GENETICA BACTERIAN

Ereditatea este nsuirea general biologic a tuturor vieuitoarelor de a transmite caracterele specifice speciei
la urmai iar variabilitatea apariia unor caractere diferite de cele ale genitorilor.
Dintre cele dou laturi ale geneticii bacteriene, variabilitatea este cea care intereseaz medicina n mod
deosebit. Modificarea zestrei ereditare la bacteriilor d natere unor tulpini bacteriene noi care, prin virulen i
rezistena la chimioterapice, se adapteaz mai bine condiiilor de mediu i nlocuiesc bacteriile mai puin adaptabile.
Un exemplu foarte sugestiv n acest sens l reprezint modificarea, numai ntr-un secol, a etiologiei infeciilor
nosocomiale 1. Astfel, agenii etiologici ai hospitalismului clasic ca, de pild, bacteriile din genurile Clostridium i
Streptococcus, se ntlnesc astzi extrem de rar, ei fiind nlocuii cu agenii etiologici ai hospitalismului modern care
sunt tulpini multirezistente la antibiotice ce aparin speciilor Staphylococus aureus, Pseudomonas aeruginosa,
familiei Enterobacteriaceae etc.
Pentru a nelege mecanismele variabilitii, vom schia, pe scurt, bazele structurii, replicrii i funcionalitii
materialul genetic la bacterii.

1. SUPORTUL MATERIAL AL EREDITII

Totalitatea caracterelor unei bacterii sunt determinate genetic, informaiile fiind codificate de ADN. Exprimarea
manifest a acestor caractere constituie fenotipul unei tulpini iar informaiile care le codific genotipul.
Genetica molecular, n general, a avut ca punct de pornire studiul bacteriilor i bacteriofagilor.
n anul 1892 August Weisman susinea, deja, c esena ereditii const n transmiterea la descendeni a unei
substane nucleare cu structur molecular specific. Cunoaterea precis a substanei care pstreaz i transmite
caracterele ereditare a parcurs un drum lung, care a nceput n anul 1928 prin experienele bacteriologului englez
Fred Griffith.
Griffith a pornit de la observaia c pneumococul de tip S, virulent, capsulat, injectat la oarecele alb produce la
acesta septicemie mortal, n timp ce injectarea pneumococului de tip R, nevirulent, necapsulat, sau a pneumococului
de tip S capsulat omort prin cldur rmne fr efect. Injectnd ns un amestec dintr-o tulpin de pneumococ de
tip R necapsulat, nevirulent, viu i o tulpin de pneumococ de tip S, capsulat, omort prin cldur, la oarece, acesta
a dezvoltat o septicemie mortal. Prin hemocultur s-a izolat pneumococ viu, de tip S, capsulat. Griffith a tras
concluzia c pneumococul viu de tip R necapsulat a preluat un principiu transformant de la pneumococul de tip
S omort, principiu ce i permite sinteza factorului de virulen - capsula.
Precizarea naturii acestui principiu transformant este meritul unui colectiv format din Avery, Mc Leod i Mc
Carty, care n anul 1944 au extras diferite substane din pneumococul virulent (polizaharid capsular, lipide, proteine,
acizi nucleici) i au artat c transformarea pneumococului de tip R se face numai n prezena acidului
dezoxiribonucleic provenit de la pneumococul de tip S.
Dovada hotrtoare c ADN este depozitarul informaiei genetice a fost adus dup descoperirea
bacteriofagului de ctre Twort i dHerelle, independent n 1915 i 1917. Atunci s-a demonstrat c bacteriofagul i
injecteaz numai ADN n celula gazd i c acesta singur este capabil s determine n celula gazd sinteza de
bacteriofagi complei, identici cu cei de la care provenea acidul nucleic.

1.1. Structura ADN

ADN este format din 2 catene spiralate complementare i de polaritate invers (modelul Watson i Crick),
fiecare fiind rezultatul polimerizrii ntr-o anumit ordine a untilor structurale de baz a acizilor nucleici, nucleotidele.
Acestea sunt formate la rndul lor dintr-o molecul de dezoxiriboz, o molecul de acid ortofosforic i dintr-una din bazele azotate
purinice - adenina (A) i guanina (G) - sau pirimidinice - citozin (C) i timina (T).
Scheletul spiralei este format din acidul ortofosforic i dezoxiriboz de care se leag bazele azotate.
Complementaritatea celor dou lanuri de nucleotide se realizeaz prin relaiile sterice ce se stabilesc ntre bazele
complementare, iar legturile prin puni de hidrogen.

Proporia de baze complementare este constant n cadrul unei specii, raportul adenin-timin/guanincitozin (AT/GC) servind drept criteriu taxonomic de baz n clasificarea modern a bacteriilor.

1.2. Replicarea ADN

Structura dublu spiralat a ADN permite replicarea lui identic, semiconservativ. Spirala se deschide ca un
fermuar la locul iniial al replicrii sub aciunea unei ADN-giraze. Pe fiecare spiral se va sintetiza o spiral nou,
complementar, cu participarea ADN - polimerazei (I, II, III) din direcia captului 5' terminal spre captul 3'
terminal.

1.3. Transcripia i translaia

S-a stabilit c specificitatea biologic a funcionalitii ADN const n secvena de nucleotide. Cele 4 baze se
succed n lanul de ADN ntr-o ordine specific ce se aseamn cu un text, secvena lor reprezentnd coninutul
textului. Fiecare aminoacid dintr-un polipeptid este codificat de trei nucleotide consecutive (triplet) ce alctuiesc un
codon. Codul genetic este corespondena dintre secvena codonilor i cea a aminoacizilor n cadrul unui polipeptid.
O gen (sau un cistron) reprezint o anumit secven de nucleotide ce codific structura primar a unui
polipeptid care funcioneaz direct sau mpreun cu alte polipeptide ca enzim sau protein structural.
Pe lng genele care codific polipeptide, exist, de asemenea, gene ce codific ARN-ul ribozomal i ARN-ul
de transfer.
Transcripia reprezint transcrierea codului genetic de pe ADN pe ARNm, proces la care particip o ARN polimeraz ADN dependent. Aceast enzim gsete prin intermediul unui factor promotorul, locul de legare i
recunoatere situat deasupra genei, sau a genelor din ADN care codific ARNm. La bacterii, promotorul este
reprezentat de regul de 40 de baze. ARN-polimeraza determin separarea catenelor de ADN i iniierea transcripiei
ARNm. Punctul de start corespunde primului nucleotid de m - ARN. Terminatorul este reprezentat de o succesiune
de baze care ncheie sinteza de ARNm. Cei mai muli ARN-m bacterieni sunt policistronici, deci conin informaii
codificate de mai multe gene.
Ceea ce deosebete transcripia la celulele procariote de cele eucariote este faptul c translaia ncepe imediat
dup iniierea transcripiei informaiei n ARNm, nainte chiar ca sinteza acestuia s fie ncheiat. Procesul de cuplare
transcripie-translaie este regul la bacterii.
Translaia reprezint transpunerea, respectiv concretizarea, informaiei m-ARN la nivelul ribozomilor n
secvena de aminoacizi din cadrul unui polipeptid.
ARN-m transpune informaia de pe gena corespunztoare la ribozomi nespecifici, crora le confer o
specificitate temporar sintezei unui anumit polipeptid. Ribozomul se nir pe ARNm, acesta fixndu-se de
unitatea 30S a ribozomului.
Aminoacizii sunt adui la ribozomi de ARNt sub forma de aminoacyl - tARN, pentru fiecare dintre aminoacizi
existnd cel puin un ARN de transfer. Acesta poart un anticodon complementar codonului de pe m-ARN. De
exemplu, ARNt pentru metionin are un anticodon UAC, ce se va lega de codonul AUG de pe ARNm.
Iniierea i terminarea translaiei secvenei de nucleotide ale m-ARN ntr-o secven de aminoacizi ntr-un
peptid sunt determinate de codoni speciali, codon start i stop. Regiunea ARN-m dintre cele 2 semnale se numete
regiune de codare, iar intervalul dintre 2 asemenea segmente, regiune intercistronic.
Sintezei oricrui polipeptid ncepe prin fixarea anticodonului de pe ARNt pentru formilmetionin pe codonul
de iniiere (start) de pe ARNm situat n poziia A a ribozomului (locul de fixare a aminoacidului). Menionm c
formilmetionina transportat aici de ARNt nu particip la structura polipeptidului, ci are numai rol de iniiere a
sintezei. n cazul cnd intr n structura polipeptidului, ea trebuie s fie neformilat. (Formil-metionina este o
substan chemoatractant puternic pentru leucocite, influennd deci aprarea antinfecioas.)
Dup fixarea anticodonului de codonul metioninei, ribozomul se deplaseaz de-a lungul ARNm n aa fel nct
pe poziia A a ribozomului trece codonul urmtor al ARNm, iar ARNt legat de ARNm trece n poziia P a
ribozomului(locul de elongare propriu-zis a peptidului). n poziia A vine urmtorul aminoacyl-ARNt. ntre
metionin i al doilea aminoacid se realizeaz legtura peptidic (NH-CO-) i ARNt al celui de al doilea aminoacid

este eliberat. Ribozomul sufer din nou o translocaie. Poziia A este din nou liber pentru al urmtorul ARNt, iar n
poziia P se afl primul ARNt de care este legat un dipeptidul rezultat. La acesta se va aduga un al treilea aminoacid
adus la ribozom i aa mai departe pn se ncheie sinteza polipeptidului care este semnalat de un codon nonsens
(stop) de pe ARNm. n aceast etap lanul peptidic este eliberat din legtura cu ARNt i ARNm i ribozom.

1.4. Reglarea activitii genelor

Jacob i Monod au imaginat un model de funcionare al genelor bacteriene care a fost demonstrat ulterior
experimental. Scopul mecanismelor de control genetic la bacterii este ajustarea metabolismului la condiiile mediului
nconjurtor n aa fel nct creterea i multiplicarea s se produc n condiii optime. Aceste mecanisme ale reglrii
negative, prezente numai la procariote, pot fi prezentate sintetic dup cum urmeaz:
genele structurale codific sinteza unor enzime care aparin unei anumite linii metabolice sunt situate una
dup alta i formeaz o unitate care se numete operon. Acesta este delimitat de secvenele de control care sunt:
- operatorul, care reprezint poriunea de ADN din structura operonului care recepioneaz semnalele
asigurnd funcionarea coordonat a operonului, promotor i terminator;
- promotorul, care este situat lng operator i iniiaz transcrierea genei structurale. La unii operoni
operatorul i promotorul sunt identici. La alii ei sunt nvecinai, sau chiar se ntreptrund;
- terminatorul, care incheie transcriptia;
gen reglatoare conduce activitatea unui operon i codific sinteza unui represor. Acesta, prin configuraia sa
steric este capabil s se fixeze pe operator, blocnd activitatea m-ARN polimerazei.
activitatea proteinei represoare este indus sau oprit printr-un efect alosteric determinat de molecule
semnal. Astfel, unele substane, ca de exemplu lactoza, inactiveaz represorul, rezultatul fiind declanarea activitii
genelor care codific enzimele catabolizante ale lactozei. Substanele care inactiveaz represiunea se numesc
inductori. Produii finali de degradare a unui substrat, activeaz represorul. Astfel operonul anabolizant, ce codific
enzimele sintetice va fi inhibat. Produii operonilor anabolici, ce activeaz represorul se numesc corepresori.

2. ORGANIZAREA MATERIALULUI GENETIC LA BACTERII

Genomul bacterian este alctuit din repliconi, care sunt formaiuni genetice ce se pot replica independent.
Astfel, se descriu:
cromozomul bacterian
elemente genetice extracromozomiale
elementele genetice transpozabile

- plasmide
- genomul bacteriofagilor
- fragmentele de inserie (IS)
- transpozonii (Tn).

2.1. Cromozomul bacterian

Majoritatea genelor bacteriene se gsesc ntr-un cromozom haploid, echivalent nuclear care codific
informaiile absolut necesare supravieuirii speciei n condiii normale.
Cromozomul la Escherichia coli este format dintr-o molecul circular dublu spiralat de ADN ce reprezint
80% din greutatea lui, dintr-o component proteic, ARN-polimeraza care reprezint 10% iar restul de 10% din
ARNm i ARNr n curs de sintetizare.
Pe lng dispoziia dublu spiralat spre dreapta a catenelor de ADN (o spir = 10 baze), acestea sufer o
suprahelicare spre stnga (o spir suprahelicat = 15 spire). Acest mod de organizare denumit supercoil sau
supertwist asigur pe de o parte mpachetarea economic a ADN i pe de alt parte o configuraie optim
activitii funcinale a ADN (replicare, transcripie, recombinare). Modelul de mpachetare a nucleului bacterian a

fost descris de Pettijohn i Hecht (1973) pentru E. coli i se pare c are un caracter general la bacterii.

2.2. Formaiunile genetice extracromozomiale

2.2.1. Plasmidele
Plasmidele sunt formaiuni genetice autonome, extracromozomiale, libere n citoplasm, reprezentate de
molecule circulare de ADN care se replic independent de cromozom. Denumirea de plasmide le-a fost dat de
Lederberg n 1952, iar importana lor practic a fost sesizat n 1963 de Watanabe, o dat cu descoperirea
posibilitii transmiterii prin plasmide a rezistenei la antibiotice ntre bacterii .
Bacteriile conin foarte frecvent plasmide, descriindu-se peste 1.000 de tipuri diferite. Lungimea acestor
molecule variaz ntre 1-150 mm i greutatea molecular ntre 2-3 milioane (3x10 3 pn la 450x103 perechi de baze).
Plasmidele mici se gsesc de obicei ntr-o celul bacterian n 10-40 de copii, pe cnd cele mari n numr mai redus
de 1-3 copii. n aceeai celul nu pot coexista mai multe plasmide nrudite (cu mecanism comun de control al
replicrii), ele fiind incompatibile, spre deosebire de cele nenrudite (cu mecanism distinct de reglare al replicrii),
care sunt compatibile. Compatibilitatea exprim competiia plasmidelor pentru un anumit situs de legare n celula
bacterian.
Plasmidele pot fi:
conjugative, care se pot transfera singure la alte bacterii, ca de exemplu plasmidele de rezisten la antibiotice
R,
neconjugative, care nu pot prsi ele nsi bacteria de origine, ci numai prin intermediul unui alt plasmid
conjugativ sau a unui bacteriofag (de exemplu plasmidul care codific secreia de beta-lactamaz la S.aureus)
episomi, care se pot integra prin recombinare n cromozomul bacterian, pierzndu-i astfel autonomia de
replicare. Un exemplu de episom este factorul de sex F (plasmidul F sau factorul de fertilitate).
Determinanii genetici eseniali ai plasmidelor codific informaiile legate de replicarea lor autonom, iar cei
accesorii caractere fenotipice neeseniale supravieuirii celulei bacteriene n condiii naturale: gene de transfer ( tra),
de rezisten la antibiotice (factorul R), de secreie a colicinelor (factorul col), de secreie a unor toxine, de
metabolizarea unor substraturi, de rezisten la unii ioni i compui organometalici etc. Unele plasmide nu au un
efect observabil asupra fenotipului bacteriei i se numesc plasmide criptice.
Pentru medicin important este cunoaterea plasmidelor de virulen i a celor care confer bacteriilor
rezistena la antibiotice.
Plasmidele de virulen poart determinanii genetici ai unor factori de virulen la bacterii, ca de exemplu
secreia de enterotoxina (termolabil i termostabil) i factorul de colonizare la Escherichia coli, hemolizina la
Staphylococcus aureus, Streptococcus faecalis i E.coli, exfoliantina la S. aureus, gena de invazivitate la Shigella etc.
Plasmidele R -de rezisten la chimioterapice (Factorul R) sunt molecule circulare de ADN care constau n
esen din dou regiuni genetice distincte: genele care codific rezistena la antibiotice R, care pot fi unice sau
multiple i genele care confer plasmidului capacitatea de a se transfera FTR.
Rezistena la peste 90% din tulpinile de spital este de natur plasmidic. Existena acestor plasmide se explic
prin aglomerarea mai multor gene de rezisten R, pe acelai plasmid, prin fenomenul transpoziiei repetate de
material genetic. Plasmide de rezisten au fost evideniate la genurile Escherichia, Salmonella, Shigella, Proteus,
Providencia, Klebsiella, Serratia din familia Enterobacteriaceae, la genurile Pseudomonas, Acinetobacter, Vibrio,
Yersinia, Pasteurella, Campylobacter, Haemophilus, Neisseria, Bacteroides, Staphylococcus, Streptococcus,
Bacillus, Clostridium, i Corynebacterium. Plasmidele prezente la bacilii gram-negativi sunt mai mari dect cele
evideniate la bacteriile gram-pozitive.
Plasmidul F se mai numete i plasmid de sex, sau factor de fertilitate i conine, pe lng ali determinani
genetici, genele de transfer tra. Plasmidul F se poate transmite altor celule bacteriene prin conjugare. El se poate
integra n cromozomul bacterian putnd media transferul de gene cromozomiale de la o celul bacterian donor
la cea receptor. n funcie de prezena factorului F, bacteriile se mpart n:
bacterii F- lipsite de factorul F, denumite celule femele i care sunt receptoare de material genetic,

 bacterii F+, masculine, care au factorul F+, autonom, ca plasmid n citoplasm i care sunt celule donoare,
bacterii Hfr care au factorul F+ integrat n cromozom, de asemenea masculine,
bacterii F care au factorul F+ ca plasmid autonom, dup ce acesta a fost integrat n cromozom i l-a prsit
rupnd un fragment ADN din cromozom. i aceste celule dunt donoare, deci masculine.
2.2.2.Bacteriofagii
Sunt virusuri care pazariteaz bacteriile. Se cunosc 6 grupe morfologice de bacteriofagi, cei mai bine studiai
fiind bacteriofagii T ai bacilului coli.
Morfologie. Bacteriofagii sunt formai dintr-un cap hexagonal, un gt i o prelungire numit picior (coad).
Capul este alctuit dintr-un nveli proteic caracteristic virusurilor (capsida) i adpostete ADN. Coada este un
cilindru rigid nvelit ntr-un manon proteic asemntor miozinei i se termin cu o plac hexagonal ce conine o
enzim de tipul lizozimului. De placa bazal se aprind 6 fibre cu rol n fixarea bacteriofagului pe suprafaa bacteriei.
Ataarea bacteriofagului pe suprafaa peretelui bacterian este determinat de existena unor receptori de perete,
specifici. Aceast specificitate este de tip enzimatic i st la baza lizotipiei 2. Dup ataare are loc contracia
manonului proteic i bacteriofagul i injecteaz numai ADN n celula bacterian.
Dup ptrunderea genomului fagic n celula bacterian, acesta va determina sinteza de noi bacteriofagi identici
cu cel de la care a provenit ADN. ADN se replic prin replicare semiconservativ iar ribozomii bacterieni vor
sintetiza proteinele capsidale i ale cozii. Dup asamblarea noilor virusuri ele vor prsi celula bacterian care se
lizeaz. Acesta este ciclul litic al bacteriofagilor, iar ei se numesc fagi viruleni.
Dar nu ntotdeauna relaiile bacteriofag-bacterie evolueaz n acest fel. Uneori genomul bacteriofagului se va
integra n cromozomul bacterian ncadrndu-se i funcional n acesta. n aceast situaie el nu se mai replic dect
n acelai timp cu cromozomul bacterian, deci n timpul diviziunii bacteriene i se numete profag. Acest ciclu este
ciclul lizogen iar bacteriofagii se numesc fagi temperai.
Lizogenia are urmtoarele consecine pentru bacteria n cauz:
bacteria lizogenizat este imun la infecia cu acelai bacteriofag, dar nu pentru ali bacteriofagi
profagul codific el nsui unele caractere pe care le dobndete astfel bacteria lizogen. Un exemplu clasic n
acest sens este toxigeneza la bacilul difteric care este codificat de un profag ce se afl n cromozomul bacterian.
Tulpinile de bacili difterici care nu sunt lizogenizate de acest profag, nu sunt capabile s secrete toxina i sunt, deci
nepatogene,
transducia, mecanism de transfer genetic de la o bacterie la alta, mediat de bacteriofagi i asupra creia vom
reveni la variabilitatea bacterian.

2.3. Elemente genetice transpozabile

Elementele genetice transpozabile sunt fragmentele de inserie (IS) i transpozonii (Tn).
IS i Tn sunt fragmente mici de ADN cu limite structurale bine precizate care se pot integra repetat n mai
multe situsuri dintr-un genom. Existena lor a fost presupus nc n anul 1931 i n anul 1952 de Barbara Mc
Clintock care le-a denumit gene sltree (jumping genes). Descoperirea a fost primit cu mult scepticism i
nencredere la vremea respectiv, dar timpul a dovedit importana ei, autoarea fiind onorat cu premiul Nobel n anul
1983.

3. VARIABILITATEA LA BACTERII
Bacteriile sunt supuse acelorai legi ale eredittii, unitare lumii vii, cu unele particulariti dictate de
organizarea materialului genetic. Astfel, n timpul diviziunilor succesive (n lipsa unui accident genetic) toi
descendenii unei bacterii sunt identici ntre ei i identici cu celula din care provin. Aceasta este descendena vertical
cu formare de clone de indivizi identici, stabilitatea fiind posibil datorit cromozomului haploid cu set unic de
gene.
Variabitatea la bacterii, latur a geneticii care are implicaii deosebite n medicina practic, poate fi explicat

prin dou procese fundamentale:

variaia fenotipic, care reprezint schimbarea unor nsuiri ale bacteriilor, ca adaptare la condiiile mediului
nconjurtor, fr s intervin vreo modificare n genomul bacterian i
variaia genotipic, ce rezult prin modificarea genomului.
Apariia modificrilor genetice la bacterii este cunoscut de mult dar nu s-a tiut, ns, dac aceste modificri
urmeaz aceleai legi ca i la organismele cu organizare superioar. n 1943 s-a dovedit faptul c modificrile
proprietilor unei populaii bacteriene este rezultatul unor variaii rare la un numr mic de celule, care se selecteaz
i dau natere unei populaii noi. Variabilitatea la bacterii se produce prin: mutaii, transfer de material genetic i
transpoziie.

3.1. Mutaia
Modificrile spontane ale genomului se numesc mutaii i constau din modificarea secvenei de nucleotide
dintr-o gen. Ele pot fi punctiforme, inversii, inserii, deleii i mutaii secundare.
Mutaiile punctiforme afecteaz un singur nucleotid n cadrul unei gene i sunt reversibile. Consecinele unei
astfel de mutaii pot fi:
nlocuirea unui codon cu altul, ceea ce se va traduce prin nlocuirea unui aminoacid cu altul din structura unui
polipeptid. Aceast mutaie se numete mutaie cu sens greit,
apariia unui codon nonsens. Mutaia nonsens mpiedic sinteza n continuare a unui polipeptid, iar dac ea se
produce la nceputul genei ce codific un polpeptid - mutaie polar, acesta nu se va mai putea sintetiza deloc.
Inseria i deleia nseamn adugarea, respectiv pierderea a dou pn la sute sau chiar mii de nucleotide,
procesul fiind ireversibil. Acest tip de mutaie duce la modificarea important a secvenei de aminoacizi, fiind
denumit mutaie cu schimbare de proiect.
Mutaiile secundare sunt mutaiile reverse, care restabilesc o secven nucleotidic ce s-a modificat, iar
mutaiile supresoare permit exprimarea funciei anterioare a unei gene care a suferit o mutaie, fr restaurarea
codonilor iniiali. Acest fenomen se explic prin sinteza unui ARNt care tie s citeasc un codon nonsens.
Frecvena pe unitatea de timp cu care se produc mutaiile este diferit i se numete rat de mutaie. Mutaia
spontan variaz de la gen la gen ntre 10 -6 i 10 -10.
Mutaiile duc la apariia unor indivizi cu caractere noi, cum sunt rezistena la chimioterapice, structur
antigenic modificat, pierderea unor receptori specifici pentru bacteriofagi, pierderea capacitii de sintez a unui
metabolit etc.
Din punct de vedere medical intereseaz n mod deosebit mutaia spre chemorezisten care se poate produce
dintr-o dat, adic one-step, sau n mai multe etape, multistep.
Prin mutaie one-step bacteria devine rezistent brusc peste noapte la un antibiotic, pe cnd prin mecanism
multistep se produc mutaii multiple, succesive, pn ia natere o mutant rezistent la concentraii ridicate de
antibiotic. Astfel prima mutant va fi puin mai rezistent dect tulpinile slbatice din care provine, mutanta a doua
mai rezistent dect mutanta 1 .a.m.d.
Dat fiind c mutaiile naturale sunt rare, este necesar un mijloc care s selecteze mutanta pentru ca aceasta s se
transforme ntr-o populaie bacterian cu proprieti noi.
Rata mutaiei poate fi crescut n mod considerabil prin ageni mutageni, ca, de pild, raze X, UV, derivai
acridinici, ageni alchilani etc.
Mutaiile spontane sau induse pot duce la pierderea integral a unui plasmid printr-o modificare ce produce
deficiene ale mecanismului de replicare, astfel nct plasmidele nu vor mai fi motenite de celulele fiice.

3.2.Transferul de material genetic

Organismele superioare se reproduc sexuat. Materialul genetic a 2 indivizi de sex opus se transmite combinat

urmailor. Bacteriile se nmulesc vegetativ prin diviziune direct, deci materialul genetic provine de la o singur
celul. Cu toate acestea exist i la bacterii mecanisme care permit schimbul de material genetic de la o bacterie la
alta. Dat fiind c aceste mecanisme nu urmeaz legile sexuale ale transmiterii caracterelor ereditare, ele se numesc
mecanisme parasexuale. Transmiterea materialului genetic de la celula donor la celula receptor este unidirecional i
se realizeaz prin transformare, transducie i conjugare.
3.2.1.Transformarea
Reprezint transferul de material genetic de la o celul donor la una receptor sub forma de ADN pur, eliberat
fie prin liza celulei donor, fie prin extracie chimic. Acest proces a fost observat pentru prima oar la pneumococi de
Griffith n 1928. ADN-ul pneumococilor viruleni, capabili s sintetizeze capsula, s-a transferat la mutante R,
nevirulente, acestea din urm dobndind capacitatea de a sintetiza capsula. Transformarea s-a pus n eviden ulterior
la numeroase genuri cum sunt, de pild, Streptococcus, Haemophilus, Bacillus, Neisseria, Salmonella etc. i se
petrece nu numai ntre tulpiile aceleiai specii, ci i ntre specii diferite.
Transformarea genetic este posibil numai dac bacteria receptoare se afl n stare de competen, stare care-i
permite nglobarea de ADN strin. Competena este o stare fiziologic temporar a bacteriei, care variaz n funcie
de specie i de faza de multiplicare n care se afl bacteria. Dup unii autori, celulele competente au pe suprafaa lor
un antigen special numit factor de competen. n timpul strii de competen se modific structura peretelui celular,
care devine mai poros, ncrcat electropozitiv, favoriznd legarea ADN-lui strin.
Transformarea depinde n egal msur i de unele proprieti ale ADN transformant, cum sunt structura dublu
catenar i o dimensiune minim a moleculei de 1 x 106 daltoni.
Cu toate c transformarea s-a descoperit experimental i se practic astzi pe scar foarte larg n tehnicile de
inginerie genetic, ea se petrece n mod natural n mediile n care triesc mpreun multe specii bacteriene i unde
procesul de liz a celulelor bacteriene este frecvent, ca de exemplu n colon . Aici se pun n libertate cantiti mari de
ADN care, dac ntlnete celule bacteriene n stare de competen, va ptrunde i se va recombina cu genomul
acestora, conferindu-le caractere noi.
Majoritatea bacteriilor nu sunt n mod natural capabile de transformare dar experimental s-au dezvoltat metode
de inducere artificial a strii de competen foarte utile ingineriei genetice.
3.2.2.Transducia
Transducia reprezint un transfer de gene cromozomiale de la o celul bacterian la alta, mediat de
bacteriofagi. Unii bacteriofagi sunt capabili s transfere orice gen bacterian (transducie generalizat) iar alii
numai anumite gene (transducia specializat).
Transducia generalizat este mediat de fagii viruleni, litici, care dup ptrunderea n celula bacterian se
multiplic i determin liza celulei gazd. n timpul lizei celulei bacteriene cromozomul acesteia se fragmenteaz. Se
poate ntmpla, ocazional, ca un fragment cu o dimensiune apropiat de cea a genomului fagic s se integreze n
capisda bacteriofagului, n locul genomului fagic. Astfel de fagi sunt defectivi i nu se vor mai putea replica, dar pot
ptrunde n alte celule bacteriene injectndu-le ADN-ul, ce provine de fapt din genomul celulei donoare. ADN-ul se
va integra n cromozomul celulei receptoare prin recombinare, conferindu-i acesteia caractere noi, ca, de exemplu,
rezistena la chimioterapice, proprieti ce in de patogenitatea bacteriei etc.
Transducia specializat este mediat de fagii temperai. Dup ptrunderea n celula bacterian a ADN-lui
bacteriofagului temperat, acesta sufer iniial un proces de circularizare dup care se inser n cromozom prin
recombinare sub forma de profag. Inseria n cromozom se face pe baza homologiei dintre 10 perechi de baz ale
ADN fagic i bacterian. Profagul devine parte integrant a cromozomului bacterian, se va replica o dat cu acesta i
nu independent, deoarece este supus unui proces de represie din partea genomului gazd.
Bacteriile care au integrate n cromozomul lor un profag sunt n stare de lizogenie. n anumite condiii, ns, are
loc un proces de derepresie i genomul bacteriofagic prsete cromozomul bacterian devenind din nou autonom.
Cnd prsete cromozomul bacterian poate detaa din acesta un fragment de ADN care va rmne legat de genomul
bacteriofagic. Acest bacteriofag nu se va putea nmuli, fiind defectiv, dar va putea intra n alt celul integrndu-se
n cromozomul acesteia tot sub forma de profag. Fragmentul provenit de la prima celul bacterian poate s codifice
diferite caractere (rezistena la antibiotice, secreia unor enzime, toxine etc.), ce se vor manifesta fenotipic la noua
bacterie gazd.
Cel mai bine studiat exemplu de transducie specializat este cea mediat de fagul lambda i gena bacterian ce

codific degradarea galactozei (lambda-gal).

Transducia specializat nu trebuie s se confunde cu conversia lizogen. In acest caz caracterul nou al celulei
bacteriene este codificat chiar de genomul bacteriofagului temperat. Fenomenul a fost descris pentru prima oar, aa
cum am mai artat, la Corynebacterium diphteriae, toxigeneza fiind tributar prezenei unui fag temperat n
cromozomul bacterian.
3.2.3.Conjugarea
Conjugarea este transferul de material genetic de la o bacterie donoare la una receptoare printr-un proces de
mperechere, ce se realizeaz prin contactul direct dintre cele dou celule. Prin conjugare se pot transmite plasmide,
precum i gene cromozomiale (prin intermediul factorului F+).
Conjugarea la bacilii gram negativi.
Factorul F+ poate fi situat, aa cum s-a mai artat, ntr-un plasmid, favoriznd transferul acestuia sau n
cromozomul bacterian, fcnd posibil transferul unor gene cromozomiale de la o bacterie la alta. Celulele bacteriene
care au factorul F+ integrat n cromozom se numesc Hfr (high freqency of recombination ), deoarece ele pot transfera
material genetic cromozomial cu o frecven mare, ceea ce duce la recombinarea unor gene din cromozomul
bacteriei donoare cu material genetic al cromozomului celulei receptoare.
Prin intermediul factorului F+ inserat n cromozom se poate transfera o copie ntreag a cromozomului celulei
donoare la cea receptoare.
Transferul integral dureaz n jur de 100 minute. Procesul de mperechere este un mijloc ideal de localizare a
genelor pe cromozomul celulei donoare. Ca celul donoare se alege o tulpin Hfr. Aceasta va fi cultivat cu celule F-.
Prin agitare puternic a mediului se intrerupe procesul de mperechere la anumite intervale de timp, i se caut
recombinani printre celulele receptoare. Cu ct ntreruperea recombinrii se produce mai repede cu att gena studiat
se afl mai aproape de vrful moleculei de ADN transferat.
Transferul prin conjugare a plasmidelor este condiionat de prezena n plasmid a genelor de transfer tra,
care sunt responsabile de sinteza sex-pilului i de transferul plasmidului.
Conjugarea ncepe prin sinteza sex-pilului care va adera de receptori specifici prezeni pe peretele celular al
bacteriei receptoare. Dup formarea legturii dintre celula donor i cea receptor are loc replicarea de transfer a
plasmidului. O caten parental de ADN va rmne n celula donor, iar a doua va trece n celula receptoare, pe tiparul
lor sintetizndu-se catene complementare.
Din punct de vedere medical importante sunt plasmidele conjugative de rezisten - plasmidele R.
Dintre proprietile plasmidelor de rezisten ale bacililor-gram negativi, 3 sunt de interes medical deosebit :
frecvena transferrii: frecvena transferului multor plasmide slbatice pe receptori adecvai este relativ
sczut 10-4/ cel., i se datoreaz faptului c plasmidele tulpinilor slbatice sunt reprimate, adic produc un represor
care inhib activitatea propriei gene de transfer. Dac se incubeaz donorii i receptorii mpreun mai multe ore,
numrul de celule recombinante cresc;
spectrul de gazde: plasmidele transferabile R circul ntre specii diferite. Acest transfer are loc i n laborator
i n macroorganism. S-a descris astfel transferul de plasmide de la bacilul coli nepatogen la salmonele sau shigelle.
Nu s-a observat ns transferul plasmidelor de la bacterii gram-negative la cele gram-pozitive;
determinanii de rezisten R: caracteristici pentru plasmidele conjugative sunt determinanii de rezisten
multipli. S-au evideniat astfel la tulpinile izolate din spital plasmide ce au factori de rezisten fa de toate
chimioterapicele uzuale (ampicilina, cefalosporine, streptomicina, tetraciclina, cloramfenicol, kanamycina,
gentamicina, sulfonamide).
Conjugarea la bacterii gram-pozitive
S-au descris procese de mperechere i la bacteriile gram-pozitive ca, de pild, la genurile Streptococcus,
Streptomyces, Clostridium, procesul bazndu-se pe performana celulei receptoare.
Celula receptoare produce un peptid cu mol. mic (GM=1000 daltoni) care determin sinteza unor substane
proteice de agregare de ctre celula donoare cu afinitate pentru unele substane adezive de pe suprafaa receptorului.
Se produce astfel o legtur strns ntre receptor i donor cu formarea unei puni intercelulare care permite transferul

de material genetic. Prin analogie cu substanele atrgtoare la insecte peptidul ce induce substana de agregare a fost
desemnat ca sexpheromon.
3.2.4.Transpoziia
Transpoziia presupune integrarea ntr-un genom al unui elemente genetic transpozabil din aceeai molecul de
ADN sau din alta prezent n aceeai celul. Elementele genetice transpozabile se mpart, dup structur i mecanism
de translocare, n 3 clase:
CLASA I cuprinde sevenele de inserie (IS) i transpozonii compui.
Secvenele de IS au n jur de 1000 de baze i fac parte n mod normal din cromozom sau plasmide. Ele sunt
prezente n mai multe copii i sunt flancate la cele 2 capete a aceleai baze, 10-40 pb-IR (inverted repeats), dar n
ordine inversat. Acestea nrmeaz secvena ce codific proteine necesare procesului de transpoziie. IS nu confer
ele nsi un caracter nou celulei, dar pot produce dup inseria lor modificri n expresia genelor adiacente inserrii.
Transpozonii compui constau din 2 IS care nu au nevoie de secvena de ADN pentru codificarea transpoziiei
i delimiteaz determinani de rezisten sau a unor caractere ce pot apare n fenotipul bacteriei.Un exemplu de
transpozon de clasa I este Tn 9 i Tn10, care codific rezistena la cloramfenicol i, respectiv, la tetraciclin.
Transpoziia elementelor din clasa I se face pe baza translocrii conservative, secvena transpozabil mutnduse de pe repliconul donor pe cel receptor fr reduplicarea tranposozonului.
CLASA II - cuprinde familia de transpozoni TnA care se transloc dup modelul transpoziiei replicative,
adic prin reduplicarea Tn nainte de translocare. Tn original rmne pe loc, iar copia se inser n noul situs. La
proces particip 2 enzime: transpozaza i rezolvaza. n timpul translocrii replicative se formeaz un produs
intermediar ntre repliconul donor i receptor care se numete cointegrat i care va fi desfcut de rezolvaz. Pe lng
genele care codific enzimele necesare transpoziiei, Tn de clasa II mai conine o gen ce confer celulei un caracter.
Tn3, de pild, codific rezistena la Ampicilin.

CLASA III cuprinde bacteriofagii transpozabili ca, de pild, fagul Mu i D 108, care folosesc transpoziia ca
mod de replicare. Fagul Mu este un fag temperat care se inser n cromozomul celulei bacteriene dup ptrundere.
Inseria acestui fag intrerupe activitatea genei n care s-a inserat i a unor gene neadiacente din acelai operon. Fagul
se replic, originalul ramne pe loc, iar copia se inser n orice alt loc de pe cromozom.
Inseria oricrei gene ntre dou elemente transpozabile face posibil transferul ei prin recombinare
neomolog, n aceeai celul pe o molecul de ADN nenrudit structural.
Astfel, prin transpoziie se pot produce deleii, inversii, transpuneri de determinani genetici de pe un plasmid
pe altul sau chiar fuzionarea stabil a unor repliconi complei, de pild a dou plasmide.
Evoluia rezistenei la antibiotice a bacteriilor nu poate fi conceput astzi fr fenomenul de transpoziie.
Studii moleculare au relevat posibilitatea ca genele de rezisten la antibiotice s fi aprut cu mult timp nainte,
la microorganismele productoare de antibiotice. Aceti determinani genetici au fost mobilizai i au ptruns prin
mecanismele transferului genetic la bacteriile importante din punct de vedere clinic.
Mecanismele transpoziiei sunt responsabile de formarea plasmidelor cu multirezisten, prin inserarea
succesiv pe un plasmid a determinanilor genetici de rezisten situai ntre dou elemente transpozabile de pe alte

plasmide.

4. RECOMBINAREA SECVENELOR DE ADN

Indiferent care este mecanismul prin care are loc transferul sau transpoziia de material genetic, inserarea ADN
la noul sediu are loc prin recombinare.
Prin recombinare se nelege formarea de noi combinaii genetice ntr-un genom. Ea se poate petrece prin
schimb de segmente homologe sau prin integrare suplimentar de ADN.
Recombinarea legitim sau homolog are loc atunci cnd un fragment de ADN provenit de la celula donoare,
sau chiar din alt molecul de ADN se inser ntr-o regiune a ADN receptor ce se aseamn din punct de vedere
chimic cu cea a ADN-ului donor, deci prezint o homologie de baze. Este ntlnit n transformare, dar i n unele
forme de transducie i conjugare.
n ADN receptor se produc rupturi cu schimbul unor secvene homologe. n acest proces sunt implicate mai
multe enzime dintre care recA-proteina i recBC nucleaza. De aceea recombinarea legitim se mai numete recAdependent.
Recombinarea nelegitim sau heterolog const n integrarea de ADN suplimentar ntr-un replicon i este
recA-independent. Exemple de recombinare heterolog sunt integrarea a plasmidului F sau a unor profagi n
cromozom sau transpoziia elementelor genetice mobile.
Clonarea genelor este o form deosebit de recombinare nelegitim genetic in vitro. Astfel, plasmidele uor
transmisibile de la o bacterie la alta sunt folosite frecvent ca vectori pentru transferul i clonarea de material genetic
de la o bacterie la alta sau ntre organisme foarte ndeprtate din punct de vedere filogenetic. Prin aceast tehnic se
introduc n genomul bacterian gene care codific sinteza unor substane ca, de exemplu, interferoni, insulin, STH
etc., a cror obinere pe cale chimic ar fi fie imposibil, fie foarte costisitoare.
Bacteria preferat a ingineriei genetice este Escherichia coli, care n mod natural nu este capabil de
transformare, dar creia n vitro i s-au introdus n genom cei mai diveri determinani genetici provenind de la
organisme ndeprtate filogenetic, cum sunt omul i animalele.