IMUNOLOGIE

LUCRRI PRACTICE

CUPRINS
Teste imunologice n laboratorul clinic Reac ia antigen!anticor"

A# Reac ii imnoc$imice %olosite n laboratorul clinic

&# Reac ia 'e "reci"itare a) Reacia de precipitare n mediul solid - Difuzia n gel - Imunodifuzia radial simpl - Dubla difuzie n gel - Difuzia combinat cu migrarea electroforetic - Imunoelectroforeza - Contraimunelectroforeza - Electroimunodifuzia - Imunofixarea b) Reacia de precipitare n mediul lichid - Reacia de precipitare n inel - Imunonefelometria (# Reac ia 'e aglutinare a) Reacia de aglutinare direct b) Reacia de aglutinare indirect c) Reacia de inhibare a aglutinrii d) Reacia de aglutinare mediat de anticorpi anti-imunoglobuline )# Reac ia 'e neutrali*are +# Reac ii ce utili*ea*, com"lement a) Reacia de fixare a complementului b) estul de imunohemoliz pasi! n prezena complementului c) Determinarea imunohemolitic a complementului -# Reac ii cu reacti.i marca i a) Reacia de imunofluorescen - Reacia de imunofluorescen direct - Reacia de imunofluorescen indirect - Reacia de imunofluorescen cu fixarea complementului b) "naliza radioimunologic c) "naliza imunoenzimatic - ehnica E#I$" /# Te$nica 0estern 1lot

1# Meto'e 2i te$nici 'e imunocitologie

&# Te$nica "entru celule lu"ice (# Testul re'ucerii N1T )# C$emiluminiscen a +# Testul in$ibi iei a'eren ei leucocitelor -# Imuno%enoti"area cu a3utorul citometriei n %lu4 /# Testul 'e trans%ormare blastic, a lim%ocitelor 5# Reac ia 'e lim%ocitoto4icitate

C# Princi"alele reac ii antigen!anticor" 2i a"lica iile acestora

Teste imunologice n laboratorul clinic Imunologia clinic folose%te numeroase tehnici pentru studiul proteinelor care mediaz imunitatea umoral& ca %i pentru studiul celulelor care uau parte la imunitatea celular "naliza imunologic este considerat ca una dintre cele mai de !'rf tehnici din domeniul biomedical( )iind foarte costisitoare& aceasta a ptruns cu dificultate n laboratoarele clinice( Complexitatea %i e!oluia rapid a acestor tehnici au fcut necesar conturarea unui departament specializat n cadrul laboratorului clinic& care se ocup cu metodele imunologice de diagnostic *imunodiagnostic)( Domeniile mai nou dez!oltate sau n curs de dez!oltare n laboratoarele clinice cuprind+ imunochimia& imunocitologia& histocompatibilitatea& radioimunoanaliza& enzimimunoanaliza( Imunitatea celular se studiaz printr-o serie de teste de imunocitologie( ,etodele de imunochimie aduc informaii asupra unor proteine din s'nge %i alte lichide biologice( De obicei se folosesc antigenul *"g) necunoscut %i reacti!ul& anticorpul *"c) cunoscut( ,etodele de analiz imunochimic cuprind operaiile de obinere %i purificare a "g %i "c %i de msurare a reaciilor dintre acestea( ,surarea reaciei "g-"c permite at't estimarea cantitati! a "g c't %i caracterizarea acestuia sub aspect imunochimic( ,etodele cele mai utilizate n analiza imunochimic se bazeaz pe reacia "g-"c Reacia dintre un "g %i un "c presupune legarea gruprii determinante a "g *epitop) de situsul de combinare al "c *paratop)( #egarea este dependent de complementaritatea steric a "g %i "c %i se realizeaz cu participarea unor fore de legtur neco!alente *fore !an der -aals& fore electrostatice& legturi de hidrogen %i legturi hidrofobe) care asigur stabilitatea complexului "g-"c( Caracteristica general a reaciei "g-"c este specificitatea& adic capacitatea ac de a discrimina "g omolog de alt "g( $pecificitatea ag nu este absolut( Reacia ncruci%at are loc c'nd un ag reacioneaz cu un "c format fa de un alt "g( "g care reacioneaz cu un "c produs fa de un alt "g se nume%te "g cross-reacti! sau "g cu reacti!itate ncruci%at( Reacia ncruci%at a "g este datorat faptului c "g posed n comun anumite grupri determinante& fie c ntre gruprile determinante exist o asemnare chimic ce nu poate fi decelat de "c( Reaciile ncrici%ate de tip I( Capacitatea a dou "g de a reaciona cu acela%i situs de combinare de pe aceea%i molecul de "c *ex( "g proteice ce dau reacii ncruci%ate din cauza diferenei foarte mici a sec!enei de aminoacizi glicina nu poate fi deosebit de alanin) Reaciile ncrici%ate de tip II( Capacitatea unui "g de a reaciona cu o subpopulaie de "c dintr-un ser heterolog care conine "c fa de un alt "g parial asemntor cu primul Reacia "g-"c se desf%oar n unul sau mai multe stadii+ - interaciunea primar se datore%te legrii efecti!e a ac cu ag %i depinde de cantitatea %i afinitatea "c( ehnicile care e!ideniaz interaciunea primar ag-ac sunt tehnici curente de diagnostic *ex( nefelometria)( In !i!o& interaciunile primare particip la protecia gazdei *neutralizarea toxinelor& inhibarea aciunii unor !irusuri sau bacterii) sau la declan%area unor reacii anafilactice

interaciunea secundar urmeaz celei primare *dup aprox( ./ min()( 0rodusul final este complexul ag-"c insolubil( Interaciunea secundar st la baza tehnicilor imunochimice *reaciile de precipitare aglutinare& fixare de complement& neutralizare)( interaciunea teriar prezint o complexitate mai mare dec't cea secundar( Depinde de !ariabilele gatdei *receptori pentru "g& complement& mastocite)( 0ot determina protecia gazdei *neutralizarea !irusurilor& imobilzarea bacteriilor) sau degranularea celulelor *fenomenul "rthus& %ocul anafilactic) Reac ia antigen!anticor"

Imunochimia disciplin de grani a imunologiei %i biochimiei studiaz substanele %i procesele chimice ce particip la reaciile imunologice( ,etodele cele mai utilizate n analiza imunochimic se bazeaz pe reacia "g-"c& utiliznd procedee care rezult din mbinarea tehnicilor fizico-chimice cu cele imunologice& primele conferind analizei precizie %i acuratee& iar ultimele asigur'nd sensibiliate %i specficitate( Datele furnizate de metodele imunochimice *calitati!e sau cantitati!e) pot conduce uneori la informaii preioase pentru diagnostic& adesea rezultatul de laborator capat !aloarea informati! real numai dac interpretarea acestuia se face n contextul clinic( 1( Reacia antigen-anticorp *"g-"c) are o mare putere de rezoluie( 2n fapt& prepararea anticorpilor prin imunizarea repetat a unui animal *iepure& %oarece& capr& etc3) cu un antigen dat conduce n general la obinerea anticorpilor puternici %i specifici& adic capabili s recunoasc selecti! antigenul n prezena numeroaselor substane& astfel prin reacia "g-"c& s detectm %i s dozm selecti! n ser o protein *hormon& enzim& etc() prezent la o concentraie de c'te!a picograme4ml& ceea ce reprezint mai puin de o miliardime din coninutul proteic al serului( "ceast caracteristic cu rezoluie crescut ine de energia crescut a reaciei "g-"c *reacie sigur non-co!alent dar datorat unei adugri de numeroase legturi unitare ca legturi electrostatice& puni de hidrogen& interacii hidrofobe) %i altor forme reduse *complementaritate ntre structura epitopului "g %i aceea a situsului "c)( 5( $electi!itatea fiecrei reacii nu este absolut( "ceasta admite o anumit degenerescen+ un "c dat poate recunoa%te mai multe "g puin diferite cu preul unei diminuri a energiei de legare( 2n practic& acest fenomen fundamental este descris prin obser!area reaciei 6ncruci%ate7 dintre diferite substane fa de acela%i "c( 2naintea oricrei aplicaii a reaciei "g-"c trebuie s ne asigurm de specificitatea funciei !erific'nd c n condiiile de utilizare& singurul "g !izat este semnificati! recunoscut( .( Reacia "g-"c prezint un domeniu de aplicare extrem de larg+ - detectarea antigenelor sau anticorpilor+ se poate aplica la dozarea medicamentelor& hormonilor peptidici& antigenelor !irale sau bacteriene %i chiar "c c'nd& de exemplu& se poate explora rspunsul indi!idului la un element patogen *serodiagnostic)

e!aluarea cantitati! a "g %i "c+ reacia "g-"c este de fapt adaptabil la dozarea proteinelor plasmatice foarte reprezentate *imunoglobuline& transferina& etc()& de asemenea& pentru substane foarte rare *anumii mar8eri !irali& hormoni& etc()( Concentraiile fiind ntre 1/-9 %i 1/-15 ,)( 9( Reacia "g-"c necesit obinerea unui semnal secundar pentru a fi detectabil( "ceasta poate s se formeze n timpul reaciei *ex( hemaglutinarea)& fie s fie preformat prin marcarea prealabil a "g sau "c prin mar8eri radioacti!i& enzimatici sau alii( Reaciile din prima categorie fac n general apel la formarea unei reele "g-"c de dimensiune mare& prin prezena de cel puin dou situsuri "c pe imunoglobulin %i de cel puin doi epitopi pe "g( "ceast reea se traduce prin aglutinare *eritrocitele acoper "g) sau prin precipitarea *cazul antigenului macromolecular care formeaz o reea cu "c)( Reaciile din a doua categorie se subdi!id n dou subtipuri+ - Reacii prin competiie+ o cantitate limitat de unul sau doi compu%i *ex(+ "c) este pus n prezena e%antionului de dozat %i o cantitate minim de element marcat *ex(( "g radioacti!)( Concentraia de "g din e%antion !a influena negati! !aloarea de legare a "g marcat cu "c *prin efect de competiie pentru o cantitate limitat de situsuri)( "ntigenul marcat fiind singurul decelabil *n contorul de radioacti!itate)& ni!elul su de legare !a ser!i la stabilirea etalona:ului reaciei *ex(+ dozarea de medicamente)( - Reaciile prin imunoextracie+ reacti!ii *ex( "c) sunt din contr n exces %i captez n totalitate substana de dozare( Cazul clasic este dozarea 6n sand;ich7 unde antigenul de dozat este fixat prin doi "c care ser!esc la insolubilizarea pe o suprafa *peretele eprubetei) %i altul aduce semnalul detectabil *"c marcai prin izotop sau o enzim)( 2n acest caz& semnalul !a fi funcionarea direct a concentraiei de "g %i acesta este "c marcat !care permite etalonarea< ehnicile de imunofluorescen pe cupe sunt un alt exemplu de imunoextragere+ antigenul *parazit& bacterie& !irus) prezent n preparatul etalat pe lam este recunoscut de "c marcat *produs fluorescent)( $plarea rapid permite s eliminm "c n exces *nefixai) apoi fixarea este rele!at la microscopul cu fluorescen pentru diagnosticul direct( =umeroase tehnici utilizate n imunologie sunt asemntoare celor din %tiinele biologice *ex+ metodele de izolare a antigenelor %i anticorpilor sunt asemntoare cu cele din biochimie utilizate pentru separarea fraciunilor proteice)( otu%i& n imunologie se utilizeaz %i tehnici proprii& cum sunt reaciile "g-"c *ex+ tehnicile de imunofluorescen& imunodifuzie n gel& radioimunologice %i imunoenzimatice)( 2n funcie de natura "g %i de metodele aplicate pentru e!idenierea reaciei "g"c& acestea se pot mpri n reacii de precipitare& aglutinare& neuralizare& reacii care folosesc complement sau reacti!i marcai *fluorocromi& izotopi& enzime)(
-

A# Reac ii imnoc$imice %olosite n laboratorul clinic

Reacti!ii imunochimici sunt produse biologice *"c& "g& C& hematii)& ce se utilizeaz pentru determinri calitati!e sau4%i cantitati!e de "g sau "c( 0entru a furniza informaii corecte& reacti!ii imunochimici trebuie folosii conform instruciunilor de utilizare( 0ersoanele care execut tehnici imunochimice trebuie s !erifice n permanen instruciunile de utilizare a produselor& nc't permanenta optimizare a acestora se reflect %i n modificarea instruciunilor respecti!e( ,anipularea reacti!ilor imunochimici trebuie fcut in'nd cont de toate normele de protecia muncii n !igoare) Reac ia 'e "reci"itare 2n cazul reaciei de precipiatere& "g este o macromolecul solubil( Reacia de precipitare poate a!ea loc n mediul solid *difuzia n gel) sau n mediul lichid( )ormarea precipiatului depinde de+ cantitatea %i concentraia "g& calitatea %i concentraia "c& temperatura& molaritatea& p>-ul& !olumul de reacie& coninutul n lipide al antiserului& etc( Compoziia precipitatului imun& proporia de combinare a "g cu "c sunt !ariabile n funcie de zona n care a a!ut loc precipitarea+ exces de "g& echi!alen sau exces de "c( a6 Reac ia 'e "reci"itare n me'iul soli' 7i%u*ia n gel Difuziile n gel se grupeaz n trei categorii+ difuzia simpl& difuzia dubl& difuzia combinat cu migrarea n c'mp electric( $e utilizeaz gel de agar sau agaroz n concentraie de /&?-1&@ g A *coninutul mare de ap permite moleculelor de "g %i "c s migreze liber n gel)( Difuzia poate fi accelerat de aplicarea unui c'mp electric *contraimunoelecroforez)( 2n cazul dublei difuzii& are loc difuzia ambilor reactani( 2n acazul difuziei simple are loc difuzia unuia ctre cellalt reactant nglobat n faza solid( 2ntr-o zon relati! ngust se creeaz datorit gradientului de concentraie condiii optime pentru imunoprecipitare( 2n gelul transparent apar linii sau zone opace( #iniile se pot deplasa p'n c'nd se a:unge la echilibrul sistemului ag-"c( =i!elul liniilor corespunde numrului minim de sisteme "g-"c( Imuno'i%u*ia ra'ial, sim"l, Imunodifuzia radial simpl sau imunodifuzia simpl bidimensional a fost imaginat de ,ancini& Carbonara %i >eremans n 1B@C( "ceast metod presupune difuzia unui reactant *n faza lichid) ntr-un gel n care este nglobat cellalt reactant( 2n aceast tehnic "c trebuie s fie n stare pur(

Dimensiunea haloului de precipitare este direct proporional cu concentraia "g ce difuzeaz %i in!ers proporional cu concentraia %i nlimea de gel n care sunt nglobai( Existena unei proporionaliti directe ntre concentraia "g %i diametrul zonei de precipitare pentru difuzia complet ,ancini permite trasarea curbei etalon prin msurarea diametrelor de precipitare a cel puin trei concentraii ale unui "g de referin( 0entru obinerea unei dimensiuni con!enabile a zonei de precipiatre %i un contur bine delimitat& concentraia "c nglobat n gel trebuie aleas n funcie de titrul antiserului %i concentraia "g testat( Cantitatea de "g introdus n godeuri nu trebuie s dep%easc capaciatea de legare a "c nglobat( impul necesar difuziei complete este n funcie de temperatura la care are loc reacia *.D/C)& de greutatea molecular %i concentraia "g( Imunodifuzia radial simpl efectuat n condiii optime prezint coeficientul de !ariaie sub 1/A& iar sensibilitatea este de 5 g4ml( Concentraia "g *proteinei) se stabile%te n funcie de curba etalon trasat cu trei diluii ale serului dereferin( Rezultatele metodei se exprim n mg4dl( "plicaii posibile sunt determinrile cantitati!e pentru+ imunoglobuline *IgE& Ig"& Ig,)& complement *C.)& alfa-1 antitripsin& siderofilin& proteina C-reacti! *CR0)& etc( 7ubla 'i%u*ie Ouc$terlon8 Dubla difuzie a fost imaginat de FuchterlonG %i Ele8 n 1B9?( ehnica se poate efectua n mai multe !ariate( 2n laboratorul clinic se folose%te tehnica cu 9-@ godeuri rotunde dispuse n :urul unui godeu central( #iniile de precipitare se formeaz la distane constante pentru fiecare sistem "g"c( $e descriu trei tipuri de reacii+ - reacia de identitate complet n care cele dou "g sunt complet identice+ antiserul conine "c specifici fa de "g< liniile de precipitare de!iaz %i fuzioneaz complet n zona central - reacia de neidentitate& absena de!iaiei liniilor( "ntiserul conine "c diferii fa de cele dou "g nenrudite& liniile de precipiatre se intersecteaz - reacia de identitate parial *fuziune parial a liniilor)( Cele dou "g prezint un numr de grupri determinante comune& dar conin %i unele distincte< antiserul are "c fa de cele dou grupri "g< linia de precipitare este curbat ca urmare a fuziunii pariale a celor dou linii %i prezint un mic pinten( "plicaii posibile sunt determinrile calitati!e pentru+ proteinele Hence-Iones tip 8appa %i lambda& crioglobuline( 7i%u*ia combinat, cu migrarea electro%oretic, ,obilitatea proteinelor n gelul supus c'mpului electric se datore%te ncrcrii electrice a proteinelor %i curentului electroendosmotic *migrarea tamponului spre catod)( #a p>-ul la care se efectueaz electroforeza *E))& agarul se ncarc negati!& tamponul din porii acestuia se ncarc poziti! %i la aplicarea c'mpului electric migreaz spre catod(

Deplasarea tamponului este in!ers mi%crii proteinelor& care la p>-ul neutru sau alcalin migreaz spre anod *J)( Dac electroendosmoza este mai mare dec't !iteza de deplasare a proteinelor spre anod& acestea !or fi deplasate spre catod *-)& de%i sunt ncrcate tot negati! *ex( gamma globulinele se deplaseaz catodic la imunoelctroforez %i contraimunoelectroforez)( Kiteza fluxului osmotic este direct proporional cu diferena de potenial %i concentraia gelului %i in!ers proporional cu fora ionic a tamponului( Kiteza curentului electroendosmotic este de trei ori mai sczut n gelul de garoz comparati! cu cel de agar& probele trebuie analizate& nu trebuie plasate la mi:locul lamei a%a cum se procedeaz n cazul gelului de agar( Imaginile de electroforez se citesc cu ochiul liber *intensitatea spoturilor migrrii)& ctre anod a albuminei< ctre catod alfa& beta& gama globulinele( Imunoelectro%ore*a ,etoda a fost imaginat de Erabar %i -illiams n 1BC.( ransformarea ntr-o micro!ariant executat pe lame de microscop se datore%te lui $cheidegge n 1BCC( Imunoelectroforeza reprezint asocierea electroforezei cu dubla difuzie( 2n prima etap are loc electroforeza proteinelor& urmat de dubla difuzie cu un antiser corespunztor( Reacia "g-"c se !izualizeaz prin linii de precipitare corespunztoare sistemelor "g-"c din reacie( Imunoelectroforeza *IE)) ofer numai informaii calitati!e n diagnosticul gamapatiilor monoclonale( ,etoda ilustraz n cazul componentei monoclonale a Ig& clasa %i tipul de Ig patologice( ,etoda se folose%te pentru studiul puritii unui "g sau "c( Imunoelectroforeza bidimensional cantitati! a fost imaginat de Ressler *1B@/)& #aurell *1B@C)& Clar8e %i )reeman *1B@?)( ,etoda combin E) n gel de agaroz cu imunodifuzia( Contraimunelectro%ore*a ,etoda a fost imaginat de Hussard *1BCB)& CIE) reprezint o dubl difuzie n care deplasarea "g %i "c este accelerat de un c'mp electric( 2n gelul de agar sau agaroz la p> ?&5-?&@ "c se deplaseaz spre catod *-)& "g migreaz ctre anod *J)( Reacia este mai sensibil %i mai rapid dec't dubla difuzie( CIE) ofer informaii calitati!e %i semicantitati!e( Electroimuno'i%u*ia EID a fost imaginat de #aurell *1B@C)( $e realizeaz prin electroforeza "g n strat de gel ce conine "c monospecifici( 0reciptatul "g-"c apare sub form de rachete *conuri) a cror nlime ste direct proporional cu concentraia "g %i in!ers proporional cu cea a "c( Reacia are sensibilitate mai mare dec't IDR$( 2n cazul Ig se utilizeaz ca suport agarul sau agaroza( IgE migreaz anodic n gelul de agar( Ig" %i Ig, migreaz ctre anod n gelul de agaroz(

Reacia prezint unele dificulti la efectuare( Imuno%i4area ,etoda a fiost imaginat de "lper %i Iohnson *1B@B)( Cuprinde un grup de tehnici imunochimice care au comun E) probei n gel& combinat cu imobilizarea *fixarea) unui reactant de ctre cellalt *imobilizarea "g de ctre ac cunoscut& fie in!ers)( 0recipitatele se e!ideniaz dup colorare( ,etoda se utilizeaz pentru stabilirea clasei %i tipului de Ig monoclonal pentru diagnosticul imunochimic al bolii lanurilor grele %i pentru diagnosticul deiferenial al hipergamaglobulinemiilor monoclonale( b6 Reac ia 'e "reci"itare n me'iul lic$i' Lrmare a reaciei "g-"c n mediul lichid se formeaz complexe care precipit c'nd cei doi reactani se gsesc n anumite proporii( Inhibarea reaciei este determinat de excesul unuia dintre ace%tia( Reacia este mai sensibil pentru e!idenierea "g *"c particip la formarea complexelor n proporie mai mare)( Reacia de precipiatre n mediul lichid presupune existena a cel puin doi determinani antigenici pe molecula de "g( Curbele de precipitare( 0rin adugarea unr concentraii cresctoare de ag la concentraii constante de "c& n urma izolrii %i analizrii precipitatelor %i supernatantelor obinute& se pot trasa curbe de precipiatre ce rele! existena a trei zone distincete( - zona excesului de "c *precipitatul cre%te la o nou adugare de "g) - zona de echi!alen *precipitatul rm'ne constant la o nou adugare de "g) - zona excesului de "g *precipiatul scade la o nou adugare de "g) $e cunosc dou tipuri de curbe de precipiatre n mediul lichid( - curba de tip iepure( 0rezint un maxim rotun:it& indiferent de natura chimic a ag( 0recipiatul este mai mult sau mai puin solubil n exces de "g& dar insolubil n exces de "c( - curba de tip cal *curba de floculare)( Curba pentru "g proteice nu trece prin origine( 0recipitatul este solubil at't n exces de "c c't %i n exces de "g( Reac ia 'e "reci"itare n inel "g %i "c se pun n contact nc't s nu se amestece( #a interfaa celor doi reactani apare un inel de precipiare( Reacia de precipitare n mediul lichid se efectueaz n tubul capilar( Imunone%elometria 2n prezena unei cantiti fixe de "c sau "g& complexele "g-"c precipitate ntr-o suspensie& modific intensitatea %i dispersia luminii proporional cu concentraia "g sau "c(

Complexarea "g cu "c specific atinge o !aloare maxim stabil n aprox( @/ sec( Deoarece formarea complexelor care disperseaz lumina este dependent de prezena n proporii optime a moleculelor de "g %i "c pentru o cantitate constant de "c *respecti! "g)& gradul de complexitate cre%te proporional cu cantitatea de "g *respecti! de "c) p'n la un maximum& dup care "g n exces determin scderea progresi! a complexitii< din aceast cauz se recomand ca determinrile nefelometrice s fie executate n exces moderat de "c( "!anta:ele constau n rapiditatea obinerii rezultatelor *automatizarea determinrilor)( E!aluarea se exprim n mg4l& automat n funcie de curba existent n memoria nefelometrului Deza!anta:ele nefelometriei constau n costul ridicat al aparaturii %i imposibilitatea determinrii directe a proteinelor n probele icterice& hemolizate sau lactescente( ,etoda este limitat %i de deficiene ce pot s apar n sistemele mecanice %i electronice ale instalaiei( (# Reac ia 'e aglutinare "glutinarea reprezint agregarea de particule prin "c( "c reacioneaz cu "g *natural sau fixat artificial) de la suprafaa unor particule *bacterii& hematii& latex) %i determin aglutinarea acestora( "glutinarea depinde de o serie de factori+ !alena "c *"c din clasa Ig, sunt mult mai aglutinani dec't cei care aparin clasei IgE)& densitatea determinanilor antigenici de la suprafaa particulei& fora ionic a mediului n care are loc reacia( "glutinarea se datoreaz scderii forelor de respindgere electrostatice dintre particule %i creeri unor puni de legtur prin intermediul "c( Reacia de aglutinare are sensibilitatea mai mare dec't reacia de precipitare *"g este o particul %i nu o molecul solubil)& excesul de "g nu inhib reacia& concentraiile mari de ac pot inhiba reacia %i produce fenomenul de prozon& raportul ntre "g-"c este tot n fa!oarea ac *ca %i la precipitare)( "c reacioneaz numai cu determinantul "g specific( "lturi de "c aglutinani exist "c neaglutinani *blocani sau incomplei) %i "c care aglutineaz numai la rece *J9/C)( Reac ia 'e aglutinare 'irect, "glutinarea direct *aglutinarea simpl& clasic) este aglutinarea "g naturale ale unor particule de ctre "c specifici *ex( determinarea grupelor sanguine& aglutinarea bacterian) $ensibilitatea acestui tip de aglutinare poate fi crescut prin tratarea celulelor cu enzime sau prin executarea reaciei n mediul cu !'scozitate crescut( Reac ia 'e aglutinare in'irect, "glutinarea indirect *pasi!) este o reacie ce presupune particule naturale sau artificiale *hematii& stafilococ protein "& latex) ncrcate in !itro cu "g sau "c( 0articulele sunt aglutinate de ctre "c& respecti! "g omolog din prob(

>emagluinarea pasi! este o metod deosebit de sensibil de cercetare a "c serici& imaginat de Ezegibes %i $ehon( "c care nu pot produce reacii !izibile cu "g din cauz c se gsesc n ser n cantiti reduse& pot fi e!ideniai prin metode de aglutinare pasi!& cresc'nd cantitatea de "g prin absorbia acstora pe un substrat inert( 2n acest fel& cantiti mici de "c produc aglutinri !izibile( Reac ia 'e in$ibare a aglutin,rii Reacia de aglutinare a particulelor ncrcate cu "g solubil este inhibat n cazul n care "c reacioneaz n prealabil cu "g omolog *ex( diagnosticul imunologic de sarcin prin inhibarea aglutinrii hematiilor sau prin inhibarea aglutinrii latexului)( Diferena principal ntre hemaglutinarea pasi! %i tehnica de inhibare a hemaglutinrii este aceea c n prima metod *hemaglutinarea) se in!estigheaz prezena "c& n timp ce n a doua *inhibarea) se in!estigheaz prezena "g( Reac ia 'e aglutinare me'iat, 'e anticor"i anti!imunoglobuline "c anti-imunoglobuline aglutineaz particule ncrcate *natural sau artificia)l cu "c *ex( decelarea )R prin reacia -aaler-rose sau #atex-)R& decelarea "c incomplei fixai la suprafaa hematiilor prin reacia coombs)( Reacia de aglutinare poate fi calitati! de screening *ex( latex-)R& reacia coombs) sau cantitati! *ex( reacia -aaler-Rose& reacia Coombs)( Reacia #atex-)R este mai sensibil& iar reacia -aaler-Rose este mai specific( )# Reac ia 'e neutrali*are "ntigenul este reprezentat de un imunogen cu proprieti biologice *toxin& enzim& !irus)( "c specifici determin *in !i!o sau in !itro) blocarea acestor proprieti( Reacia de neutralizare depinde de a!iditatea "c& adic de !iteza cu care "c se poate combina cu "g %i de gradul de stabilitate a legturii ag-"c( =eutralizarea efectelor biologice ale "g se constat numai n cazul n care situsul *toxic sau enzimatic) responsabil de acti!itatea biologic a "g este identic cu situsul "g( 2n laborator& acest tip de reacie se utilizeaz pentru determinarea "c antistreptolizin F prin reacia "$#F *etapa final de !izualizare este hemoliza) %i pentru identificarea unor !irusuri( estul "$#F este o reacie de neutralizare *inhibare a hemolizei)( $e bazeaz pe proprietatea streptolizinei de a produce liza hematiilor de di!erse specii( +# Reac ii ce utili*ea*, com"lement 2n laboratorul clinic se execut patru reacii de acest tip+

Reac ia 'e %i4are a com"lementului Reacia de fixare a complementului *R)C)& hemoliz direct( I( Hordet a imaginat o metod de !izualizare indirect a unei reacii "g-"c& folosind complement *C) %i un sistem indicator *hemolitic)( Complexul "g-"c fixeaz C& iar hematiile sensibilizate adugate ulterior rm'n intacte *absena hemolizei nseamn reacie poziti!)& n lipsa complexului "g-"c specific *iniial)& C se fixeaz pe hematiile sensibilizate *sistemul indicator) produc'nd hemoliza *hemoliza nseamn reacie negati!)( )ixarea C pe complexul "g-"c este e!ideniat indirect prin absena hemolizei sistemului indicator din a doua etap a reaciei *ser antihematii berbec-hematii berbec) "cti!itatea anticomplement se datore%te prezenei complexelor "g-"c preformate& agregatelor de Ig %i a altor substane care pot acti!a calea clasic sau calea alternati! de acti!are a C( Testul 'e in$ibare a $emoli*ei imune "asi.e n "re*en a com"lementului estul este analog testului de inhibare a hemaglutinrii& deosebirea esenial const n desf%urarea reaciei n prezena C( 2n cazul n care n prima etap a reaciei se formeaz complexul "g-"c nu mai rm'n disponibili "c care s reacioneze cu hematiile sensibilizate& astfel nc't n ultima etap& C nu este cuplat cu hematiile sensibilizate %i acestea nu sunt lizate( 2n acest caz rezltatul testului este considerat poziti!( 2n situaia n care nu se formeaz complexul "g-"c& "c liberi reacioneaz cu hematiile sensibilizate %i are loc liza acestora& rezultatul testului este considerat negati!( 2n testul de imunohemoliz pasi!& interpretarea rezultatului se face n funcie de gradul hemolizei obinute& lu'ndu-se n considerare dimensiunile sedimentului de hematii %i intensitatea culorii supernatantului( estul de inhibare a hemolizei imune pasi!e n prezena C in!estigheaz prezena "g n ser& n timp ce testul clasic in!estigheaz prezena "c n ser( Testul 'e imuno$emoli*, "asi., n "re*en a com"lementului Ca %i n cazul testului de hemaglutinare pasi!& "g este fixat pe hematie %i reacioneaz cu "c specific& form'ndu-se n acest fel complexe "g-"c( Realizarea acestui complex n prezena C determin liza hematiilor sensibilizate cu "g( 7eterminarea imuno$emolitic, a com"lementului $e refer la reacia "g-"c numai n msura n care se folosete ca indicator sistemul hemolitic *hematii de berbec sensibilizate cu ser anti-hematii berbec)( Reacia msoar acti!itatea hemolitic total a sistemului complement( ,etoda are ca punct final hemoliza C/A( Citirea se face la spectrofotometru(

-6 Reac ii cu reacti.i marca i Detectarea& localizarea %i identificarea antigenelor se poate realiza utiliz'nd anticorpi care recunosc %i se leag specific de antigenele respecti!e( Kizualizarea complexului "g-"c format poate fi realizat prin marcarea "c( ,arcarea "c trebuie s ndeplineasc dou condiii+ 1) s permit detectarea unor cantiti infime de substan 5) s nu altereze capacitatea de legare a "c la "g corespunztoare( 2n aceste reacii se utilizeaz "g sau "c marcai+ izotiocianatul de fluorescein *produce strlucire caracteristic la examenul microscopic n lumina ultra!iolet& Coons& 1B95)& izotopi radioacti!i *Malo; %i Herson& 1B@/)& %i enzime *au acti!itate asupra unui substrat-cromogen specific *Eng;all %i 0erlman& 1BD5)( a6 Reac ia 'e imuno%luorescen , 2n reacia de imunofluorescen *I)) unul dintre reactani *"g sau "c de cercetat) trebuie s constituie o parte dintr-o structur biologic *celul sau esut)& reacti!ul marcat cu fluorocrom rele!'nd reacia "g-"c( Kizualizarea complexului "g-"c format poate fi realizat prin marcarea "c( $ubstanele fluorescente *fluorocromii) absorb lumina incident de diferite lungimi de und %i emit o lumin !izibil care este n funcie de fluorocromul utilizat+ albastr& !erde& galben& ro%ie sau alb( Reacia se poate realiza direct& indirect& cu fixarea complementului Reac ia 'e imuno%luorescen , 'irect, ,etoda direct *Coons) permite identificarea "g specifice n preparate cu a:utorul con:ugatului fluorescent anti-"c( $e folosesc seciuni de esuturi& seruri fluorescente antiIg %i anti-C( Reac ia 'e imuno%luorescen , in'irect, Reacia de imunofluorescen indirect *I)I) !izualizeaz reacia "g-"c prin aplicarea unui con:ugat fluorescent anti-"c( $e folose%te pentru detectarea "c fixai pe "g( $erul de bolna! se pune n contact cu un substrat celular *tisular)( Lrmeaz incubarea preparatului cu un ser antiglobulin uman marcat cu izotiocianat de fluorescein care !izualizeaz n lumin ultra!iolet reacia "g-"c( estul poate fi folosit at't pentru determinarea "g necunoscut cu ser imun cunsocut c't %i pentru detectarea ac necunoscui cu ag cunoscut( Reac ia 'e imuno%luorescen , cu %i4area com"lementului Complexul "g-"c fixeaz C( ,etoda fixrii C pe seciuni de esut este deri!at din metoda indirect prin adugarea C& apoi a serului marcat care !a !izualiza complexul "g-"c-C(

b6 Anali*a ra'ioimunologic, "naliza radioimunologic *RI") este o tehnic de determinare cantitati! a unui numr mare de substane prezente n lichidele biologice n cantitate foarte mic( RI" este o tehnic obiecti!& cu mare sensibilitate& parial automatizat& aparatur costisittoare *echpament nuclear)& reacti!i scumpi& cu durat de utilizare scurt& personal cu calificare special& supus unei legislaii speciale *radioizotopi)( c6 Anali*a imunoen*imatic, 2n 1B@@& "!rameas %i Lriel introduc n histochimie marcarea enzimatic cu peroxidaz& iar n 1BD1& Kan -eemen %i independent Eng;all %i 0erlmann utilizeaz enzimele ca mar8er pentru reaciile "g-"c( "naliza imunoenzimatic *EI") se poate realiza n sistem omogen sau heterogen( -reacia imunoenzimatic n sistem omogen const n competiia pentru "c ntre "g marcat enzimatic %i "c de determinat *din prob)( "cti!itatea enzimatic este in!ers proporional cu concentraia "g din prob( -reacia imunoenzimatic n sistem heterogen poate fi utilizat at't pentru determinatrea "c c't %i a "g( "cti!itatea enzimatic a con:ugatului nu este influenat de reacia "g-"c %i necesit o etap de separare( "!anta:ele EI"+ obiecti!& poate fi automatizat& folose%te reacti!i cu !alabilitate con!enabil& aparatura este simpl& are sensibilitate crescut& nu este supus unei legislaii restricti!e ca RI"( Te$nica ELISA 2n cazul utilizrii sistemelor de faz solid pentru separarea moleculelor libere %i a celor marcate& tehnica este denumit E#I$" *enzime lin8ed immunosorbent asssaG)( ehnica imunoenzimatic E#I$" este bazat pe reacia "g-"c( $istemul de analiz const din mai multe reacii+ - "g sau "c este imobilizat pe suport solid *plci de pastic cu godeuri) - "g sau "c din proba de testat se leag specific de reactantul imobilizat - reactantul marcat enzimatic reacioneaz cu complexul reactant imobilizat-"g *sau "c) din prob( Reactantul marcat enzimatic format din "g *sau "c) con:ugat cu o enzim este acti! at't imunologic c't %i enzimatic %i reacioneaz at't cu "g *sau "c) din prob imobilizat pe suportul solid c't %i cu substratul corespunztor enzimei( Kizualizarea reaciei dintre reactantul enzimatic %i complexul "g-"c iniial se realizeaz prin adugarea unui substrat corespunztor enzimei utilizate( )ormarea complexului este identificat prin reacia de culoare care apare la adugarea substratului specific *p-nitrofenilfosfat disodic pentru fosfataza alcalin %i tetrametilbenzidina pentru peroxidaz)( Intensitatea culorii indic prezena sau absena "g& respecti! "c din prob *se cite%te spectrofotometric folosind un cititor de plci E#I$")(

ehnica E#I$" se poate folosi pentru e!idenierea "c *boliinfecioase& autoimune) sau a "g *boli infecioase& neoplazice& endocrinologice& farmacologie)( /# Te$nica 0estern 1lot ehnica cuprinde trei etape+ separarea "g prin electroforez& transferul "g& testarea probei de ser utiliz'nd tehnica RI" sau E#I$"( =umai partea a treia este efectuat n laboratoarele clinice( ehnica -H este disponibil sub form de truse comerciale(

1# Meto'e 2i te$nici 'e imunocitologie

&# Te$nica "entru celule lu"ice ehnica pentru celule lupice *#E) este o tehnic morfologic de decelare a "c antinucleari - gamaglobuline cu proprieti antinucleare *factorul >aseric8) - ce apar n serul pacienilor cu lupus eritematos sistemic *#E$)( "cest factor seric acioneaz asupra nucleilor de leucocite %i i transform n corpusculi omogeni& care pierd structura cromatinian %i %i modific colorabilitatea *corpusculi #E)( Corpusculii #E sunt apoi fagocitai de leucocite intacte %i astfel apare imaginea caractertistic pe care o numim celul #E( 0rocesul de omogenizare a nucleului %i de fagocitoz are loc in !itro( Interpretarea preparatelor presupune o experien temeinic de mIcroscopist *cunoa%tere exact a morfologiei celulelor #E)( Celula #E este de obicei mai mare dec't un polimorfonuclear( Caracteristic este culoarea roz-!iolacee a corpusculilor #E care nu prezint nici o structur( 2n :urul corpusculilor #E apare& ca o semilun& nucleul celulei fagocitante& cu structura %i culoarea obi%nuite( Imaginea de rozet este gruparea leucocitelor n :urul unui corpuscul #E( (# Testul re'ucerii N1T Determinarea procentului de granulocite care produc intracelular anion superoxid datorit acti!rii oxidazelor celulare( #a microscopul optic se determin procentul de celule care conin depozite intracelulare albastre de formazan( )# C$emiluminiscen a )ormarea speciilor reacti!e de oxigen *RF$) de ctre granulocitul 0,= este asociat cu emisia de energie luminoas( Emisia luminoas poate fi intensificat cu a:utorul luminolului sau lucigeninei %i con!ertit de ctre un chemiluminometru n semnal electric( Rezultatele se exprim n mK(

+# Testul in$ibi iei a'eren ei leucocitelor estul inhibiiei aderenei leucocitelor in!estigheaz rspunsul imun mediat celular n prezena unui "g tumoral( Rezultatele sunt exprimate sub form de indice de de!iaie a aderenei *exprim procentual cre%terea sau scderea aderenei fa de proba martor)( -# Imuno%enoti"area cu a3utorul citometriei n %lu4 Citometria n flux reprezint o abordare tehnic de mare complexitate ce permite determinarea simultan a mai multor parametri fizici %i chimici caract;eristici unei singure celule aflate n mi%care ntr-un curent de lichid( ,etoda permite caracterizarea pe baze morfologice %i fenotipice a populaiilor celulare din s'ngele periferic *limfocite& monocite& granulocite& etc()( 0rin citometria n flux se pot determina procentele seturilor %i subseturilor limfocitare din s'nge( /# Testul 'e trans%ormare blastic, a lim%ocitelor Dac o suspensie de limfocite prele!ate de la un subiect sensibilizat se culti! n !itro n prezena unui "g se constat dup un inter!al de timp cre%terea numrului de celule blastice cu numeroase mitoze( ransformarea blastic a celulelor in !itro se datore%te stimulrii metabolismului celular ca urmare a reaciei dintre "g %i structura membranei limfocitelor( 2n urma cuplrii "g cu receptorii pe suprafaa limfocitelor sensibilizate& membrana celular se acti!eaz& declan%'nd transmiterea unui semnal spre nucleu& ceea ce determin iniierea sintezei de "D=( Ca urmare& are loc cre%terea dimensiunilor celulelor& nucleul de!enind mai mare cu cromatina lax %i citoplasma bazofil( -# Reac ia 'e lim%ocitoto4icitate ,etoda a fost descris de Eorer& apoi a fost aplicat la om de erasa8i( Reacia const n a incuba la .D/C o suspensie de limfocite n prezena C %i a antiserului( Dac antiserul nt'lne%te "g corespunztor pe suprafaa limfocitelor membrana celulelor este alterat %i permite trecerea colorantului n citoplasm& color'nd celulele( Citirea se face la microscopul optic( estul este poziti! c'nd exist un anumit procenta: de celule colorate( estul ser!e%te pentru determinarea "g de histocopatibilitate *>#")(

C# Princi"alele reac ii antigen!anticor" 2i a"lica iile acestora

Testul "entru 'eterminarea gru"elor sanguine A1O 2i R$ Reactivi pentru grupele de snge ABO Reacti!i "nti-"& "nti-H& "nti-"H sunt deri!ai din liniile de celule hibridizate care sunt obinute prin fuzionarea anticorpilor de %oarece ce produc limfocite H cu celule de mielom( "nticorpii deri!ai dintr-o singur clon *celulele aprute din celula hibrid)& precum %i amestecul de diferii anticorpi deri!ai de la diferite clone sunt desemnai ca monoclonali+ "nti-"& "nti-H& "nti-"H( Reacti!ii "nti-"& "nti-H& "nti-"H au fost e!aluai n toate tipurile de teste& incluz'nd sisteme automate n paralel cu reacti!ii "HF con!enionali& policlonali( =u s-au obser!at reacii fals-poziti!e %i fals-negati!e ntre serul monoclonal %i cel policlonal( "finitatea serului reacti! a fost adesea mai puternic dec't a serului policlonal& n mod special fa de celulele de nou-nscui %i subgrupele cu reacti!itate slab( Material biologic $e folose%te s'nge total *puncie n deget) Modul de lucru I. Testul pe lam A.Testul rapid -$e pune o pictur de anti-"& "nti-H& "nti-"H pe o lam de sticl -$e adaug o pictur mic de s'nge total %i se omogenizeaz bine -$e rote%te u%or lama timp de 5 min( -$e obser! apariia aglutinrii( "glutinarea apare ntre ./-@/ sec Rezultatele negati!e pot fi semnalate dup 5 min( B.Testul cu incubare -$e prepar o suspensie de celule C-1/A n soluie salin izotonic sau se folose%te s'nge total -$e pune o pictur din fiecare reacti! "nti-"& "nti-H& anti-"H pe o lam -$e adaug o pictur de suspensie ori o pictur mic de s'nge %i se amestec bine -$e incubeaz 1C-./ min( la temperatura de 5//C -$e amestec u%or %i se obser! apariia aglutinrii II. Testul n tub -$e prepar o suspensie de celule de .-CA n soluie salin izotonic -$e pune o pictur de "nti-"& "nti-H& "nti-"H n tubul notat corespunztor -$e adaug n fiecare tub o pictur din suspensia de celule %i se omogenizeaz bine -$e centrifugheaz 5 min( la 1/// rpm sau 5/ sec( #a ./// rpm ori se incubeaz 5/ min( la temperatura de 5//C

-$e disloc u%or butonul de celule %i se obser! apariia aglutinrii Reactivul anti-D "nticorpi monoclonali umani din clasa Ig,& obinui din culturi celulare $e pstreaz la 5-?/C Conser!are cu =a=.-/&1A Reacti!ul este pentru diagnosticul in !itro Reactivi Conine anticorpi monoclonali de origine uman din clasa Ig,& obinut din culturi celulare( $pecificitatea %i reproductibilitatea sunt proprieti bine cunoscute la anticorpii monoclonali( ,a:oritatea reacti!ilor anti-D monoclonali aparin clasei de Ig,( Modul de lucru I. Testul pe lam A. Testul rapid estul trebuie efectuat pe o suprafa ce are temperatura cuprins ntre 5/-.D/C -$e pune o pictur de reacti! "nti-D pe lam -$e adaug o pictur mic de s'nge total( $e omogenizeaz bine( -$e rote%te energic lama 5 min( $e obser! dac apare aglutinarea -$e cite%te rezultatul dup 5 min( *suprafaa uscat poate fi interpretat ca o reacie falspoziti!( B. Testul cu incubare $e poate folosi s'nge total sau suspensia de celule -$e prepar o suspensie de C-1/A din celule ce trebuie testate n soluie salin izotonic sau se folose%te s'nge total -$e pune c'te o pictur de reacti! anti-D n cerculeele lamei& ce se !or folosi -$e adaug o pictur de suspensie sau o pictur mic de snge total %i se omogenizeaz bine -$e incubeaz ./ minla 5/-.D/C -$e agit u%or lama %i se obser! aglutinarea II. Testul n tub -$e pregte%te o suspensie .-CA din celule ce trebuie testate n soluie salin izotonic -$e pune o pictur de reacti! anti-D n tubul-prob -$e adaug n fiecare tub o pictur din suspensia de celule %i se omogenizeaz bine -$e centrifugheaz 5 min( la 1/// rpm -$e disloc u%or butonul de celule %i se obser! prezena aglutinrii( Dac reacia este negati! se incubeaz tubul 1C min( la 5//C& se centrifugheaz 5 min la 1/// rpm& se disloc u%or butonul de celule %i se obser! aglutinarea(

Erupa " Erupa H Erupa F Erupa "H

"nti-" J J

"nti-H J J

"nti-"H J J J

Testul "entru 'eterminarea anticor"ilor antistre"toli*ina O Reac ia ASLO est calitati! %i cantitati! pentru explorarea strii de imunitate antitoxic fa de toxinele streptococului( estul este bazat pe reacia de aglutinare( estul permite stabilirea diagnosticului anginei streptococice sau de infecii streptococice& ca %i a celui de reumatism articular acut *R"")( ,eninerea titrului "$#F crescut chiar %i la c'te!a luni dup puseul reumatismal permite stabilirea diagnosticului retrospecti! al bolii( rincipiul metodei Reacti!ul folosit este o suspensie de particule latex de polistiren ncrcate cu streptolizina F stabilizat( Reacti!ul a fost astfel preparat nc't& n prezena unui titru "$#F normal de 5// ui4ml sau mai crescut& s dea o aglutinare !izibil a particulelor latex& fr diluarea serului( Reactivi 1 flacon cu reacti! latex de C ml 1 flacon cu control poziti! de 1 ml 1 flacon cu control negati! de 1 ml 1 plcu pe care se efectueaz reacia Material biologic $erul de cercetat trebuie s fie clar %i proaspt( 0lasma& serul lipemic ori contaminat poate determina erori n obinerea rezultatelor( Dac testul nu poate fi efectuat imediat& atunci serul se pstreaz la 5-?/C& maximum D5 ore( 0entru o perioad mai ndelungat serul trebuie s fie pstrat congelat( Modul de lucru I. Testul A!"O calitativ

-$e aduc reacti!ii %i probele la temperatura camerei naintea folosirii cu ./ min -$e pun 5 picturi *C/ l) de control *J) n unul din cercurile plcuei de testare(

-$e pun 5 picturi *C/ l) de control *-) n al doilea cerc( -Cu o pipet se pun c'te o pictur de ser *9C l) din fiecare prob n cercurile urmtoare( -$e agit u%or suspensia de reacti! latex %i se pune n fiecare cerc folosit c'te o pictur de reacti!( 0entru omogenizare se folose%te un bei%or pentru fiecare test n parte( -$e rote%te plcua 5 min %i se cite%te aglutinarea imediat l'ng o surs de lumin( II. Testul A!"O cantitativ

-$e aduc reacti!ii %i probele la temperatura camerei& nainte de folosire cu ./ min( -$e dilueaz probele 145< 149< 14? 141@ n soluie salin izotonic( $e pot face diluii %i mai mari dac este necesar -$e pune 1 pictur *9C l) din fiecare diluie n succesiunea de cercuri ale plcuei de testare -$e agit reacti!ul latex %i se adaug o pictur de reacti! n fiecare cerc de testare( -$e omogenizeaz cele dou picturi folosind un bei%or pentru fiecare prob -$e rote%te u%or placa 5 min( %i se cite%te rezultatul imediat n dreptul unei surse de lumin Interpretarea testului Reacia "$#F negati!+ obinerea unei suspensii lptoase& fr aglutinare& ca cea obser!at la controlul negati! Reacia "$#F poziti!+ obinerea unei aglutinri obser!at n cercul probei asemntoare cu cea obser!at la controlul poziti!( Reacia "$#F indic starea de imunitate antitoxic fa de streptococ( Kalori normale+ ntre /-5// ui Kalori crescute+ I( N 5// ui #a pacienii care au a!ut n ultimele trei luni o angin streptococic sau alte infecii streptococice II( N .// ui 2n infecii streptococice+ glomerulonefrit acut streptococic& scarlatin& purpur reumatoid III( @//-5C// ui 2n reumatismul articular acut& reacia "$#F a:ut n stabilirea diagnosticului retrospecti! al bolii& deoarece titrul anticorpilor antistreptolizin F se menine crescut timp de c'te!a luni dup puseul reumatismal acut( itrul "$#F cre%te odat cu e!oluia puseului reumatismal( Reacia "$#F este poziti! n stenoz mitral& amigdalit acut streptococic& endocardita streptococic lent( Observa#ii Reacti!ii conin azid de sodiu ce se poate combina cu Cu %i 0b& put'nd asfel de!eni explozibili(

Controlul poziti! %i negati! a fost preparat din ser uman care a fost testat folosind metoda liceniat )D" %i s-a demonstrat c nu reacioneaz cu anticorpii pentru "g>Hs %i >CK( oate probele umane pot fi considerate potenial infectate( Reacti!ii %i controalele sunt stabile p'n la data expirrii& dac sunt pstrate la temperatura de 5-?/C( Reacti!ii nu se pstreaz la congelator( Testul "entru i'enti%icarea "roteinei C reacti.e estul este utilizat pentru identificarea proteinei C reacti!e *CR0) n ser pentru diagnosticul unor afeciuni inflamatorii sau pentru monitorizarea inflamaiei( rincipiul metodei Reacti!ul CR0 este o suspensie de particule latex de polistiren& marcate cu o fraciune de gamaglobulin a serului anti-uman CR0 specific( C'nd CR0 este prezent n prob& se obser! o aglutinare ce indic un coninut de @ mg4l( Reactivi 1 flacon cu reacti! latex de C ml 1 flacon cu control poziti! de 1 ml 1 flacon cu control negati! de 1 ml 1 plcu pe care se efectueaz reacia Material biologic $e folose%te ser clar %i proaspt( 0lasma& serul lipemic& ori contaminat poate duce la erori n obinerea rezultatelor( Dac testul nu poate fi fcut imediat& serul se pstreaz la 5-?/C& pentru D5 de ore( 0entru o perioad mai ndelungat& serul trebuie pstrat congelat( Modul de lucru -$e aduc reacti!ii %i probele la temperatura camerei naintea folosirii cu ./ min( -$e pun 5 picturi *C/ l) de control *J) n primul cerc %i 5 picturi n al doilea cerc al plcuei de testare -$e pune o pictur *9C l) de ser nediluat din fiecare prob n cercurile ce urmeaz -$e agit u%or suspensia de reacti! latex -$e pune n fiecare cerc folosit o pictur *9C l) 0entru omogenizare se folose%te un bei%or pentru fiecare test efectuat -$e rote%te plcua 5 minute %i se cite%te rezultatul imediat n dreptul unei surse de lumin Interpretarea re$ultatelor Reacia negati!+ apariia unei suspensii lptoase& fr aglutinare& ca cea obser!at n controlul negati! Reacia poziti!+ orice aglutinare obser!at la proba asemntoare celei obser!ate la controlul poziti! Proteina C reacti., nu este "re*ent, n serul "acien ilor a"arent s,n,to2i#

7eterminarea CRP "oate ser.i la monitori*area acti.it, ii in%lamatorii9 %ie ca re*ultat al tera"iei9 %ie al remisiunii s"ontane Kalori normale+ O@ mg4l Kalori crescute+ I( 2n faza iniial a inflamaiei n -infecii bacteriene+ pneumonii -infarct miocardic& stri postoperatorii& afeciuni maligne& mielom multiplu& lupus eritematos sistemic *#E$) II( "lte afeciuni -febre reumatice& afeciuni reumatice di!erse& colagenoze& tuberculoza acti! Observa#ii Reacti!ii conin azid de sodiu ce se poate combina cu Cu %i 0b& put'nd de!eni explozibili( Controlul poziti! %i negati! din ser uman& a fost testat prin metoda liceniat )D" %i s-a demonstrat c nu reacioneaz cu anticorpii pentru "g>Hs %i >IK( oate probele umane pot fi considerate potenial infectate( Reacti!ii %i controalele sunt stabile p'n la data expirrii& dac sunt pstrate la temperatura de 5-?/C& maximum D5 de ore( Reacti!ii nu se pstreaz congelai( Testul "entru i'enti%icarea %actorului reumatoi' rincipiul metodei Reacti!ul pentru factorul reumatoid *)R) este o suspensie de particule latex de polistiren ncrcate cu IgE uman( $ensibilitatea reacti!ului )R detecteaz o concentraie minim de ? ui4ml& n acord cu ->F Internaional $tandard& fr diluarea probei( 2n mod practic& particulele de polistiren-latex n!elite cu gamaglobulin denaturat sunt aglutinate de seruri ce conin )R( Reactivi 1 flacon cu reacti! latex de C ml 1 flacon cu control poziti! de 1 ml 1 flacon cu control negati! de 1 ml 1 plcu pe care se efectueaz testul Material biologic $e folose%te ser clar %i proaspt( 0lasma& serul lipemic sau contaminat poate duce la erori n obinerea rezultatelor( Dac testul nu poate fi fcut imediat& serul se pstreaz la 5-?/C& pentru D5 de ore( 0entru o timp mai ndelungat& serul trebuie pstrat congelat( Modul de lucru -$e aduc reacti!ii %i probele la temperatura camerei naintea folosirii cu ./ min -$e pun 5 picturi *C/ l) de control *J) n primul cerc %i 5 picturi n al doilea cerc al plcuei de testare

-$e pune o pictur *9C l) de ser nediluat din fiecare prob n cercurile ce urmeaz -$e agit u%or suspensia de reacti! latex -$e pune n fiecare cerc folosit o pictur *9C l) 0entru omogenizarea coninutului se folose%te un bei%or pentru fiecare test efectuat -$e rote%te plcua 5 minute %i se cite%te rezultatul imediat n dreptul unei surse de lumin Interpretarea re$ultatelor Reacia negati!+ apariia unei suspensii lptoase& fr aglutinare& ca cea obser!at n controlul negati! Reacia poziti!+ orice aglutinare obser!at la proba ntocmai celei obser!ate la controlul poziti! )actorii reumatoizi sunt imunoglobuline cu acti!itate de anticorpi( )R sunt prezeni la pacienii care prezint poliartrit reumatoid *0R)( 2n continuare se recomand folosirea testului -aaler-Rose-test specific pentru determinarea )R mpotri!a IgE de animal )actorul reumatoid este prezent %i la persoanele aparent sntoase( 0este !'rsta de @/ de ani& frec!ena )R este de C-@A Kalori normale+ ntre /-@ ui4ml Kalori patologice+ Reacia poziti!+ poliartrit reumatoid< boli de colagen *la 1/-C/A)& ex+ lupus eritematos sistemic& sclerodermie< unele disglobulinemii *ex+ Pala-"zar& maladia -aldenstrQm) Reacia negati!+ gut& reumatism articular acut& artroze Observa#ii Reacti!ii conin azid de sodiu ce se poate combina cu Cu %i 0b& put'nd de!eni explozibili( Controlul poziti! %i negati! din serul uman& a fost testat prin metoda liceniat )D" %i s-a demonstrat c nu reacioneaz cu anticorpii pentru "g>Hs %i >IK( oate probele umane pot fi considerate potenial infectate( Reacti!ii %i controalele sunt stabile p'n la data expirrii& dac sunt pstrate la temperatura de 5-?/C( Reacti!ii nu se congeleaz( $erurile contaminate sau citirea mai t'rziu de . min(& pot da reacii fals-poziti!e( =u se poate pune un diagnostic doar pe baza unui singur test& este necesar corelarea cu datele clinice( Testul "entru i'enti%icarea :actorul Reumatoi' ;:R6 n serul 2i lic$i'ul articular cu reacti.ul 0aaler!Rose rincipiul metodei Reacti!ul -aaler-Rose este o suspensie stabilizat de hematii de oaie sensibilizate la r'ndul lor cu anti IgE de %oarece( $ensibilitatea reacti!ului este pentru a detecta o cantitate minim de )R de @ ui4ml n acord cu ->F Internaional $tandard)& fr diluarea probei( Material biologic

$e folose%te serul clar %i proaspt( 0lasma& serul lipemic& ori contaminat poate duce la erori n obinerea rezultatelor( Dac testul nu poate fi fcut imediat& serul se pstreaz la 5-?/C& pentru D5 de ore( 0entru un timp mai ndelungat& serul trebuie pstrat congelat( Modul de lucru I. Testul calitativ

-$e aduc reacti!ii %i probele la temperatura camerei naintea folosirii cu ./ min( -$e agit bine reacti!ul astfel nc't particulele s se disperseze -$e pun 5 picturi *C/ l) de ser nediluat din fiecare prob n cercurile plcuei de testare -$e adaug o pictur de reacti! n fiecare cercule utilizat -$e omogenizeaz coninutul cu un bei%or pentru fiecare test efectuat -$e pune plcua pe o suprafa plan 5 min( -Dup expirarea timpului se apleac plcua la 9C/ %i se a%teapt 1 min( -$e cite%te prezena sau absena aglutinrii !izibile aparut n acest timp( Dac se dep%e%te timpul& atunci se !a citi o reacie de aglutinare nespecific( 0rezena aglutinrii indic prezena n ser a unei cantiti de )R egal cu @ ui4ml( $cderea intensitii aglutinrii indic un ni!el mai sczut( II. Testul semicantitativ

"cest test se realizeaz prin efectuarea unor diluii succesi!e ale serului n soluie salin izotonic( Diluii $erul probei $oluie salin 1// l 15 1// l 19 1? 11@ 1// l

1// l 1// l 1// l

1// l C/ l @x?

1// l C/ l @x1@

Kolumul probei Calcularea conc(

C/ l @x5

C/ l @x9

)actorii reumatoizi sunt imunoglobuline cu acti!itate de anticorpi( )actorii reumatoizi sunt prezeni la ma:oritatea pacienilor cu poliartrit reumatoid *0R)( Interpretarea re$ultatelor Kalori normale+ ntre /-@ ui4ml

Kalori patologice+ poliartrita reumatoid *BCA dintre cazuri)& n unele colagenoze *lupusul eritematos sistemic& dermatomiozit)& n unele forme de neoplasm %i unele hemopatii maligne& intr-un numar mare de afeciuni reumatismale ale copilriei *spondilartrita anchilozant)& boli infecioase *sifilis& HC& hepatita !iral)& boli respiratorii *astm bron%ic& fibroza pulmonar& bron%ite)( Observa#ii Reacti!ii conin azid de sodiu ce se poate combina cu Cu %i 0b& put'nd de!eni explozibili( Controlul poziti! %i negati! din ser uman& a fost testat prin metoda liceniat )D" %i s-a demonstrat c nu reacioneaz cu anticorpii pentru "g>Hs %i >IK( oate probele umane pot fi considerate potenial infectate( Reacti!ul se !a agita bine nainte de folosire& astfel nc't suspensia s fie bine omogenizat( $ensibilitatea testului depinde de !olumul picturii *C/ l)( Reacti!ii %i controalele sunt stabile p'n la data expirrii& dac sunt pstrate la temperatura de 5-? /C( Reacti!ul nu se pstreaz congelat( $erurile contaminate sau citirea mai t'rziu de . min(& pot da reacii fals-poziti!e( =u se poate pune un diagnostic doar pe baza unui singur test& este necesar corelarea cu datele clinice( Testul "entru i'enti%icarea Ag<1s rincipiul metodei estul pentru identificarea "g>Hs este un test rapid se efectueaz din ser& este util n diagnosticul infeciei cu !irusul hepatitic H( Rezultatul testului poate fi citit !izual& fr niciun instrument( estul se bazeaz pe principiul determinrii semicantitati!e a "g>Hs din ser& cu a:utorul metodei imunoenzimatice de tip 6sand;ich7( "nticorpii monoclonali %i policlonali sunt folosii pentru identificarea "g>Hs cu o nalt sensibilitate( estul dureaz aprox( 1C min( Reactivi 5C de plcue imunocromatografice Reacti!ul 1Renzima con:ugat Reacti!ul 5Rsoluia de splare Reacti!ul .Rsoluia re!elatoare Material biologic 0acientul nu necesit o pregtire prealabil( -$e recolteaz s'nge fr anticoagulant -$e las s'ngele s se coaguleze -$e separ serul Dac probele nu pot fi testate n ziua recoltrii& serul se pstreaz n frigider sau congelat( =u se recomand congelare %i decongelare repetat( -Dup decongelare& serul se omogenizeaz bine(

Modul de lucru -$e aduc toi reacti!ii& plcua %i toate materialele necesare la temperatura camerei nainte de efectuarea testului cu ./ min( =u se amesteca capacele eprubetelor ce conin probe -$e adaud .//-9// l de ser n situsul de testare( $e las serul s se absoarb complet -$e adaug 5 picturi Reacti! 1 *Enzima con:ugat)( -$e las soluia s se absoarb complet( $e a%teapt 1/ min( -$e adaug ? picturi Reacti! 5 *$oluia de splare) n situsul de testare( -$e las ca soluia s se absoarb complet( -$e ndeprteaz filtrul -$e adaug . picturi Reacti! . *Re!elator de culoare) n situsul de testare( -$e las ca soluia s se absoarb complet( -$e adaug nc C picturi Reacti! . -$e cite%te rezultatul dup . min( Interpretarea re$ultatelor =egati!+ sunt !izibile doar cele . spoturi mici Intens poziti!+ toate cele trei spoturi mici %i spotul mare sunt !izibile& iar spotul mare este intens colorat $lab poziti!+ apar cele . spoturi mici %i spotul central& dar spotul mare nu foarte intens colorat =econcludent+ c'nd spotul central este !izibil& dar cele mici nu sau c'nd nu apare nici un spot( $e repet testul Observa#ii Pitul trebuie pstrat la temperatura de 5-?/C( Dup deschiderea pachetului& 8itul poate fi pstrat la temperatura camerei o sptm'n& dar nu la temperaturi mai mari de .//C( )laconul cu reacti! reprezint enzima con:ugat %i trebuie pstrat la 5-?/C( Testul calitati. "entru i'enti%icarea Ag<1s rincipiul metodei Reacti!ul este o suspensie de particule latex de polistiren SncTrcate cu gamaglobulin anti->Hs nalt purificat( C'nd "g>Hs este prezent n prob se obser! o aglutinare e!ident( Reactivi 1 flacon cu reacti! latex de C ml 1 flacon cu control poziti! de 1 ml 1 flacon cu control negati! de 1 ml 1 plcu pe care se efectueaz reacia Material biologic

$e folose%te ser clar %i proaspt( 0robele pot fi pstrate la 5-?/C pentru 9? de ore& nainte de efectuarea testului( 0entru o perioad mai lung serul trebuie pstrat congelat Modul de lucru -$e aduc reacti!ii %i probele la temperatura camerei cu ./ min( naintea folosirii -$e agit u%or reacti!ul pentru dispersia particulelor %i pentru omogenizare -0entru fiecare prob se pregte%te o eprubet etichetat %i se adaug n 5 ml soluie salin izotonic& C/ l de prob *diluie 149/) -$e pipeteaz 1 pictur de control negati! %i poziti! nediluat n c'te un cercule al plcuei( -$e pipeteaz C/ l de prob diluat ntr-un cercule al plcuei %i C/ l de prob nediluat ntr-un alt cercule -$e adaug o pictur de suspensie latex "g>Hs n fiecare cercule utilizat( $e amestec ambele picturi de pe plcu cu un bei%or -$e rote%te plcua manual sau cu un rotator *@/-?/ rpm) timp de C min( -$e cite%te imediat l'ng o surs de lumin aglutinarea -$ensibilitatea testului descre%te proporional cu temperatura camerei Rezultatul testului calitati!+ 0roba nediluat =egati! 0oziti! Conc( sczut Conc( medie Conc( mare "glutinare("glutinare J "glutinareJ "glutinare 0roba diluat "glutinare U "glutinare U "glutinare J "glutinare J

Observa#ii Reacti!ii conin azid de sodiu care n contact cu plumbul %i cuprul e!ilor poate forma azid metalic explozi!( Dup ndeprtarea reacti!ilor se spal sistemul de scurgere cu un !olum mare de ap( Reacti!ii se arunc sub :et de ap pentru a pre!eni formarea de azid metalic explozi! ( Controlul poziti! prezint caracteristicile antigenice nu %i pe cele infecioase( otu%i& nici o metod de testare nu poate oferi sigurana absolut( oate probele umane pot fi considerate potenial infectate( Testul "entru i'enti%icarea anticor"ilor anti!<1s rincipiul metodei "cesta este un test rapid pentru identificarea anticorpilor anti->Hs n ser& fiind util n diagnosticul infeciei cu !irusul hepatitic H( Rezultatele pot fi citite !izual( estul se bazeaz pe principiul determinrii semicantitati!e a anticorpilor anti>Hs n ser cu a:utorul metodei imunoenzimatice de tip 6sand;ich7( "nticorpi sintetici %i

recombinai sunt folosii pentru identificarea specific a anticorpilor anti->Hs& metoda prezint o sensibilitate crescut( "nticorpii anti->Hs mai mici de 1/ mui4l pot fi detectai n 1/-1C min( $potul mare sau linia celor . spoturi mici ne a:ut la citirea rezultatelor poziti!e %i negati!e( Cele . spoturi mici ser!esc pentru controlul intern( $potul mic central este un control slab poziti!& celelalte 5 spoturi laterale sunt pentru controlul intens poziti!( "ceste spoturi apar cnd reacia imunoenzimatic este complet Reactivi 5C de pliculee imunocromatografice R1 Enzima con:ugat R5 $oluia de splare R. $oluia de de!elopare Pitul se pstreaz la temperatura de 5-?/C( Dup deschiderea pachetului& acesta poate fi pstrat la temperatura camerei o sptm'n& dar nu la temperaturi mai mari de .//C( )laconul cu enzima con:ugat trebuie pstrat la 5-?/C( Material biologic 0acientul nu necesit n prealabil o pregtire( $e recolteaz s'nge ntr-o eprubet fr anticoagulant( $e las s'ngele s se coaguleze %i se separ serul( Dac probele nu pot fi lucrate n ziua recoltrii& serul se pstreaz n frigider sau congelator( $e e!it congelarea %i decongelarea repetat( Dup decongelare serul trebuie s se omogenizeze( Modul de lucru -$e aduc toi reacti!ii& plcua& probele %i toate materialele necesare la temperatura camerei nainte de efectuarea testului( 0entru fiecare test se folose%te o singur caset( -Cu pipeta se adaug . picturi de soluie de splare *R5) n dispoziti!ul de testare( $e las s se absoarb complet soluia naintea continurii testrii( -$e adaug .//-9// l de ser n situsul de testare( -$e adaug 5 picturi de Reacti! 1 *Enzima con:ugat)( $e las reacti!ul s se absoarb complet *se a%teapt 1/ min)( -$e adaug ? picturi de Reacti! . *$oluia de de!elopare) n situsul de testare( Din nou se las s se absoarb complet -$e adaug alte C picturi de Reacti! .( $e las 5 min -$e cite%te rezultatul Interpretarea re$ultatelor =egati!+ sunt !izibile doar cele . spoturi mici Intens poziti!+ $unt !izibile toate cele . spoturi mici %i spotul mare( $potul mare este intens colorat $lab poziti!+ "par cele . spoturi mici %i spotul mare central& dar spotul mare nu este foarte intens colorat =econcludent+ C'nd spotul central este !izibil& dar cele mici nu sunt !izibile sau c'nd nu apare nici un spot( 2n aceast situaie se recomand repetarea testului(

Testul "entru i'enti%icarea anticor"ilor anti!<C= rincipiul metodei Este un test rapid pentru identificarea anticorpilor anti->CK din ser& care a:ut la diagnosticul infeciei cu !irusul hepatitic C( $e bazeaz pe principiul reaciei imunoenzimatice& determin'ndu-se anticorpii anti->CK n ser( "ntigenele sintetice %i recombinate >CK sunt folosite pentru identificarea specific a anticorpilor anti->CK cu nalt specificitate( estul dureaz . min( "nticorpii anti->CK nu reacioneaz cu Ig,& iar IgE este mar8er pentru >CK( )ormarea unui spot mare *Ref( ") %i o linie cu . spoturi mici indic un rezultat poziti! sau negati!( Cele . spoturi mici ser!esc ca un control intern( $potul central mic indic un control slab poziti! %i cele 5 spoturi laterale indic un control intens poziti!( "cestea apar dup ce reacia imunoenzimatic este complet( Reactivi 5C de teste *fiecare plcu imunocromatografic este pentru un test) 5 flacoane cu soluie con:ugat de aur coloidal Material biologic Recoltarea probelor nu necesit pacientului o pregtire special( Recoltarea s'ngelui se face ntr-o eprubet fr anticoagulant( $e folose%te numai ser( Modul de lucru -$e aduc toi reacti!ii& plcua& probele %i orice alte materiale necesare la temperatura camerei nainte de efectuarea testului -$e adaug 1/ picturi de soluie con:ugat n spaiul de reacie de pe plcu -$e adaug ./ l ser peste soluia con:ugat %i se agit -)olosind o pipet se transfer toat soluia din spaiul de reacie respecti! peste prefiltrul care acoper spaiul n care se gse%te h'rtia imunocromatografic -$e las ca probele s fie absorbite complet de pre-filtru -$e a%teapt s apar spoturile de control nainte de a continua urmtoarea etap( -$e adaug 1/ picturi de soluie con:ugat peste prefiltru -$e las s se absoarb toat soluia -$e ndeprteaz prefiltrul plcuei -$e cite%te rezultatul Interpretarea re$ultatelor =egati!+ dac numai cele . spoturi mici de pe linia de control sunt !izibile( Lneori datorit concentraiei crescute a probei poate s apar %i un spot superior liniei de control& mai puin intens colorat 0oziti!+ spotul superior %i linia de control sunt !izibile $lab poziti!+ spotul superior apare mai puin intens& dar este nsoit de linia de control

=econcludent+ c'nd apare doar spotul central %i linia de control nu apare sau c'nd at't spotul central c't %i linia de control nu apare( 2n acest caz se recomand repetarea testului( Testul "entru i'enti%icarea anticor"ilor anti!<elicobacter "8lori rincipiul testului Este un test !izual& rapid& pentru identificarea calitati! a IgE specifice anti>elicobacter pGlori n serul uman( "cest 8it este utilizat pentru diagnosticul infeciei cu >elicobacter pGlori la pacieni cu simptome gastro-intestinale( estul este conceput pentru detectarea anticorpilor specifici anti->elicobacter pGlori din serul uman( )olosirea corect a testului permite detectarea infeciei cu >elicobacter pGlori la pacieni simptomatici( "ceast informaie poate fi folosit n urmrirea de ctre medic a e!oluiei bolii( estul este destinat detectrii infeciei prin interpretarea !izual a culorii aprute n dispoziti!ul de testare& care este o faz solid de tip 6sand;ich7 colorat prin con:ugare ntr-o reacie imun neenzimatic( ,embrana a fost acoperit cu antigen de >elicobacter pGlori n zona benzii testului %i cu anticorpi de capr anti-%oarece n regiunea benzii de control( 2n timpul testului& serul diluat al pacientului este lsat s reacioneze cu con:ugatul colorat *antigenul de >elicobacter pGlori U coloidul de aur con:ugat)& care a fost precolorat n coninutul din interiorul casetei( "mestecul !a circula in membrana cromatografic prin capilaritate( C'nd anticorpii specifici& adic IgE sunt prezente n prob& !a aprea o band colorat cu complexele antigen-anticorp( 0e de alt parte& o band colorat !a apare intotdeauna n zona de control( "ceast band de control este un indicator al utilizrii corecte a testului( F culoare distinct aprut n regiunea benzii-test indic un rezultat poziti!& iar absena benzii colorate n regiunea testului reprezint un rezultat negati! Reactivi Dispoziti!ul testului+ )iecare caset conine o bandelet de testare cu antigen >elicobacter pGlori& acoperit cu agentul colorant( $oluia de diluie+ fosfat tamponat salin& cu ;een 5/ %i conser!ant Material biologic $'ngele recoltat prin flebotomie este colectat intr-o eprubet fr anticoagulant( $e las s'ngele s se coaguleze( $e separ serul prin centrifugare( $erul se pstreaz la 5?/C p'n la 5 sptm'ni( $erul poate fi pstrat la U5//C p'n la 1 an( Modul de lucru -Inainte de testare& plcua-test %i proba de ser a pacientului se aduc la temperatura camerei *5/-.//C)( -$e scoate plcua-test din punga de protecie -$e eticheteaz testul cu numele sau numrul de identificare al pacientului -$e pipeteaz 5/ l din proba de ser n 1?/ l soluie de diluie -$e adaug n dispoziti!ul de testare .-9 picturi de soluie peste 5/ l ser

-$e cite%te rezultatul n C min Interpretarea re$ultatelor =egati!+ c'nd apare o singur band ro%ie n zona benzii de control( =u apare nici o band ro%ie n zona benzii de testare 0oziti!+ n afara benzii de control& apare o band ro%ie n regiunea liniei de testare =econcludent( Cnd nu apare nici o band n nici una din regiuni& procedura de testare a fost probabil nerespectat sau reacti!ii au fost probabil alterai ,a:oritatea subiecilor care prezint infecia cu >elicobacter pGlori au ni!elurile de IgE crescute( $e estimeaz c >elicobacter pGlori este prezent la C/A din populaia globului( Incidena anticorpilor anti->elicobacter pGlori este n funcie de !'rst& ras& zona geografic& starea clinic( F parte relati! mare de pacieni care au !alori poziti!e ale ni!elurilor de anticorpi sunt asimptomatici& de%i sunt infectai cu >elicobacter pGlori( =i!elurile de anticorpi nu se coreleaz cu se!eritatea simptomelor clinice Observa#ii Piturile trebuie s fie pstrate la frigider *5-?/C) sau la temperatura camerei *1C.//C) n punga de garanie cu 1g deshidratant pentru pstrarea !alabilitii( Pitul este folosit numai pentru diagnosticul in !itro( " nu se folosi dup data expirrii( " nu se deschide punga casetei cu teste p'n nu suntei gata s efectuai testul( $erurile icterice& lipemice& hemolizate sau contaminate pot furniza rezultate eronate( Testul imunologic "entru i'enti%icarea antigenului 'e C$lam8'ia rincipiul metodei estul este imunologic& calitati!& rapid& bazat pe principiul imunocromatografiei( 0rincipiul testului const n plasarea probei ntr-un tub de reacie ce conine soluia "( Dup 5 min se adaug n tub soluia de extracie H( Dup ce s-a realizat extracia& se adaug . picturi *aprox( 5// l) din proba obinut n loca%ul pentru prob al casetei-test( 2n caseta-test& n regiunea benzii de testare& membrana se acoper n prealabil cu anticorpi monoclonali anti-antigen specific lipopolizaharidic *#0$)& iar n regiunea benzii de control& cu anticorpi de capr anti-%oarece( 2n timpul testrii& proba !a reaciona cu particulele de aur coloidal care au fost acoperite cu anticorpi monoclonali anti-ChlamGdia& complexul rezultat difuz'nd lateral n membran prin capilaritate( Dac proba conine antigenul de ChlamGdia& pe membran n regiunea band a testului& se !a forma o band colorat ce conine complexul anticorp ChlamGdia-anticorp particul de aur coloidal( Dac antigenul de ChlamGdia nu este prezent& nu se !a forma nici o linie n regiunea band a testului( 2ntotdeauna& indiferent de prezena ChlamGdiei& !a aprea n regiunea de control o band colorat& ser!ind drept control( Reactivi )iecare 8it conine tot ce este necesar pentru efectuarea a 5/ probe 5/ casete-test48it 1 fiol soluie de extracie "+ sticlu picurtoare de plastic *15 ml) cu hidroxid de sodiu /&5 ,

1 fiol soluie de extracie H+ sticlu picurtoare de plastic *15 ml) cu acid clorhidric /&5 , 5/ aplicatoare sterile 1 fiol control poziti! *1 ml)+ Chlamzdia inacti!at termic& n tampon& azid de sodiu /&1A 1 fiol control negati! *1 ml)+ $treptococ grupa H inacti!at& n tampon& azid de sodiu /&1A 5/ de tuburi de extracie 1 ambala: Material biologic Calitatea probelor recoltate are o mare importan( Detectarea antigenului de ChlamGdia cere ca tehnica de recoltare prin care se obine material celular s fie altfel dec't pentru lichidele biologice *!iguroas %i suficient)( Recoltarea probei de la ni!elul zonei endocer!icale -$e folose%te aplicatorul din 8it( 2nainte de recoltarea probelor se nltur excesul de mucus din zona endocer!ical cu un tampon de !at -$e introduce aplicatorul steril n canalul endocer!ical& trec'nd de :onciunea scuamocilindric& p'n c'nd cea mai mare poriune a aplicatorului nu mai este !izibil( "ceasta permite recoltarea de celule cilindrice sau cuboidale& care sunt principalele sedii ale ChlamGdiilor n organism( -$e rote%te ferm aplicatorul 1/-1C sec(& apoi aplicatorul poate fi scos cu atenie& fr a contamina proba cu celule exocer!icale sau !aginale( Ca o alternati!& probele endocer!icale pot fi recoltate cu ansa citologic( =u se folosesc ansele citologice la pacientele nsrcinate( Dup curetarea exocer!ixului cu aplicatorul& se introduce ansa citologic n canalul endocer!ical& dep%ind :onciunea scuamocilindric( -$e las pe loc 5-. sec(& se rote%te ansa citologic de dou ori& apoi se retrage ansa fr s se ating pereii !aginului( -$e introduce aplicatorul sau ansa n tubul de extracie numai dac testul se efectueaz imediat( Recoltarea probei de la nivelul uretrei -$e recomand pacientului s nu urineze cu cel puin o or nainte de recoltarea probei( "plicatorul sau ansa citologic se pot folosi %i pentru recoltarea probei uretrale( -$e introduce aplicatorul n uretr circa 5-9 cm( $e rote%te timp de .-C sec(& apoi se retrage( -$e introduce aplicatorul n tubul de extracie& dac proba trebuie testat imediat( Dac nu este posibil determinarea imediat& proba pacientului poate fi introdus ntr-un tub uscat pentru pstrare sau transport( 0roba poate fi pstrat 9-@ ore la temperatura camerei *1C.//C) sau 59-D5 de ore la frigider *5-?/C)( 0roba nu se congeleaz( oate probele !or fi aduse la temperatura camerei nainte de testare( Recoltarea probelor de urin la brba#i 0rima urin de diminea este de preferat& deoarece probabilitatea identificrii prezenei antigenului de ChlamGdia este cea mai mare(

-$e recomand pacientului s recolteze minimum 5/-9/ ml din prima urin din ziua analizei ntr-un container steril %i fr conser!ant( Dac probele de urin nu pot fi testate imediat& acestea trebuie pstrate la frigider p'n la 59 de ore( Modul de lucru oi reacti!ii %i probele trebuie aduse la temperatura camerei nainte de nceperea analizei 0robele urinare trebuie centrifugate pentru a colecta toate particulele ce pot conine celule cu ChlamGdia -$e centrifugheaz urina *minimum 1C ml) timp de 1/ min( -$e nltur cu atenie supernatantul -$e adaug C picturi de soluie de extracie " n tub %i se amestec sedimentul cu o pipet de unic folosin& p'n la omogenizarea suspensiei -$e las 5 minute la temperatura camerei -$e transfer suspensia ntr-un tub de extracie folosind o pipet de unic folosin -$e adaug C picturi de soluie de extracie H -$e scoate testul din folia protectoare %i se pune pe o suprafa plan& uscat %i curat -$e eticheteaz testul -$e adaug . picturi *5// l) din proba obinut n caseta de testare -$e a%teapt s apar benzile colorate( Rezultatul testului trebuie s fie citit n 1/ min dup adugarea extractului de suspensie( 2n funcie de numrul de microorganisme de ChlamGdia prezente pe aplicator unele rezultate poziti!e pot de!eni !izibile dup numai 1 min( otu%i pentru a confirma rezultatele negati!e este necesar un timp de reacie de 1/ min( Rezultatele nu se interpreteaz dup 1C min( Interpretarea re$ultatelor =egati!+ n regiunea test nu apare nici o band colorat clar %i distinct n roz( "ceasta arat c nu a fost detectat antigenul de ChlamGdia 0oziti!+ n afar de banda roz din regiunea control a testului apare o alt band roz clar prezent n regiunea test( "ceasta indic c proba conine antigen de ChlamGdia =econcludent+ dac nu apare nici o band n regiunea control& analiza trebuie repetat( "ceasta indic o posibil eroare n efectuarea testului( 2n acest caz se poate recolta o prob nou sau dac nu a trecut mai mult de o or de la recoltarea probei& se poate efectua nc o determinare pe aceea%i prob( Observa#ii $e prelucreaz toate probele chiar dac conin ageni infecio%i( Dup terminarea testrii& se arunc aplicatoarele numai dup autocla!area acestora la 15//C& cel puin 5/ min( Ca o alternati!& aplicatoarele pot fi tratate cu soluie de hipoclorit de sodiu /&C-1&/A o or nainte de a fi aruncate( 0ersoanele care efectueaz testul& trebuie s poarte mbrcminte de protecie cum ar fi halat %i mnu%i de unic folosin n timpul recoltrii %i testrii probelor( =u se mn'nc& nu se bea& nu se fumeaz n aria unde sunt prelucrate probele %i reacti!ii 8itului(

$oluia de extracie " conine hidroxid de sodiu( $oluia de extracie H conine acid clorhidric( Dac una dintre cele dou soluii !ine n contact cu pielea sau cu ochii& se recomand splarea cu mult ap( $e e!it orice contact al m'inilor cu nasul sau ochii n timpul recoltrii %i testrii probelor( Controlul poziti! %i negati! din 8itul de testare conine azid de sodiu *=a=.) /&1A& care n contact cu plumbul %i cuprul e!ilor poate forma azid metalic explozi!( Dup ndeprtarea reacti!ilor se spal sistemul de scurgere cu un !olum mare de ap( $e recomand folosirea aplicatoarelor ori anselor citologice pentru obinerea probelor endocer!icale( =u se amestec reacti!ii sau componentele din loturi sau 8ituri diferite( =u se schimb dopurile sticlelor ntre ele( =u se folose%te 8itul dup expirarea datei indicat pe cutie( #a fel ca n cazul tuturor testelor& diagnosticul definiti! nu trebuie s se bazeze doar pe rezultatul unui singur test %i acesta trebuie coroborat cu datele clinice( Pitul se !a pstra la temperatura camerei *1C-5//C)( Testul "entru e.i'en ierea Sta"$8lococcus aureus rincipiul metodei 0rincipala deosebire dintre $taphGlococcus aureus %i alte tipuri de stafilococi este existena unui factor de aglutinare( $taphGlococcus aureus determin aglutinarea hematiilor n!elite cu fibrinogen( Reactivi Reacti! 5x5 ml hematii de oaie n!elite cu fibrinogen Reacti! C 5x5 ml hematii de oaie 0ictor 9 buc Material biologic $e folosesc colonii bacteriene considerate de $taphGlococcus aureus Modul de lucru -$e agit bine reacti!ii -$e deschid flacoanele %i se pun pictoarele -$e pune o pictur de Reacti! *test) %i o pictur de Reacti! C *control) la fiecare capt al lamei de sticl -)olosind o ans& se amestec coloniile bacteriene cu fiecare pictur -$e nclin u%or lamela Interpretarea re$ultatelor Reacie poziti!+ suspensia din prob aglutineaz n primele 1C sec& n timp ce suspensia de control rm'ne fin dispersat+ Rezultatul este $taphGlococcus aureus prezent Reacie negati!+ at't suspensia din prob c't %i cea de control rm'n fin dispersate& chiar dup 1 min( Rezultatul este $taphGlococcus aureus absent(

Reacia echi!oc+ at't suspensia din prob c't %i cea de control au semne de aglutinare( 2n acest caz trebuie fcute testele clasice pentru identificare Observa#ii Reacti!ii nedesfcui sunt stabili la 5-?/C p'n la data de expirare tiprit pe cutie( Testul imunoc$imic "entru 'etectarea s>ngelui ocult n "robele 'e %ecale rincipiul metodei >emoglobina uman din probele de fecale reacioneaz cu un amestec de anticorpi monoclonali4policlonali( 2n caz de reacie poziti! apar dou linii roz n zonele %i C( Dac nu exist hemoglobin apare o singur linie !izibil n zona de control C $ensibilitatea testului+ /&/. mg >b4g de materii fecale& /&5 mg >b4ml de soluie( Reactivi $tripsuri pentru test uburi colectoare *tampon) C buc( C buc(

Materialul biologic Recoltarea probelor -$e colecteaz materii fecale ntr-un recipient curat %i uscat -$e de%urubeaz capacul tubului colector %i se scoate bei%orul aplicator -$e recolteaz . probe de materii fecale folosind bei%orul aplicator -$e nltur excesul de prob de pe bei%orul aplicator& %terg'ndu-l cu un material absorbant -$e introduce bei%orul aplicator napoi n tubul colector( 0roba astfel pregtit poate fi pstrat la 5/-.//C o sptm'n Modul de lucru -$e scoate strip-ul de test din ambala: -$e amestec bine proba n tubul colector -$e taie !'rful tubului colector %i se arunc primele 5-. picturi de prob -$e poziioneaz !ertical tubul colector %i se disperseaz 9 picturi pe suprafaa marcat $ -$e a%teapt C min( %i se cite%te rezultatul Interpretarea re$ultatelor 0oziti!+ apar linii colorate n zonele *test) %i C *control) =egati!+ o linie colorat este !izibil numai n zona C *control) =econcludent+ nu exist linie colorat nici n zona nici n zona $( estul trebuie repetat Observa#ii -0entru obinerea rezultatului real nu sunt necesare restricii dietetice -0robele nu trebuie colectate n timpul ciclului menstrual sau dac pacientul sufer de hemoroizi sau hematurie *rezultatul apare fals-poziti!)

- ratamentul cu medicamente care pot cauza iritaii gastro-intestinale trebuie ntrerupt cu cel puin 5 zile nainte de recoltarea probei - estul este specific pentru hemoglobina uman( 0'n la C// g4ml nu s-au obser!at interferene cu hemoglobina de pasre& !ac& porc& capr& cal& iepure( Testul RPR carbon rincipiul metodei Reacti!ul R0R Carbon este o suspensie stabilizat cu cristale de colesterol marcate cu cardiolipin lecitin %i particule de mangal *pentru mbuntirea interpretrii rezultatelor)( Reacti!ul are rolul de antigen fa de anticorpii prezeni n organismul persoanelor infectate cu reponema pallidum( Reactivi 1 flacon cu reacti! latex de . ml 1 flacon cu control poziti! de 1 ml 1 flacon cu control negati! de 1 ml 1 set de plcue pe care se efectueaz testul 1 flacon pipeta pentru reacti!ul latex Material biologic $e folose%te ser clar& obinut prin centrifugarea s'ngelui recoltat fr anticoagulant( 0robele pot fi pstrate la 5-?/C maximum 9? de ore nainte de efectuarea testului( 0entru o perioad mai lung& serul trebuie pstrat congelat( $erurile hemolizate& lipemice sau contaminate pot da erori la interpretarea rezultatelor( Modul de lucru -$e aduc reacti!ii %i probele la temperatura camerei& nainte de folosire -$e agit u%or reacti!ul pentru dispersarea particulelor -$e pune c'te o pictur din controlul poziti! %i negati! n c'te un cercule al plcuei -$e pune c'te o pictur *C/ l) de ser nediluat din fiecare prob n c'te unul din cercurile plcuei -$e adaug o pictur de reacti! R0R Carbon& ori se pipeteaz 5/ l de reacti! n fiecare cercule folosit -$e amestec ambele picturi& fr s se disperseze pe toat suprafaa cercului -$e rote%te plcua manual ori cu un rotor mecanic de ?/-1// rpm& ? min( -$e cite%te prezena aglutinrii !izibile cu ochiul liber( F aglutinare nespecific poate apare dac testul este citit mai t'rziu de ? min( estul semicantitati! -$e poate efectua o diluie succesi! cu soluie salin izotonic - itrul serului este diluia cea mai mare care produce reacia poziti! Interpretarea re$ultatului Rezultat poziti!+ prezena unor nori cenu%ii pe albul plcuei Rezultat negati!+ lipsa unei reacii de floculare uniforme %i a unei culori cenu%ii

$ifilisul este o boal cu transmitere sexual& cauzat de reponema pallidum( Observa#ii Reacti!ii conin azid de sodiu ce se poate combina cu 0b %i Cu put'nd de!eni explozibili( Controlul poziti! %i negati! din ser uman a fost testat folosind metoda liceniat )D" %i s-a demonstrat c nu reacioneaz cu anticorpii fa "g>Hs %i >IK( Fricum& toate probele umane pot fi considerate potenial infectate( $e pune reacti!ul de R0R Carbon n sticlua special nainte de folosire( "cesta trebuie foarte bine omogenizat& reacti!ul se agit bine nainte de folosire( =u se folosesc dec't picturile care sunt puse perpendicular pe suprafaa plcuei( Dac nu se folose%te sticlua picurtoare& atunci se folose%te pipeta automat pentru 5/ l( $ensibilitatea acestui test depinde de !olumul picturii( Reacti!ul %i controalele se pstreaz la 5-?/C( Testul "entru 'e"istarea "recoce a sarcinii rincipiul metodei estul hCE *Eonadotrofina corionic uman) este un test calitati!& o reacie imun n dou straturi pentru determinarea hCE n urin( ,embrana a fost acoprit cu anticorpi de capr anti-hCE n regiunea benzii de test %i anticorpi de capr anti-%oarece n regiunea benzii de control( 2n timpul testului urina pacientei este lsat s reacioneze cu anticorpii monoclonali anti-hCE colorai cu coloidul de aur aplicat pe bandeleta de test( ,ixtura !a migra n membran prin capilaritate( "bsena benzii colorate n regiunea benzii testului indic rezultatul negati!( 0entru controlul procedurii n regiunea de control !a aparea ntotdeauna o band colorat n prezena hCE n proba de urin( Reactivi Handeletele de testare+ bandelet acoperit cu anticorpi anti-hCE de capr %i anticorpi monoclonali anti-hCE de %oarece n coloid de aur uscat( Material biologic Recoltarea probei Frice prob de urin este bun pentru testare& dar prima urin de diminea este cea mai indicat& deoarece conine cele mai mari concentraii de hCE( 0robele de urin pot fi recoltate ntr-un recipient curat& de plastic sau de sticl( Dac probele nu pot fi prelucrate imediat& acestea pot fi pstrate la frigider *5/ ? C) p'n la D5 de ore(=u este necesar s adugm prezer!ant probei de urin( 0roba de urin trebuie lsat la temperatura camerei nainte de efectuarea reaciei( 0robele de urin tulbure trebuie centrifugate sau filtrate nainte de folosire( 0robele cu precipitate !izibile trebuie lsate s se decanteze %i pentru testare se !a folosi numai supernatantul clar(

Modul de lucru

-$e scoate bandeleta de testare din ambala: -$e introduce bandeleta n urin& cu !'rful sgeii orientat spre urin( =u se dep%e%te linia max *maximum) -$e poate lsa bandeleta n urin sau se poate s o scoatem dup min . sec %i s o lsm pe o suprafa curat& uscat& neabsorbant *ex+ marginea recipientului cu urin) -$e a%teapt s apar banda colorat( Dependent de concentraia de hCE din proba de urin& rezultate poziti!e pot fi obse!ate n 1/-./ sec( 0entru confirmarea rezultatului negati! sunt necesare C min( pentru reacie( =u se interpreteaz rezultatele dup ./ min( Interpretarea re$ultatelor =egati!+ doar o singur band colorat aprut n zona de control( =u apare nici o band colorat n regiunea de testare 0oziti!+ benzi distincte colorate apar n regiunea de control %i n regiunea de testare( Intensitatea culorii n regiunea de testare poate fi !ariabil( Incorect+ nici o band !izibil sau nici o band !izibil n regiunea de testare( $e repet testul Observa#ii Pitul de testare poate fi pstrat la temperatura camerei *5/-.//C) ntr-un container uscat p'n la data expirrii( Handeletele testului trebuie pstrate departe de umezeal& cldur %i razele soarelui( Capacul containerului de pstrare trebuie s conin desicant pentru pstrarea bandeletelor uscate( Imediat dup utilizare se repune cu gri: capacul( 2n anumite situaii& altele dec't sarcina& incluz'nd boala trofoblastic %i neoplasmele netrofoblastice& se pot produce ni!eluri ridicate de hCE( "ceste diagnostice trebuie luate n considerare dac tabloul clinic le sugereaz( Dac probele de urin sunt prea diluate& pot s nu conin ni!eluri semnificati!e de hCE( Dac se menine suspiciunea de sarcin trebuie repetat testul la 9?-D5 ore( Ca pentru toate testele diagnostice& un diagnostic clinic definiti! nu se poate baza pe un singur test %i trebuie pus numai de ctre medic dup e!aluarea datelor clinice %i de laborator( Testul :S< "entru 'iagnosticul meno"au*ei rincipiul metodei estul )$> pentru diagnosticul menopauzei este un test calitati!( o analiz imunologic de tip sand;ich prin care se determin concentraia hormonului foliculostimulant *)$>)( 0e linia de test a membranei au fost fixai anticorpi anti-)$>& pe linia de control s-au fixat anticorpi de capr anti()$> de mgar( 2n timpul testului& )$> din urina de la pacient reacioneaz cu con:ugatul colorat n auriu *coloid de anticorp monoclonal anti-)$>) care se afl sub form preuscat pe banda de test( "mestecul migreaz spre partea superioar a membranei cromatografice prin capilaritate( Dac proba testat conine )$> *n concentraie semnificati!) !a aprea n regiunea de test a membranei o linie colorat %i care reprezint complexul con:ugat anticorp )$>-)$>( 2n acelai timp !a aprea o linie de culoare slab n regiunea de control a membranei( "ceast linie de control reprezint o referin a intensitii culorii& echi!alent cu aprox( 5C mui4ml )$>(

Dac intensitatea liniei de test este egal sau mai puternic dec't cea a liniei de control& atunci rezultatul este poziti! Reactivi 5/ de casete de test cu membrana marcat cu anticorp de captur anti-)$> %i anticorp monoclonal anti-)$> colorat Material biologic 0roba de urin trebuie s fie recoltat ntr-un !as curat %i uscat( 0oate fi folosit urina din orice moment al zilei& totu%i se recomand urina de diminea& deoarece conine concentraia maxim diurn de )$>( 0robele de urin pot fi pstrate la frigider *5-?/C) cel mult D5 ore naintea efecturii testului( Dac probele au fost inute la frigider nainte de a efectua testul& acestea !or fi aduse la temperatura camerei( "cele probe de urin unde se obser! o precipitare& se filtreaz sau se centrifugheaz sau se las s se sedimenteze p'n se !or obine e%antioane clare care !or fi testate( Modul de lucru -2nainte de efectuarea testului& casetele de test& probele pacientelor& controalele %i probele de referin trebuie s fie aduse la temperatura camerei *5/-.//C)( -$e scoate caseta de test din punga de protecie *adus n prealabil la temperatura camerei& pentru a e!ita formarea condensului pe membrana test n momentul deschiderii) -$e !a nscrie pe fiecare caset de test numrul de identificare al pacientului sau al controalelor -$e ndeprteaz capacul de plastic roz pentru a a!ea liber !'rful absorbant( -$e apas cu degetul mare pe caseta de test& astfel nc't !'rful absorbant s fie direcionat n :os( -$e introduce !'rful absorbant n urin timp de 1/ sec( -$e reacoper caseta cu capacul roz %i se las pe o suprafa plan cu fereastra de test n sus %i se a%teapt p'n se obine rezultatul -$e cite%te rezultatul dup minimum . min( *max( 1/ min) Interpretarea re$ultatelor =egati!+ intensitatea culorii liniei de test este mai mic dec't cea a liniei de control 0oziti!+ intensitatea culorii liniei de test este egal sau mai mare dec't a liniei de control Dac nici linia de test& nici linia de control nu apar pe membrana casetei& atunci se elimin testul respecti!( "cest lucru s-a datorat fie unei proceduri neadec!ate n timpul etapelor de testare& fir deteriorrii reacti!ilor casetei( $e recomand a se repeta testul C-D zile mai t'rziu *preferabil de recoltat urina la aceea%i or) pentru a determina dac ni!elul de )$> este nc ridicat

Observa#ii Pitul se pstreaz la frigider *5-?/C) sau la temperatura camerei *p'n la .//C) n punga de plastic cu desicant( Testul L< 'e o.ula ie rincipiul estul este rapid %i u%or de folosit( estul este calitati!& put'nd preciza c'nd are loc o secreie de hormon luteinizant %i c'nd este probabil o!ulaia( 0entru nceput trebuie determinat durata ciclului menstrual( "ceasta reprezint numrul de zile cuprins ntre prima zi a ciclului %i ziua premergtoare apariiei ciclului( Dac ciclul este mai scurt de 51 zile ori mai lung de .? zile& trebuie consultat medicul(( Dac nu se cunoa%te durata ciclului& se ncepe testarea din a 11-a zi a ciclului& fc'nd o medie a celor 5? de zile( $e efectueaz un test la fiecare a C-a zi a perioadei sau dup ce secreia de #> a fost detectat Material biologic =u se folose%te prima urin de diminea& deoarece #> este sintetizat n cursul nopii %i !a apare n urin mai t'rziu& n timpul zilei( 0erioada cea mai bun pentru colectarea urinei este ntre orele 1/(//-1?(//( $e colecteaz urina la aceeea%i or n fiecare zi( Modul de lucru -$e las casetele test& proba de urin %i soluia de control s ating temperatura camerei *1?-.//C) -$e extrage urina cu a:utorul unui picurtor pentru urin -$e adaug C picturi de urin n acest loc -$e las lichidul s migreze -$e a%teapt s se coloreze %i s apar benzile Depinz'nd de concentraia de #>& rezultatele poziti!e pot fi obser!ate dup aprox 9/ sec( Confirmarea rezultatelor negati!e este dup ce a a!ut loc reacia complet *1/ min) Interpretarea re$ultatelor =u se secret #>+ apare o singur culoare n regiunea de control sau banda este strlucitoare $ecreie de #>+ dac apar 5 benzi colorate !izibile %i banda test este egal ca intensitate cu banda de control& atubnci cu siguran o!ulaia !a a!ea loc n urmtoarele 59-9? ore( est neconcludent+ nu este nici o band !izibil( $e recomand repetarea testului( Durata ciclului *zile) estul trebuie efectuat n ziua 51 55 5. 59 5C 5@ 5D 5? 5B ./ .1 .5 .. .9 .C .@ .D .? @ @ D D ? B 1/ 11 15 1. 19 1C 1@ 1D 1? 1B 5/ 51

7eterminarea crio"roteinelor rincipiul Incubarea serului la 9/C timp de 59 ore& dup care se urmre%te prezena unui precipitat n ser *crioproteine)( $erul cu crioprecipitat se centrifugheaz& apoi sedimentul este splat la rce de mai multe ori& solubilizat la .D /C& dup care este testat n dubla difuzie cu antiseruri monospecifice anti-imunoglobuline( 0rezena crioproteinelor reprezint un semn de disproteinemie ce se manifest n anumite situaii patologice *ex( afeciuni autoimune)( 1I1LIOGRA:IE Cristea K(& Cri%an ,(& Costin =(& Flinescu "( Imunologie clinic( Editura Casa Crii de Vtiin& Clu:-=apoca& 5//5 De:ica D( *sub red() ratat de imunologie clinic( Kol( I Ed( Dacia& Clu:-=apoca& 1BBD De:ica D( *sub red() ratat de imunologie clinic( Kol( II Ed( Dacia& Clu:=apoca& 1BB? Drugrin D(& =egru V(& Porec8 "(& ,ederle C( Imunologie molecular( Ed( ,irton& imi%oara& 1BB? Eluho!schi E( "ctualiti n imunologia clinic( Ed( >elicon& imi%oara& 1BB9 ,oraru I( Imunologie( Ed( ,edical& Hucure%ti& 1B?9 Flinescu "( Imunologie( Ed( Didactic %i 0edagogic& Hucure%ti& 1BBC 0unescu K(& atu C("(& $tnescu D(I(& ,edrea D(0( Imunologie concepte fundamentale %i aplicati!e( Ed( >elicon& imi%oara& 1BB@ 0ereianu D(& $aragea ,( Imunologia n teoria %i practica medicinei( Kol I Ed( "##& Hucure%ti& 1BB@ 0ereianu D(& $aragea ,( Imunologia n teoria %i practica medicinei( Kol( II Ed( "##& Hucure%ti& 1BB? Rpunteanu E( Imunologie U Imunopatologie( Ed( Eenesis& Clu:-=apoca& 1BB@ Koiculescu C(*sub red() =oiuni de imunologie %i imunopatologie( Ed( "cademiei Rom'ne& Hucure%ti& 1BBB Drugrin D(& =egru V(& Porec8 "(& ,ederle C( Imunologie molecular( Ed( ,irton& imi%oara& 1BB? ,oraru I( Imunologie( Ed( ,edical& Hucure%ti& 1B?9 Flinescu "( Imunologie( Ed( Didactic %i 0edagogic& Hucure%ti& 1BBC 0unescu K(& atu C("(& $tnescu D(I(& ,edrea D(0( Imunologie concepte fundamentale %i aplicati!e( Ed( >elicon& imi%oara& 1BB@ 0ereianu D(& $aragea ,( Imunologia n teoria %i practica medicinei( Kol I Ed( "##& Hucure%ti& 1BB@ 0ereianu D(& $aragea ,( Imunologia n teoria %i practica medicinei( Kol( II Ed( "##& Hucure%ti& 1BB? Koiculescu C(*sub red() =oiuni de imunologie %i imunopatologie( Ed( "cademiei Rom'ne& Hucure%ti& 1BBB