Metabolismul intermediar

 Sistemele biologice = sisteme informaionale deschise

METABOLISMUL
Totalitatea transformrilor de substan, energie
i informaie care au loc ntr-un organism viu
Metabolismul general prezint dou aspecte eseniale :

catabolism
anabolism
2

CATABOLISM
Totalitatea reaciilor de degradare din organism
sunt frecvent reacii de oxido-reducere
au loc cu eliberare de energie
au loc cu creterea entropiei
energia eliberat este conservat n structuri cu legturi macroergice
(de exemplu - ATP, GTP)
Substanele macromoleculare cu mare specificitate structural, cu
nalt nivel de organizare, provenite din mediul nconjurtor sunt
transformate conform principiului termodinamicii n compui cu
molecul mic, cu specificitate redus, cu nivel sczut de
organizare.

ANABOLISM
Totalitatea proceselor de biosintez
decurg cu o scdere a entropiei sistemului (procese antientropice)
decurg cu consum de energie

sunt procese endergonice

Catabolismul i anabolismul se desfoar concomitent n celule

i sunt nsoite de schimburi de energie.

ATP

PRINCIPAL - rezervor
- furnizor
- transportor
- intermediar de energie

Procese amfibolice
4

Substrat redus

Substrat oxidat

Catabolism

ATP

ADP + Pi
Anabolism

Produs de biosintez
(stare redus)

Precursor
(stare oxidat)

Procesele catabolice sunt cuplate cu procesele anabolice prin mecanisme

caracteristice, care implic frecvent participarea ATP-ului.
ATP-ul joac un rol de principal rezervor, furnizor i transportor intermediar de
energie n organismele vii.
5

MECANISME GENERALE DE TRANSFORMARE A CONSTITUENILOR

ORGANICI FUNDAMENTALI AI ORGANISMELOR VII
Proteine

Polizaharide

Lipide

Aminoacizi

Hexoze
Pentoze

Acizi grasi
Glicerol

Stadiul I

Stadiul II
Acetil~SCoA

Ciclul
citratului

Stadiul III

2H
Stadiul IV

O2

2H

2H

2H

Oxidarea biologic

H 2O

ATP

CO2

Stadiul IV
OXIDAREA BIOLOGIC

RESPIRAIA CELULAR

OXIDAREA BIOLOGIC
Proces cu caracter de universalitate pentru toate organismele aerobe.
Oxidarea hidrogenului coninut n moleculele substratelor organice din
alimente de ctre oxigenul atmosferic, cu formare de ap i eliberare de
energie.

Hidrogenul substratului este transferat oxigenului molecular prin

intermediul unor transportori intermediari de hidrogen i electroni care
sunt sisteme oxidoreductoare cu poteniale redox cresctoare.

Substrat - H2

2 H+
2e-

1/

O2
(atmosferic)
2

H2 O
+ 57 kcal/mol
O28

Mitocondria sediul respiraiei celulare

OXIDAREA BIOLOGIC
Procesele de respiraie ce au loc la nivel mitocondrial reprezint etapa
terminal, comun, de oxidare biologic a moleculelor din alimente,
n cadrul creia se elibereaz o cantitatate mare de energie.

O parte din energia

eliberat este utilizat
sub diferite forme
(cldur, energie
osmotic, mecanic,
etc) pentru nevoile
imediate ale celulei

O alt parte din energia

eliberat este recuperat i
stocat n celul sub form
de legturi macroergice, n
cadrul unor compui specifici
bogai n energie, cum este
adenozin trifosfatul (ATP)
10

LANUL RESPIRATOR MITOCONDRIAL Definiie

TOTALITATEA SISTEMELOR
OXIDOREDUCTORE ENZIMATICE
PRIN INTERMEDIUL CRORA
HIDROGENUL SUBSTRATULUI ESTE
OXIDAT DE OXIGENUL ATMOSFERIC
CU FORMARE DE AP I CU

ELIBERAREA A 57 kcal/mol
CORESPUNZTOARE DIFERENEI DE 1,2V
DE LA POTENIALUL
HIDROGENULUI SUBSTRATULUI
(- 0,42 V) LA CEL AL O2 (+ 0,81 V).
11

Sistemele redox ce fac parte din lanul transportor de electroni

mitocondrial
Sistemul redox

+ 2H+ + 2e- H2O

Citocrom a3 (Fe3+) + e- Citocrom a3 (Fe2+)
Citocrom a (Fe3+) + e- Citocrom a (Fe2+)
Citocrom c (Fe3+) + e- Citocrom c (Fe2+)
Citocrom c1 (Fe3+) + e- Citocrom c1 (Fe2+)
Citocrom b (Fe3+) + e- Citocrom b (Fe2+)
Ubichinon + 2H+ + 2e- Ubichinol
FAD + 2H+ 2e- FADH2
NAD+ + H+ + 2e- NADH2
2H+ + 2e- H2
1/

2O2

Potenialul
redox
standard
E'o (voli)
+ 0,816
+ 0,350
+ 0,290
+ 0,250
+ 0,210
+ 0,120
+ 0,01
- 0,219*
- 0,320
- 0,420

E'o este potenialul redox standard msurat la pH 7 i 25oC, iar n este numrul de
electroni transferai n reacia general:
Oxidant + ne- Reductor
* valoarea este pentru molecula de FAD libera; FAD legat de flavoproteinele
specifice (de ex. succinat dehidrogenaza) are un E'o diferit (- 0,05V), ce depinde de
12
componenta proteic. (dup Lehninger, 2008)

COMPONENTELE LANULUI RESPIRATOR

Sisteme oxidoreductoare specializate:
1. Substratul donor de hidrogen;
2. Oxidoreductazele piridinice: coenzima piridinic - nicotinamida
adenin dinucleotidul (NAD+);
3. Flavin enzimele ce au drept grupri prostetice flavin
mononucleotidul (FMN) sau flavin adenin dinucleotidul (FAD);
4. Fier-sulf (Fe-S) proteinele;
5. Coenzima Q (CoQ) sau ubichinona;
6. Citocromii;
7. Citocromoxidaza - reacioneaz direct cu oxigenul molecular.

13

 Lanul respirator funcioneaz ca o succesiune de reacii redox n care

fluxul de echivaleni reductori este dirijat de la perechea cu
potenialul standard cel mai negativ donorul de hidrogen - spre
perechea cu potenialul standard cel mai pozitiv - oxigenul molecular.

Componentele sistemului enzimatic transportor de hidrogen au rolul de

a activa hidrogenul sub form de proton (H+).
Componentele transportoare de electroni citocromii, au rolul de
a activa oxigenul molecular sub form de anion (O2-).
Aceste forme moleculare activate vor reaciona i vor forma apa (H2O).

14

Lanul respirator mitocondrial

G = - 11,9 kcal
0,2 V
- 0,42 V

Substrat - H2

Substrat - Ox

- 0,32 V
NAD+

- 0,12 V*
- 0,06 V**
Fp-H2
(FMNH2
FADH2)

NADH+H+

Fp
(FMN*
FAD**)

G = - 9,9 kcal
0,13 V

+ 0,12 V
2 cit-b Fe2+

+ 0,01 V
CoQ

+ 0,29 V

+ 0,25 V
2 cit-c Fe3+
2e-

2eCoQH2

G = - 23,9 kcal
0,52 V

2 cit-b Fe3+

2 cit-c Fe2+

O2

2e-

2e2 cit a-a3 Fe3+

O2-

ATP
7,3 kcal

Transport de hidrogen

2H+

1/

2 cit a-a3 Fe2+

ATP
7,3 kcal

ATP
7,3 kcal

+ 0,81 V

H2 O

O2-

Transport de electroni

15

Structura lanului respirator mitocondrial organizat

funcional n complexele enzimatice Green
(Complexele I IV)
Substrat - H2

NADH + H+

Complexul I
NADH2 - ubichinon
oxidoreductaza
Proteine FMN
Proteine Fe-S
(8 atomi Fe
neheminic)

Complexul III
Ubichinon: cit c oxidoreductaza

Ubichinona
(CoQ)
Acid
succinic

Proteine FAD
Proteine Fe-S
(3 atomi Fe
neheminic)
Complexul II
Succinat - ubichinon
oxidoreductaza

2 Cit b
1 Cit c1
2 atomi Fe
neheminic
Proteine Fe-S

Cit c

Complexul IV
Citocrom a-a3:
oxidoreductaza
Cit a-a3
Proteine cu cupru

1/

2H+

H 2O

O2

O216

Schema lanului respirator mitocondrial organizat

funcional n complexele enzimatice Green

17

Energetica lanului respirator

Orice sistem redox se caracterizeaz printr-un potenial de oxidoreducere,

exprimat n voli (V).
Se exprim prin relaia lui Nernst:

E = E'o +

2,303 RT
nF

lg

[Oxidant]
[Reductor]

E - potenialul de oxidoreducere al sistemului redox;

E'o - potenialul standard (normal) al sistemului redox,
respectiv potenialul sistemului n care concentraia
oxidantului este egal cu concentraia reductorului;
R - 8,315 J/mol x K (1,987 cal/mol x K), constanta
gazelor ideale;
F - 96 485 coulomb sau 96,480 J/V x mol, numrul lui
Faraday sau echivalent caloric = 23,28 kcal/mol;
T - temperatura absolut exprimat n grade Kelvin (K);
Condiii standard: 298K = 25oC
n - numrul de electroni transferai n timpul procesului de
oxidoreducere;
2,303 - coeficientul de transformare a logaritmilor naturali
(ln) n logaritmi zecimali (lg).

18

Energetica lanului respirator

Variaia energiei libere standard (Go, cal/mol) ntr-un sistem redox:

[Oxidant]
G = - RT ln
[Reductor]
La transferul unui echivalent de electroni (n=1), i la o diferen de potenial
de 1 volt (E'o = 1 volt) se dezvolt o energie liber de 23,3 kcal/mol.

Go = - n F E'o

Go = - 1 x 23,3 = - 23,3 kcal/mol

La transferul a doi electroni, eliberarea de energie pentru o variaie de
potenial de 1 Volt :

Go = - 2 x 23,3 = - 46,6 kcal/mol

19

Energetica lanului respirator

E'o = - 0,42 V
Substrat - H2

2 H+
H2O + 57 kcal/mol

2e1/

O2
(atmosferic)
2

E'o = + 0,81 V

O2-

E'o = Eo(oxidant) - Eo(reductor)

E'o = + 0,81 - (- 0,42) = 0,81 + 0,42 = 1,23 V
E'o = 1,23 V
Go = - n F E'o

unde n = 2 electroni
F = echivalentul caloric al lui Faraday
(23,3 kcal/mol)
Go = - 2 x 23,3 x 1,23
Go = - 57,318 kcal/mol

E'o este pozitiv => transferul de electroni din cadrul lanului transportor
de electroni are loc spontan, deci Go este negativ

20

Conservarea energiei biologice

Fosforilarea oxidativ
Fosforilare oxidativ: procesele prin care oxidarea (transportul de
electroni) este intim cuplat cu formarea de compui fosforilai bogai
n energie.
ATP se poate forma numai n etapele n care variaiile de potenial
(E'o) sunt ndeajuns de mari ( > 0,12V) pentru a permite eliberarea
unei cantiti de energie superioar celei necesare formrii unei
legturi macroergice (~ 7kcal).
Treptele de fosforilare = locurile specifice, precise de conservare a
energiei - locuri de fosforilare

Raportul dintre cantitatea de fosfat legat sub form de ATP i

cantitatea de oxigen consumat n timpul desfurrii lanului
respirator = ct de fosforilare
21

Conservarea energiei biologice

Fosforilarea oxidativ

raportul P/O = ct de fosforilare

Raportul P/O = 3 n cazul oxidrilor care au loc
prin intermediul enzimelor piridinice
(NADH+H+)
Raportul P/O = 2 n cazul oxidrilor care au loc direct
prin intermediul flavin enzimelor
(FADH2)
1 NADH2 . . . . . . . 3 ATP
1 FADH2 . . . . . . . . 2 ATP

22

Randamentul energetic al lanului respirator

Procesul global de oxidoreducere poate fi scris sub forma a 2 reacii:
- reacie exergonic
NADH + H+ +

1/ O
2 2

H2O + 57 kcal/mol
NAD+

G = -57 kcal/mol

- reacie endergonic

3 ADP + 3 Pi

3 ATP + 3 H2O
G = 3 x 7 = 21 kcal/mol

Ecuaia global a fosforilarii oxidative poate fi scris astfel:

NADH + H+ 1/2 O2 + 3 ADP + 3Pi

3 ATP + 4 H2O + NAD+

23

Randamentul energetic al lanului respirator

Din transferul a 2 atomi de hidrogen de la NADH la oxigen rezult
o variaie a energiei libere de 57 kcal/mol din care sunt stocai n
legtura fosfat macroergic din ATP doar 21 kcal. Din energia de
formare a apei este nmagazinat ca energie biologic util energia
corespunztoare formrii a 3 molecule de ATP (21 kcal).
Randamentul procesului () va fi:
Total 57 kcal ..21 kcal (ATP)
100 kcal ......X
X 37% ()
Energia liber care nu este captat n legturile fosfat macroergice este
eliberat sub form de cldur sau este transformat n alte forme de
energie necesare pentru funcionarea celulei: energie mecanic, osmotic
24
sau energie luminoas (bioluminiscen).

BIOSINTEZA ATP
TEORIA CHEMIOSMOTIC
(ipoteza Mitchell, 1961)
Componentele principale care particip la procesul de fosforilare
oxidativ sunt:
pompa de protoni
ATP sintetaza
Fiecare din cele trei complexe - I, III i IV acioneaz ca pomp de
protoni. Complexul enzimatic ATP sintetazic (EC: 3.6.3.14)
(cunoscut i sub numele de complexul V) sintetizeaz ATP prin
utilizarea energiei gradientului de protoni generat de lanul
transportor de electroni.

25

BIOSINTEZA ATP
TEORIA CHEMIOSMOTIC
(ipoteza Mitchell, 1961)

Reprezentarea schematic a modelului teoriei chemiosmotice

26

BIOSINTEZA ATP
TEORIA CHEMIOSMOTIC
(ipoteza Mitchell, 1961)

n cursul respiraiei, transportul electronilor este cuplat cu transportul

protonilor (H+) prin membrana intern mitocondrial, dinspre matrix ctre
spaiul intermembranar. Acest proces induce formarea unui gradient
electric () prin membrana intern mitocondrial (cu mai multe sarcini
pozitive n exteriorul membranei dect n interior), i a un gradient de pH
(n exteriorul membranei pH-ul este mai sczut fa de micromediul
interior).
Ipoteza chemiosmotic susine deci posibilitatea ca fluxul de protoni, odat
transferai n spaiul intermembranar, s poat reintra n matrixul
mitocondrial prin trecerea lor prin interiorul domeniului FO al ATP
sintetazei. Aceast trecere reprezint fora motrice care determin sinteza
ATP din ADP i Pi. Gradientul de protoni va determina eliberarea ATP de pe
suprafaa enzimei (n absena unui gradient de protoni, ATP nou sintetizat
nu prsete suprafaa enzimei). n acelai timp, acest gradient de protoni
poate s disipeze att gradientul electric ct i cel de pH, i s restabileasc
starea de echilibru iniial.
27

BIOSINTEZA ATP
TEORIA CHEMIOSMOTIC
(ipoteza Mitchell, 1961)

Reprezentarea schematic a
structurii complexului enzimatic al
ATP sintetazei mitocondriale FO F1

Peter Mitchell a dezvoltat teoria

chemisomotic din anul 1961, i a fost
laureat al Premiului Nobel pentru chimie n
anul 1978.
n mitocondrie, FOF1 ATP sintetaza este
constituit din dou domenii funcionale:
un domeniu axial FO, de form cilindric,
inserat n membrana intern, i un
domeniu de form sferic F1, liber, situat
deasupra membranei, n matrixul
mitocondrial. Denumirea de FO deriv de la
faptul c oligomicina un inhibitor al ATP
sintetazei, se leag specific de aceast
poriune.
Domeniul F1 al complexului ATP sintetazic
conine 9 subuniti, care alterneaz ntr-o
structur asimetric, cu compoziia
33. Fiecare din cele 3 subuniti are
cte un centru activ care catalizeaz
sinteza ATP.
28

Transformarea energiei de oxidoreducere n energie luminoas

BIOLUMINISCENA
Variaia de energie n cursul oxido-reducerilor este utilizat pentru a excita
o molecul numit luciferin care trece ntr-o stare energetic ridicat,
instabil. Prin revenirea la starea stabil, iniial, aceasta emite radiaii
luminoase.
Mg2+

LH2 + ATP + luciferaz

LH2-AMP-luciferaz

O2

Mg2+

PPi

LH2-AMP-luciferaz

L + H2O +

luminiscen

29

Inhibitorii lanului respirator i fosforilrii

oxidative
a) Inhibitori ai transferului de hidrogen sau de electroni n lanul
respirator.
Rotenona (substan toxic de origine vegetal, utilizat ca insecticid)
Amitalul (amobarbitalul medicament din clasa barbituricelor)
blocheaz transferul de hidrogen de la centrii Fe-S asociai NADH
dehidrogenazei, la ubichinon
Antimicina A inhib transferul electronilor de la citocromul b
la citocromul c1
Piericidina este un antibiotic cu structur asemntoare CoQ, cu care
intr n competiie
Cianurile, monoxidul de carbon (CO), hidrogenul sulfurat (H2S),
i azida de sodiu (NaN3) inhib mai ales citocromoxidaza a/a3.
Malonatul este un inhibitor competitiv al succinat dehidrogenazei
30

Inhibitorii lanului respirator i fosforilrii oxidative

Succinat
(-) Malonat

FAD
FP2 Succinat-DH
FADH2

ATP
(-) 2,4-DNP

NAD+

(-) 2,4-DNP

(-) 2,4-DNP

FMN [4Fe-S]

(-) Piericidina

CoQ

[2Fe-S]

cyt b [Fe-S] cyt c1

(-) Rotenona
(-) Amital

Numeroase

ATP

ATP

substane,

cyt c

CN-

care

medicamente

pot

influena

oxidoreducerile tisulare i fosforilarea oxidativ.

O2

(-)
(-) H2 S
(-) CO
(-) NaN3

(-) Antimicina A

printre

cyt a a3

Hormonii tiroidieni sunt stimulatori ai oxidoreducerilor tisulare.

31

b) Decuplanii fosforilrii oxidative nu influeneaz semnificativ reaciile

lanului respirator, fluxul de electroni, dar opresc sinteza de ATP.
Determin
creterea
permeabilitii
membranei
interne
mitocondriale la protoni.
Transportul de electroni are loc cu o vitez mrit fr a stabili i un
gradient normal de protoni.

Exemple:
2,4-dinitrofenolul (DNP)
Valinomicina
Aspirina
Arseniatul
Thermogenina

32

c) Inhibitorii globali ai fosforilrii oxidative inhib concomitent

i respiraia i fosforilarea.
Oligomicina este un antibiotic care se leag de ATP
sintetaz, nchide canalul de H+, i previne reintrarea
protonilor n matrixul mitocondrial;
transportul de electroni se oprete datorit dificultii de a
pompa mai muli protoni mpotriva excesului de gradient.
transportul de electroni i fosforilarea sunt procese cuplate
dac unul din ele se oprete, nceteaz i cellalt.

INHIBITORII = utilitate practic, experimental, n studiul proceselor de

respiraie tisular, prin blocarea diferitelor segmente ale lanul transportor
de electroni i/sau a fosforilrii oxidative.
33

LANUL RESPIRATOR MITOCONDRIAL

- CONCLUZII 1. Lanul respirator componenta major a respiraiei celulare este un
proces universal i fundamental deoarece este generator de energie. El
se desfoar la toate vieuitoarele aerobe, n toate celulele care
conin mitocondrii (o excepie o reprezint eritrocitele), i n toate
etapele vieii celulare. n esen, are loc oxidarea hidrogenului.
2. Componentele lanului respirator sunt situate n membrana intern
mitocondrial, n ordinea cresctoare a potenialelor perechilor lor
redox.
3. Succesiunea acestor componente este foarte bine determinat, ele fiind
asamblate n complexe Green.
4. Oxidarea biologic este cuplat cu fosforilarea, respectiv cu formarea
de compui macroergici fosforilai ATP, sub aciunea complexului
enzimatic al ATP sintetazei.
5. Moleculele de ATP se formeaz n anumite trepte, acolo unde diferena
de potenial este > 0,12 voli i permite eliberarea unei energii > 7 kcal,
necesar formrii unei molecule de ATP.
34

ALTE SISTEME TRANSPORTOARE DE

HIDROGEN I ELECTRONI.
OXIDOREDUCERILE MICROZOMALE

35

Pe lng lanul respirator mitocondrial, mai exist n celule i alte sisteme

oxidoreductoare, care pot folosi ali acceptori de electroni sau hidrogen
dect oxigenul sau avnd tot oxigenul drept acceptor final, i care decurg n
paralel (separat), dup mecanisme diferite.

Denumirea de citocrom P450 se datorete faptului c avnd structur

citocromic, forma redus a derivatului su combinat cu monoxidul de
carbon prezint un maximum de absorbie la = 450 nm.
Citocromul P450 se gsete n toate formele de via, i constituie o familie
multigenic de enzime, reprezentat de un numr foarte mare de izoforme,
ce catalizeaz o varietate extins de molecule. Aceste izoenzime au rolul de a
cataliza hidroxilarea a numeroi compui endogeni i exogeni, printre care
steroizii, aminoacizii- mai ales cei aromatici, acizii biliari, precum i
numeroase medicamente (fenobarbital, morfin, codein, amfetamine etc.).
Unele hidrocarburi polinucleare carcinogenetice de tipul metilcolantrenului,
precum i alte substane xenobiotice" (strine de organismul gazd:
pesticide, aditivi alimentari, compui poluani, etc) pot fi detoxifiate sub
aciunea unor astfel de oxidaze mixte.
36

ALTE SISTEME TRANSPORTOARE DE HIDROGEN I

ELECTRONI. OXIDOREDUCERILE MICROZOMALE

Localizat n reticulul endoplasmatic neted (fraciunea microzomal)

Sistem transportor de electroni care nu este fosforilant (nu este productor
de ATP)
Implicat n procesele de hidroxilare i de dehidrogenare
Sistemul cuprinde:
donorul de echivaleni reductori - NADPH2

flavoprotein

fier-sulf-protein

citocrom microzomal specific, denumit citocromul P450, care are rol de

oxidaz mixt, cataliznd concomitent procese de hidroxilare i de formare a
apei.

Hidroxilazele utilizeaz NADPH, n calitate de cosubstrat i oxigenul molecular,

cataliznd urmtoarea reacie general:

R-H + NADPH + H+ + O2

R-OH + NADP+ + H2O

37

Mecanismul secvenial al oxidoreducerilor microzomale

Produs (R-OH)
hidroxilat

Citocrom P450
reductaza
NADPH+H+

1e-

2Fe2+-Sulf
proteine

FAD

2eNADP+

citP450-Fe3+

primul
electron

R-OH

Citocromul
3+
citP450-Fe
P450

citP450-Fe3+

R-H O

(Oxidat)

2Fe3+-Sulf
proteine

FADH2

2H+

citP450-Fe2+

Substrat (R-H)

Substrat (R-H)
Compus aromatic
Compus steroidic
Acizi biliari
Metabolit toxic endogen
Medicament

citP450-Fe2+

1e-

R-H

R-H

al doilea
electron

O2

O2

H2O
R-H + NADPH + H+ + O2

R-OH + NADP+ + H2O

38

2-

Mecanismul secvenial al oxidoreducerilor microzomale

Schema ilustreaz legarea substratului (R-H) de citocromul P450, transferul individual,
secvenial, al celor doi electroni de la NADPH-citocrom P450 reductaz, i legarea de
oxigenul activat, cu formarea substratului hidroxilat (R-OH) i a apei (H2O)
n prima etap, substratul R-H se combin cu forma oxidat (Fe3+) a P450 care este apoi
redus cu un electron (ce provine de la NADPH) la forma Fe2+. Acest transfer al
primului electron se face prin intermediul flavoproteinei (NADPH citocrom P450
reductaza). Fier-Sulf proteinele, au rolul de a separa cei doi electroni provenii de de
la NADPH. Complexul format din citocromul P450 (Fe2+) i substrat (R-H) reacioneaz
cu oxigenul molecular (O2) ntr-un asemenea mod nct unul din atomii de oxigen este
redus la ap, iar cellalt este introdus n substratul organic, rezultnd substratul
hidroxilat (R-OH). Ca mecanism, complexul este oxigenat i primete un al doilea
electron de la NADPH, rezultnd oxigen activat sub form de anion O2-. Urmeaz o
oxidoreducere intern cu formarea substratului hidroxilat i a apei (H2O), ambii
produi de reacie coninnd atomii de oxigen din molecula de O2. Citocromul P450
liber este regenerat sub form de Fe3+. Transferul de echivaleni reductori de la
NADPH se face n dou trepte, datorit aciunii Fe-S proteinelor.

39

R-H + NADPH + H+ + O2

R-OH + NADP+ + H2O

R-H - substratul care urmeaz a fi hidroxilat: compui aromatici,

compui steroidici, acizi biliari, medicamente, metabolii toxici
endogeni;
Un atom din molecula de O2 este ncorporat n substratul R-H iar
cellalt este redus cu formarea apei.
Flavoproteina microzomal i citocromul P450 prezint fenomenul de
inducie enzimatic: biosinteza i deci concentraia lor n ficat crete
semnificativ sub aciunea barbituricelor i a altor medicamente.
Aceti ageni stimuleaz proliferarea reticulului endoplasmatic din
celulele hepatice = > adaptare cu rol protector a celulei.
40

STADIUL III

CICLUL CITRATULUI
CICLUL KREBS
CICLUL ACIZILOR TRICARBOXILICI

41

Proteine

Polizaharide

Lipide

Aminoacizi

Hexoze
Pentoze

Acizi grasi
Glicerol

Stadiul I

Stadiul II
Acetil~SCoA

Ciclul
citratului

Stadiul III

2H
Stadiul IV

O2

2H

2H

2H

Oxidarea biologic

H 2O

ATP

CO2

42

The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1953 was divided

equally between Hans Adolf Krebs "for his discovery of the citric
acid cycle" and Fritz Albert Lipmann "for his discovery of coenzyme A and its importance for intermediary metabolism".

Hans Krebs (1900 1981) a descoperit ciclul citratului

n anul 1937

Acetil-CoA intr n ciclul Krebs (al acizilor tricarboxilici sau al

citratului), care reprezint o cale final comun pentru

catabolismul tuturor constituenilor fundamentali ai materiei vii.

43

CICLUL CITRATULUI (CICLUL KREBS)

Reacia global care are loc n cursul ciclului Krebs este:
CH3-COOH + 2 H2O 2 CO2 + 8H

Formarea CO2 din acetil-CoA are loc prin intermediul unei serii de
8 reacii enzimatice care constituie un ciclu.
Ciclul citratului n ansamblul lui, reprezint un sistem catalitic care
asigur degradarea unui numr nelimitat de molecule de acid acetic
activate sub form de acetil-CoA.
Premisele experimentale n descoperirea ciclului Krebs
Localizarea intracelular a enzimelor ciclului citratului: matrixul
mitocondrial
44

Etapele acestui ciclu au fost mai nti postulate, i apoi demonstrate de

H. Krebs, care n anul 1937, utiliznd metoda Warburg a observat c o
suspensie de celule consum mai mult oxigen, dac se adaug acizi
organici dicarboxilici i tricarboxilici, respectiv acid succinic, fumaric i
citric.
Reaciile ciclului Krebs au loc n mitocondrie, n matrix, i sunt cuplate cu
lanul respirator. Astfel exist o vecintate spaial a celor dou
procese biochimice.
Cercetri fcute de E. P. Kennedy i A. L. Lehninger nc din anul 1948 au
demonstrat c mitocondriile izolate prin ultracentrifugarea omogenatelor
de esut hepatic asigur transformarea tuturor intermediarilor ciclului
citratului, deci conin toate enzimele ciclului citratului. Ciclul citratului se
desfoar n compartimentul intern al mitocondriei i anume, unele
enzime sunt repartizate n matricea solubil, n timp ce altele sunt legate
de membrana mitocondrial intern.

45

O
H3C

Reaciile ciclului Krebs

C ~ SCoA

Acetil~SCoA
NADH+H+

CH2 COOH

NAD+
8
CH

HO

+ H2O

COOH

HSCoA

Acid oxalilacetic
HO

COOH

CH2

H2C

COOH

COOH

Acid citric

COOH

CH2 COOH
- H2 O

Acid L-malic
7
+ H2 O
HC
CH

Acid cis-aconitic

COOH

Acid fumaric

COOH

COOH

COOH

FADH2

H2C

COOH

+ H2O

+ H2 O

FAD
H2C

COOH

Acid succinic

Acid izo-citric

CH2 COOH
HO

Succinil~SCoA
5
GTP

COOH

COOH

CH

COOH

NAD+
CH2

CH2
C

HC

COOH

CH2
HSCoA

COOH

Acid -cetoglutaric

+ H2O

GDP+Pi

H2C

CH2

~ SCoA

C=O

NADH+H+

COOH

CO2

NADH+H+

NAD+
HSCoA

CO2

46

Acetil~SCoA
O

C ~ SCoA
CH3

citrat
sintaza

COOH

HO

COOH

+ H2O

HO

CH2

CH2

COOH

2 CH
2

CH2

+
O

C ~ SCoA

HSCoA

COOH

COOH

- H2O
aconitaza
2

CH2
COOH

COOH

Citril~SCoA

Acid oxalilacetic

COOH

COOH

HC

COOH

CH
COOH
Acid cis-aconitic

HO

NADH+H+
NAD+

CH2

+ H2O
aconitaza

CH2

Acid citric

COOH

CH
COOH

Acid izo-citric

COOH
CH2

izocitrat-DH

CH2

C=O
CO2

COOH
Acid a-cetoglutaric
47

NADH+H+
COOH

GTP
COOH

HSCoA
NAD+

CH2

CH2

a-cetoglutarat-DH

CH2

TPP
Acid lipoic
FAD
NAD+
CoASH

4
C=O
COOH

+ H2 O

HSCoA
Acid succinic

Succinil~SCoA

GTP + ADP

FADH2 COOH
FAD

CH

succinat-DH
6

HC
COOH
Acid fumaric

ATP + GDP

NADH+H+

COOH

+ H2O
fumaraza

CH2

COOH

~ SCoA

CO2

Acid -cetoglutaric

CH2

succinil tiokinaza

CH2
O

COOH

GDP+Pi

COOH

NAD+
HO

CH
CH2
COOH

Acid L-malic

malat-DH
8

C
CH2
COOH

Acid oxalilacetic
48

Bilanul chimic al ciclului Krebs

Principalele reacii ale ciclului Krebs:
a)

1 reacie de condensare (C2 + C4).

b) 4 dehidrogenri dintre care trei catalizate de NAD+ (izocitrat,

-cetoglutarat i malat) i una de FAD (succinat).
c)

2 decarboxilri (izocitrat i -cetoglutarat).

d)

2 hidratri efective (hidratarea fumaratului i formarea acidului

succinic din succinil-CoA).

e)

1 reacie de hidratare reversibil (reacia aconitazic).

Bilanul chimic al ciclului citratului poate fi redat prin ecuaia global:

CH3-CO~SCoA + 3H2O + 3NAD+ + FAD + GDP + Pi

2CO2 + HS-CoA + 3NADH+H+ + FADH2 + GTP

49

Bilanul chimic al ciclului Krebs

Simplificat, se poate scrie:
CH3-COOH + 2 H2O 2 CO2 + 8H

Prin oxidarea unei molecule de acetil-CoA se formeaz 2 molecule de CO2

i 4 perechi de echivaleni reductori (3 NADH+H+ + FADH2)

6 3 NADH2 x 3ATP = 9ATP

8H

11ATP+ 1GTP ATP

2 1 FADH2 x 2ATP = 2ATP

12ATP

50

BILANUL CHIMIC I ENERGETIC AL CICLULUI KREBS

CUPLAT CU LANUL RESPIRATOR
CH3-COOH + 2 H2O

+ 2O2 2 CO2 +

4 H2O + energie

stocat n compui macroergici

12 ATP (11ATP + 1GTPATP)

Oxidarea acetatului prin ciclul citratului cuplat cu lanul respirator

conduce la formarea a 228 kcal, corespunztoare celor patru
molecule de ap formate (4 x 57 kcal)
Pe seama energiei eliberate n acest proces, se formeaz
12 molecule de ATP, crora le corespund 84 kcal (7 x 12).
Din totalul de 228 kcal eliberate, 84 kcal au fost stocate sub form
de ATP, ceea ce corespunde unui randament () de cca 37%.

51

BILANUL CHIMIC I ENERGETIC AL CICLULUI KREBS

CUPLAT CU LANUL RESPIRATOR
12 ATP 12 x 7 84 kcal

Proces endergonic

4 H2O .4 x 57 - 228 kcal

Proces exergonic

228 kcal 84 kcal stocai n energie biologic util (ATP)

100 kcal X

X = 37% ()
Restul de energie, nestocat n ATP este consumat sub diferite forme:

cldur, energie mecanic, osmotic, etc.

Apa rezultat n urma oxidrii hidrogenului intr n fondul metabolic de
ap al celulei.
52

Concluzii
Semnificaia metabolic a ciclul Krebs
1.) Ciclul Krebs are caracter de universalitate.
Este prezent la toate vieuitoarele, de la cele mai simple la cele
complexe, inclusiv la plante.
Este prezent n toate celulele organismului, cu excepia hematiilor.
Prin cuplarea cu lanul respirator, este o cale final de degradare,

comun i obligatorie, de transformare a componentelor din

principiile alimentare (glucide, lipide, proteine).

2.) Localizarea intracelular a reaciilor ciclului Krebs este cea

intramitocondrial, n apropierea componentelor lanului respirator.
53

3.) Ciclul Krebs este n esen un proces de oxidare, i anume a

CH3-CO~SCoA/CH3-COOH prin cuplare cu lanul respirator. Ciclul
Krebs se desfoar exclusiv n condiii de aerobioz, pentru a
permite oxidarea echivalenilor reductori din NADH2 i FADH2.
4.) Ciclul Krebs este un proces formator de CO2.
5.) CO2 se formeaz prin decarboxilarea oxidativ a cetoacizilor,
nu prin combinarea direct a carbonului i a oxigenului molecular,
ceea ce subliniaz importana proceslor de decarboxilare n
lumea vie.
6.) Ciclul Krebs este un proces ciclic. n acest proces are loc
rennoirea acidului oxalilacetic.

54

7.) Ciclul Krebs este un proces amfibolic. Este n primul rnd catabolic,
deoarece CH3-CO~SCoA se degradeaz la CO2 dar are i caracter

anabolic, deoarece are lor formarea unor intermediari foarte

importani n biosinteza altor compui: hem, purine, pirimidine, acizi
grai, steroli.

8.) Ciclul Krebs, prin cuplarea cu lanul respirator, este un proces

puternic eliberator de energie; oxidarea unei singure molecule de
CH3-COOH presupune stocarea energiei n 12 molecule de ATP.
Cuplarea ciclului Krebs cu lanul respirator la nivel mitocondrial

reprezint principala surs de energie biologic la organismele

chimiosintetice.
O a doua surs major de energie biologic o constituie fotosinteza.
55