LP 12: Diagnosticul de laborator al hepatitelor acute virale. Obiective: 1.

Definirea hepatitelor virale, enumerarea principalelor virusuri cu tropism hepatic i prezentarea metodelor specifice i nespecifice de diagnostic. 2. Diagnosticul specific al hepatitelor cu transmitere predominant fecal-oral: VHA, VHE (metode directe, indirecte, semnificaia markerilor virali) 3. Diagnosticul specific al hepatitelor cu transmitere predominant parenteral: VHB, VHD, VHC (metode directe, indirecte, semnificaia markerilor virali, algoritm de diagnostic) 1. Hepatite virale = boli sistemice care afecteaz ficatul Virusurile hepatitei hepatotropism obligatoriu VHA, VHE = nude, ARNm.c. (+) transmitere predominant pe cale fecal-oral cauzeaz hepatite acute autolimitate VHB, VHC = invelite transmitere predominant parenteral infecii persistente evoluie spre hepatit cronic sau cancer hepatic VHD = ARN defectiv (infecteaz numai asociat VHB) VHG Alte virusuri cu tropism hepatic (ocazional): VEB, VCM, VHS, v febrei galbene afectarea hepatic este secundar Diagnosticul de laborator teste nespecifice (ALAT, ASAT, bilirubin, fosfataz alcalin, etc..) teste specifice directe detectare antigene/genom/ evideniere virioni (ME)/izolare indirecte detectare Ac IgM/IgG 2. Diagnosticul specific al hepatitelor cu transmitere predominant fecal-oral Diagnosticul hepatitei cu VHA: Direct = apanajul cercetrii Virusul este prezent n snge i MF cu 2 sptmni anterior debutului bolii i 1-2 sptmni dup dispariia icterului. - izolarea VHA - evidenierea virionilor n materii fecale prin IME Serologic = depistarea Ac anti-VHA prin ELISA - IgM persist 2-4 luni - IgG persist toat viaa
Semnificaie Ac anti-VHA/IgM Ac anti-VHA/totali (IgM+IgG)

infecie acut/recent trecere prin boal cu imunizare

+ +

Diagnosticul hepatitei cu VHE: Direct = inaccesibil pentru practica de rutin - evidenierea ARN/VHE prin PCR (n ser, MF) sensibilitate sczut (50%) - evidenierea virionilor n MF prin IME cercetare - identificare de Ag virale n probe de esut hepatic prin IF Indirect = evideniere Ac anti-VHE/IgM sau IgG prin ELISA sau WB 3. Diagnosticul specific al hepatitelor cu transmitere predominant parenteral Diagnosticul hepatitei cu VHB: Direct - evideniere antigene VHB n ser prin ELISA: Ag HBs, Ag HBe - evideniere ADN/VHB prin PCR - evideniere Ag HBc n hepatocit prin ME Indirect = evideniere Ac anti-HBs, anti-HBe, anti-HBc prin ELISA Semnificaia markerilor n HVB: AgHBs = infeciozitatea sngelui n portaj Ag HBe = contagiozitate periculoas prin snge i secreii Ac anti-HBc IgM = infecie acut/recent reapar n acutizrile formelor cronice IgG = rol anamnestic Ac anti-HBs = imunitate la reinfecie Ac anti-HBe = potenial infecios redus al sngelui evoluie spre vindecare (excepie tulpinile mediteraneene) ADN/VHB = replicare activ/infectivitate
AgHBs + + (>6 luni) + (>6 luni) Ag HBe + antiHBc/IgM + anti-HBc/ totali + + (>6 luni) + (>6 luni) + (>6 luni) + + + + antiHBs antiHBe Diagnostic Hepatit acut cu VHB Purttor sntos (+ transaminaze normale) Hepatopatie cronic (+ creterea ALAT > 2,5 ori) Vindecare cu imunizare Status post-vaccinare

boal acut boal cronic

Pentru orice marker testat putem discuta i eventualitatea unor rezultate: a. fals (-) consecinele lor: triajul donatorilor, riscul nedecelrii portajului de AgHBs soluie: se folosesc mai muli markeri (e.g AgHBs i antiHBc/totali) si teste surogat (valoarea transaminazelor, ca marker nespecific pentru trecerea prin boal, absena bolii, etc) b. fals (+) diagnostic de HVB, n absena virusului; mai rar posibil (diagnosticul de HVB se stabilete pe baza mai multor markeri). Aspect important de cunoscut pentru explicarea unor posibile profiluri serologice particulare Soluia: se testeaz acelai marker, cu mai multe truse (de la productori diferii). Diagnosticul hepatitei cu VHD ! doar la pacienii Ag HBs(+): purttori sntoi, infecii acute sau cronice cu VHB
Coinfecia = infectarea simultan cu VHB+VHD evoluie sever n faza acut de regul nu se cronicizeaz Suprainfecia = suprapunerea VHD pe un teren AgHBs(+) evoluie fulminant frecvent forme cronice foarte frecvente

Diagnostic direct - detectare antigen delta - detectare ARN genomic Diagnostic serologic = detectare, prin ELISA, a Ac anti-VHD/IgM, IgG sau totali Diagnosticul hepatitei cu VHC Direct evideniere ARN/VHC prin tehnici de biologie molecular (RT-PCR) teste calitative confirm boala n caz de rezultate serologice echivoce evideniaz infecia cu VHC precoce, la 1-2 sptmni de la contactul infectant certific debarasarea de virus/vindecarea (sunt mai sensibile dect testele cantitative) teste cantitative msoar ncrctura viral monitorizarea terapiei evideniere Ag de miez, prin ELISA - testul se pozitiveaz la 2 zile dup PCR - util pentru a surprinde perioada ferestrei imunologice - util n centrele de transfuzii pentru a decela persoanele aflate n perioada anterioar seroconvesiei sau a cazurilor rare, la care Anti-VHC apar tardiv sau niciodat Indirect = evidenierea de Ac prin: teste tip screening (ELISA de generaia a III-a) - se folosesc Ag structurale i nestructurale adsobite pe faza solid - mai sensibile i mai specifice dect trusele de generaia a II-a - Ac pot fi decelai mai repede, comparativ cu trusele de prim generaie teste de confirmare (RIBA - Recombinant Immunobinding Assay)

similar WB, dar antigenele sunt obinute prin recombinare i sunt fixate la egal distan pe banda de nitroceluloz poate specifica tipurile de Ac (anti C-100-3, C 22-3, C 33c; ultimele 2 tipuri de Ac apar cel mai precoce n infecia acut); util i pentru predicii evolutive, de rspuns la tratament, etc Interpretare: prezena a cel puin dou categorii de Ac test pozitiv nicio band (Ac abseni) rezultat negativ band (o categorie de Ac) rezultat indeterminat (se apeleaz la IF sau RT-PCR sau/i se repet testarea dup 2-3 luni)
Algoritm de diagnostic

ELISA

Ser repetat reactiv (RR)

Teste de confirmare

RIBA sau WB

negativ

indeterminat (o singur categorie de Ac)

pozitiv

ELISA peste 2-3 luni

RT-PCR

n sal se gsesc: - plci pentru ELISA - plane pentru evidenierea dinamicii markerilor specifici pentru HVA, HVB, HVD, HVC