- referat BIOCHIMIE -

Introducere
Aminoacizii sunt uniti constituente ale proteinelor. Dintre toi aminoacizii existeni n natur, o clas special o constituie cea a -aminoacizilor, ntlnii i sub titulatura de aminoacizi naturali. n mod curent, aminoacizii sunt prescurtai printr-un simbol din trei litere, dar au !ost adoptate i simboluri dintr-o sin"ur liter pentru a !acilita compararea sec#enelor de aminoacizi ale proteinelor omoloa"e. $tabel %& Tabel 1. Simbolurile aminoacizilor
Nr. crt. 1 2 3 4 5 6 7 ! " 1$ 11 12 13 14 15 16 17 1! 1" 2$ 21 22 Aminoacid Alanin Arginin Asparagin Acid aspartic Cistein Glutamin Acid glutamic Glicin #istidin %&'leucin (eucin (i&in *eti'nin +enilalanin ,r'lin .erin /re'nin /ript'0an /ir'&in 3alin 4Asn 5i6sau Asp 4Gln 5i6sau Glu Simbol trei litere Ala Arg Asn Asp Cys Gln Glu Gly #is %le (eu (ys *et ,-e ,r' .er /-r /rp /yr 3al As7 Gl7 cu Simbol cu o liter A R N D C Q G # % ( ) * + , . / 1 2 3 8 9

'-au propus numeroase moduri de clasi!icare a aminoacizilor bazate pe particularitile structurale ale radicalilor -aminoacizilor. (ea mai semni!icati# din acest punct de #edere este clasi!icarea pe baza polaritii radicalilor ). Ast!el ntlnim patru clase principale de -aminoacizi* 1) Aminoacizi cu radicali nepolari (hidrofobi) (tabelul 2)

n tabelul + se prezint !ormulele structurale i con!ormaiile spaiale a opt aminoacizi cu radicali nepolari, mpreun cu simbolurile lor. Aceast !amilie include cinci aminoacizi cu radicali ) ali!atici $alanina, leucina, izoleucina, #alina i prolina&, doi amino-acizi cu ciclu aromatic $!enilalanina i tripto!anul& i un aminoacid cu sul! $metionina&. Aminoacizii din aceast clas sunt mai puin solubili n ap dect aminoacizii cu radicali ) polari. (omponentul cel mai slab ,idro!ob al acestei clase este alanina, care este ast!el aproape de "rania dintre aminoacizii nepolari i cei cu radicali polari nencrcai. -rolina di!er de toi ceilali aminoacizi standard, !iind de !apt un -iminoacid. poate !i pri#it i ca un -aminoacid n care radicalul ) este un substituent n "ruparea amino. 2) Aminoacizi cu radicali polari nencrcai (tabelul ) Aceti aminoacizi sunt relati# mai solubili n ap dect cei cu radicali ) nepolari. )adicalii lor conin "rupri !uncionale polare neutre $nencrcate& care pot !orma le"turi de ,idro"en cu apa. -olaritatea serinei, treoninei i tirozinei. este datorat "ruprilor lor ,idroxil, cea a aspara"inei i "lutaminei "ruprilor amid i cea a cisteinei "ruprii ei sul!,idril $/'0&. 1licina, aminoacidul a!lat la limita demarcaiei acestei "rupe, este clasi!icat uneori ca un aminoacid nepolar, dar radicalul ei, un sin"ur atom de ,idro"en, este prea mic ca s poat in!luena "radul ridicat de polaritate al "ruprilor a-amino i -carboxil. Aspara"ina i "lutamina sunt amidele acidului aspartic i acidului "lutamic. ntruct aceti aminoacizi sunt uor ,idrolizai de acizi sau baze la acid aspartic, respecti# "lutamic, simbolurile !olosite pentru a desemna aceste perec,i de aminoacizi nrudii, cnd cantitile de amid !ormat nu sunt cunoscute, sunt Asx i 1lx. (isteina i tirozina au cei mai polari substitueni ai acestei clase de aminoacizi, i anume "ruprile tiol i, respecti#, ,idroxilul !enolic. Aceste "rupri tind s piard protoni prin ionizare, mult mai rapid dect radicalii ) ai altor aminoacizi din aceast clas, dei ei sunt doar slab ionizai la pH 2,3. (isteina se ntlnete deseori n protein n !orma sa oxidat cistina, n care "ruprile tiol din dou molecule de cistein au !ost oxidate la o "rupare disul!uric, prin care se !ormeaz o le"tur co#alent ntre ele. 'tructura cisteinei este dat n tabelul 4. 4

) Aminoacizi cu radicali ncrcai pozitiv (bazici) (tabelul !) 5oi aminoacizii bazici n care radicalii ) prezint sarcini net poziti#e la pH 2,3 au ase atomi de carbon. Aceast clas de aminoacizi se compune din* lizin, care prezint o "rupare amino ncrcat poziti# n poziia 6 din lanul su ali!atic. ar"inin, care prezint "ruparea "uanidin ncrcat poziti# i ,istidin, care conine "ruparea imidazol slab bazic. -rin proprietile sale, ,istidina este situat la limita de demarcaie a acestei clase de aminoacizi. 7a p0 8,3 aproximati# 93: din moleculele de ,istidin posed un radical ) protonat, ncrcat poziti#, dar la pH %,3 mai puin de %3: din molecule au sarcin poziti#. 0istidina este sin"urul aminoacid al crui radical ) are p;< aproape de 2,3. !) Aminoacizi cu radicali ncrcai negativ (acizi) (tabelul ") (ei doi membri ai acestei clase sunt acidul aspartic i acidul "lutamic, !iecare cu o a doua "rup carboxil complet ionizat i ast!el ncrcat ne"ati# ntre pH 8,3 i pH 2,3.

Tabel 2. #-aminoacizi cu radical $ ne%olar

&enumire #-aminoacid

Simboluri
(la (

Structur'
OH CH )H2

(lanin'

OH

CH CH )H2

*alin'

*al *
O

OH

+eucin'

+eu +
O )H2 OH CH CH

CH

Izoleucin'

Ile I
O )H2 OH

CH

,rolin'

,ro ,
O

H )

OH

-enilalanin'

,.e -

O )H2 OH

Tri%tofan

Tr% /

O )H2 ) H

OH

Metionin'

Met M
O )H2

CH

Tabel . #-aminoacizi cu radical $ ne0nc'rcat

&enumire #-aminoacid

Simboluri
1l2 1

Structur'
OH O )H2

1licin'

OH

Serin'

Ser S
O )H2 OH CH OH )H2 OH OH

Treonin'

T.r T
O

Ci3tein'

C23 C
O )H2 OH SH

Tirozin'

T2r 4

O )H2 OH OH

(3%ara5in'

(3n )
O )H2 OH O

)H2

)H2 O )H2

1lutamin'

1ln 6
O

Tabel !. #-aminoacizi bazici (0nc'rca7i %oziti8 la pH 9:;)

&enumire #-aminoacid

Simboluri
OH

Structur'
)H2 )H2

+izin'

+23 <
O

OH

)H2 )H )H2 OH )H

(r5inin'

(r5 $
O

Hi3tidin'

Hi3 H

O )H2

H ) )

Tabel ". #-aminoacizi acizi (0nc'rca7i ne5ati8 la pH 9:;)

&enumire #-aminoacid

Simboluri
(3% &
O

Structur'
OH OH )H2 OH O OH O )H2

(cid a3%artic

(cid 5lutamic

1lu E
O

,ro%riet'7ile acido-bazice ale aminoacizilor

(unoaterea proprietilor acido-bazice ale aminoacizilor este !oarte important pentru nele"erea i analizarea proprietilor proteinelor. >ai mult, o mare parte din tiina separrii, identi!icrii i dozrii di!eriilor aminoacizi i determinrii sec#enei lor n proteine este bazat pe comportarea lor acido-bazic.

n primul rnd, s considerm speciile ionice comune ale aminoacizilor. n stare cristalin, aminoacizii au puncte de topire sau de descompunere ridicate, de obicei peste +33?(. @i sunt mult mai solubili n ap dect n sol#eni nepolari. Aceste proprieti sunt exact cele pe care ne ateptm s le ntlnim, considernd c reeaua molecular a aminoacidului n stare cristalin este stabilizat prin !ore electrostatice de atracie ntre "rupri cu sarcini opuse ca n cazul reelelor cristaline ale srurilor cu puncte de topire ridicate, ca de exemplu clorura de sodiu. Dac aminoacizii ar cristaliza ntr-o !orm neionic, ei ar !i stabilizai de !orele #an der Aaals, mult mai slabe, i ar a#ea puncte de topire Boase. Aceste consideraii, ct i multe alte do#ezi au dus la concluzia c aminoacizii se "sesc n soluii apoase neutre i cristalizeaz din aceste soluii mai de"rab ca ioni dipolari sau am!ioni, dect ca molecule nedisociate. @xistena aminoacizilor ca ioni dipolari n soluii apoase neutre este indicat i de constantele dielectrice ridicate i momentele de dipol mari, care re!lect prezena att a sarcinilor ne"ati#e cit i a celor poziti#e n aceeai molecul. (nd un aminoacid am!ionic cristalin, de exemplu alanina, este dizol#at n ap, el poate aciona att ca un acid $donor de proton& ct i ca o baz $acceptor de proton&* - ca un acid* H )=CH(CH )COO> ? H= = H2)CH(CH )COO> - ca o baz* H= = H )=CH(CH )COO> ? H )=CH(CH )COOH 'ubstanele cu ast!el de proprieti sunt amfotere $n "reac amphi nseamn ambiiC& i sunt numite amfolii, !orma prescurtat de la electrolii am!oteriC. (omportarea acido-bazic a am!oliilor este cel mai simplu !ormulat n termenii teoriei acido-bazice DrEnsted-7oFrG. Hn -aminoacid simplu monoaminomonocarboxilic ca alanina este considerat a !i un acid dibazic n !orm complet protonat, care poate dona doi protoni n timpul titrrii sale complete cu o baz. -i5. 1Des!urarea unei asemenea titrri cu IaJ0, care decur"e n dou trepte, Curba!i dereprezentat titrare a alaninei. poate n ecuaiile urmtoare, ce indic !iecare specie ionic $ A 5ru%area metil. implicat* H )=CH$COOH = HO> @ H )=CH$COO> = H2O H )=CH$COO> = HO> @ H )=CH$COO> = H2O

Li"ura prezint curba de titrare di!azic a alaninei, care poate !i comparat cu curbele de titrare ale acizilor slabi. Malorile pK' ale celor dou etape de ionizare ale alaninei sunt destul de distanate pentru a rezulta dou trepte net separate. Liecare treapt prezint un punct de ec,i#alen, unde modi!icarea pHului cnd se adau" cantiti crescute de 0JN este minim. Malorile pK' aparente pentru cele dou trepte de disociere pot. !i determinate din punctele de ec,i#alen ale !iecrei trepte. ele sunt pK1 O +,4= i pK2 O P,8P. 7a pH +,4=, punctul de ec,i#alen al primei trepte, donorul de protoni $04IQ(0)(JJ0& i acceptorul de protoni $04IQ(0)(JJN& se "sesc n concentraii ec,imolare. La pH P,8P, speciile $04IQ(0)(JJN& i $0+I(0)(JJN& se "sesc n concentraii ec,imolare. Liecare dintre cele dou trepte ale curbei pot !i bine aproximate matematic prin ecuaia 0enderson-0asselbac,. aceasta nseamn c se pot calcula raporturile speciilor ionice ale aminoacidului la orice pH, dac se cunosc #alorile pentru pK1 i p K 2. 7a pH 8,3+ exist un punct de in!lexiune ntre cele dou trepte ale curbei de titrare a alaninei. 7a acest pH, molecula nu prezint sarcin electric net i nu mi"reaz n cmp electric. Acesta este pH-ul izoelectric $simbolizat prin pHi) care reprezint media aritmetic a lui pK1 i p K 2, adic pHi O %R+ (pK1 Q p K 2). Aceste relaii sunt destul de exacte pentru maBoritatea scopurilor. 5otui, o cantitate mic din !orma nencrcat $04IQ(0)(JJ0& este prezent n ec,ilibru cu !orma. ncrcat.

5oi acizii monoaminomonocarboxilici prezint n esen aceeai comportare. Tabelul 9. *alorile pK %entru 5ru%'rile ionizate ale unor aminoacizi la 2"BC

(minoacid
1licin' (lanin' +eucin' Serin' Treonin' 1lutamin' (cid a3%artic (cid 5lutamic Hi3tidin' Ci3tein' Tirozin' +izin' (r5inin'

pK1 #-COOH
2: ! 2: ! 2: 9 2:21 2:9 2:1D 2:;C 2:1C 1:E2 1:D1 2:2; 2:1E 2:1D

pK2 #-)H
C:9; C:9C C:9; C:1" 1;:! C:1 C:E2 C:9D C:1D E: C:11 E:C" C:;!
=

pK radical $

:E9 !:2" 9:;; 1;:DE 1;:;D 1;:" 12:!E

n tabelul 8 sunt date #alorile p;< pentru "ruprile ionizate ale unor aminoacizi. Din aceste date rezult urmtoarele obser#aii "enerale* %. 1ruparea carboxil din poziia a acizilor monoaminomonocarboxilici este un acid mai puternic dect "ruparea carboxil a acizilor ali!atici corespunztori, ca de pild acidul acetic $p;< O =,28&. Aciditatea crescut a acestei "rupri se datorete "ruprii amoniu din poziia i sarcinii sale poziti#e, care produce un puternic e!ect de cmp, crescnd ast!el tendina ,idro"enului carboxilic de a disocia ca proton. +. 1ruparea -amino a acizilor monoaminomonocarboxilici este un acid mai tare $sau o baz mai slab& dect "ruparea amino a aminelor ali!atice corespunztoare. 4. 5oi aminoacizii monoaminomonocarboxilici cu radicali ) nencrcai au #alori pK1 i #alori pK2S aproape identice. =. Iici unul dintre aminoacizii monoaminomonocarboxilici nu are capacitate de tamponare semni!icati# n Burul p0-ului !iziolo"ic, ntre pH 8,3 i pH K,3. @i prezint ntr-ade#r capacitate de tamponare la pH-uri apropiate de #alorile pK', i anume ntre pH %,4 / 4,4 i K,8 / %3,8. 'in"urul aminoacid cu putere de tamponare semni!icati# ntre pH 8 i K este ,istidina. 9. 1ruparea T-carboxil a acidului aspartic i "ruparea U-carboxil a acidului "lutamic, dei complet ionizate la pH 2,3, au #alori pK' considerabil mai mari dect #alorile pK' %3

ale "ruprilor -carboxil i aproape e"ale cu cele ale acizilor carboxilici simpli, de exemplu acidul acetic. 8. 1ruparea tiol sau sul!,idril $/'0& a cisternei i "ruparea p-,idroxil a tirozinei sunt doar !oarte slab acide. 7a pH 2,3, cea dinti este ionizat n proporie de aproximati# K:, iar cea de-a doua n proporie de 3,3%:. 2. 1ruparea 6-amino a lizinei i "ruparea "uanidin a ar"ininei sunt puternic bazice. aceste "rupri cedeaz protoni numai la #alori !oarte ridicate ale pH-ului. 7a pH 2,3, aceti aminoacizi prezint o sarcin net poziti#. (urbele de titrare ale aminoacizilor cu radicali ) ionizabili, de exemplu ,istidina, lizina, acidul "lutamic, snt mult mai complexe, ele !iind o combinaie ntre curba care corespunde disocierii radicalului ) i curbele corespunztoare "ruprilor amino i carboxil din poziia . Lormalde,ida, n exces, se combin uor cu "ruprile amino libere, neprotonate ale aminoacizilor, rezultnd deri#ai metilol. n aceast reacie, aminoacidul izoelectric pierde un proton de la "ruparea /QI04 a am!ionului* H )=CH$COOF ? H2)CH$COO> = H= H2)CH$COO> = 2HCHO @ (HOCH2)2)CH$COO> -rotonul ast!el eliberat poate !i titrat direct cu IaJ0 pn la pH K, punctul de #iraB al !enol!taleinei. 5itrarea aminoacizilor sau amestecurilor de aminoacizi n prezena unui exces de !ormalde,id $titrare cu !ormol& este o metod analitic util n urmrirea !ormrii aminoacizilor liberi n timpul ,idrolizei proteinelor de ctre enzimele proteolitice.

$eac7ii c.imice ale aminoacizilor

)eaciile caracteristice ale aminoacizilor sunt cele ale "ruprilor !uncionale, i anume* "ruprile carboxil, "ruprile -amino i "ruprile !uncionale prezente n lanurile laterale. (unoaterea acestor reacii este !olositoare n numeroase aspecte importante ale c,imiei proteinelor* %& identi!icarea i analiza aminoacizilor n ,idrolizatele proteice. +& identi!icarea sec#enei de aminoacizi n moleculele proteice. 4& identi!icarea resturilor de aminoacizi speci!ice proteinelor nati#e, care sunt eseniale pentru !uncia lor biolo"ic.

%%

=& modi!icarea c,imic a resturilor de aminoacizi din molecula proteic pentru a produce sc,imbri n acti#itatea lor biolo"ic sau n alte proprieti. 9& sinteza c,imic a polipeptidelor. eaciile gruprilor carbo!il 1ruprile carboxil ale aminoacizilor dau reacii binecunoscute conducnd la !ormarea de amide, esteri i ,alo"enuri acide. @steri!icarea aminoacizilor cu etanol sau alcool benzilic este deseori !olosit pentru proteBarea "ruprii carboxil a aminoacizilor n sinteza c,imic a peptidelor. J alt reacie a "ruprii carboxil !oarte important n studiul sec#enei aminoacizilor este reacia de reducere n mediu an,idru, cu un a"ent puternic reductor, boro,idrura de litiu, !ormndu-se alcoolul primar corespunztor*
COOH H2 ) $ H +iBH ! CH2 OH H 2) $ H

eaciile gruprilor amino 1ruparea -amino a aminoacizilor poate !i acilat prin tratare cu ,alo"enuri acide sau an,idride. aceast reacie este utilizat curent pentru a bloca sau proteBa "ruparea -amino n sinteza c,imic a peptidelor. Hn a"ent mult utilizat n acest scop este clorocarbonatul de benzil, care conduce la !ormarea deri#atului benziloxicarbonil al aminoacidului, numit i deri#at carbobenzoxi*
H $ )H2 COOH = O Cl O - HCl H $ COOH )H O O

(nd acilarea este realizat n condiii blnde, inte"ritatea stereoc,imic a atomului de carbon a se pstreaz. n condiii drastice, la cald, poate aprea racemizarea. J reacie a "ruprii -amino !oarte lar" !olosit, reacia cu nin,idrin, poate !i utilizat pentru dozarea unor cantiti !oarte mici de aminoacizi. -rin nclzire, un -aminoacid reacioneaz cu dou molecule de nin,idrin i rezult un produs intens colorat*

%+

HO O HO H $ )H2 COOH = O OH O - $CHO - CO2 O HO H O

OH O

O - 2H2 O O )

Aminoacizii i peptidele cu "rupri -amino libere dau cu nin,idrina o coloraie albastru-#iolet, n timp ce prolina i ,idroxiprolina, n care "ruparea -amino este substituit, !ormeaz deri#ai cu o culoare "alben caracteristic. 1ruprile -amino ale aminoacizilor reacioneaz re#ersibil cu alde,idele i !ormeaz compui numii baze 'c,i!!*
COOH H $ )H2 = $CHO = H 2O - H2 O COOH H $ ) CH$

'e pare c bazele 'c,i!! sunt compui intermediari ntr-un numr de reacii enzimatice care implic interacia enzimei cu "ruprile amino sau carboxil ale substratului. J alt reacie important a "ruprii amino este reacia cu cianatul, din care se !ormeaz deri#ai carbamil*
COOH H $ )H2 = C)O =H
=

COOH H $ )H O

)H2

Aceast reacie a !ost !olosit pentru a modi!ica proprietile ,emo"lobinei ' patolo"ice $ntlnit n anemia !alci!orm cu ,ematii n !orm de secer&, n sensul creterii asemnrii ei cu ,emo"lobina normal. n a!ar de aceste reacii ale "ruprii amino, multe altele sunt deosebit de utile n marcarea restului de aminoacid de la acel capt al lanului polipeptidic la care "ruparea amino este liber sau necombinat, i anume, captul amino-terminal. eaciile radicalilor Aminoacizii dau i reacii calitati#e de culoare, tipice pentru anumite !unciuni prezente n radicalii lor, de exemplu "ruparea tiol a cisteinei, ,idroxilul !enolic al %4

tirozinei i "ruparea "uanidin a ar"ininei. Dei aceste reacii de culoare sunt !olositoare uneori pentru colorarea spoturilor sau pentru identi!icri calitati#e, aminoacizii sunt identi!icai mai precis i msurai n concentraii !oarte mici cu aButorul metodelor cromato"ra!ice. 5otui, unele "rupri !uncionale din catenele laterale ale aminoacizilor Boac roluri importante n acti#itatea biolo"ic a proteinelor, printre ele numrndu-se "ruparea tiol sau sul!,idril a cisteinei. Aceast "rupare nalt reacti# este susceptibil de a !i oxidat la disul!ur de oxi"enul atmos!eric n prezena srurilor de !ier, sau de ali a"eni oxidani blnzi. -rodusul de oxidare este cistina*
COOH H )H2 SH = H HS COOH )H2 - H2 H COOH )H2 H S S COOH )H2

7e"tura disul!uric !ormeaz o punte co#alent ntre dou resturi de cistein. J alt reacie caracteristic i important a "ruprii tiol a cisteinei este reacia cu metale "rele ca 0"+Q i A"Q, care !ormeaz mercaptani*
COOH H )H2 SH = (5
=

COOH -H
=

)H2 S (5

1ruprile tiol ale resturilor cisteinei i cistinei din peptide i proteine pot !i msurate printr-o reacie cantitati#, cu reacti#ul @llman, n care se !ormeaz un produs care poate !i msurat colorimetric*

%=

COOH H )H2 = O 2 ) SH

COOH

COOH )O 2

S S

COOH H )H2 S S

COOH )O 2 = O2 )

COOH

SH

Aceste "rupri tiol ale resturilor speci!ice de cistein, n anumite molecule enzimatice, Boac un rol important n acti#itatea lor catalitic. modi!icarea unor asemenea "rupri tiol prin reacii ca cele descrise mai sus, deseori, inacti#eaz enzima. (istina, !orma oxidat a cisteinei Boac un rol special n structura proteic, ntruct "ruparea ei disul!uric ser#ete ca o punte de le"tur co#alent ntre dou lanuri polipeptidice sau ntre dou puncte ale aceluiai lan. -untea disul!uric poate !i des!cut prin aciunea a"enilor reductori, de exemplu mercaptoetanolul, care trans!orm cistina n dou molecule de cistein*
COOH )H2 H S S COOH )H2 = 2 HS OH SH 2H COOH )H2 = S S HO OH

(istina poate !i oxidat i de a"eni ca acidul per!ormic, rezultnd dou molecule de acid cisteic. Att "ruprile sul!,idril ct i cele disul!urice sunt distruse n soluii puternic alcaline, cu !ormarea unor produi de reacie.

Biblio5rafie
%. 7e,nin"er, A..7., Dioc,imie, @d. 5e,nic, Ducureti

%9

+. (. D. Ieniescu V 5ratat @lementar de (,imie Jr"anic, #ol. WW, @d. 5e,nic, Ducureti, %P9K 4. 7. Drs V (,imia (ompuilor Jr"anici $curs an WWW, sem. W&, cap. Aminoacizi =. M. Xunel V (,imia (ompuilor Jr"anici $curs an WWW, sem. WW&, cap. Aminoacizi

%8