 4.17 1.3480 6.86

1.3435 4.36 1.3487 7.05

1.3438 4.56 1.3491 7.24

1.3442 4.75 1.3494 7.43

1.3446 4.94 1.3498 7.62

1.3450 5.13 1.3502 7.81

1.3453 5.32 1.3506 8.00

1.3457 5.51 1.3509 8.19

1.3461 5.71 1.3513 8.37

1.3465 5.90 >1.3513 >8.37

Metoda spectrofotometric
la 280 nm
Proteinele absorb radiatia ultravioleta cu
lungimea de unda 280nm , absorbtia fiind
proportionala cu concentratia proteinelor

chiopu A, chiopu A jr 1994

Metoda spectrofotometric
la 210 nm

chiopu A, chiopu A jr 1994

Electroforeza proteinelor
Principiu: la un pH alcalin particulele proteice
se incarca cu sarcini negative si migreaza
spre anod.
Viteza de migrarea este influentat de:
ncarcarea electrica, dependenta de structura
primara, marimea si forma particulei
pH-ul solventului
temperatura mediului
vascozitatea mediului
suportul in care se separa
Probele cu continut proteic scazut trebuie
concentrate (ultrafiltrare)
Principiul electroforezei

chiopu A, chiopu A jr 1994

Electroforeza proteinelor

chiopu A, chiopu A jr 1994

Dezavantajele ultrafiltrarii

chiopu A, chiopu A jr 1994

 Electrofocusarea
geometric
Analiza lichidelor cu concentraii mici
de proteine, fr s mai fie necesar
concentrarea prealabil a probelor

Principiu: concentrarea proteinelor din

lichidele analizate n cursul
electroforezei, la nivelul unor zone de
focalizare ale liniilor de for electric
ce traverseaz gelul de migrare
Principiul electrofocusarii
geometrice

chiopu A, chiopu A jr 1994

Pstrarea condiiei de tangenialitate,
n condiiile unor diametre diferite ale
cilindrului cu prob gelificat

chiopu A, chiopu A jr 1994

Fazele de realizare a dispozitivului de
electrofocusare geometric

A Secionarea transversal a gelului;

B ndeprtarea feelor seciunii
C Inseria cilindrului cu prob gelificat;
D Apropierea feelor seciunii pn la realizarea contactului cu cilindrul

chiopu A, chiopu A jr 1994

Montarea cilindrului cu prob gelificat
n instalaia clasic de electroforez

chiopu A, chiopu A jr 1994

Compararea metodei electroforetice
clasice cu electrofocusarea geometric

chiopu A, chiopu A jr 1994

Electroforeze comparative, obinute
prin electrofocusare geometric din ser
i din lichid cefalorahidian

chiopu A, chiopu A jr 1994

Electroforeza proteinelor
Grupele proteice separate
Albumine
Serumglobuline
1 globuline
2 globuline
1 globuline
2 globuline
globuline
 Imunoelectroforeza
Metoda de analiza a componentelor antigenice
dintr-un lichid biologic prin separarea lor
electroforetica si prin punerea in evidenta cu
ajutorul unor anticorpi specifici prin precipitare

Este utilizata pentru identificarea unui deficit

proteic specific

Reactia antigen-anticorp intre antigenul

plasmatic si imunoser (anticorpi) se evideneaza
prin aparitia unor arcuri de precipitare ce permit
identificarea mai multor fraciuni proteice
plasmatice
 Imunodifuziunea radial
(Mancini)
Principiul metodei: intr-un gel de
agaroza, in care s-a incorporat antiserul
specific (ex. anti IgA) difuzeaza IgA din
serul de analizat depus intr-un godeu
circular

La echivalenta dintre anti IgA din antiser si

IgA din ser se formeaza un inel de
precipitare al carui diametru este
proportional cu concentratia IgA din proba
Imunodifuziunea radial
(Mancini)
 Reactia Ouchterloni
Pe o placa cu gel de agaroza cu 4-6
godeuri
In godeul central se introduce antiser (de
ex anti IgG) iar in celelalte godeuri de
introduc serurile de cercetat
La nivelul punctului de echivalenta are loc
formarea precipitatului
Se poate identifica prezenta/absenta Ig din
serul de cercetat
Reactia Ouchterloni
Concentratia in proteine a
diferitelor lichide
biologice

Valori
normale
Ser 6 8 g/dl
Urina < 150mg/24h
LCR 15 45
mg/100ml
 Variatii patologice ale
proteinelor serice
Hiperproteinemie
Hemoconcentratie (crestere relativa)
Gamopatii monoclonale (mielomul multiplu,
macroglobulinemia Waldenstrm)

Hipoproteinemie
Aport nutritional scazut
Inaintie
Malabsorbie
Rezectii de intestin subtire
Sinteza defectuoasa la nivel hepatic
Hepatite ac, cr
Ciroza
Tumori hepatice
 Variatii patologice ale
proteinelor serice
Hipoproteinemie
Catabolism proteic excesiv
Supuratii cr
Infectii cr
Tumori
Hipertiroidism
Postoperator
Pierderi de proteine:
pe cale digestiva: enteropatia exudativa, boala Crohn
pe cale cutanata: arsurile
pe cale renala: sindrom nefrotic, glomerulonefrite
Scadere relativa: administrarea intravenoasa de
lichide
Electroforeza proteinelor
Valori Valori
absolute relative
(g/l) (%)
albumine 35-55 50-60
1 2-4 4,2-7,2
globuline
2 5-9 6,8-12
globuline
globuline 6-11 9,3-15
 Variatii patologice ale
albuminelor
Hipoalbuminemiile:
Scaderea sintezei afectiuni hepatice
Catabolism crescut diabet, neoplazii, subnutriie
sau denutriie
Pierderi de albumine
pe cale renal (sd nefrotic, tumori renale)
pierderi intestinale ( enterite ac si cr, steatoree,
fistule intestinale)
dup hemoragii masive, supuraii, arsuri
Scadere relativa - perfuzii

Hiperalbuminemiile: hemoconcentratii
 Variatii patologice ale
globulinelor
Hiperglobulinemii
boli infecioase ac si cr
Neoplazii
Boli alergice
Boli autoimune

Hipoglobulinemii
diminuarea sintezei
deficit de factori alimentari, inanitie, malabsorbtie
dup iradieri, radioterapie, citostatice
boli congenitale sau dobndite (agama sau
hipogamaglobulinemie)
pierderi consecutive unor arsuri grave, pierderi renale,
intestinale
 Imunoglobulinele
IgG
Anticorpii majori produsi ca raspuns la un contact
secundar cu un antigen
Sinteza maxima de IgG survine dupa 10-14 zile de
la inductia imunogena
Reprezinta majoritatea anticorpilor antibacteriani
si antivirali, si o mare parte din autoanticorpi
Strabat endoteliile si placenta si induc pasiv
imunitatea la nou nascut
Cresterea IgG: infectii cu evolutie lenta sau
repetitiva, tumori, procese autoimune, mielom
multiplu cu IgG
 Imunoglobulinele
IgM
Anticorpi majori produsi initial in cursul raspunsului
imun
Sinteza IgM, la nivelul organelor limfatice, este
maxima la 2-3 zile de la contactul cu antigenul
Prima clasa de Ig sintetizate de fat sau nou-nascut
IgM nu traverseaza placenta
IgM reprezinta 5-10% din totalulul Ac
Valori crescute: infectii ac, macroglobulinemia
Waldenstrom
La nou nascuti arata o infectie cu debut in viata
intrauterina
 Imunoglobulinele
Evaluarea IgG si IgM specifici - evaluarea
stadiului infectiei
infectie acuta: sunt prezenti anticorpii IgM

infectie cronica: predomina anticorpii IgG

infectie congenitala:
nou-nascut cu anticorpi IgM este infectat;
un nou-nascut cu anticorpi IgG a dobandit
pasiv, transplacentar, anticorpi materni
 Imunoglobulinele
IgA
anticorpii secretori majori
in lacrimi, saliva, secretii respiratorii,
gastrointestinale si urogenitale
reprezinta 10-15% din totalul Ac
Se separa in majoritate in zona 2 globulinelor
Valori crescute: mielom multiplu, boli
autoimune (PAR, LES), boli hepatice (hep cr,
ciroza)
Imunoglobulinele

IgD intervin in maturarea

limfocitelor

IgE au un rol in lupta

impotriva parazitilor si in
alergie
 Proteinuria
In condiii fiziologice, proteinuria nu
depete 100 mg/24 de ore,
cantitate nedetectabila prin
metodele uzuale de identificare

Prin electrofocusare geometrica se

pot identifica proteinuriile <10mg/dl
 Proteinuria clasificarea
etiopatogenica
Proteinurii prerenale
exces plasmatic de proteine normale:
aport exogen crescut (abuz de lapte
si ou)
distructii tisulare - hemoglobin,
mioglobin, lizozimul, amilazele
pancreatice
apariia de proteine anormale:
proteine Bence-Jones (mielom
multiplu)
 Proteinuria clasificarea
etiopatogenica
Proteinurii renale
proteinurie selectiv: albumina
proteinurie neselectiv: toate tipurile de proteine
Cauze:
procese inflamatorii sau degenerative: nefropatii
glomerulare, nefropatii interstitiale cr,
hipoxiei generale sau locale, staz renal, insuficient
cardiac, compresiuni sau torsiuni ale pediculului renal
Intoxicatii: Pb, Cu, Hg
rejetul rinichiului transplantat
 Proteinuria clasificarea
etiopatogenica
Proteinurii postrenale:

sangerari la nivelul cailor urinare: litiaza

renal se elimina proteine plasmatice
infectii urinare: pielite, cistite, uretrite,
tuberculoz renal - cand se elimina Ig
 Proteinuria
Reactii fals pozitive
Urina alcalina
Antiseptice

Reactii fals negative

Mielom multiplu (uneori prot Bence
Jones nu sunt detectate)
 Proteinurie

Proteinurie neselectiva Albuminurie

Colectie personala Prof Schiopu