CURS 14 BIOCHIMIA DINAMIC

Biochimia dinamic studiaz ansamblul transformarilor chimice i fizico-chimice ale substanelor constituente ale materiei vii, nsoite de schimbri n coninutul de energie (metabolism). Metabolismul, cu cele dou laturi, anabolismul i catabolismul, constituie alturi de alte caracteristici eseniale (ereditatea, variabilitatea, autoreproductibilitatea, etc.), trstura esenial a materiei vii. Anabolismul cuprinde procesele de sintez i cretere a complexitii biomoleculelor i este asociat cu consumul de energie (reacii endergonice). In organismele autotrofe (celule clorofiliene, bacterii nitrificante, organisme vegetale superioare), substanele organice sunt sintetizate (prin fotosintez) din substane minerale (n primul rand CO2), folosind ca surs de energie, energia luminoas. Organismele heterotrofe nu-i pot sintetiza substanele organice din cele de natur mineral, ci triesc pe seama substanelor sintetizate de organismele autotrofe, folosind ca surs de energie, energia chimic. Catabolismul cuprinde reaciile de biodegradare a biomoleculelor cu structur complex n biomolecule cu structur simpl (CO2, NH3, H2O), procese biochimice care decurg cu eliberare de energie (reacii exergonice). Transformrile metabolice se desfoar n organismele vii (vegetale i animale) n condiii fiziologice (la temperatur normal, pH caracteristic fiecrei pri a organismului), n mod continuu, ntr-o strns interdependen, sub aciunea biocatalizatorilor enzime, i prin reglarea fin, mediat de hormoni. METABOLISMUL GLUCIDELOR Biosinteza (anabolismul) glucidelor Biosinteza monoglucidelor Biosinteza monoglucidelor poate fi exprimat printr-o reacie global, pornind de la CO2 i H2O, substanele precursoare, practic inepuizabile n natur:
n CO2 + m H2O CnH2mOm + n O2

Energia necesara biosintezei poate fi realizata prin: (a) chimiosintez, (b) fotosintez. a) Chimiosinteza furnizeaz energia necesar biosintezei compuilor organici prin oxidarea unor compui anorganici: H2, H2S, FeCO3, NH3, etc., cu ajutorul hidrogenobacteriilor, sulfobacteriilor, ferobacteriilor, bacteriilor nitrificante, etc. Importana biologic a chimiosintezei const n faptul c se demonstreaz posibilitatea eliberrii energiei necesare sintezei materiei vii, de ctre celulele autotrofe, n medii minerale. b) Fotosinteza, procesul de asimilare a CO2 de ctre plantele verzi, este calitativ si cantitativ, cel mai important proces biochimic de pe planet, deoarece reprezint: principala surs de materie organic (se transform C mineral din CO2 n C organic); unica surs de oxigen singurul proces celular care folosete drept surs energetic lumina, pe care o transform n energie chimic.

Locul de desfurare a fotosintezei l reprezint cloroplastele, produse de organite specializate ale celulelor plantelor verzi. Acestea posed ADN propriu, care codific partea proteic i un tip special de membran, denumit tilacoid, care conine pigmenii clorofilieni i sistemele transportoare de electroni. In cloroplaste, se gsesc alturi de clorofile (a, b, c, d) i pigmeni carotenoidici, care absorb energia luminoas i o cedeaz clorofilei a, singura capabil s o transforme n energie chimic. Moleculele clorofilelor sunt dispuse n plantele verzi sub forma unor uniti funcionale denumite fotosisteme, astfel nct, la absorbia luminii s se produc rapid un transfer de energie de rezonan. Fotosinteza reprezint n esen, un proces biologic de oxido-reducere, n care lumina este direct implicat n transferul electronilor i n generarea de ATP. Fotosinteza se realizeaz n dou etape greu de delimitat, datorit rapiditii cu care se succed foarte rapid: fotoreacia (etap care necesit prezena luminii) scotoreacia (etap care nu necesit implicarea luminii la transformarea CO2 i H2O n moleculele de glucide) Fotoreacia, prima etap a fotosintezei, este condiionat de prezena energiei luminoase, necesar fotoactivrii pigmenilor (clorofile, carotenoide) din cloroplaste. Fotosistemele n care decurge absorbia luminii, reacia cu clorofila i eliberarea electronilor, deci a poteialului reductor, sunt implicate n dou procese foarte importante: fotoliza apei i reducerea NADP depozitarea energiei chimice n compusul macroergic ATP. Schematic acest proces complex, poate fi reprezentat astfel: a) fotoactivarea pigmenilor din cloroplaste (reacie de oxidare) clorofila + h (cuante de lumin) clorofila fotoactivat+ + eb) fotoliza apei
2H2O 2H+ + 2e2H+ + 2OH2H 2H + S CH2 CH2 S C H (CH2)4 COOH HS HS CH2 CH2 C H (CH2)4 COOH

acid lipoic (tioctic) - forma oxidat c) fotooxidarea

2 HO- + clorofila fotoreactivata+ (fotooxidare)

acid lipoic (tioctic) - forma redus

2 OH + clorofila dezactivata 1/2 O2 + H2O 2 OH

d) fosforilarea fotosintetic a ADP (transformarea energiei luminoase n energie chimic)

ADP + H3PO4 + energie luminoasa ATP

nsumnd reaciile pariale, se poate scrie ecuaia global a fotoreaciei (ecuaia lui Hill):
2H2O + 2NADP+ + ADP + H3PO4 = 2NADPH + H+ + 1/2O2 + ATP
produsele fotoreaciei

Scotoreacia, a doua etap a fotosintezei, poate decurge i n absena luminii i cuprinde: reacia de asimilare fotosintetic a CO2 absorbit prin frunze din atmosfer, sau rezultat din alte procese biochimice obinerea celor mai simple monoglucide (triozele aldehida fosfogliceric i hidroxoacetonfosfatul), prin participarea produselor fotoreaciei, ATP ca activator energetic, NADPH +H+ ca agent reductor. obinerea primei hexoze (fructozo-1,6-difosfat) de la care se pot biosintetiza oligoglucide i poliglucidele, sau care poate participa la regenerarea ribulozei-1,5- difosfat, necesar asimilrii CO2. Succesiunea de reacii ale scotoreaciei constituie ciclul Benson-Calvin. Dac aspectul fundamental diferit al fotosintezei, fa de alte procese biochimice, l constituie folosirea energiei luminoase pentru a scinda fotolitic apa, a reduce NADP i pentru a stoca energia luminoas sub form de energie chimic n ATP, reaciile scotoreaciei ncepnd de la metabolitul acid-3-fosfogliceric sunt asemntoare celor produse n ficatul organismelor animale. Singura etap caracteristic organismelor vegetale este formarea metabolitului acid 3fosfogliceric, care implic asimilarea CO2 de ctre pentoza ribulozo-1,5-difosfat, prin intermediul celei mai rspndite proteine de pe planeta-ribulozo-1,5-difosfatcarboxilaza. ase molecule de ribulozo-1,5-difosfat (30 de atomi de C n total) i ase molecule de CO2 (6 atomi de C) reacioneaz formnd 12 molecule de acid 3-fosfogliceric (36 de atomi de C). Dintre acestea, 2 molecule (2 C3) sunt utilizate pentru a stoca glucide hexoze (C6). Cele 10 molecule de acid fosfogliceric rmase (30 atomi de C) produc 6 molecule de ribulozo-1,5difosfat (30 atomi de C). Secvena de reacii este complex i implic glucide pentoze, trioze, hexoze, care se transform prin reacii de aldolizare, de transcetolizare, etc, biocatalizate de enzime specifice.

H2C C OH HC OH HOOC C O Aldehida 3-fosfoglicerica HC OH P CH2 O O P Acidul 2-carboxi- H2C Esterul 3-cetopentozo 1.5-difosfat 3-ceto pentozo- Acidul 3-fosfo1.5 difosfat gliceric (APG) H H2C C P HC P HC CH2 HO CH OH OH O P Fructoza 6-fosfat O ATP ADPHO OH HC O H C H2C O OH OH OH O CH HO + CH H2C P Eritrozo-4-fosfat H2C OH O O P Zaharoza H C HC HC HC OH OH OH P Fructoza Glucoza 6 fosfat C P H2C C ADP OH - ATP OH OH HO O O CH2 HC P Xilulozo-5-fosfat HC H CH2 O OH C HO HC P HC HC CH O OH OH O H2C OH O C OH O CH2 O OH C H C O H2C C CH HC HC OH OH CH2 O P Fructoza 1,6-difosfat O O P P CH2 O P HC OH HC OH O C COOH COOH CO2 H C O H2C C OH OH OH O C HC P forma dienolica CH2 O C HC OH HC OH C O

OH

H2C P O P

CH2 O P

H2C

H2C

CH2

CH2

CH2

HC

OH Dihidroxiacetonfosfat

HC CH2 O

OH ATP HC OH -ADP OH HC OH

H2C

OH

RIBULOZA A Esterul ribulozoAT DP 1.5-difosfat P OH H2C C O OH O OH OH O

H2C

HC

CH2

Ribulozo-5-fosfat

Glucoza

HC

HC

HC

H2C

Ribozo -5-fosfat

Ciclul BENSON CALVIN

H2C O P H2C O P Sedoheptulozo - 7-fosfat Sedoheptulozo - 1,7-fosfat

Biosinteza pentozelor Pentozele, glucide deosebit de importante pentru organismele animale i vegetale (riboza este component a acizilor nucleici i a multor coenzime, iar ribuloza este acceptorul primar la asimilarea fotosintetic a CO2), se pot forma prin dou ci metabolice: calea (ciclul) pentozofosfailor (degradarea glucozo-6-fosfatului rezultat prin izomerizare din fructozo-6-fosfat) combinarea triozelor cu aldehida acetic sau aldehida glicolic.
H H H C C H2C O H OH O + H P CH2 H C H2C OH O P H C H2C OH OH C O H C OH C CH2 ADP O ATP H H C CH2 C OH O

Aldehida 3-fosfogliceric

Ester deoxirobozo-5-fosfat
H C C C C H2C O OH OH OH O P ADP ATP

Deoxiriboza
H H H H C C C C H2C O OH OH OH OH

H H

C C H2C

O H OH O + H2C P OH C O aldolaza

H H H

Aldehida 3-fosfogliceric

Ester ribozo-5-fosfat
H2C OH O ADP OH OH O P ATP H H

Riboza
H2C C C C H2C OH O OH OH OH

H2C C H2C

OH H O O + H2C P O P C O H H

C C C H2C

Hidroxiaceton-3-fosfat

Ester ribulozo-5-fosfat

Ribuloza

Biosinteza oligoglucidelor Biosinteza oligoglucidelor reprezint un proces secundar al fotosintezei, respectiv transformarea hexozelor formate n diglucide, triglucide, etc. Legturile glicozidice dintre moleculele de monoglucide pot fi realizate enzimatic prin dou reacii diferite: transglicozilare (cazul biosintezei amilopectinei i glicogenului) cuplarea unor resturi de glucide activate n prealabil cu compui macroergici (UTP, GTP).

Zaharoza (zahrul) este prima diglucid aprut n procesul de fotosintez i este uor asimilat de plante. Zaharoza se poate biosintetiza n cantiti mici din ester glucozo-1-fosfat i fructoz, sub influena biocatalitic a enzimei zaharozofosforilazei, prin elimi-narea unei molecule de acid fosforic. n cantiti mari, zaharoza se biosintetizeaz prin activarea uneia dintre componente (glucoza) cu compusul macroergic acid uridintrifosforic (UTP).
OH CH2OH H O H OH H O H OH H O P OH OH + HO O P~ O OH O P~O OH O P OH H O CH2 H OH O O H H OH N N

OH

Glucozo-1-fosfat

Acid uridintrifosforic (UTP)

OH

CH2OH H O H OH H O H OH H O P ~O OH O P OH H O CH2 H OH O O

N N O O O P OH OH

OH

+
H H OH

HO

P OH

Uridin difosfatglucoza (UDPG)

OH CH2OH H O H OH H O H OH H O P~O OH O P OH H O CH2 H OH O O H H OH N HO + H CH2 H OH OH O OH H CH2 O P N

OH

Uridin difosfatglucoza (UDPG)

CH2OH H OH H HO CH2 H H OH OH O H H OH O + HO O H OH H O P~ O OH O P~O OH O P H

Fructozo-1-fosfat
OH N O O N

OH

CH2 O H H H H OH OH

Zaharoza

Acid uridindifosfat (UDP)

Diglucida maltoza se biosintetizeaz dup un mecanism asemntor zaharozei, n care esterul glucozo-1-fosfat este transformat n uridindifosfatglucoza (UDPG) pentru a reaciona cu glucozo-1-fosfat, cu formarea maltozei-1-fosfat.

Biosinteza poliglucidelor Biosinteza poliglucidelor de rezerv glicogen (regnul animal) i amidon (regnul vegetal) decurge cu mare vitez i ncepe cu transformarea glucozo-6-fosfat n glucozo-1-fosfat, reacie catalizat de enzima fosfoglucomutaza. Primul pas n sinteza glicogenului n organismele animale este reacia cu compusul macroergic UTP, cu formarea uridindifosfatglucozei (UDPG), care este apoi transferat pe resturile de glucoz sau pe un fragment poliglucidic cu formarea glicogenului, sub influena enzimei glicogensintetaza. Glicogensintetaza necesit drept starter o caten poliglucidic de cel puin 4 resturi de glucoz, la care s se lege succesiv alte molecule de UDPG. Ramificarea prin legturi C1 - C6 pe catena glicogenului este catalizat de o enzim de ramificare denumit glucanaza. n plante i n multe bacterii, sinteza amidonului decurge asemntor glicogenului, fiind catalizat de enzima amidonsintetaza.
CH2O P CH2O P O CH2O P CH2O P O CH2OH O

OH

OH

OH

Fructozo-1,6-difosfat
CH2OH O

Fructozo-6-fosfat

Glucozo-6-fosfat

AMILOZA AMILOPECTINA O P

AMIDON

Glucozo-1-fosfat

Biodegradarea (catabolismul) glucidelor Biodegradarea glucidelor n organismele vii, vegetale i animale, este un proces oxidativ, generator de energie (exergonic), care const n transformarea moleculelor de glucide (poliglucide, oligoglucide, monoglucide) n compui mai simpli, cu mas molecular mai mic. Biodegradarea glucidelor poate decurge, n funcie de condiii, n dou etape: biodegradarea (catabolismul) anaerob biodegradarea (catabolismul) aerob Catabolismul anaerob decurge n organismele vii n absena oxigenului, pe dou ci metabolice: biodegradarea glicolitic (glicoliza), un ciclu de reacii prin care glucoza este transformat n acid piruvic i se formeaz ATP. Biodegradri fermentative: (a) fermentaia anaerob de diferite tipuri (alcoolic, lactic, butiric, etc.) avnd ca produs final: alcoolul etilic, acidul lactic, acidul butiric i CO2, respectiv, fermentaia aerob. Biodegradarea glicolitic a glucidelor (glicoliza)

Glicoliza, una dintre cile metabolice care demonstreaz universitalitatea proceselor biochimice, a fost complet elucidat pn n anul 1940 (mai ales datorit savanilor G. Embden, O. Meyerhoff, J, Parnas, de unde i denumirea ciclului de transformri ciclul Embden - Meyerhoff - Parnas. Toate reaciile glicolizei decurg n citosolul celulelor. Procesul de biodegradare a poliglucidei amidon decurge prin parcurgerea urmtoarelor etape: scindarea legturilor C1 C6 glicozidice din amiloz pe cale hidrolitic (sub aciunea enzimei amilaza), sau pe cale fosforolitic (sub aciunea enzimei transglucozidaza), cu eliberarea unei molecule de ester glucozo-1-fosfat; legturile C1C6 glicozidice din amilopectina sunt scindate hidrolitic de ctre enzima amilo-1,6-glucozidaza; n cazul n care glicoliza pornete direct de la glucoz este necesar fosforilarea prealabil cu ATP n prezena enzimei hexokinaza (activat de prezena ionilor de Mg2+ sau Mn2+) cu formarea esterului glucozo-1-fosfat; esterul glucozo-1-fosfat (ester Cori) este izomerizat la ester glucozo-6-fosfat (ester Robinson) sub aciunea fosfoglucomutazei; urmtoarea etap a glicolizei const n izomerizarea glucozo-6-fosfatului la fructozo-6fosfat (ester Neuberg). Aceasta este o reacie de conversie a unei aldoze ntr-o cetoz, sub aciunea enzimei fosfohexozizomeraza; are loc a doua reacie de fosforilare (sub aciunea ATP i a fosfofructokinazei) a fructozo-6-fosfatului cu formarea fructozo-1,6-difosfatului (ester Harden-Young), ultima glucid cu ase atomi de carbon din ciclul glicolizei; sub aciunea biocatalitic a enzimei aldolaza, esterul fructozo-1,6-difosfat este scindat n aldehida 3-fosfoglicerica i dihidroxiacetonfosfat. Toate celelalte etape ale glicolizei decurg numai cu uniti formate din cte 3 atomi de carbon; glicoliza decurge n continuare prin intermediul aldehidei-3-fosfoglicerice, la care este convertit i dihidroxiacetonfosfatul, sub aciunea fosfotriozizomerazei.In etapele precedente, glicoliza a decurs cu scindarea unei molecule de glucoz n dou molecule de aldehid 3-fosfogliceric, cu consumarea a doi moli de ATP: urmeaz o etap foarte important din punct de vedere al producerii de energiefosforilarea oxidativ a aldehidei-3-fosfoglicerice n acid 1,3-difosfogliceric, care decurge n prezena enzimei fosfogliceroaldehiddehidrogenazei avnd drept coenzim NAD. Energia eliberat n aceast reacie de oxido-reducere se nmagazineaz n ATP prin legtura macroergic aprut ntre ADP si H3PO4; n ultima etap a glicolizei se formeaz acidul piruvic i o a doua molecul de ATP printr-o secven de reacii care implic: - o reacie de defosforilare (n prezena ADP, a fosfoglicerokinazei i a ionului Mg2+) a acidului 1,3-difosfogliceric la acid 3-fosfogliceric (ester Nilson). - izomerizarea acidului 3-fosfogliceric la acid 2-fosfogliceric, reacie catalizat de enzima fosfogliceromutaza. - transformarea acidului 2-fosfogliceric n acid 2-fosfoenolpiruvic, sub aciunea enolazei. - defosforilarea acidului 2-fosfoenolpiruvic sub aciunea piruvatkinazei, n prezen de ADP, Mg2+ i K+, cu formarea acidului piruvic i a ATP. Acidul piruvic este unul dintre cei mai importani metabolii, finalul biodegradrii anaerobe i compusul de la care ncepe biodegradarea aerob a glucidelor. El reprezint, de asemenea, o punte de legtura cu protidele i cu lipidele. Reacia total care reprezint transformarea glucozei n acid piruvic i 2 moli de ATP este: Glicoliza este reprezentat n schema de reacii urmtoare:

AMIDON
CH2
O

P
OH

1
H OH
H
H

O
O

CH2

CH2OH

P
O

CH2

CH2 O

P
OH C

CH2

CH2O P

3 4
ALDOLAZA

2
H

OH

GLUCOZA

OH H ester glucozo 6-fosfat

ester fructozo 6-fosfat ester fructozo 1,6-difosfat

ADP ADP

5
OH

7
Enz
HS-Enz

COOH

HC

HC

6
HC

H2C
OH

OH

HC
NADP NADPNH+
+

OH Acid lactic

HC

OH

C
H2C

O
OP

CH3

NADP

H2C

H2C

OP

NADPNH

aldehida 3-fosfoglicerica dihidroxiacetanfosfat

COOH

ATP
O
C HC

Acid piruvic

S Enz
OH

CH3

H3PO4 HSEnz

C HC

O
OH

H2C

H2C

P
acidul 1,3-difosfogliceric

COOH

OH

ENZIME:

CH2
ADP

acid enolpiruvic

ADP

11
COOH

O
P

C HC

OH
O

O
P

OH

10
- H2O

9
OH

HC

OH

1 Fosforilaza 2 Glucokinaza 3 Fosfohexozizomeraza 4 Fosfofructokinaza 5 Aldolaza 6 Fosfotriozizomeraza 7 HS - Enzima 8 Fosfoglicerokinaza 9 Fosfogliceromutaza 10 Enolaza 11 Piruvatkinaza
H2C

CH2

H2C

acidul 2-fosfoenolpiruvic acidul 2-fosfogliceric acidul 3-fosfogliceric

SCHEMA EMBDEN - MEYERHOF - PARNAS (EMP)

Biodegradarea aerob a glucidelor (ciclul acizilor tricarboxilici, ciclul acidului citric sau ciclul Krebs) Biodegradarea aerob a glucidelor reprezint etapa de desvrire a biodegradrii glucidelor i decurge prin transformarea acidului piruvic, produsul final al glicolizei, n acetilcoenzima A, care va fi, n final, oxidat total la CO2 i H2O. Ciclul acidului citric (sau ciclul Krebs, sau ciclul acizilor tricarboxilici) reprezint calea metabolic comun de descompunere oxidativ a glucidelor, lipidelor i aminoacizilor. Principiul de funcionare a metabolismului poate fi enunat astfel: moleculele organice complicate sunt scindate n uniti C2 (acid acetic activat) biodegradarea unitilor C2 conduce la formarea a doi moli de CO2 i 2 atomi de H produsul final H2O apare n lanul respirator din atomii de hidrogen de pe coenzime i oxigen, cu depozitarea unei pri din energie sub forma compusului ATP spre deosebire de glicoliz, care decurge n citosol, reaciile ciclului Krebs decurg n mitocondrii biodegradarea aerob a glucidelor este precedat de 2 reacii importante: o decarboxilarea acidului piruvic cu formarea acetilcoenzimei A, compus macroergic o carboxilarea acidului piruvic la acid oxalilacetic, care prin reacia cu acetilcoenzima A va forma acidul citric. Decarboxilarea acidului piruvic reprezint etapa de legtura ntre glicoliz i ciclul acidului citric. Reacia este catalizat de enzima piruvatdehidrogenaza i poate fi reprezentat astfel :
O CH3 C COOH + HSCoA NAD+ H3C NADPH O C ~SCoA + CO2

Decarboxilarea se produce printr-o succesiune de reacii intermediare, catalizate fiecare de cte o enzim din sistemul multienzimatic al piruvatdehidrogenazei, cu participarea coenzimelor specifice: tiaminpirofosfatul (TPP), NADP+, HSCoA, acidul lipoic, Mg2+. Prima etap const n decarboxilarea acidului piruvic, cu producerea CO2 i a unei grupe hidroxietil ataat tiaminpirofosfatului. Grupa hidroxietil este transformat n acetilcoenzima A, cu reducerea NAD+, proces denumit decarboxilare oxidativ. Conversia acidului piruvic la acetilcoenzima A este ireversibil, ca urmare acizii grai superiori nu pot fi transformai n glucoz n organismele animale, dei bacteriile i plantele o pot face, printr-un mecanism special. Atomii de H fixai de NADP+ si FAD n etapa de decarboxilare oxidativ i rezultai i din alte etape ale ciclului, se vor combina cu oxigenul, cu formarea apei (n aa numitul ciclu respirator). Carboxilarea acidului piruvic este o etap n care are loc fixarea CO2 activat cu biotinilenzima i cu ATP la acidul piruvic, cu formarea acidului oxalilacetic.
O C COOH + CO2 activat O C COOH COOH +

biotinilenzima
AMP

H2CH

H2C

Acid piruvic

Acidul oxalilacetic

Biosinteza acidului citric decurge ireversibil, prin condensarea aldolic a acetilcoenzimei A cu acidul oxalilacetic, sub influena enzimei citratsintetaza. Energia necesar reaciei este furnizat prin hidroliza legturii macroergice din acetilcoenzima A. deshidratarea acidului citric la acid cis-aconitic i hidratarea la acid izocitric (ambele etape ) sunt catalizate de enzima aconitaza. urmeaz prima din cele patru reacii de oxido-reducere din ciclul Krebs i anume, dehidrogenarea acidului izocitric cu ajutorul enzimei izocitricdehidrogenaza, avnd drept coenzima NADP+ i formarea acidului oxalilsuccinic. prima decarboxilare din ciclu, decurge la acidul oxalilsuccinic, un -acid instabil, care se decarboxileaz cu ajutorul izocitricdehidrogenazei, cu formarea acidului cetoglutaric. a doua decarboxilare oxidativ din ciclu, a acidului cetoglutaric la succinilcoenzima A, care prin hidroliz formeaz acidul succinic, decurge cu participarea aceluiai sistem enzimatic ntlnit la etapa de decarboxilare a acidului piruvic la acetilcoenzima A (cetoglutaricdehidrogenaza) ultimele reacii ale ciclului constau n transformarea n trei etape a acidului succinic n acid oxalilacetic: o oxidarea (dehidrogenarea cu FAD) a acidului succinic la acid fumaric o hidratarea acidului fumaric la acid malic o oxidarea (dehidrogenarea cu NAD+) a acidului malic la acid oxalilacetic Acidul oxalilacetic regenerat poate asigura continuarea aceleiai succesiuni de reacii, cu eliberare de energie stocata sub forma de FADH i NAD+. Bilantul general al ciclului Krebs poate fi reprezentat astfel :
CH3 CO~SCoA + 3H2O + 3NADP+ + FAD + ADP + P = 2CO2 + 3NADPH + 3H+ + FADH2 + ATP + HSCoA

Sensul metabolic al ciclului const n : oxidarea restului acetil (CH3CO-) din acetilcoenzima A rezultat din acid piruvic, la CO2 , substan n care carbonul este complet oxidat la C4+ . din cele patru reacii de oxidare rezult 8 atomi de H, legai de coenzimele NAD+ i FAD, care sunt participani la lanul respirator, unde de-a lungul unui sistem enzimatic specific, sufer reacii de oxidare la H+, form sub care reacioneaz cu O2-, formnd H2O i elibernd energie. Procesul de respiraie tisular ( lanul respirator ) poate fi reprezentatat, sumar, astfel:
2RH sistem enzimatic 2H+ + 2e- + 2R(substrat oxidat) 2e- + 1/2O2 2H+ + O2O2H2O + energie

Ciclul Krebs opereaz n sens unic datorit celor trei reacii care decurg ireversibil: sinteza acidului citric din acetilcoenzima A i acid oxalilacetic decarboxilarea acidului izocitric la acid -cetoglutaric dehidrogenarea acidului -cetoglutaric Energia eliberat treptat, n cursul reaciilor este nmagazinat sub forma legturilor macroergice ale compuilor macroergici GTP, ATP i eliberat treptat n funcie de nevoile organismului (procese de biosintez, energie osmotic, electric, mecanic, caloric, etc.). n urmtoarea schem este reprezentat succesiunea reaciilor din ciclul Krebs.

acetil - CoA

H3C

Co~SCoA + HOH

H2C O C H2C COOH COOH HO C HC COOH COOH HO C HC COOH HO COOH H2C C

COOH COOH COOH

forma cetonica

forma enolica
O CH3 C COOH + HSCoA
NAD+

acid citric

acidul oxalilacetic
CO2 H3C O C ~SCoA

C CH2H

COOH + CO2

C H2C

COOH COOH

HSCo H2C HO C H2C

COOH COOH COOH

11
HO H C H2C COOH
NADP

Acidul oxalilacelic

Acidul citric 2
HC C H2C COOH COOH COOH

NADPH

Acidul malic
+ H 2O - H 2O

COOH

HOOC

CH HC

10 Acidul cisaconitic
COOH

Acidul fumaric 9
H2C H2C COOH COOH
HSCoA

3
H

CICLUL KREBS

HO

C HC H2C

COOH COOH COOH

NADP

Acidul succinic 8
O

H2O
C ~SCoA

Acidul izocitric 4
NADPH

CH2 O H2C COOH HC H2C COOH COOH C COOH

Succinil CoA
NADPH NADP

Acidul oxalilsuccinic 5

7
O C CH2 COOH

CO2

6
HSCoA

CO2 H2C COOH Acidul alfa-cetoglutaric

Enzime: 1-citrat sintetaza, 2-acinitaza, 3-cisaconitaza, 4-izocitricdehidrogenaza, 5-oxalilsuccincarboxilaza, 6,7-complex enzimatic (-cetoglutaricdehidrogenaza), 8-complex enzimatic, 9-succindehidrogenaza, 10-fumaraza, 11-L. Maliccodehidrogenaza.

Importana ciclului Krebs decurge din faptul c, constituie o cale comun de biodegradare a glucidelor, a lipidelor si protidelor (prin substanele intermediare provenite din acestea). Cetoacizii rezultai n ciclul citric, pot servi la biosinteza aminoacizilor (corelaie ntre glucide i protide), iar prin intermediul acetilcoenzimei A se stabilete corelaia metabolic dintre glucide i lipide. Se poate concluziona c, prin interrelaiile metabolice stabilite ntre glucide-lipide-protide, ciclul Krebs reprezint o surs de substrat i de energie necesar tuturor proceselor metabolice. Biodegradarea fermentativ a glucidelor Biodegradrile fermentative sunt procese de descompunere, predominant anaerob, ale glucidelor datorate activitii fiziologice a unor microorganisme. Au o importan practic deosebit, contribuind la circuitul elementelor n natur, la fertilizarea solului, la obinerea unor compui utilizai n industria alimentar, chimic, farmaceutic.

Fermentaiile anaerobe (n absena oxigenului )

Se pot clasifica, dup natura substanelor finale n: - fermentaia alcoolic - fermentaia lactic - fermentaia butiric - fermentaia propionic a) Fermentaia alcoolic a glucidelor decurge sub influena drojdiilor Saccharomices cerevisiae. Mecanismul este identic cu cel al glicolizei, pn la acidul piruvic. n continuare, acidul piruvic este decarboxilat la acetaldehid, (n prezena catalizatorului piruvatdecarboxilaza, avnd drept coenzim tiaminpirofosfatul. Acetaldehida este apoi redus la etanol cu enzima alcooldehidrogenaza i NADH + H+.
CH3 CO
COOH
CH3 CHO
NADPH + H+ - NADP+

- CO2

CH3

CH2

OH

Acid piruvic

Acetaldehid

Etanol

n decursul fermentaiei alcoolice rezult i produi secundari: acetaldehid, acid lactic, alcool amilic, acid succinic, etc., care trebuiesc separai prin distilare fracionat. b) Fermentaia lactic este ntlnit n mod normal n diferite microorganisme, dar i n muchi la efort intens depus in condiii de concentraii de reduse de oxigen. Mecanismul fermentaiei lactice este analog glicolizei, pn la acidul piruvic. Mai departe, acidul piruvic se transform printr-un proces de reducere enzimatic n acid lactic sub aciunea enzimei lactatdehidrogenaza avnd drept coenzima NADH+H+.
CH3 CO COOH
NADPH + H+ - NADP+

CH3

CH OH

COOH

Acid piruvic

Acid lactic

Fermentaia lactic se aplic n industria alimentar la prepararea iaurtului, murturilor, panificaie, etc.).

c) Fermentaia propionic este un proces de degradare anaerob a glucidelor, care decurge sub aciunea unor bacterii specifice, n urma cruia se obine, comparativ cu fermentaia alcoolic i cea lactic, o cantitate mai mare de ATP, respectiv, cte 2 moli de ATP/mol de glucoz.
3 C6H12O6

4 H3C

CH2

COOH + 2 CH3

COOH + 2CO2 + H2O

Fermentaia propionic este utilizat, alturi de fermentaia lactic, n industria alimentar la fabricarea brnzeturilor, pentru activarea unor procese biochimice din sol, etc. d) Fermentaia butiric const n bioegradarea glucidelor de ctre anumite microorganisme, cu formarea acidului butiric.
C6H12O6 CH3 CH2

CH2

COOH + CO2 + H2O

Decurge cu descompunerea unei mari cantiti de substan organ, n soluri mltinoase, n nmoluri, n bli, cu degajare de miros neplcut.

Fermentaia aerob (n prezena oxigenului)

Fermentaia aerob este un proces biochimic care decurge n prezena oxigenului. Mecanismul de reacie este similar cu cel al fermentaiei alcoolice, pn la etapa de formare a aldehidei acetice, dup care, n urma procesului de oxidare, se formeaz acid acetic. Acidul acetic poate fi biodegradat pn la CO2 i H2O.
hexoze EMP acid piruvic aldehida acetica etanol [O] CH3 COOH CO2 + H2O

METABOLISMUL LIPIDELOR Biosinteza (anabolismul) lipidelor simple gliceride Biosinteza lipidelor (simple i complexe) reprezint procese metabolice importante n organism, deoarece lipidele (sub forma trigliceridelor) prezint importan biologic ca substane de nmagazinare a energiei n organism (cldura de ardere = 39 kcal/g, n comparaie cu cea a glucidelor = 17 kcal/g), iar lipidele complexe (fosfolipide, glicolipide, lipoproteine) intr n structura membranelor celulare sau au importan biologic deosebit, de reglare a funciilor celulare, reglarea colesterolului, a steridelor etc. Biosinteza (anabolismul) lipidelor ncepe n cea de-a doua etap a fotosintezei, scotoreacia, prin formarea acidului 3-fosfogliceric, compus implicat att n biosinteza lipidelor simple gliceride, ct i a celor complexe Pentru biosinteza gliceridelor se biosintetizeaz n prezena enzimelor caracteristice elementele componente, glicerol i acizii grai superiori, etap urmat apoi de biosinteza propriu-zis a lipidelor simple gliceride. Biosinteza glicerolului Biosinteza glicerolului decurge n strns corelaie cu metabolismul glucidic. Aldehida 3fosfogliceric i hidroxoacetonfosfatul, cele dou trioze fundamentale rezultate la glicoliz

(biodegradarea anaerob a glucidelor), sau la plante, n a doua etap a fotosintezei (scotoreacia) sunt reduse la 3-fosfoglicerol, din care, prin defosforilare rezult glicerolul liber.
H H C C H2C O OH O P
NADP NADPH

H2C H C H2C

OH OH O

ATP ADP

H2C H C H2C

OH OH OH

H2C C H2C

OH
NADPH

NADP

H2C H C H2C

OH OH O

ATP ADP

H2C H C H2C

OH OH OH

O O P

Triozofosfai

3-Fosfoglicerol

Glicerol

Biosinteza acizilor grai superiori Principalele locuri de biosintez a acizilor grai n organism sunt ficatul i celulele adipoase. Urmrind etapele metabolismului (relaiile dintre reaciile de oxidare a glucidelor, lipidelor, aminoacizilor pentru producerea de energie) se poate observa c precursorul biogenetic al acizilor grai superiori este acetilcoenzima A (CH3CO~SCoA). Transformarea acizilor grai n acetilcoenzima A poate fi parcurs i n sens invers, ca transformare a acetilcoenzimeiA n acizi grai. Faptul c acizii grai sunt biosintetizai din acetilcoenzima A, explic numrul par de atomi de C din catena lor. Excesul de glucide conduce la depunerea de grsimi, deoarece glucoza este transformat n acid piruvic, iar acesta, n final n acetilcoenzima A. Deoarece aceast etap este ns ireversibil, acetilcoenzima A nu se poate transforma n acid piruvic, deci grsimile nu pot fi convertite n glucoz n organismele animale (spre deosebire de plante i bacterii). Biosinteza acizilor grai superiori are loc atunci cnd necesarul energetic al organismului este acoperit i acetilcoenzima A nu mai intr n ciclul Krebs, furnizor de energie. Biosinteza acizilor grai se poate realiza pe dou ci metabolice : a) calea malonilcoenzimei A (calea citoplasmatic) b) calea mitocondrial

Biosinteza acizilor grai superiori pe calea mitocondrial (calea elongaiei)

Biosinteza acizilor grai pe aceast cale decurge la nivelul mitocondriilor, pornind de la acizi grai cu catena scurt. Drept partener de reacie al componentei iniiale - radicalul hidrocarbonatcoenzima A, este n acest mecanism acetil-coenzima A (n locul malonil-coenzimei A). Reaciile sunt aceleai ca la procesul de -oxidare, cu o singur excepie, reducerea legturii duble decurge cu NADPH + H+ n loc de FADH+H+. Se pare c aceast cale de biosintez este mai scurt pentrul acidul acetic, comparativ cu calea malonil-coenzimei A. Etapele prin care se realizeaz creterea catenei acizilor grai sunt aceleai cu cele ale cii malonil - coenzimei A, respectiv, (a) formarea cetoacidului gras activat, (b) formarea

hidroxoacidului gras activat, (c) biosinteza acidului gras nesaturat activat, (d) biosinteza acidului saturat cu doi atomi de carbon in plus n caten.
O R CH2 CH2 C~SCoA O

+ H3C

CH2

C~SCoA - HSCoA

Acid saturat activat (Cn)

O R CH2 CH2 C

Acetil-coenzima A (C2)
O CH2 C~SCoA NADPH + H+ NADP

Cetoacid activat (Cn+2)

OH NADPH + H+ NADP R CH2 CH2 C H CH2 O C~SCoA

Hidroxiacid activat (Cn+2)

O - H2O R CH2 CH2 C H H C C~SCoA NADPH2

Acid nesaturat activat (Cn+2)

O NADPH2 R CH2 CH2 H2 C H2 C C~SCoA

Acid saturat activat (Cn+2)

Biosinteza acizilor grai nesaturai

Organismul are nevoie de acizi grai nesaturai pentru producerea lipidelor polare constituente ale membranelor celulare i pentru alte necesiti. Acetia rezult din acizi grai saturai, prin dehidrogenare catalizat de enzime specifice. De exemplu, un sistem enzimatic din ficat poate introduce o singur legtur dubl, n mijlocul catenei acidului stearic, genernd acidul oleic. Sistemul enzimatic nu poate introduce i alte legturi duble, de aceea acidul linoleic cu dou duble legturi i acidul linolenic (cu trei duble legturi) nu pot fi sintetizai n organism ci sunt preluai numai prin alimentaie.
CH3 (CH2)7

CH2

CH2

(CH2)7

COOH

CH3

(CH2)7

C H

C H

(CH2)7

COOH

Acid stearic

Acid oleic

n plante, creterea indicelui de iod, odat cu avansarea spre coacere, dovedete posibilitatea transformrii acizilor grai saturai n acizi grai nesaturai. Biosinteza acizilor fosfatidici i a gliceridelor (acilglicerolilor) Acizii grai rezultai prin biosintez vor fi stocai n organism sub form de esteri cu glicerina, sub forma aa numitelor grsimi neutre, sau gliceride.

Legtura esteric nu se formeaz pornind de la glicerol, ci de la glicerolfosfat, forma activat energetic (cu ATP) i implicnd acizii grai activai cu acetil-coenzima A. Enzima care biocatalizeaz procesul este glicerinkinaza din ficat, care reacioneaz rapid cu acizii grai, dar care lipsete practic n esuturile grase i n muchi. n prima etap rezult acizi fosfatidici (monoacil- i diacilfosfatidici). Prin defosforilare cu o enzim fosfataz i esterificare cu un alt mol de acil-coenzim A, se formeaz triacilglicerol (triglicerida), care se depoziteaz ca grsime neutr.
H2C HC OH OH 2R O C~SCoA H2C HC O OH CO R H2C HC O O CO CO R R

2 HSCoA CH2O P

CH2O P
ADP ATP

CH2O P
ADP ATP

H2C HC CH2

O OH OH

CO

H2C HC CH2

O O OH

CO CO

R R

RCO~SCoA

Monoglicerida

Diglicerida
RCO~SCoA

H2C HC CH2

O O O

CO CO CO

R R R

Triglicerida

Biosinteza lipidelor complexe Lipidele complexe sunt componente de baz ale membranelor celulare. Din punct de vedere chimic sunt gliceroaminfosfatide, compui care prezint o legtur esteric la radicalul fosforil format cu un alcool polar (baz azotat), conform formulei generale:
H2C HC H2C O O O CO CO P R R O O OH NH2 CH2 CH COOH H2C HC H2C O O O CO CO P R R O O OH

CH2

CH2

NH2

Serinfosfatide

Colaminfosfatide (cefaline)

H2C HC H2C

O O O

CO CO P

R R O O OH CH2 CH2 N CH3 CH3 CH3

Colinfosfatide (lecitine)

Biosinteza bazelor azotate (serina, colamina, colina) Biosinteza bazelor azotate se realizeaz pornind de la acidul 3-fosfogliceric, dup urmtoarea schem de reacii:
H2C H C O OH P
NAD NADH

H2C C

O O

P
transaminare

H2C H C

O NH2

P
ADP

ATP

H2C H C

OH NH2

COOH

COOH

COOH

COOH

Ac. 3-glicerofosforic

Ester al acidului hidroxipiruvic

OH NH2 H2C - CO2 H2C

Ester fosforic al serinei

Serina

H2C H C

OH NH2

CH3I

H2C H2C

OH + N CH3 CH3 CH3

COOH

Serina

Colamina

Colina

Biosinteza gliceroaminfosfatidelor Lipidele cele mai rspndite n membranele celulelor eucariote sunt colaminfosfatidele i colinfosfatidele. Biosinteza lor se realizeaz prin parcurgerea urmtoarelor etape: - biosinteza acizilor fosfatidici - activarea bazei azotate cu compuii macroergici ATP i CTP - esterificarea acizilor fosfatidici (sau a gliceridelor) cu baza azotat activat.
H2C H2C O NH2 P P-P-P O CH2 O citozina

Fosfocolamina

CTP

H2 N

CH2

CH2

P-P

CH2

citozina

+ P-P
diglicerida 1
- CMP

2 acid fosfatidic
- CDP

H2C HC CH2

O O O

CO CO P

R R CH2 CH2 NH2

Colaminfosfatida (Cefalina)

Biodegradarea (catabolismul) lipidelor Biodegradarea gliceridelor Hidroliza enzimatic a trigliceridelor (triacilgliceroli) decurge sub aciunea enzimelor lipaze, care le scindeaz n etape, n diacil-, monoacilgliceroli (di- i monogliceride). Aceste enzime sunt controlate hormonal de ctre adrenalin i glucagon, care actioneaz lipolitic. Hidroliza grsimilor alimentare decurge n intestinul subire biocatalizat de lipaza pancreaza, activat de srurile acizilor biliari. Produii hidrolizei grsimilor, glicerolul i acizii grai superiori, urmeaz n metabolism ci diferite. Biodegradarea lipidelor complexe Catabolismul lipidelor complexe se realizeaz n etape, prin hidroliz enzimatic, cu eliberarea tuturor componentelor structurale: baze azotate, acizi fosfatidici, acid ortofosforic. Cu exceptia acidului fosforic (ortofosforic) fiecare dintre componente se biodegradeaz specific. a) Biodegradarea bazelor azotate Decurge sub aciunea enzimelor specifice :
H2C HC OH H2C NH2 -CO2 H2C OH NH2 CH3I HI H2C H2C OH N(CH3)3 [O] HC H2C O [O]

N(CH3)3

COOH

Serina

Colamina
HO C H2C O N(CH3)3 HO

Colina
C H2C O

Aldehida betainei
CO2 NH2 NH2

[O]

H3C

Betaina

Glicin

Metilamin

b) Biodegradarea acizilor fosfatidici decurge sub aciunea enzimelor din clasa hidrolazelor, numite lipaze (fosfolipaze), care elibereaz acidul fosforic, di- i monogliceridele, iar n final glicerolul.
H2C HC CH2 O O O CO CO P R R H2O H3PO4 H2C HC CH2 O O OH
Diglicerid

CO CO

R R Lipaza - 2 RCOOH

H2C HC H2C

OH OH OH
Glicerol

Acid Fosfatidic

c) Biodegradarea glicerolului este corelat cu metabolismul glucidic. Glicerolul poate fi fosforilat sub aciunea fosfokinazei i a ATP (n ficat) la fosfoglicerol, care prin oxidare (cu fosfogliceroldehidrogenaza i ATP) se transform n aldehida fosfogliceric. Aceasta poate participa la biosinteza poliglucidelor sau se poate biodegrada de-a lungul ciclului E.M.P (pn la acid piruvic) i ciclului Krebs pn la CO2 i H2O, cu eliberare de energie.
H2C HC H2C OH OH OH
Fosfokinaza ATP

H2C HC H2C

OH OH O P NADP+ NADPH2

HC HC H2C

O OH O
Glicoliza

CH3 C O
Krebs

CO2

+
H2O

COOH

Glicerol

3- Fosfoglicerol

Aldehida fosfoglicerica

Acid piruvic

H2C C H2C

OH O O P

Fructoza 1,6-difosfat

Oligo-, Poliglucide

d) Biodegradarea acizilor grai superiori Biodegradarea acizilor grai superiori decurge n mitocondrii, n prezena sistemelor enzimatice specifice. Deoarece acizii grai sunt relativ ineri chimic, ei trebuie activai prin transformare n tioesteri, cu ajutorul coenzimei A, a compusului macroergic ATP, a Mg2+ i a enzimei acil-coenzima A-sintetaza (tiokinaza). Printr-o succesiune de reacii inverse celor de la biosinteza acizilor grai superiori, catena de acid gras superior este scindat n uniti de 2 atomi de C, sub form de acetil-coenzime A (CH3 CO~SCoA). Deoarece reaciile decurg la atomul de carbon din poziia (fa de grupa carboxil, descompunerea se numete calea -oxidrii (spirala Knoop-Lynen). Acizii grai saturai cu numr impar de atomi de C se biodegradeaz dup acelai mecanism al -oxidrii, dup o prealabil reacie de carboxilare n prezena coenzimei A, a biotinei, a ATP i Mg2+ (conversie la acid gras cu numr par de atomi de carbon).

Produsul biodegradrii acizilor grai superiori cu numr impar de atomi de carbon este ns acidul propionic, nu acetil-coenzima A.
O R CH2 CH2 C OH ATP R CH2 CH2 O C O PMA HSCoA AMP

P-P

Acid gras superior neactivat

O HSCoA AMP R CH2 CH2 C~SCoA NADP+ NADPHH+ R C H C H O C~SCoA HOH

Acid gras superior saturat activat

OH HOH R C H CH2 O C~SCoA NADP+ NADPHH+

Acid gras superior nesaturat activat

O R C CH2 O C~SCoA

- Hidroxiacil coenzima A
O R' CH2 C OH

- Cetoacil coenzima A
O

H3C

C~SCoA

Biodegradare ciclica O H3C C~SCoA Biodegradare aeroba ciclul Krebs CO2

+
H2O

METABOLISMUL PROTIDELOR Cele mai multe dintre protidele organismelor superioare sunt continuu biodegradate i biosintetizate. La om si animale, timpul de njumtire biologic a albuminelor din plasm este de 20-25 de zile, cnd jumtate din cantitatea de albumin este biodegradat i nlocuit cu una nou sintetizat. Chiar i proteinele intracelulare (enzimele) sunt supuse unor procese de biodegradare i biosintez continu n perioade de timp de la cteva ore la mai multe zile. De aceea, pentru un adult, necesarul de aminoacizi este de 1 g/zi/kg corp, deoarece organismul uman nu poate sintetiza dect jumtate din cei 20 de aminoacizi proteinogeni. Biosinteza (anabolismul) protidelor Etapa de biosintez a protidelor (anabolismul) ncepe cu biosinteza aminoacizilor, urmat de biosinteza protidelor, n ordinea complexitii lor: aminoacizi peptide peptone albumoze proteine proteide (holoproteide) (heteroproteide) Biosinteza aminoacizilor Biosinteza aminoacizilor se realizeaz n principal pe dou ci metabolice:

aminare reductiv a cetoacizilor transaminare

Aminarea reductiv a cetoacizilor reprezint o cale principal de biosintez a aminoacizilor, direct din amoniac i cetoacizii formai n organism prin degradarea aerob a glucidelor (ciclul Krebs). Aminarea cetoacizilor decurge n prezena enzimei glutamatdehidrogenaza care are drept coenzim NAD+ sau NADP+. Reacia decurge cu formarea intermediar a unui iminoacid, care va fi redus enzimatic, conform reaciei:
NAD

R C O

NADH + H+

R HC NH2

NH3

- H2O

NH

COOH

COOH

- Cetoacid

COOH

Iminoacid

Aminoacid

Se biosintetizeaz prin acest mecanism aminoacizii: alanina, acid aspartic, acid glutamic din cetoacizii respectivi: acid piruvic, acid oxalilacetic, acid cetoglutaric.
CH3 C O CH3 HC NH2

C H2C

COOH COOH

H2N

H C H2C

COOH COOH

COOH

Acid piruvic

- Alanina

COOH

Acid oxalilacetic

Acid aspartic

C CH2 H2C

COOH

H2N

CH CH2

COOH

COOH

H2C

COOH

Acid - cetoglutaric

Acid Glutamic

Transaminarea

Transaminarea const n transferul grupei amino -NH2 de la un aminoacid la un cetoacid, dup un mecanism care cuprinde ca etape intermediare formarea unor baze Schiff:
R1
HC NH2

R2 +
C O

R1
C O

R2 +
HC NH2

COOH

COOH

COOH

COOH

R1
HC NH2 O

R2
C - H2O

R1
HC N

R2
C COOH

R1 + 2[H]
HC H N

R2
CH

- 2[H]
COOH COOH COOH

COOH

COOH

Aminoacid 1

Cetoacid 2
R1 - 2[H]
C N

Baza Schiff 1
R2
CH COOH + H2O

R1
C O

R2 +
HC NH2

COOH

COOH

COOH

Baza Schiff 2

Cetoacid 1

Aminoacid 2

Transaminarea este catalizat de o enzim specific transaminaza care are drept coenzim piridoxalfosfatul (vitamina B6). Importana deosebit a reaciilor de transami-nare, reacii biochimice reversibile, const n realizarea corelaiei dintre metabolismul glucidic i cel protidic. Aminoacizii sunt intermediari la obinerea altor biomolecule importante, cum ar fi: peptide, proteine, antibiotice (gramicidina), hormoni (adrenalina, noradrenalina). Biosinteza proteinelor (poliprotidelor) Proteinele (holoproteide superioare) se sintetizeaz din aminoacizi printr-un proces continuu i complex, care decurge cu vitez mare, la nivelul ribozomilor din celule, cu implicarea acizilor nucleici i a compuilor macroergici ATP, GTP care furnizeaz energia necesar proceselor biochimice. Aminoacizii se unesc n catene macromoleculare, prin legturi peptidice, ntr-o anumit succesiune, conform codului genetic coninut n ADN. Succesiunea bazelor azotate din ADN este transcris (cu respectarea principiului complementaritii) ntr-o anumit structur a acizilor mARN i tradus cu ajutorul acizilor t ARN din codonii mARN pe anticodonii tARN n noua structur proteic (limbajul bazelor azotate din acizii nucleici este tradus n limbajul aminoacizilor proteinei). Proteinele sunt sintetizate din cei 20 de aminoacizi proteinogeni, iar secvena bazelor azotate din mARN reprezint secvena amionacizilor din protein. Fiecare aminoacid este reprezentat pe mARN printr-o triplet de baze azotate numit codon (cu cele 4 baze azotate exist 64 codoni (triplete) diferii. Etapele necesare sintezei proteinelor sunt: reduplicarea ADN, const n desfacerea legturilor de hidrogen dintre bazele azotate complementare, urmat de desfurarea spiralei bicatenare, cu formarea celor dou catene polipeptidice simple de ADN; transcrierea (transcripia) mesajului genetic, respectiv o anumit succesiune a bazelor azotate de pe ADN (matria) pe catena polinucleotidic a mARN, care este sintetizat cu respectarea riguroas a complementaritii bazelor azotate din ADN, cu deosebirea c timina din ADN este nlocuit n mARN cu uracil traducerea (translaia) este o etap important n determinarea caracterului i nsuirilor unui organism, deoarece limbajul bazelor azotate din acizii nucleici (o anumit secven, respectiv codul genetic) este tradus n limbajul aminoacizilor constitueni ai proteinei (o anumit secven a aminoacizilor).

Fiecare secven de 3 baze azotate din structura acizilor nucleici constituie un codon, iar fiecrui codon i corespunde un anumit aminoacid. Conform principiului complementaritii bazelor azotate, unui anumit codon de pe ADN i corespunde un anumit codon de pe mARN i apoi un anticodon de pe tARN. Reprezentarea acestor etape este redat schematic n figura urmtoare.
ADN

Structura secundara: dubla catena spiralata

REDUPLICARE

IN NUCLEU

ADN

Structura primara: catena polinucleotidica simpla - sediul mesajului genetic - matrita pozitiva a originalului

TRANSCRIERE ARNm

ATGCAGCTA

Catena polinucleara simpla: - purtatorul mesajului genetic - matrita negativa a originalului Repozitivarea (realizarea) mesajului genetic

1'

2'

3'

UACGUCGAU

IN CITOPLASMA

TRANSLATIE 1'' 2'' 3''

AUGCAGCUA
AA1 AA2 AA3
leucina Metionina glicina

PROTEINA

CO R1 NH CO R2 NH CO R3 NH

Din punct de vedere biochimic, etapa de traducere (translaie) reprezint biosinteza propriu-zis a macromoleculelor proteice i cuprinde mai multe etape: a) activarea enzimatic a aminoacizilor din citoplasm const n aciunea ATP asupra aminoacizilor, n prezena enzimei amionoacil- ARN sintetaza i a ionilor Mg2+, cu formarea complexului aminoacil-AMP- enzima.
O
R CH

Mg2+
r

O
R CH

C + P ~P ~ P

A + Enz

Enz + P ~ P
P

NH2

OH

ATP

NH2

Aminoacid

Aminoaciladenilat

Enz = aminoacil ARN - sintetaza b) formarea complexului aminoacil-tARN, prin transferul restului aminoacil de la complexul aminoacil-AMP-enzima la capatul C3 -OH al tARN (se formeaz o legtur esteric la C3-OH de la secvena terminal a tARN a trinucleotidei CCA. Trinucleotida terminal CCA a tARN are braul flexibil i poate adapta grupa aminoacil la poziia reactiv determinat de pe ribozom.

O R CH NH2 C
Enz

ARNt

CH2

ADENINA

ARNt

CH2

ADENINA

O~ P

O OH OH
R

+ P

Tib

A + Enz

AMP CH C ~ OH OH NH2 complexul aminoacil t.RNA

a.a. AMP Enz aminoaciladenilat-Enz

partea terminala a t.RNA

Evidenierea modului n care tARN este capabil s identifice poziia de legare a aminoacidului n lanul peptidic, poate fi realizat cu ajutorul modelului trifoi al tARN:
Codon mRNA

C anticodon al tRNA

CH2

ADENINA

A 3` Aminoacid activat OH OH adenina riboza P O O C NH2 CH R

Capatul tRNA t RNA C C P CH2 O ADENINA

A 3` O O C HC R NH2 OH Complexul aminoacil RNA

Legarea corect a aminoacidului cu tARN corespunztor se datoreaz specificitii absolute a enzimei aminoacil-ARN-sintetaza. Se asigur astfel, recunoaterea codonului de ctre anticodon (i nu de ctre aminoacidul activat). c) formarea legturii peptidice decurge pe ribozomi (particule coninnd rARN, prezente n toate celulele) i se realizeaz ntre aminoacizii transportai fiecare de tARN corespunztori (aflai pe codonii dictai de mesajul genetic nscris pe mARN). Ribozomii posed pe suprafaa lor dou situsuri catalitice: - situsul P (donor), pe care se va gsi complexul aminoacil 1-t1ARN - situsul A (acceptor), pe care se afl complexul aminoacil 2 t2ARN. ntre cei doi aminoacizi alturai, legtura peptidic -NH-CO- se realizeaz ntre grupa carbonil a aminoacidului 1, de pe poziia donor a ribozomului (corespunzator codonului 1 de pe mARN) i grupa amino (-NH2) a aminoacidului 2 de pe poziia acceptor a ribozo-mului (corespunznd codonului 2 de pe mARN).

n urma formrii legturii peptidice ntre cei doi aminoacizi, molecula de t1 -ARN este eliberat din complexul aminoacid 1-t1 ARN i poate fi din nou utilizat.
R1 R2 HC
** ARNt ~ C

HC * NHH + ARNt ~ C

NH2 O - ARNt

O
** ARNt ~ C

R2 CH NH CO

R1 CH NH2

acceptor donor RIBOZOM

dipeptida

Prin deplasarea ribozomilor de-a lungul mARN (sau deplasarea mARN pe suprafaa ribozomilor), codonii de pe mARN trec succesiv prin dreptul situsului A de pe ribozomi, dictnd natura complexului aminoacil-tARN care urmeaz s fie fixat pe acest situs. Dipeptida format, sub forma complexului aminoacid 1-aminoacid 2t2ARN, trece pe poziia donor a ribozomului, lsnd liber poziia acceptor, corespunzator codonului 3 de pe mARN. d) elongaia (creterea lungimii lanului polipeptidic) se realizeaz dup un mecanism identic cu cel implicat n cazul biosintezei dipeptidei. Situsul P al ribozomului este ocupat cu complexul dipeptidil-t2ARN, iar situsul A este vacant i se poziioneaz la al treilea codon de pe mARN, formnd complexul aminoacil 3-t3ARN. Dup formarea noii legturi peptidice ntre grupa carbonil legat de complexul dipeptidil-t2ARN i grupa amino de la complexul aminoacil 3-t3ARN, are loc deplasarea tripeptidei formate (sub forma complexului AA1-AA2-AA3-t3ARN) pe situsul donor (situs P) al ribozomului cu eliberarea concomitent a situsului acceptor (situs A) al ribozomului, care se va poziiona n dreptul codonului 4 de pe mARN, n vederea formrii complexului aminoacil-4-t4 ARN.Dac proteina care urmeaz a fi sintetizat are, de exemplu, 200 de aminoacizi, etapa final implic transferul peptidei coninnd 199 de aminoacizi spre aminoacidul final, legat n complexul cu tARN, cu formarea unui complex protein-tARN. Captul N-terminal al proteinei este sintetizat primul, captul C-terminal, ultimul. e) Terminarea biosintezei lanului polipeptidic al proteinei Lungimea lantului polipeptidic este determinat genetic, prin transcrierea pe mARN a unui codon stop (nu codeaz nici un aminoacid): UAG, UAA, AGA (pentru care nu exist nici un tARN cu anticodoni corespunztori). Aceti codoni "non-sens" sunt ns recunoscui de proteine citoplasmatice specifice, denumite factori de eliberare (protein release factors), care desprind proteina de pe tARN. Lanul polipeptidic este eliberat de pe situsul P al ribozomului i de pe tnARN printr-o reacie de hidroliz. Ribozomul se detaeaz de pe mARN i este apt pentru o nou etap de iniiere. Lungimea lanului proteic este determinat genetic, prin transcrierea pe mARN a unui codon stop.Proteinele sintetizate (holoproteide) particip la biosinteza heteroproteidelor, a enzimelor, la ndeplinirea unor funcii specifice organismului. Concomitent se desfor i un proces invers, de biodegradare a proteinelor. Biodegradarea (catabolismul) protidelor Biodegradarea proteinelor Proteinele (holoproteidele) libere sau rezultate din biodegradarea heteroproteidelor se scindeaz pe cale enzimatic n aminoacizii componeni. Enzimele proteolitice (proteinazele) sunt alturi de amilaze cele mai cunoscute i importante enzime hidrolitice (C-N hidrolaze).

Biodegradarea aminoacizilor Aminoacizii rezultai prin biosinteza sau prin biodegradarea proteinelor pot fi utilizati n continuare la: - biosinteza proteinelor noi - biosinteza altor compui cu azot n molecul - sinteza de aminoacizi (prin transaminare, aminare reductiv) - biodegradare total pn la: NH3, CO2, H2O. n organismele animale i vegetale biodegradarea aminoacizilor decurge preponderent prin: - dezaminri - decarboxilri simple sau nsoite de dezaminri - transaminri. a) Biodegradarea aminoacizilor prin dezaminare Dezaminrile sunt reactii catalizate enzimatic, care constau n eliminarea unor grupe amino (-NH2), sub form de amoniac (NH3) cu formarea unor compui ternari (C, N, O) care pot constitui punct de plecare pentru alte transformri biochimice. Dezaminarea oxidativ const n eliberarea a doi atomi de hidrogen, cu formarea unui iminoacid instabil, care n prezena apei hidrolizeaz cu formare de NH3 i cetoacid. Enzimele implicate fac parte din clasa oxidoreductazelor i pot fi: glutamatdehidrogenaza n prezena NAD+ sau NADP+, alanindehidrogenaza n prezena FAD, etc. Cetoacizii rezultai pot fi metabolizai (biodegradai) la CO2 i H2O, sau pot fi transformai n monoglucide care vor parcurge n sens invers ciclul de biodegradare EMP (glicoliza). Aminoacizii care se pot transforma n cetoacizi se numesc aminoacizi cetogeni, iar cei care se pot transforma n glucoz se numesc aminoacizi glucoformatori.
CH3 HC NH2 FAD FADH2 CH3 C NH +H2O CH3 NH3 + C O

COOH

COOH

COOH

Alanina

Iminoalanina

Acid piruvic

Dezaminarea hidrolitic a aminoacizilor conduce la obinerea NH3 unui hidroxiacid.

CH3 CH NH2 COOH HOH NH3 + CH3 CH OH COOH [O] CH3 C O COOH

- Alanina

Acid lactic

Acid piruvic

Hidroxiacidul poate fi transformat, n prezena dehidrogenazelor n cetoacid, care poate fi metabolizat n continuare prin ciclul Krebs sau poate fi retransformat n aminoacizi. Dezaminarea reductiv a aminoacizilor conduce la obinerea NH3 i a acidului saturat cu acelai numr de atomi de carbon:
CH3 CH

COOH

[H]

NH3 + CH3

CH2

COOH

- Alanina

NH2

Acid propionic

Acidul propionic format, sub forma propionil-coenzimei A este implicat n biosinteza acizilor grai superiori cu numr impar de atomi de carbon, pe calea malonil-coenzimei A. Dezaminarea desaturant (biocatalizat de enzime din clasa liazelor) are drept produs de reacie, pe lng NH3, un acid carboxilic nesaturat cu acelai numr de atomi de carbon n molecul:
CH3 CH NH2 COOH NH3 + CH2 CH COOH

- Alanina

Acid acrilic

b) Decarboxilarea aminoacizilor Decarboxilarea aminoacizilor este o cale de biodegradare important, biocatalizat de enzime specifice, aminoaciddecarboxilaze, care au drept coenzima piridoxalfosfatul (vitamina B6). Ca produi de reacie, pe lng CO2, se formeaz amine primare, denumite amine biogene. Mecanismul reaciei de decarboxilare este urmtorul:
R CH NH2 COOH + O C H -H2O R CH N COOH CH -CO2

Aminoacid
R -CO2

Enz-piridoxalfosfatul
CH2 N CH H2O R CH2

Enz-iminoacid

NH2 + O

Enz-imin

Amin

Piridoxal-fosfat

Unele dintre aminele biogene rezultate prezint activitate farmacologic, altele sunt componente ale coenzimelor sau contribuie la sinteza unor heterociclii cu azot (pirol, piridina) care intr n structura unor alcaloizi.
H2C CH2 NH2 (CH2)2 CH NH2 COOH -CO2 H2N (CH2)4 NH2
-NH3

CH2 N H CH2
-4H

HC HC N H

CH CH

H2C

Ornitina

Putresceina

Pirolidin
H2 C

Pirol
H C CH2 HC HC N CH CH

CH2 NH2

(CH2)3

CH NH2

COOH

-CO2

H2N

(CH2)5

NH2

H2C H2C N H

CH2

Lizina

Cadaverin

Piperidin

Piridin

Prin natura compuilor rezultai, reaciile de biodegradare a aminoacizilor reflect corelaiile dintre metabolismul proteic - glucidic - lipidic. Metabolismul amoniacului Amoniacul rezultat prin dezaminare ca i cel preluat de ctre plante din sol n decursul procesului de nutriie, este o substan toxic; nivele ridicate prezente n snge impiedic funcionarea creierului, provocnd com. De aceea, amoniacul nu este transportat liber de-a lungul esuturilor la ficat ci este transformat nti n amide netoxice. Cile de metabolizare a amoniacului sunt urmtoarele: fixarea sub forma de amide (ndeosebi ale acidului glutamic i aspartic) participare la biosinteza aminoacizilor, prin aminarea reductiv a cetoacizilor formarea de sruri de amoniu ale acizilor organici (oxalic, citric, malonic, fumaric, etc.) din metabolism. a) Fixarea amoniacului sub forma de amide
O R C O R C OH + HNH2 - H2O R OH + HNH2 R O C O C NH2 amida ONH4 sare de amoniu

acid organic amoniac

COOH H C CH2 O C OH O NH2

COOH HC CH2 C O P O NH2

COOH HC CH2 C NH2 NH2

Acidul asparagic
COOH H C NH2

Asparaginfosfat
COOH HC NH2 COOH HC NH2

Asparagina

(CH2)2 O C OH O

(CH2)2 C O P O

(CH2)2 C NH2

Acidul glutamic

Glutaminfosfat

Glutamina

Glutamina este unul din cei 20 de aminoacizi constitueni ai proteinelor i este implicat n biosinteza multor altor metabolii (este utilizat ca surs de azot). b) Metabolizarea amoniacului prin aminare reductiv (transaminare) Peste 30% din amoniacul rezultat n muchi la biodegradarea proteinelor este trimis n ficat, sub form de alanin (sau glutamin). Alanina formeaz prin transaminare acid piruvic, care este convertit n ficat la glucoz, care trece apoi n snge i din nou n muchi. Secvena de reacii constituie ciclul glucozo-alaninic. Toate aceste reacii, n care amoniacul este utilizat

la sinteza amidelor sau a unor noi aminoacizi, reprezint ci de corelaie a metabolismului protidic cu cel glucidic (ciclul acidului glutamic, ciclul acidului aspartic). c) Metabolizarea amoniacului prin ciclul ureeogenetic (ciclul ornitinic sau ciclul Krebs-Henseleit) Plantele superioare, mamiferele, pestii, ciupercile i bacteriile pot transforma amoniacul n uree, alt form netoxic de pstrare i de transport n organism. In organismele vii, formarea ureei decurge printr-o transformare ciclic complex, denu-mit ciclul ureogenetic (ciclul ornitinic sau ciclul Krebs-Henseleit).

Ciclul KREBS HENSELEIT

dezaminari ATP NH3 + CO2 H2O ureaza NH2 uree C O NH2 H2C -PPAMP NH2 C O ~P -H3PO4 NH2 H2C

carbamilfosfatul O NH2 C NH O + H2N COOH CH CH2 COOH Acid aspartic HO COOH CH CH2 COOH Acid malic din ciclul KREBS

(CH2)2 HC NH2

(CH2)2 HC NH2

COOH NH2 izouree C OH NH NH2 C H2C NH NH H2C ORNITINA

COOH CITRULINA

NH2 C NH N

COOH CH CH2 COOH

(CH2)2 HC NH2

(CH2)2 HC NH2

COOH ARGINA

COOH Acid arginsuccinic (suaccinil orginina)

HOOC

H C

CH

COOH Acid fumaric

Ureea este produs n ficat prin scindarea hidrolitic a argininei la ornitin. Amoniacul de la catabolismul aminoacizilor poate fi utilizat pentru a reface arginina din ornitin, atomul de carbon provenind de la CO2 din metabolismul glucidic. La realizarea biosintezei ureei particip i un alt aminoacid, citrulina. Dioxidul de carbon activat enzimatic cu enzima carbamilfosfatsintetaza i cu aportul energetic al ATP, reacioneaz cu NH3 formnd carbamilfosfatul care reacioneaz cu ornitina formnd citrulina. Citrulina reactioneaza cu acidul aspartic (provenit prin trans-aminare din acid oxalilacetic, format n ciclul Krebs), n prezena enzimei argininsuccin-sintetaza, a ATP i ionilor Mg2+, cu formarea acidului argininsuccinic. Acesta este scindat de ctre

argininsuccinliaza n arginin i acid fumaric (care poate conduce la acid aspartic, n ciclul Krebs). Arginina rezultat este scindat de ctre hidrolaza arginaza n ornitin i izouree, care se izomerizeaz la uree, scindabil sub aciunea ureeazei n CO2 i NH3, compui care pot iniia biosinteza aminoacizilor, glucidelor, etc. Ciclul ornitinic (ciclul KrebsHenseleit) reprezint i el o cale de corelaie a metabolismului proteic, prin aminoacidul ornitina, cu metabolismul glucidic. Corelaii biochimice se pot stabili i ntre compuii fundamentali, glucide, lipide, protide i enzime, hormoni, acizi nucleici, etc. Abordarea complez a fenomenelor biochimice impune ca, pe lng studiul transformrilor diferitelor substane, s se ia n considerare i aspectele energetice ale acestor procese, cu evidenierea corelrii biosintezei, consumatoare de energie, cu biodegradarea, generatoare de energie. Trebuie, n acelai timp, acordat importana cuvenit influenei factorilor de mediu n care triesc organismele vegetale i animale, condiiilor n care i procur materia prim (H2O, CO2, O2, substane minerale, etc.), ct i energia necesar biotransformrilor, precum i influenei factorilor de mediu (clima, diferite radiaii, etc.), asupra evoluiei normale a diferitelor organisme.