corelate cu originea etnic i geografic a populaiei investigate.

Polimorfismele ADNmt sunt intens exploatate n prezent n domeniile paleoantropologiei, criminalisticii i medicinii legale. Existena mutaiilor avanta oase este susinut de argumente circumstaniale. !e consider c variantele care, realiz"nd o cuplare str"ns a respiraiei cu fosforilarea oxidativ, reduc producia de cldur i o cresc pe cea de A#P, sunt favora$ile vieii la tropice. %nvers, mutaiile care relaxeaz cuplarea, intensific"nd astfel termogeneza, ar fi avanta oase n regiunile arctice. Este foarte pro$a$il ca selecia natural s fi operat rein"nd, atunci c"nd populaiile au migrat ntre ecuator i pol, mutaiile optime pentru anumite condiii climaterice i elimin"ndu&le pe cele inadecvate. 'ariantele prezumate a conferi avanta selectiv nu au fost nc identificate. (utaiile detrimentale conduc la apariia unor manifestri clinice a cror severitate difer n funcie de gradul )eteroplasmiei, tipul celulelor care le poart i gena afectat. *n cazul mutaiilor )eteroplasmice, relaia dintre proporia moleculelor ADN mutante i declinul produciei de energie este una direct. #otui, efectele fenotipice ale mutaiilor se fac resimite numai atunci c"nd eficiena glo$al a fosforilrii oxidative scade su$ un anumit nivel, denumit prag energetic, a crui valoare variaz de la un esut la altul. +el mai sensi$il la deficitul energetic este sistemul nervos, urmeaz, n ordine, muc)ii sc)eletici, inima i rinic)iul, glandele endocrine i ficatul. (ai puin evident este ns modul n care alterrile diferitelor gene mitocondriale se coreleaz cu severitatea i - mai mult dec"t at"t - c)iar cu trsturile fenotipului patologic pe care l imprim. Este un fapt $ine sta$ilit c exist mai multe mutaii care se fac rspunztoare de apariia unui acelai fenotip i c o aceeai mutaie poate imprima fenotipuri semnificativ diferite. Aceast disociere ntre genotip i fenotip se explic prin naltul polimorfism al ADNmt, precum i prin intervenia unor factori modificatori epigenetici. . meniune special i se cuvine depleiei mitocondriale. Depleia este termenul utilizat pentru a desemna reducerea drastic /uneori cu 0123 a cantitii de ADNmt. Depleia se produce, de regul, ntr&un singur organ /specificitate de esut3, cruia i deterioreaz profund i ireversi$il capacitatea funcional. 4iteratura conine exemple de depleii ale ADNmt din muc)i, rinic)i, ficat i creier. (area lor ma oritate determin tul$urri clinice de o gravitate extrem, instalate n primele sptm"ni de la natere i compati$ile cu o supravieuire de numai c"teva luni. +auzele depleiei par a fi mutaiile unor gene autosomale, un exemplu constituindu&l gena factorului de transcriere N567. Acest factor regleaz transcrierea genelor nucleare care codific proteinele mitocondriale. Prezena depleiei ADNmt la mai muli mem$ri ai unei fratrii, indiferent de sexul lor, precum i a$sena semnelor la prini, indic natura recesiv a mutaiei cauzatoare. 8.#5AN!(%#E5EA 4A DE!+ENDEN9% A (:#A9%%4.5 ADNmt. (utaiile produse n genele mitocondriale se transmit exclusiv pe linie matern. Except"nd c"teva specii de Drosop)ila i de roztoare, spermatozoizii nu contri$uie cu citoplasma lor /n care se afl un numr de numai ;<&=> de mitocondrii3 la formarea zigotului. Potrivit unor o$servaii recente, celor c"teva mitocondrii ale spermatozoizilor ptrunse ocazional n ovul n momentul fertilizrii, li se ataeaz molecule de u$i?uitin care le marc)eaz n vederea distruciei. 5ezult c toate cele aproximativ ;>>.>>> de mitocondrii prezente n citoplasma zigotului aparin ovulului i, ca atare, celulele viitorului organism vor fi ec)ipate numai cu mitocondrii materne. +onsecina poate fi exprimat astfel@ mamele i transmit genotipul mitocondrial copiilor de am$ele sexe, dar numai fiicele lor vor fi acelea care l vor transmite generaiei urmtoare . *n cazul n care femeia purttoare a unei mutaii mitocondriale are numai descendeni de sex masculin, mutaia se va elimina din populaie deoarece $r$aii nu pot asigura propagarea ei n succesiunea generaiilor.

PRINCIPALELE TIPURI DE BOLI MITOCONDRIALE (AN%6E!#A5%4E +4%N%+E A4E A6E+9%:N%4.5 (%#.+.ND5%A4E Principalele elemente care sugereaz implicarea alterrii funciilor mitocondriilor n etiopatogenia unei $oli sunt@ caracterul necoerent al asocierii semnelor i simptomelor clinice, de$utul cel mai adesea precoce i evoluia rapid progresiv, afectarea concomitent a cel puin trei organe care nu au n comun nici originea em$riologic i nici funciile $iologice, modificrile recurente survenite n ta$loul clinic cu ocazia unor infecii /ameliorri, agravri3, prezena n ta$loul clinic al $olilor comune a unor com$inaii de trsturi atipice, inexplica$ile. Pertur$rile procesului fosforilrii oxidative antreneaz - virtual - disfuncii ale oricrui organ sau esut. Ele pot afecta esuturile individual sau n diferite com$inaii. *n plus, mutaii diferite ale ADNmt pot produce manifestri clinice similare, iar o aceeai mutaie poate imprima fenotipuri mor$ide variate. !tudii efectuate pe familii n care s&au decelat mutaii )eteroplasmice ale ADNmt demonstreaz c, pe msura creterii proporiei de ADNmt mutant, are loc o reducere a produciei de energie, iar c"nd este atins un anumit prag, varia$il n funcie de esut, criza energetic determin declanarea manifestrilor patologice. 'aloarea pragului depinde de mai muli factori@ declinul produciei de energie, creterea produciei speciilor reactive de oxigen, iniierea apoptozei care, deplet"nd esuturile, compromite funcionalitatea acestora. Diferena ntre celulele normale i cele defective n ce privete funcia mitocondrial este minim, instalarea $olii produc"ndu&se atunci c"nd proporia de ADNmt mutant atinge 1<2. !emnele de de$ut pot aprea n orice moment al ontogeniei - din perioada antenatal, p"n la v"rsta adult - iar spectrul simptomelor de de$ut ale $olilor mitocondriale este foarte larg /ta$elul 73. #a$elul 7. Diversitatea simptomelor $olilor mitocondriale i relaia cu v"rsta de de$ut.
.5BAN PE5%.ADA NE.NA#A4A />& 7 4:NA3 +.P%4A5%E /. 4:NA&; AN%3 AD.4E!+EN9A, 'C5!#A AD:4#A

!N+

Dipotonie Acidoz lactic +om acidocetozc

(usculatura striat

(iopatie Atrofie muscular

5etard psi)omotor Ataxie cere$eloas (ioclonie Pseudoaccidente vasculare cere$rale Encefalomiopatie necrozant su$acut (iopatie Atrofie muscular !l$iciune muscular Dipotonie (ialgie %ntoleran la efort

(ioclonie Ataxie cere$eloas !pasticitate 5etard psi)omotor 4eucodistrofie Atrofie cortical Neuropatie periferic (iopatie progresiv !l$iciune muscular (ialgie %ntoleran la efort (ioglo$inurii recurente

(ioglo$inurii recurente Depatomegalie Disfuncie )epatocelular %nim +ardiomiopatie +ardiomiopatie +ardiomiopatie )ipertrofic )ipertrofic concentric )ipertrofic sau dilatativ Eloc cardiac 5inic)i #u$ulopatie proximal#u$ulopatie proximal /sindrom#oni&De$re& /sindrom# D63 6anconi3 Aparat 'om, diaree digestiv Atrofie a vilozitilor intestinale %nsuficien pancreatic exocrin !istem Dipostatur Dia$et endocrin Dipoglicemie Dipoparartiroidie Diperaldosteronism !istem Anemie sidero$lastic )ematopoietic Neutropenie, trom$openie Analizatorul !urditate neurosenzorial !urditate neurosenzorial auditiv Analizatorul Atrofie optic .ftalmoplegie extern vizual .ftalmoplegie extern progresiv progresiv Ptoz palpe$ral 5etinit pigmentar Atrofie optic 4e$er Ptoz palpe$ral 5etinit pigmentar +ataract +ataract Piele Pigmentaie anormal a regiunilor expuse la soare. Pr uscat i fria$il #ricotiodistrofie 6icat %nsuficien )epatic

Dup un interval relativ scurt de timp, semnelor iniiale li se adaug - invaria$il - cele ale afectrii neuromusculare. *n general, semnele prezente la de$ut persist i se agraveaz gradual. :neori ns, ele pot regresa, c)iar p"n la dispariie, o dat cu dezvoltarea unei simptomatologii care exprim suferina altor organe. Astfel, diareea, pancitopenia sau insuficiena )epatic se pot remite atunci c"nd n prim&planul manifestrilor clinice se plaseaz semnele deficitului neuromuscular. De notat c, urmare a acumulrii de ADNmt mutant i a segregrii replicative, n fenotipul unui $olnav se pot nregistra variaii importante, merg"nd de la nrutirea dramatic a manifestrilor clinice p"n la completa conversie a afeciunii :n exemplu l constituie sindromul Pearson /produs de deleii ale ADNmt din celulele sanguine3, caracterizat prin anemie sidero$lastic i insuficien pancreatic exocrin. Eolnavii care supravieuiesc p"n n a doua decad a vieii dezvolt adesea sindromul Fearns& !aGre /produs de acumularea de deleii ale ADNmt n muc)i i alte esuturi3, n ale crui simptome nu se includ anemia i deficitul enzimelor pancreatice. Principalele tipuri de $oli mitocondriale, mutaiile ADNmt care le determin i codul .(%( la care pot fi o$inute informaii comlete i actualizate sunt prezentate n ta$elul ;.

#a$elul ; Eoli cauzate de defecte ale funciei mitocondriale i de mutaii ale ADNmt. Eoala (utaii .ftalmoplegia extern cronic progresiv /+PE.3 Deleii !indromul Fearns&!aGre /F!!3 Deleii (iopatii oculare 5earan ri +ardiomiopatii ereditare (iopatie, encefalomiopatie, acidoz lactic, accidente A5Nt leuAIJB =;8= cere$rale vasculare /mGopat)G, encep)alomipat)G, lactic acidosis, stroHe - (E4A!3 Epilepsia mioclonic cu fi$re musculare roii n lam$ouri A5Nt lGsAIJB 1=88 /(Goclonic epilepsG and ragged red fi$ers - (E5663 Eoala 4eig) i sl$iciunea muscular neurogenic, ataxia i #IJB 100=, #J+ 100= retinita pigmentar /neurogenic muscle KeaHness, ataxia and retinitis pigmentosa & NA5P3 Neuropatia optic ereditar 4e$er /4e$er )ereditarG optic (ultiple neuropt)G - 4D.N3 .totoxicitatea aminoglicozidic /aminoglGcoside AIJB 7<<< ototoxicitG3 Encefalomiopatia progresiv Eoala Alz)eimer cu de$ut tardiv, $oala ParHinson A5Nt gluAIJB 8==L

!e accept c exist cinci categorii ma ore de afeciuni, definite molecular, determinate de mutaii ale ADNmt /citopatii mitocondriale3. Oftalmoplegia extern cronic progresi /cpeo3 i sindromul Fearns&!aGre /F!!3. & +PE. se caracterizeaz prin ptoz palpe$ral, oftalmoplegie, tul$urri miopatice la nivelul musculaturii mem$relor. 4a examenul )istologic al fragmentelor de muc)i sc)eletici recoltate prin $iopsie se o$serv aspectul care definete cele mai multe dintre encefalomiopatiile mitocondriale@ fi$re musculare roii n lam$ouri. Acest aspect este creat prin proliferarea anormal a mitocondriilor, consecutiv defectelor $ioc)imice severe ale fosforilrii oxidative. !in"rom#l $earns%!a&re /F!!3 se caracterizeaz prin )ipostatur, nt"rzierea dezvoltrii pu$ertare, oftalmoplegie extern, ptoz palpe$ral, semne de )iperparatiroidie, surditate, ataxie cere$eloas, $locuri cardiace i retinopatie pigmentar atipic. Afeciunea de$uteaz naintea v"rstei de ;> de ani. Am$ele sindroame sunt consecina unei deleii unice mari /1 H$3 a ADNmt. !in"rom#l MELA! /(itoc)ondrial mGopat)G, Encep)alopat)G, 4actic acidosis, !troHe&liHe episodes3 este o $oal multisistemic n care, pe l"ng semnele cardinale desemnate prin acronimul (E4A! exist o ampl varietate de anomalii clinice, dintre care cele mai frecvente sunt@ )ipostatura, surditatea, convulsiile generalizate, episoadele de vom. +onsecutiv ictusurilor cere$rale se instaleaz )emiplegii, )emianopsii, amauroz central. 4a peste 1>2 dintre pacieni se detecteaz mutaii punctiforme n gena A5Nt 4eu/::53 n poziiile nucletidice =;8= i =;M7. Epilepsia mioclonic c# fi're m#sc#lare ro(ii )n lam'o#ri /mGoclonic epilepsG Kit) ragged&red fi$ers - (E5663 se definete prin mioclonie intens, ataxie progresiv, sl$iciune muscular, crize de convulsii generalizate, surditate, demen, acidoz lactic, ictusuri cere$rale recurente. (utaia care determin (E566 este o tranziie AIB la situsurile 1=88 sau 1=<L din gena pentru A5Nt4N!. Ne#ropatie* ataxie* retinit pigmentar /NA5P3O'oala Leig+ cu transmitere matern. !indromul NA5P include@ nt"rziere a creterii postnatale, detres respiratorie cu

crize de apnee, sl$iciune la nivelul muc)ilor proximali ai mem$relor, neuropatii senzoriale cu amauroz i surditate, ataxie, convulsii, retinit pigmentar. 4a $olnavii cu NA5P se detecteaz o mutaie punctiform n poziia 100= a genei care codific su$unitatea L a A#P sintetazei. +"nd proporia celulelor mutante este foarte nalt, se constituie fenotipul encefalopatiei necrozante su$acute, cunoscut su$ numele de $oala 4eig) Ne#ropatia optic ere"itar Le'er /4D.N3. Eoala de$uteaz dramatic prin semne de nevrit retro$ul$ar acut sau su$acut nedureroas. Pierderea vederii se instaleaz $rusc i este, n <>2 din cazuri, unilateral, afectarea celuilalt oc)i este ns o$ligatorie i se produce n interval de aproximativ o lun. M>2 dintre $olnavi sunt $r$ai, ceea ce a condus la ipoteza, neconfirmat ns, a interveniei adiionale a unei gene de pe cromozomul P. '"rsta medie de de$ut este de ;= de ani. Aspectul de papilit este prezent de la nceputul $olii, atrofia optic nu reprezint, totui, niciodat un semn precoce, dezvoltarea ei este progresiv i devine complet doar la dou treimi dintre $olnavi. *n unele cazuri, ta$loul clinic include, pe l"ng manifestrile oftalmologice, diferite alte tul$urri@ neuropatii periferice, distonie, mielopatie demielinizant, defecte de conducere cardiac. (utaiile =8L> i 77MM1 /de la nivelul genelor ND7 i ND8 imprim un caracter de gravitate, n timp ce forma indus de mutaia 78818 este mai $l"nd, compati$il c)iar cu redo$"ndirea parial a vederii. #a$elul = prezint sinoptic trsturile clinice ale celor mai frecvente sindroame clinice produse de mutaiile ADNmt iar n ta$elul 8 simptomele prezente n diferite citopatii mitocondriale sunt grupate pe organe i sisteme. #a$elul =. Eoli mitocondriale mai frecvent nt"lnite. Eoala #rsturi clinice #rsturi adiionale .ftalmoplegia extern .ftalmoplegie extern (iopatie proximal moderat cronic progresiv Ptoz $ilateral !indromul Fearns !aGre De$ut prin oftalmoplegie extern !urditate $ilateral progresiv naintea v"rstei de ;> (iopatie de ani Disfagie 5etinit pigmentar Dia$et Ataxie cere$eloas, $locuri za)arat,Dipoparatiroidism cardiace Demen (E4A! %ctusuri cere$rale naintea v"rstei Dia$et za)arat de 8> de ani +ardiomiopatie /iniial +onvulsii iOsau demen )ipertrofic, ulterior 6i$re musculare roii n lam$ouri dilatativ3 iOsau acidoz lactic !urditate $ilateral 5etinopatie pigmentar Ataxie cere$eloas Epilepsie mioclonic (ioclonii Demen cu fi$re musculare roii +onvulsii Atrofie optic, surditate n lam$ouri Ataxie cere$eloas $ilateral /(E563 (iopatie Neuropatie periferic, spasticitate 4ipoame multiple Neuropatia optic ereditar Pierderea $ilateral a vederii, Distonie 4e$er /4D.N3 nevrit retro$ul$ar nedureroas !indroame de preexcitare 5aportul $r$ai @ femei - 8@7 cardiac '"rsta medie de de$ut - ;= de ani Neuropatie, ataxie i Neuropatie periferc cu de$ut n +alcificri ale ganglionilor retinit pigmentar adolescen sau la adult $azali /NA5P3 Ataxie Electroretinogram anormal

!indromul 4eig)

(iopatia infantil i acidoza lactic /forme letale i neletale3 !indromul Pearson

5etinopatie pigmentar Neuropatie sesorimotorie Encefalopatie su$acut +alcificri n ganglionii $azali !emne ale afectrii cere$elului i %storic matern de afeciuni ale trunc)iului cere$ral neurologice sau de sindrom 4eig) Dipotonie n primul an de via 6orma fatal poate fi asociat Dificulti n alimentaie i cu cardiomiopatie iOsau cu respiraie sindrom #oni&De$re&6anconi Anemie sidero$lastic Defecte tu$ulare renale Pancitopenie %nsuficien pancreatic exocrin

#a$elul 8. #ul$urri asociate cu citopatiile mitocondriale. .rganOsistem !imptome asociate +reier *nt"rzieri ale dezvoltrii, retard mental, tul$urri neuropsi)ice, demen, crize comiiale, mioclonii, tul$urri ale motilitii /distonie, disHinezie, coree3, paralizie cere$ral atipic, migrene, ictusuri cere$rale. Nervi !l$iciune, durere neuropatic, a$sena reflexelor, pro$leme gastrointestinale /reflux gastroesofagian, golire gastric nt"rziat, constipaie, pseudo&o$strucie3, lipotimii, transpiraie a$sent sau excesiv cu afectare a termoreglrii. (uc)i sc)eletici, !l$iciune, )ipotonie, crampe, dureri musculare (uc)i oculari Ptoz, stra$ism do$"ndit, oftalmoplegie extrinseci 5inic)i #u$ulopatie proximal cu pierderi de proteine, magneziu, fosfor, calciu etc %nim Defecte de conducere /$locuri3, cardiomiopatii 6icat Dipoglicemie, insuficien )epatic Analizator vizual 5educerea sau pierderea vederii /retinit pigmentar, atrofie optic3 Analizato auditiv Deficit al auzului, surditate Pancreas Dia$et i insuficiena secreiei exocrine !istemice 6alimentul creterii, )ipostatur, o$oseal, pro$leme respiratorii

:nele dintre trsturile fenotipice imprimate de diferitele mutaii ale ADNmt sunt comune mai multor entiti nosologice incluse n categoria citopatiilor mitocondriale. !uprapunerea semnelor clinice este redat n ta$elul <, iar n ta$elul L sunt prezentate manifestrile sistemice ale citopatiilor mitocondriale.

#a$elul <. #rsturi clinice asociate cu citopatiile mitocondriale. #rstura clinic +PE.O (E4A! (E556 F!! .ftalmoplegie Q R S Degenerarea retinian Q S S 5etinita pigmentar S S S

NA5P S S Q

4D.N S S S

Atrofia optic Elocuri cardiace (ioclonii Ataxia !l$iciune +rize comiiale Demen Dipostatur Episoade de vom +ecitate cortical Demiparez, )emianopsie !urditate sensorineural Neuropatie Acidoz lactic 6i$re musculare roii n lam$ouri %storic familial pozitiv

S Q S Q Q S Q Q S S S Q R Q Q S

S S S S Q Q Q Q Q Q Q Q R Q Q Q

S S Q Q Q Q Q Q S S S S R Q Q Q

S S Q Q Q Q Q S S S S Q Q R S Q

Q S S S S S S S S S S S S S S Q

#a$elul L. (anifestri sistemice ale $olilor mitocondriale. (eta$olice Acidoza lactic, coma cetoacidozic Depatice Depatopatie, insuficien funcional +ardiace +ardiomiopatie, defecte de conducere 5enale #u$ulopatii proximale i distale, glomerulopatii %ntestinale Diaree, atrofie viloas, sindrom pseudoo$structiv Pancreatice Disfuncie a acinilor Endocrine Dipertiroidie, dia$et za)arat, )ipostatur .ftalmologice +ataract, retinopatie pigmentar

+el mai adesea, manifestrile clinice iniiale ale citopatiilor mitocondriale exprim suferina unui singur organ. Nici una dintre manifestrile de de$ut nu este de natur s orienteze asupra implicrii n patogenia $olii a unui defect mitocondrial. Asocierea ulterioar a semnelor afectrii altor aparate i sisteme impune efectuarea unor examene paraclinice ale cror rezultate pot documenta posi$ila disfuncie mitocondrial /ta$elul M3. #estul decisiv de diagnostic l constituie ns analiza molecular a ADNmt. #a$elul M. 5ezultate posi$ile ale explorrilor paraclinice n citopatiile mitocondriale. Distologie 6i$re musculare roii n lam$ouri Distoc)imie Proliferarea excesiv a mitocondriilor i deficienele citocrom c oxidazei (icroscopie Anomalii morfologice ale mitocondriilor electronic Electromiografie Poteniale miopatice Audiogram !urditate senzorial Electrocardiogram Defecte de conducere Eioc)imie 5aport molar lactatOpiruvat crescut /T;>3 n ser i n 4+5, )iperlactatemie U = mmOl sau U 7,< mmOl n 4+5 , acidoz meta$olic /$icar$onai plasmatici crescui3.

Neuroimagistic /#+,5(N3 Analiza ADNn i ADNmt

Polarografia permite sta$ilirea consumului de oxigen. Diperglicemia indic prezena unui dia$et asociat. +alcificri n ganglionii $azali, atrofie difuz iOsau focal a cortexului i cere$elului (utaii, deleii, duplicaii n celulele sanguine sau din fi$rele muc)ilor sc)eletici. Pot fi evideniate mutaii n genomul nuclear sau n cel mitocondrial

;. #5A#A(EN#:4 E.4%4.5 (%#.+.ND5%A4E #ratamentele convenionale conduc uneori la ameliorarea temporar a simptomatologiei clinice a $olilor mitocondriale i la restaurarea, cel puin parial, a parametrilor $ioc)imici alterai. Aceste tratamente comport administrarea agenilor antioxidani /ascor$at, alfa&tocoferol, menadion, glutation, acid lipoic, seleniu3, a unor cofactori ai enzimelor lanului respirator /ri$oflavina3, a vitaminelor complexului E /tiamin, niacin, EL, E7;, $iotin, acid pantotenic3, a 4&carnitinei /o su$stan alimentar necesar transportului acizilor grai prin mem$ranele mitocondriale3 i a coenzimei V7>, aceasta din urm particip"nd la generarea de energie i acion"nd ca antioxidant cu rol de protecie a celulelor mpotriva in uriei produse de speciile reactive de oxigen. #re$uie specificat c tratamentele convenionale nu reuesc s sta$ilizeze $oala i, cu at"t mai puin, s o vindece. 4a unii pacieni severitatea simptomelor poate s decline iar progresia $olii poate fi nt"rziat. !e impune ns ca tratamentul s fie condus de un specialist n $oli meta$olice deoarece administrarea fr prescripie a medicaiei se poate solda cu nt"rzierea sau eecul sta$ilirii unui diagnostic corect. Ela$orarea unor strategii alternative reprezint o cerin o$ligatorie, aceste strategii nu pot fi altele dec"t cele ale terapiei genice. P"n n prezent au fost imaginate trei a$ordri diferite care vizeaz suplinirea sau corectarea prin metodele geneticii moleculare a defectelor structurale ale ADNmt@ nlocuirea genelor mitocondriale mutante cu gene normale inserate n genomul nuclear. Procedura presupune convertirea prin mutagenez diri at a codonilor eretici n cuvinte ale codului universal. Bena este apoi amplasat ntr&un vector i transfectat prin intermediul acestuia n genomul nuclear. Produsul proteic sintetizat n citoplas este cuplat cu o secven de sortare care l introduce n mitocondrii unde va funciona compens"nd deficitul creat de mutaia patologic, introducerea n mitocondrii a unei proteine cuplate cu secvena de ADNmt care codific lanuri polipeptidice sau molecule de A5Nt i A5Nr. %mportul n mitocondrii este asigurat prin ataarea semnalului de sortare. Prin aceast te)nic s&a reuit transferul n mitocondrii al unor segmente de ADN cu lungimi cuprinse ntre >,= i = F$, eliminarea moleculelor ADNmt mutante prin $locarea specific a replicrii@ se utilizeaz oligonucleotide antisens care, fix"ndu&se pe secvena alterat, fac imposi$il replicarea moleculei n care se afl mutaia, fr a afecta replicarea moleculelor normale. *n la$oratoarele de cercetare aceste strategii i&au dovedit eficiena. %ntroducerea lor n practic este ns condiionat de rezolvarea multiplelor pro$leme de ordin te)nic cu care se confrunt, n general, terapia genic. +. (:#A9%%4E ADNmt W% !ENE!+EN9A

+apacitatea generrii A#P prin procesele fosforilrii oxidative declin n paralel cu naintarea n v"rst. Deficitul de A#P este evident n toate esuturile senescente alctuite din celule difereniate terminal /postmitotice3. Declinul produciei de A#P se coreleaz at"t cu instalarea i progresiunea semnelor senescenei, c"t i cu acumularea de alterri mutaionale ale ADNmt. *n celulele sistemului nervos central ale indivizilor v"rstnici a fost decelat o deleie de < F$. +ea mai nalt proporie de molecule ADNmt deletate se nregistreaaz n su$stana neagr, nucleul caudat i putamen. 4a v"rsta de 1< de ani aceast mutaie este detectat n peste 7>2 din neuronii nucleilor $azali, ea afecteaz i alte zone ale encefalului, dar lipsete din neuronii cere$elului. *n fi$rele muc)ilor sc)eletici, pe l"ng deleia de < F$, la persoanele v"rstnice se deceleaz i o deleie de = F$. Dup v"rsta de =< de ani, n fi$rele miocardice ncep s se acumuleze mutaii reprezentate cu precdere de deleia unui segment cu o lungime de =,L F$. %ncriminate n producerea mutaiilor ADNmt sunt speciile reactive de oxigen. Nivelul crescut al 1&)idroxiguanozinei n ADNmt este consecina stresului oxidativ la care este expus permanent genomul mitocondriilor. Proporia de 7>>&=>> ori mai nalt a moleculelor cu deleii n ganglionii $azali ai $tr"nilor se explic prin faptul c aceste formaiuni sunt foarte $ogate n fi$re dopaminergice, dezaminarea oxidativ a dopaminei de ctre monoaminooxidaz produce o mare cantitate de radicali li$eri. *n $oala coronarian, alternana isc)emie&reperfuzie stimuleaz producerea speciilor reactive de oxigen. Prin intermediul mutaiilor pe care le determin, radicalii li$eri se constituie n cauza ma or a deteriorrii progresive a mecanismelor mitocondriale implicate n meta$olismul energetic. Acumularea n exces a mutaiilor mitocondriale i dezec)ili$rul su$secvent ntre necesarul de energie al celulelor i posi$ilitatea asigurrii acestuia se afl la originea $olilor degenerative ale v"rstei a treia. D. (:#A9%%4E ADNmt *N E.4%4E DEBENE5A#%'E *n neuronii dopaminergici din regiunea nigrostriat i din muc)ii sc)eletici ai pacienilor cu $oala ParHinson au fost identificate deficiene ale complexului % i leziuni oxidative, prezente i n ci$rizii realizai din celulele patologice. +i$rizii sunt celule )imerice, formate prin fuzionare. Nucleii acestor celule provin de la indivizi aparent sntoi, iar citoplasma - de la $olnavi cu afeciuni mitocondriale. 5aportul ADNmt mutantOADNmt normal este, n medie, de 7> ori mai nalt la $olnavi comparativ cu martorii sntoi. 5spunztoare de pertur$area meta$olismului energetic este considerat a fi deleia de < F$ a ADNmt, evidenia$il mai ales n neuronii nucleilor $azali. !cleroza lateral amiotrofic este consecina degenerrii motoneuronilor somatici din trunc)iul cere$ral i mduva spinrii. Aproximativ 7>2 dintre $olnavi sunt purttori ai unor mutaii autosomal dominante cu penetran nalt, exprimate dup v"rsta de L> de ani. (utaiile intereseaz gena nuclear codificatoare a uneia dintre formele superoxid dismutazei. *n lipsa !.D, anionul superoxid rm"ne activ perioade mai lungi de timp i i exercit efectul toxic asupra ADNmt, provoc"ndu&i leziuni ce se vor traduce prin deficit energetic. *n $oala Alz)eimer mutaiile ADNmt sunt detecta$ile n neuronii cortexului cere$ral n care se nregistreaz i reduceri importante ale activitii piruvat de)idrogenazei i a complexului %. Aceste o$servaii certific participarea la patogenia $olii a pertur$rii mecanismelor mitocondriale ale generrii de energie. :n alt esut ale crui funcii sunt frecvent alterate ca urmare a acumulrii defectelor mitocondriale este miocardul. *n fi$rele musculare cardiace ale $olnavilor cu cardiomiopatie dilatativ analizele moleculare relev prezena moleculelor ADNmt cu deleii de dimensiuni variate. (a oritatea cazurilor de cardiomiopatie dilatativ sunt familiale. !&a sugerat c de producerea deleiilor multiple ale ADNmt se face rspunztoare mutaia unei gene nucleare cu rol n meninerea integritii genomului mitocondrial.

Dia$etul za)arat insulino&independent /DX%%3 se dezvolt la v"rste avansate i manifest trsturile unei $oli degenerative. 4a unii dintre $olnavii cu DX%% au fost detectate mutaii ale ADNmt n celulele insulelor 4anger)ans i n fi$rele musculare sc)eletice. !&a demonstrat c agenii dia$etogeni - interleuHina , interferonul , factorul de necroz tumoral tip alfa, aloxanul, streptozotocina - acioneaz asupra mitocondriilor din celulele insulare, stimul"nd producerea speciilor reactive de oxigen sau determin"nd alc)ilarea ADN. 5upturile induse prin aceste mecanisme n moleculele ADNmt antreneaz moartea celulelor $eta, urmat de instalarea insuficienei de insulin. 4a $olnavii cu sindrom Fearns&!aGre i la cei cu oftalmoplegie extern cronic progresiv incidena dia$etului za)arat este de c"teva ori mai nalt dec"t n populaia general, iar sindromul (E4A! se asociaz uneori cu DX%%. 5ezult, aadar, c celulele insulare, mari consumatoare de energie, se situeaz printre elementele cele mai afectate de prezena mutaiilor constitutive sau do$"ndite ale ADNmt. E. (:#A9%%4E (%#.+.ND5%A4E W% #:(.5%BENEXA Exist un consens n a se considera c ADNmt este implicat n tumorigenez datorit at"t vulnera$ilitii sale la stresul oxidativ, c"t i muta$ilitii nalte pe care o manifest. !peciilor reactive de oxigen li se atri$uie roluri n iniierea i n promovarea cancerului, precum i n reducerea produciei de A#P mitocondrial. A$eraii mitocondriale au fost notate n ma oritatea tumorilor maligne /cancere de vezic urinar, s"n, colon, rinic)i, ficat, plm"n, stomac, ale capului i g"tului, limfoame i leucemii3. (utaiile ADNmt detectate n cancere sunt similare celor rspunztoare de producerea $olilor mitocondriale, 5ecent s&a raportat prezena a 7; mutaii somatice )omoplasmice n apte din zece linii celulare sta$ilite din tumori colorectale. De altfel, n cele mai multe cancere mutaiile sunt )omoplasmice, ceea ce sugereaz c fixarea anumitor alterri ale ADNmt poate dota celulele maligne cu avanta selectiv. +reterea cantitii de transcripte ale ADNmt, precum i creterea expresiei su$unitilor codificate de ADNmt din alctuirea complexelor 45 sunt interpretate ca reflect"nd rspunsul mitocondrilor la cerinele nalte de energie ale celulelor canceroase. Este cunoscut c celulele maligne au, de regul, o capacitate considera$il mai mare dec"t cea a corespondentelor lor normale de a realiza glicoliza aero$, fapt ce ustific aseriunea c o importan crucial n procesul tumorigenezei ar avea&o existena unei forme de interaciune mitocondrie&celul, nc neprecizat.