Prepararea furajelor prin diferite procedee biotehnologice sau dirijarea proceselor fermentative ntr-o mas furajer se practic de foarte mult timp, poate chiar din perioada n care omul a devenit contient c trebuie s fac rezerve de hran i pentru animalele cu care s-a nconjurat. n acest prim capitol al crii se prezint metodele de preparare a furajelor care se bazeaz pe procedee biotehnologice respectiv pe activitatea unor microorganisme sau a unor metabolii rezultai din cultivarea acestora. La acest mod de preparare se supun n principal nutreurile din categoria silozurilor, concentratele i grosierele.
I .1. BI OTEHNOLOGI I N PREPARAREA SI LOZURI LOR
Nutreul nsilozat este un preparat furajer rezultat prin instituirea unei fermentaii anaerobe controlat ntr-o biomas vegetale format din furaje verzi sau produse secundare agricole. Intensitatea i natura proceselor fermentative care au ca efect formarea acizilor organici conservani (acid lactic, acid acetic) n cursul maturrii silozului depind de : natura furajului, de coninutul n ap i al glucidelor fermentescibile a plantelor, precum i de tehnologia aplicat. n funcie de caracteristicile de mai sus deosebim urmtoarele tipuri de silozuri : A. Silozuri din plante cu umiditate ridicat (peste 60%) sunt de fapt silozurile propriu-zise. B. Silozuri din plante cu umiditate redus (sub 60%), 2
respectiv semisilozurile i semifnurile. C. Silozurile energetice; sunt cele provenite din grunele de cereale cunoscute i sub denumirea de past de cereale.
I.1.1. EFECTUL I CARACTERIZAREA NUTRITIV A SILOZURILOR
Prin nsilozare se pot pstra nsuirile bune ale nutreurilor verzi, asigurnd-se astfel categoria suculentelor din structura raiilor n perioada de stabulaie. La prepararea silozurilor pierderile de substane nutritive sunt de pn la 10-15 %. Acestea stimuleaz producia de lapte, favorizeaz de asemenea ngrarea la o pondere obinuit n structura raiilor furajere de 40-65 %. nsilozarea furajelor este o lucrare n ntregime mecanizabil iar influena condiiilor meteo este mult diminuat. n tabelul 1 se redau principalele caracteristici nutritive ale unor furaje nsilozate n diferite tehnologii. Datele tabelare relev de exemplu c n cazul porumbului mas verde pentru a se obine un siloz cu valoare energetic mai ridicat trebuie recoltat i nsilozat cnd boabele sunt n faza de cear sau vitroas pentru c asigur 0,3 UN i 12 g PD/kg. Mai este de observat aportul proteic ridicat de 90-105 g PD/kg al unui semifn de lucern sau cel energetic de 0,7-0,9 UN consemnat la grunele de porumb nsilozate. Varietatea preparatelor furajere posibil de obinut prin nsilozare trebuie s conduc n timp la alegerea sortimentelor i a tehnologiei care s corespund n cea mai mare msur necesitilor fermei de animale. 3
Tabelul 1
Caracteristicile nutritive ale unor nutreuri nsilozate (BURLACU i colab., 1998)
Nutreul SU g/kgSN UNL /kgSU UNC /kgSU PDIN g/kgSU PDIE g/kgSU USV /kgSU UST /kgSU USO /kgSU Ca g/kgSU P g/kgSU Siloz de porumb cu bobul n lapte- cear 271 1,04 1,02 47 57 1,22 1,22 1,29 3,7 2,6 Siloz de porumb cu boabele n cear 300 1,05 1,04 46 66 1,10 1,10 1,30 4,3 2,3 Semifn de lucern la nceput de nflorire 350 0,90 0,84 106 59 1,09 1,09 1,20 16,9 3,1 Semifn de raigras aristat la nceput de nspicare 350 1,09 1,10 76 65 1,09 1,09 1,43 6,9 4,0 Siloz de coceni cu 1 % melas 421 0,85 0,80 48 53 1,28 1,30 2,20 (4,0) (2,5) Siloz de coceni cu 1 % drojdie 334 0,83 0,77 50 51 1,28 1,30 2,20 (4,0) (2,5) 4
I.1.2. TIMPII TEHNOLOGICI DE PREPARARE A SILOZURILOR
A. - la silozurile din plante cu umiditate ridicat : - condiii de nsilozare : imediat dup cosire - coninut n ap : peste 60% - recoltare tocare (la dimensiuni sub 1,5 cm) - tasare plus adaosuri de siguran - pstrarea condiiilor de anaerobioz (maturarea 40-60 de zile) B. la semisilozuri i semifnuri - condiii de nsilozare : dup ofilirea plantelor verzi
- coninut n ap : sub 60% - recoltare cu formarea brazdelor (ofilirea n brazd) - adunat + tocare - tasare + adaosuri de siguran - pstrarea condiiilor de anaerobioz (maturare 40-60 de zile) C. la silozurile energetice - se supun nsilozrii grunele de orz, de porumb sau tiuleii de porumb cu i fr pnui - coninut n ap : 27-35% - recoltare (cu combina) - mcinare - tasare + adaosuri de siguran - pstrarea condiiilor de anaerobioz (maturare 40-60 de zile) I.1.3. ADAOSURILE LA NSILOZARE
Dup cum s-a vzut la toate cele trei tipuri de silozuri n momentele tehnologice prezentate, concomitent cu tasarea, n funcie de caracteristicile sortimentelor furajere se poate interveni cu diferite adaosuri dup cum urmeaz : 5
a) adaosuri energetice
n cazul plantelor greu nsilozabile (a leguminoaselor) se poate recurge la diferite surse bogate n glucide uor fermentescibile care creeaz n masa nsilozat un substrat favorabil activitii bacteriilor acido-lactice i ridic i valoarea nutritiv a preparatului furajer. n acest scop se pot folosi : - melasa 2-4 kg diluat n ap cu care se umecteaz 100 kg furaj. - finurile de cereale 5 kg/100 kg furaj.
b) adaosuri chimice
Pentru a se crea ct mai repede un mediu puternic acid (pH sub 4,5) care favorizeaz dezvoltarea florei acido-lactice n condiiile nsilozrii unor plante cu coninut ridicat n ap (peste 75%) sau a celor greu nsilozabile se pot folosi acizi anorganici, organici sau substane bacteriostatice. Utilizarea acestora se bazeaz pe cercetrile lui VIRTANEN, care a demonstrat c activitatea florei de fermentaie butiric i de putrefacie este oprit la un pH de 4,2 ; la un pH sczut se reduc i pierderile de substane nutritive prin oprirea respiraiei reziduale a celulelor plantelor. n continuare redm cteva reete (mai vechi i mai noi) de astfel de adaosuri chimice : - soluia AIV n doz de 5 l/100 kg furaj este format din 1,3 l acid sulfuric concentrat, 8 l acid clorhidric i 70 l ap. - soluia Defaux, n doz de 5-6 l/100 kg furaj, se prepar din 1,3 l acid sulfuric, 9 l acid clorhidric, 0,2 l acid fosforic n 60 de litrii ap. - acid formic cu concentraie 5% n doz de 5 l/100 kg furaj. - o soluie de 5 l acid formic, 1 l formaldehid n 100 l ap se utilizeaz n doz de 5 l/100 kg furaj. 6
- acidul propionic n cantitate de 1,5 l diluat n 2-3 l ap pentru 100 kg furaj. n acelai mod se utilizeaz i Luprosilul care este denumirea comercial a unui preparat lichid pe baz de acid propionic i substane bactericide.
Substanele i preparatele bacteriostatice inhib n prima faz dezvoltarea florei epifite, favoriznd apoi nmulirea celei acido- lactice : - metabisulfitul de sodiu sau de potasiu, n cantitate de 0,3- 0,5 kg/100 kg furaj. - formiatul de sodiu, de potasiu sau de calciu 0,3-0,5 kg/100 kg furaj. - clorura de sodiu, fin mrunit 1-1,5 kg/100 kg furaj. - soluia de formol, format din 5l formol cu concentraia de 60-70% n 100 l ap care se aplic n cantitate de 5 l/100 kg furaj.
c) adaosurile biologice
Sunt preparate pe baz de monoculturi sau policulturi de bacterii acido-lactice i propionice selecionate la care se mai pot asocia i drojdii sau micete productoare de enzime sau chiar enzime ca atare. Utilizarea i a drojdiilor se explic prin faptul c aceste microorganisme fiind aerobe, consum din oxigenul aflat nc n primele faze ale nsilozrii n biomasa vegetal, contribuind astfel la instalarea mai rapid a anaerobiozei ; este de notat i mbuntirea mediului n vitaminele complexului B. Produsele biologice poart diferite denumiri comerciale ale firmelor productoare ns aa dup cum s-a artat mai sus ele se obin pe baza unor culturi selecionate de : - Lactobacillus plantarum, casei, bulgaricus, bifidus - Streptococcus faecium - Pediococcus acidolactici, pentosaceus - Lactococcus lactis lactis 7
- Propionibacterium Shermanii - Bacillus subtilis La alegerea unui preparat biologic se va avea n vedere i clasificarea acestora ntr-o anumit categorie n funcie de efect, dup cum urmeaz : A 1 stimuleaz creterea n greutate A 2 stimuleaz producia de lapte Categoria B : B 1 mbuntete consumul voluntar B 2 mbuntete digestibilitatea n vivo B 3 mbuntete eficiena utilizrii energiei Categoria C : C 1 mbuntete fermentaiile C 2 mbuntete stabilitatea aerobic C 3 reduce efluenii C 4 reduce pierderile prin nsilozare
n tabelul 2 prezentm cteva preparate biologice oferite de diverse firme care au ptruns deja pe piaa romneasc. La noi n ar IBNA Bucureti a produs i difuzat n anii 80 un biopreparat din culturi selecionate de bacterii acidolactice denumit LACTOSIL. Folosindu-se tulpini active din speciile Lactobacillus plantarum, L. casei, L. termophilus, L. bulgaricus, L. bifidus i uneori i cu drojdii din genurile Torula i Monillia n laboratorul de microbiologie tehnic se realiza pentru comercializare culturi lichide de inocul. Modul de prezentare era sub form lichid sau semiumed (cu 55-60% SU) cnd cultura se trecea pe un suport energetic la care se adugau i sruri minerale. Doza de 1 kg / ton nutre trebuia s asigure o ncrctur de 50000-100000 bacterii / g nutre nsilozat
8
Tabelul 2 Preparate biologice destinate nsilozrii furajelor Numele produsului Ingredienii activi Forma de aplicare Cantitatea Categorii promovate Kg/t L/t A B C 1 2 1 2 3 1 2 3 4
Ecobale Lactobacillus plantarum Serratia rubidaea Bacillus subtilis
Genus instant silage inoculant for grass Lactobacillus plantarum Streptococcus faecium Pediococcus lactici Celulaz, hemicelulaz Pentozanaz, amilaz
Granular Lichid
0,5
2
1
2
1
2
3
1
-
3
- Mole -Active Lactobacillus plantarum Enzime
Lichid
-
2
1
1
-
3
1
-
3
- Pioneer Brand 1188 Lactobaciullus plantarum Granular Lichid 0,5
2 1 2 1 2 3 1 - 3 4
Sussex Sile Pediococcus acidilactici Lactobacillus plantarum 0,4
2
1
2
1
2
-
1
-
-
-
9
d) adaosurile enzimatice
Asigur creterea coninutului de zaharuri uor fermentescibile prin hidroliza hidrailor de carbon ndeosebi a amidonului i celulozei. Se utilizeaz n cultur speciile de ciuperci : Aspergillus oryzae, A. niger, A. wenti care mbogesc substratul pe care se dezvolt n complexe enzimatice n care predomin amilazele i celulazele. De regul preparatele enzimatice se asociaz diferitelor culturi de bacterii acidolactice selecionate rezultnd produse cu efect complex asupra biomasei vegetale care se supune nsilozrii. n exemplele de produse din tabelul nr. 2 se poate constata prezena aditivilor enzimatici de tipul celulazei, hemicelulazei, xylanazei, pectinazei, pentozanazei, amylazei. i la noi n ar s-au experimentat preparate enzimatice produse de Aspergillus orizae i A. niger, care aveau ca efect ridicarea procentului de glucide din substratul furajer.
e) alte adaosuri
- la nsilozarea grosierelor sau pentru mbogirea coninutului azotat al gramineelor se poate folosi ca adaos ureea n doz de 0,3-0,5 % prin pulverizare dup solubilizare n ap n proporie de o parte uree la 3-5 pri ap ; - ntr-o variant mbuntit se poate recurge la un amestec de 0,3-0,5 kg uree cu 0,2-0,3 kg sulfat de amoniu care se dilueaz n 3-5 pri ap aceasta fiind doz pentru 100 kg nutre care se nsilozeaz.
I.1.4. PROCESE FERMENTATIVE LA NSILOZAREA PLANTELOR
La nceput n biomasa vegetal supus nsilozrii se produc concomitent dou tipuri de procese fermentative i anume : - dependent de plant ; la silozurile provenite din plante verzi se prelungesc procesele metabolice, respiraia continund pn la 10
epuizarea oxigenului disponibil ; aceasta se face cu consum de glucide i degajare de cldur dup urmtoarea formul general :
zaharuri + O 2 : CO 2 + H 2 O + cldur
Creterea temperaturii n masa furajer care se nsilozeaz determin ntr-o prim faz ncingerea, care scpat de sub control favorizeaz dezvoltarea florei mezofile i termofile i este nsoit de reducerea zaharurilor i de degradarea carotenului ; reaciile de proteoliz sunt deasemeni intense pn cnd pH-ul coboar la valori de 4,2-4,5. Pentru a limita respiraia rezidual a plantelor i s se asigure instituirea unei fermentaii anaerobe, se impune din punct de vedere tehnologic mrunirea (tocarea) plantelor pn la dimensiuni de 15- mm, efectuarea unei tasri puternice iar pentru biomasa furajer mai greu nsilozabil i o acidifiere suplimentar. - dependent de microflora epifit ; pe plantele verzi destinate nsilozrii numrul microorganismelor epifite poate ajunge la milioane /g SU. Dup VINTIL (1989) din punct de vedere sistematic cele mai numeroase sunt : - bacteriile din zona radicular a plantelor (gen Pseudomonas) - bacteriile din grupa coli aerogenes - spori de mucegaiuri - bacteriile lactice, a cror numr oscileaz ntre 5-15 milioane /g SU, valorile mai mari fiind pentru graminee i apoi n ordine descresctoare pe borceag, lucern, trifoi, buruieni, stuf. - spori de drojdii (a doua grup favorabil nsilozrii) n numr de 4000-300000/ g SU, nivelele mai ridicate fiind de regul la porumb i mai sczute la trifoi i lucern. Dup acelai autor (VINTIL, 1989) se arat c nutreul se poate degrada dac numrul de bacterii acido-lactice este mai mic de 50000/ g SU. 11
La nceputul nsilozrii plantelor, tehnologia aplicat influeneaz dou procese microbiologice oarecum antagoniste i anume : reducerea activitii bacteriilor coliforme, butirice, acetice, de putrefacie i a mucegaiurilor (care reprezint i ponderea cea mai mare a florei epifite) respectiv favorizarea nmulirii bacteriilor acido- lactice i a drojdiilor, care iniial se afl ntr-o proporie mai redus pe materialul vegetal, dar cu care se realizeaz procesele fermentative prin care se produce acidul lactic care este principalul agent de conservare al masei furajere. Pentru c dezvoltarea microflorei aerobe este favorizat (iniial) de prezena aerului rezidual i a pH-ului slab acid-neutru al sucului celular, dirijarea spre o fermentaie acido-lactic se realizeaz printr-o tasare insistent i prin utilizarea de adaosuri de siguran (chimice, biologice, enzimatice) care au ca efect acidifierea rapid a masei furajere. Din acest punct de vedere o atenie special trebuie acordat leguminoaselor la care s-a constatat c bacteriile butirice se dezvolt mai rapid dect pe graminee. Astfel n cazul lucernei proliferarea florei nefavorabile este favorizat i de caracteristicile biochimice ale plantelor : pH neutru-slab acid al sucului celular, raportul glucide / protein mai mic de 0,5, coninutul sczut de Mg i ridicat de Ca.
I.1.5. DINAMICA PROCESELOR MICROBIOLOGICE N MASA FURAJER NSILOZAT
Dup VINTIL (1989) n dinamica proceselor fermentative care au loc n masa furajer supus nsilozrii se pot distinge mai multe faze i anume : - faza de dezvoltare a microflorei mixte ; aceasta are o durat de cteva zile, perioad n care continu respiraia celular i au loc reacii de oxidare a zaharurilor simple iar proteazele vegetale sunt active ; se dezvolt abundent o flor mixt de specii aerobe i anaerobe ceea ce determin o cretere a temperaturii la 35-38 0 C, o 12
diminuare a O 2 i o acumulare de CO 2 ; masa nsilozat se autotaseaz i apar scurgeri de suc cu pierderi de substane nutritive valoroase : glucide, proteine, vitamine i sruri minerale. Spre sfritul fazei oxigenul dispare iar pH-ul scade sub 4,7. La plantele uor nsilozabile (la graminee) ca urmare a coninutului ridicat n glucide simple, microflora acido-lactic este foarte activ din prima parte a fermentaiei, determinnd prin acidul lactic format o acidifiere rapid a mediului i atingerea unui pH de 4,4 dup numai 3 zile ceea ce are ca efect i inhibarea dezvoltrii florei nedorite. La plantele greu nsilozabile (la leguminoase) datorit cantitii mai reduse de glucide i a capacitii de tamponare a pH-ului de ctre sucul celular, n prima faz se dezvolt i bacterii coliforme i butirice, care i prelungesc activitatea i datorit scderii lente a pH-ului care ajunge la 4,4 abia dup 15 zile. Din aceast cauz la aceast categorie furajer se intervine cu o tehnologie de preparare specific. - faza de fermentaie propriu-zis ; dureaz pn la cca 30 de zile de la nsilozare. Condiiile de la sfritul primei faze favorizeaz dezvoltarea masiv a microflorei de fermentaie acido-lactic ceea ce asigur formarea la nivel conservant a acidului lactic. O bacterie acido-lactic poate produce la interval de o or o cantitate de acid lactic de 2-3 ori mai mare dect greutatea ei. La plantele uor nsilozabile, faza de maturare este mai scurt, acizii organici i ndeosebi acidul lactic ating o proporie de 2-2,5 % ceea ce determin, spre final, o reducere masiv a numrului total de microorganisme din masa nsilozat. n silozurile care se acidifiaz mai lent crete proporia de acid acetic i se formeaz i acid butiric. La lucern, VINTIL (1989) constat c dezvoltarea bacteriilor acido-lactice este maxim la circa 20 zile de la nsilozare cu valori de 47-127 milioane / g SU n cazul silozului i de circa 13 milioane / g SU n cazul semifnului, nivele care sunt de 5-14 ori, respectiv de 1,4 ori mai mari comparativ cu prezena acestei microflore pe plantele verzi. Dup acest maxim numrul bacteriilor acido-lactice se reduce 13
mult astfel nct la 60 de zile de la conservare valorile sunt comparabile ntre siloz i semifn. n general drojdiile se dezvolt n primele 10-20 de zile cnd numrul lor crete de la circa 4.000 /g SU plant verde pn la 100.000-480.000 / g SU plant nsilozat. n condiii normale coliformii i microflora de fermentaie butiric i putrid se reduce i dispare n scurt timp de la ermetizarea silozului. - faza de repaus sau faza final ; apare dup 50-60 de zile de la nsilozare i dureaz la o conservare corespunztoare 6-12 luni. Temperatura se stabilizeaz la 25-30 0 C, pH-ul la 4-4,2 i se acumuleaz 1,5-2 % acid lactic. Numrul microorganismelor se reduce foarte mult iar cele prezente sunt inactive, fiind la valori comparabile la cele dou tipuri de silozuri (cu umiditate ridicat respectiv redus). Nerespectarea timpilor tehnologici de nsilozare a plantelor poate genera interferarea unei nedorite faze, respectiv : - faza proceselor de degradare ; dac nu s-au creat condiii favorabile dezvoltrii florei lactice i a drojdiilor, dup circa 20 de zile se produce o fermentaie butiric i putrid. Neatingerea aciditii corespunztoare stimuleaz activitatea microorganismelor de putrefacie care degradeaz ndeosebi proteina i vitaminele. Dac se pstreaz condiiile de aerobioz se dezvolt mucegaiurile i ciupercile ; aceste procese pot s aibe loc i n silozurile la care dup un timp s-au produs defeciuni de etaneizare. - ncingerea i autoaprinderea silozurilor ; n prima etap procesul de autoncingere este de natur microbiologic. Se constat mai frecvent la silozurile semiuscate (45% umiditate) bogate n surse energetice i insuficient tasate i etaneizate. Microorganismele mezofile care acioneaz la nceput determin o cretere a temperaturii la 40-45 0 C. Le urmeaz microorganismele termofile i termorezistente prin a cror activitate se intensific termogeneza ajungndu-se la temperaturi de 70-75 0 C. Se menioneaz urmtoarele 14
microorganisme ca principale autogeneratoare de cldur : Bacillus colfactor, Aspergillus fumigatus i mai puin Bacillus subtilis i Bacillus mezentericus. Pe msur ce crete temperatura, speciile de mai sus dispar rmnnd prezent la 65-75 0 C numai Bacillus colfactor. De la 70-75 0 C producerea biologic de cldur nceteaz ne mai fiind posibil dezvoltarea bacterian i astfel un siloz ncins se autosterilizeaz n aceast faz silozul se brunific respectiv se caramelizeaz. Etapa urmtoare este de natur chimic, deoarece prin formarea unor gaze combustibile (alcooli, aldehide, eteri, acetone) cu punct de aprindere la circa 70 0 C, se poate institui un proces de ardere care ncepnd cu temperatura de 90 0 C determin carbonizarea silozului i apoi chiar autoaprinderea. i la noi n ar se citeaz numeroase cazuri de autoinflamare a unor depozite de semifnuri (ndeosebi de Lolium) sau de silozuri. I.1.6. CRITERII DE APRECIERE A CALITII SILOZURILOR
Pentru c silozurile care se prepar pot avea diferite caliti, prezentm principalele criterii de apreciere a nsuirilor acestora :
- s provin din culturi recoltate n faza optim - s aibe culoarea apropiat de cea a plantelor la recoltare, miros plcut cu arome de fructe i gust acrior - pH s fie de 4,2-4,5 - coninutul de acizi organici : 1,5-2,0 % acid lactic, sub 0,5% acid acetic, sub 0,1 % acid butiric - coninutul n azot amoniacal s nu depeasc 1 % din N total - mucegaiuri absente - structur iniial meninut 15
I.1.7. RECOMANDRI PRIVIND UTILIZAREA SILOZURILOR N HRANA ANIMALELOR
Premergtor administrrii silozurilor n hrana rumegtoarelor trebuie s se aibe n vedere i urmtoarele reguli de utilizare : - s se respecte o perioad de obinuire a animalelor de 10-15 zile - raiile pe baz de siloz vor conine i minimum 2-3 kg fn de bun calitate - n cazul silozurilor acide (cu un pH sub 4,2) se va practica tamponarea acestora cu circa 2 g carbonat de calciu /kg furaj - silozurile ngheate pot fi administrate imediat dup ce s-au dezgheat n grajd. n ceea ce privete cantitile de furaje conservate prin murare care se recomand la diferitele specii i categorii de animale, se pot reine urmtoarele valori orientative : - la vacile de lapte : 20-30 kg siloz (50-60% din structura raiei) ; 8-10 kg semifn ; 2-4 kg past de cereale. - la tineretul taurin destinat prsilei, n funcie de vrst : siloz 5-15 kg (40-50% din structura raiei), 2-6 kg semifn i 2-3 kg past de cereale. - la tineretul taurin supus ngrrii : siloz 10-25 kg (pn la 70% din structura raiei), 2-6 kg semifn, 2-6 kg past de cereale. - la ovinele adulte : siloz 2-3 kg semifn 1-2 kg, past de cereale 0,1-0,15 kg. - la tineretul ovin : siloz 1-2 kg, semifn 1-1,5 kg, past de cereale 0,1-0,15 kg. - la suinele supuse ngrrii de la greutatea minim de 30 kg precum i la scroafele n ateptare i n prima perioad de gestaie se poate folosi past de grune de cereale n cantiti de 1-1,15 kg care s reprezinte circa 10-12 % din structura unui amestec furajer de concentrate. 16
I .2. METODE BI OTEHNOLOGI CE DE PREPARARE A NUTREURILOR GROSIERE I.2.1. RESURSELE FURAJERE
Din aceast categorie fac parte paiele i pleava de cereale, cocenii i cioclii de porumb, vrejii de leguminoase, capitulele i tulpinile de floarea soarelui. Se poate aprecia c resursele diferitelor sortimente de grosiere sunt foarte mari tiind c la 1 kg produs principal (grune, boabe, semine) se poate obine i pn la 1 kg produs secundar. Astfel n ara noastr producia agricol se completeaz i cu 5-7 milioane tone paie + pleav, 11-13 milioane tone coceni de porumb, 2 milioane tone ciocli, 1 milion tone vreji i capitule etc. n viitorul imediat utilizarea acestor produse va constitui o sfidare biotehnologic pentru c, ca atare, sau prin metodele actuale de preparare sunt valorificate n msur redus de ctre animale. i pentru alte domenii tehnicile biotehnologice constituie o provocare, prin ele grosierele devenind o resurs important pentru multe produse. Dup SASSON (1988) degradarea i transformarea de ctre microorganisme a substanelor celulozice i hemicelulozice permit obinerea etanolului i a materiilor prime pentru industria chimic (furfuroli, fenoli, crezoli). Din 200.000 tone de paie transformate n mod eficient ar putea fi produse 50.000 tone de etanol i 20.000 tone furfurol. Dup unii specialiti, 30 % din compuii de origine petrochimic ar putea fi obinui pornind de la transformrile microbiene ale celulozei. Tehnicile de recombinare genetic vor contribui la izolarea suelor cel mai bine adaptate la aceste transformri pentru a dezvolta o veritabil strategie de substituie care ar deveni operaional pentru anul 2000 (carbochimia ar prelua atunci tafeta petrochimiei n fabricarea noilor biopolimeri, biosolvenilor i biodetergenilor).
17
I.2.2. CARACTERIZARE NUTRITIV
Aportul nutritiv al furajelor din aceast categorie, (dup cum rezult i din datele tabelului 3) la un coninut de circa 85% SU, poate fi apreciat ca fiind moderat energetic (0,3-0,4 UN / kg), srac n protein (3 g PD la paie, 18 g PD la coceni i 35 g PD la vreji / kg) i bogat n celuloz brut (37-42 % din care lignin 9-12 %). Digestibilitatea substanei organice din furajele grosiere este sub 50%. n ceea ce privete partea mineral, coninutul este sczut n P, moderat n Ca (2-4 g / kg) dar este ridicat n sruri de siliciu.
I.2.3. METODE I TEHNICI DE PREPARARE (PREPARAREA BIOTEHNOLOGIC)
Valorificarea digestiv redus a substanelor nutritive din furajele grosiere constituie o preocupare pentru nutriioniti de a gsi metode i tehnici de preparare prin care aceste nutreuri s devin un component obinuit al raiilor furajere destinate rumegtoarelor. Pn n prezent prepararea nutreurilor voluminoase celulozice s-a efectuat n principal prin metode mecanice i chimice, n viitor ateptndu-se extinderea celor de tip biotehnologic. Rezumativ cele mai uzuale metode i tehnici de preparare a grosierelor sunt : Prelucrarea mecanic se execut n scopul facilitrii travaliului digestiv al animalelor (prehensiunea, masticaia, digestia) precum i pentru o preparare i o manipulare ulterioar a furajelor. Prin prelucrare mecanic se pot realiza : - mrunirea (mcinarea) furajelor ; se efectueaz cu mori specifice fibroaselor iar mrimea predominant a particulelor furajere este sub 10 mm. - tocarea ; se efectueaz cu combine sau toctori iar mrimea obinuit a particulelor furajere este de 10-60mm.
18
Tabelul 3 Caracteristicile nutritive ale unor nutreuri grosiere (BURLACU i colab., 1998)
- defibrarea ; se practic de regul concomitent cu tocarea i are ca efect sfierea n lung a cuticulei silicoase de la tulpinile de coceni de porumb. - zdrobirea ; se efectueaz n cazul cioclilor sau a tiuleilor de porumb cnd se intervine cu utilaje specifice (zdrobitoare) - presarea ; se practic n condiiile granulrii paielor cnd pentru compactarea lor se acioneaz cu presiuni de 100-500 kg for / cm 2 n condiii de temperatur de 90-120 0 C la nivelul matriei.
Prepararea prin hidratare ; are ca efect nmuierea prilor dure ale grosierelor, lavarea prafului i a agenilor infestani (spori, micete) asigurndu-se i instituirea unor procese fermentative. Hidratarea se poate efectua cu : - ap ; rece sau cald (oprire) prin stropire sau nmuiere ; - cu soluii nutritive : - saramurarea ; se prepar o soluie de 1-2 % sare i se umecteaz cu 200-300 l / tona de nutre grosier. - melasarea ; se prepar o soluie de 2-4 % melas i se folosete 200-300 l / tona de nutre. Datorit coninutului ridicat n glucide simple, dup 24 de ore, flora acido-lactic i drojdiile slbatice produc o uoar fermentaie lactic n masa furajer hidratat. - cu soluii complexe formate pe baz de uree sau melas n raport 1/9 la care se adaug apa n proporie de 1/5 i sruri minerale solubile. - cu furaje apoase, respectiv cu borhoturi de la fabricile de zahr, spirt, amidon, bere, n cantiti de 300-350 kg care se amestec cu 1000 kg nutre grosier. i n acest amestec furajer dup 24-36 de ore de la preparare se produce o uoar fermentaie lactic.
Chimiotratarea : se efectueaz cu substane chimice (alcalii, acizi) care acionnd asupra complexului ligno-celulozic faciliteaz 20
atacul enzimelor i a microorganismelor de la nivelul tubului digestiv asupra furajului grosier. - Tratarea cu alcalii ; n practica curent s-a rutinizat utilizarea hidroxizilor de sodiu, potasiu, calciu i amoniu n doz de 3-5 %. Aplicarea acestor tratamente se poate face : - prin imersiune, respectiv prin scufundarea ntr-un bazin a nutreului grosier ntr-o soluie alcalin cu concentraia de 1,5 % ; se pregtesc circa 10 l soluie pentru 1 kg paie ( metoda Beckmann) - prin spreiere ; se stropete nutreul grosier cu o soluie alcalin concentrat (20-25 % NaOH) n cantitate de 0,5-3 l soluie pentru 100 kg paie. - amonizarea grosierelor ; determin o cretere a fraciunii azotate din furaje, o distrucie parial a complexului ligno-celulozic prin gomflarea fibrelor de celuloz, se favorizeaz creterea populaiei ruminale i se reduc procesele de gazogenez de la nivelul rumenului. Amonizarea furajelor se poate efectua : - cu NH 3 anhidru gazos, prin injectare cu utilaje specifice a amoniacului n ire mpachetate n folie de polietilen n doz de 30 kg NH 3 / t ; efectul se obine dup 4-6 sptmni vara i 8 sptmni iarna. - prin umectarea furajelor cu ape amoniacale care au un coninut minim de 17 % N. Doza este de 12 l / 100 kg, practicndu-se o stropire n straturi succesive a grosierelor pn se formeaz ira. - cu substane generatoare de amoniac ; n tehnica de granulare a grosierelor se poate utiliza de exemplu uree 2 % sau carbonat de amoniu 2 %, care n timp se descompun la nivel de amoniac producndu-se i amonizarea granulelor.
Prepararea prin fermentare se urmrete asigurarea condiiilor de producere a proceselor fermentative favorabile n masa furajelor 21
grosiere prin care se asigur creterea nivelului de consumabilitate, a digestibilitii i a valorii nutritive a acestor nutreuri. Fermentarea nedirijat - asigur instituirea n masa furajelor a unei uoare fermentaii alcoolice i lactice prin activitatea drojdiilor slbatice i a bacteriilor din mediul ambiant. Fermentarea se produce prin inhibarea dezvoltrii bacteriilor termofile i prin asigurarea condiiilor de nmulire a bacteriilor lactice ceea ce se realizeaz prin mrunirea grosierelor i eliminarea aerului (prin tasare uoar) i introducerea unor componente bogate n glucide uor fermentescibile : melas, tiei de sfecl, borhoturi lichide, amidon, bostnoase, tuberculifere, finuri de cereale. Fermentarea dirijat - drojduirea grosierelor, se realizeaz n urmtorii timpi tehnologici : - Prepararea inoculului folosindu-se drojdie presat de panificaie 2-4 g / l mediu sau drojdie uscat 1 g / l, n fermentatoare de mic capacitate cu mediu lichid format din melas 10 g, uree 0,3 g, extract de superfosfat 4 ml, clorur de potasiu 0,1 g, sulfat de mangan 0,025 g i ap pn la un litru. Timpul de fermentare este de 10-12 ore. Se preia 4/5 din mediu restul de 1/5 fiind maiaua pentru zilele urmtoare (7-14 zile). n timpul fermentrii se va asigura un pH de 4,5, temperatura de 30-33 0 C i aerarea mediului. - Prepararea soluiei complexe ; se face pe baza inoculului la care se adaug uree, melas, sruri minerale, ap cald n cantitile prin care se asigur 300-350 l soluie complex pentru 1000 kg nutreuri grosiere. - Mrunirea grosierelor i umectarea lor cu soluia complex, pentru care se folosesc utilaje specifice, de regul toctori prevzute cu sisteme de stropire. - Pstrarea materialului furajer preparat, timp de 24 ore ntr-un bazin betonat pentru a se institui procesele de fermentaie lactic. Pentru a se asigura zilnic cantitile 22
necesare de nutreuri grosiere drojduite trebuie s se dispun de dou bazine dimensionate la mrimea fermei de animale.
Au fost preconizate i metode pentru producerea de biomas n care paiele au constituit sursa energetic, polizaharidele coninute fiind hidrolizate chimic sau enzimatic pn la nivel de monozaharide care pot fi valorificate metabolic de drojdii. Astfel JACKSON (1977) supune paiele la un tratament hidrobarometric n mediu acid urmat de o neutralizare cu amoniac tot sub presiune. Acest tratament hidrolizeaz polizaharidele ndeosebi din hemiceluloze obinndu- se circa 20 % zaharuri fermentescibile. Drojdiile s-au cultivat pe aceste paie timp de 35 de ore apoi materialul furajer uscat n curent de aer cald s-a administrat n hrana vieilor. Coninutul n protein brut s-a mbogit oscilnd ntre 7 i 10 %. GHEORGHIU (1979) citat de DRINCEANU i MILO (1985) arat c n timpul fermentaiei, drojdiile se nmulesc de 5-10 ori i elaboreaz o serie de factori activi ca : vitamine din complexul B, aminoacizi eseniali etc. n timpul dospirii se intensific i activitatea bacteriilor acidolactice. Drojduirea contribuie favorabil la procesul de dezintoxicare, facilitnd asimilarea N ului neproteic prin intensificarea activitii microflorei din rumen, drojdiile vii ingerate servind i ca resurs proteic pentru microfauna din rumen. Efectul productiv al nutreurilor grosiere drojduite stabilit la ICCT Corbeanca i IBNA Baloteti a constat la vaci n sporirea produciei de lapte cu 1-1,5 l i a procentului de grsime cu 0,10-0,15 % puncte procentuale.
Prepararea prin nsilozare permite utilizarea grosierelor n hrana animalelor datorit efectului de mbuntire a palatabilitii i a indicilor de consum, a eficienei n furajare precum i datorit posibilitilor mecanice de preparare a acestora. Variantele de aplicare ale acestui mod de preparare sunt diverse, dintre care exemplificm : 23
- nsilozarea cu furaje verzi ; pentru suculena lor se poate folosi porumbul verde, coletele i frunzele de sfecl, lucerna verde etc. nsilozarea se face alternnd straturi de 40-60 cm de nutre verde cu 20-30 cm paie, care se supun tasrii. - nsilozarea n amestec cu borhoturile, ndeosebi cu tiei de sfecl proaspei n proporie de 2-3/1 (borhot / grosiere - paie, coceni) care de asemeni se supun tasrii. - nsilozarea n amestec cu dejeciile de psri ; n acest sens se pot folosi aternuturile permanente provenite din creterea la sol a diferitelor categorii de psri. Amestecurile de 300 kg dejecii i 1000 kg grosiere tocate se trateaz cu 70-80 l soluie HCl de concentraie 0,5 % se taseaz i se las pentru maturare 60-120 zile.
Prepararea prin amestecare este o preparare asociativ de diferite componente furajere prin care se realizeaz structuri complexe de amestecuri furajere unice (AFU). O astfel de structur de AFU destinat tineretului taurin supus ngrrii se poate alctui din ciocli de porumb (40-50 %), fibroase (20 %), concentrate (20-25 % - past de cereale, gozuri) cu uree (2%) i preparate minerale (3%). Toate componentele se mrunesc n mori i se supun omogenizrii n remorci de tip amestector.
Prepararea enzimatic n prezent acest mod de tratare a grosierelor pentru rumegtoare nu a depit faza de microproducie, dar rezultatele obinute permit aprecierea c n viitor prepararea enzimatic a acestei categorii furajere poate readuce interesul nutriional pentru unele sortimente. Descoperirile microbiologiei ruminale, identificarea factorilor de stimulare celulozolitic, posibilitile de obinere a celulazei ruminale sau a celulazelor de origine bacterian sau fungic precum i 24
alte sisteme enzimatice vor permite revoluionarea metodelor de preparare a nutreurilor voluminoase celulozice. n acest sens au fost identificate diferite ciuperci i micete care elaboreaz enzime cu efect ligno-celulozolitic. Astfel JACKSON (1978) semnaleaz unele cercetri prin care s-a stabilit c mucegaiul alb de lemn poate degrada cu precdere lignina din unele plante. i LYNCH i colab. (1977) citat de DRINCEANU i MILO (1985) arat c ciuperca Diplodia gossypina poate determina scindarea celulozei din semine de bumbac, coji de arahide, ciocli, paie hidratate cu o soluie de N neproteic i sruri minerale. Trichoderma viridae produce o enzim complet (enzim fungic) care poate reduce celuloza pn la nivel de glucoz. De asemeni micetele din genul Aspergillus elaboreaz enzime cu aciune celulozolitic. DANIELS i HASHIM (1977) citai de DRINCEANU i MILO (1985) utiliznd enzime celulozolitice fungice n tratamentele plevei de orez la o umiditate de 50 % obin o cretere a digestibilitii substanei uscate i a energiei. WILLIS i colab., 1980, trateaz paiele de orz cu NaOH 5 % iar dup trei zile adaug preparate enzimatice pe baz de hemicelulaze, pectinaze, betaglucozidaze n cantiti de 20 mg / 100 g SU i le nsilozeaz la un coninut n ap de circa 70 % timp de 30 de zile. Constat creterea digestibilitii grosierelor de la 44,1 % la 58,6 % la turaii Holstein. n prezent enzimele disponibile din categoria celulazelor sunt utilizate n hrana porcinelor i a psrilor n condiiile utilizrii n structura nutreurilor combinate a orzului i a ovzului care prin pleava bobului ridic nivelul celulozic peste pragurile fiziologice admise.
Prepararea prin granulare este o metod industrial n care prepararea i mbuntirea valorii nutritive a grosierelor se realizeaz prin metode fizice de prelucrare mecanic (mrunire, presare), prin 25
tratare chimic i prin completarea de asociaie cu unele furaje sau ingrediente. n deceniul opt procedeul granulrii furajelor voluminoase celulozice a fost destul de extins n rile central i est europene, de exemplu una din variantele rspndite fiind tratarea paielor cu soluie de NaOH 20 % i granularea lor n proporie de 80 % cu concentrate 20 % care aveau n structur 2 % uree. Costurile energetice foarte mari au determinat ns renunarea la aceast tehnologie.
I.2.4. RECOMANDRI PRIVIND UTILIZAREA NUTREURILOR GROSIERE N ALIMENTAIA ANIMALELOR
Aportul azotat redus, eliberarea n principal a unei energii de tip caloric i rolul de balast al raiilor, limiteaz mult utilizarea grosierelor n hrana animalelor. n prezent pentru aceast categorie furajer se fac urmtoarele recomandri : - la vacile de lapte, n perioada de var, pentru asigurarea valorilor de ncrcare digestiv se administreaz 1-2 kg nutreuri grosiere prin acces liber la pune ; n stabulaie la vacile cu producii anuale de pn la 3000-3500 l lapte i numai n faza descendent a curbei de lactaie, se pot da 3- 5 kg respectiv pn la 25 % din structura raiei. - la tineretul taurin supus ngrrii, n sistem semiintensiv dar mai ales extensiv, grosierele (de preferin cioclii de porumb) pot s participe n proporie de pn la 30-40% n structura amestecului furajer unic (AFU). - la ovinele adulte, se pot valorifica cu precdere vrejii de leguminoase n cantiti de 1-1,5 kg ndeosebi n prima parte a gestaiei precum i n lactaie. - la tineretul ovin supus ngrrii n sistem semiintensiv, grosierele n general dar vrejii n special se pot administra n cantiti de 0,5-1,0 kg.
26
I .3. METODE BI OTEHNOLOGI CE DE PREPARARE A GRUNELOR I BOABELOR
I.3.1. CARACTERIZARE I EFECT NUTRITIV
Din categoria grunelor de cereale face parte porumbul, orzul, grul furajer, sorgul, triticale, meiul. Din punct de vedere nutritiv se caracterizeaz printr-un coninut de 85 % SU i un nivel relativ sczut n protein brut (8-12 %) cu valoare biologic influenat n cazul porumbului de proporia redus n lizin, triptofan, cistin) ; coninutul n grsime brut este variabil de la 2 % la 6 % (n porumb 4-5 % i este de tip oleic) iar celuloza brut de la 2 % (la porumb) la 10-12 % (la ovz) ; sunt foarte bogate n SEN (66-70 %) de unde i denumirea de furaje amidonoase (tabelul 4). Aceste sortimente furajere formeaz baza energetic a nutreurilor combinate i a amestecurilor de concentrate, avnd o participare de 50-80 % ; administrate peste valorile de necesar predispun la ngrare. Boabele de leguminoase sunt reprezentate de mazre, soia, bob, linte, lupin, mzriche, fasole. Pentru aceast categorie este caracteristic coninutul ridicat n protein brut (de exemplu 23 % la mazre i 33 % la soia) cu valoare biologic mare (aminoacizi corelai, totui limitai de metionin) ; unele sortimente, de exemplu soia sunt bogate n grsime brut (21 %) ; este de notat i aportul n vitaminele complexului B iar dintre srurile minerale a fosforului. n alimentaie boabele de leguminoase se utilizeaz n principal pentru asigurarea i echilibrarea proteic a raiilor furajere sau a nutreurilor combinate destinate diferitelor specii si categorii de animale ; este recunoscut i efectul de stimulare a spermatogenezei la reproductorii masculi. 27
Tabelul 4
Caracteristicile nutritive ale unor grune de cereale i boabe de leguminoase (BURLACU i colab., 1998)
O particularitate la aceast categorie furajer o constituie prezena substanelor cu efect antinutritiv a cror inhibare sau distrugere se poate face prin metode diferite de preparare. Factorii antinutriionali specifici n boabele de leguminoase i grunele de cereale sunt : - soia : tripsininhibitori, hemaglutinine, saponine, oligozaharide (rafinoz), poliglucide neamidonoase (PnA), factori goitrogeni, antivitamine, pectine. - rapi : glucozinolinai, tanin, acid fenolic, acid erucic, pectine. - lupin : alcaloizi, pectine. - mazre : lecitine, tanin, PnA, oligozaharide, inhibitori proteazici. - floarea soarelui : fibre brute, tanini. - orz : beta-glucani, arabinoxilani. - gru : arabinoxilani, beta-glucani. - secar : arabinoxilani, beta-glucani, inhibitori proteazici. - sorg : tanini Consecinele nutriionale ale acestor factori sunt : - reduc digestibilitatea i / sau absorbia nutrienilor ; - afecteaz rata pasajului digestei ; - mresc activitatea microbian n intestinul subire ; - influeneaz textura fecalelor prin creterea coninutului n ap i a vscozitii cu urmtoarele efecte asupra animalului i n particular a tineretului: ncetinirea creterii reducerea utilizrii digestive a furajelor creterea mortalitii i a morbiditii tulburri digestive, diaree
I.3.2. CONSERVAREA GRUNELOR I BOABELOR
Pentru o conservare i o depozitare n bune condiii a acestor sortimente alimentare i furajere se urmrete : - reducerea intensitii proceselor fiziologice i fizico-chimice n boabe (respiraia) pentru a se preveni ncingerea i ncolirea ; 29
- inactivarea microorganismelor tegumentare pentru a nu se produce mucegirea sau alterarea grunelor sau a boabelor. Principalii factori de influen ai conservabilitii furajelor sunt : umiditatea, corpurile strine (impuriti teroase, semine de buruieni, resturi de plante) ; microorganismele n stare latent sau activ, temperatura exterioar, prezena oxigenului atmosferic etc. Premergtor aciunii de depozitare i conservare, boabele i grunele se supun CONDIIONRII, care const n : - CURARE, respectiv ndeprtarea corpurilor strine. Aceast operaiune se poate efectua : - cu ajutorul sitelor - pe baza nsuirilor de portan (prin vnturare) - pe baza greutii specifice n FNC-uri utilajul specific pentru aceste operaiuni se numete tarar. - USCARE, aducerea la procentul de umiditate care permite conservarea adic sub 14 %. n funcie de posibiliti se poate practica o uscare : - natural ; solarizare pe platforme betonate - prin contact cu suprafee nclzite - cu aer cald, prin injectare n masa de boabe - n vid parial Deasemeni naintea conservrii sau preparrii nutreurilor combinate, cerealele mai pot fi supuse : BATOZRII, DECORTICRII i chiar DEGERMINRII. Depozitarea grunelor sau a boabelor se poate efectua n urmtoarele condiii : - n stare uscat, n silozuri (celule betonate), ptule, magazii, poduri de case, n condiiile reducerii umiditii sub 14 % ; este cel mai rspndit mod de conservare - tratate cu substane chimice care au aciune bioacid i biostatic n acest sens se poate folosi acidul propionic, acidul formic, cloropicrina, dicloretanul, metabisulfitul. Dintre acestea acidul 30
propionic fiind i un produs normal de metabolism care se formeaz n prestonacele rumegtoarelor este cel mai indicat. Doza de utilizare este n funcie de perioada de pstrare i de coninutul n ap al cerealelor i variaz de la 500 g /100 kg boabe pentru depozitare 30 de zile la umiditatea de 24 % i pn la 1400 g / 100 kg boabe pentru 180 de zile i 35 % umiditate. - prin nsilozare sub form de past de cereale (vezi silozurile energetice) Mai rar, se poate recurge i la o conservare n condiii de anaerobioz la temperaturi sczute sau dup iradiere.
I.3.3. PREPARAREA I PRELUCRAREA GRUNELOR I BOABELOR
Pe lng metodele generale de prelucrare, la aceast categorie furajer se vor practica i tehnici specifice n funcie de caracteristicile sortimentului dup cum urmeaz : - prelucrarea mecanic, respectiv mcinarea se efectueaz n primul rnd pentru a se realiza amestecarea omogen a diferitelor sortimente care alctuiesc structura unui nutre combinat sau a unui amestec de concentrate. La uruieli sau constatat coeficieni de digestibilitate (Qd) mai mari comparativ cu valorile de la grunele de provenien. - hidratarea sau nmuierea grunelor poate avea ca efect, de exemplu n cazul orzului o cretere a sensibilitii amidonului la aciunea enzimelor amilolitice i chiar inactivarea inhibitorilor proteazei. De aceea premergtor administrrii, mai ales n hrana psrilor, grunele de orz se in n ap circa 12 ore. Dificultatea procedeului este dat de necesitatea uscrii ulterioare a acestor grune. - tratarea termic ; pentru distrugerea factorilor antinutritivi din boabele de leguminoase sau pentru reducerea procentului de celuloz din unele grune (orz, ovz) precum i pentru creterea palatabilitii n general se pot efectua diferite tratamente termice : 31
procedeul uscat respectiv prjirea sau toastarea grunelor se practic n cazul orzului, n instalaii simple sau chiar n tvi nclzite. Orzul prjit se administreaz purceilor sugari de la vrsta de 7-8 zile. la boabele de soia se apreciaz c prjirea inactiveaz numai parial substanele antiproteinogenetice pe care le conin. Durata tratamentului termic poate fi scurtat i mbuntit prin adaosul unor substane chimice. Astfel se obine o inactivare eficient a factorilor antinutritivi din boabele de soia prin tratament termic (15 minute la 75 0 C) asociat cu o soluie de : NaOH 1%, sau NH 4 OH 1 %. Procedeul umed (autoclavarea) este indicat n cazul boabelor de leguminoase. Se realizeaz cu eficien maxim la 115 0 C timp de 20 minute sau la 107-108 0 C timp de 30 minute. De asemeni rezultate bune se obin prin nmuierea prealabil a boabelor n ap timp de 12-24 de ore naintea autoclavrii i apoi uscare la 100 0 C timp de 30 de minute. Depirea limitelor de timp i temperatur indicate poate reduce disponibilul de aminoacizi eseniali. - prepararea enzimatic cercetrile mai recente au relevat c dac n structura nutreurilor combinate destinate psrilor i chiar suinelor (ndeosebi purceilor sugari), grul, orzul, secara i sursele de protein vegetal depesc proporia de 45-50 % se produce o cretere a vscozitii digestei n intestin. Aceast vscozitate crescut se datoreaz prezenei polizaharidelor neamidonoase (PnA) din compoziia acestor furaje care au ca efect reducerea digestibilitii nutrienilor i deci a absorbiei digestive cu impact negativ asupra performanelor la animalele monogastrice (BEDFORD, 1981). In denumirea generic de PnA se include celuloza, hemiceluloza, substanele pectice, |-glucani, pentozani (arabinoxilani) i o-galactozide (ex. rafinoza), care ntr-un nutre combinat pe baz de gru, orz, i soia ajung n proporie de 12-16 % n SU. 32
S-a demonstrat c reetele furajere cu nivele ridicate de PnA au o digestibilitate mai redus iar timpul de adaptare digestiv la nutreurile combinate de acest tip este mai mare afectndu-se indicii economico-productivi. Adiia de enzime specifice poate reduce efectul antinutritiv al PnA. De regul preparatele enzimatice de prevenire a vscozitii coninutului intestinal sunt o mixtur de : arabinoxilanaza, |-glucanaza, i o-galactozidaza. Pe plan mondial oferta de preparate enzimatice de combatere a factorilor antinutriionali din grunele de cereale este mare i divers. Astfel dintre productorii europeni, compania Finnfeeds International Ltd.- Anglia distribuie i la noi n ar produsele Avizyme i Porzyme cu specificitate pentru componentele de baz ale furajelor combinate destinate psrilor i suinelor dup cum urmeaz : La psri : - Avizyme 1100 pentru nutreuri combinate (NC) pe baz de orz destinate puilor de carne. - Avizyme 1200 pentru NC pe baz de gru / orz la puii de carne. - Avizyme 1300 pentru NC pe baz de gru la puii de carne. - Avizyme 1500 pentru NC pe baz de porumb / rot soia i / sau rot floarea soarelui la psri. - Avizyme 2100 pentru NC pe baz de orz la gini outoare. - Avizyme 2300 pentru NC pe baz de gru la gini outoare.
n prospectul acestor preparate se arat c utilizarea lor permite folosirea orzului n reetele de NC n proporie de pn la 60 %, rotul de soia poate fi nlocuit n procent de 45-60 % cu cel de floarea soarelui, energia metabolizabil crete cu 10 % la orz i cu 6 % la gru i se mbuntete i nivelul proteinei brute i al aminoacizilor cu 15 % respectiv 10 %. La porcine : - Porzyme 8100 pentru NC pe baz de orz la purcei. - Porzyme 8300 pentru NC pe baz de gru la purcei. 33
- Porzyme 9100 pentru NC pe baz de orz la porci la ngrat. - Porzyme 9300 pentru NC pe baz de gru la porci la ngrat. - ncolirea - are drept scop asigurarea unui surplus energetic i vitaminic prin grune n alimentaia de iarn a tineretului ndeosebi a puilor i purceilor. Procedeul const n umectarea cu ap cldu a grunelor i aezarea acestora n straturi de 4-5 cm n tvi de diferite dimensiuni i care se menin la temperatura minim de 20 0 C. Timp de 2-3 zile tvile pot fi acoperite cu un material textil umed. La 2-3 zile de la apariia colului, se administreaz n hran la gini outoare 15- 20 g, la pui 10-15 g, la purcei 30-50 g. - extrudarea metod termodinamic prin care un amestec de uruieli de cereale (70-80 %) uree (15-20 %) i bentonit (5 %) este trecut la presiune de 60 atm i temperatur de pn la 140 0 C printr-o matri cu orificii mici rezultnd un concentrat amidic destinat rumegtoarelor. - expandarea tratament prin suprapresiune, n turnuri de expandare a uruielilor de cereale pentru gelatinizarea amidonului. - micronizarea tratarea cu radiaii infraroii n micronizatoare timp de 40 secunde la 140 0 C. Sistemul fiind nchis, presiunea vaporilor supranclzii (180-220 0 C) distrug i factorii antinutriionali din soia determinnd i gelatinizarea amidonului.
I.3.4. MOD DE UTILIZARE N HRANA ANIMALELOR.
Orientativ pentru grunele de cereale se pot face urmtoarele recomandri : - porumbul poate fi consumat de taurine n cantiti zilnice de 2-4 kg, de ovine 0,1-0,4 kg i poate reprezenta 30-50 % din amestecul de concentrate. La alte specii poate participa n proporie de 40-80 % la porcine i 50-60 % la psri n structura nutreurilor combinate specifice. 34
- ovzul este specific reproductorilor masculi i cabalinelor i poate reprezenta 30-50 % din structura amestecurilor de concentrate destinate acestor categorii de animale (ex. un taur de reproducie consum 2-4 kg ovz / zi). La cabaline consumul zilnic de ovz poate oscila ntre 2-8 kg. - orzul la noi n ar nlocuiete de regul porumbul n proporie de 20-30 % n structura nutreurilor combinate destinate suinelor i psrilor. - grul furajer, secara, triticale se recomand s se foloseasc n proporie de 15-20 % n nutreurile combinate sau amestecurile de concentrate destinate diferitelor specii i categorii de animale de ferm. La boabele de leguminoase conduita general de utilizare n hrana animalelor este : - la rumegtoare participarea de 10-15 % n amestecul de concentrate se stabilete pentru a asigura consumuri zilnice de circa 1 kg la taurine i 0,1 kg la ovine. - la suine i psri, dup o prealabil tratare la cele cu astfel de prescripii se pot incorpora pn la 10-12 % n nutreurile combinate.
35
CAPITOLUL II RESURSE PROTEICE BIOTEHNOLOGICE
I I .1. DROJ DI I LE FURAJ ERE
Producia de drojdii furajere, ca surs de protein obinut prin biosintez i care poate fi dezvoltat industrial, constituie principala alternativ la cantitile limitate ale celorlalte sortimente din categoria furajelor de origine animal (fin de carne, de pete, de snge etc).
II.1.1. CARACTERIZAREA NUTRITIV A DROJDIILOR FURAJERE (DF)
n tabelul 5 se prezint principalele caracteristici chimice i nutritive ale drojdiilor furajere care se cultiv la noi n ar. Pe baza valorilor tabelare se pot face urmtoarele aprecieri : - coninutul de protein brut oscileaz de regul ntre 40-50 %, spre limita inferioar plasndu-se drojdia furajer cultivat pe melas cu valori mai mari fiind DF pe n - parafine. - proteina din drojdii asigur un aport important n unii aminoacizi ca de exemplu lizin (cu peste 3 %), arginin (peste 2 %), dar valoarea biologic general este destul de redus (60 %) datorit coninutului sczut n aminoacizi cu sulf, respectiv metionina (sub 1 %), triptofan (sub 0,5 %).
36
Tabelul 5
Caracteristicile nutritive ale drojdiilor furajere (BURLACU i colab., 1998)
Drojdii SU g/kgS N UNL /kgSU UNC /kgSU PDIN g/kgS U PDIE g/kgS U USV /kgSU UST /kgSU USO /kgSU Ca g/kgS U P g/kgSU Drojdie de bere deshidratat 917 1,23 1,25 350 234 - - - 1,5 14,4 Drojdie pe material lemnos 928 1,31 1,36 360 240 - - - 5,6 15,7 Drojdii pe leii sulfitare 916 1,09 1,09 318 213 - - - 4,3 15,9 37
- digestibilitatea proteinei de circa 70 % este grevat i de rezistena pereilor celulari la atacul enzimatic digestiv. - DF sunt recunoscute ca surse de vitamine din complexul B, n mod obinuit putndu-se conta pe nivele de peste 6 mg tiamin, 45 mg riboflavin, 300 mg acid nicotinic, 50 mg acid pantotenic i 2800 mg colin la 1 kg. - din punct de vedere mineral, Ca cu valori de regul sub 1 % este sczut n schimb P (peste 1%)conteaz mai mult n balana mineral a raiilor furajere. Drojdiile furajere sunt echilibrate n Fe, Cu, Mn, Zn, Co care provin n principal din mediul de cultivare ; un caz particular l reprezint coninutul ridicat n Se al drojdiei de bere care poate constitui din acest punct de vedere un supliment natural pentru acest microelement. - uscarea drojdiilor cu mediul de fermentaie, mbogete produsul furajer cu vitamine, microelemente, enzime cu activitate amilolitic i proteolitic, cu factori neidentificai de cretere prin care se ridic efectul nutritiv al acestor componente furajere. Dup MARINESCU (1980) la noi n ar se produc n principal n funcie de mediul de cultivare urmtoarele tipuri de drojdii furajere: Drojdii furajere pe leii bisulfitice ; se obin prin cultivarea drojdiei Monillia murmanica pe leiile bisulfidice rezultate din dezincrustarea acid a materiilor celulozice destinate fabricrii hrtiei. Drojdiile se dezvolt pe medii formate din leii bisulfitice i sruri minerale, n sistem discontinuu, submers, n fermentatoare, la temperaturi de 30-35 0 C i pH 4,5-5,4. Zaharurile existente n leii sunt valorificate n proporie de 40-42 %. Coninutul n protein al acestor drojdii de circa 45 % poate fi apreciat ca fiind mediu. Drojdii furajere din ape reziduale lemnoase ; Rezult prin cultivarea drojdiei Monillia murmanica pe apele de splare ale plcilor fibrolemnoase fabricate din rumegu i alte deeuri provenite de la industrializarea lemnului ; mediul de cultur sunt apele de splare plus srurile minerale. 38
Randamentul de utilizare al zaharurilor este de circa 40 %. La acest tip de drojdie coninutul proteic este de 47 % iar cel de celuloz brut este de 4,2 %. Drojdii furajere din melas ; se obin prin cultivarea drojdiilor Torula utilis i Candida lipolitica pe melas cu 50 % zaharuri. Ca i n celelalte cazuri dup metabolizarea zahrului din mediu se procedeaz la centrifugare, splare, concentrare prin recentrifugare i deshidratare pe valuri sau prin atomizare. n ceea ce privete randamentul, din 4 tone melas tip 50 se obine o ton de drojdie standard. Coninutul n protein brut este mai redus (circa 40 %) fiind inferior celorlalte tipuri de drojdie. Drojdii furajere din hidrocarburi (n-parafine) n lume mari productoare de drojdii cultivate pe n-parafine sunt Frana (nc din 1970 autoritile franceze au eliberat autorizaia de administrare n hrana animalelor a acestui tip de drojdie) SUA i Japonia, aceasta din urm contribuind la construcia, la noi n ar, la Curtea de Arge a unei fabrici cu o capacitate de producie de 60000 to /an. Se obine prin cultivarea drojdilor Candida sp., Pichia miso pe medii nutritive din hidrocarburi plus sruri minerale, tot n sistem discontinuu submers, n fermentatoare la o temperatur de 30 0 C i pH 4,5-5,0. Fa de cantitatea de n-parafine utilizate ca mediu nutritiv, randamentul n drojdie furajer standard este de peste 90 %. Aceast drojdie cu nivel proteic de circa 60 % se plaseaz spre valorile cele mai ridicate de coninut n aceast substan nutritiv ; este de asemeni bogat n grsime brut (7,7 %), n sruri minerale (8,2 % cenu) precum i n lizin (5,1 %), riboflavin (100 mg /kg) etc. Drojdii furajere pe metanol ; prin cultivarea drojdiilor Candida sp, Metilomonas clara pe medii nutritive alctuite din metanol, amoniac i sruri minerale. Reprezint o surs proteic de perspectiv i la noi n ar. 39
Din 2 kg metanol i 0,16 kg NH 3 plus mediu nutritiv mineral (acid fosforic 0,017 %, sulfat de potasiu 0,11 %, sulfat de Mg 0,017 %, sulfat feros 0,007 % i carbonat de calciu 0,01 %) rezult 1 kg biomas (cu 7 % substrat mineral). Randamentul este de 2/1 iar nivelul proteic de cca 60 %. Drojdiile furajere de la fabricile de bere ; de la fermentarea primar a mustului de bere, rezultat din cultivarea pe orz a drojdiei Saccharomyces Carlsbergensis, care se separ din tancurile de fermentare prin sedimentare. Deshidratarea se poate realiza prin uscare pe valuri, dar se poate administra i sub form proaspt la toate speciile de animale. Sub form uscat are un coninut proteic de 48,2 % cu 3,3 % lizin, 2,18 % arginin i 2 % fosfor.
Dintre mediile de cultur nefolosite la noi n ar dar utilizate n strintate n special n Frana este zerul. POP i STAN (1997) citeaz societatea Bell din Frana care a brevetat i aplicat un procedeu de obinere a drojdiilor lactice din zer pe baza proprietii drojdiei Saccharomices fragilis de a utiliza lactoza i acidul lactic. Aceiai autori descriu procedeul DEVOS care const n mbogirea zerului sau a zarei cu drojdii Saccharomices cerevisiae, nsmnate dup o prealabil pasteurizare a mediului, cu sau fr adaos de roturi de soia i n condiii de aerare intens.
De fapt producia de drojdie a unei ri fiind o activitate industrial depinde de posibilitiile de realizare a unor instalaii de biosintez n funcie de resursele de mediu nutritiv existente. Odat sursele de carbon identificate n laboratoarele de microbiologie 40
industrial se pot stabili condiiile de cultivare i se selecioneaz tulpinile cu randamentul cel mai ridicat. HALGA i colab. (1979) citat de POP i STAN (1997) arat c n SUA au fost definite i autorizate n 1976 de ctre Association of American Feed Control Officiall (AAFCO) ca ingrediente de uz furajer, opt produse pe baz de drojdii i anume : 1. Drojdii primare uscate 2. Drojdii brute active uscate 3. Drojdii iradiate uscate este n prezent mai puin produs i folosit n SUA 4. Drojdie de bere uscat 5. Drojdie uscat de la distileriile ce utilizeaz cereale 6. Drojdie uscat de la distileriile ce utilizeaz melas 7. Drojdie Torula uscat 8. Cultur de drojdie vie (Yeast culture)
II.1.2. RECOMANDRI DE UTILIZARE N HRANA ANIMALELOR
n condiiile de calitate ale drojdiilor furajere se prevede prezentarea acestora ca pulberi fine, neglomerulate, de culoare brun- rocat, cu miros specific (nu de mucegai, acru etc), gust caracteristic, cu umiditate maximum 10 %, PB minimum 44 % i cenu brut maximum 10 %. n alimentaia taurinelor, drojdia furajer se introduce n amestecurile de concentrate destinate vieilor (0-3 luni), taurilor de reproducie i eventual vacilor cu producii mari de lapte, n proporie de 3-6 %, prin care se asigur consumuri zilnice de 0,3-0,4 kg /cap. La suine, drojdiile furajere sunt recomandate n alimentaie (HALMGEAN, 1972) avnd n vedere efectul nutritiv i productiv la scroafele de reproducie precum i la categoriile de cretere i ngrare cu greuti de peste 50 kg. De regul, introducerea drojdiilor furajere n nutreurile combinate pentru porcine se face n proporie de 2-5 %. 41
Administrnd scroafelor n gestaie avansat nutreuri combinate cu 3 % drojdie furajer cultivat pe deeuri grase de abator prin care s- au substituit 50 % din furajele proteice de origine animal, MILO i colab. (1980), obin indici morfo-productivi i fiziologici apropiai, n condiii de economicitate sporit. Substituind n proporie de 60 % fina de carne prin introducerea n nutreurile combinate a drojdiilor furajere cultivate pe n-parafine, MILO i colab. (1976) nregistreaz la tineretul suin un spor n greutate cu 15,93 % mai ridicat dect la lotul martor, n condiiile unui cost al hranei mai redus cu 5,5 %. La psri, drojdiile furajere administrate n hran n proporie de 5 %, favorizeaz producia de ou i creterea tineretului. Utilizarea drojdiei furajere produs pe deeuri grase de abator n proporie de 3 % prin nlocuirea parial a furajelor de origine animal, nu a diminuat producia de ou, iar consumurile specifice au fost asemntoare ntre diferitele loturi din experien (MILO i colab. 1980). Administrnd puilor de carne furaje combinate cu 3-5 % drojdie cultivat pe n- parafine, s-au obinut sporuri de cretere cu 3,6-5,6 % mai mari i consumuri specifice cu 5,8-8,4 % mai reduse dect la loturile martor hrnite cu drojdii pe melas (MILO i colab. 1976). Experienele efectuate pe animale de laborator au relevat ns c utilizarea drojdiei ca unic surs de protein, produce n timp infiltraii i leziuni necrotice i hemoragice la nivelul ficatului.
II.1.3. CULTURA DE DROJDII VII (YEAST CULTURE)
n ultimii 15 ani, utilizarea culturilor vii de drojdii ndeosebi n hrana rumegtoarelor dar i a altor specii de animale s-a rspndit foarte mult. Cultura de drojdie vie (Yeast culture) este definit de AAFCO ca un produs alctuit din drojdii i din mediul pe care acestea s-au dezvoltat, uscat astfel nct s se pstreze activitatea fermentativ a drojdiilor. Acest produs devine bogat n celule vii de drojdie, vitamine, enzime i factori de cretere neidentificai. 42
Pe lng aportul proteic (totui mai redus fiind uscat i mediul) produsul influeneaz i flora tubului digestiv, mrind numrul de simbioni ndeosebi a florei celulozolitice, reduce pierderile sub form de metan i ridic aportul de protein microbian la nivel intestinal. Efectele stimulatoare ale suplimentelor de drojdii vii la animale au mai multe explicaii dintre care enumerm : - prezena drojdiilor n rumen i secreia de peptide i compui care conin lipide, stimuleaz creterea i activitatea unor bacterii ruminale celulozolitice i amidono-fermentative. De asemenea s-a mai constatat c perioada necesar pentru iniierea creterii i activitii bacteriilor ruminale a fost mai redus cnd au fost introduse n hran i celule de drojdii vii. - s-a consemnat i capacitatea drojdiilor de a determina scderea concentraiilor inhibitorii de oxigen din rumen. - pereii celulari ai drojdiilor au n structur manan- oligozaharide care pot constitui un produs natural alternativ antibioticelor. Astfel n cercetri recente s-a relevat elecia bacterian pentru unii carbohidrai, stabilindu-se prezena unor receptori specifici pe bacteriile intestinale pentru celulele epiteliale din peretele intestinal dar i pentru anumite zaharuri (manani) aflate n digest. Utilizarea manan-oligozaharidelor poate modifica ecosistemul microbian intestinal prin blocarea receptorilor germenilor patogeni urmat de evacuarea acestora din tractusul gastrointestinal prevenindu-se astfel colonizarea acestuia. Cnd acest efect este cuplat i cu un rspuns imun mbuntit, rezultatele pot fi comparabile cu cele obinute prin utilizarea antibioticelor. Culturile de drojdii vii se recomand n general n cantiti de 1 g /kg SU raie att la rumegtoare ct i la monogastrice. Efectul productiv al culturilor de drojdii vii administrate n hrana animalelor asigur sporuri medii zilnice mai mari cu 6 % i o conversie a hranei mbuntit cu 5%. Compania american ALLTECH comercializeaz i la noi n ar preparate de culturi de drojdii vii, tulpina Saccharomices cerevisiae 1026 (Yea Sacc 1026 ) i un produs Bio-Mos care este un 43
extract de manan-oligozaharide din peretele celular al drojdiilor din genul Saccharomices cerevisiae. S-a demonstrat c Bio-Mos-ul reduce concentraiile enterice a bacteriilor patogene de tipul Salmonelei i E. coli datorit lectinelor de pe suprafaa lor care sunt ataabile manozei. Astfel patogenii nu mai ader la celulele epiteliale din intestinul subire i vor fi evacuate din tractusul gastrointestinal. S-a mai stabilit i c suplimentarea raiilor cu Bio-Mos poate absorbi micotoxinele de tipul aflatoxinei sau a zearalenonei reducndu-se efectele negative ale acestora asupra performanelor i strii de sntate a animalelor. Produsul se recomand s se administreze n hrana suinelor, psrilor, vieilor, iepurilor i petilor n doz de 1 kg / to furaj.
I I .2. BI OMASA BACTERIAN
Proteinele de origine microbian care nu pot, evident nc s rezolve problema foamei n lume, vor juca un rol important n cursul deceniului urmtor n domeniul alimentaie animalelor i mai trziu n cel al hranei oamenilor, deoarece istoria acestor proteine abia a nceput (SASSON, 1988). Dup cum arat POP i STAN (1997) interesul de a se produce biomas bacterian este dat de ritmul deosebit de ridicat de cretere i reproducere a bacteriilor (biomasa acestora dublndu-se n 30 de minute), a coninutului nutritiv, a rolului antipoluant jucat de bacterii n circuitul materiei minerale-materie organic - materie mineral, a valorificrii unor substraturi organo-minerale, precum i pentru promovarea unei noi resurse proteice n hrana animalelor. Din punct de vedere nutritiv, biomasa bacterian are un coninut proteic de circa 50 %, substane de rezerv (lipide, poliglucide) 20 %dar la nivele ridicate (10-20%) acizii nucleici care n cazul administrrii biomasei bacteriene n proporii mai mari i n timp pot induce tulburri metabolice n organismul animal. 44
POP i STAN (1997) citeaz cele mai utilizate bacterii pentru producerea de biomas i anume : CORYNEBACTERIUM, PSEUDOMONAS, MICROCOCCUS, BREVIBACTERIUM, KLEBSIELLA, MYCOBACTERIUM, METHYLOMONAS, METHYLOCOCCUS precum i bacteriile celulolitice din genul CELLULOMONAS. Cel mai utilizat mediu de cultivare a bacteriilor productoare de biomas este n prezent metanolul, de viitor considerndu-se c celuloza din produsele secundare agricole (grosiere) sau din industria lemnului poate constitui un substrat pentru flora celulozolitic.
I I .3. BI OMASA FUNGI C
Cultivarea fungilor n producia de proteine prezint o serie de avantaje comparativ cu celelalte microorganisme prezentate datorit n principal structurii lor filamentoas, care permite o separare mai uoar de mediul de cretere. Este de relevat i coninutul mai redus n acizi nucleici comparativ cu bacteriile i drojdiile (POP i STAN, 1997). Principalele caracteristici nutritive ale biomasei fungice sunt : coninutul n proteine 20-40 %, cu o valoare biologic (75) nc limitat de nivelul mai sczut de metionin i triptofan ; este de consemnat i aportul nsemnat de vitamine din complexul B. Pentru producerea de biomas fungic cele mai utilizate sunt genurile :RHIZOPUS, FUSARIUM, CLADIOSPORIUM, PENICILLIUM i ASPERGILLUS, PAECILOMYCES, TRICHODERMA. Substraturile obinuite de nmulire a fungilor sunt reprezentate de melas, leii bisulfidice, hidrocarburile, dejeciile i nutreurile grosiere celulozice. Dup POP i STAN (1997) ciupercile microscopice sunt utilizate nu numai pentru mbogirea proteic a resurselor celulozice de diferite origini ci i pentru efectul de 45
descompunere a celulozei, hemicelulozei i chiar a ligninei mrind astfel digestibilitatea i deci valoarea nutritiv a nutreurilor grosiere.
II.4. BIOMASA ALGIC
i algele unicelulare pot fi utilizate n condiii de mediu adecvate specificului propriu pentru obinerea de biomas proteic. Dup POP i STAN (1997) cele mai utilizate genuri sunt : CHLORELLA, SCENEDESMUS la care se adaug CHLAMYDOMONAS i CLOSTERIUM din grupa algelor verzi i SPIRULINA, ANACYSTIS i NOSTOC din grupa algelor albastre. Valorile orientative de caracterizare nutritiv a biomasei algice sunt de 50-65 % PB, cu un grad ridicat de corelare a aminoacizilor (lizina este aminoacidul care limiteaz valoarea biologic a proteinei), coninutul n celuloz de regul nu depete 3 %, concentraia n acizi nucleici de pn la 5-6 % este net inferioar celorlalte tipuri de biomase proteice prezentate. Cele mai numeroase date de producie i de efect nutritiv sunt despre spiruline. Apele lacului Texcoco (Mexic) i blile din jurul lacului Ciad (Africa) sunt foarte alcaline (pH ~ 11) i favorizeaz proliferarea spirulinelor care formeaz o monocultur ; prezena vacuolelor gazoase n celule i forma spiralat a filamentelor le permite s pluteasc iar recoltarea s fie relativ uoar ; uscarea se face rapid la soare. Compoziia chimic : 65 % protein, 19 % glucide, 6 % pigmeni, 4 % lipide, 3 % fibr i 3 % cenu este valoroas cu att mai mult cu ct i coninutul n AA este echilibrat, de interes fiind nivelele ridicate de metionin i triptofan n schimb lizina este mai slab reprezentat. Mai este de subliniat concentraia de acizi nucleici de 4 % mult inferioar comparativ cu levurile (10 %) (SASSON, 1988). 46
n condiii optime de cretere produciile anuale ajung n cazul spirulinelor pn la 50 t / ha comparativ cu 4 t la gru, 7 t la porumb sau 6 t la soia iar cantitatea de protein de 35 t / ha / an este de 14,5 ori mai mare comparativ cu soia (CIFERRI, 1981 citat de SASSON, 1988). Spirulina uscat cu aer cald i transformat n fin poate fi utilizat att n alimentaia animalelor ct i a omului (un fel de biscuii). Chiar i asigurarea n totalitate a masei proteice prin spirulin la mai multe specii de animale a asigurat rate de cretere comparabile celor ale regimurilor obinuite fr s se constate efecte patologice.
47
CAPITOLUL III
PRODUSE BIOTEHNOLOGICE UTILIZATE N HRANA ANIMALELOR
Prin diferite procedee biotehnologice se pot obine componente furajere sau ingrediente care se introduc n hran, de obicei n structura nutreurilor combinate cu scopul de a satisface unele cerine specifice, pentru profilaxia sau combaterea unor boli, precum i pentru mbuntirea performanelor de cretere i de producie ale diferitelor specii i categorii de animale.
I I I .1. VI TAMI NELE
Cele aproape 20 de vitamine cunoscute pn n prezent se denumesc cu ajutorul cuvntului vitamin urmat de una din majusculele alfabetului latin (A, B, C, D etc.) sau prin intermediul aceluiai cuvnt urmat de prefixul anti i denumirea hipovitaminozei sau avitaminozei pe care o poate vindeca (vitamin antiscorbutic, antirahitic, etc) respectiv prin denumiri strns legate de structura chimic (retinol, tiamin, riboflavin etc.) (CAPRIA, 1998). De regul vitaminele sunt clasificate dup criteriul solubilitii fiind liposolubile : A, D, E, K, F i hidrosolubile : complexul vitaminei B i C. Vitaminele i provitaminele sunt biosintetizate de plante sau de microorganisme n cursul dezvoltrii acestora cnd se formeaz ca metabolii primari. 48
Fiind indispensabile animalelor superioare, necesarul n aceti nutrieni se satisface prin aport exogen, prin hran respectiv prin diferite componente ale acesteia mai bogate n anumite vitamine. Cnd acest aport devine insuficient, de exemplu n creterea intensiv a animalelor, se impune suplimentarea vitaminic utilizndu-se produse industriale obinute prin sintez sau biotehnologic.
III.1.1. VITAMINELE LIPOSOLUBILE
Vitamina A (antixeroftalmic, antiinfecioas) este un factor esenial pentru creterea i regenerarea esuturilor, cu rol n meninerea normal a troficitii mucoaselor i glandelor anexe ; are o aciune important n reproducie, n conversia hranei i n creterea rezistenei la stres. Cerinele n aceast vitamin sunt asigurate prin consum de provitamin A (caroteni i carotenoizi vitamina A natural) i prin suplimentarea hranei cu preparate sintetice de vitamina A stabilizat. n cazul provitaminei A procedeele tehnologice de obinere a carotenoizilor folosind culturi de microalge (beta- carotenul din Dunaliella bardawil reprezint 10 % din greutatea uscat a algei) ciuperci (Blakeslea trispora) sau drojdii (Rhodotorula) sunt nc prea costisitoare (POP i STAN, 1997). Suplimentarea cu vitamina A a nutreurilor combinate pentru psri i porci se efectueaz curent pe calea preparatelor sintetice stabilizate de tip microvit A cu 325 mii UI / g sau 500 mii UI / g.
Vitamina D regleaz absorbia intestinal a Ca i P, contribuie la meninerea raportului Ca / P normal, intervine n metabolismul acestor macroelemente i asupra meninerii concentraiei lor n snge i n lichidele interstiiale. Necesarul organismului se asigur prin transformarea provitaminelor (ergosterolul i 7 dehidrocolesterolul) cu localizare subcutanat sub aciunea radiaiilor ultraviolete i prin suplimentarea nutreurilor combinate cu preparate sintetice stabilizate de vitamina D 3
49
ca de exemplu microvitul D 3 (forma comercial a 7 dehidrocolesterolului sintetic iradiat) de 200 mii UI / g sau 400 mii UI / g.
Vitamina E (tocoferolul) este cunoscut ca factor al fertilitii dar este n principal un factor oxido reductor de reglare a respiraiei celulare n toate esuturile vii, antioxidant biologic puternic, i cu aciune sinergic cu Se. Animalele nu pot sintetiza vitamina E iar tocoferolii existeni n stare natural n furaje nu satisfac necesarul mai ales n sistemul intensiv de cretere. Cerinele se asigur prin suplimentarea nutreului combinat cu vitamina E sintetic stabilizat sub form de microvit E de 250 UI / g sau de 500 UI / g.
Vitamina K (antihemoragic) este indispensabil sintezei de protrombin, intervenind n coagularea sngelui. n condiii normale de cretere, vitamina K este sintetizat de microflora de pe traiectul digestiv chiar pn la nivelul cerinelor la mamifere dar insuficient la psri la care se i suplimenteaz. Prin sintez microbian se poate obine vitamina K 2 , principalele microorganisme productoare fiind din genul Bacillus (B. subtilis, B. cereus, B. mycoides, B. proteus, B. aerogenes) i Staphylococcus aureus, Mycobacterium tuberculosis, Proteus vulgaris i Escherichia coli (POP i STAN, 1997). Vitamina K 3 de uz furajer este produsul de sintez MBS (menadion bisulfit de Na), o pulbere solubil care conine 95 % vitamina K 3 . 50
III.1.2. VITAMINELE HIDROSOLUBILE
Vitamina B 1 (tiamina) ndeplinete un rol important n metabolismul glucidelor i al apei, n resorbia grsimilor, n meninerea tonusului gastro intestinal. Se sintetizeaz n prestomace la rumegtoare de ctre bacteriile ruminale. Microorganismele specifice productoare de tiamin sunt : Bacillus proteus, Bacillus mesentericus, Bacillus aerogenes, Bacillus vulgatus, E. coli, precum i drojdiile (Saccharomices cerevisiae). n prezent se produce industrial prin sintez chimic sub form de clorhidrat de tiamin.
Vitamina B 2 (riboflavina) ndeplinete un rol important n metabolismul glucidelor, lipidelor i proteinelor (al AA), intervine n fosforilare, n reglarea oxidrilor celulare precum i n procesele de cretere. Se produce biotehnologic prin microbiologie industrial prin cultivarea bacteriei Ashbya gossyppii sau prin fermentarea laptelui smntnit sau a zerului cu Clostridium acetobutylicum, Candida tropicalis, Candida guillermondia dar i a ciupercii Eremothecium ashby (POP i STAN, 1997).
Acidul pantotenic (vitamina B 3 ) este component al coenzimei de acetilare A (CoA) cu rol n metabolismul lipidelor, hidrailor de carbon i protidelor ; ia parte la formarea acetilcolinei. Este sintetizat de flora bacterian din rumen i intestinul gros. Se produce pe cale industrial i prin biosintez microbian din drojdii, mucegaiuri (Streptomyces frediae) i mai ales din bacterii : Acetobacter aerogenes, Clostridium butylicum, Pseudomonas fluorescens, Proteus vulgaris, E. coli. Ca aditiv furajer se utilizeaz sub form de premix cu 45 % D.L. pantotenat de calciu.
51
Vitamina PP (niacina, acid nicotinic, vitamina B 4 ) intr n componena codehidrogenazei I i II i este un factor indispensabil creterii florei bacteriene digestive. Se produce industrial sub form de acid nicotinic. Biosinteza se realizeaz din triptofan (provitamina niacinei) i acid glutamic prin intermediul florei microbiene de la nivelul tubului digestiv. Microorganismele specifice productoare de vitamina PP sunt : E. coli, Neurospora crassa, Xanthomonas pruni etc.
Acidul folic este un complex de pteridin, acid paraminobenzoic i acid glutamic. Intervine n sinteza unor AA (serina, metionina)i este un factor de cretere i antianemic la psri (la puii de gin). Este biosintetizat de microorganismele : E. coli, Bacillus subtillis, Streptococcus faecium sau Lactobacillus arabinosus.
Piridoxina (vitamina B 6 ) rol n metabolismul protidelor, n sinteza unor AA neeseniali i a triptofanului ; activitate antianemic ; intervine n biosinteza substanelor responsabile de transmiterea stimulilor nervoi. Se poate obine n cantiti mari prin cultivare de Saccharomices cerevisiae, sau a unor bacterii ca Acetobacter xilinum, Acetobacter aerogenes, Proteus vulgaris, Pseudomonas fluorescens, iar prin sintez chimic rezult sub form de clorhidrat de piridoxin.
Biotina (vitamina B 7 ) coferment al unor enzime cu rol n decarboxilare, intervine n sinteza acidului aspartic. Este sintetizat de microflora digestiv, ns sub valori de necesar la gini, curci, purcei la care sunt necesare suplimentri de biotin. Se poate obine pe cale biotehnologic folosind culturi de drojdii, micete (genul Penicillium, Aspergilus) sau bacterii : Lactobacillus casei, L. bulgaricus, L. acidophilus, Pseudomonas sp., E. coli. 52
Vitamina B 12 (cobalamina) este factor esenial de cretere, important n hematopoez (principiu antianemic) i activator al celulelor nervoase. Este sintetizat de microflora ruminal iar biotehnologic prin cultivarea de Pseudomonas denitrificans, Propionbacterium spp., precum i de Rhizopus arrhizus i Rhizopus nigricans. Pentru suplimentarea hranei cu vitamina B 12 se utilizeaz un premix furajer denumit Bevitex cu 50 sau 200 gama vitamin B 12 / g produs.
Vitamina C (acidul ascorbic) regleaz procesele oxidoreductoare fiind un antioxidant, sporete rezistena endoteliului vascular, are o aciune antihemoragic i antitoxic fiind un potenator al celorlalte vitamine. n condiii de cretere intensiv a animalelor nu este sintetizat la nivelul cerinelor de flora digestiv. Se practic extragerea din surse vegetale (citrice, ardei) dar poate fi obinut i pe cale microbiologic prin cultivarea de Acetobacter suboxydans i Pseudomonas fluorescens.
I I I .2. ANTI BI OTI CELE DE UZ FURAJER I STIMULATORI I DE CRETERE
III.2.1. ANTIBIOTICELE FURAJERE
Dup descoperire, antibioticele au fost utilizate ca ageni terapeutici n combaterea diferitelor boli infecioase la om i la animale. La acestea din urm s-a observat ns c antibioticele aveau i un efect bioproductiv ceea ce a determinat s fie folosite i ca aditivi furajeri. Ca promotori de cretere, la animale antibioticele se folosesc de circa 45 de ani. 53
Administrarea antibioticelor n hrana animalelor ca biostimulatori se bazeaz pe urmtoarele efecte : - amelioreaz schimburile nutritive de la nivelul tubului digestiv prin diminuarea populaiei bacteriene saprofite i instituirea unei vasodilataii la nivelul vilozitilor intestinale ; - se reduce consumul de hran pe unitatea de produs prin suprimarea dezvoltrii unor microorganisme, potenial patogene ; - se juguleaz unele infecii inaparente, cu evoluie subclinic ; - se diminueaz efectele provocate de stresul nutriional, de transport i de microclimat ;
S-a constatat c efectele enunate mai sus asigur obinerea unor sporuri mai mari n greutate cu 4-8 % n condiiile reducerii consumului specific cu 3-6 %. ntr-un raport al firmei Alltech n care se fcea o trecere n revist a rezultatelor privind utilizarea antibioticelor n hrana animalelor se arat c din 12153 experimente, la aproximativ 72 % s-a constatat o mbuntire a indicilor productivi. Utilizarea neraional a antibioticelor n scop terapeutic i furajer a generat ns fenomenul de antibiorezisten amplificat de posibila remanen rezidual a acestora n produciile animalelor (lapte, carne) cu implicaii cunoscute n asigurarea strii de sntate att la om ct i la animale. Astfel nc din anii 50, BOHNHOFF i colab. i FRETER citai de GHERGARIU (1995) constat c administrarea de antibiotice la animale de experien, mrete riscul de infecii i c puii care primeau n hran antibiotice ca stimulatori de cretere sunt mai susceptibili la colonizarea cu Salmonella. De aceea n raportul SWANN elaborat n 1969, antibioticele au fost separate pentru prima dat n dou mari categorii : de uz terapeutic i de uz furajer. 54
Dup BALLARINI citat de GHERGARIU (1995) antibioticele folosite ca aditivi trebuie s ntruneasc urmtoarele condiii : - s nu aibe legturi cu antibioticele folosite n terapia uman respectiv n cea veterinar ; - s se absoarb puin (sau deloc) dup administrarea oral pentru a se prevenii reziduurile antibiotate din produsele animale (lapte i carne) ; - s aibe toxicitate redus pentru animale ; - s fie compatibile cu ali aditivi furajeri ; - s aibe stabilitate dup ncorporarea n anumite preparate furajere : premixuri, concentrate PVM, nutreuri combinate; - s nu influeneze funciile organismului ; - impact minim (sau absent) asupra mediului ; Pentru a se preveni fenomenul de antibiorezisten la o populaie bacterian se va recurge i la schimbarea periodic a antibioticului furajer folosit ntr-o ferm. n mare majoritate i antibioticele de uz furajer se obin biotehnologic fiind produse de microorganisme : bacterii, actinomicete, ciuperci, licheni, fcnd parte din categoria metaboliilor secundari (idiolii). Prezentm n continuare principalele tipuri de antibiotice de uz furajer, produse prin biosintez microbian, care au fost i sunt nc utilizate la noi n ar. PENICILINELE reprezint o ntreag clas de antibiotice. Se obin prin biosintez din culturi specifice de Penicillim. Instalarea penicilino-rezistenei se datoreaz producerii penicilinazei care descompune penicilina. Sunt active pe coci gram pozitivi i pe bacili gram negativi. Penicilinele posed i proprieti antitoxice neutraliznd endotoxinele bacteriene. Absorbia intestinal este redus. Eliminarea din organism se face prin urin, bil i lapte deci nu se vor administra la vacile n lactaie. 55
Sub form de Furadicil (procain-penicilina) se utilizeaz n profilaxia enteropatiilor, pentru ameliorarea strii de sntate i stimularea creterii la pui, purcei, viei n doze de 10-50 ppm. TETRACICLINA se obine din culturile de Streptomyces texasi sau prin declorurarea aureomicinei. Are spectru larg de aciune asupra germenilor Gram pozitivi i a unora negativi, a ricketsiilor i asupra unor virui i protozoare. Sub form de tetraxin se utilizeaz n profilaxia tulburrilor gastrointestinale i n stimularea creterii la porci i psri n doze de 5-50 ppm substan activ. CLORTETRACICLINA sau aureociclina, aureomicina sau biomicina se obine din culturile de Streptomyces aureofaciens. Are cel mai larg spectru de aciune antimicrobien dintre antibioticele utilizate mai frecvent : asupra bacteriilor Gram + i - , ricketsi i virui. Sub form de Gallisan (aureociclin + moldamin), se utilizeaz preventiv n paratifoz la psri. Ca aditiv furajer se utilizeaz sub denumirea de aurex (200 UI aureomicin / mg) ; doza de 20 ppm influeneaz sporurile n greutate. Alte forme de prezentare : Vitaurom premix (40 % clortetraciclin i 1,5 mg Bi 2 ) ; Ciclofurin (15 UI aureociclin / mg de produs) i Gallisan. OXITETRACICLINA sau Teramicina se obine din culturile de Streptomyces rimosus. Are spectru larg de aciune. La tineret, n doz de 5-20 ppm stimuleaz sporul i reduce consumul specific cu 2-5 %. Restricii : se administreaz pn la 5 zile nainte de sacrificarea puilor i a porcilor. FLAVOMICINA se prezint ca pulbere amorf, incolor, produsul comercial fiind un miceliu de fermentaie uscat, obinut din culturi de Streptomyces, pus pe un suport. Doza ca aditiv furajer este de 5-10 ppm. Stabilitatea n PVM i n nutreurile combinate este de 7-8 luni. BACITRACINA este un stimulator de cretere la psri, porcine, taurine dar nu se va administra la ginile i curcile outoare. 56
Este un antibiotic cu aciune de tipul penicilinei. Se obine din culturile de Bacillus subtilis. Dup fermentare se centrifugheaz, se ajusteaz pH-ul, se adaug Zn, se deshidrateaz i se micronizeaz. Este un bacteriostatic fa de germenii Gram pozitivi i negativi i fa de micoplasme. Se prezint ca o pulbere alb foarte higroscopic, rezist la digestia pepsic i tripsic. Este precipitat i inactivat de srurile metalelor grele. Favorizeaz creterea i ngrarea tineretului (pui, purcei, viei, miei) n doze de 5-50 ppm. Administrat oral nu se absoarbe. Forme de prezentare : premix cu Zn-bacitracin 40 % ; Baciferm cu 50 g Zn bacitracin i 12 mcg B 12 / kg produs. VIRGINIAMICINA se obine din lichidele de fermentaie ale speciei Streptomyces virginiae (recoltat din solul belgian). Administrat prin NC determin creterea rezistenei florei fiziologice fa de cea patogen, mbuntete digestia i absorbia tisular a nutrienilor ; favorizeaz sinteza unor enzime implicate n metabolismul proteic. Dozele de 5-20 ppm amelioreaz sporul cu 2-5 % i reduce consumul specific cu 3-6 %. Forma de prezentare : premix cu virginiamicin 5 %. Nu se administreaz la scrofiele cu greuti peste 50 kg i nici la scroafele i vierii de reproducie. ERITROMICINA este un antibiotic izolat din culturi de Streptomyces erythreus. Acioneaz asupra germenilor prin blocarea sintezelor proteice i inhibarea ncorporrii de AA la nivelul membranei celulare. Fiind liposolubil traverseaz membrana lipidic a pereilor celulari i ptrunznd n interiorul celulelor are o activitate bacteriostatic. n NC doza este de 5-20 ppm pentru psri, porci, taurine, stimuleaz creterea ; la nivel de 100 ppm previne infeciile subclinice, efectele stresului de transport, a vaccinrilor, a erorilor tehnologice i de furajare. Forme de prezentare : Gallimicin 20 premix cu eritromicin 20 g / kg produs ; Gallimicin 100 premix cu 100 g / kg produs. 57
TYLANUL este un antibiotic de uz furajer, izolat i extras dintr-o tulpin de Streptomyces fradiae (recoltat iniial din solul Taivanului). Are specificitate asupra bacteriilor Gram pozitive (stafilococi, streptococi), spirochei : Vibrio coli, Micoplasma. Dup 48 de ore de la tratament nu se mai constat reziduuri tisulare la porci i psri. Previne dizenteria produs de Vibrio coli, rinita atrofic, enteritele colibacilare la porci. Doza de prevenie este de 100 ppm iar ca stimulator de cretere de 10-40 ppm. La psri se utilizeaz n prevenirea i tratamentul micoplasmozei la pui i a sinuzitei infecioase la curci. Forme de prezentare : Tylan 100 cu 100 g fosfat de tylosin / kg produs ; Premix Ty 10 cu 10 g fosfat de tylosin / kg premix. APRAMICINA este un produs de uz furajer izolat i extras dintr-o cultur de Streptomyces tenebrarius. Este activ fa de Salmonella i Escherichia coli la o concentraie mai mic de 16 mcg / ml. Se poate asocia cu tylanul 1/1 (cte 100 ppm) sau cu furazolidona 100 ppm A / 300 ppm F. Se administreaz prin premixuri medicamentoase n nutreul combinat n perioadele de tratament de 10-14 zile pentru combaterea enteritelor la suine. Forme de prezentare : - Apralan 100 premix n saci de 25 kg ; Apralan pulbere solubil, n flacoane de 50 g substan activ. RUMENSINUL (Monensinul) principiul activ este monensinul, un antibiotic de uz furajer obinut dintr-o cultur de Streptomyces cinnamonensis. Este un aditiv furajer pentru nutreurile combinate destinate taurinelor la ngrat. Aciune : n prestomace inhib fermentaia butiric i acetic i mrete cantitatea de acid propionic, diminu metanogeneza i ridic nivelul energetic al raiei ingerate ; consumul nu se modific. Doza de utilizare : - 20 ppm la tineretul taurin n greutate de 125-250 kg ; - 40 ppm la tineretul taurin cu greutatea peste 250 kg pn la sacrificare ; 58
III.2.2. ANTIBIOTICE ANTICOCCIDIENE
Coccidioza este o parazitoz produs de numeroasele specii ale genului Eimeria (E. tenella, acervulina, necatrix, brunetti, mivati, mitis, maxima) care poate produce pagube nsemnate n sectorul avicol. Boala este mult potenat de modificrile echilibrului ecologic n condiiile sistemului intensiv de cretere a psrilor. Prevenirea i combaterea coccidiozei se efectueaz cu produse medicamentoase specifice, n Romnia importndu-se i testndu-se numeroase preparate de firm i anume : Amprolium, Etopabat, Amprol-plus, Zoalen, Lerbeck, Nicrazin, Sulfachinoxalina, Ultrastat etc. La acestea se adaug i unele antibiotice obinute prin biosintez microbian care au i un efect anticoccidien i anume : - MONENSIN antibiotic din culturi de Streptomyces cinnamonensis ; prezentare Elancoban 100 (100 g substan activ / kg premix) cu doza de 1 % n NC, deci concentraie de 100 ppm. Nu se va administra la puii i tineretul aviar de nlocuire iar la broileri se va scoate din hran cu 3 zile premergtor sacrificrii. - AVATEC - se folosete ca Lasalocid sodium i se obine prin biosintez cu Streptomyces lasaliensis. Prezentare Avatec- premix cu 15 % lasalocid de sodiu, n doz de 75 ppm ; se scoate cu 5 zile naintea sacrificrii puilor de carne. Are activitate coccidiocid marcant, intervenind n prima faz din ciclul de dezvoltare al coccidiilor i are i un efect antimicrobian asupra germenilor gram pozitivi ; stimuleaz i ritmul de cretere la pui. - SALINOMICINUL - este un antibiotic de biosintez, obinut din cultura de Streptomyces albus. Produs comercial : SACOX 60 sau 100 care conine 60 respectiv 100 g substan activ / kg premix. Pentru prevenirea i combaterea coccidiozei aviare se vor ntocmi i programe de utilizare i rotire a produselor medicamentoase pentru a nu se instala fenomene de rezisten n efectivele de psri. La stabilirea deciziei privind utilizarea unui coccidiostatic se va avea n vedere : 59
- eficacitatea maxim fa de ct mai multe specii de Eimeria care paraziteaz obinuit n complexul avicol ; - toxicitate redus sau nul ; - s nu afecteze ritmul de cretere i consumul specific ; - s se elimine din organism, s nu lase reziduuri n carcase i organe care pot fi duntoare consumului uman ;
III.2.3. STIMULATORII DE CRETERE
ntr-o accepiune mai veche, n categoria stimulatorilor de cretere intr substanele obinute de regul prin sintez chimic dar cu aciune comparabil cu cea a antibioticelor i care sunt folosite ca aditivi furajeri n hrana tineretului din seria animal. Ne fiind obinute prin procedee biotehnologice prezentm succint produsele utilizate la noi n ar mai mult pentru a cunoate apartenena acestor preparate. CARBADOX (Mecadox) produs chimic de sintez ; stabil n nutreurile combinate. Are spectru larg de aciune fa de germenii Gram pozitivi i negativi, spirochete, clamidii, rickettsii. Se utilizeaz profilactic i curativ mpotriva enteritelor bacteriene. Se poate administra ca aditiv permanent n nutreurile combinate pentru tineretul suin pn la 35 kg, doza fiind de 50 ppm. Nu se va folosi dac nutreul combinat conine sub 15 % PB. NITROVIN (Payzone) stimulator de cretere pentru puii de carne i purcei. Mecanismul de aciune este incomplet elucidat ns are aciune asupra germenilor Gram pozitivi (streptococi, stafilococi, clostridii) i stimuleaz absorbia elementelor nutritive la nivelul intestinului. Compatibil cu antibioticele i coccidiostaticele este practic netoxic, fr rezidii de substan activ n carne. Doza stimulatoare este de 10-12 ppm. BAYONOX este stimulator chimic pentru creterea porcilor. Are efecte profilactice i curative mpotriva germenilor Gram pozitivi i negativi, reducnd cu peste 50 % incidena tulburrilor digestive. 60
Stimuleaz ritmul de cretere la purceii sugari i tineretul suin sub 50 kg, obinndu-se sporuri mai mari cu 5-7 %, dac se folosete doza permanent de pn la 100 ppm. Este bine tolerat de organism i compatibil cu ingredientele obinuite din hran ; se elimin repede din organism. Se folosete sub form de premix cu 10 % substan activ. RIDZOL (Ronidazol) stimulator de cretere i agent terapeutic activ n combaterea dizenteriei porcilor. Are spectru larg de aciune fa de germenii Gram pozitivi i negativi, spirochete i rickettsii. Se utilizeaz profilactic i curativ n enteritele bacteriene, avnd o toxicitate limitat i este bine tolerat. Doza de 10-50 ppm se stabilete n funcie de categoria de greutate. Nu se folosete cu 7 zile premergtor sacrificrii.
n prezent n rile din Uniunea European se urmrete eliminarea antibioticelor n scop furajer ; de fapt s-a i interzis folosirea Zn-bacitracinei, a spiromicinei, virginiamicinei i a tylanului n acest sens. Din aceast cauz unele companii i reorienteaz cercetrile pentru a obine ageni antimicrobieni cu efect de promotori de cretere i care s constituie i o alternativ natural la antibioticele furajere. n acest context se nscriu i noile produse ale firmei Alltech, respectiv : preparatul Bio-Mos, care are ca efect ndeprtarea bacteriilor care conin plasmide din tractusul intestinal de ctre manan- oligozaharidele coninute de pereii celulari ai drojdiilor (Sacharomyces cerevisiae) (vezi i la probiotice). biopeptidele ; n ultimul timp au fost izolate un numr mare de peptide active biologic care au proprieti antioxidante, aromatizante sau efecte hormonale i antimicrobiene. 61
Diferitele peptide ciclice, glicopeptidele i lipopeptidele prin activitatea lor antimicrobien i antiviral pot nlocui (alternativ) antibioticele. n aceast categorie se nscrie produsul Ultimate Protein TM 1672 format din : - dipeptide bogate n acid glutamic care mbuntete palatabilitatea hranei ; - tripeptide cu efecte asemntoare antibioticelor ; - nucleotide similare proteinelor specifice descoperite n colostru ; - oligopeptide care stimuleaz proliferarea lactobacililor. Utilizarea acestui produs este susinut i de cercetrile prin care s-a stabilit c n intestinul subire o parte semnificativ a N proteic poate fi absorbit i la nivel de peptide i nu numai ca aminoacizi.
I I I .3. AMI NOACI ZI I SI NTETI CI
Posibilitiile de producere n cantiti industriale (prin sintez chimic sau biosintez) a principalilor aminoacizi eseniali permite nutriionitilor un mod mult mai direct i eficient de echilibrare i corelare a aminoacizilor eseniali n hrana diferitelor specii i categorii de animale. Se asigur astfel o mbuntire a valorii biologice a proteinei i satisfacerea cerinelor azotate n condiiile reducerii nivelului de PB din raie sau din nutreurile combinate. Obinui prin tehnici biotehnologice, aminoacizii fac parte din grupa metaboliilor primari, alturi de acizii organici, nucleotide purinice i pirimidinice, solveni, vitamine, care sunt produi de ctre celulele microbiene n cursul dezvoltrii lor. n prezent microbiologia industrial asigur prin microorganisme specializate genetic producerea de aminoacizi eseniali i neeseniali n principal de lizin, acid glutamic, treonin, valin, triptofan, prolin, metionin i alii. n tabelul 6 sunt prezentate unele specii de microorganisme mutante auxotrofe* utilizate pentru producerea de AA prin biosintez. 62
Tabelul 6 Producerea de aminoacizi de ctre microorganisme mutante auxotrofe* (dup RAICU i colab. 1990, citat de POP i STAN, 1997)
Aminoacidul produs Microorganisme Producia (g / l mediu) L - lizin Corinebacterium glutamicum 13 Brevibacterium flavum 34 Brevibacterium lactofermentum 20,2 L - leucin Corynebacterium glutamicum 16 L - prolin Corynebacterium glutamicum 14,8 L - citrulin Corynebacterium glutamicum 10,7 Bacillus subtilis K 16,5 L - ornitin Corynebacterium glutamicum 26 Brevibacterium sp. (B. flavum) 23 L - treonin Arthrobacter paraffineus 9 Escherichia coli 10,5 L - valin Corynebacterium glutamicum 30 Arthrobacter paraffineus 9 * mutantele auxotrofe, sunt microorganisme deficitare metabolic pentru c nu rspund proceselor de reglare enzimatic i au nevoie de un factor de cretere pentru a fi cultivate industrial.
III.3.1. L LIZINA
Lizina a fost primul aminoacid izolat din cazein n 1889 de ctre DRECHSEL i este unul din principalii AA limitativi din hran. n organism lizina ndeplinete numeroase funcii avnd o pondere nsemnat n structura proteinelor. Este de asemenea un important constituent al unor peptide hormonale. Intervine n urmtoarele procese fiziologice (mai importante) : - n metabolismul proteinelor, n sinteza proteinelor corporale ; 63
- este un precursor al carnitinei care particip n metabolismul acizilor grai ; - n formarea esutului osos ; - n funcia de reproducie att la masculi ct i la femele ; - stimuleaz ritmul de cretere la tineret ; - excesul de lizin poate fi utilizat ca surs de energie pentru organism asigurnd 4600 EM/kg ; Lizina pur este foarte higroscopic i de aceea se comercializeaz ca o sare a lizinei cu acidul clorhidric. Lizina monoclorhidric are formula general C 6 H 14 N 2 O 2 x HCl, cu greutatea molecular de 182,65, de culoare alb-glbuie, cristalin cu solubilitatea n ap 35 % (la 20 0 C i pH 5,5) i cu concentraii de minim 78,8 % . Se poate gsi i sub form lichid coninnd 20-50 % L lizin. Se produce n proporie de peste 80 % prin biosintez (la nivel mondial 41000 t n 1980). n acest proces, L lizina reprezint un metabolit primar produs prin fermentarea unor microorganisme auxotrofe. Astfel unele sue de BREVIBACTERIUM FLAVUM i CORYNEBACTERIUM GLUTAMICUM transform peste o treime din zahrul coninut n mediul de cultur n lizin ; cantitile obinute pot atinge 75 g lizin / litru de mediu (SASSON, 1988). n Japonia se produce lizin prin biosintez, cu MICROCOCCUS GLUTAMICUS specie, cu care se poate obine i acid glutamic sau ali AA, n funcie de dirijarea parametrilor de fermentaie i a mediului de cultur (POP i STAN, 1997). La noi n ar, prin lucrri de mutagenez, la ICCF Bucureti s-a obinut o mutant auxotrof denumit BREVIBACTERIUM LACTOFERMENTUM ICCF 3 capabil s produc 35-40 g lizin / l mediu, folosit apoi pentru producerea de lizin furajer la ntreprinderea Antibiotice Iai (POP i STAN, 1997). Marii productori mondiali de AA sintetici, comercializeaz i la noi L lizina sub diferite denumiri ca : ADM L lizine, Luta Lysin, Sewon L Lysine. 64
Un mod interesant de asigurare a lizinei n hrana psrilor este efectuat de KOUDELA i colab. 1992 citat de POP i STAN (1997) care utiliznd un premix care conine germeni productori de lizin (E. coli lys 5 x 10 8 / g premix i 125-250 g premix / 100 kg NC) a avut o influen pozitiv asupra creterii n greutate i a valorificrii hranei la puii de gin. Valorile de suplimentare a L lizinei n reetele furajere destinate psrilor i porcilor se stabilesc n funcie de aportul n acest AA al componentelor furajere de baz. Totui orientativ n nutreul combinat pe baz de porumb, proporia de ncorporare a lizinei oscileaz ntre 0,2 i 0,5 %. La aceste doze se pot satisface cerinele de lizin care la psri oscileaz de la 0,70 % la ginile outoare la 1,10 % la puii de carne (0-21 de zile) iar la suine de la 0,55 % la porcii n faza de ngrare 80-110 kg pn la 1,15 % la purceii sugari. n stare natural lizina se gsete n sursele proteice de origine animal (fina de pete, de carne, laptele praf) precum i n proteina vegetal din roturile de soia, drojdiile furajere, fina de lucern i trifoi. n cereale i n rotul de floarea soarelui lizina este deficitar.
III.3.2. D.L. METIONINA
Metionina este un alt aminoacid esenial care ndeplinete n organism funcii biologice importante i anume : - intervine n creterea organismului - n creterea lnii i a penelor - n metabolismul lipidelor - la formarea proteinelor din snge - stimuleaz ritmul de cretere la tineret i produciile la animalele adulte - influeneaz valorificarea hranei la psri i porci Metionina a nceput s fie produs n anii `50 prin sintez chimic i spre deosebire de ali aminoacizi aceast cale este i n prezent mai eficient economic n comparaie cu sinteza biotehnologic. Aceasta i datorit faptului c animalele au capacitatea 65
de a converti D-metionina, ambii izomeri ai acestui aminoacid produs industrial fiind activi biologic. Sursele naturale de metionin sunt nutreurile proteice de origine animal i roturile de floarea soarelui, n cantiti mai reduse fiind n roturile de soia n drojdiile furajere precum i n cereale. n nutreurile combinate destinate psrilor i porcinelor care au fost preparate pe baz de cereale i rot de soia se va recurge la suplimentarea cu D.L. metionin de regul n proporie de 0,03-0,1 % n funcie de aportul n acest AA al structurii de baz. Dup STILBORN, 1990 la o reet format din porumb i rot de soia pentru puii de carne, doza minim de D.L. metionin necesar a fi suplimentat este de 0,35 %. De fapt nivelele de suplimentare ale D.L. metioninei urmresc satisfacerea cerinelor n tioaminoacizi care la psri variaz de la 0,90 % la broileri la 0,58 % la ginile outoare (ou de consum) iar la porcine de la 0,62 % la purceii sugari la 0,42 % la suinele din categoria de greutate 80-110 kg. i la vacile performante metionina devine un factor de limitare a produciei de lapte dar administrarea n hran a aminoacizilor se face numai dup o prealabil protejare de atacul microsimbiont. Astfel n Frana se comercializeaz deja preparatul Smartamina (metionin protejat pentru vacile de lapte) n doz de 12 g / cap / zi. Suplimentarea raiei n primele 70-100 de zile de lactaie a determinat o cretere a produciei de lapte cu 3,02 l, a proteinei din lapte cu 0,07 % dar nu s-a influenat coninutul n lactoz i grsime al laptelui.
III.3.3. L ACIDUL GLUTAMIC
Acidul glutamic este un aminoacid neesenial dar important pentru c muli AA sunt sintetizai prin transaminare prin intermediul lui. Este utilizat cu precdere pentru evidenierea gustului la alimente i furaje (destinate porcinelor) sub form de L glutamat monosodic. Se pare c acidul glutamic este primul aminoacid produs industrial dar pe cale chimic nc din primul deceniu al secolului 66
XX de IKEDA (1908) fiind folosit pentru producerea glutamatului de sodiu (POP i STAN, 1997). n prezent este biosintetizat prin culturi de CORYNEBACTERIUM GLUTAMICUM i BREVIBACTERIUM FLAVUM. Mediul de cultivare a unor tulpini specializate din genurile de mai sus poate fi acidul acetic, etanolul, n parafinele cu randamente de 40-60 g / l mediu. i la noi n ar prin lucrri de mutagenez la ICCF Bucureti s- au obinut sue mutante de BREVIBACTERIUM LACTOFERMENTUM care au produs pn la 60 g / l de acid glutamic. Dup SASSON (1988) n lume, producia de L acid glutamic la nivelul anului 1980 a fost de 360000 t.
III.3.4. L TRIPTOFANUL
Triptofanul este un precursor n biosinteza unor substane biologic active, respectiv a acidului nicotinic, a acidului indolacetic i a serotoninei. Pentru psri i porci este un aminoacid esenial cu rol n metabolismul protidic. Contribuie la stimularea ritmului de cretere, a produciei de ou cu reducerea consumurilor specifice. Intervine i n funcia de reproducie precum i n creterea muchilor scheletici. Se cunoate c aproximativ 2 % din triptofanul raiei zilnice se convertete n niacin la pui i peste 7 % la purcei. n prezent triptofanul se obine prin fermentaie microbian, utilizarea sa n alimentaia animal fiind limitat ndeosebi de producia redus cantitativ. Cerinele n triptofan la monogastrice se difereniaz puin fiind de 0,20 % la broileri i de 0,16 % la ginile outoare respectiv de 0,19 % la purceii sugari i de 0,11 % la suinele supuse ngrrii n greutate de 80-110 kg. L triptofanul destinat produciei furajere are o puritate minim de 98 % i un coninut maxim de 2 % ap.
67
III.3.5. L TREONINA
Treonina a fost ultimul AA izolat de ctre ROSE n anul 1935. Cu descoperirea acesteia a fost posibil s se stabileasc tot setul de cerine n AA al animalelor utilizndu-se formulele purificate de AA i stabilindu-se bilanul AA, antagonismul dintre ei i digestibilitatea lor rezultnd necesarul de aminoacizi. Treonina ndeplinete funcii importante n organism intervenind n metabolismul altor AA, este un precursor al glicinei, se afl n concentraii ridicate n epiteliul gastrointestinal n enzimele digestive i n imunoproteine ; favorizeaz creterea muchilor scheletici. Producerea industrial de L treonin prin tehnologii fermentative s-a dezvoltat n anii `80, fiind destinat ndeosebi industriei de nutreuri combinate pentru porci i psri. Orientativ necesarul de treonin la psri oscileaz de la 0,80 % la puii broileri (0-21 de zile) la 0,47 % la ginile outoare a cror ou sunt destinate consumului. La suine cerinele cele mai ridicate sunt la purceii sugari de 0,70 % iar cele mai reduse de 0,42 % sunt la categoria porcinelor supuse ngrrii la 80-110 kg. n prezent se livreaz n scop furajer la o puritate de minim 98,5 % i umiditate de maxim 1,5 %. Tabelul 7 Ordinea teoretic a AA limitani, din unele furaje, pentru cretere la suine i psri
Nutreul Suine Psri 1 2 3 1 2 3 a b c d e f g Orz Lys Thr SAA Lys Arg SAA Porumb Lys Trp Thr Lys Arg Ile Ovz Lys Thr SAA Lys SAA Thr Orez Lys SAA Thr Lys SAA Thr Secar Lys Thr Trp Lys SAA Thr Sorg Lys Thr SAA Lys Arg SAA Triticale Lys SAA Thr Lys SAA Thr Gru Lys Thr Val Lys Thr Arg Distilat solubil de grune de porumb Lys Trp Thr Lys Arg SAA 68
a b c d e f g Fin de gluten de porumb Lys Trp Thr Lys Trp Arg Tre de orez Lys SAA Thr Lys SAA Ile Tre de gru Lys Thr Met Lys SAA Thr Fin de snge Ile SAA Thr Ile SAA Thr Fin de pene Lys His Trp Lys His Trp Fin de pete Trp Thr SAA SAA Arg Thr Fin de carne i oase Trp SAA Ile SAA Trp Ile Fin de carne Trp SAA Thr SAA Trp Thr Fin de arahide Lys SAA Thr Lys SAA AAA Fin de soia SAA Thr Lys SAA Thr Val Fin de floarea soarelui Lys Thr SAA Lys SAA Thr Lys lizin Trp triptofan Ile - izoleucin SAA AA cu sulf (met + cis) Thr treonin His - histidin Val valin Met metionin Arg - arginin
I I I .4.PREBI OTI CE
Termenul de prebiotice n sensul propus de POP i STAN (1997) definete : substanele care susin sau favorizeaz dezvoltarea i multiplicarea microorganismelor probiotice. n aceast categorie se pot include substanele acidifiante, care creeaz la nivelul digestiv un pH favorabil dezvoltrii microflorei i oligozaharidele care asigur substratul energetic pentru anumite genuri microbiene de regul a celor din categoria probioticelor.
III.4.1. OLIGOZAHARIDELE
Oligozaharidele pe lng substratul nutritiv energetic necesar microflorei digestive contribuie i la igienizarea tubului digestiv prin aderarea la acestea a germenilor poteniali patogeni datorit receptorilor specifici pentru hidraii de carbon ; prin acest mecanism germenii devin tranzitani i se elimin ntr-o proporie semnificativ mai mare din organism. 69
Dup POP i STAN (1997) cele mai disponibile oligozaharide sunt : fructooligozaharidele (FOZ), alfa glucooligozaharidele (o - GOZ), beta glucooligozaharidele (| - GOZ) i alfa galactooligozaharidele (o - GalOZ) care se pot obine fie prin procedee de extracie din plante sau (n principal) biotehnologic prin sintez enzimatic. Alte FOZ folosite n scop prebiotic sunt Raftiloza (obinut prin hidroliza enzimatic a inulinei) sau Profeed ul. Pentru prebioticele cele mai utilizate se recomand doze care s asigure 0,1-0,2 % GOZ i 0,25-0,75 % FOZ. Se apreciaz c cele mai bune rezultate sau obinut la purcei i iepuri la care prebioticele asigur sporuri mai mari n greutate, reducerea consumurilor specifice i mbuntirea strii de sntate prin diminuarea numrului de germeni de Salmonella, E. coli sau Clostridium din intestin (POP i STAN, 1997). Relativ recent s-a demonstrat c manan oligozaharidele derivai din pereii celulari ai drojdiilor pot reduce colonizarea cu germeni patogeni (Salmonele, coliformi) a tractusului gastrointestinal. Ca produse prebiotice n uz se poate cita gama : Bio Mos (pe baz de manani) realizat de firma Alltech prin fermentarea unor zaharuri cu Saccharomyces cerevisiae ; se incorporeaz n cantiti de 0,5-1 kg / t n NC destinate psrilor (Avi Mos) porcinelor (Por Mos) i iepurilor (Lapo Mos). S-a demonstrat c preparatele Bio Mos pot reine bacteriile patogene de tipul Salmonella i E. coli deoarece acestea au la suprafaa lor lectine ataabile manozei. Legarea de aceste oligozaharide i nu de celulele epiteliale din intestinul subire asigur eliminarea acestor gemeni odat cu fecalele. S-a constatat deasemeni c gama de produse Bio Mos determin i stimularea sistemului imun iar prin absorbia micotoxinelor de tipul aflatoxinelor mbuntete calitatea furajelor i implicit starea de sntate a animalelor.
70
III.4.2. SUBSTANELE ACIDIFIANTE
Dup REDDY (1994), substanele acidifiante prin efectul de inhibare a nmulirii germenilor patogeni (ca de exemplu Salmonella, Clostridium, Staphylococcus, Escherichia) i de favorizare a multiplicrii microorganismelor utile (lactobacili, bifidobacterii, drojdii) se ncadreaz n categoria probioticelor. Dar de fapt pentru c aceste substane creeaz la nivelul tubului digestiv, condiii de mediu (pH acid) prin care se favorizeaz dezvoltarea i multiplicarea microorganismelor probiotice (POP i STAN, 1997) se poate aprecia ca fiind mai oportun clasarea acidifianilor n categoria prebioticelor. Pe lng efectele de mai sus, acizii organici, prin acidifierea hranei i a apei mai determin : - creterea conservabilitii i a valorii nutritive a furajelor murate ; - palatabilizarea raiilor furajere ; - mbuntirea absorbiei i utilizrii substanelor minerale deoarece pot aciona i ca ageni de chelatare ; - creterea conversiei pepsinogenului n pepsin - favorizeaz scindarea unor nutrieni (de exemplu hidroliza amidonului necesit un pH de 6,5 iar scindarea dextrinei de ctre gluco amilaz un pH de 4,4. n scop acidifiant se pot utiliza att acizii anorganici (acidul clorhidric, sulfuric, fosforic) dar mai ales cei organici : acidul lactic, propionic, citric, sorbic, formic. n prezent acizii organici sunt obinui n principal prin metode biotehnologice. Efectul administrrii acidifianilor la diferite specii i categorii de animale : - la porcine, dintre numeroasele rezultate consemnate la aceast specie se poate evidenia : c adugarea de acid lactic n apa de but la purceii nrcai poate asigura mbuntirea vitezei de cretere, a conversiei hranei i reducerea numrului de E. coli n intestinul subire (COLE, 1970) ; 71
- riscul diareei se reduce semnificativ la purcei prin introducerea n adptori de acid lactic 5,75 N pn la un pH de 4,8 ; acidifierea hranei purceilor cu vrsta ntre 10-42 de zile cu HCl 0,2 N asigur o eritropoez mai stabil, reducerea incidenei enteropatiilor, creterea concentraiilor de Fe i Cu n ser, ficat, splin (ZDUNCZYK i colab., 1983) ; = acidul formic (3 %) adugat n raie pn la obinerea unui pH de 3,6 a determinat o cretere a sporului n greutate cu 10 % (ROSS citat de POP i STAN, 1997 ; un amestec echilibrat de acid formic i propionic i sruri ale acestor acizi (formiat de Ca i propionat de Ca) n produsul Formac SP previne multiplicarea exploziv a E. coli i a Salmonelei, stimuleaz activitatea enzimelor digestive (a pepsinei) mrind digestibilitatea substanelor nutritive i indicatorii zootehnici. Alte produse acidifiante de firm destinate porcinelor care pot fi citate sunt : Digest Acid Plus ; Acid Way al firmei americane Cenzone ; Biotronic al firmei austriece Biomin. - la psri, ndeosebi la broilerii de gin i de curc, acidifierea hranei sau a apei de but determin reducerea mortalitii, creterea greutii la livrare i reducerea consumului specific (POP i STAN, 1997). Aceti autori arat c la psri acidul lactic este totui ineficient, acidul propionic (n doze de pn la 0,8 %) reduce semnificativ ncrctura de Salmonella, fr performane de cretere, rezultate asemntoare obinndu-se i cu acidul formic n proporie de 1 % ; - la taurine, de fapt la viei s-a stabilit c acidifierea apei de but prin introducerea n adptori de acid lactic 5,75 N pn la un pH de 4,8 diminueaz riscul producerii diareelor ; Ca i preparate conservante la producerea nutreurilor murate (vezi subcapitolul III.1.3.) pentru acidifierea biomasei vegetale sunt n uz urmtoarele produse : Action Protoguard 2000 pe baz de acid formic i formaldehid cu doza de 2-6 l / t nutre ; Add F cu acid formic ; SUL 45 plus, cu acid sulfuric i acid propionic n doz de 2,2- 4,5 l / t etc. 72
I I I .6. PROBI OTI CELE
Cnd o tehnologie de cretere corespunde cerinelor specifice ale animalelor, mbuntirea performanelor zootehnice este legat de identificarea posibilitilor de potenare a calitilor intrinsece a animalelor, precum i de reducerea factorilor patogeni susceptibili de interferare sau alterare a acestor potenialiti. Pentru cea de a doua condiie a dezideratului se poate recurge la produsele care fac parte din categoria probioticelor. ntr-o lucrare de prezentare a probioticelor, GHERGARIU (1995) n istoricul acestei categorii de aditivi furajeri precizeaz : termenul de probiotic a fost inventat de PARKER (1974) spre a se descrie microorganisme vii a cror aciune este opus antibioticelor i care contribuie la meninerea sau restaurarea echilibrului microbian intestinal. i n definiiile formulate de LOPEZ, MARQUEZ i FULLER (1989) se statueaz c probioticul constituie un supliment furajer microbian care amelioreaz echilibrul microbian intestinal. Mai recent REDDY (1994) i BALLARINI (1994) citai de GHERGARIU constatnd c i alte ingrediente nemicrobiene pot menine i / sau restaura echilibrul microbian intestinal i s mbunteasc biodisponibilitatea unor nutrieni, redefinesc noiunea de probiotic prin : organisme i / sau substane capabile s contribuie la meninerea echilibrului microbian intestinal. n acest context, dup REDDY (1994) probioticele se pot mpri n urmtoarele categorii : a) bacterii b) levurile i unii micei c) enzime d) acidifiante Pentru c fiecare categorie de mai sus are o specificitate de aciune care o i particularizeaz la care se adaug i faptul c unele definiii ale probiozei se refer exclusiv la efectele benefice ale unor microorganisme, n aceast lucrare tratm n subcapitolul probiotice, grupele a i b, enzimele furajere i acidifiani prezentndu-se distinct. 73
Dar dac, dup cum s-a vzut, acidifiantele i oligozaharidele au fost ncadrate n categoria prebiotice pentru c asigur condiii de multiplicare a florei probiotice, atunci i grupa de enzime care de fapt rezult din activitatea acestor microorganisme (la nivel intestinal sau industrial) poate constitui o alt categorie de aditivi furajeri i anume cea a postbioticelor.
A). BACTERIILE PROBIOTICE
n sistemele de cretere naturale a animalelor, traiectul digestiv este populat de o microflor care n timp i-a consolidat o influen benefic asupra gazdei. Creterea artificializat i intensiv cu hrnire unilateral i simplificat, cu utilizarea de diferii nlocuitori i medicamente peste care se suprapun i factorii de stres are ca efect i diminuarea cantitativ a microflorei intestinale i chiar dispariia unor genuri bacteriene. n ultimul timp, ameliorarea bilanului nutriional i sanitar al animalelor prin administrare de culturi bacteriene benefice face obiectul unor studii aprofundate n prezent devenind o obinuin utilizarea probioticelor. Genurile microbiene cu proprieti probiotice mai frecvent utilizate sunt : - Lactobacillus, cu speciile delbrucki subspecia bulgaricum ; L. acidofilus, L. casei, L. fermentum, L. plantarum, L. brevis, L. cellobiosus, L. lacticus. - Bifidobacterium, cu speciile B. adolescentium, B. animalis, B. bifidum, B. infantum, B. longum, B. termophilum. - Enterococcus ; ex. E. faecium. - Streptococcus ; S. salivarius subspecia termophilus. - Lactococcus ; L. lactis subspecia lactis ; subspecia cremoris. - Clostridium ; C. butyricum. - Propionbacterium. - Pediococcus. 74
- Bacillus ; B. subtilis.
Este de observat c Lactobacillus i Enterococcus sunt genuri prezente n cantiti importante (de ordinul 10 4 10 8 / g) n structura microflorei digestive a porcilor, psrilor i vieilor. Prin administrarea probioticelor bacteriene la animale se poate obine : un efect nutriional direct, manifestat prin mbuntirea performanelor animalelor, cuantificabile prin criterii zootehnice i anume : sporuri n greutate mai mari i consum specific mai redus, producii mai ridicate. Aceste efecte se obin datorit urmtoarelor mecanisme de aciune a probioticelor : - diminuarea pH-ului intestinal ; ex. plecnd de la lactoz, lactobacilii asigur producerea de acid lactic i un pH acid impropriu germenilor patogeni prin care se diminu diareele la tineret. - stimularea produciei de enzime endogene. - producerea de peroxid de hidrogen ceea ce activeaz sistemul lactoperoxidaz thiocianat. - aport suplimentar de aminoacizi, vitamine i acizi organici. - controlul produciei de amine (antitoxine). - modificarea cheltuielilor metabolice pentru funcia digestiv a animalului. efectul sanitar : probioticele contribuie la ntrirea aprrii naturale a organismului efectund de fapt o igienizare digestiv datorit urmtoarelor caracteristici de aciune : mpiedic colonizarea intestinului de ctre germenii patogeni favorizat de factorii de stres cum ar fi schimbarea drastic a regimului alimentar, antibioterapia etc. Acest efect de barier prin care flora 75
existent se opune implantrii unui nou germen se poate explica prin : - competiia la disponibilul de nutrieni precum i prin producerea de ctre flora probiotic a unor metabolii cu efect toxic asupra germenilor patogeni, ca de exemplu a acizilor grai volatili ; - ocuparea de ctre flora probiotic a site- urilor de fixare de la suprafaa mucoasei digestive. reducerea translocaiilor bacteriilor patogene la nivelul ganglionilor limfatici intestinali. stimularea imunitii organismului, datorit: - creterii nivelului anticorpilor (ex. n cazul Lactobacillus plantarum), - sporirii activitii macrofagelor, - creterii numerice a celulelor implicate n rspunsul specific imun : limfocite T i B, - modereaz sau chiar neutralizeaz aciunea imunodepresoare a unor micotoxine, - lactobacilii dup 7 zile de la administrare determin o cretere a imunoglobulinelor n lichidul intestinal. alterarea metabolismului unor germeni patogeni prin mrirea sau inhibarea activitii unor enzime. secretarea de substane antibiotice, de ctre culturile de bacterii lactice. Reducerea incidenei microorganismelor patogene de la nivelul tubului digestiv contribuie la ameliorarea efectului nutriional al probioticelor bacteriene. Probioticele ajut la dezvoltarea timpurie a microflorei intestinale n cursul primei colonizri postpartum sau a recolonizrii dup antibioterapie (oral).
76
Tabelul 8 Activitatea metabolic a microorganismelor n intestin (dup COATES, 1980)
Activitatea metabolic n tubul digestiv Aciune asupra gazdei Nociv Benefic - Proteoliz - Degradare de AA - Sintez de AA - Transformri ale acizilor biliari i a sterolilor - Hidrogenarea acizilor grai - Sinteza de vitamina K i B - Crearea unui necesar ridicat de acid pantotenic i de vitamina C - Pierderi de AA - Exces de amoniac - Produi finali toxici - Diminuarea digestiblitii grsimilor - Diminuarea absorbiei Ca - Agravarea carenei de Zn - Accentuarea efectului unei carene - Posibilitatea creterii cerinelor - Eliberarea de AA din alimente i din proteinele endogene. - Reutilizarea NH 3 n sinteza de AA - Creterea eliminrilor de colesterol - Prevenirea excesului de absorbie sau de retenie a Ca - Beneficii incerte pentru coprofage
B). LEVURILE I UNII MICEI PROBIOTICI
Cele mai utilizate levuri ca probiotice sunt : Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces boulardi, Candida pintolopessii iar dintre micei unele tulpini de Aspergillus. Administrarea acestora n seria animal se bazeaz pe urmtoarele efecte : - mresc disponibilitatea digestiv a nutrienilor din furaje ; - cultura de drojdii vii de S. cerevisiae la rumegtoare determin o cretere a sintezei de protein microbian, 77
reducerea metanogenezei i stimuleaz formarea de AGV n rumen ; - ne fiind antibiosensibile, asocierea acestora cu antibioticele furajere permite obinerea unor rezultate productive superioare, o astfel de combinaie fiind carbadoxul + levurile administrate la purcei la vrsta de 5-8 sptmni ; - exercit o aciune micotoxic ; ex. STANLEY i colab., ntr-un experiment controlat, administreaz la puii broiler timp de 4 sptmni 5ppm aflatoxin ; la un lot de pui suplimentarea hranei cu 0,1 % cultur de S. cerevisiae a redus depresia sporului n greutate, a proteinemiei precum i hipertrofia ficatului, cordului i splinei ca reacie la aflatoxin ;
Calitile pe care trebuie s le ndeplineasc un probiotic microbian sunt : s aibe capacitatea de supravieuire pe parcursul tranzitului digestiv la urmtoarele condiii : - n gur la aciunea litic a lizozimului salivar ; - n stomac la un pH foarte acid (uneori sub 3) ; ntr-o suspensie de suc gastric artificial cu pH = 3 la 37 0 C, Lactobacillus casei, L. plantarum, L. acidophilus au supravieuit peste 3 ore n schimb L. bulgaricus nu rezist peste o or. Timpul de rezisten se poate mri prin includerea probioticelor pe substraturi alimentare ; - n intestinul subire trebuie s reziste aciunii sucurilor biliare ; s-a stabilit o corelaie ntre rezistena unei tulpini bacteriene la sucurile biliare (care au proprieti antibacteriene) i puterea de a se coloniza n intestin ; s prezinte aderen satisfctoare la mucoasa peretelui intestinal ; s produc anumite substane cu efect antimicrobian ; Pentru c uneori efectele probioticelor nu sunt evidente i chiar contestate de unii autori s-a cutat s se stabileasc condiiile 78
dependente de animal i de hran n care eficacitatea acestor preparate biologice este maxim i deci rentabil. Astfel unele rezultate contradictorii s-ar putea explica prin urmtoarele situaii : - impreciziile privind natura, originea, caracterul re- nsufleitor, doza, durata sau calea de aport a microorganismelor utilizate ; - necunoaterea echilibrelor nutritive ale raiilor furajere sau prezena altor aditivi furajeri cu efect antagonic ; - informaiile reduse n ceea ce privete starea fiziologic i patologic a animalelor, a condiiilor climatice sau ale microbismului local ; n conduita prezent, pentru o mai bun eficacitate, probioticele se pot recomanda : - la nou-nscui pentru colonizarea bacterian a tubului digestiv ; - la tineretul din seria animal pentru prevenirea tulburrilor gastro-intestinale, ndeosebi nainte, n momentul i dup nrcare ; - la orice vrst, n perioadele de stres legate de tehnologiile de cretere : schimbarea raiei, lotizri, vaccinri ; - pentru prevenirea unor micotoxicoze dup antibioterapie (mai ales oral) ; - ca imunostimulatori ; Dovada eficacitii unui probiotic n condiiile practice de folosire n producia animal se face prin raportare la grupa de animale martore i eventual la grupe de animale care consum furaje care conin un aditiv cu eficacitate cunoscut. Se stabilete efectul asupra nivelului de cretere, a indicelui de conversie, a morbiditii i mortalitii, eventual asupra funciei de reproducie ; se fac corelaii asupra relaiei doz / efect. Dac se suspecteaz calitatea unui preparat biologic atunci se efectueaz : 79
- controlul activitii microbiene : identificarea suei, activitatea enzimatic n vitro. - controlul eventualelor contaminri chimice sau biologice ; - controlul stabilitii n condiiile depozitrii ; durata i condiiile depozitrii ; - controlul n condiiile de garanie a stabilitii i conservrii formelor comerciale ; Se menioneaz condiiile de utilizare, respectiv specia de animale la care forma comercial este destinat precum i modul de folosire detaliat. De asemenea se urmresc precauiile care trebuie luate naintea sau n cursul ncorporrii preparatului n raia furajer.
Si n ceea ce privete probioticele, Romnia nu dispune n prezent de capaciti industriale n lucru pentru a produce aceste preparate biologice, fiind o pia de desfacere pentru multe companii strine. Astfel de la firma Alltech Inc. se pot obine probioticele All Lac i Lacto Sacc (un complex de lactobacili i drojdii destinate suinelor), firma olandez Franklin Products Inc. produce i comercializeaz produsul Fralac LBC pe baz de Streptococcus faecium, compania Santel produce seria de probiotice Levucell pe baz de culturi vii de drojdii ; bacteriile acidolactice sunt i componentele de baz pentru probioticele din gama Protexin ale firmei Probiotics Int. Ltd. din Marea Britanie, tot bacteriile lactice constituie baza probioticelor din seria Probios ale firmei Pioneer, iar probioticul francez Paciflor conine spori maturi de Bacillus (POP i STAN, 1997). Mai sunt i alte probiotice realizate pe baz de culturi de drojdii vii de Saccharomices cerevisiae i anume : Yea-Sacc produs de firma Alltech Inc. sau Diamond V Yeast Culture i Diamond V XP Yeast Culture ale firmei Diamond V Mills Inc. 80
Dintre probioticele romneti cea mai lung circulaie (prin anii 85) a avut-o Lactosilul produs i difuzat de ctre Institutul de Biologie i Nutriie Animal (IBNA) Baloteti, fiind format din culturi selecionate de bacterii acidolactice cu recomandarea de a fi folosit la nsilozarea nutreurilor n doz de 1 kg / t siloz precum i ca adaos n hrana tineretului animal n cantiti zilnice de 50-200 g la purcei i de 100-500 g la viei pentru efectul terapeutic n bolile gastrice. III.6.1. PROBIOTICE LA PSRI
La psri pe lng alte funcii, ingluviul reprezint i un punct de plecare n regularizarea florei din intestin. n acest segment al traiectului digestiv, lactobacilii fixai la nivelul epiteliului sunt dominani. Un metabolit al activitii lor, dac sunt suficient de numeroi este acidul lactic care reduce pH-ul coninutului ingluvial la valori acide de 4,5. n timpul stagnrii i apoi a trecerii prin gu, furajele se inoculeaz cu bacterii lactice care pot contracara germenii patogeni mpiedicndu-se colonizarea cecumurilor puilor cu salmonele. Dup BURKETT i colab. (1977) suplimentnd o raie pentru puii de carne fie cu lactobacili, fie cu levuri sau cu un amestec de cele dou probiotice, constat dup 4 sptmni o conversie alimentar superioar la lotul cu lactobacili, dar acest avantaj s-a diminuat la vrsta de 8 sptmni. n alte cercetri s-a stabilit c administrarea de lactobacili la pui pe parcursul a 8 sptmni are un efect semnificativ asupra creterii i a conversiei hranei. Cu un regim la care nivelul de lizin i metionin sunt reduse la nivelul de 90 % din optim, probioticele restabilesc performanele comparativ cu raiile necarenate. S-a stabilit c L. plantarum are i capacitatea de a sintetiza lizina. MOSS i colab., (1983) prepar o raie pentru pui pe baz de cereale n intenia de a se asigura o parte din lizin pe baza probioticului. Rezultatele au fost diferite dependent de sua bacterian utilizat. 81
Studiile de efect ale streptococilor au fost mai rare la pui, acestea fiind evaluate la 1-2 % n ceea ce privete greutatea corporal, conversia alimentar i calitatea carcaselor. De asemeni numrul coliformilor a fost mult mai sczut n cecumurile puilor din loturile experimentale, artndu-se c dozele sunt de 10-20 x 10 9 germeni / kg furaj. La ginile outoare utilizarea probioticelor este cu efecte controversate. De exemplu MILES i colab. (1981), adiionnd L. acidophilus obine o cretere semnificativ a numrului de ou n Arizona, nesemnificativ n Florida i fr efect n Dakota explicndu- se aceasta prin diferenele de clim. Nu s-au constatat diferene determinate de creterea ginilor n baterii sau la sol. Cu un probiotic aparinnd genului Bacillus s-a constatat c se reduc simptomele coccidiozei i se amelioreaz sporurile n greutate. GUILLOT i YVORE (1990) i alii au studiat efectul unei sue de Bacillus i de Enterococcus, pe loturi de 500 pui carne n perioada 0-6 sptmni cu observaii i la 3 sptmni. Implicaiile de la nivelul tubului digestiv a celor dou genuri s-au analizat la puii de carne cu flor controlat (gnotoxenici). Dac sporii de Bacillus au fost administrai ntr-o priz unic sunt eliminai masiv din tubul digestiv, la 28 de zile fiind prezeni la 2 din 10 pui ; la o administrare cotidien, se formeaz o populaie constant de ordinul 10 5 -10 6 spori / g pe timpul administrrii. Invers, o singur inoculare de Enterococcus faecium colonizeaz bine tubul digestiv al puilor axenici, formnd o populaie de 10 4 -10 5 / g coninut intestinal care corespunde puilor obinuii. ntr-o experien cu Bacillus probioticul PACIFLOR, s-a constatat c acesta este ineficace n privina colonizrii tubului digestiv cu salmonele, ns puii au devenit mai rezisteni la o coccidioz cu E. tenella asociat cu o subcaren vitaminic aprut pe parcursul experimentului. Efectul s-a manifestat clinic i asupra sporului n greutate. Probioticul cu denumirea comercial PACIFLOR este format din spori de Bacillus depui n colecia Institutului Pasteur (sub nr. 82
CIP 5832). De fapt sunt chiar sporii care formeaz principiul activ al produsului BACTISUBTIL (N.D) utilizai de circa 40 de ani n medicina uman contra tulburrilor digestive de origine microbian nespecific sau secundar tratamentelor cu antibiotice. Administrat la psri efectul de cretere a fost regsit la puii de carne pn la 42 de zile la doza de 500000 germeni / g furaj i la broilerii de curc. Se pare totui c la psri influena microflorei digestive asupra digestiei, performanelor productive i strii de sntate este mai pregnant dect la alte specii monogastrice. Astfel s-a demonstrat experimental c prin aport exogen de flor alctuit preponderent din lactobacili se poate menine echilibrul microbian digestiv caracteristic strii de sntate. Cercetrile efectuate pe puii de broiler imediat dup ecloziune, au artat importana populrii tractusului digestiv cu bacterii lactice nc din acest moment, deoarece la ecloziune, valoarea pH-ului din tubul digestiv al puilor este apropiat de 6, fiind favorabil proliferrii germenilor patogeni cum ar fi de exemplu E. coli. Un pH ntre 4 i 5 este favorabil dezvoltrii bacteriilor lactice. La Universitatea Auburn (SUA) s-a demonstrat c introducerea n hrana broilerilor de gin a unor culturi mixte de Streptococcus faecium i Lactobacillus acidophilus determin o reducere semnificativ a valorii pH-ului la nivelul cecumului. Se citeaz de asemeni c administrarea n hran a unor culturi de bacterii probiotice previn stabilirea Salmonelelor n cecumul puilor (POP i STAN, 1997). Totui i la psri utilizarea probioticelor determin obinerea unor rezultate cu variabilitate ridicat, dup cum rezult i din sistematizarea unor date experimentale fcute de GUILLOT i RUCKEBUSCH (1994) dup diferii autori i prezentat n tabelul numrul 9.
83
Tabelul 9 Rezultate experimentale cu probiotice la psri
Bacteria Specia Vrsta Durata administrrii n procente fa de martor S.M.Z Ind. de transformare L a c t o b a c i l l u s
Microflora tractusului digestiv al porcinelor este dominat de bacterii Gram + mai ales de lactobacili, n stomac acest gen fiind ndeosebi reprezentat de L. fermentum i L. aciodophilus i mai puin de L. salivarius. Streptococii sunt a doua mare grup ntlnit n stomac i anume : S. faecium, S. salivarius, S. faecalis. Printre alte bacterii autohtone sau nu, se ntlnesc E. coli, Bifidobacterium, Clostridium. n prima sptmn de via, dup nrcare, sau la trecerea n boxele de ngrare pot apare tulburri digestive n care crete prezena E. coli i diminu bacteriile lactice. De aici i necesitatea interveniei, n aceste perioade, pentru echilibrarea microbismului digestiv iar utilizarea probioticelor se impune prin efect. 84
ntr-un studiu se arat c dup ingerarea unui concentrat liofilizat de L. lactis izolat de la om, a diminuat numrul de coliformi n fecalele purceilor. Dup 54 de zile de tratament raportul lactobacili / coliformi a fost de 1280/1 comparativ cu 2/1 la martor ; aceste diferene rezist circa 30 de zile de la oprirea administrrii. Dup unii autori, cu lactobacili, nu se mai obin diferene semnificative la porcii n cretere ncepnd cu greuti de 35 kg. Totui POLLMANN i colab. (1980) asigurnd 10 % lactoz n raie i intubnd L. acidophilus obin un spor mediu zilnic semnificativ, evideniindu-se astfel c activitatea acestor microorganisme este dependent i de sursa de glucide din raie. MORDENTI (1986) a constat deasemeni c efectul promotor de cretere obinut consecutiv administrrii de Enterecoccus faecium la porcine poate fi mbuntit adugnd n hran peptide din zer. La tineretul porcin recent nrcat un concentrat de lactobacili inactivai n cantitate de 0,18 ; 0,36 i 0,72 ml / kg la care s-a efectuat i antibiosuplimentare, a ridicat sporul zilnic cu 5,4 %, dar la porcii n cretere - finisare nu s-a constat nici un efect. Utilizndu-se Streptococcus faecium (1,5 x 10 6 germeni / cap / zi) timp de 50 de zile, se pare c acest germen este capabil s stabilizeze flora lactic din intestin i s diminueze numrul de salmonele. Aprecierea general este c totui probioticele la suine au efecte productive mai inconstante dect antibioticele. Recapitulndu-se numeroasele studii de efect a probioticelor se poate constata c la purcei de la natere la 5 sptmni, sporul este ameliorat n 73 % din cazuri iar eficacitatea alimentar la 90 % din efectiv, n schimb porcii n cretere i finisare nu rspund dect n proporie de 1/3 la cretere i n ceea ce privete eficacitatea alimentar. Dintre produsele probiotice cu o frecven mai mare de utilizare la porcine se prezint : 85
- Acosil este un preparat pe baz de orz germinat mbogit cu bacterii lactice care amelioreaz apetitul scroafelor gestante i a purceilorntrindu-le vigoarea i prevenind diareele. - Paciflorul (spori de Bacillus) la suine poate mbuntii viteza de cretere i s diminueze consumul specific . Astfel la purceii dup nrcare, sporul mediu zilnic a fost mai mare cu 15-18 % iar consumul specific mai mic cu 4,6-6,2 % la valori asigurate statistic. La porcii destinai sacrificrii doza de 1 milion germeni / g furaj timp de 17 zile la nceput i apoi 200000 germeni / g furaj pn la sfrit asigur un efect productiv mai bun pn la greutatea de circa 65 kg cu 7,5 % la spor i mai redus cu 6,6 % la consumul specific. Efectul antidiareic a mai fost explicat i prin faptul c biomasa de Bacillus instalat la nivelul tubului digestiv poate s lizeze pereii celulari ai altor bacterii ca de exemplu Escherichia i Salmonella sau c poate intervenii i n mecanismele imunomodulatorii la nivelul organismului. HAN i colab. (1984) citai de POP i STAN (1997) suplimentnd hrana porcilor cu Lactobacillus sporogenes i Clostridium butyricum au constatat c dei efectul asupra creterii nu a fost semnificativ, mbuntirea conversiei hranei a fost important iar probioticul a determinat reducerea numrului de stafilococi i coliformi din tractusul intestinal al porcilor. Complexul de lactobacili plus drojdii coninut de produsul Lacto Sacc (Alltech Inc.) n doz de 1 g / kg furaj la scroafele gestante i lactante a determinat o reducere semnificativ a mortalitii la purceii nou-nscui urmat de o cretere a ingestei i sporuri mai mari cu reducerea consumului specific. Un concentrat termostabil de Sacharomyces cerevisiae (BIOSAF) administrat la scroafe i purcei a asigurat rezultate semnificative n ceea ce privete reducerea pierderilor n greutate ale scroafelor n lactaie, a mortalitii iar la purcei sporuri mai mari cu 3- 5 %. POLLMAN i BENDYR (1984) citai de GUILLOT i RUCKEBUSCH (1994) ncearc s specifice diferenele de 86
reproductibilitate consecutiv utilizrii probioticelor din urmtoarele cauze : - carcateristicile suei ; - vitalitatea suei n funcie de condiiile de stocare i rezistena la diferii ageni ; - dozele i frecvena ingestei ; n conduita general de utilizare a probioticelor la porcine se va mai avea n vedere c la purcei n prima lun de via, preparatele pe baz de lactobacili sunt mai de efect, n schimb dup nrcare, cnd se va dezvolta i cecumul i colonul, bacteriile sporogene devin mai utile.
III.6.3. PROBIOTICELE LA TAURINE
III.6.3.1. Probioticele la tineretul taurin - nc de la nceputul secolului s-au folosit diferite preparate de fapt probiotice pentru tratarea enteritelor la vieii nou-nscui. Mai recent TOURNUT i colab. (1976) preconizau administrarea per os a unui preparat liofilizat care coninea 6 x 10 9
lactobacili i 6 x 10 9 / ml enterococi naintea primului supt i apoi nc 3 zile pentru a se contracara dezvoltarea anarhic a E. coli. Rezultate contradictorii s-au obinut cu culturi de lactobacili inactivai administrai din zilele 3-5 de via pn n a 16 zi n cantiti de 4-12 ml / zi / animal ; unii nu constat efect alii consemneaz sporuri mai mari n greutate. Dup transporturi lungi probioticele au avut un efect evident, care ns nu s-au constatat n cazul distanelor scurte (sub 20 km). n experiene cu Streptococcus faecium, comercializat sub denumirea de Lactiferm, n doz de 5 x 10 5 germeni / g furaj la tineretul taurin cu greuti de 65-170 kg, s-a asigurat o vitez de cretere mai bun dect suplimentarea cu 80 ppm Zn-bacitracin. Cercetri efectuate n Frana la tineretul taurin au relevat c : - lactobacilii amelioreaz indicii zootehnici cu 3,4 % (semnificativ) ; 87
- streptococii cu numai 1,8 % (nesemnificativ) - prin utilizarea n asociaie a lactobacililor cu streptococi se obin efecte superioare comparativ cu administrarea separat ; - este un ecart semnificativ la administrarea suelor vii, iar doza este de 10 6 / g furaj ; S-a confirmat c n general rezultatele sunt mai bune dac de folosesc amestecuri de diferite tipuri de microorganisme : lactobacili, bacillus, bifidus i chiar levuri ca de exemplu n preparatul Cerbiobovis. Administrarea la tineretul taurin supus ngrrii a preparatului Cerbiobovis n doz de 17 g / zi, n perioade de 5-7 luni cu regim alimentar pe baz siloz de porumb sau sfecl furajer, a asigurat : - un spor mediu zilnic mai mare cu 8-12 % ; - o tendin de ameliorare a clasei i a omogenitii carcaselor produse ; La tineretul ngrat - utilizarea Cerbiobovis n faza de finisare (90-120 de zile) a determinat : - mbuntirea sporului mediu zilnic ; - ameliorarea strii de ngrare a carcaselor (cu mai puine excese de grsime); - caliti organoleptice superioare, datorit unui coninut de lipide intramusculare mai mare i o conservare mai bun a crnii ; - n perioada de nrcare, sau a tranziiilor furajere s-a ameliorat starea sanitar a animalelor ; La aceast categorie de animale este de prezentat experimentul efectuat la noi n ar de VERDE i IOANID (1995) cu Bifidobacterium bifidum. Astfel laptele degresat i sterilizat s-a nsmnat cu Bifidobacterium bifidum, tulpina VN 38 / 1993 i incubat 24 de ore la 37 0 C. Dup omogenizare, produsul a devenit de consistena smntnii, un coagul fin de culoare alb-crem, cu miros i gust acido-lactic plcut, pH = 4,5 coninnd 10 8 bacterii / ml ; concentraie la care microorganismul este activ la nivelul intestinului. 88
O conservare la frigider (5-8 0 C) peste 8 zile reduce numrul de germeni sub 10 3 , ceea ce l face ineficient. Administrarea preparatului s-a fcut din prima zi de via, odat cu primul supt, n cantitile : 50 ml n prima zi, 150 ml n ziua II, 200 ml n ziua III, 250 ml n zilele IV i V, 350 ml n zilele VI i VII i 400 ml n ziua VIII, deci n total 2 l n opt zile. Experimentul s-a efectuat pe 116 viei (din care 79 au fost n lotul martor) ntr-o ferm cu mortaliate i morbiditate ridicat prin gastroenterite neonatale, din 320 viei obinui 250 capete (62,18 %) au fcut enterit n prima sptmn de via. Vieii din lotul martor au fost tratai conform schemelor curativ-profilactice instituite n unitate, respectiv tratamente cu antibiotice i chmioterapice n funcie de antibiogram i terapie adjuvant de rehidratare. Lotul experimental nu a primit dect probioticul prezentat. Morbiditatea i mortalitatea s-a difereniat distinct semnificativ ntre cele dou loturi i anume : viei bolnavi cu diaree la lotul martor 59,49 % iar la lotul experimental 17,24 %, vieii mori la lotul martor reprezint 16,45 % iar la cel experimental 6,03 %. Mai este de remarcat eficiena economic i rolul ecologic ale acestui mod de tratament deoarece nu mai apar n mediu rezidiile date de substanele medicamentoase. Totui aa cum s-a mai putut consemna efectele ateptate ale probioticelor nu se confirm ntotdeauna aa cum se poate constata dup datele obinute de WOLTER i colab., 1987 i care sunt prezentate n tabelul 10. Tabelul 10 Influena a dou culturi asociate de Lactococcus + Lactobacillus asupra performanelor zootehnice la tineretul taurin supus ngrrii
La rezultatele de mai sus sunt de reinut ns i urmtoarele observaii : - rspunsul zootehnic este mai evident la animalele stresate ; - rezultatele sunt de regul cel puin egale cu cele obinute dup administrarea de antibiotice ; - concentraia germenilor i vivacitatea acestora n hrana administrat sunt foarte importante n eficacitatea produselor ;
III.6.3.2. Probiotice la vacile de lapte bacteriile lactice asigurate la vacile de lapte prin preparatul Cerbiobovis n cantitate de 50 g / cap au avut un efect pozitiv asupra produciei de lapte dup circa 3 sptmni de administrare. Comparativ cu alimentaia de iarn efectul este mai mare n perioada de administrare a masei verzi de bun calitate i bogat n sucuri, deoarece bacteriile produsului asigur producerea n cantiti mai mari a propionatului i lactatului. Preparatul mbuntete i nivelul materiilor proteice din lapte, semnificativ dar dup o perioad mai lung de administrare (dup circa 4-5 sptmni). La ncetarea administrrii, efectul estompeaz relativ repede. La vacile de lapte a fost testat i probioticul PACIFLOR, care dup cum se tie este format din spori de Bacillus i este utilizat n profilaxia gastroenteritelor fiind considerat un bioregulator al florei digestive. La vaci s-a folosit ns deoarece s-a constatat c n perioada cultivrii, Bacillus produce acizi organici : lactic, acetic, succinic i propionic i n felul acesta s-a urmrit modificarea raporturilor ntre diferiii AGV. ntr-o experien pe rumen artificial n mediu acid BRONGNIART arat c PACIFLOR mbuntete producia de AGV i de izo-acizi i diminu i gazogeneza. Pe vaci fistulizate acelai autor arat c PACIFLOR poate s mbunteasc degradarea substanei uscate, a NDF i a celulozei brute din silozul de porumb. 90
Taurinele adulte rspund foarte bine la Saccharomices cerevisiae i la Aspergillus oryzae deoarece aceste probiotice i exercit efectul prin influenarea fermentaiilor ruminale fr a genera efecte duntoare ca ionoforii sau antibioticele. Dup cum s-a precizat i n subcapitolul II.1 i la noi n ar se comercializeaz de ctre firma american ALLTECH, un produs cu denumirea YEA SACC 1026 care este pe baz de culturi de drojdii vii. Conform cercetrilor lui GIRARD (1996) tulpina de drojdii 1026 stimuleaz creterea i activitatea bacteriilor celulolitice, hemicelulolitice, proteolitice i a celor care utilizeaz lactatul din rumen, dac se asigur o cultur cu o concentraie de 10 4 -10 5 celule / ml i se asigur o doz zilnic de 5-10 g YEA SACC 1026 / animal. n cantitate zilnic de 50 g pn la 300 g / animal i concentraii de 1-6 x 10 7 celule / ml de cultur se stimuleaz i activitatea unor fungi celulolitici i a bacteriilor utilizatoare de lactat. Aspergillus oryzae se utilizeaz sub forma unui extract de fermentaie constnd din spori i micelii uscate pe un suport de tre de gru i care conine 1,6 x 10 3 celule viabile / g produs. Se poate incorpora ntr-un component al raiei sau ca inoculant n siloz. Cele dou produse citate pot avea ca efect sporirea produciei de lapte i carne ca urmare a consumului de hran mrit datorit creterii ratei de digestie a fibrei i a fluxului de protein microbian n intestin, care se explic prin creterea numrului de bacterii viabile n rumen, mbuntirea produciei de lactat i ncetinirea eliberrii de oligozaharide.
III.6.4. PROBIOTICE LA OVINE
i la ovine s-au utilizat probioticele avndu-se n vedere c aportul de bacterii utile vii nu poate s nu aibe efect asupra florei digestive i c la aceast specie sunt numeroase strile patologice care pleac de la dezechilibrul florei digestive. Acest dezechilibru poate fi determinat n principal de dou cauze : 1. dezvoltarea bacteriilor patogene ; 91
2. dismetabolismul digestiv care poate antrena i un dismicrobism al florei digestive. n primul caz, probioticele bacteriene devin eficiente prin prezena lor cnd concureaz bacteriile patogene, acesta fiind efectul de barier. n al doilea caz bacteriile i levurile pot interveni n reechilibrarea florei simbionte (rol eutrofic), acesta fiind efectul de stimulare al florei. Efectul bacteriilor lactice s-a urmrit n mai multe sindroame digestive i chiar boli infecioase : n gastrotoxinemia mieilor, poate apre o paracheratoz a rumenului datorit conjugrii a doi factori : acidoza rumenului determinat de un exces de amidon i insuficiena balastului n cazul raiilor srace n nutreuri voluminoase. Aceast paracheratoz poate fi punctul de plecare al unei intoxicaii clostridiene responsabil de o toxinemie mortal. n terapie se intervine prin mbuntirea ingestei de lest, se combate acidoza prin administrarea de bicarbonat de sodiu i se intervine cu antibiotice, dei efectul este deseori aleatoriu. Folosindu- se Cerbiocap n furaje 5 g / cap / zi timp de 10 zile, s-a constatat c dup patru zile de tratament mortalitile s-au diminuat semnificativ. Listerioza este o maladie bacterian dat de Listeria monocytogenes care la rumegtoarele mici determin avorturi i tulburri encefalitice. Oile sunt foarte sensibile i de regul boala este potenat dac se administreaz n consum siloz n cantiti mari, cnd silozul este impurificat cu pmnt, sau nu este bine tasat, dac nu se utilizeaz conservani iar SU este sub 25 %, cnd silozurile nu sunt bine etaneizate, sau se produc fermentaii butirice, dac silozul nu se administreaz imediat n consum, sau cnd raiile sunt dezechilibrate UF / PDI ; Ca / P - oligoelemente. n terapie, se corecteaz defectele silozului i a raiilor i se procedeaz la antibiosuplimentare. Dac s-a administrat i Cerbiocap 7 g / cap / zi timp de 15 zile, dup 5 zile de tratament incidena cazurilor clinice s-a redus, confirmndu-se efectul de barier. S-au 92
obinut astfel rezultate bune ntr-o boal n care mijloacele de combatere sunt foarte reduse. Necroza cortexului cerebral (NCC) este o boal la rumegtoare care se manifest prin tulburri nervoase determinate de o caren n vitamina B 1 . La ovine, boala poate apare la mieii nrcai, respectiv la vrsta de 3-6 luni. B 1 este un produs normal al florei ruminale, dar unele dismicrobisme reduc (inhib) vitaminoproducia n rumen : - n caz de acidoz a rumenului prin exces de amidon - prin producerea de tiaminaz datorit furajelor mucegite - se pare c excesul de sulf i o caren de cupru sunt factori favorizani Clinic se constat tulburri nervoase, patognomic fiind opistotonusul. Tratament : administrarea de B 1 , parenteral 0,5-1 g / zi, se combate acidoza i se scot nutreurile mucegite. S-a folosit i CERBIOTIC pentru efectul eutrofic asupra florei digestive 5 g / zi timp de 15 zile i ntr-adevr nu au mai aprut cazuri noi de la trei zile dup administrare. Sindromul agneaux mous, regrupeaz mai multe entiti patologice care au ns o singur expresie clinic - ataxia mieilor - i poate fi determinat de : - intoleran la laptele mamei asociat cu o indigestie a cheagului ; se manifest la mieii sub 10 zile ; - septicemii, mai ales colibacilare, la mieii peste 10 zile - carene oligo-vitaminice, mai ales de vitamina E i Se la mieii de 15-21 de zile ; Mieii sunt slabi, adinamici, se ridic greu, n stadii avansate apare ca o paralizie flasc generalizat. S-a administrat la oile mame 7 g Cerbiocap pe ntreaga perioad de alptare, efectul constatndu-se chiar la 4 zile de la administrare. 93
III.6.5. PROBIOTICE LA IEPURI
n anumite condiii de cretere i exploatare, utilizarea probioticelor devine benefic i la iepuri. Astfel sporii maturi de Bacillus incorporai n preparatul francez Paciflor administrat la iepuri a relevat c doza optim este de 10 6 germeni / g furaj. Administrat la iepuroaicele care alpteaz a fcut ca greutatea la nrcare a iepurailor s fie mai mare, confirmndu-se i la aceast specie c probioticul este un bioregulator, respectiv un stabilizator al florei intestinale. De exemplu la iepurii crescui i hrnii cu raii granulate, flora cecal devine srac fiind de circa 10 3 germeni / g comparativ cu 10 5 / g n creterea gospodreasc. Aceast srcire a florei face ca iepurii s fie foarte sensibili i s apar frecvent tulburri digestive i mortaliti n acest sistem. Streptococcus faecium n doze de 5 x 10 5 i 8 x 10 6 germeni / g furaj, nu modific consumul i greutatea corporal, dar reduce semnificativ mortalitatea de la 22,4 % la martor la 6,1 % respectiv 10,6 % la celelalte loturi.
Prin probiotice se deschide o mare cale de progres n biotehnologii cu profituri n creterea i sntatea animalelor i n securitatea consumatorilor.
I I I .7. ENZIMELE DE UZ FURAJ ER
Enzimele reprezint proteine biocatalitice, care, formndu-se n celulele organismului influeneaz desfurarea reaciilor intracelulare (CPRIA, 1998). 94
Unele enzime i exercit activitatea biocatalitic i dup izolarea lor din celulele n care se formeaz, pe aceast proprietate bazndu-se i industria biotehnologic care produce o gam divers de enzime furajere utilizate ca aditivi n hrana animalelor. Pn n prezent se cunosc peste 2500 de enzime ns la nivelul anilor 80 cca. 200 erau disponibile pentru utilizare n diferite industrii : alimentar, mase plastice etc. Fiind foarte diferite, la baza clasificrii funcionale a enzimelor propus n 1964 de Uniunea Internaional de Biochimie (I.U.B) stau urmtoarele criterii de sistematizare a acestora n clase : - enzimele sunt mprite n 6 clase definite de specificitatea reaciei, mecanismul reaciei i enzima specific. Deci fiecare enzim va aparine uneia din urmtoarele clase :
1. Oxidoreductaze catalizeaz reacii de oxidare- reducere (reacii rexdox). 2. Transferaze catalizeaz transferul unor grupri chimice de pe un substrat (donor) pe alt substrat (acceptor). 3. Hidrolaze, catalizeaz ruperea pe cale hidrolitic a legturilor C-C, C-N, C-O, O-P. 4. Liaze catalizeaz reaciile de eliminare sau de adiie ce rezult n urma ruperii legturilor de tip C-C, C-N sau C-O. 5. Izomeraze catalizeaz rearanjamentele structurale din cadrul unei molecule. 6. Ligaze catalizeaz formarea de legturi C-C, C-O, C- N etc., folosind energia legturii fosfat macroergice din ATP sau alte nucleotide.
- numele fiecrei enzime se compune din dou pri. Prima parte indic substratul sau substratele asupra crora acioneaz enzima. A doua parte a denumirii indic tipul de reacie catalizat iar la sfrit se adaug sufixul az. 95
- potrivit acestei clasificri, fiecare enzim este reprezentat printr-un cod format din majuscule E. C. (Enzyme Comission), urmat de patru cifre, cu punct ntre ele, care reprezint clasa, subclasa, sub- subclasa i numrul de ordine al enzimei n aceasta din urm. Astfel lactat dehidrogeneza (LDH) are numrul de cod : E. C. 1.1.1.27. - este nc acceptat i denumirea trivial a enzimei format din numele substratului implicat, tipul reaciei catalizate i sufixul az, ca de exemplu: lactat + dehidrogenare + az = lactat dehidrogenaza (CPRIA, 1998). n funcie de provenien, enzimele pot fi de natur endogen fiind cele produse de glande i organe i de natur exogen respectiv produse de plante, bacterii, levuri, mucegaiuri. n prezent enzimele folosite n procesele de fabricaie industrial sau semiindustrial sunt n principal de origine microbian, acestea nlocuind din ce n ce mai mult enzimele de origine animal sau vegetal. Astfel amilazele de Bacillus i Aspergillus le-au nlocuit pe cele ale grului i orzului germinat (mal) n fabricile de bere i n panificaie, proteaza de Aspergillus a substituit enzimele animale i vegetale pentru frgezirea crnii iar reninele de Mucor au nlocuit cheagul n prepararea brnzeturilor (SASSON, 1988). Utilizarea enzimelor n nutriia animal se bazeaz dup HOTTEN (1991) pe dou argumente de baz i anume : - la animalele tinere (puii, purceii, vieii) maturizarea enzimatic este progresiv, iar una din perioadele cele mai critice este nrcarea. n acest interval scurt se produce o trecere brusc de la regim alimentar lactat la unul uscat cu coninut ridicat de amidon i de celuloz brut. Pentru digestia acestor poliglucide sunt necesare cantiti mari de amilaze (pentru amidon) i de enzime elaborate de flora celulozolitic (celulaze), care pot fi suplimentate n hran prin diferite preparate comerciale. - se tie c animalele adulte dispun de sisteme enzimatice alctuite din enzime proprii (dar care la rumegtoare nu sunt specializate i pe scindarea pereilor celulari ai 96
furajelor) i respectiv enzime elaborate de microorganismele stabilite normal pe traiectul digestiv. Simplificarea raiilor furajere i intensificarea creterii animalelor poate genera insuficiena unor enzime iar prezena unor nutrieni n cantiti mari poate avea chiar un efect antinutritiv. Astfel este cazul : - coninutului ridicat n celuloz brut al raiei care se manifest ca factor antinutritiv deoarece afecteaz digestibilitatea tuturor nutrienilor (deci i a proteinei i a amidonului) cu impact i asupra indicilor bioproductivi (spor n greutate, nivel de producie, consum specific). Bineneles c efectul este mult mai mare la animalele tinere (cu sistem enzimatic imatur) sau la monogastrice. - prezena n cantiti ridicate a PnA (poliglucidelor neamidonoase) ca urmare a utilizrii grului, orzului, secarei, finii de soia n raie la monogastrice (vezi i n capitolul I referitor la prepararea concentratelor). Una din posibilitile actuale de contracarare a efectului antinutritiv al factorilor prezentai mai sus este reprezentat de utilizarea enzimelor furajere a cror producie i utilizare a devenit semnificativ din anii 80. De fapt cu aceste preparate se realizeaz o predigestie enzimatic respectiv o scindare a macromoleculelor nutrienilor pn la nivele chiar de absorbie i de metabolizare de ctre organismul animal. De aceea enzimele destinate domeniului nutriiei animale sunt n majoritate hidrolitice. n tabelul 11 se prezint cteva tipuri de enzime cu efectul i substratul int dup ROTTER i col., 1989 citai de POP i STAN, 1997. 97
Tabelul 11 Enzime furajere existente pe pia (dup ROTTER i colab., citat de POP i STAN, 1997)
Tipul enzimei Scundeaz (efect hidrolitic) Substrat int Proteaze Proteinele pn la peptide i AA Finuri de origine animal, gluten Amilaze Amidonul pn la dextrine, maltoz i glucoz Raii bogate n amidon Celulaze Celuloza pn la celobioz i glucoz Furaje bogate n celuloz Glucanaze Glucanii n oligizaharide Raii bazate pe orz, secar, gru Pentozanaze (xilanaze) Pentozanii n produi cu greutate molecular mic Secar, orz, gru Lipaze Grsimile n acizi grai superiori i glicerin Grsimi animale i vegetale Fitaze Fosforul fitic n fosfor asimilabil Furaje combinate, tre Alte enzime : hemicelulaze, pectinaze, celobiaze, aminoglucozidaze, lactoze, lactaze
Dup POP i STAN (1997), se consider c enzimele furajere trebuie s ndeplineasc urmtoarele condiii : - s fie termostabile, pentru cazurile n care prepararea furajelor se face la temperaturi nalte (extrudare, expandare, granulare etc.) ; - s fie rezistente la atacul proteolitic din stomac i intestin ; - s fie maxim de active la temperaturi i valori de pH normale fiziologic, caracteristic animalelor crora le sunt administrate ; - preparatele enzimatice s aibe o mare concentraie activ i o capacitate de dispersabilitate rapid i uniform (sunt preferate pulberile uscate) ; - s-i menin caracteristicile un timp ct mai ndelungat, chiar i n condiiile introducerii lor n premixuri vitamino- minerale ; 98
Pentru c enzimele acioneaz numai asupra substratului specific pe care l i recunoate printr-un mecanism intim, pentru a se sporii efectul i eficacitatea, preparatele comerciale sunt de regul amestecuri de mai multe enzime devenind produse enzimatice complexe. La noi n ar s-a urmrit ca ntr-o prim etap s se produc industrial preparate enzimatice cu activitate amilolitic. Astfel se poate cita : SUBTILAZA Z, obinut prin cultivarea submers a unei tulpini de Bacillus subtilis. Mediul de cultur fermentat, la maximum de activitate enzimatic se usuc prin atomizare i se incorporeaz pe un suport de tre sau fin de gru. Cu un nivel enzimatic de 1000 USKB / g pentru activitatea amilolitic i de 24 U gelatin / g pentru cea proteolitic produsul se utiliza n proporie de 1 % n nutreurile combinate destinate purceilor i vieilor. Efectul productiv se explic prin creterea gradului de utilizare digestiv a amidonului i a proteinelor vegetale din NC. Un alt preparat indigen : ASPERGILAZA Z, se obinea prin cultivarea submers a unor tulpini de Aspergillus orizae, A. niger i A. saitoi. i n acest caz mediul de cultur se deshidrateaz prin atomizare i se pune pe suport de tre de gru sau roturi, avnd nivelul enzimatic stabilit la 250 USKB / g. Sunt de amintit i produsele enzimatice obinute la Institutul de Cercetri Chimico Farmaceutice (ICCF) Bucureti i anume o proteaz bacterian biosintetizat cu tulpina ICCF 22 de Bacillus subtilis i folosit n hrana tineretului suin nrcat i Celulaza Cx produs de tulpina ICCF 23 de Aspergillus niger i utilizat n hrana porcilor destinai ngrrii. Dei tehnologiile de producere a preparatelor enzimatice se cunosc, n prezent nu dispunem de produse indigene, piaa romneasc fiind disputat i din acest punct de vedere de diverse companii internaionale. Astfel Compania Alltech (din SUA) ofer preparatul Allzyme BG (pe baz de beta glucanaze) sau Allzyme FD (pe baz de lipaze i proteaze), firma Finnfeeds are ca produse enzimatice seria Porzyme pentru porci i Avizyme pentru psri ; 99
firma Rhne Poulenc Nutrition Animale dispune de gama Rovabio pe baz de beta glucanaze sau xylanaze ; produsul Roxazyme G al firmei Hoffmann La Roche (Elveia) este un preparat enzimatic complex ce conine glucanaze, pectinaze, xilanaze, celulaze i amilaze sau produsul Natuphos, care este un preparat enzimatic pe baz de fitaze realizat de BASF i Gist Brocades recomandat monogastricelor pentru mbuntirea utilizrii digestive a fosforului din fitai. Alegerea preparatului enzimatic trebuie fcut n funcie de indicaiile din prospect pentru structura de nutre combinat unde efectul este maxim bineneles avnd n vedere i condiia de economicitate. Orientativ efectul nutritiv i productiv al acestor produse enzimatice se materializeaz prin : - utilizarea n proporii mai mari n raiile monogastricelor a unor componente furajere cu nivele mai ridicate de celuloz brut (orz, ovz) sau de PnA (gru, orz, secar) ; - creterea cu 6-8 % a valorii energiei metabolizabile a grunelor de cereale ; - mbuntirea indicilor de valorificare digestiv a substanelor nutritive din nutreurile raiei furajere ; - creterea sporului n greutate la tineret cu 5-8 %, a produciei (de ou) cu 4-7 %, n condiiile reducerii consumului specific cu 6-7 % ; - reducerea potenialul poluant al dejeciilor, de exemplu fitazele diminueaz cu peste 30 % coninutul n P al dejeciilor de la suine i psri ; - mbuntirea digestibilitii i a valorii nutritive a nutreurilor celulozice administrate n hrana rumegtoarelor ;
100
IV. TEHNICI BIOTEHNOLOGICE DE MANIPULARE A FUNCIILOR DIGESTIVE
A. LA RUMEGTOARE
IV.A.1. MICROORGANISMELE RUMINALE
La rumegtoare, rumenul constituie, unul din modelele cele mai complexe de simbioz din natur, n care au loc procese complexe de transformare i sintez a unor nutrieni specifici metabolismului acestor animale. De fapt n compartimentele gastrice preabomasale se ntreine i se dezvolt o populaie microbian foarte divers n condiiile unor constante fiziologice strns corelate, aflate sub controlul unor mecanisme regulatoare i anume : - sistemul termoregulator care asigur o constan a temperaturii la 38-40 0 C; - condiia de anaerobioz ; - substratul nutritiv bogat i variat asigurat de ingesta diferitelor categorii furajere ; - compoziia ionic constant ; - sistemul tampon, prin care se asigur n condiii normale de hrnire un pH de 6-7 ; Cantitatea de coninut rumino - reticular la bovinele adulte oscileaz ntre 30-60 kg iar la ovine de la 4 la 6 kg. Procentul de SU al coninutului ruminal la animalele hrnite echilibrat este de 10-15 % din greutatea umed. Dup unele determinri, microsimbionii ocup cantitativ 3,6 % din volumul lichidului ruminal filtrat. 101
n ansamblu, pentru un animal rumegtor microsimbionii au devenit utili : - n digestia furajelor voluminoase celulozice ; ei pot converti eficient celuloza, hemiceluloza, amidonul i glucidele simple n produi care furnizeaz energie gazdei prin intermediul AGV i a acidului lactic ; circa 60-70 % din cerinele energetice ale animalelor sunt astfel asigurate: - n sinteza unor nutrieni eseniali : AA, vitamina K, vitaminele complexului B; - n utilizarea azotului neproteic ; - prin digerarea la rndul lor de animalul gazd se mrete aportul calitativ i cantitativ de protein (ingesta postruminal este mai bogat proteic dect hrana consumat) ; nc din 1957 GILCHRIST i colab. citai de JURUBESCU (1966) n ncercarea de a clasifica aceast populaie microorganic mpart microsimbionii rumenului n trei categorii principale i anume: a) microorganisme adaptate perfect condiiilor de simbioz cu gazda ; b) microorganisme potenial duntoare, aflate n numr redus, dar care se pot nmuli n condiii anormale ; c) bacterii ajunse ntmpltor n rumen, unde s-au adaptat, ns nu au un rol important n digestie. Microorganismele din prima categorie constituie simbionii sau microsimbionii ruminali care se pot subdivide n dou grupe mai mari: - microflora ; format din bacteriile i fungii ruminali - microfauna ; dat de protozoarele ruminale
102
A.1.1. BACTERIILE RUMINALE
Dup GUILLOT i RUCKEBUSCH (1994) bacteriile constituie circa 50 % din biomasa microbian i reprezint categoria de microorganisme ruminale cea mai important i cea mai complex fiind format n principal din bacterii strict anaerobe ne sporulate. Au fost descrise pn n prezent 39 de genuri i 63 de specii bacteriene ns peste 200 de specii au fost izolate ; totui dintre aceste specii numai circa 30 pot fi considerate ca autohtone. n prezent dup activitatea fiziologic dominant s-au stabilit 6 clase bacteriene i anume : - bacteriile celulolitice ; - bacteriile amilolitice ; - bacteriile proteolitice ; - bacterii care fermenteaz lactatul ; - bacteriile metanogene ; - bacteriile lactice ; n tabelul numrul 12 se prezint principalele specii bacteriene din rumen. Tabelul 12 Clasificarea principalelor specii bacteriene din rumen (dup GUILLOT i RUCKEBUSCH, 1994) Bacterii celulolitice Bacteroides succinogenes, Butyrivibrio fibrisolvens, Cillobacterium cellusolvens, Clostridium lochheadii, Ruminococcus albus, Ruminococcus flavefaciens Bacterii amilolitice Bacteroides amylophilus, Bacteroides ruminicola, Enterococcus bovis, Selenomonas ruminantium, Succinomonas amylolitica + Bacteroides succinogens Bacterii proteolitice Bacteroides amylophilus, B. succinogenes, Butyrivibrio, Corynebcaterium, Methanobacterium ruminantium, Micrococcus, Proteus Bacterii care fermenteaz lactatul Butyribacterium limosum, Peptostreptococcus elsdenii, Veillonella alcalscens Bacterii metanogene Methanobacterium ruminantium Bacterii lactice Bifidobacterium bifidum, Eubacterium ruminantium, Lactobacillus acidophilus, Lb. Brevis, Lb. Buchneiri, Lb. Casei, Lb. Cellobiosus, Lb. Fermentum 103
Microorganismele din rumen ocup trei nie ecologice distincte i anume : - bacteriile libere n lichidul ruminal ; - bacteriile fixate la peretele ruminal ; este flora epimural, foarte specific fiind compus n principal din bacterii facultativ anaerobe : Staphylococcusm, Micrococcus, Streptococcus, Fusobacterium. Acestea utilizeaz oxigenul provenit din circulaia sangvin i contribuie la meninerea anaerobiozei la nivelul rumenului ; - bacteriile fixate pe particulele alimentare ; acestea constituie circa 75 % din populaia bacterian total din care 70-90 % este o populaie celulolitic aparinnd genurilor Bacteroides i Ruminococcus. Numrul bacteriilor dup JURUBESCU (1966) oscileaz de regul ntre 1,5 x 10 9 i 50 x 10 9 / ml de coninut ruminal i poate fi influenat de numeroi factori respectiv de specia, vrsta i starea fiziologic a animalului, anotimpul dar mai ales n funcie de specificul alimentaiei practicate. Astfel dac dup perioade scurte de inaniie numrul lor se reduce la sub 6 x 10 9 / ml coninut ruminal la o hrnire bogat n concentrate se poate ajunge chiar la 10 11 / ml. n etapele succesive de dezvoltarea a compartimentelor gastrice de la faza de monogastric i pn cnd acestea devin funcionale, adaptat la specificul hrnirii se constat importante variaii n prezena diferitelor specii de bacterii ruminale. Popularea rumenului cu bacterii are loc odat cu ingerarea hranei i prin contaminare de la mam. Prin nsmnarea rumenului, o parte din acestea ajung pn n intestin populnd i segmentul ceco- colic . Genurile de bacterii cel mai frecvent prezente n rumen sunt : Lactobacillus, Streptococcus, Ruminococcus, Ruminobacter, Methanobacterium etc. Primii care se dezvolt sunt lactobacilii, avnd ca substrat laptele care ajunge accidental n rumen n timpul suptului. 104
nc din prima sptmn de via, laptele la viei asigur i dezvoltarea bacteriilor proteolitice care aparin genului Bacteroides. Dup vrsta de 6 sptmni, proteoliza n rumen se realizeaz n deosebi de bacteriile ce aparin genurilor Bacteroides (B. ruminicola), Butyrivibrio i Selenomonas. Prezena bacteriilor celulozolitice la circa 2 sptmni de la natere explic posibilitatea introducerii n raia vieilor a fibroaselor, aceast categorie furajer grbind dezvoltarea rumenului i mrete capacitatea de adaptare a organismului la specificul de hrnire a rumegtoarelor. La rumegtoarele adulte s-au evideniat numeroase specii de streptococi, lactobacili, clostridii, un numr mare de specii bacteriene amilolitice i proteolitice care se afl n relaii de interdependen. Sunt numeroase bacteriile ruminale heterotrofe care folosesc pentru sinteza proprie proteic surse de azot anorganic ca de exemplu speciile celulozolitice Bacteroides succinogenes, Eubacterium, Butyrivibrio i Ruminococcus care aleg din mediul nutritiv NH 3 dei se afl n cantiti importante i AA. La acestea se adaug i alte genuri care pot utiliza i NH 3 i AA pentru sinteza proteic proprie. Aceste proprieti ale bacteriilor ruminale ofer perspective mari i diverse n chimizarea nutriiei pentru substituirea proteinei vegetale ct i pentru echilibrarea pe aceast cale a balanei proteice i a AA. n rumen se afl i un numr mare de microorganisme ca de exemplu Lactobacillus bifidus care elaboreaz ureaz, aceast activitate ureolitic permind utilizarea ca atare a boabelor de soia n hrana rumegtoarelor. Avnd n vedere c regimul alimentar al animalului poate s constituie principalul factor de influenare a numrului de bacterii i specii din lichidul ruminal, explic apariia indigestiilor ruminale determinate de schimbarea brusc a raiei. De fapt aceste tulburri se datoresc prezenei n rumen a unei flore cu un echipament enzimatic neadecvat substratului nou de digerat. Deoarece adaptarea echipamentului enzimatic bacterian se poate realiza n decurs de 3-10 zile de la schimbarea regimului 105
alimentar, se impune obinuirea microflorei prin cantiti crescnde a oricrui nou furaj introdus n hrana rumegtoarelor. La o hrnire constant, cunoaterea mecanismelor biologice de meninere la nivele cvasi constante a numrului de bacterii ruminale, n condiiile n care la fiecare circa 30 de minute apare o nou generaie, poate permite intervenia nutriionistului n asigurarea unei cantiti mai mari de protein digestibil microbian la nivelul intestinului (PDIM). Astfel dac se enumer principalii factori de influenare ai acestui indicator i anume: - autoliza bacterian, - activitatea enzimelor proteolitice exogene din rumen ; - consumul bacterian de ctre protozoare ; - tranzitul digestiv etc. ; Se poate astfel constata c omul poate interveni mai ales asupra celui referitor la pasajul ruminal.
A.1.2. PROTOZOARELE RUMINALE
Protozoarele sau infuzorii reprezint microfauna ruminal. n rumen s-au identificat peste 120 de specii de infuzori, numrul acestora variaz mult, ncepnd cu 200 pn la 10 6 / ml lichid ruminal (JURUBESCU, 1966). Similar bacteriilor, prezena i numrul protozoarelor depinde n principal de prezena anumitor substraturi nutritive provenite din hrana ingerat. Protozoarele ciliate se mpart n dou grupe mari : - HOLOTRICHA (cu cili dispui egal pe suprafaa corpului celular) reprezentat n principal de genul ISOTRICHA. - OLIGOTRICHA, cu genurile ENTODINIUM i DIPLODINIUM Sunt de asemenea prezente protozoare din genurile OPHRYOSCOLEX i BUTSCHILA. Rolul funcional al protozoarelor ruminale poate fi sistematizat n urmtoarele caracteristici : particip la digestia i metabolizarea substanelor nutritive din furaje : 106
- s-a constatat o relaie strns ntre numrul infuzorilor din rumen i metabolismul proteic al organismului gazd. Ingerarea de bacterii (circa 200 bacterii / minut) transform proteina bacterian ntr-o alt form (animal) cu o valoare biologic (VB) i o digestibilitate mai mare pentru animalul gazd (Qd ul proteinei infuzoriene poate ajunge la circa 80 % iar cel al proteinei bacteriene este de circa 60 %). Se apreciaz c 10-20 % din azotul coninutului abomasal este de origine infuzorian. Protozoarele au i capacitatea de sintez a unor AA eseniali ; - contribuie activ n procesul celulolizei ; prin participarea la mrunirea mecanic a particulelor vegetale (a celulozei) ; faciliteaz digestia acesteia. Se presupune c infuzorii secret i enzime celulozolitice ; - ca rezultat al hidrolizei glucidelor, unele genuri de infuzori (ISOTRICHA) pot s elaboreze pn la 10% din cantitatea total de AGV care se afl n rumen ; - contribuie la hidroliza lipidelor din hran ; au proprietatea de echilibrare a populaiei bacteriene prin ingerarea acesteia n anumite condiii ; dup cum s-a mai artat consumul poate ajunge pn la 200 bacterii / minut ; au o sensibilitate crescut la variaiile factorilor de biotop, constituind din acest punct de vedere indicatori precoce ai dismetaboliilor ruminale ; de exemplu dup 4-6 zile de inaniie oile se defaunizeaz ; variabilitatea relativ restrns a speciilor de protozoare rumenosimbionte dovedete o anumit direcie a adaptrii lor ;
Totui dup unii autori defaunarea experimental a rumegtoarelor nu pare s aibe consecine importante asupra digestiei ruminale. n primele zile dup natere (n perioada de alptare) lipsesc infuzorii. Cnd tineretul ncepe s consume concentrate i fibroase (amidon, celuloz) se creeaz i condiii de dezvoltare a infuzorilor. La miei acetia apar la 8-12 zile de la natere. Popularea rumenului se 107
face de regul prin contaminare de la coabitani. La nceput n coninutul ruminal apar infuzorii din genurile ENTODINIUM apoi DIPLODINIUM, iar la aproximativ 3 luni cei din ordinul HOLOTRICHA. A.1.3. FUNGII RUMINALI
Muli spori fungici sunt ingerai odat cu hrana de ctre animale i ndeosebi de ierbivore. Pentru c acetia nu se pot dezvolta n condiii anaerobioz se poate considera c sunt n tranzit prin tubul digestiv. Totui unele levuri din genul Candida pot fi relativ frecvent ntlnite n partea proximal a rumenului unde pH-ul este mai acid i chiar n intestin. Aceste levuri se asociaz mucoasei epiteliale i uneori ca de exemplu n cazul Candida pintolopesii se dezvolt n condiii de anaerobioz, coloniznd mucusul. Nu a fost stabilit rolul acestora n procesele de digestie. Observate de mult timp n rumen, unele microorganisme flagelate sunt n realitate zoospori de ciuperci phicomicete anaerobe. S-au identificat 4 specii mai frecvente care sunt prezente n rumenul bovinelor, ovinelor i caprinelor i chiar n cecumul cabalinelor. Zoosporii se pot fixa pe particulele alimentare i pot facilita colonizarea acestora ndeosebi de bacteriile celulolitice i metanogene. Totui efectul prezenei zoosporilor n procesele de celuloliz i proteoliz ruminal nu a putut fi cuantificat (FONTY i colab., 1988 citat de GUILLOT i RUCKEBUSCH, 1994).
A.1.4. VIRUII
n rumen dar i n cecumul i colonul cabalinelor s-au identificat bacteriofagi care pot fi liberi sau fixai pe celule sau pe detritusurile celulare. n rumen, rolul lor n reglarea populaiei bacteriene este discutabil. Multe din virusurile animale au tropism intestinal prezena Enterovirusurilor fiind un exemplu. Totui la aceast categorie informaiile sunt puine i ne-corelate din cauza dificultilor de izolare i de identificare.
108
IV.A.2 TEHNICI BIOTEHNOLOGICE DE DIRIJARE A ACTIVITII MICROORGANISMELOR RUMINALE
Interesul de a dirija activitatea microorganismelor ruminale, n scopul maximizrii fermentaiilor la nivel pre-abomasal este din ce n ce mai mare, deoarece prin diferite tehnici biotehnologice poate fi crescut gradul de utilizare al hranei sau pot fi dirijate fermentaiile ruminale ntr-un sens care favorizeaz una din formele produciei animale. Dup JOUANY i THIVEND (1986) manipularea ne-genetic a microorganismelor din rumen cuprinde trei aspecte : 1. Suplimentarea nutriional a microflorei din rumen ; aceasta are ca scop mrirea activitii microbiene precum i creterea suprafeei de atac a acestora ; Pentru stimularea activitii microorganismelor ruminale se afl pe pia diferite preparate specifice elaborate de companii de profil. n acest context se nscrie i preparatul Prosimbiont realizat de VOIA i col., 1999 pe baz de microelemente chelatate, vitamine, glucoz i probiotice. Administrnd preparatul la mieii sugari, autorii obin aceleai performane zootehnice n condiiile reducerii nivelului proteic la amestecul de concentrate cu dou puncte procentuale ; 2. Modificarea populaiei microbiene (bacterii, protozoare, fungi) i promovarea (selectarea) speciilor care sunt cele mai capabile s asigure biomasa i metaboliii ; 3. Modificarea fiziologiei tractusului digestiv (secreia salivar, motilitatea rumenului, cantitatea de lichid i a particulelor ce se gsesc n acesta) ; Pentru primul punct este necesar s se cunoasc cerinele cantitative i calitative ale populaiei microbiene din rumen. Celelalte dou puncte corespund prin definiie sistemului de manipulare, ncepnd chiar cu caracterizarea condiiilor normale de hrnire. Posibilitile de influenare a activitii microsimbionilor ruminali sunt numeroase, dar dei sunt cunoscute nu sunt suficient de 109
bune stpnite pentru a putea fi folosite n practica curent a rumegtoarelor. Pentru c sunt foarte diveri s-a simit nevoia unei clasificri a acestor factori de influen, care pentru nceput pot fi ncadrai n una din cele dou categorii i anume : C 1 Cantitatea i coninutul hranei n nutrieni : n care se discut despre ingesta de hran, structura raiilor, sursa i nivelul glucidelor i a azotului din raii, coninutul n grsimi a raiilor ; C 2 Substanele sau preparatele de intervenie : substanele tampon, ionoforii, adiia de grsimi, de protectori ai proteinei, de inhibitori ai metanului, de acizi grai volatili ramificai ;
C 1 Cantitatea i coninutul hranei n nutrieni
Tehnica de alimentaie aplicat la o anumit categorie de animale trebuie s aibe n vedere nivelul productiv i felul produciei principale (lapte, carne) iar la tineret destinaia acestuia : pentru reproducie sau pentru ngrare, deoarece modul n care se practic hrnirea poate influena i modifica activitatea microsimbionilor determinnd creterea ingestei, optimizarea fermentaie ruminale, creterea nutrienilor care scap de degradarea ruminal, dar i suplimentarea produilor finali ai metabolismului ruminal. Cercetrile n acest domeniu efectuate de nutriioniti ofer n viitor practicienilor posibilitatea de a mri disponibilul de nutrieni pentru o anumit form de producie animal dorit. Astfel au fost investigai principalii factori, pe care i vom prezenta n cele ce urmeaz, n ceea ce privete influena lor asupra fermentaiei ruminale, pasajul nutrienilor n intestinul subire i performanele productive ale animalului :
a) Ingesta de hran
Trebuie avut n vedere c nivelul hranei consumate poate s constituie un factor nutriional care poate limita performanele animalului de exemplu n cazul vacilor cu o producie foarte mare de lapte. Creterea ingestei de furaje poate avea ca efect mrirea cantitii nutrienilor care scap de fermentaia ruminal i de asemeni poate 110
mri nivelul proteinei microbiene care trece n intestinul subire. Astfel ntr-o cercetare efectuat de LYNCH i colab., citat de CLARK (1993), vacile au fost hrnite cu aceiai raie format din 40 % fn de lucern, 40 % siloz de porumb i 20 % concentrate dar n cantiti zilnice diferite i anume ad libitum precum i la nivelul de 88 %, 76 % i 64 % din consumul la discreie. S-a constatat c la aceiai raie, creterea ingestei de SU a determinat mrirea cantitii de SO i de celuloz care se degradeaz n rumen. Creterea liniar a ingestei de N a generat i o sporire liniar a N neamoniacal i nemicrobian, a N microbian, precum i a aminoacizilor liberi care au trecut n intestinul subire. i n experiena lui ROBINSON i colab., 1985 citat de CLARK (1993) care a folosit o raie format din 65 % fn mrunit i 35 % concentrate la vacile de ras Holstein, prin mrirea consumului zilnic de la 6 kg la 17 kg SO se consemneaz o cretere a cantitii de SO care fermenteaz n rumen, ceea ce are ca efect sporirea pasajului N ului bacterian ctre intestinul subire raportat la unitatea de SO aparent digerat n rumen. S reinem deci c un mecanism important prin care se poate dispune de creterea nutrienilor digestibili la vacile de lapte const n mrirea ingestei de furaje.
b) Structura raiilor
Schimbarea raportului dintre voluminoase i concentrate dintr-o raie poate constitui un mecanism prin care se poate sincroniza disponibilizarea energiei i a proteinei pentru a se maximiza nivelul proteinei microbiene i alimentare care trece n intestinul subire. RODE i colab., 1985 hrnete vacile de lapte cu o raie format pe baz de fn de lucern, grune de porumb i fin de soia ns la cele patru loturi de experien fnul a oscilat ca pondere de la 24 % la 38 %, 58 % i 80 %. Datele obinute au artat c nivelul de N microbian trecut n intestin s-a corelat pozitiv cu cantitatea de SO real digerat n rumen. Pasajul N-ului microbian i a N-ului neamoniacal a fost maxim n cazul raiilor care au coninut 38 % voluminoase i 62 % 111
concentrate. ns pasajul N-ului microbian raportat la unitatea de SO real digerat n rumen a fost mai mare n cazul raiilor cu proporii mai mari n voluminoase dect n concentrate dac s-a efectuat o corectare a raiilor n ceea ce privete consumul SU i a fost similar la toate raiile dac nu s-a procedat la amintita corecie legat de nivelul consumului. KLUSMEYER i colab., 1991 utiliznd n raiile vacilor fn de lucern, siloz de porumb, tre de porumb, fina de soia i grsime asigur la dou loturi 50 % i respectiv 67 % din SU prin componente voluminoase. S-a constatat c vacile crora li s-a administrat 50 % voluminoase au consumat mai mult SO comparativ cu cellalt lot, dar ingesta de N, SO real digerat n rumen i concentraia ruminal n NH 3 nu a fost influenat de nivelele voluminoaselor din raii. Hrnind vacile cu o raie cu 50 % voluminoase n structur s-a nregistrat o uoar descretere a pasajului N-ului microbian n intestinul subire ns s-a mrit pasajul de N neamonical i nemicrobian i de aceea nu se consemneaz diferene n pasajul N-ului neamoniacal cnd raiile au raporturi diferite ntre voluminoase i concentrate. Nici pasajul de AA liberi spre intestinul subire nu s-a difereniat semnificativ ntre raiile cu proporii diferite de voluminoase. Aceste constatri sugereaz c nivelul energiei provenite din SO fermentat n rumen este probabil unul din factorii limitani ai creterii microbiene n rumen. Prin numeroase cercetri s-a demonstrat c prin modificarea raportului fibroase / concentrate din raie se poate direciona fermentaia ruminal spre formarea unui anumit acid gras volatil, n funcie de tipul de exploatare (lapte sau carne) a animalului. Astfel raiile bogate n fibroase genereaz formarea acetatului n proporie de 55-75 % i a propionatului de 15-20 %, n schimb raiile bogate n concentrate favorizeaz formarea propionatului chiar pn la 40 % din totalul AGV (http://www.cowcash-uk./shortuff.htm , 1999). n tabelul 13 sunt prezentate proporiile de formare a acizilor grai volatili n funcie de raportul concentrate / fibroase din raii.
112
Tabelul 13
Efectul raportului concentrate / fibroase asupra proporiei de AGV la vacile de lapte (dup PHILIPSON, 1970)
ARZOLA-ALVAREZ i colab., 1999 au cercetat efectul structurii raiei, efectund experiene pe ase capre canulate duodenal, n scopul testrii diferitelor nivele de protein solubil sau degradabil asupra parametrilor fermentaiei ruminale (tabelul 14).
Tabelul 14
Concentraia de AGV i NH 3 ruminal n cazul caprinelor la care s-au administrat raii cu nivele diferite de protein metabolizabil (dup ARZOLA-ALVAREZ, 1999)
Specificare Nivelul de protein metabolizabil din raie (%) 90 115 130 C 2 (mM) 62,64 67,26 57,15 C 3 (mM) 18,89 19,76 15,49 C 4 (mM) 10,10 7,53 6,87 C 2 : C 3 (mM) 3,39 3,47 3,47 N-NH 3 (mg/100 ml) 135,61 191,1 200,46
Raia de baz a constat dintr-un amestec de concentrate i fn de lucern, fiind astfel formulate nct s asigure 90, 115 respectiv 130 % 113
din necesarul de protein metabolizabil a caprinelor pentru meninerea n limite normale a sporului n greutate. n urma analizelor efectuate nu s-au observat modificri de volum ale fluidului ruminal, dar n cazul raiilor cu o concentraie de protein metabolizabil redus rata de diluie a fost mai sczut. Nu s-au observat efecte importante asupra concentraiei acizilor grai volatili (AGV) din lichidul ruminal, dar a fost nregistrat o concentraie ridicat a amoniacului n cazul raiilor cu concentraii ridicate de protein solubil sau degradabil (135,61 mg NH 3 / 100 ml fluid ruminal n cazul raiilor cu 90 % protein metabolizabil ; 191,91 mg n cazul raiilor cu 115 % protein metabolizabil i 200,46 mg n cazul raiilor cu 130 % protein metabolizabil).
c) Succesiunea de administrare a furajelor
Atunci cnd este cunoscut natura raiei eficiena utilizrii ei poate fi mbuntit prin modificarea modului de distribuie a hranei n scopul obinerii unei fermentaii ruminale optime, pentru a putea oferii microorganismelor ruminale nutrienii necesari (JOUANY i THIVEND, 1983). Al ATTAR i colab.,1976 a demonstrat acest fapt la ovine, n cazul administrrii unor raii cu un coninut mai mare de 60 % concentrate, caz n care nivelul azotului microbian n intestin a fost dublat dac orarul de furajare s-a modificat de la 1-2 tainuri / zi la o distribuie mult mai mare (6-24 tainuri). Dac nivelul absorbiei este crescut la animalele hrnite n mai multe tainuri, multiplicarea ulterioar a acestora nu mai are efect asupra sintezei microbiene sau asupra nivelului de azot intestinal. n cazul raiilor de slab calitate este necesar suplimentarea azotului prin adugarea concentratelor, ca supliment, pentru asigurarea necesarului energetic i a azotului amoniacal necesar sintezei microsimbionilor (tabelul 15). GIBSON (1987) arat c procesele de fermentaie ruminal, care determin o digestibilitate bun a furajelor ingerate i menin n condiii normale starea de sntate a animalelor poligastrice, se desfoar la un pH cu prins ntre 6,4-6,8. 114
JARRIGE (1988) arat c meninerea unui pH de peste 6,0 la finele unui tain poate fi obinut astfel : - amestecnd concentratele cu furajele de volum ; - fracionnd distribuirea concentratelor n mai multe tainuri; - scznd nivelul glucidelor uor fermentescibile din raie ; - conservnd structura fibroas a furajelor i nveliurile seminelor de cereale ;
Tabelul 15
Efectul frecvenei administrrii hranei asupra digestiei azotului din hran (dup Al ATTAR i colab., 1976)
Specificare N microbian (Nm / mol) Fluxul de azot n duoden (g / zi) Fluxul de N neamoniacal n duoden (g / zi) x y x y x y C o n c e n t r a t e
a - - 20 39 - - 22 52 84 187 - - b 26 57 104 220 - - - - 95 99 322 327 F i b r o a s e
c - - 8 16 - - - - 10 10 - - - - 12 11 22 21 d - - 9 9 15 14 a raii cu coninut sczut de azot (2,2 % din SO) iar la b 3,3 % din SO c consum sczut de hran (700 g SU / zi), comparativ cu d unde consumul de hran este de 1500 g SU / zi x 1 sau 2 tainuri / zi ; y 6-24 tainuri / zi
JOURNET i colab., 1985 arat c administrarea n amestec a concentratelor cu fibroasele determin reducerea vitezei de ingestie a concentratelor i a ritmului de producere a acizilor grai volatili, suprimnd astfel mai mult sau mai puin aa-numitul efect al tainului. Utilizarea, la vacile de lapte, a unor raii complete (unice), cu 50 % 115
concentrate i 50 % fibroase, comparativ cu distribuirea separat a fiecrui nutre din raie, a permis creterea cantitii totale ingerate cu circa 1 kg SU. n cazul administrrii separate a fibroaselor i concentratelor cu fracionarea concentratelor n 6 tainuri, n loc de dou, a dus la o cretere a produciei de acid acetic.
d) Prepararea furajelor
Dup gradul de prelucrare a hranei JOURNET (1995) arat c metodele de procesare a furajelor pot determina : - prepararea furajelor ntr-o msur redus ; - prepararea furajelor prin supunerea acestora unor procese mai complexe ; Supunerea furajelor la un grad redus de preparare cuprinde mcinarea, oprirea etc. Aceste procesri distrug pericarpul i permit accesul microorganismelor ruminale spre endosperm. Dac se reduce dimensiunea particulelor, crete suprafaa de expunere, deci se mrete i activitatea enzimatic. Dac dimensiunea particulelor este mare, gradul de digestie al amidonului scade (GALYEAN i colab., 1979). n cazul n care dimensiunea particulelor este mare, scade producia de acizi organici, iar pH-ul ruminal este meninut la un nivel aproape neutru. Reducerea digestiei ruminale a amidonului este compensat de o cretere a digestiei acestuia n intestinul subire i gros (KIM i OWENS, 1995). Supunerea furajelor unor metode mai complexe de preparare, cum ar fi transformarea acestora n fulgi, miconizarea etc. implic supunerea cerealelor la temperaturi foarte ridicate, producndu-se gelatinizarea amidonului (EVERS i STEVENS, 1985). Gelatinizarea distruge regiunile dense, compacte de amilopectin i mrete gradul atac al microorganismelor ruminale i a enzimelor gazd. Supunerea furajelor la temperaturi ridicate determin formarea unui complex ntre amidon i protein care nu este digerat de enzimele microbiene (DREHER i colab., 1984). 116
ORSKOV i colab., 1981 afirm c tratarea boabelor de cereale cu hidroxid de sodiu determin o amplificare a fermentaiei ruminale. n tabelul 16 se prezint, pe scurt, influena dimensiunii particulelor, din structura raiei, asupra consumului, pH-ului ruminal i a acizilor grai volatili. Raia care a fost utilizat conine 55 % siloz i 45 % concentrate. Tabelul 16
Influena dimensiunii particulelor din raie asupra consumului, pH-ului ruminal i al AGV (dup ORSKOV i colab., 1981)
HOOVER i colab., 1990 testeaz posibilitile de sincronizare a relaiei dintre energie i azot dintr-o raie balansnd carbohidraii nestructurali i proteina degradabil n rumen. Dac raiile au fost ntocmite la nivele sczute n carbohidrai nestructurali i protein s-a consemnat o ingest redus de SU, de carbohidrai, de protein brut i de protein degradabil. Digestia ruminal a SU i a carbohidrailor nestructurali, precum i concentraia amoniacului ruminal, a fost de asemeni redus n cazul acestor raii. Cantitatea de protein microbian care trece n intestinul subire s-a constatat c poate fi influenat de tipul de amidon cu care este hrnit vaca. Astfel OLDHAM i colab., 1979 citat de CLARK (1993) 117
administrnd la vaci concentrate pe baz de orz sau porumb i fn n proporie de 60/40 respectiv 90/10, constat cantitativ c eficiena pasajului proteinei microbiene n intestinul subire a fost mai mare la vacile care au consumat orz comparativ cu porumbul sau ambele concentrate. ntr-o alt experien McCARTHY i colab., 1989 utilizeaz o raie format dintr-un amestec furajer cu un nivel 15 % PB format n proporie de 45 % voluminoase i 55 % concentrate cu orz i respectiv porumb. n acest experiment ingesta de SO a fost n medie de 22,2 kg / zi n cazul raiilor cu porumb i de 19,3 kg / zi la cele cu orz. Ingesta de amidon i de N a fost mai mare n cazul raiilor cu porumb comparativ cu cele cu orz deoarece i ingesta de SO a fost mai mare. Cnd s-a furajat orz, digesta real de SO n rumen a fost mai mare n schimb concentraia de NH 3 ruminal a fost mai redus. Hrnirea cu porumb mrete pasajul SO, a amidonului, a N neamonical i nemicrobian n intestinul subire comparativ cu orzul. Creterea pasajului N neamonical i nemicrobian este determinat probabil de degradabilitatea ruminal a proteinei din porumb mai sczut comparativ cu proteina orzului i pentru c ingesta de furaje a fost mai mare n cazul hrnirii cu porumb fa de orz. Nivelul i eficiena pasajului proteinei microbiene n intestinul subire nu a fost influenat de felul cerealei din raie. Dac vacile s-au furajat cu porumb mai mul treonin, metionin, izoleucin, leucin, fenilalanin i histidin trec n intestinul subire, dar felul cerealei din raie nu afecteaz pasajul valinei, lizinei i argininei. Proprietile relative ale cerealelor de a scpa de fermentaiile ruminale i suplimentrile energetice pentru creterea microbian pot fi modificate pe baza interrelaiilor cu nivelul ingestei, tipul i forma fizic a hranei, precum i prin structura raiilor (raportul voluminoase / concentrate). Administrnd aceiai surs de cereale cu diferite furaje voluminoase sau cantiti diferite din aceiai cereal se pot obine cantiti diferite de protein microbian i de nutrieni care trec n 118
intestinul subire i care reprezint expresia nivelului zilnic al unitilor de SO fermentat n rumen. Sunt necesare efectuarea de experiene pe animale hrnite cu nivele foarte diferite de cereale pentru a se evalua efectul diverselor surse de carbohidrai i protein brut pentru a se sincroniza energia i N degradabil din rumen pentru maximizarea creterii microbiene i a pasajului de nutrieni spre intestinul subire.
f) Sursa i nivelul azotului din raie
O caren de N n rumen depreseaz att degradarea SO ct i sinteza de protein microbian. Majoritatea bacteriilor ruminale prefer utilizarea N-NH 3 ca surs de azot pentru cretere (BRYANT, 1974) fiind foarte eficiente n prelucrarea amoniacului (SCHAEFER i colab., 1980 citat de CLARK, 1993). KLUSMEYER i colab., 1990 hrnind vacile de lapte cu o raie pe baz de amestec furajer format din 60 % siloz de porumb i 40 % concentrate prin care se asigurau nivele proteice de 11 % i 14,5 % PB, au constatat un consum zilnic de peste 21 kg SU respectiv de circa 20 kg SO. Ingesta de N a fost mai mare dac raia cu 14,5 % PB s-a comparat cu cea de 11 % ceea ce are ca efect creterea semnificativ a concentraiei NH 3 ruminal respectiv de 8,0 fa de 2,2 mg / 100 ml fluid ruminal. SO real digerat n rumen i pasajul N-ului microbian n intestinul subire nu a fost semnificativ influenat de nivelul de PB din raie. Aceste constatri sugereaz c nivelul mediu de 2,2 mg NH 3 / 100 ml fluid este corespunztor pentru maximizarea fermentrii SO i pentru sinteza de protein microbian i c nivelul de SO care fermenteaz n rumen se coreleaz direct cu nivelul i eficiena sintezei proteinei microbiene cnd concentraia de amoniac este de 2-3 mg / 100 ml fluid ruminal. Hrnind vacile cu raia cu 14,5 % PB se dubleaz cantitatea de N alimentar care trece n intestinul subire fr a crete semnificativ pasajul AA individuali n intestin. Totui, surplusul de protein poate fi benefic prin creterea suplimentului de AA n intestin deoarece o parte mai important din proteina alimentar scap de degradarea ruminal. 119
i AA i peptidele reprezint surse importante de N pentru bacteriile ruminale. n condiii de furajare normal, nivele mari de N utilizate pentru creterea bacterian pot s provin din alte surse dect cele amoniacale. Importana N-ului din AA pentru dezvoltarea bacterian a fost demonstrat folosindu-se substraturi iso-nitrogene cu N din AA i din uree (MAENG i colab., 1976 citat de CLARK, 1993). nlocuindu-se azotul din uree n cantiti iso-nitrogene cu N din AA se constat o cretere a produciei de protein microbian i o mai bun eficien a utilizrii energiei n creterea microbian. Aceste date indic c N-AA poate fi utilizat pentru maximizarea creterii microbiene i eficientizarea fermentaiei ruminale. Hrnindu-se vacile cu componente proteice cu nivele ridicate de degradare ruminal se determin o cretere a nivelului i a eficienei fluxului de N microbian in intestinul subire comparativ cu resursele proteice cu degradabilitate redus n rumen. Administrnd fin de soia, McCARTHY i colab., 1989 constat o cretere semnificativ a pasajului proteinei microbiene i a eficienei acesteia. mbuntirea pasajului N microbian poate fi atribuit creterii disponibilului de amoniac, de AA i de peptide n rumen. Tot n acest sens se nscriu i observaiile lui KLUSMEYER i colab., 1991 cnd a comparat fina de soia i fina de pete administrate ntr-o raie cu 30 % fn de lucern, 20 % siloz de porumb i 50 % concentrate la vacile de lapte. Ingesta de SO i de N, SO real digerat n rumen i pasajul de N neamonical i nemicrobian i de AA n intestinul subire nu au fost influenate de sursa de protein. Pasajul N microbian a fost mai ridicat la fina de soia comparativ cu pasajul n cazul finii de pete, dar sursa de protein nu a influenat eficiena sintezei proteice microbiene, aceasta deoarece concentraia de NH 3 n rumen a fost n medie de 13 mg / 100 ml la fina de soia i respectiv de 11 mg / 100 ml la fina de pete. n aceste condiii diferenierea pasajului N-ului microbian n intestinul subire poate fi explicat prin creterea disponibilului de AA i peptide rezultate din degradarea ruminal a proteinei sau datorit unei mai bune sincronizri a relaiei dintre energie i N cnd ingredientele raiei se degradeaz n rumen. 120
Se poate concluziona c mbuntirea sintezei de protein microbian poate fi atribuit creterii disponibilitii sau a sincronizrii NH 3 , AA i a peptidelor cu energia cnd se adaug ntr-o raie o protein cu degradabilitate mai mare, comparativ cu o protein cu degradabilitate mai redus.
g) Coninutul n grsimi a raiilor
Pentru satisfacerea cerinelor de energie la vacile cu produciile mari de lapte a intrat n practica hrnirii acestora includerea de grsimi n raie. Pentru a se utiliza cu succes, aceste grsimi nu trebuie s afecteze semnificativ fermentaia ruminal i nici digestibilitatea nutrienilor necesari produciei de lapte. Srurile de calciu ale acizilor grai cu lan lung sunt relativ inerte n rumen (GRUMMER, 1988) i pot furniza energie care poate fi folosit n producia de lapte. KLUSMEYER i colab., 1991 folosind raii n care 67 % din SO era asigurat de voluminoase a suplimentat, sau nu, cu 4 % cu sruri de calciu ale acizilor grai cu lan lung (SCaAGLL), i au urmrit efectele acestui adaos asupra fermentaiei ruminale i a pasajului nutrienilor n intestinul subire. Ingesta de SO i de N precum i SO real digerat n rumen a fost mai sczut cnd s-a administrat SCaAGLL dar concentraia n NH 3 din rumen i pasajul de N microbian i N neamoniacal spre intestinul subire nu au fost afectate semnificativ. Pasajul metioninei i a leucinei s-au redus ns semnificativ. Scderea digestiei SO n rumen i uoara reducere a pasajului componenilor azotai se datoreaz probabil descreterii ingestei de hran. Eficiena sintezei proteinei microbiene nu a fost influenat semnificativ, dar cantitativ a fost mai mare prin adaos de SCaAGLL. n alt experiment acelai colectiv de autori administrnd o raie format pe baz de 30 % fn de lucern, 20 % siloz de porumb i 50 % concentrate au urmrit efectul SCaAGLL asupra fermentaiei ruminale i a pasajului nutrienilor la vacile de lapte. Astfel la un alt lot de animale s-a nlocuit porumbul cu 4 % SCaAGLL constatndu-se c ingesta de SO s-a redus cu 1,1 kg / vac / zi iar ingesta de N cu 121
circa 40 g / vac / zi. SO real digerat n rumen s-a redus iar concentraia NH 3 ruminal a fost mai ridicat ; pasajul N-ului microbian i a N-ului neamoniacal precum i a AA liberi nu au fost semnificativ influenate, eficiena sintezei proteice microbiene a ns mai bun. Preparatele SCaAGLL fiind relativ inerte n rumen pot i ele determina o reducere a numrului de protozoare pentru c acizii grai nesaturai din aceste structuri nu sunt complet protejai de biohidrogenare (ZHIGUO i colab., 1989).
C 2 Substane sau preparate de intervenie
a) Substanele tampon
Dintre factorii intraruminali cu influen asupra microorganismelor (temperatura, condiia de anaerobioz etc.), pH-ul prezint variabilitatea cea mai mare i deci pentru asigurarea unor procese fermentative optime se impune identificarea condiiilor de dirijare i meninere a valorilor acestui indice ntre limite fiziologice. Meninerea pH-ului ntre limite normale are o importan deosebit pentru activitatea microorganismelor ruminale i pentru desfurarea normal a absorbiei AGV i NH 3 prin epiteliul ruminal. Dac de regul valorile pH-ului sunt aproape de neutralitate (6- 7) la un pH de sub 5, activitatea microorganismelor este profund tulburat, influenndu-se cu precdere tipurile de bacterii care se dezvolt n rumen precum i metabolismul acestora. pH-ul ruminal este n principal influenabil de natura componentelor furajere ale raiei ndeosebi n intervalul de timp care urmeaz dup consumul unui tain, astfel : - fibroasele dintr-o raie ntrein un pH mai ridicat ; - concentratele prin glucidele coninute determin o reducere a pH-ului ; 122
- silozurile n cantiti mari i netamponate, n timp ntrein o stare de acidoz ruminal cu reducerea ndeosebi a populaiei de infuzori ; - dezvoltarea rapid a AGV determin scderea pH-ului ; - schimburile ionice ntre rumen i plasma sangvin n cursul transferului de AGV, reduc pH-ul ; - alcalinitatea salivei reprezint un sistem tampon care poate contribui la reducerea aciditii ruminale ; Capacitatea de tamponare a rumegtoarelor n domeniul alcalin este mai redus dect pentru domeniul acid. Pentru a se preveni riscurile acidozei care rezult din scderea pH-ului, ndeosebi n cazul raiilor bogate n glucide uor fermentescibile se incorporeaz de regul n amestecurile de concentrate, ageni tampon, cei mai obinuii fiind bicarbonatul de sodiu n doz de 1,5 % (la SU) sau bicarbonat 1 % plus 0,8 % oxid de magneziu ; n cazul silozurilor acestea se tamponeaz premergtor administrrii n consum cu 1-2 g carbonat de calciu / kg. Totui unii cercettori arat c administrarea i acumularea srurilor pot s determine o cretere masiv a presiunii osmotice n rumen care influeneaz negativ i dezvoltarea microorganismelor.
b)Utilizarea ionoforilor (amelioratori ai transferului ionilor prin peretele celular)
S-a constatat c unele antibiotice ca monensinul i lasalocidul, la rumegtoare, acioneaz asupra transferului de ioni n celul inducnd modificri importante ale microorganismelor din rumen. Acestea influeneaz i fermentaia ruminal producnd : - modificarea cantitii i proporiei de AGV prin creterea produciei de propionat pe cheltuiala acetatului i butiratului ; - scderea metanogenezei , deci reducerea pierderilor de energie ; 123
- descreterea distrugerii proteinei n rumen prin reducerea proteolizei microbiene ; - scderea sintezei de proteine microbiene ; - descreterea turn-overului coninutului ruminal ; - se amelioreaz eficacitatea nutriional cu 10-15 % (JARRIGE, 1988) ;
De asemenea s-a mai artat c ionoforii acioneaz mpotriva bacteriilor Gram pozitive i a unor bacterii Gram negative dar care au structura peretelui celular ca i bacteriile gram pozitive ca de exemplu Ruminococcus albus. Ionoforii au efect i asupra productorilor lactici care sunt n cea mai mare parte bacterii Gram pozitive, fr a inhiba ns utilizatorii lactici ruminali care produc acid propionic. Aceasta este principala explicaie a faptului c la administrarea de monensin se modific concentraia molar a propionatului cu descreterea acetatului i butiratului (JOUANY, SENAUD, 1978 ; JOUANY, THIVEND, 1983). Efectele antibioticelor ionofore asupra protozoarelor ciliate din rumen au variat mult de la un experiment la altul. Totui rata apariiei lor n rumen este mai sczut datorit reducerii fazei lichide ruminale n timpul tratamentului. Efectele inhibitoare ale ionoforilor asupra degradrii proteinelor i a formrii NH 3 se pare c ar fi mai mult din cauza inhibrii dezaminrii dect a proteolizei. Se apreciaz c acest efect este condiionat de doi factori importani i anume : - adaptarea microorganismelor la antibiotice ; - solubilitatea proteinelor ; de exemplu n cazul proteinelor cu solubilitatea sczut i concentraia de NH 3 ruminal este mai redus ;
Efectul pozitiv al ionoforilor asupra performanelor la tineretul taurin supus ngrrii au fost acceptate, totui este necesar continuarea cercetrilor pentru a se explica modurile diferite de 124
aciune i variabilitatea rezultatelor obinute n ceea ce privete numrul de protozoare, metabolismul N i degradarea carbohidrailor din peretele celular. De asemenea viitoarele produse trebuie s fie ct mai puin toxice sau s se identifice metode de a izola metaboliii din tractusul digestiv, ficat i alte organe precum i din snge.
c) Eliminarea protozoarelor ciliate din rumen (defaunarea)
Dup JOUANY (1988), protozoarele pot atinge un nivel mai mare de 50 % din biomasa microorganismelor din rumen. Eliminarea lor determin modificri ale populaiei bacteriene i a materiei organice care se diger n rumen. Defaunarea determin creterea numrului total de bacterii ruminale, deoarece ciliatele consum bacteriile i concur cu acestea la utilizarea nutrienilor. Astfel dup COLLEMAN (1975) ciliatele pot consuma zilnic peste 45 g SU bacterian dintr-un total de 50 g SU care se afl n rumenul ovinelor. Efectele defaunrii asupra fiziologiei ruminale se reflect n scderea digestiei SO la nivel ruminal (cu circa 30 %). De asemeni defaunarea poate mri rata de curgere a particulelor din rumen, deci cu repercusiuni asupra produilor finali ai digestiei. Dac producia total de AGV este uor sau deloc schimbat de defaunare, structura molar este modificat consemnndu-se de regul o cretere a proporiei molare a acidului propionic n dauna acidului butiric i acetic. n cazul raiilor bogate n glucide, defaunarea poate determina o cretere a acidului butiric. Deoarece n cazul defaunrii, concentraia de azot amoniacal din sucul ruminal este sczut (i nu poate depi 50 mg / l, valoarea teoretic de optim pentru sinteza microbian), prin raie trebuie asigurat N solubil sau degradabil n cantiti mai mari. Defaunarea determin i o reducere a energiei metabolizabile. Se poate aprecia c defaunarea poate fi utilizat pentru protejarea proteinelor de degradare n rumen n cazul raiilor cu nivel sczut de protein, dei se reduce i degradarea pereilor celulari la furajele grosiere. Dar pentru acest aspect se pot dezvolta tulpini noi de 125
bacterii celulolitice sau bacterii genetic modificate pentru a se mbuntii digestia carbohidrailor din pereii celulari.
d) Adiia protectorilor proteinelor
Constatarea c proteinoliza ruminal cu formare de amoniac depete de regul capacitatea de metabolizare a microsimbionilor a sugerat idea de a gsi metode de protejare a proteinei sau a aminoacizilor din raie fa de aciunea de degradare bacterian din rumen. Cu acest efect s-au identificat unele substane ca : aldehide, tanini, etanol, hidroxid de sodiu dar mai ales formaldehida. i substanele difeniliodate pot s inhibe degradarea AA n rumen i deci s creasc nivelul acestora n lichidul ruminal (CHALUPA, 1997). Teoretic degradarea AA mai poate fi prevenit i prin inhibarea transportului lor intracelular n bacterii, dar nc nu se pot face recomandri practice. Metodele acestui gen de intervenie sunt indicate mai ales pentru rile care au resurse puine de protein disponibil sau cnd acestea sunt utilizate cu precdere n hrana monogastricelor.
e) Adiia inhibitorilor metanului
Formarea metanului n rumen de ctre bacteriile metanogene se face cu consumuri energetice importante care s-au apreciat la cca. 8 % din energia furajelor consumate. Pentru reducerea acestor pierderi (vezi capitolul IV.A.3 car cuprinde i gazogeneza ruminal) s-a urmrit efectul unor inhibitori ai metanogenezei. Analogii halogenai ai metanului (ca de exemplu amichloral, tricloroetiladipat sau dioxin halogenatul) pot fi utilizai pentru a inhiba producerea metanului. S-au mai utilizat i acizii grai cu lan lung dar ei pot avea i un efect depresiv asupra numrului de protozoare. n general o producie sczut de metan este concomitent cu un schimb al transferului de H la acidul propionic a crui producie este mrit. 126
Aceste substane au un efect toxic direct asupra bacteriilor metanice, efectul fiind crescut n cazul raiilor bogate n concentrate comparativ cu cele pe baz de grosiere. Bacteriile ruminale sunt ns capabile s se adapteze la inhibitorii metanului n circa 4 sptmni, deoarece prin enzimele produse pot s inactiveze aceste substane. Deocamdat din cauza rezultatelor irelevante aceste substane nu ntrunesc nc recomandri practice de utilizare. Dac se utilizeaz proporii mari (de 5-10 % din SU) trigliceride neprotejate sau acizi grai liberi polinesaturai din uleiuri vegetale se produce o reducere puternic a protozoarelor din rumen. Adugnd aceste substane se produce i o scdere a digestiei SO n special a carbohidrailor din peretele celular, a amoniacului, a produciei de metan precum i a proporiei propionat / acetat. Efectul este mai evident n cazul acizilor grai liberi dect a trigliceridelor sau a uleiurilor neesterificate. Ovinele par s fie mai sensibile dect bovinele. Acizii grai saturai (palmitic, stearic) pot avea ns un efect stimulatoriu asupra creterii bacteriene din rumen deoarece se simplific N bacterian fiindc este preluat ntr-o proporie mai redus de protozoare (SUTTON i colab., 1983). Este deci important de stabilit prin mai multe studii natura acizilor grai i implicaiile acestora cnd sunt utilizai n hrana rumegtoarelor. Aciunea specific a acizilor grai de protecie a fibrelor vegetale sau asupra microorganismelor ruminale (aderena sau metabolismul bacteriilor) trebuie nc cercetat.
f) Adiia de bacterii sau de coninut ruminal
Aceast adiie poate fi folositoare dac metabolismul ruminal a fost afectat, ca de exemplu n cazul acidozei, sau datorit tratamentelor orale cu antibiotice. 127
Se poate utiliza coninut ruminal uscat i refrigerat (dup recoltare) pentru a avea toate speciile de bacterii care se pot dezvolta n aceste condiii. Diferitele preparate comerciale de extract ruminal care conin microorganisme sau enzime au fost utilizate pentru a mri digestibilitatea hranei, dar nu au fost ntotdeauna eficace. i aceasta se poate explica prin dificultatea de a modifica balana natural a microorganismelor ruminale. ns stabilizarea unor tulpini bacteriene n rumen se poate face numai pe baza unor secvene specifice, iar dezvoltarea protozoarelor depinde de prezena unui numr minim de bacterii. Ca regul general se va reine c stabilizarea i creterea microorganismelor ruminale depinde de condiiile de hrnire (furaje, forma de administrare), de starea animalului (stadiu fiziologic, de producie) care determin condiiile fizice i chimice din rumen. Se poate dezvolta n viitor implantarea bacteriilor manipulate genetic dar succesul lor depinde de cunoaterea foarte bine a ecologiei microorganismelor ruminale.
g) Adiia acizilor grai volatili ramificai
n vitro, adugarea de AGV ramificai (izobutiric i izovalerianic) n proporie de pn la 1 % n furaje, determin o cretere a digestibilitii SU i dezvoltarea microorganismelor ruminale ndeosebi a florei celulozolitice. Efectele pozitive asupra sintezei microbiene de azot sunt mai mari cnd sursele de protein administrate au o degradabilitate ruminal sczut. n aceste condiii lanurile ramificate ale acizilor grai suplinesc lanurile carbonice scheletice care sunt insuficiente n bacterii pentru unii AA (leucina, valina). Studiile n vitro pe vaci de lapte indic o doza maxim cu aceti produi de 89 g / animal / zi ceea ce nseamn 0,45 % din SU raie. Este o metod de urmat deoarece aceti compui sunt total neprimejdioi pentru animal fiind n mod obinuit produi n rumen i 128
metabolizai de bacterii fiind nutrieni din afara raiei indispensabili pentru bacteriile din rumen.
IV.A.3. METODE BIOTEHNOLOGICE DE INFLUENARE A METABOLISMULUI RUMINAL A SUBSTANELOR AZOTATE
Rezumativ, dup cum se poate vedea i n figura 1, pentru un biotehnolog este de interes c n metabolismul ruminal al azotului intervine i capacitatea microorganismelor de a sintetiza protein pentru structura propriilor organisme utiliznd sursele de N proteic i neproteic. Simbionii multiplicai sunt apoi evacuai i digerai n abomasum i n intestin constituind o surs important de protein i AA pentru animalele gazd. Figura nr. 1
n rumen au deci loc concomitent procese hidrolitice de scindare a proteinei alimentare (proteinoliza) i de sintez proteic bacterian, asupra crora se ncearc s se intervin din exterior.
IV.A.3.1. PROTEINOLIZA MICROORGANIC
Proteina alimentar care intr n rumen prin ingest este hidrolizat de microorganismele ruminale pn la formarea de peptide, AA i NH 3 . S-a stabilit c n principal bacteriile dispun de abiliti proteolitice ca de exemplu Bacteroides ruminicola, Butyrivibrio etc., dar i unele protozoare, prin specii din genurile Entodinium i Isotricha particip la acest proces. Proteoliza este influenat n principal de urmtorii factori: - de proprietile fizice ale proteinei ingerate - de timpul de retenie ruminal ; acesta la rndul su poate fi condiionat de nivelul de furajare, de digestibilitatea raiei i de mrimea particulelor. n funcie de specie timpul de retenie ruminal este la bovine de 1,3-3,7 zile iar la ovine de 0,8-2,2 zile. Dac acest timp este scurtat proteoliza este mai redus - de nivelul NH 3 ruminal ; amoniacul provenit din dezaminarea AA sau din compuii azotai neproteici dac este n exces poate inhiba proteoliza - metionina i cistina din raie favorizeaz proteoliza - pH-ul ruminal ; nivelul optim de desfurare a acestui proces este apreciat la valorile de 6-7. La valori ale pH-ului de sub 4,2 i de peste 7,2 proteoliza nceteaz
Mecanismul degradrii proteinei indus de bacterii este diferit de cel al protozoarelor. Bacteriile degradeaz parial sau total lanurile peptidice prin hidroliz, procesele avnd loc n afara celulei bacteriene cu ajutorul exopeptidazelor. Peptidele i AA care rezult sunt preluate n corpul bacterian unde peptidele sunt scindate cu endopeptidaze pn la nivel de AA. Aminoacizii rezultai precum i cei absorbii 130
direct din fluidul ruminal sunt incorporai n proteina bacterian sau sunt scindai pn la formarea AGV, NH 3 , CO 2 , CH 4 i energie aceti produi de degradare fiind eliminai n fluidul ruminal. Scopul degradrii proteinelor de ctre bacterii este de a-i asigura N-NH 3 , AA, alfa cetoacizii i energia necesar pentru sintezele proteice proprii. S-a constatat c degradarea proteinei se produce de regul n exces fa de cerinele bacteriene, ns n privina energiei, proteoliza nu poate furniza dect parial ATP -ul necesar. Rolul protozoarelor n degradarea proteinelor este incomplet elucidat. Ele pot ngloba mici fragmente de digestie i bacterii. Degradarea proteinelor are loc n corpul protozoarelor pn la AA, care n excedent sunt eliminai n mediu fr a mai fi scindai intracelular la nivel de NH 3 . Rezistena AA la degradare este diferit. Astfel valina i metionina par a fi AA cei mai rezisteni la degradarea microbian n timp ce arginina, acidul aspartic, acidul glutamic, prolina, alanina, sunt degradai ntr-o msur mult mai mare. La valori intermediare se plaseaz lizina, fenilalanina i leucina. Cea mai important cale de degradare a AA se apreciaz a fi dezaminarea urmat de decarboxilarea cetoacidului. Consecutiv degradrii i sintezei microbiene n procesele de fermentaie ruminal, att cantitativ ct i calitativ gama de AA din rumen n raport cu AA alimentari ingerai se schimb. Ca un specific al nutriiei rumegtoarelor, proteinele din hran cu valoare biologic ridicat sunt dezavantajos utilizate deoarece sunt degradate pn la nivel de NH 3 n proporie mare (60-80 %) iar ulterior prin sintez bacterian se produce o protein cu o valoare biologic mai redus i datorit coninutului n acizi nucleici bacterieni (circa 15 %).
IV.A.3.2. SINTEZA DE PROTEIN BACTERIAN
Populaia microbian din rumen sintetizeaz permanent protein pentru ntreinerea turnoverului proteic propriu i pentru multiplicare. 131
Turnoverul este un mecanism homeostatic prin care se asigur rennoirea proteinelor proprii. Pentru creterea bacterian sunt necesari precursori (respectiv compui chimici surse de N, C i energie) pentru sinteza de macromolecule : proteine, acizi nucleici.
o Sursa de azot n condiii de furajare obinuit 50-80 % din azotul din furaje este convertit n compui microbieni. Ca rezultat al proteolizei n coninutul ruminal apar peptide i AA din care circa 30 % ptrund n celulele bacteriene fiind utilizai n sintez fr alte modificri. Totui amoniacul este sursa principal de N pentru sinteza proteic, fiind cel mai important constituent solubil din coninutul ruminal. ntr-o furajare corespunztoare n rumen se gsesc i AA liberi, cea mai mic valoare corespunde cu 20 mg N / l lichid ruminal. Concentraia optim de NH 3 pentru sinteza de protein necesar creterii microbiene este apreciat la 5-8 mg N-NH 3 / 100 ml lichid ruminal dup alii autori la 23 mg. Concentraia ruminal a NH 3 este influenat de : - cantitatea i solubilitatea proteinei din raie ; - de ureea care difuzeaz din circulaie n rumen ; - de rata de absorbie a amoniacului prin mucoasa ruminal ; aceasta este cu att mai ridicat cu ct concentraia de NH 3
n fluidul ruminal este mai mare ; - rata de utilizare n sinteza de protein bacterian ;
O parte din NH 3 format este absorbit prin mucoasa ruminal, rata acestui pasaj fiind proporional cu creterea concentraiei de amoniac n fluidul ruminal. Amoniacul absorbit n reticulo-rumen i n cantiti mai mici n segmentele distale ale tubului digestiv este convertit n ficat n uree care poate fi eliminat renal sau reciclat prin saliv. Cnd nivelul de NH 3 n rumen este mare i capacitatea ficatului de a sintetiza uree este depit, amoniacul se acumuleaz n snge devenind toxic. 132
La 7 mg NH 3 / 100 ml fluid ruminal, cantitatea de amoniac absorbit prin peretele ruminal este egal cu ureea care vine n rumen prin saliv. Utilizarea N din substane azotate sintetice neproteice, (SASN) n sinteza proteic microbian, este dependent de o surs energetic (ATP microbian) i un suport de cetoacid pentru grefarea gruprii aminice, care sunt furnizate de fermentaia glucidelor. Cele mai bune rezultate se obin cnd raportul uree / glucide fermentescibile este de 1/10, n care amidonul reprezint 2/3 din glucidele digestibile.
o Sursa de carbon (C) Necesitatea glucidelor n raie ntr-o anumit structur, compoziie, proporie, care s fie degradate la o rat convenabil bacteriilor, asigur eficiena utilizrii azotului. Sinteza de protein bacterian are loc n strns relaie cu metabolizarea glucidelor care reprezint principala surs de carbon pentru sinteza de AA. Alte surse de C pot fi acizii organici produi prin decarboxilarea oxidativ a unor AA, acidul acetic, CO 2 .
o Sursa de energie Se utilizeaz energia stocat n ATP disponibil iar glucidele, reprezint substratul cel mai eficient n furnizarea de ATP microbian.
O serie de factori afecteaz sinteza de protein ruminal. Astfel rata de sintez a AA eseniali nu este realizat de microsimbioni dac condiiile de alimentaie ale rumegtoarelor nu sunt ndeplinite. Astfel dintre factorii care influeneaz procesul de sintez a proteinei microbiene se enumer : - prezena glucidelor (uor solubile) descompunerea poliglucidelor (celulozei) este determinat de activitatea 133
bacteriilor celulozolitice. Pentru a le satisface necesarul (material energetic) dup VIINESCU trebuie s se asigure 1-3 g / kcorp la taurine, la vacile de lapte 4-5 g / kcorp iar la ovine 1-2 g / kcorp ; - activitatea proceselor microbiologice n rumen este proporional cu cantitatea de acid adenozin trifosfat (ATP) ce se formeaz prin fermentaia glucidelor i care constituie o surs de energie biologic n sintezele proteice. Se arat c la fiecare mol de ATP accesibil pentru microorganisme se sintetizeaz aproximativ 10 g SU de bacterii ; - amidonul n raii ; n funcie de coninut, are un grad diferit de hidroliz - de exemplu cerealele dac sunt introduse n proporie de pn la 13 % n raiile cu aport nsemnat de celuloz (cu grosiere) i SASN, favorizeaz metabolizarea celulozei i sinteza proteinei microbiene ; dac se depete, se modific structura microflorei preferndu-se hidroliza amidonului.
tiind ns c pentru sintezele proteice proprii, n majoritate, bacteriile ruminale utilizeaz N-NH 3 , la rumegtoare se pot folosi ca surs de amoniac i substanele azotate sintetice neproteice (SASN). Dac un compus SASN nu este convertit n amoniac nu poate fi utilizat de bacterii. Pentru un rumegtor este important cantitatea microorganismelor ce sosesc n duoden. De exemplu la ovine, a cror coninut ruminal este de circa 5 kg n condiii normale de hrnire se formeaz zilnic circa 100 de grame protein microbian, cu o digestibilitate de 80 % ; se asigur astfel un aport proteic mai mare dect necesarul pentru ntreinere. De fapt la rumegtoare se apreciaz c sinteza de protein microbian este de 135 g / kg SOD (substan organic digestibil). Sinteza de protein microbian poate fi modificat prin procedee fizice i chimice de preparare a furajelor, fiind dependent i de 134
normalitatea raportului N / energie din hran, de prezena factorilor de cretere microbian precum i de rata de diluie a coninutului ruminal respectiv a fluxului proteic n segmentele postruminale.
IV.A.3.3. FLUXUL PROTEINEI N SEGMENTELE POSTRUMINALE
Noile cercetri urmresc stabilirea unor corelaii ntre rata de diluie a lichidului ruminal, creterea populaiei microbiene i aprovizionarea intestinului cu protein (AA). Curgerea digestei din rumen se realizeaz continuu, cu viteze diferite, n raport cu caracteristicile fizice i chimice ale hranei n condiiile n care rumenul nu se golete practic niciodat. n inaniie, dup 48 ore, rata de curgere din rumen se reduce la o valoare minim de circa 2 % din coninutul ruminal, fiind necesare 15-17 zile pentru o evacuare complet (CRISTA, 1985). Bineneles c natura raiei i ndeosebi unii nutrieni influeneaz rata de pasaj. De exemplu, ntre coninutul n celuloz brut (CB) i timpul de retenie ruminal exist o relaie liniar, respectiv cu ct coninutul n CB este mai mare, cresc i timpii de retenie. n principiu creterea ratei de diluie sporete fluxul de protein din rumen, inclusiv cea microbian spre segmentele postruminale permind creterea n continuare a altor generaii de microorganisme. Dac odat formate, microorganismele sunt evacuate, ali indivizi se vor dezvolta i o alt cantitate de protein devine disponibil pentru animalul gazd. Stagnarea prelungit a microsimbionilor n rumen presupune un consum suplimentar de nutrieni i de energie pentru metabolismul de ntreinere al microorganismelor iar apoi se produce i autoliz microbian. De exemplu, la o rat de diluie mic, aproximativ 55 % din energia provenit din glucoz se folosete pentru ntreinerea microorganismelor, n schimb la o rat nalt, consumul energetic este de numai 15 %. 135
Scderea ratei de diluie poate reduce ns cu circa 43 % sinteza de protein. Accelerarea ratei de diluie poate fi obinut prin infuzie de saliv artificial sau prin administrarea de bicarbonat de sodiu i clorur de sodiu n raie. n revers, nici rata de diluie ridicat nu este favorabil, deoarece sunt afectate microorganismele ruminale i activitatea lor pentru c : - se reduce timpul de fermentaie a glucidelor i deci scade disponibilul de energie (ATP) ; - se formeaz insuficieni AA pentru creterea bacteriilor.
Deci fluxul ruminal transport n intestin protein din furaje (alimentar -PDIA) i protein microbian (PDIM). n vederea atingerii celui mai ridicat aflux de AA n intestin, hrana trebuie s conin n anumite proporii o protein degradabil (pentru microorganisme) i una nedegradabil. Stabilirea raportului optim ntre proteina degradabil i nedegradabil permite reducerea necesarului azotat al vacilor fr s fie afectat producia de lapte. Cantitatea de protein alimentar care se hidrolizeaz efectiv n rumen este influenat de numeroi factori rezultnd acea parte de protein degradabil sau fermentescibil utilizabil de microsimbioni. nc nu sunt metode standardizate, dar degradabilitatea proteinei poate fi evaluat prin mai multe metode i anume : - prin msurare efectiv, pe animale cu canule digestive i markeri pentru N ; - prin msurarea solubilitii proteinei : ^ n soluii tampon pe baz de bicarbonat i fosfat de sodiu cu pH = 9 ; ^ n vitro, ntr-un mediu analog celui din rumen ;
Proteina degradabil respectiv azotul fermentescibil la diferite categorii furajere poate oscila ntre : - 40-75 % la furajele verzi, fibroase i n cazul raiilor mixte; 136
- 50-85 % la silozuri ; - 20-80 % la furajele deshidratate ; - 30-80 % la concentratele bogate n azot ;
Se apreciaz c raiile devin deficitare n protein degradabil dac aportul lor este inferior valorii de 135 g / kg SOD (substan organic digestibil) care corespunde valorii sintezei microbiene. Dac se vrea s se completeze o raie deficitar n N fermentescibil se prezint dou posibiliti : - utilizarea unei surse de azot neproteic ; n acest caz se stabilete cantitatea de uree care asigur la o raie ca PDIE = PDIN. Potenialul de utilizare a ureei la unele furaje este: - cereale porumb 23 g uree la kg SU ; - orz 13 g ; uree la kg SU - tiei de sfecl 20 g ; uree la kg SU - furaje verzi 8-12 g ; uree la kg SU - fn cu 7,6 % PB 9 g ; uree la kg SU - siloz de porumb cu 8,2 % PB - 12 g ; uree la kg SU - recurgerea la un furaj cu o valoare PDIN ridicat ; de exemplu la roturi ;
Dac n raie predomin ns protein degradabil, n rumen se poate produce un exces de amoniac care nu poate fi preluat eficient de microorganisme (n condiii optime 70-80 % din amoniacul ruminal ptrunde n celulele bacteriene). n schimb excesul de protein nedegradabil reduce populaia bacterian cu efecte negative asupra digestiei celorlalte substrate organice din hran, n special a pereilor celulari bogai n celuloz. Deci raportul dintre cele dou categorii de protein reprezint un factor critic care influeneaz cantitatea i natura AA sosii n rumen ; manipularea acestui raport nu este pe deplin stpnit, din punct de vedere practic, de ctre nutriioniti.
137
IV.A.3.4. PROTECIA PROTEINEI ALIMENTARE
Din cele prezentate rezult c n rumen nu se degradeaz toat proteina coninut de furaje, o parte din aceasta ajungnd n abomasum i n intestin unde va fi digerat similar monogastricelor. Interesul pentru evaluarea proteinei din raie scpat de aciunea proteolitic a simbionilor, este mare, deoarece absorbia intestinal a acestei pri devine important n bilanul azotat ndeosebi la vacile de lapte performante. Stabilirea proporiei de protein scpat de atacul microsimbiont i a celei de sintez microorganic devine un factor important n evaluarea necesarului de protein i de AA la rumegtoare tiindu-se i c AA de surs microbian se gsesc aproximativ n aceiai structur chiar dac raia difer. Tot n acest context se poate discuta despre preluarea unor AA din hran de ctre simbioni n detrimentul animalului gazd. S-a artat c n condiii normale n rumen se degradeaz aproximativ 70 % din proteina din raie. Dac de exemplu se reduce degradarea cu 10 %, animalul gazd poate beneficia de AA n alt structur dect cea oferit de microsimbioni cu un procent mai ridicat de AA limitativi pentru producia de lapte. Constatarea c proteinoliza ruminal cu formarea de amoniac, depete de regul capacitatea de metabolizare a microsimbionilor, coroborat cu date experimentale prin care s-a demonstrat c introducerea unor surse bogate n AA limitativi (cazein, soia) direct n abomasum determin creterea produciilor fa de animalele care au primit aceiai cantitate de protein dar pe cale oral, a sugerat idea de a gsi posibiliti de protejare a proteinei sau a AA din raie fa de aciunea de degradare bacterian din rumen. A aprut astfel perspectiva creterii proporiei de protein digestibil la nivel intestinal de origine alimentar (PDIA) i o mai bun utilizare digestiv a proteinei din furaje sau raii. Reducerea degradrii ruminale a proteinei alimentare cu valoare biologic ridicat care se administreaz ca supliment la o raie de 138
baz se poate realiza prin protejarea ei prin diferite metode fizice, chimice i nutriionale. Pn n prezent cele mai bune rezultate cu o reproductibilitate mare i n practica curent s-au dovedit metodele chimice de utilizare a diferitelor substane ca : aldehide, tanini, alcooli (etanol), hidroxid de sodiu, acid propionic. Cea mai cercetat i folosit substan pn n prezent este formaldehida (F) care n condiiile pH-ului ruminal poate forma un complex F-protein prin adiia unei grupri hidroximetil la grupul NH 2 terminal al lanului proteic care poate rezista atacului peptidazelor bacteriene. n cheag la un pH acid aceast legtur se desface i permite digestia pepsic. Iniial aceste reacii sunt reversibile ns dup un timp mai ndelungat de contact pot s apar reacii care conduc la fixarea stabil a unei cantiti de formaldehid la gruprile NH 2 , producndu-se aa numita supra-protecie. S-a stabilit c nivelul optim de formaldehid prin care se maximizeaz utilizarea N la rumegtoare este de 0,3-0,5 g CH 2 O / 100 g la fina de soia i de 1,6 g CH 2 O / 100 g PB la rotul de floarea soarelui, folosindu-se soluii cu concentraia de 10-14,5 % formaldehid. Unii cercettori mai arat c o doz de 10 g CH 2 O / 100 g PB realizeaz o supra-protecie care poate avea ca efect reducerea utilizrii postruminale a proteinei. Gradul de protecie ridicat se poate asocia i cu reducerea amoniacului disponibil pentru creterea bacteriilor ruminale i a sintezei de protein bacterian avnd deci un impact negativ asupra fermentaiilor ruminale. Dac reaciile ntre gruprile aldehidice i cele aminice libere ar putea fi controlate atunci s-ar putea reduce solubilitatea proteinei i degradarea acesteia n rumen fr s se diminueze digestibilitatea AA n intestin i s se obin astfel un bilan azotat pozitiv i o eficien proteic crescut a furajelor. n Frana tratarea proteinelor cu formaldehide sau cu tanini (tanarea) se efectueaz industrial nc din 1976. Acest tratament diminu fermentescibilitatea proteinei n rumen i formarea de amoniac. Astfel dac la roturile netratate 139
degradabilitatea proteinei depete 25-45 % la cele tratate este de pn la 5 %. Tratamentul afecteaz n mic msur digestibilitatea pe care o reduce cu pn la 5 %. Pentru vacile cu producii mici i medii de lapte, nutreurile astfel tratate nu prezint interes datorit efectului productiv redus. Protejarea proteic cu formaldehid permite administrarea i la vacile de lapte a cazeinei. Cazeina neprotejat este degradat n rumen n proporie de 75-80 %. Tratarea cu formaldehid asigur creterea cantitativ de AA n duoden mrind sinteza laptelui cu circa 12 % i a coninutului n protein. Utilizat n acest fel cazeina amelioreaz i cantitatea de ln i sporurile n greutate la ovine. n condiii obinuite de alimentaie i la rumegtoare asigurarea necesarului de AA prin sinteza microbian i prin proteina nedegradabil devine insuficient n cazul produciilor mari. Acest lucru a fost dovedit prin sporurile de producie obinute cu suplimentarea AA limitani (metionina, lizina, fenilalanina) prin infuzie postruminal (CLARK, 1975). Astfel, n cazul vacilor performante se poate recurge i la procedeul de a proteja AA liberi de degradarea microbian prin ncapsulare. n acest context se nscrie produsul realizat de SIBBALD preparat din 20 % DL metionin, 20 % caolin i 60 % tristearin. DL metionina se fixeaz n interiorul coloidului de caolin iar tristearina formolizat formeaz o pelicul foarte fin cu rol protector la atacul bacterian. Cu acest produs s-au obinut la tineretul ovin sporuri medii zilnice semnificativ mai ridicate. n ncercrile de suplimentare a AA la rumegtoare prin intermediul celor protejai trebuie s se aibe n vedere i urmtoarele aspecte : - din punct de vedere nutriional, lizina, tirozina, cisteina dar i metionina par a fi cei mai afectai AA la tratamentul cu formaldehid ; - pentru a se obine rezultate mai eficiente trebuie n prealabil s se stabileasc care AA sau grup de AA au rol stimulativ pentru diferitele specii i categorii de 140
rumegtoare. De exemplu necesarul pentru ntreinere, spor n greutate, lactaie, ln nu este acelai iar rspunsul animalelor devine variabil. Astfel la oi, metionina este un AA limitativ pentru ln iar rspunsul pentru lapte poate fi altul. Este i de reamintit c n funcie de cerinele unui animal excesul unui AA nu este utilizat eficient.
Ca o regul general se va reine c utilizarea AA eseniali n sinteza de protein este posibil numai pn la preluarea cantitilor disponibile ale primului AA limitativ. Determinarea AA limitativi la rumegtoare este mai complex datorit AA care provin din proteina microbian. Mai muli autori arat c AA cu sulf sunt limitativi generali pentru rumegtoare. Se mai asociaz i valina i lizina pentru producia de lapte. Pentru asigurarea metioninei i lizinei n cantiti suplimentare la vacile de lapte performante se poate utiliza fina de soia tratat cu formaldehid sau produse ncapsulate prin care se administreaz zilnic 19 g L-lizin i 6,5 g DL metionin. n Frana denumirea comercial a metioninei protejate este Smartamina. La noi n ar firma Degusa Hls AG comercializeaz produsul MEPRON.
IV.A.4. METODE BIOTEHNOLOGICE DE INFLUENARE A METABOLISMULUI RUMINAL A GLUCIDELOR
Prin hran se inger i glucide n diferite forme moleculare i anume : - polizaharide - celuloz, hemiceluloz, lignin, polifructozani, amidon, xilani, galactani, pectine - dizaharide zaharoz - monozaharide glucoz, fructoz
- produilor finali ai metabolismului microbian, AGV, utilizabili de rumegtor ca substraturi energetice i precursori n sintezele tisulare ; - de ATP utilizat pentru ntreinere i n sintezele microbiene; - surselor simplificate de carbon necesare n creterea i multiplicarea simbionilor ;
Metabolizarea poliglucidelor se realizeaz n principal de populaii mixte de bacterii ntre care se stabilesc numeroase interelaii. Astfel scindarea celulozei este realizat succesiv de : - bacterii celulozolitice ca de exemplu Ruminococcus flavofaciens, Ruminobacter parvum, etc ; - bacterii care continu fermentaia glucidelor solubile rezultate din celuloliz ; - bacterii care degradeaz acidul succinic, formiatul, lactatul; - bacteriile metanogene ;
Rolul protozoarelor n degradarea celulozei nu este pe deplin lmurit ; se accept c particulele nglobate de protozoare sunt hidrolizate dar nu se tie dac este ca urmare a enzimelor proprii sau a enzimelor bacteriene aflate pe suprafaa fragmentelor de celuloz. Celuloza, dup o prim etap de degradare mecanic care ncepe n procesele de masticaie, nsalivaie, mbibiie i remasticaie continu sub aciunea celulazelor bacteriene cu formarea de celobioz, care apoi este scindat n dou molecule de glucoz de ctre celobiaz. Celuloliza se desfoar n condiiile unei fermentaii metanice puternice cu producerea unor cantiti mari de gaze respectiv de CH 4 , CO 2 , CO. Dup LeBARS la taurinele adulte se formeaz zilnic circa 600-800 l gaze din care 80-95 % este metan i CO 2 . - hemicelulozele sufer transformri similar celulozei, din hidroliza lor rezultnd hexoze, pentoze i acizi uronici, produi care ulterior sunt inclui n procesele de sintez. 142
- lignina, dup unii autori se poate constata o oarecare digestie ruminal dar n procese foarte lente. Legat de acest constituent intereseaz de fapt aciunea de inhibare a digestiei celorlali nutrieni din hran. - pectinele se degradeaz n rumen n proporie de 75-90 % n acid pectic i metanol. Sub aciunea pectinazei, din acidul pectic poate rezulta glucoz, galactoz, acid acetic, etc. Substanele pectice pot fi implicate frecvent n etiologia timpanismului acut prin efectul lor de cretere a tensiunii artificiale i de formare de spume stabile. - amidonul, sub form de granule este activ degradat n rumen de Bacteroides amylophylus, Streptococcus bovis, Clostridium butyricum. Bacteriile ruminale hidrolizeaz enzimatic amidonul pn la glucoz prin alfa amilaz, maltaz i izo-maltaz. Amidonul este ingerat de mai multe specii de protozoare ndeosebi de cele din genul Diplodinium. Scindarea diferitelor poliglucide structurale, este prezentat schematic i n figura 2. Figura 2 143
Prepararea furajelor prin mcinare sau tratare termic accelereaz scindarea amidonului. Totui o degradare intens a amidonului n rumen genereaz pierderi de energie sub form de metan i cldur de fermentaie. Schematizat, poliglucidele ndeosebi cele structurale trec prin urmtoarele transformri : - degradare mecanic, cu formarea de particule de dimensiuni mici, n procesele de prelucrare digestiv a hranei ; - hidroliza extracelular prin carbohidrazele eliminate de bacterii n lichidul ruminal, cu formare de mono i dizaharide ; - metabolizarea intracelular ; bacteriile preiau n corpul lor din mediul ruminal, mono i dizaharidele formate i chiar glucide cu lan mai lung oligozaharide. Catabolizarea intracelular a glucidelor prin reacii complexe cu muli compui intermediari, determin formarea de AGV, acid succinic, acid lactic, etanol, dioxid de carbon i metan ;
Produii ruminali ai metabolismului glucidic la rumegtoare i modalitile de influenare a acestora : Metabolizarea ruminal a glucidelor la rumegtoare poate fi influenat mult prin structura raiilor i tehnicile de administrare a furajelor precum i prin conducerea fermentaiilor ruminale pentru a se limita pierderile energetice i pentru a se obine preponderent unii produi n funcie de nivelul i forma de producie n care animalul este specializat.
glucoza ; procesele fermentative intense de la nivelul rumenului fac ca glucoza de origine alimentar (din amidon) care rmne disponibil pentru absorbia intestinal s fie foarte redus acoperind numai o parte din necesarul de glucoz al organismului. Dup CRISTA (1985) la oile hrnite cu fibroase n intestin se absorb 3-8 g glucoz / zi iar dac primesc i concentrate se poate ajunge pn 144
la 25-30 g / zi n condiiile n care la oile n repaus, necesarul zilnic este de circa 85 g. Din aceast cauz procesul de gluconeogenez, care se desfoar n principal n ficat, constituie o important cale de acoperire a cerinelor n glucoz. Este de precizat i c sursele endogene de producere a glucozei sunt tot produi ai metabolismului glucidic ruminal respectiv propionatul, lactatul, piruvatul, glicerolul dar i aminoacizi. La rumegtoare, glicemia are valorile normale mai mici dect la celelalte mamifere iar disponibilul de glucoz este redus. Glicemia i rata de utilizare a glucozei la animalele tinere este mai ridicat dect la adulte aceasta diminundu-se cnd animalul trece la furajarea caracteristic adultului. De exemplu la viei, viteza de utilizare a glucozei este de 3 mg / kcorp / min iar la tauri se reduce la 1,7 (CRISTA, 1985). n organism glucoza este utilizat ca substrat energetic pentru formarea altor compui glucidici (ex. lactoza din lapte), pentru sinteza glicogenului ct i n lipidogenez. Produii metabolici intermediari aprui n cursul degradrii glucozei pot fi utilizai la sinteza acizilor grai, a glicerolului, a unor AA precum i la resinteza glucozei. Este de relevat importana glucozei n metabolismul glandei mamare furniznd carbonul pentru sinteza lactozei, regsindu-se n proteinele i lipidele din lapte i contribuind energetic la sinteza laptelui. Din aceast cauz n lactaia de vrf, esutul mamar necesit 60-85 % din glucoza total disponibil pentru organism i deci aprovizionarea glandei mamare cu glucoz poate fi un factor de limitare a produciei lactate (CRISTA, 1985). Pe baza datelor experimentale s-a stabilit c necesarul zilnic de glucoz la vacile lactante este de cel puin 1100 g din care, dup cum s-a vzut, peste 60 % este utilizat de glanda mamar. La celelalte esuturi, n timpul lactaiei, se reduce utilizarea glucozei ca surs de energie crescnd ns folosirea energetic a lipidelor (este de fapt perioada cnd animalele slbesc) CRISTA, 1985. 145
Avnd n vedere c posibilitile de dirijare a metabolismului glucozei n organism nu sunt stpnite, pentru nutriioniti, pentru a se asigura o cantitate mai mare de glucide disponibile pentru absorbie, se impun urmtoarele direcii de cercetare : - s se stabileasc proporia de glucide uor solubile din raia corespunztoare nivelului productiv i a direciei de exploatare a animalelor ; - identificarea posibilitilor i stabilirea nivelelor de suplimentare a raiilor cu glucide uor solubile protejate de aciunea microsimbionilor ; - dirijarea proceselor de gluconeogenez hepatic prin intermediul precursorilor rezultai n metabolismul glucidic ruminal ;
AGV ; din activitatea de metabolizare a glucidelor de ctre simbionii ruminali rezult preponderent AGV : acid acetic, propionic i butiric. Astfel la bovinele adulte n 24 de ore se produc 1,8-2,4 kg AGV care nglobeaz circa 70 % din energia total a furajelor degradabile n rumen. Dar pentru c sursa de formare a AGV poate fi constituit i de ali nutrieni din raie, se prezint separat posibilitile de influenare a metabolismului acestora.
gazogeneza ruminal ; bula de gaze din rumen este format dintr-un amestec de gaze : CO 2 , CH 4 , H 2 , N, SH 2 , O 2 rezultate n majoritate n cursul metabolizrii glucidelor. Proporia acestora oscileaz n funcie de natura hranei i intensitatea fermentaiilor, cele mai importante fiind CO 2 i CH 4 . De exemplu la ovinele hrnite o singur dat pe zi, CO 2 poate reprezenta 20-65 % iar CH 4 30-40 % din totalul gazelor. Acestea se formeaz cu rapiditate postprandial, n primele 4 ore de la furajare, la bovinele adulte ritmul fiind de 20 l / 30 de minute (CRISTA, 1985). HUNGATE apreciaz c la un animal de 500 kg cu un coninut ruminal de 70 kg se produc circa 2 l gaze / minut. 146
Gazele care se degaj, se acumuleaz n partea dorsal a sacului ruminal de unde se elimin la exterior n principal prin eructaie dar i prin flatulaie. Totui n condiii de furajare obinuite, metanul reprezint 15-30 % din gazul ruminal total, producerea fiind influenat de caracteristicile fizico-chimice ale furajelor din raie precum i de mrimea ingestei. Metanul se produce prin activitatea bacteriilor metanogene n special prin reducerea CO 2 de ctre H 2 care se formeaz continuu n rumen. Formarea metanului n rumen constituie o pierdere energetic important pentru animal apreciat la circa 8 % din energia furajelor consumate. i reducerea acestor pierderi constituie o problem de interes pentru nutriioniti, care pot intervenii n principal pe urmtoarele ci : - folosirea furajelor cu digestibilitate ridicat deoarece se formeaz mai puin metan pe unitatea de energie caloric consumat, dect la cele cu digestibilitate redus ; - utilizarea inhibitorilor metanogenezei ; Ideea de a reduce pierderile energetice prin utilizarea unor inhibitori ai metanogenezei a preocupat muli cercettori, dar rezultatele investigaiilor ntreprinse nu au nc o aplicabilitate practic curent. Prelucrnd informaiile sistematizate de STOICA i colab., 1999 se poate constata c : - probioticele pot modifica componena gazelor ruminale cu reducerea cu 1,5 puncte procentuale a concentraiei metanului (JOUANY i colab., 1991) ; - somatotropina bovin poate reduce producia de metan cu 9 % (TISSERAND, 1994) ; - o seam de ageni chimici inhib metanogeneza ns cei mai poteni sunt analogii halometanici (TREI i colab., 1970). n experienele ntreprinse, ca metan inhibitori s-au utilizat : 147
2,2,2-tricloracetamid n doz de 0,9 g / kg furaj, bromoclorometanul n cantiti de 0,2-0,4 g / kg furaj iar amilocloralul (amidon cloral) n doz de 0,5-2 g / kg furaj ; - prin utilizarea inhibitorilor crete eficiena fermentaiilor ruminale deoarece o proporie mai mare de H metabolic produs este convertit n AGV ; - inhibarea metanogenezei poate fi determinat de acidul 2-brometanolul sulfonic (GRAEVE, 1991) ; - LOVINESCU (1985) menioneaz c unele substane care rein hidrogenul, cum ar fi acizii grai nesaturai cu molecul mare, sulfiii, propandiolul etc, pot reduce producia de metan; - dirijarea biochimismului ruminal (ndeosebi prin reducerea pH-ului) spre fermentaia de tip propionic i diminu formarea de CH 4 . Creterea propionatului este avantajoas dac nu se depete capacitatea de metabolizare tisular a rumegtoarelor. Totodat se va avea n vedere i meninerea ratei de cretere populaiei bacteriene.
energia caloric de fermentaie ; activitatea bacterian se face cu consum de energie rezultnd aa numita cldur de fermentaie care a fost evaluat la 3-12 % din energia furajelor ingerate respectiv la circa 6 % din energia celulozei coninut de raie. S-a constatat c forma fizic a furajelor (particulele de dimensiuni mici) i preparatele enzimatice diminu pierderile de energie pe aceast cale.
IV.A.5. METODE BIOTEHNOLOGICE DE INFLUENARE A METABOLISMULUI RUMINAL AL LIPIDELOR
n condiii obinuite de hrnire aportul de lipide prin raiile furajere pentru rumegtoare este destul de sczut fiind evaluat la circa 148
2-5 % din SU. Lipidele din furaje sunt n principal ca gliceride i fosfolipide. Sub aciunea microsimbionilor, n rumen au loc procese se scindare (lipoliz) a lipidelor n glicerol i acizi grai nesaturai i saturai (figura 3).
149
Lipoliza este efectuat n principal de populaia bacterian, rolul protozoarelor fiind insuficient cunoscut. Numrul bacteriilor lipolitice i biohidrogenatoare este redus la animalele hrnite cu raii bogate n concentrate i mai ridicat cnd predomin fibroasele. Astfel n primul caz crete ponderea acizilor grai nesaturai n lipidele din lapte. Glicerolul rezultat n decursul lipolizei se transform n AGV. Acizii grai cu lan lung pot fi incorporai uor n celulele bacteriene i ale protozoarelor (CRISTA, 1985). n rumen, acizii grai nesaturai : oleic, linoleic i linolenic sunt rapid hidrogenai i transformai n acid stearic. Dup diferii autori citai de CRISTA (1985) la caprele lactante, 90 % din acizii grai nesaturai sunt biohidrogenai iar la vacile n lactaie, 68 % din acidul linoleic este hidrogenat. Odat cu fluxul ruminal acizii grai cu lan lung sunt transferai i absorbii n intestin. Concomitent cu procesele de lipoliz i biohidrogenare n rumen se produce i o sintez de lipide. Att bacteriile ct i protozoarele dispun de capacitatea de a sintetiza acizi grai cu lan lung din precursori cu numr par sau impar de atomi de carbon sau din precursori cu caten de carbon ramificat. Raiile bogate n fibroase stimuleaz sinteza microbian de acizi grai n schimb adugarea uleiurilor inhib sinteza de lipide (SUTTON i colab., citat de CRISTA 1985). i AA cu sulf sunt factori de influen, metionina stimulnd sinteza lipidelor microbiene n vitro (PATTON i colab., citat de CRISTA 1985). Datorit lipidogenezei ruminale, cantitatea de lipide din digesta sosit n intestin este mai mare dect cea coninut de furajele consumate i de asemenea nsuirile fizico-chimice ale lipidelor din esutul adipos al rumegtoarelor se caracterizeaz printr-o proporie 150
mai ridicat de acid stearic i prin prezena acizilor grai ramificai sintetizai de bacteriile ruminale. Avnd n vedere necesarul energetic foarte ridicat la vacile de lapte performante la nceputul lactaiei precum i posibilitile de influenare a compoziiei i a proporiei lipidelor din lapte pentru nutriioniti sunt posibile urmtoarele ci de intervenie n metabolismul ruminal al lipidelor :
suplimentarea cu lipide a raiilor ; n cantiti mari, ns ca efect al lipolizei, acizii grai cu lan lung care rezult pot reduce fermentaiile ruminale. Aceasta se explic fie prin aderarea acizilor grai cu lan lung la particulele celulozice din fibroase care devin impermeabile, fie c acoper suprafaa celulelor bacteriene pe care le pot inactiva. Pentru c se pot diminua i cationii disponibili n lichidul ruminal i ndeosebi Ca 2+ , adugarea srurilor de calciu (carbonai, cloruri) dar i de magneziu previne reducerea digestibilitii datorit suplimentrii grsimilor. S-a stabilit c un adaos de lipide n raie de 3-5 % are un efect bun la vacile de lapte cu producii mari. Este de reinut i c incorporarea direct a unor compui lipidici din raie n lipidele proprii celulare de ctre bacterii ar putea economisii o fraciune de ATP pentru sinteza altor compui, cum ar fi proteina bacterian (CRISTA, 1985).
utilizarea de lipide protejate n raia rumegtoarelor ; grsimile protejate scap de aciunea lipolitic a microsimbionilor digestia acestora producndu-se prin lipazele din secreiile biliare. De regul pentru protejare se folosesc lipidele nesaturate, de preferin de origine vegetal pentru ca o parte ct mai mare din acizii grai s rmn nemodificai de aciunea simbionilor ruminali. Dintre lipidele de origine animal se utilizeaz mai frecvent seul i osnza, eficiena digestiv fiind i n aceste cazuri mai ridicat n cazul protejrii acestora. 151
Un produs complex realizat de CSIRO n Australia i folosit ncepnd cu anii 1970 este un amestec de grsime i extract proteic tratat cu formaldehid. Precipitarea proteinei de ctre formaldehid determin ncapsularea grsimii ntr-o pelicul rezistent la aciunea microsimbionilor. Cercetrile care se efectueaz acum n lume pe acest tip de produs urmresc creterea grsimilor polinesaturate n produciile rumegtoarelor (McDONALD i SCOTT, 1977). De mare interes practic poate fi i constatarea general c acizii grai saturai, avnd o solubilitate redus, n rumen sunt relativ, inerte la atacul microbian. n aceste condiii, CLAPPERTON i STEELE (1982) arat c administrnd la vacile de lapte cte 500 g / zi dintr-un preparat cu acizi grai liberi n proporie de 45 % palmitic, 45 % stearic i 10 % oleic, producia de lapte crete de la 15,4 l la 17,2 l / zi fr a se modifica procentul de grsime, ns cel de protein s-a diminuat. Cu un produs similar, la o proporie de 5-10 % din raie, CHALUPA i colab., 1989 constat c nu se influeneaz proporia AGV din rumen. Dup JEKINS i JENNY (1985) citai de PALMQUIST (1991) trigliceridele nalt saturate au dezavantajul c n intestinul subire sunt mai rezistente la aciunea lipazei comparativ cu acizii grai saturai n form neesterificat. Foarte interesant a devenit utilizarea aa numitor spunuri de calciu care sunt sruri de calciu ale acizilor grai cu lan lung i care fiind relativ inerte n rumen, dar ntrunesc o digestibilitate ridicat, pot fi folosite pentru aportul lor energetic n structura raiilor destinate vacilor cu producii mari de lapte (SKLAN i colab., 1991). Suplimentarea lipidelor n raii trebuie corelat i cu capacitatea de digestie a grsimilor n segmentul intestinal. Din acest punct de vedere s-a demonstrat c turaii cu o greutate corporal de 300 kg pot s digere zilnic o cantitate de lipide cu o valoare energetic de 7000 kcal iar mieii de 20 kg pot digera circa 100 g lipide / zi dup ROY i colab., BAILEY i ORSKOV citai de CRISTA, 1985. Metabolismul ruminal al lipidelor intereseaz i pentru obinerea de carcase cu coninut corespunztor de grsime att din punct de 152
vedere cantitativ ct i calitativ, pentru promovarea sintezei de lipide n lapte, etc.
IV.A.6. METODE BIOTEHNOLOGICE DE INFLUENARE A METABOLISMULUI RUMINAL AL AGV
Avnd drept surs de provenien substanele nutritive din raii, AGV sunt reprezentai n principal de acidul acetic, propionic, butiric precum i de acidul izovaleric i formic. Metabolizarea AGV la rumegtoare asigur circa 70 % din necesarul energetic. Ei confer de asemeni aciditate digestei ruminale. Mai ndeplinesc n organism i o funcie plastic : acetatul a fost evideniat n esutul glandei mamare, n muchii striai, n miocard, propionatul n esutul hepatic ; butiratul n epiteliul ruminal i n ficat. + Formarea AGV din proteine - prin proteoliza ruminal rezult peptide i AA care se folosesc apoi n procesele de biosintez proteic. AA pot fi incorporai n celulele bacteriene sau dezaminai pn la formarea de NH 3 , CO 2 i AGV. Contribuia cantitativ a proteinelor la producerea de AGV i cile de sintez a AA n rumen sunt nc puin cunoscute. Nu sunt nc estimri cantitative asupra contribuiei celulelor bacteriene din rumen pentru formarea AGV. + Formarea AGV din glucide polizaharidele din raii se scindeaz prin procesele fermentative din rumen, n funcie de natura lor n proporie de 40-85 %, produii finali ai degradrii fiind AGV precum i gaze, ndeosebi metan i bioxid de carbon. Proporia acestor produi variaz n funcie de caracteristicile fizico-chimice ale raiilor care determin tipul de fermentaie. + Formarea AGV din lipide sursa de formare o constituie glicerolul rezultat n urma lipolizei ruminale.
153
La taurinele adulte se pot forma pn la 4,5 kg AGV / zi iar la ovine 200-500 g / zi. Nivelul maxim se nregistreaz la 2-5 ore de la consumarea tainului. n coninutul ruminal se dezvolt compui caracteristici AGV a cror concentraie i proporie este variabil dup natura furajelor. Se apreciaz c totalul AGV n rumen variaz ntre 60-120 mEq / l. Sunt posibile i concentraii de peste 200 mEq / l n condiiile furajrii cu plante verzi (faz tnr) sau cu raii bogate n amidon. Cele mai mici fluctuaii zilnice se produc n furajarea cu fn, concentraia AGV fiind sub 100 mEq / l. Proporia AGV este influenat n principal de compoziia chimic a raiei astfel (tabelul nr. 17): - raiile n care predomin concentratele i glucidele uor solubile favorizeaz formarea acidului propionic (pn la 40 % din totalul AGV) ; - raiile bogate n fibroase determin formarea acidului acetic (55-75 %) apoi a acidului propionic (15-20 %) i acidul butiric (5-10 %) ;
Tabelul 17 Influena regimului alimentar asupra proporiei de AGV
Specificare Acid acetic Acid propionic Acid butiric C 2 / C 3 pH Fn de lucern 70 18 8 3,9 6,5 Concentrate la discreie + fn 47 28 18 1,7 6,3
Caracteristicile de metabolizare ale AGV :
154
- acetatul este utilizat pentru sinteza de compui tisulari i ai laptelui precum i ca substrat energetic. Acetatul este foarte activ preluat de glanda mamar lactant fiind un precursor important de sintez al acizilor grai din lapte. Se apreciaz c la o vac de 500 kg circa 3,8 kg acetat trece prin snge n 24 de ore. Acidul acetic fiind principalul acid din care se sintetizeaz grsimea laptelui, astfel se explic scderea coninutului n grsime dup administrarea unui regim de hran care reduce acetogeneza n rumen. n acest sens pot fi citate urmtoarele situaii : - coninutul redus de celuloz din raii ; - dezechilibrul ntre celuloz i glucidele uor fermentescibile favorizeaz formarea acidului propionic i modific raportul acetat / propionat care este optim de 2,5- 3/1 ; - consumul de iarb tnr (srac n substan uscat i celuloz) modific procesele fermentative din rumen, reducnd formarea acidului acetic. n acest caz trebuie s se intervin cu supliment de fn sau paie n raie ; - cnd raiile sunt srace n fn dar conin cantiti mari de furaje bogate n glucide fermentescibile (sfecl, gulii, tiei de sfecl) respectiv la consumuri mai mari de 4-5 kg SU. Deci trebuie limitat consumul de suculente la 30-35 kg / zi.
- propionatul : este un metabolit important fiind un precursor gluconeogenetic - deoarece este convertit n glucoz. Direct acidul propionic are o contribuie redus la sinteza acizilor grai din esutul adipos i are efect depresor asupra lipidelor din lapte.
- butiratul n absorbia de la nivelul epiteliului ruminal circa 30 % din butirat este metabolizat i transformat n corpi cetonici.
155
Betahidroxibutiratul este preluat din circulaie de glanda mamar i utilizat pentru sinteza de acizi grai cu lan scurt i mediu din lapte.
Absorbia AGV
Din totalul AGV produi n rumen, 87 % se absorb prin mucoasa rumenului, 12,5 % se absorb n foios i 0,5 % intr n cheag. Absorbia AGV n rumen se realizeaz cu vitez mare n mucoasa sacului ruminal ventral, care are papilele ruminale mai puin cheratinizate ; la fel se absorb AGV n segmentul ceco-colic al cailor i iepurilor. S-au demonstrat interrelaiile de transfer i de metabolizare a AGV n mucoasa ruminal, ndeosebi prin diferenele de concentraie ale AGV din coninutul ruminal care este de 7-10 ori mai mare dect concentraia din sngele venos, care prsete peretele ruminal. Viteza de absorbie a AGV din rumen crete cu lungimea lanului, acidul acetic are viteza cea mai mic iar acidul butiric cea mai ridicat. Mediul acid favorizeaz absorbia AGV din rumen.
Posibiliti de influenare a proporiei AGV n rumen
n funcie de specializarea productiv a diferitelor categorii de rumegtoare se poate intervenii n direcia formrii preponderente a unui AGV prin factorii de influen cunoscui : - prin raportul de fibroase / concentrate dintr-o raie se poate determina formarea predominant a acidului acetic sau a acidului propionic. Astfel raiile bogate n fibroase genereaz formarea acetatului n proporie de 55-75 % i a propionatului 15-20 % n schimb raiile cu concentrate favorizeaz formarea propionatului chiar pn la 40 % din totalul AGV ; - cunoaterea cilor de metabolizare a glucidelor i a mecanismelor biochimice de formare a CH 4 au condus la 156
posibilitatea de a devia reaciile biochimice ruminale spre formarea de propionat i de diminuare a metanului ; n concluzie i foarte schematic, dup GUILLOT i RUCKEBUSCH, o vac de 600 kg cu o capacitate de 150 l a reticlulo-rumenului, n plin producie poate fermenta, n mediu anaerobic, 90 l de coninut, echivalentul a 10 kg substane organice cu potenial oxido-reductor de 250-400 mV, producndu-se 6-7 kg AGV, 1 m 3 de gaze (30-40 % CH 4 i 60-70 % CO 2 ) i 3-4 kg materii microorganice.
B. LA MONOGASTRI CE
Particularitile anatomice, fiziologice i regimul alimentar condiioneaz parametrii fizico chimici ai tubului digestiv i n consecin i ecosistemul microbian. i la monogastrice microflora digestiv se caracterizeaz printr-o stare de echilibru la animalele adulte i sntoase dac creterea i regimul alimentar sunt corespunztoare. Anatomia i fiziologia digestiv, regimurile alimentare, strile patologice precum i interveniile medicamentoase pot s influeneze mult compoziia microflorei digestive. De aceea, n prezent pentru ultimii factori amintii n conduita terapeutic de prevenire i combatere a tulburrilor digestive medicaia propriu-zis se asociaz cu preparate biologice de reechilibrare a microflorei. n cele prezentate s-au fcut numeroase referiri la produsele comerciale din categoria probioticelor, stimulatorilor de cretere etc., prin care se urmrete refacerea i stabilizarea microflorei la nivelul traiectului digestiv. Principalele caracteristici anatomice i din punct de vedere al fiziologiei digestive prin care se contureaz specificitatea unor tehnici biotehnologice le prezentm pe urmtoarele categorii :
157
Erbivorele monogastrice au ca exponeni principali cabalinele i iepurii. Acestea asimileaz elementele digestibile ale raiei n partea anterioar a tubului digestiv ns unii nutrieni nedigerai ca de exemplu celuloza vor tranzita pn n intestinul gros respectiv n cecum care este transformat ntr-o voluminoas camer de fermentare i care este populat cu o flor microbien celulolitic i proteolitic abundent. La cabalineconinutul util al stomacului este redus (la circa 10 litrii) iar valorile pH-ului rmn atta timp ct se efectueaz rennoirea coninutului mai aproape de 5-6 dect de 3-4 ceea ce inhib puin proliferarea microbien. La nivelul intestinului gros activitatea o - amilazei pancreatice este mai redus la cal dect la carnivore, ceea ce se presupune c are consecine asupra digestiei amidonului. Analizele comparative ale coninutului diferitelor segmente ale tubului digestiv, arat c proteinele sunt digerate n medie n proporie de 60 % la nivelul intestinului gros (WOLTER i colab., 1979). Activitatea fermentativ este limitat la segmentul ceco-colic cu producie de acizi grai volatili i sintez bacterian pornind de la amoniac. Cecumul i colonul este populat de o microflor abundent alctuit din bacterii strict i facultativ anaerobe printre care predomin bacili i coci din genurile ENTEROCOCCUS, BACTEROIDES i LACTOBACILLUS. Aceast microflor atinge 10 10 bacterii / g coninut cecal din care aproape jumtate este reprezentat de flora celulolitic iar circa 2-8 x 10 5 / g de flora proteolitic. Din activitatea acestei microflore rezult o producie orar de AGV de 50-100 mmol / l de coninut cecal care acoper 20- 30 % din cerinele energetice precum i 2,5 mg protein bacterian / g SU coninut cecal. i flora strict anaerob este important dar dezvoltarea acesteia este limitat de concentraia n AGV. Dup RALSTON i colab., 1983 citat GUILLOT i RUCKEBUSCH (1994) creterea concentraiei de AGV poate fi un factor declanator al inhibrii ingestiei de furaje. Astfel la nceputul perioadei de punat, ierburile ingerate fiind bogate n glucide fermentescibile i proteine 158
determin la nivelul cecumului o proliferare i activitate microbien intens ceea ce are ca efect producerea de gaze de fermentaie care pot provoca o distensie cecal dureroas i formarea n cantiti mari de acid lactic responsabil de o atonie digestiv. La iepuri, tubul digestiv este adaptat digestiei unor mari cantiti de furaje. Stomacul este voluminos iar intestinul subire lung de 3,2 m are un coninut duodenal foarte fluid i alcalin (pH cuprins ntre 7,05 i 7,18) ca urmare a unei abundente secreii pancreatico-biliare. Cecumul este segmentul cel mai voluminos al traiectului digestiv, capacitatea sa fiind mai mare dect a stomacului. Coninutului cecal poate fi eliminat sub form de crotine moi sau cecotrofe pe care animalul le inger odat pe zi. Cecotrofia prin care se asigur recircularea digestei determin un aport proteic de 20 % i energetic de 10 % din metabolismul de baz. Cecotrofia asigur i o suplimentare n unii aminoacizi ca lizina, treonina sau leucina. Microflora digestiv la iepure evolueaz odat cu vrsta n special dup nrcare. Aceasta se caracterizeaz prin dominana bacteriilor strict anaerobe reprezentate de genul BACTEROIDES care se regsete la toate nivelele tubului digestiv. Clostridiile i bifidobacteriile sunt de asemeni prezente. O particularitate a microflorei la iepuri dup nrcare este c bacteriile facultativ anaerobe sunt cantitativ mai puin importante, lactobacilii fiind rar ntlnii, de asemenea popularea cu ESCHERICHIA COLI este redus sau chiar absent ; i enterococii au o prezen neregulat. n cecum, digestia celulozei conduce la o producie de AGV a cror concentraie poate fi un factor declanator al cecotrofiei (LAPLACE, 1978 citat de GUILLOT i RUCKEBUSCH, 1994). Pentru c iepurii nu diger dect 10-30 % din celuloza ingerat, energia de origine celulozic provine n principal din acizii grai cu lan scurt : acidul acetic, butiric i propionic. Circa 10 % din energie se pierde prin gazele de fermentaie (CH 4 , CO 2 , H 2 ) iar restul se utilizeaz de bacterii pentru cretere i multiplicare. La iepuri pentru a se produce fermentarea de ctre microflor a celulozei care ajunge n 159
cecum, trebuie s se asigure un aport corespunztor de materii azotate degradabile prin hran. La iepuri pentru a stimula rspunsul imun nespecific i pentru a bloca colonizarea cu germeni patogeni a traiectului digestiv se poate utiliza produsul Lapo-Mos al firmei Alltech n doz de 1 kg / t NC.
Omnivorele porcinele prin sporurile zilnice mari pe care le realizeaz, imediat dup natere i apoi dup nrcare relev proprietile tubului digestiv de a transforma rapid nutreurile ingerate n nutriente. Tranzitul alimentar este relativ ncet la nivelului segmentului ceco-colic astfel nct partea elicoidal a colonului este sediul unei activiti bacteriene intense iar acizii grai formai au un rol antiseptic care nu poate fi neglijat (PROHASZAKA, 1986 citat de GUILLOT i RUCKERBUSCH, 1994). Timpul mediu de retenie a ingestei la porcinele de ras Marele Alb este de 30 de ore la tineretul n cretere i de peste 51 de ore la adulte. Autorul mai sus citat mai susine i c un coninut n celuloz mai ridicat nu modific timpul mediu de reinere a ingestei la porcii n cretere. Acidul clorhidric secretat n stomac menine un pH intragastric la valori de 2-3 care corespunde zonei optime de aciune a pepsinei i care blocheaz creterea bacterian. Digestia n intestinul gros devine dependent de flora bacterian a crei activitate este n funcie de cantitatea de substane nedigerate care trec prin zona ileo-ceco-colic. Microflora la porcine care se implanteaz de la natere este constituit n majoritate de urmtoarele genuri : LACTOBACILLUS, BACTEROIDES, ENTEROCOCCUS, ESCHERICHIA i CLOSTRIDIUM. Caracteristica esenial este predominana lactobacililor care atinge nivele de populare de 10 7 -10 8
bacterii / g de coninut, n toate segmentele tubului digestiv, de la stomac unde tapeteaz epiteliul zonei esofago-gastrice pn la rect. Duodenul i partea proximal a jejunului gzduiesc o populaie microbian total de circa 10 8 bacterii / g dup care aceast concentraie crete de la ileon spre colon unde ajunge la 10 11 bacterii / g. n poriunea distal a intestinului, n clon i cecum, predomin 160
bacteriile strict anaerobe din genul Bacteroides. La porcine este de relevat rolul fiziologic esenial al microflorei intestinale care este nu numai metabolic ci i antimicrobian. Acest ultim efect este dat de exemplu de consumul de lactoserum care favorizeaz fermentaiile intestinale cu producere de acid lactic care este un bun antiseptic intestinal. Ca tehnici cu influen asupra microflorei digestive la suine se poate recurge la diferii aditiv furajeri care pot fi gsii i la noi n ar ca de exemplu : Acidifiani : - Acid Pak 4 Way Liquid Concentrate n doz de 2 ml / l ap de but. - Acid Pak 4 Way Feed Grade care se incorporeaz n nutreurile combinate de tip starter i grower n cantitate de 2,5-5 kg / t NC ; - Acid Lac Dry, o combinaie de acizi organici (acid lactic, fumaric, propionic, citric i formic) n doz de 3-5 kg / t NC ; - Selacid, amestec de acizi organici diferii i sruri ale acestora, n doz de 5-7 kg / t NC la purcei pn la 6 sptmni i 3-4 kg / t NC la porcii la ngrat ; Prebiotice : prin care se blocheaz colonizarea cu germeni patogeni a traiectului digestiv cu preparatul Por-Mos n cantiti de 1 kg / t NC starter i 0,5 kg / t NC de tip grower i finisher. Enzime furajere : - Kemzyme PS Dry, este o surs stabilizat de enzime pentru tineretul porcin. Doza de administrare este 1 kg / t NC n raii de orz, porumb, rot soia ; - Porzyme 8300, produs multienzimatic pentru nutreurile combinate pe baz de gru destinat purceilor i tineretului suin pn la greutatea de 30 kg n doz de 1 kg / t NC ; Psrile aparatul digestiv prezint numeroase particulariti anatomice i funcionale n ceea ce privete motricitatea, secreiile 161
digestive i rolul microflorei. Astfel la psrile granivore, dilatarea esofagului n aa numita gu este important iar zona stomacal se compune din dou sectoare distincte : - stomacul glandular, bogat n glande care secret acidul clorhidric i pepsina n cantiti mai mari dect la carnivore; - stomacul triturator (pipota), la care mucoasa este cheratinizat i servete la sfrmarea grunelor de hran; n segmentul distal al tubului digestiv are loc absorbia apei i se produce o fermentaie microbian a proteinelor i a celulozei cu absorbia a circa 10 % din aminoacizii rezultai. Capacitatea celor dou cecumuri este cu att mai mare cu ct coninutul n celuloz al hranei este mai ridicat. Durata tranzitului la pui este redus dar totui variabil situndu- se ntre 3-5 ore. Flora microbian la psri se poate caracteriza prin importana numeric a lactobacililor (GUILLOT, 1987). n gu, lactobacilii, responsabili cu fermentaia glucidelor sunt dominani i adereni la mucoas , ajungnd la o populare de ordinul 10 9 bacterii / g coninut. Celelalte bacterii n cantiti mai reduse sunt de regul enterococi, colibacili la circa 10 5 / g i ocazional streptococi, micrococi i levuri. Bacteriile strict anaerobe se pare c sunt absente la nivelul ingluviului. Flora bacterian n partea proximal a tubului digestiv respectiv de la ventricul pn la jonciunea ileo-ceco-colic se difereniaz puin calitativ de gu. Cantitativ, este influenat de pH-ul acid i de tranzitul alimentar care limiteaz dezvoltarea microflorei. De la jonciunea ileo-ceco-colic, tranzitul mai lent iar pH-ul favorabil de 6,4-7,8 , mrete populaia bacterian. Pentru aceasta la nivelul cecumurilor condiiile de dezvoltare sunt mai favorabile datorit pH- ului de 6,5-7,5 , anaerobiozei i stazei ntre evacurile succesive ale cecului (la 24-48 ore). Astfel n acest segment al tubului digestiv prolifereaz o microflor abundent, care ajunge la 10 9 -10 10 bacterii / g coninut. Aceasta se constituie din bacterii facultativ anaerobe i bacterii strict anaerobe respectiv cele foarte sensibile la prezena 162
oxigenului. n aceast microflor, bacteriile strict anaerobe, lactobacilii i enterocii domin. Aproximativ jumtate din aceast populaie bacterian se constituie prin bacili strict anaerobi ne sporulai, respectiv coci i clostridii care descompun acidul uric (tabel 18). Flora digestiv este srac n primele ore de la eclozionare ns se dezvolt rapid dup prima ingest de hran. n aceast perioad microflora este format n principal de E. coli i de enterococi. Dup apariia i nmulirea lactobacililor n a doua sptmn de via, regreseaz concomitent flora proteolitic. La sfritul acestei perioade flora devine aparent relativ stabil. La curci i porumbei microflora este asemntoare cu cea de la gini, la rae apare de regul i o populaie crescut de enterococi de ordinul 10 9 / g coninut (DUCLUZEAU, 1969 citat de GUILLOT i RUCKERBUSCH, 1994).
Tabelul 18 Bacteriile strict i facultativ anaerobe prezente n cecumul puilor de carne (BARNES, 1978 citat de GUILLOT i RUCKEBUSCH, 1994)
Glucidele sunt predigerate la nivelul ingluviului sub aciunea microflorei producndu-se i acid lactic care are un efect bun asupra gazdei. n cecumuri, bacteriile sunt responsabile de formarea AGV n principal de acid acetic, propionic i butiric. Pentru metabolismul proteic, prezena microflorei const ndeosebi n preluarea moleculelor azotate pentru propriile sinteze. Utilizarea acidului uric sau a amoniacului este efectuat de specii ca Escherichia coli sau Enterococcus faecalis precum i de numeroase bacterii anaerobe ne sporulate. Microflora intestinal intervine deasemeni n metabolismul lipidic, asupra colesterolului i acizilor biliari pe care-i transform n taurin i colin care apoi sunt descompuse de bacteriile strict anaerobe. Vitaminele din hran sunt folosite de microflora bacterian, care sintetizeaz i ea n cecumuri o varietate mare de vitamine mai ales din grupa B, dar totui n cantiti insuficiente comparativ cu cerinele gazdei. n tehnicile biotehnologice cu influen asupra microflorei digestive la psri intr utilizarea aditivilor furajeri dintre care exemplificm : - acidifiani Acid Pork 4 Way Liquid Concentrate n doz de 2 ml / l ap de but ; - prebiotice preparatul Avi- Mos n cantiti de 0,5 kg / t NC att pentru broileri ct i pentru ginile outoare ; - enzime furajere Natugrain pe baz de | - glucanaz i endo - | - xylanaz se introduce n doz de 100 g / t NC destinate puilor de carne, ginilor outoare, curcilor dac proporia de gru depete 35 %, orzul 15 % sau triticale 20 % ; Kemzyme B Dry surs stabilizat de enzime (o - amilaz, | - glucanaz, complex de celulaze, lipaz, proteaz) n 164
doz de 1 kg / t NC cnd proporia de participare a orzului este de peste 50 % ; Avizyme 1100, n doz de 1 kg / t NC, permite includerea orzului pn la 60 % n raiile puilor de carne ; Avizyme 1500, un amestec de amilaze, xilanaze i proteaze n doz de 0,75 kg / t NC destinat ginilor outoare ; Rovabio Excel AP, produs cu xilanaz i | - glucanaz, este o pulbere destinat nutreurilor combinate pentru psri pe baz de gru i / sau secar i / sau orz ; Xylanase TR LC, un lichid cu xilanaz (500 uniti AXC / g) care se ncorporeaz n nutreurile combinate pentru psri pe baz de gru i / sau secar ; 165
BIBLIOGRAFIE SELECTIV
1. Al Attar A, Evans R.A and Axford R.F.E 1976. The effect of frequency of feeding and dietary energy source upon microbial protein synthesis in the rumen of sheep. Proc. Nutr. Soc. 35, 109 A (Abstract). 2. Arzola-Alvarez, C. Uribe-Gonzales, Jimenez-Castro, J 1999. Effects of quantity and degradability of dietary protein on ruminal fermentation and bacterial protein synthesis in goats. Faculdad de Zootecnia, Departamento de Nutricion, Chih. Mexico. 3. Burlacu Gh, Surdu I, Burlacu R, Cavache A 1998. Indicatorii noului sistem de apreciere a nutreurilor pentru rumegtoare. IBNA & SIAT Bucureti. 4. Cpria R 1998. Biochimie (Partea II Biocatalizatorii). Ed. Mirton. Timioara. 5. Chalupa W 1977. Journal of Animal Science nr.46. 6. Claperton J.L, Steele W 1982. Proc. Nutr. Soc. 41, 136 A. 7. Clark J.H 1975. Journal of Dairy Science. Nr. 58. 8. Clark J.H 1993. Feeding and Nutrition X. 9. Crista N 1985. Digestia, metabolismul i produciile la rumegtoare. Ed. Ceres Bucureti. 10. Dawson K.A 1990. Biotechnologies in the feed industry. Vol. V. Alltech Tech. Publ. Nicholosville. K.Y. 11. Dawson K.A, - 1990. Biotech. In the Feed. Ind. Vol. V. Alltech Publ. Nicolasville. K. Y. 12. Dreher, M,L, Dreher C,J, Berry J, W 1994. Starch digestibility of foods. A nutritional perspective. CRC. Crit. Rev. Food Science, 20, 47-71. 13. Drinceanu D, Milo M 1985. Metode i tehnologii de preparare a furajelor grosiere. Ed. Ceres. Bucureti. 14. Evers A,D, Stevens D,V 1985. Starch damage. Advances in Cereal Science Technology, 321-349, VII, Amer, Assoc, Cereal Chem, St.Paul Mn. 166
15. Ghergariu S 1995. Rev. Romn de Medicin Veterinar nr. 1 i 2. 16. Gibson S 1987. Feeding and Nutriton. Feeding strategies for a stable rumen pH. 17. Guillot J.F, Ruckebusch Y 1994. Microflore digestive des animaux. Bactries Lactiques. Vol II. Ed. Lorica. 18. Hlmgeanu P 1972. Contribuii la cunoaterea influenei sursei i proporiei proteinelor din raii asupra prolificitii scroafelor i asupra creterii i dezvoltrii purceilor. Tez de Doctorat. Institutul Agronomic Iai. 19. Hoover W.H., Miller T.K 1990. Proc. Pacific Northwest Nutr. Conf. p 173. 20. Hotten P 1991. World Poultry nr. 7 (9). 21. Jackson M.G 1977. Anim. Feed. Sci. tecnol. Nr. 2 p105-130. 22. Jarrige R 1988. Alimentation des bovins, ovins & caprins. INRA Paris. 23. Jouany J.P 1988. The roles of protozoa and fungi in ruminant digestion. Preambul Books : Armidale, Australia. 24. Jouany J.P, Thivend P 1983. IV th Symp. Protein metabolism and nutrition. Clermont-Ferrand. Coll. INRA vol II. 16. 25. Jouany J.P, Thivend P 1986. Anim. Feed. Technol. V. 15 p 215. 26. Journet 1985. http//:www.ads.uga.edu/annrpt/1985/95234htm 27. Jurubescu V 1966. Digestia la rumegtoare. Ed. Agro-Silvic. Bucureti. 28. Kim Y, K, Owens F, N 1985. Starch digestion by feedlot cattle : influence of roughage and intake level particle size. Oklahoma. Agr. Exp. Sta, M.P 17, 298-305. 29. Klusmeyer T.H., Lynch G.L., Nelson D.R 1991. Journal of Dairy Science 74. 30. Marinescu A 1980. Chimizarea n nutriia animalelor (Aditivi furajeri). Ed. Ceres. Bucureti. 31. McCarthy-1989 http://www.adsa.uic.edu/jds/toc/abs/98/Feb98ab462html 167
32. Milo M, Drinceanu D, Hlmgeanu P, Siniteanu S, Ghidali A, Luca I, Tmoiu R 1978. Lucr. t. IA Timioara. Vol XV. 33. Milo M, Vancea I, Hlmgeanu P, Siniteanu S, Drinceanu D, Moiescu V, Luca I 1977. Lucr. t. Zoot. Vol. XIV. 34. Orskov E.R, MacDreamid A, Grubb D, A, Innes G, M 1981. Utilisation of alkalitreated grain. 1. Alkalitreated grain in complete diets for steers and lambs. Anim. Feed Science technology, 6, 273-283. 35. Palmquist D.L 1991. Journal of Dairy Science. 74, 1354. 36. Philipson A.T 1970. Physilogy of digestion and metabolism in ruminant. England : Oriel Press, p422. 37. Pop I.M, Stan Gh 1997. Biotehnologii n alimentaia animalelor. Ed. Junimea. Iai. 38. Rhode 1985. http://www.asas.uic.edu/abs/1991/apr1167abs 39. Roissart H, Luquet F.M 1994. Bacteries Lactiques vol. II. Ed. Lorica. 40. Sasson A 1988. Biotehnologiile: sfidare i promisiuni. Ed. Tehnic. Bucureti. 41. Sklan D, Moallem U, Folman 1991. Journal of Dairy Science. 74, 510. 42. Stoica I, Stoica L, Pan C 1999. Aditivi furajeri. Ed. Coral Sanivet Bucureti. 43. Sutton 1983. http://wwwcipav.org.co/lrrd/lrrd4/2/cont42.htm 44. Tournut J, Labie C, Redon P, Sarraut O, Badia J 1969. Les Cohiers de Md. Vt. nr. 6. 45. Verde, N, Ioanid P 1995. Rev. Romn de Medicin Veterinar nr. 2. 46. Vintil M 1989. Tehnologii actuale de nsilozare a nutreurilor. Ed. Ceres Bucureti. 47. Willis M.C, Stallcup O.T, Kreider L.D 1980. Journal of Animal Science. Vol. 50, nr. 2. 48. Zhiguo 1989. http://www.cowcash-uk./shortruff.htm 49. *** http://www.asas.uic.edu/papers/1996/may/may1116abs.html
168
CUPRINS I. BIOTEHNOLOGII N PREPARAREA NUTREURILOR ............................ 1 I.1. BIOTEHNOLOGII N PREPARAREA SILOZURILOR .................................................. 1 I.1.1. Efectul i caracterizarea nutritiv a silozurilor ............................................. 2 I.1.2. Timpii tehnologici de preparare a silozurilor ............................................... 4 I.1.3. Adaosurile la nsilozare ................................................................................ 4 I.1.4. Procese fermentative la nsilozarea plantelor ............................................... 9 I.1.5. Dinamica proceselor microbiologice n masa furajer nsilozat ............... 11 I.1.6. Criterii de apreciere a calitii silozurilor ................................................... 14 I.1.7. Recomandri privind utilizarea silozurilor n hrana animalelor ................. 15 I.2. METODE BIOTEHNOLOGICE DE PREPARARE A NUTREURILOR GROSIERE ......... 16 I.2.1. Resursele furajere ....................................................................................... 16 I.2.2. Caracterizare nutritiv ................................................................................ 16 I.2.3. Metode i tehnici de preparare (prepararea biotehnologic) ...................... 17 I.2.4. Recomandri privind utilizarea nutreurilor grosiere n alimentaia animalelor ................................................................................................... 25 I.3. METODE BIOTEHNOLOGICE DE PREPARARE A GRUNELOR I BOABELOR ................................................................................................... 26 I.3.1. Caracterizare i efect nutritiv ..................................................................... 26 I.3.2. Conservarea grunelor i boabelor ............................................................ 28 I.3.3. Prepararea i prelucrarea grunelor i boabelor ........................................ 30 I.3.4. Mod de utilizare n hrana animalelor. ........................................................ 33 CAPITOLUL II RESURSE PROTEICE BIOTEHNOLOGICE ....................... 35 II.1. DROJDIILE FURAJERE ...................................................................................... 35 II.1.1. Caracterizarea nutritiv a drojdiilor furajere (DF) .................................... 35 II.1.2. Recomandri de utilizare n hrana animalelor .......................................... 40 II.1.3. Cultura de drojdii vii (Yeast culture) ........................................................ 41 II.2. BIOMASA BACTERIAN .......................................................................... 43 II.3. BIOMASA FUNGIC .................................................................................. 44 II.4. BIOMASA ALGIC ..................................................................................... 45 CAPITOLUL III PRODUSE BIOTEHNOLOGICE UTILIZATE N HRANA ANIMALELOR ........................................................................ 47 III.1. VITAMINELE ............................................................................................. 47 III.1.1. Vitaminele liposolubile ........................................................................... 48 III.1.2. Vitaminele hidrosolubile ......................................................................... 50 III.2. ANTIBIOTICELE DE UZ FURAJER I STIMULATORII DE CRETERE .................... 52 III.2.1. Antibioticele furajere ............................................................................... 52 III.2.2. Antibiotice anticoccidiene ....................................................................... 58 169
III.2.3. Stimulatorii de cretere ............................................................................ 59 III.3. AMINOACIZII SINTETICI......................................................................... 61 III.3.1. L lizina .................................................................................................. 62 III.3.2. D.L. metionina ...................................................................................... 64 III.3.3. L acidul glutamic .................................................................................. 65 III.3.4. L triptofanul .......................................................................................... 66 III.3.5. L treonina ............................................................................................. 67 III.4.PREBIOTICE ............................................................................................... 68 III.4.1. Oligozaharidele ....................................................................................... 68 III.4.2. Substanele acidifiante ............................................................................. 70 III.6. PROBIOTICELE ......................................................................................... 72 a). Bacteriile probiotice ....................................................................................... 73 b). Levurile i unii micei probiotici .................................................................... 76 III.6.1. Probiotice la psri .................................................................................. 80 III.6.2. Probiotice la porcine ................................................................................ 83 III.6.3. Probioticele la taurine .............................................................................. 86 III.6.4. Probiotice la ovine ................................................................................... 90 III.6.5. Probiotice la iepuri .................................................................................. 93 III.7. ENZIMELE DE UZ FURAJER .................................................................... 93 IV. TEHNICI BIOTEHNOLOGICE DE MANIPULARE A FUNCIILOR DIGESTIVE ........................................................................... 100 A. LA RUMEGTOARE ................................................................................... 100 IV.A.1. Microorganismele ruminale ................................................................. 100 IV.A.2. Tehnici biotehnologice de dirijare a activitii microorganismelor ...... 108 IV.A.3. Metode biotehnologice de influenare a metabolismului ruminal al substanelor azotate ............................................................................... 128 IV.A.4. Metode biotehnologice de influenare a metabolismului ruminal a glucidelor ............................................................................................... 140 IV.A.5. Metode biotehnologice de influenare a metabolismului ruminal al lipidelor ................................................................................................. 147 IV.A.6. Metode biotehnologice de influenare a metabolismului ruminal al AGV .................................................................................................. 152 B. LA MONOGASTRICE .156