Lucrari Practice Imunologie MG 2008

UNIVERSITATEA TITU MAIORESCU
FACULTATEA DE MEDICIN
BUCURETI
IMUNOLOGIE
LUCRRI PRACTICE
PENTRU STUDENII LA FACULTATEA DE MEDICIN
MANOLE COJOCARU
BUCURETI
2009
CUPRINS
Teste imunologice n laboratorul clinic
Reacia antigen-anticorp
A. Reacii imnochimice folosite n laboratorul clinic

1. Reacia de precipitare
a) Reacia de precipitare n mediul solid
- Difuzia n gel
- Imunodifuzia radial simpl
- Dubla difuzie n gel
- Difuzia combinat cu migrarea electroforetic
- Imunoelectroforeza
- Contraimunelectroforeza
- Electroimunodifuzia
- Imunofixarea
b) Reacia de precipitare n mediul lichid
- Reacia de precipitare n inel
- Imunonefelometria
2. Reacia de aglutinare
a) Reacia de aglutinare direct
b) Reacia de aglutinare indirect
c) Reacia de inhibare a aglutinrii
d) Reacia de aglutinare mediat de anticorpi anti-imunoglobuline
3. Reacia de neutralizare
4. Reacii ce utilizeaz complement
a) Reacia de fixare a complementului
b) Testul de imunohemoliz pasiv n prezena complementului
c) Determinarea imunohemolitic a complementului
5. Reacii cu reactivi marcai
a) Reacia de imunofluorescen
- Reacia de imunofluorescen direct
- Reacia de imunofluorescen indirect
- Reacia de imunofluorescen cu fixarea complementului
b) Analiza radioimunologic
c) Analiza imunoenzimatic
-Tehnica ELISA
6. Tehnica Western Blot
B. Metode i tehnici de imunocitologie

1. Tehnica pentru celule lupice
2. Testul reducerii NBT
3. Chemiluminiscena
4. Testul inhibiiei aderenei leucocitelor
5. Imunofenotiparea cu ajutorul citometriei n flux
6. Testul de transformare blastic a limfocitelor
7. Reacia de limfocitotoxicitate
C. Principalele reacii antigen-anticorp i aplicaiile acestora
Teste imunologice n laboratorul clinic

Imunologia clinic folosete numeroase tehnici pentru studiul proteinelor care
mediaz imunitatea umoral, ca i pentru studiul celulelor care uau parte la imunitatea
celular
Analiza imunologic este considerat ca una dintre cele mai de vrf tehnici din
domeniul biomedical. Fiind foarte costisitoare, aceasta a ptruns cu dificultate n
laboratoarele clinice.
Complexitatea i evoluia rapid a acestor tehnici au fcut necesar conturarea
unui departament specializat n cadrul laboratorului clinic, care se ocup cu metodele
imunologice de diagnostic (imunodiagnostic). Domeniile mai nou dezvoltate sau n curs
de dezvoltare n laboratoarele clinice cuprind: imunochimia, imunocitologia,
histocompatibilitatea, radioimunoanaliza, enzimimunoanaliza.
Imunitatea celular se studiaz printr-o serie de teste de imunocitologie.
Metodele de imunochimie aduc informaii asupra unor proteine din snge i alte
lichide biologice. De obicei se folosesc antigenul (Ag) necunoscut i reactivul, anticorpul
(Ac) cunoscut.
Metodele de analiz imunochimic cuprind operaiile de obinere i purificare a
Ag i Ac i de msurare a reaciilor dintre acestea. Msurarea reaciei Ag-Ac permite att
estimarea cantitativ a Ag ct i caracterizarea acestuia sub aspect imunochimic.
Metodele cele mai utilizate n analiza imunochimic se bazeaz pe reacia Ag-Ac
Reacia dintre un Ag i un Ac presupune legarea gruprii determinante a Ag
(epitop) de situsul de combinare al Ac (paratop). Legarea este dependent de
complementaritatea steric a Ag i Ac i se realizeaz cu participarea unor fore de
legtur necovalente (fore van der Waals, fore electrostatice, legturi de hidrogen i
legturi hidrofobe) care asigur stabilitatea complexului Ag-Ac.
Caracteristica general a reaciei Ag-Ac este specificitatea, adic capacitatea ac de
a discrimina Ag omolog de alt Ag. Specificitatea ag nu este absolut. Reacia ncruciat
are loc cnd un ag reacioneaz cu un Ac format fa de un alt Ag. Ag care reacioneaz
cu un Ac produs fa de un alt Ag se numete Ag cross-reactiv sau Ag cu reactivitate
ncruciat. Reacia ncruciat a Ag este datorat faptului c Ag posed n comun
anumite grupri determinante, fie c ntre gruprile determinante exist o asemnare
chimic ce nu poate fi decelat de Ac.
Reaciile ncriciate de tip I. Capacitatea a dou Ag de a reaciona cu acelai situs
de combinare de pe aceeai molecul de Ac (ex. Ag proteice ce dau reacii ncruciate din
cauza diferenei foarte mici a secvenei de aminoacizi glicina nu poate fi deosebit de
alanin)
Reaciile ncriciate de tip II. Capacitatea unui Ag de a reaciona cu o
subpopulaie de Ac dintr-un ser heterolog care conine Ac fa de un alt Ag parial
asemntor cu primul
Reacia Ag-Ac se desfoar n unul sau mai multe stadii:
- interaciunea primar se datorete legrii efective a ac cu ag i depinde de
cantitatea i afinitatea Ac. Tehnicile care evideniaz interaciunea primar ag-ac sunt
tehnici curente de diagnostic (ex. nefelometria). In vivo, interaciunile primare particip
la protecia gazdei (neutralizarea toxinelor, inhibarea aciunii unor virusuri sau bacterii)
sau la declanarea unor reacii anafilactice
interaciunea secundar urmeaz celei primare (dup aprox. 30 min.).

Produsul final este complexul ag-Ac insolubil. Interaciunea secundar st la
baza tehnicilor imunochimice (reaciile de precipitare aglutinare, fixare de
complement, neutralizare).
interaciunea teriar prezint o complexitate mai mare dect cea secundar.
Depinde de variabilele gatdei (receptori pentru Ag, complement, mastocite).
Pot determina protecia gazdei (neutralizarea virusurilor, imobilzarea
bacteriilor) sau degranularea celulelor (fenomenul Arthus, ocul anafilactic)
Reacia antigen-anticorp
Imunochimia disciplin de grani a imunologiei i biochimiei studiaz

substanele i procesele chimice ce particip la reaciile imunologice.
Metodele cele mai utilizate n analiza imunochimic se bazeaz pe reacia Ag-Ac,
utiliznd procedee care rezult din mbinarea tehnicilor fizico-chimice cu cele
imunologice, primele conferind analizei precizie i acuratee, iar ultimele asigurnd
sensibiliate i specficitate.
Datele furnizate de metodele imunochimice (calitative sau cantitative) pot
conduce uneori la informaii preioase pentru diagnostic, adesea rezultatul de laborator
capat valoarea informativ real numai dac interpretarea acestuia se face n contextul
clinic.
1. Reacia antigen-anticorp (Ag-Ac) are o mare putere de rezoluie. n fapt,
prepararea anticorpilor prin imunizarea repetat a unui animal (iepure,
oarece, capr, etc) cu un antigen dat conduce n general la obinerea
anticorpilor puternici i specifici, adic capabili s recunoasc selectiv
antigenul n prezena numeroaselor substane, astfel prin reacia Ag-Ac, s
detectm i s dozm selectiv n ser o protein (hormon, enzim, etc.)
prezent la o concentraie de cteva picograme/ml, ceea ce reprezint mai
puin de o miliardime din coninutul proteic al serului. Aceast caracteristic
cu rezoluie crescut ine de energia crescut a reaciei Ag-Ac (reacie sigur
non-covalent dar datorat unei adugri de numeroase legturi unitare ca
legturi electrostatice, puni de hidrogen, interacii hidrofobe) i altor forme
reduse (complementaritate ntre structura epitopului Ag i aceea a situsului
Ac).
2. Selectivitatea fiecrei reacii nu este absolut. Aceasta admite o anumit
degenerescen: un Ac dat poate recunoate mai multe Ag puin diferite cu
preul unei diminuri a energiei de legare. n practic, acest fenomen
fundamental este descris prin observarea reaciei ncruciate dintre diferite
substane fa de acelai Ac. naintea oricrei aplicaii a reaciei Ag-Ac trebuie
s ne asigurm de specificitatea funciei verificnd c n condiiile de utilizare,
singurul Ag vizat este semnificativ recunoscut.
3. Reacia Ag-Ac prezint un domeniu de aplicare extrem de larg:
- detectarea antigenelor sau anticorpilor: se poate aplica la dozarea
medicamentelor, hormonilor peptidici, antigenelor virale sau
bacteriene i chiar Ac cnd, de exemplu, se poate explora rspunsul
individului la un element patogen (serodiagnostic)
evaluarea cantitativ a Ag i Ac: reacia Ag-Ac este de fapt adaptabil

la dozarea proteinelor plasmatice foarte reprezentate (imunoglobuline,
transferina, etc.), de asemenea, pentru substane foarte rare (anumii
markeri virali, hormoni, etc.). Concentraiile fiind ntre 10-4 i 10-12 M).
4. Reacia Ag-Ac necesit obinerea unui semnal secundar pentru a fi detectabil.
Aceasta poate s se formeze n timpul reaciei (ex. hemaglutinarea), fie s fie
preformat prin marcarea prealabil a Ag sau Ac prin markeri radioactivi,
enzimatici sau alii. Reaciile din prima categorie fac n general apel la
formarea unei reele Ag-Ac de dimensiune mare, prin prezena de cel puin
dou situsuri Ac pe imunoglobulin i de cel puin doi epitopi pe Ag. Aceast
reea se traduce prin aglutinare (eritrocitele acoper Ag) sau prin precipitarea
(cazul antigenului macromolecular care formeaz o reea cu Ac).
Reaciile din a doua categorie se subdivid n dou subtipuri:
- Reacii prin competiie: o cantitate limitat de unul sau doi compui
(ex.: Ac) este pus n prezena eantionului de dozat i o cantitate
minim de element marcat (ex.. Ag radioactiv). Concentraia de Ag
din eantion va influena negativ valoarea de legare a Ag marcat cu Ac
(prin efect de competiie pentru o cantitate limitat de situsuri).
Antigenul marcat fiind singurul decelabil (n contorul de
radioactivitate), nivelul su de legare va servi la stabilirea etalonajului
reaciei (ex.: dozarea de medicamente).
- Reaciile prin imunoextracie: reactivii (ex. Ac) sunt din contr n
exces i captez n totalitate substana de dozare. Cazul clasic este
dozarea n sandwich unde antigenul de dozat este fixat prin doi Ac
care servesc la insolubilizarea pe o suprafa (peretele eprubetei) i
altul aduce semnalul detectabil (Ac marcai prin izotop sau o enzim).
n acest caz, semnalul va fi funcionarea direct a concentraiei de Ag
i acesta este Ac marcat vcare permite etalonarea; Tehnicile de
imunofluorescen pe cupe sunt un alt exemplu de imunoextragere:
antigenul (parazit, bacterie, virus) prezent n preparatul etalat pe lam
este recunoscut de Ac marcat (produs fluorescent). Splarea rapid
permite s eliminm Ac n exces (nefixai) apoi fixarea este relevat la
microscopul cu fluorescen pentru diagnosticul direct.
Numeroase tehnici utilizate n imunologie sunt asemntoare celor din tiinele
biologice (ex: metodele de izolare a antigenelor i anticorpilor sunt asemntoare cu cele
din biochimie utilizate pentru separarea fraciunilor proteice). Totui, n imunologie se
utilizeaz i tehnici proprii, cum sunt reaciile Ag-Ac (ex: tehnicile de imunofluorescen,
imunodifuzie n gel, radioimunologice i imunoenzimatice).
n funcie de natura Ag i de metodele aplicate pentru evidenierea reaciei Ag-Ac,
acestea se pot mpri n reacii de precipitare, aglutinare, neuralizare, reacii care
folosesc complement sau reactivi marcai (fluorocromi, izotopi, enzime).
A. Reacii imnochimice folosite n laboratorul clinic
Reactivii imunochimici sunt produse biologice (Ac, Ag, C, hematii), ce se

utilizeaz pentru determinri calitative sau/i cantitative de Ag sau Ac.
Pentru a furniza informaii corecte, reactivii imunochimici trebuie folosii
conform instruciunilor de utilizare. Persoanele care execut tehnici imunochimice
trebuie s verifice n permanen instruciunile de utilizare a produselor, nct permanenta
optimizare a acestora se reflect i n modificarea instruciunilor respective.
Manipularea reactivilor imunochimici trebuie fcut innd cont de toate normele
de protecia muncii n vigoare)
1. Reacia de precipitare
n cazul reaciei de precipiatere, Ag este o macromolecul solubil. Reacia de
precipitare poate avea loc n mediul solid (difuzia n gel) sau n mediul lichid.
Formarea precipiatului depinde de: cantitatea i concentraia Ag, calitatea i
concentraia Ac, temperatura, molaritatea, pH-ul, volumul de reacie, coninutul n lipide
al antiserului, etc.
Compoziia precipitatului imun, proporia de combinare a Ag cu Ac sunt variabile
n funcie de zona n care a avut loc precipitarea: exces de Ag, echivalen sau exces de
Ac.
a) Reacia de precipitare n mediul solid
Difuzia n gel
Difuziile n gel se grupeaz n trei categorii: difuzia simpl, difuzia dubl, difuzia
combinat cu migrarea n cmp electric.
Se utilizeaz gel de agar sau agaroz n concentraie de 0,8-1,6 g % (coninutul
mare de ap permite moleculelor de Ag i Ac s migreze liber n gel). Difuzia poate fi
accelerat de aplicarea unui cmp electric (contraimunoelecroforez).
n cazul dublei difuzii, are loc difuzia ambilor reactani. n acazul difuziei simple
are loc difuzia unuia ctre cellalt reactant nglobat n faza solid. ntr-o zon relativ
ngust se creeaz datorit gradientului de concentraie condiii optime pentru
imunoprecipitare. n gelul transparent apar linii sau zone opace. Liniile se pot deplasa
pn cnd se ajunge la echilibrul sistemului ag-Ac. Nivelul liniilor corespunde numrului
minim de sisteme Ag-Ac.
Imunodifuzia radial simpl
Imunodifuzia radial simpl sau imunodifuzia simpl bidimensional a fost
imaginat de Mancini, Carbonara i Heremans n 1965.
Aceast metod presupune difuzia unui reactant (n faza lichid) ntr-un gel n
care este nglobat cellalt reactant. n aceast tehnic Ac trebuie s fie n stare pur.
Dimensiunea haloului de precipitare este direct proporional cu concentraia Ag
ce difuzeaz i invers proporional cu concentraia i nlimea de gel n care sunt
nglobai.
Existena unei proporionaliti directe ntre concentraia Ag i diametrul zonei de

precipitare pentru difuzia complet Mancini permite trasarea curbei etalon prin msurarea
diametrelor de precipitare a cel puin trei concentraii ale unui Ag de referin.
Pentru obinerea unei dimensiuni convenabile a zonei de precipiatre i un contur
bine delimitat, concentraia Ac nglobat n gel trebuie aleas n funcie de titrul antiserului
i concentraia Ag testat.
Cantitatea de Ag introdus n godeuri nu trebuie s depeasc capaciatea de
legare a Ac nglobat.
Timpul necesar difuziei complete este n funcie de temperatura la care are loc
reacia (370C), de greutatea molecular i concentraia Ag.
Imunodifuzia radial simpl efectuat n condiii optime prezint coeficientul de
variaie sub 10%, iar sensibilitatea este de 2 g/ml.
Concentraia Ag (proteinei) se stabilete n funcie de curba etalon trasat cu trei
diluii ale serului dereferin. Rezultatele metodei se exprim n mg/dl.
Aplicaii posibile sunt determinrile cantitative pentru: imunoglobuline (IgG, IgA,
IgM), complement (C3), alfa-1 antitripsin, siderofilin, proteina C-reactiv (CRP), etc.
Dubla difuzie Ouchterlony
Dubla difuzie a fost imaginat de Ouchterlony i Elek n 1948.
Tehnica se poate efectua n mai multe variate. n laboratorul clinic se folosete
tehnica cu 4-6 godeuri rotunde dispuse n jurul unui godeu central.
Liniile de precipitare se formeaz la distane constante pentru fiecare sistem AgAc.
Se descriu trei tipuri de reacii:
- reacia de identitate complet n care cele dou Ag sunt complet identice:
antiserul conine Ac specifici fa de Ag; liniile de precipitare deviaz i fuzioneaz
complet n zona central
- reacia de neidentitate, absena deviaiei liniilor. Antiserul conine Ac diferii fa
de cele dou Ag nenrudite, liniile de precipiatre se intersecteaz
- reacia de identitate parial (fuziune parial a liniilor). Cele dou Ag prezint
un numr de grupri determinante comune, dar conin i unele distincte; antiserul are Ac
fa de cele dou grupri Ag; linia de precipitare este curbat ca urmare a fuziunii pariale
a celor dou linii i prezint un mic pinten.
Aplicaii posibile sunt determinrile calitative pentru: proteinele Bence-Jones tip
kappa i lambda, crioglobuline.
Difuzia combinat cu migrarea electroforetic
Mobilitatea proteinelor n gelul supus cmpului electric se datorete ncrcrii
electrice a proteinelor i curentului electroendosmotic (migrarea tamponului spre catod).
La pH-ul la care se efectueaz electroforeza (EF), agarul se ncarc negativ, tamponul din
porii acestuia se ncarc pozitiv i la aplicarea cmpului electric migreaz spre catod.
Deplasarea tamponului este invers micrii proteinelor, care la pH-ul neutru sau alcalin
migreaz spre anod (+).
Dac electroendosmoza este mai mare dect viteza de deplasare a proteinelor spre
anod, acestea vor fi deplasate spre catod (-), dei sunt ncrcate tot negativ (ex. gamma
globulinele se deplaseaz catodic la imunoelctroforez i contraimunoelectroforez).
Viteza fluxului osmotic este direct proporional cu diferena de potenial i
concentraia gelului i invers proporional cu fora ionic a tamponului.
Viteza curentului electroendosmotic este de trei ori mai sczut n gelul de garoz
comparativ cu cel de agar, probele trebuie analizate, nu trebuie plasate la mijlocul lamei
aa cum se procedeaz n cazul gelului de agar.
Imaginile de electroforez se citesc cu ochiul liber (intensitatea spoturilor
migrrii), ctre anod a albuminei; ctre catod alfa, beta, gama globulinele.
Imunoelectroforeza
Metoda a fost imaginat de Grabar i Williams n 1953. Transformarea ntr-o
microvariant executat pe lame de microscop se datorete lui Scheidegge n 1955.
Imunoelectroforeza reprezint asocierea electroforezei cu dubla difuzie. n prima
etap are loc electroforeza proteinelor, urmat de dubla difuzie cu un antiser
corespunztor. Reacia Ag-Ac se vizualizeaz prin linii de precipitare corespunztoare
sistemelor Ag-Ac din reacie.
Imunoelectroforeza (IEF) ofer numai informaii calitative n diagnosticul
gamapatiilor monoclonale. Metoda ilustraz n cazul componentei monoclonale a Ig,
clasa i tipul de Ig patologice.
Metoda se folosete pentru studiul puritii unui Ag sau Ac. Imunoelectroforeza
bidimensional cantitativ a fost imaginat de Ressler (1960), Laurell (1965), Clarke i
Freeman (1968). Metoda combin EF n gel de agaroz cu imunodifuzia.
Contraimunelectroforeza
Metoda a fost imaginat de Bussard (1959), CIEF reprezint o dubl difuzie n
care deplasarea Ag i Ac este accelerat de un cmp electric.
n gelul de agar sau agaroz la pH 8,2-8,6 Ac se deplaseaz spre catod (-), Ag
migreaz ctre anod (+).
Reacia este mai sensibil i mai rapid dect dubla difuzie.
CIEF ofer informaii calitative i semicantitative.
Electroimunodifuzia
EID a fost imaginat de Laurell (1965). Se realizeaz prin electroforeza Ag n
strat de gel ce conine Ac monospecifici.
Preciptatul Ag-Ac apare sub form de rachete (conuri) a cror nlime ste direct
proporional cu concentraia Ag i invers proporional cu cea a Ac.
Reacia are sensibilitate mai mare dect IDRS. n cazul Ig se utilizeaz ca suport
agarul sau agaroza. IgG migreaz anodic n gelul de agar. IgA i IgM migreaz ctre anod
n gelul de agaroz.
Reacia prezint unele dificulti la efectuare.
Imunofixarea
Metoda a fiost imaginat de Alper i Johnson (1969). Cuprinde un grup de tehnici
imunochimice care au comun EF probei n gel, combinat cu imobilizarea (fixarea) unui
reactant de ctre cellalt (imobilizarea Ag de ctre ac cunoscut, fie invers). Precipitatele
se evideniaz dup colorare.
Metoda se utilizeaz pentru stabilirea clasei i tipului de Ig monoclonal pentru
diagnosticul imunochimic al bolii lanurilor grele i pentru diagnosticul deiferenial al
hipergamaglobulinemiilor monoclonale.
b) Reacia de precipitare n mediul lichid
Urmare a reaciei Ag-Ac n mediul lichid se formeaz complexe care precipit
cnd cei doi reactani se gsesc n anumite proporii. Inhibarea reaciei este determinat
de excesul unuia dintre acetia.
Reacia este mai sensibil pentru evidenierea Ag (Ac particip la formarea
complexelor n proporie mai mare).
Reacia de precipiatre n mediul lichid presupune existena a cel puin doi
determinani antigenici pe molecula de Ag.
Curbele de precipitare. Prin adugarea unr concentraii cresctoare de ag la
concentraii constante de Ac, n urma izolrii i analizrii precipitatelor i supernatantelor
obinute, se pot trasa curbe de precipiatre ce relev existena a trei zone distincete.
- zona excesului de Ac (precipitatul crete la o nou adugare de Ag)
- zona de echivalen (precipitatul rmne constant la o nou adugare de Ag)
- zona excesului de Ag (precipiatul scade la o nou adugare de Ag)
Se cunosc dou tipuri de curbe de precipiatre n mediul lichid.
- curba de tip iepure. Prezint un maxim rotunjit, indiferent de natura chimic a
ag. Precipiatul este mai mult sau mai puin solubil n exces de Ag, dar insolubil n exces
de Ac.
- curba de tip cal (curba de floculare). Curba pentru Ag proteice nu trece prin
origine. Precipitatul este solubil att n exces de Ac ct i n exces de Ag.
Reacia de precipitare n inel
Ag i Ac se pun n contact nct s nu se amestece. La interfaa celor doi reactani
apare un inel de precipiare. Reacia de precipitare n mediul lichid se efectueaz n tubul
capilar.
Imunonefelometria
n prezena unei cantiti fixe de Ac sau Ag, complexele Ag-Ac precipitate ntr-o
suspensie, modific intensitatea i dispersia luminii proporional cu concentraia Ag sau
Ac.
Complexarea Ag cu Ac specific atinge o valoare maxim stabil n aprox. 60 sec.
Deoarece formarea complexelor care disperseaz lumina este dependent de prezena n
proporii optime a moleculelor de Ag i Ac pentru o cantitate constant de Ac (respectiv
Ag), gradul de complexitate crete proporional cu cantitatea de Ag (respectiv de Ac)

pn la un maximum, dup care Ag n exces determin scderea progresiv a
complexitii; din aceast cauz se recomand ca determinrile nefelometrice s fie
executate n exces moderat de Ac. Avantajele constau n rapiditatea obinerii rezultatelor
(automatizarea determinrilor).
Evaluarea se exprim n mg/l, automat n funcie de curba existent n memoria
nefelometrului
Dezavantajele nefelometriei constau n costul ridicat al aparaturii i
imposibilitatea determinrii directe a proteinelor n probele icterice, hemolizate sau
lactescente.
Metoda este limitat i de deficiene ce pot s apar n sistemele mecanice i
electronice ale instalaiei.
2. Reacia de aglutinare
Aglutinarea reprezint agregarea de particule prin Ac. Ac reacioneaz cu Ag
(natural sau fixat artificial) de la suprafaa unor particule (bacterii, hematii, latex) i
determin aglutinarea acestora.
Aglutinarea depinde de o serie de factori: valena Ac (Ac din clasa IgM sunt mult
mai aglutinani dect cei care aparin clasei IgG), densitatea determinanilor antigenici de
la suprafaa particulei, fora ionic a mediului n care are loc reacia. Aglutinarea se
datoreaz scderii forelor de respindgere electrostatice dintre particule i creeri unor
puni de legtur prin intermediul Ac.
Reacia de aglutinare are sensibilitatea mai mare dect reacia de precipitare (Ag
este o particul i nu o molecul solubil), excesul de Ag nu inhib reacia, concentraiile
mari de ac pot inhiba reacia i produce fenomenul de prozon, raportul ntre Ag-Ac este
tot n favoarea ac (ca i la precipitare). Ac reacioneaz numai cu determinantul Ag
specific. Alturi de Ac aglutinani exist Ac neaglutinani (blocani sau incomplei) i Ac
care aglutineaz numai la rece (+40C).
Reacia de aglutinare direct
Aglutinarea direct (aglutinarea simpl, clasic) este aglutinarea Ag naturale ale
unor particule de ctre Ac specifici (ex. determinarea grupelor sanguine, aglutinarea
bacterian)
Sensibilitatea acestui tip de aglutinare poate fi crescut prin tratarea celulelor cu
enzime sau prin executarea reaciei n mediul cu vscozitate crescut.
Reacia de aglutinare indirect
Aglutinarea indirect (pasiv) este o reacie ce presupune particule naturale sau
artificiale (hematii, stafilococ protein A, latex) ncrcate in vitro cu Ag sau Ac.
Particulele sunt aglutinate de ctre Ac, respectiv Ag omolog din prob.
Hemagluinarea pasiv este o metod deosebit de sensibil de cercetare a Ac serici,
imaginat de Gzegibes i Sehon.
Ac care nu pot produce reacii vizibile cu Ag din cauz c se gsesc n ser n

cantiti reduse, pot fi evideniai prin metode de aglutinare pasiv, crescnd cantitatea
de Ag prin absorbia acstora pe un substrat inert. n acest fel, cantiti mici de Ac produc
aglutinri vizibile.
Reacia de inhibare a aglutinrii
Reacia de aglutinare a particulelor ncrcate cu Ag solubil este inhibat n cazul
n care Ac reacioneaz n prealabil cu Ag omolog (ex. diagnosticul imunologic de sarcin
prin inhibarea aglutinrii hematiilor sau prin inhibarea aglutinrii latexului).
Diferena principal ntre hemaglutinarea pasiv i tehnica de inhibare a
hemaglutinrii este aceea c n prima metod (hemaglutinarea) se investigheaz prezena
Ac, n timp ce n a doua (inhibarea) se investigheaz prezena Ag.
Reacia de aglutinare mediat de anticorpi anti-imunoglobuline
Ac anti-imunoglobuline aglutineaz particule ncrcate (natural sau artificia)l cu
Ac (ex. decelarea FR prin reacia Waaler-rose sau Latex-FR, decelarea Ac incomplei
fixai la suprafaa hematiilor prin reacia coombs).
Reacia de aglutinare poate fi calitativ de screening (ex. latex-FR, reacia
coombs) sau cantitativ (ex. reacia Waaler-Rose, reacia Coombs).
Reacia Latex-FR este mai sensibil, iar reacia Waaler-Rose este mai specific.
3. Reacia de neutralizare
Antigenul este reprezentat de un imunogen cu proprieti biologice (toxin,
enzim, virus). Ac specifici determin (in vivo sau in vitro) blocarea acestor proprieti.
Reacia de neutralizare depinde de aviditatea Ac, adic de viteza cu care Ac se
poate combina cu Ag i de gradul de stabilitate a legturii ag-Ac.
Neutralizarea efectelor biologice ale Ag se constat numai n cazul n care situsul
(toxic sau enzimatic) responsabil de activitatea biologic a Ag este identic cu situsul Ag.
n laborator, acest tip de reacie se utilizeaz pentru determinarea Ac antistreptolizin O prin reacia ASLO (etapa final de vizualizare este hemoliza) i pentru
identificarea unor virusuri.
Testul ASLO este o reacie de neutralizare (inhibare a hemolizei). Se bazeaz pe
proprietatea streptolizinei de a produce liza hematiilor de diverse specii.
4. Reacii ce utilizeaz complement
n laboratorul clinic se execut patru reacii de acest tip:
Reacia de fixare a complementului
Reacia de fixare a complementului (RFC), hemoliz direct. J. Bordet a imaginat

o metod de vizualizare indirect a unei reacii Ag-Ac, folosind complement (C) i un
sistem indicator (hemolitic).
Complexul Ag-Ac fixeaz C, iar hematiile sensibilizate adugate ulterior rmn
intacte (absena hemolizei nseamn reacie pozitiv), n lipsa complexului Ag-Ac
specific (iniial), C se fixeaz pe hematiile sensibilizate (sistemul indicator) producnd
hemoliza (hemoliza nseamn reacie negativ).
Fixarea C pe complexul Ag-Ac este evideniat indirect prin absena hemolizei
sistemului indicator din a doua etap a reaciei (ser antihematii berbec-hematii berbec)
Activitatea anticomplement se datorete prezenei complexelor Ag-Ac preformate,
agregatelor de Ig i a altor substane care pot activa calea clasic sau calea alternativ de
activare a C.
Testul de inhibare a hemolizei imune pasive n prezena complementului
Testul este analog testului de inhibare a hemaglutinrii, deosebirea esenial
const n desfurarea reaciei n prezena C. n cazul n care n prima etap a reaciei se
formeaz complexul Ag-Ac nu mai rmn disponibili Ac care s reacioneze cu hematiile
sensibilizate, astfel nct n ultima etap, C nu este cuplat cu hematiile sensibilizate i
acestea nu sunt lizate. n acest caz rezltatul testului este considerat pozitiv.
n situaia n care nu se formeaz complexul Ag-Ac, Ac liberi reacioneaz cu
hematiile sensibilizate i are loc liza acestora, rezultatul testului este considerat negativ.
n testul de imunohemoliz pasiv, interpretarea rezultatului se face n funcie de
gradul hemolizei obinute, lundu-se n considerare dimensiunile sedimentului de hematii
i intensitatea culorii supernatantului.
Testul de inhibare a hemolizei imune pasive n prezena C investigheaz prezena
Ag n ser, n timp ce testul clasic investigheaz prezena Ac n ser.
Testul de imunohemoliz pasiv n prezena complementului
Ca i n cazul testului de hemaglutinare pasiv, Ag este fixat pe hematie i
reacioneaz cu Ac specific, formndu-se n acest fel complexe Ag-Ac. Realizarea acestui
complex n prezena C determin liza hematiilor sensibilizate cu Ag.
Determinarea imunohemolitic a complementului
Se refer la reacia Ag-Ac numai n msura n care se folosete ca indicator
sistemul hemolitic (hematii de berbec sensibilizate cu ser anti-hematii berbec).
Reacia msoar activitatea hemolitic total a sistemului complement.
Metoda are ca punct final hemoliza 50%. Citirea se face la spectrofotometru.
5) Reacii cu reactivi marcai
Detectarea, localizarea i identificarea antigenelor se poate realiza utiliznd

anticorpi care recunosc i se leag specific de antigenele respective.
Vizualizarea complexului Ag-Ac format poate fi realizat prin marcarea Ac.
Marcarea Ac trebuie s ndeplineasc dou condiii: 1) s permit detectarea unor
cantiti infime de substan 2) s nu altereze capacitatea de legare a Ac la Ag
corespunztoare.
n aceste reacii se utilizeaz Ag sau Ac marcai: izotiocianatul de fluorescein
(produce strlucire caracteristic la examenul microscopic n lumina ultraviolet, Coons,
1942), izotopi radioactivi (Zalow i Berson, 1960), i enzime (au activitate asupra unui
substrat-cromogen specific (Engwall i Perlman, 1972).
a) Reacia de imunofluorescen
n reacia de imunofluorescen (IF) unul dintre reactani (Ag sau Ac de cercetat)
trebuie s constituie o parte dintr-o structur biologic (celul sau esut), reactivul marcat
cu fluorocrom relevnd reacia Ag-Ac.
Vizualizarea complexului Ag-Ac format poate fi realizat prin marcarea Ac.
Substanele fluorescente (fluorocromii) absorb lumina incident de diferite lungimi de
und i emit o lumin vizibil care este n funcie de fluorocromul utilizat: albastr,
verde, galben, roie sau alb.
Reacia se poate realiza direct, indirect, cu fixarea complementului
Reacia de imunofluorescen direct
Metoda direct (Coons) permite identificarea Ag specifice n preparate cu ajutorul
conjugatului fluorescent anti-Ac. Se folosesc seciuni de esuturi, seruri fluorescente antiIg i anti-C.
Reacia de imunofluorescen indirect
Reacia de imunofluorescen indirect (IFI) vizualizeaz reacia Ag-Ac prin
aplicarea unui conjugat fluorescent anti-Ac.
Se folosete pentru detectarea Ac fixai pe Ag. Serul de bolnav se pune n contact
cu un substrat celular (tisular). Urmeaz incubarea preparatului cu un ser antiglobulin
uman marcat cu izotiocianat de fluorescein care vizualizeaz n lumin ultraviolet
reacia Ag-Ac.
Testul poate fi folosit att pentru determinarea Ag necunoscut cu ser imun
cunsocut ct i pentru detectarea ac necunoscui cu ag cunoscut.
Reacia de imunofluorescen cu fixarea complementului
Complexul Ag-Ac fixeaz C. Metoda fixrii C pe seciuni de esut este derivat
din metoda indirect prin adugarea C, apoi a serului marcat care va vizualiza complexul
Ag-Ac-C.
b) Analiza radioimunologic
Analiza radioimunologic (RIA) este o tehnic de determinare cantitativ a unui

numr mare de substane prezente n lichidele biologice n cantitate foarte mic.
RIA este o tehnic obiectiv, cu mare sensibilitate, parial automatizat, aparatur
costisittoare (echpament nuclear), reactivi scumpi, cu durat de utilizare scurt, personal
cu calificare special, supus unei legislaii speciale (radioizotopi).
c) Analiza imunoenzimatic
n 1966, Avrameas i Uriel introduc n histochimie marcarea enzimatic cu
peroxidaz, iar n 1971, Van Weemen i independent Engwall i Perlmann utilizeaz
enzimele ca marker pentru reaciile Ag-Ac. Analiza imunoenzimatic (EIA) se poate
realiza n sistem omogen sau heterogen.
-reacia imunoenzimatic n sistem omogen const n competiia pentru Ac ntre
Ag marcat enzimatic i Ac de determinat (din prob). Activitatea enzimatic este invers
proporional cu concentraia Ag din prob.
-reacia imunoenzimatic n sistem heterogen poate fi utilizat att pentru
determinatrea Ac ct i a Ag. Activitatea enzimatic a conjugatului nu este influenat de
reacia Ag-Ac i necesit o etap de separare.
Avantajele EIA: obiectiv, poate fi automatizat, folosete reactivi cu valabilitate
convenabil, aparatura este simpl, are sensibilitate crescut, nu este supus unei legislaii
restrictive ca RIA.
Tehnica ELISA
n cazul utilizrii sistemelor de faz solid pentru separarea moleculelor libere i a
celor marcate, tehnica este denumit ELISA (enzime linked immunosorbent asssay).
Tehnica imunoenzimatic ELISA este bazat pe reacia Ag-Ac.
Sistemul de analiz const din mai multe reacii:
- Ag sau Ac este imobilizat pe suport solid (plci de pastic cu godeuri)
- Ag sau Ac din proba de testat se leag specific de reactantul imobilizat
- reactantul marcat enzimatic reacioneaz cu complexul reactant imobilizat-Ag
(sau Ac) din prob.
Reactantul marcat enzimatic format din Ag (sau Ac) conjugat cu o enzim este
activ att imunologic ct i enzimatic i reacioneaz att cu Ag (sau Ac) din prob
imobilizat pe suportul solid ct i cu substratul corespunztor enzimei.
Vizualizarea reaciei dintre reactantul enzimatic i complexul Ag-Ac iniial se
realizeaz prin adugarea unui substrat corespunztor enzimei utilizate.
Formarea complexului este identificat prin reacia de culoare care apare la
adugarea substratului specific (p-nitrofenilfosfat disodic pentru fosfataza alcalin i
tetrametilbenzidina pentru peroxidaz).
Intensitatea culorii indic prezena sau absena Ag, respectiv Ac din prob (se
citete spectrofotometric folosind un cititor de plci ELISA).
Tehnica ELISA se poate folosi pentru evidenierea Ac (boliinfecioase,
autoimune) sau a Ag (boli infecioase, neoplazice, endocrinologice, farmacologie).
6. Tehnica Western Blot

Tehnica cuprinde trei etape: separarea Ag prin electroforez, transferul Ag,
testarea probei de ser utiliznd tehnica RIA sau ELISA. Numai partea a treia este
efectuat n laboratoarele clinice.
Tehnica WB este disponibil sub form de truse comerciale.
B. Metode i tehnici de imunocitologie

1. Tehnica pentru celule lupice
Tehnica pentru celule lupice (LE) este o tehnic morfologic de decelare a Ac
antinucleari - gamaglobuline cu proprieti antinucleare (factorul Haserick) - ce apar n
serul pacienilor cu lupus eritematos sistemic (LES).
Acest factor seric acioneaz asupra nucleilor de leucocite i i transform n
corpusculi omogeni, care pierd structura cromatinian i i modific colorabilitatea
(corpusculi LE).
Corpusculii LE sunt apoi fagocitai de leucocite intacte i astfel apare imaginea
caractertistic pe care o numim celul LE.
Procesul de omogenizare a nucleului i de fagocitoz are loc in vitro.
Interpretarea preparatelor presupune o experien temeinic de mIcroscopist
(cunoatere exact a morfologiei celulelor LE).
Celula LE este de obicei mai mare dect un polimorfonuclear. Caracteristic este
culoarea roz-violacee a corpusculilor LE care nu prezint nici o structur. n jurul
corpusculilor LE apare, ca o semilun, nucleul celulei fagocitante, cu structura i culoarea
obinuite. Imaginea de rozet este gruparea leucocitelor n jurul unui corpuscul LE.
2. Testul reducerii NBT
Determinarea procentului de granulocite care produc intracelular anion superoxid
datorit activrii oxidazelor celulare. La microscopul optic se determin procentul de
celule care conin depozite intracelulare albastre de formazan.
3. Chemiluminiscena
Formarea speciilor reactive de oxigen (ROS) de ctre granulocitul PMN este
asociat cu emisia de energie luminoas. Emisia luminoas poate fi intensificat cu
ajutorul luminolului sau lucigeninei i convertit de ctre un chemiluminometru n
semnal electric. Rezultatele se exprim n mV.
4. Testul inhibiiei aderenei leucocitelor
Testul inhibiiei aderenei leucocitelor investigheaz rspunsul imun mediat

celular n prezena unui Ag tumoral. Rezultatele sunt exprimate sub form de indice de
deviaie a aderenei (exprim procentual creterea sau scderea aderenei fa de proba
martor).
5. Imunofenotiparea cu ajutorul citometriei n flux
Citometria n flux reprezint o abordare tehnic de mare complexitate ce permite
determinarea simultan a mai multor parametri fizici i chimici caractweristici unei
singure celule aflate n micare ntr-un curent de lichid.
Metoda permite caracterizarea pe baze morfologice i fenotipice a populaiilor
celulare din sngele periferic (limfocite, monocite, granulocite, etc.).
Prin citometria n flux se pot determina procentele seturilor i subseturilor
limfocitare din snge.
6. Testul de transformare blastic a limfocitelor
Dac o suspensie de limfocite prelevate de la un subiect sensibilizat se cultiv n
vitro n prezena unui Ag se constat dup un interval de timp creterea numrului de
celule blastice cu numeroase mitoze.
Transformarea blastic a celulelor in vitro se datorete stimulrii metabolismului
celular ca urmare a reaciei dintre Ag i structura membranei limfocitelor.
n urma cuplrii Ag cu receptorii pe suprafaa limfocitelor sensibilizate,
membrana celular se activeaz, declannd transmiterea unui semnal spre nucleu, ceea
ce determin iniierea sintezei de ADN. Ca urmare, are loc creterea dimensiunilor
celulelor, nucleul devenind mai mare cu cromatina lax i citoplasma bazofil.
5. Reacia de limfocitotoxicitate
Metoda a fost descris de Gorer, apoi a fost aplicat la om de Terasaki.
Reacia const n a incuba la 370C o suspensie de limfocite n prezena C i a
antiserului.
Dac antiserul ntlnete Ag corespunztor pe suprafaa limfocitelor membrana
celulelor este alterat i permite trecerea colorantului n citoplasm, colornd celulele.
Citirea se face la microscopul optic.
Testul este pozitiv cnd exist un anumit procentaj de celule colorate. Testul
servete pentru determinarea Ag de histocopatibilitate (HLA).
C. Principalele reacii antigen-anticorp i aplicaiile acestora
Testul pentru determinarea grupelor sanguine ABO i Rh

Reactivi pentru grupele de snge ABO
Reactivi Anti-A, Anti-B, Anti-AB sunt derivai din liniile de celule hibridizate
care sunt obinute prin fuzionarea anticorpilor de oarece ce produc limfocite B cu celule
de mielom.
Anticorpii derivai dintr-o singur clon (celulele aprute din celula hibrid),
precum i amestecul de diferii anticorpi derivai de la diferite clone sunt desemnai ca
monoclonali: Anti-A, Anti-B, Anti-AB.
Reactivii Anti-A, Anti-B, Anti-AB au fost evaluai n toate tipurile de teste,
incluznd sisteme automate n paralel cu reactivii ABO convenionali, policlonali.
Nu s-au observat reacii fals-pozitive i fals-negative ntre serul monoclonal i cel
policlonal.
Afinitatea serului reactiv a fost adesea mai puternic dect a serului policlonal, n
mod special fa de celulele de nou-nscui i subgrupele cu reactivitate slab.
Material biologic
Se folosete snge total (puncie n deget)
Modul de lucru
I. Testul pe lam
A.Testul rapid
-Se pune o pictur de anti-A, Anti-B, Anti-AB pe o lam de sticl
-Se adaug o pictur mic de snge total i se omogenizeaz bine
-Se rotete uor lama timp de 2 min.
-Se observ apariia aglutinrii. Aglutinarea apare ntre 30-60 sec
Rezultatele negative pot fi semnalate dup 2 min.
B.Testul cu incubare
-Se prepar o suspensie de celule 5-10% n soluie salin izotonic sau se folosete snge
total
-Se pune o pictur din fiecare reactiv Anti-A, Anti-B, anti-AB pe o lam
-Se adaug o pictur de suspensie ori o pictur mic de snge i se amestec bine
-Se incubeaz 15-30 min. la temperatura de 200C
-Se amestec uor i se observ apariia aglutinrii
II. Testul n tub
-Se prepar o suspensie de celule de 3-5% n soluie salin izotonic
-Se pune o pictur de Anti-A, Anti-B, Anti-AB n tubul notat corespunztor
-Se adaug n fiecare tub o pictur din suspensia de celule i se omogenizeaz bine
-Se centrifugheaz 2 min. la 1000 rpm sau 20 sec. La 3000 rpm ori se incubeaz 20 min.
la temperatura de 200C
-Se disloc uor butonul de celule i se observ apariia aglutinrii
Reactivul anti-D
Anticorpi monoclonali umani din clasa IgM, obinui din culturi celulare
Se pstreaz la 2-80C
Conservare cu NaN3-0,1%
Reactivul este pentru diagnosticul in vitro
Reactivi
Conine anticorpi monoclonali de origine uman din clasa IgM, obinut din culturi
celulare. Specificitatea i reproductibilitatea sunt proprieti bine cunoscute la anticorpii
monoclonali.
Majoritatea reactivilor anti-D monoclonali aparin clasei de IgM.
Modul de lucru
I. Testul pe lam
A. Testul rapid
Testul trebuie efectuat pe o suprafa ce are temperatura cuprins ntre 20-370C
-Se pune o pictur de reactiv Anti-D pe lam
-Se adaug o pictur mic de snge total. Se omogenizeaz bine.
-Se rotete energic lama 2 min. Se observ dac apare aglutinarea
-Se citete rezultatul dup 2 min. (suprafaa uscat poate fi interpretat ca o reacie falspozitiv.
B. Testul cu incubare
Se poate folosi snge total sau suspensia de celule
-Se prepar o suspensie de 5-10% din celule ce trebuie testate n soluie salin izotonic
sau se folosete snge total
-Se pune cte o pictur de reactiv anti-D n cerculeele lamei, ce se vor folosi
-Se adaug o pictur de suspensie sau o pictur mic de snge total i se omogenizeaz
bine
-Se incubeaz 30 minla 20-370C
-Se agit uor lama i se observ aglutinarea
II. Testul n tub
-Se pregtete o suspensie 3-5% din celule ce trebuie testate n soluie salin izotonic
-Se pune o pictur de reactiv anti-D n tubul-prob
-Se adaug n fiecare tub o pictur din suspensia de celule i se omogenizeaz bine
-Se centrifugheaz 2 min. la 1000 rpm
-Se disloc uor butonul de celule i se observ prezena aglutinrii.
Dac reacia este negativ se incubeaz tubul 15 min. la 20 0C, se centrifugheaz 2 min la
1000 rpm, se disloc uor butonul de celule i se observ aglutinarea.
Grupa A
Grupa B
Grupa O
Grupa AB
Anti-A
+
+
Anti-B
+
+
Anti-AB
+
+
+
Testul pentru determinarea anticorpilor antistreptolizina O

Reacia ASLO
Test calitativ i cantitativ pentru explorarea strii de imunitate antitoxic fa de
toxinele streptococului.
Testul este bazat pe reacia de aglutinare. Testul permite stabilirea diagnosticului
anginei streptococice sau de infecii streptococice, ca i a celui de reumatism articular
acut (RAA).
Meninerea titrului ASLO crescut chiar i la cteva luni dup puseul reumatismal
permite stabilirea diagnosticului retrospectiv al bolii.
Principiul metodei
Reactivul folosit este o suspensie de particule latex de polistiren ncrcate cu
streptolizina O stabilizat.
Reactivul a fost astfel preparat nct, n prezena unui titru ASLO normal de 200
ui/ml sau mai crescut, s dea o aglutinare vizibil a particulelor latex, fr diluarea
serului.
Reactivi
1 flacon cu reactiv latex de 5 ml
1 flacon cu control pozitiv de 1 ml
1 flacon cu control negativ de 1 ml
1 plcu pe care se efectueaz reacia
Material biologic
Serul de cercetat trebuie s fie clar i proaspt.
Plasma, serul lipemic ori contaminat poate determina erori n obinerea
rezultatelor. Dac testul nu poate fi efectuat imediat, atunci serul se pstreaz la 2-8 0C,
maximum 72 ore. Pentru o perioad mai ndelungat serul trebuie s fie pstrat congelat.
Modul de lucru
I.
Testul ASLO calitativ
-Se aduc reactivii i probele la temperatura camerei naintea folosirii cu 30 min

-Se pun 2 picturi (50 l) de control (+) n unul din cercurile plcuei de testare.
-Se pun 2 picturi (50 l) de control (-) n al doilea cerc.
-Cu o pipet se pun cte o pictur de ser (45 l) din fiecare prob n cercurile urmtoare.
-Se agit uor suspensia de reactiv latex i se pune n fiecare cerc folosit cte o pictur
de reactiv. Pentru omogenizare se folosete un beior pentru fiecare test n parte.
-Se rotete plcua 2 min i se citete aglutinarea imediat lng o surs de lumin.
II.
Testul ASLO cantitativ
-Se aduc reactivii i probele la temperatura camerei, nainte de folosire cu 30 min.

-Se dilueaz probele 1/2; 1/4; 1/8 1/16 n soluie salin izotonic. Se pot face diluii i
mai mari dac este necesar
-Se pune 1 pictur (45 l) din fiecare diluie n succesiunea de cercuri ale plcuei de
testare
-Se agit reactivul latex i se adaug o pictur de reactiv n fiecare cerc de testare.
-Se omogenizeaz cele dou picturi folosind un beior pentru fiecare prob
-Se rotete uor placa 2 min. i se citete rezultatul imediat n dreptul unei surse de
lumin
Interpretarea testului
Reacia ASLO negativ: obinerea unei suspensii lptoase, fr aglutinare, ca cea
observat la controlul negativ
Reacia ASLO pozitiv: obinerea unei aglutinri observat n cercul probei
asemntoare cu cea observat la controlul pozitiv.
Reacia ASLO indic starea de imunitate antitoxic fa de streptococ.
Valori normale: ntre 0-200 ui
Valori crescute:
I.
> 200 ui
La pacienii care au avut n ultimele trei luni o angin streptococic sau alte
infecii streptococice
II.
> 300 ui
n infecii streptococice: glomerulonefrit acut streptococic, scarlatin, purpur
reumatoid
III.
600-2500 ui
n reumatismul articular acut, reacia ASLO ajut n stabilirea diagnosticului
retrospectiv al bolii, deoarece titrul anticorpilor antistreptolizin O se menine crescut
timp de cteva luni dup puseul reumatismal acut.
Titrul ASLO crete odat cu evoluia puseului reumatismal. Reacia ASLO este
pozitiv n stenoz mitral, amigdalit acut streptococic, endocardita streptococic
lent.
Observaii
Reactivii conin azid de sodiu ce se poate combina cu Cu i Pb, putnd asfel
deveni explozibili.
Controlul pozitiv i negativ a fost preparat din ser uman care a fost testat folosind
metoda liceniat FDA i s-a demonstrat c nu reacioneaz cu anticorpii pentru AgHBs i
HCV.
Toate probele umane pot fi considerate potenial infectate.
Reactivii i controalele sunt stabile pn la data expirrii, dac sunt pstrate la

temperatura de 2-80C. Reactivii nu se pstreaz la congelator.
Testul pentru identificarea proteinei C reactive
Testul este utilizat pentru identificarea proteinei C reactive (CRP) n ser pentru
diagnosticul unor afeciuni inflamatorii sau pentru monitorizarea inflamaiei.
Principiul metodei
Reactivul CRP este o suspensie de particule latex de polistiren, marcate cu o
fraciune de gamaglobulin a serului anti-uman CRP specific. Cnd CRP este prezent n
prob, se observ o aglutinare ce indic un coninut de 6 mg/l.
Reactivi
Material biologic
Se folosete ser clar i proaspt.
Plasma, serul lipemic, ori contaminat poate duce la erori n obinerea rezultatelor.
Dac testul nu poate fi fcut imediat, serul se pstreaz la 2-8 0C, pentru 72 de ore.
Pentru o perioad mai ndelungat, serul trebuie pstrat congelat.
Modul de lucru
-Se aduc reactivii i probele la temperatura camerei naintea folosirii cu 30 min.
-Se pun 2 picturi (50 l) de control (+) n primul cerc i 2 picturi n al doilea cerc al
plcuei de testare
-Se pune o pictur (45 l) de ser nediluat din fiecare prob n cercurile ce urmeaz
-Se agit uor suspensia de reactiv latex
-Se pune n fiecare cerc folosit o pictur (45 l)
Pentru omogenizare se folosete un beior pentru fiecare test efectuat
-Se rotete plcua 2 minute i se citete rezultatul imediat n dreptul unei surse de lumin
Interpretarea rezultatelor
Reacia negativ: apariia unei suspensii lptoase, fr aglutinare, ca cea observat
n controlul negativ
Reacia pozitiv: orice aglutinare observat la proba asemntoare celei observate
la controlul pozitiv
Proteina C reactiv nu este prezent n serul pacienilor aparent sntoi.
Determinarea CRP poate servi la monitorizarea activitii inflamatorii, fie ca
rezultat al terapiei, fie al remisiunii spontane
Valori normale: <6 mg/l
Valori crescute:
I.
II.
n faza iniial a inflamaiei n

-infecii bacteriene: pneumonii
-infarct miocardic, stri postoperatorii, afeciuni maligne, mielom
multiplu, lupus eritematos sistemic (LES)
Alte afeciuni
-febre reumatice, afeciuni reumatice diverse, colagenoze, tuberculoza
activ
Observaii
Reactivii conin azid de sodiu ce se poate combina cu Cu i Pb, putnd deveni
explozibili.
Controlul pozitiv i negativ din ser uman, a fost testat prin metoda liceniat FDA
i s-a demonstrat c nu reacioneaz cu anticorpii pentru AgHBs i HIV.
temperatura de 2-80C, maximum 72 de ore. Reactivii nu se pstreaz congelai.
Testul pentru identificarea factorului reumatoid
Principiul metodei
Reactivul pentru factorul reumatoid (FR) este o suspensie de particule latex de
polistiren ncrcate cu IgG uman. Sensibilitatea reactivului FR detecteaz o concentraie
minim de 8 ui/ml, n acord cu WHO Internaional Standard, fr diluarea probei. n mod
practic, particulele de polistiren-latex nvelite cu gamaglobulin denaturat sunt
aglutinate de seruri ce conin FR.
Reactivi
1 plcu pe care se efectueaz testul
Material biologic
Se folosete ser clar i proaspt.
Plasma, serul lipemic sau contaminat poate duce la erori n obinerea rezultatelor.
Dac testul nu poate fi fcut imediat, serul se pstreaz la 2-8 0C, pentru 72 de ore. Pentru
o timp mai ndelungat, serul trebuie pstrat congelat.
Modul de lucru
-Se aduc reactivii i probele la temperatura camerei naintea folosirii cu 30 min
-Se pun 2 picturi (50 l) de control (+) n primul cerc i 2 picturi n al doilea cerc al
plcuei de testare
-Se pune o pictur (45 l) de ser nediluat din fiecare prob n cercurile ce urmeaz
-Se agit uor suspensia de reactiv latex
-Se pune n fiecare cerc folosit o pictur (45 l)
Pentru omogenizarea coninutului se folosete un beior pentru fiecare test efectuat
-Se rotete plcua 2 minute i se citete rezultatul imediat n dreptul unei surse de lumin
Reacia negativ: apariia unei suspensii lptoase, fr aglutinare, ca cea observat
n controlul negativ
Reacia pozitiv: orice aglutinare observat la proba ntocmai celei observate la
controlul pozitiv
Factorii reumatoizi sunt imunoglobuline cu activitate de anticorpi. FR sunt
prezeni la pacienii care prezint poliartrit reumatoid (PR). n continuare se recomand
folosirea testului Waaler-Rose-test specific pentru determinarea FR mpotriva IgG de
animal
Factorul reumatoid este prezent i la persoanele aparent sntoase. Peste vrsta de
60 de ani, frecvena FR este de 5-6%
Valori normale: ntre 0-6 ui/ml
Valori patologice:
Reacia pozitiv: poliartrit reumatoid; boli de colagen (la 10-50%), ex: lupus
eritematos sistemic, sclerodermie; unele disglobulinemii (ex: Kala-Azar, maladia
Waldenstrm)
Reacia negativ: gut, reumatism articular acut, artroze
Observaii
explozibili.
Controlul pozitiv i negativ din serul uman, a fost testat prin metoda liceniat
FDA i s-a demonstrat c nu reacioneaz cu anticorpii pentru AgHBs i HIV.
temperatura de 2-80C. Reactivii nu se congeleaz.
Serurile contaminate sau citirea mai trziu de 3 min., pot da reacii fals-pozitive.
Nu se poate pune un diagnostic doar pe baza unui singur test, este necesar corelarea cu
datele clinice.
Testul pentru identificarea Factorul Reumatoid (FR) n serul i lichidul
articular cu reactivul Waaler-Rose
Principiul metodei
Reactivul Waaler-Rose este o suspensie stabilizat de hematii de oaie sensibilizate
la rndul lor cu anti IgG de oarece. Sensibilitatea reactivului este pentru a detecta o
cantitate minim de FR de 6 ui/ml n acord cu WHO Internaional Standard), fr diluarea
probei.
Material biologic
Se folosete serul clar i proaspt.
Plasma, serul lipemic, ori contaminat poate duce la erori n obinerea rezultatelor.
Dac testul nu poate fi fcut imediat, serul se pstreaz la 2-8 0C, pentru 72 de ore. Pentru
un timp mai ndelungat, serul trebuie pstrat congelat.
Modul de lucru
I.
Testul calitativ
-Se aduc reactivii i probele la temperatura camerei naintea folosirii cu 30 min.

-Se agit bine reactivul astfel nct particulele s se disperseze
-Se pun 2 picturi (50 l) de ser nediluat din fiecare prob n cercurile plcuei de testare
-Se adaug o pictur de reactiv n fiecare cercule utilizat
-Se omogenizeaz coninutul cu un beior pentru fiecare test efectuat
-Se pune plcua pe o suprafa plan 2 min.
-Dup expirarea timpului se apleac plcua la 450 i se ateapt 1 min.
-Se citete prezena sau absena aglutinrii vizibile aparut n acest timp. Dac se
depete timpul, atunci se va citi o reacie de aglutinare nespecific.
Prezena aglutinrii indic prezena n ser a unei cantiti de FR egal cu 6 ui/ml. Scderea
intensitii aglutinrii indic un nivel mai sczut.
II.
Testul semicantitativ
Acest test se realizeaz prin efectuarea unor diluii succesive ale serului n soluie
salin izotonic.
Diluii
Serul probei
Soluie salin
12
14
18
116
100 l
100 l
100 l
100 l
100 l
100 l
100 l
100 l
Volumul probei
50 l
50 l
50 l
50 l
Calcularea conc.
6x2
6x4
6x8
6x16
Factorii reumatoizi sunt imunoglobuline cu activitate de anticorpi. Factorii

reumatoizi sunt prezeni la majoritatea pacienilor cu poliartrit reumatoid (PR).
Valori normale: ntre 0-6 ui/ml
Valori patologice: poliartrita reumatoid (95% dintre cazuri), n unele colagenoze
(lupusul eritematos sistemic, dermatomiozit), n unele forme de neoplasm i unele
hemopatii maligne, intr-un numar mare de afeciuni reumatismale ale copilriei
(spondilartrita anchilozant), boli infecioase (sifilis, TBC, hepatita viral), boli
respiratorii (astm bronic, fibroza pulmonar, bronite).
Observaii
explozibili.
Controlul pozitiv i negativ din ser uman, a fost testat prin metoda liceniat FDA
i s-a demonstrat c nu reacioneaz cu anticorpii pentru AgHBs i HIV.
Reactivul se va agita bine nainte de folosire, astfel nct suspensia s fie bine
omogenizat.
Sensibilitatea testului depinde de volumul picturii (50 l). Reactivii i
controalele sunt stabile pn la data expirrii, dac sunt pstrate la temperatura de 2-8 0C.
Reactivul nu se pstreaz congelat.
Serurile contaminate sau citirea mai trziu de 3 min., pot da reacii fals-pozitive.
Nu se poate pune un diagnostic doar pe baza unui singur test, este necesar corelarea cu
datele clinice.
Testul pentru identificarea AgHBs
Principiul metodei
Testul pentru identificarea AgHBs este un test rapid se efectueaz din ser, este util
n diagnosticul infeciei cu virusul hepatitic B.
Rezultatul testului poate fi citit vizual, fr niciun instrument.
Testul se bazeaz pe principiul determinrii semicantitative a AgHBs din ser, cu
ajutorul metodei imunoenzimatice de tip sandwich. Anticorpii monoclonali i
policlonali sunt folosii pentru identificarea AgHBs cu o nalt sensibilitate. Testul
dureaz aprox. 15 min.
Reactivi
25 de plcue imunocromatografice
Reactivul 1=enzima conjugat
Reactivul 2=soluia de splare
Reactivul 3=soluia revelatoare
Material biologic
Pacientul nu necesit o pregtire prealabil.
-Se recolteaz snge fr anticoagulant
-Se las sngele s se coaguleze
-Se separ serul
Dac probele nu pot fi testate n ziua recoltrii, serul se pstreaz n frigider sau congelat.
Nu se recomand congelare i decongelare repetat.
-Dup decongelare, serul se omogenizeaz bine.
Modul de lucru
-Se aduc toi reactivii, plcua i toate materialele necesare la temperatura camerei nainte
de efectuarea testului cu 30 min. Nu se amesteca capacele eprubetelor ce conin probe
-Se adaud 300-400 l de ser n situsul de testare. Se las serul s se absoarb complet
-Se adaug 2 picturi Reactiv 1 (Enzima conjugat).
-Se las soluia s se absoarb complet. Se ateapt 10 min.
-Se adaug 8 picturi Reactiv 2 (Soluia de splare) n situsul de testare.
-Se las ca soluia s se absoarb complet.
-Se ndeprteaz filtrul
-Se adaug 3 picturi Reactiv 3 (Revelator de culoare) n situsul de testare.
-Se las ca soluia s se absoarb complet.
-Se adaug nc 5 picturi Reactiv 3
-Se citete rezultatul dup 3 min.
Negativ: sunt vizibile doar cele 3 spoturi mici
Intens pozitiv: toate cele trei spoturi mici i spotul mare sunt vizibile, iar spotul
mare este intens colorat
Slab pozitiv: apar cele 3 spoturi mici i spotul central, dar spotul mare nu foarte
intens colorat
Neconcludent: cnd spotul central este vizibil, dar cele mici nu sau cnd nu apare
nici un spot. Se repet testul
Observaii
Kitul trebuie pstrat la temperatura de 2-80C. Dup deschiderea pachetului, kitul
poate fi pstrat la temperatura camerei o sptmn, dar nu la temperaturi mai mari de
300C. Flaconul cu reactiv reprezint enzima conjugat i trebuie pstrat la 2-80C.
Testul calitativ pentru identificarea AgHBs
Principiul metodei
Reactivul este o suspensie de particule latex de polistiren ]nc[rcate cu
gamaglobulin anti-HBs nalt purificat. Cnd AgHBs este prezent n prob se observ o
aglutinare evident.
Reactivi
Material biologic
Se folosete ser clar i proaspt. Probele pot fi pstrate la 2-8 0C pentru 48 de ore,
nainte de efectuarea testului. Pentru o perioad mai lung serul trebuie pstrat congelat
Modul de lucru
-Se aduc reactivii i probele la temperatura camerei cu 30 min. naintea folosirii
-Se agit uor reactivul pentru dispersia particulelor i pentru omogenizare
-Pentru fiecare prob se pregtete o eprubet etichetat i se adaug n 2 ml soluie

salin izotonic, 50 l de prob (diluie 1/40)
-Se pipeteaz 1 pictur de control negativ i pozitiv nediluat n cte un cercule al
plcuei.
-Se pipeteaz 50 l de prob diluat ntr-un cercule al plcuei i 50 l de prob
nediluat ntr-un alt cercule
-Se adaug o pictur de suspensie latex AgHBs n fiecare cercule utilizat. Se amestec
ambele picturi de pe plcu cu un beior
-Se rotete plcua manual sau cu un rotator (60-80 rpm) timp de 5 min.
-Se citete imediat lng o surs de lumin aglutinarea
-Sensibilitatea testului descrete proporional cu temperatura camerei
Rezultatul testului calitativ:
Negativ
Pozitiv
Conc. sczut
Conc. medie
Conc. mare
Proba nediluat
Proba diluat
Aglutinare.-
Aglutinare
Aglutinare +
Aglutinare+
Aglutinare -
Aglutinare
Aglutinare +
Aglutinare +
Observaii
Reactivii conin azid de sodiu care n contact cu plumbul i cuprul evilor poate
forma azid metalic exploziv. Dup ndeprtarea reactivilor se spal sistemul de
scurgere cu un volum mare de ap.
Reactivii se arunc sub jet de ap pentru a preveni formarea de azid metalic
exploziv .
Controlul pozitiv prezint caracteristicile antigenice nu i pe cele infecioase.
Totui, nici o metod de testare nu poate oferi sigurana absolut.
Testul pentru identificarea anticorpilor anti-HBs
Principiul metodei
Acesta este un test rapid pentru identificarea anticorpilor anti-HBs n ser, fiind util
n diagnosticul infeciei cu virusul hepatitic B. Rezultatele pot fi citite vizual.
Testul se bazeaz pe principiul determinrii semicantitative a anticorpilor antiHBs n ser cu ajutorul metodei imunoenzimatice de tip sandwich. Anticorpi sintetici i
recombinai sunt folosii pentru identificarea specific a anticorpilor anti-HBs, metoda
prezint o sensibilitate crescut.
Anticorpii anti-HBs mai mici de 10 mui/l pot fi detectai n 10-15 min.
Spotul mare sau linia celor 3 spoturi mici ne ajut la citirea rezultatelor pozitive i
negative. Cele 3 spoturi mici servesc pentru controlul intern. Spotul mic central este un
control slab pozitiv, celelalte 2 spoturi laterale sunt pentru controlul intens pozitiv. Aceste
spoturi apar cnd reacia imunoenzimatic este complet
Reactivi
25 de pliculee imunocromatografice
R1
Enzima conjugat
R2
Soluia de splare
R3
Soluia de developare
Kitul se pstreaz la temperatura de 2-80C. Dup deschiderea pachetului, acesta
poate fi pstrat la temperatura camerei o sptmn, dar nu la temperaturi mai mari de
300C.
Flaconul cu enzima conjugat trebuie pstrat la 2-80C.
Material biologic
Pacientul nu necesit n prealabil o pregtire. Se recolteaz snge ntr-o eprubet
fr anticoagulant. Se las sngele s se coaguleze i se separ serul. Dac probele nu pot
fi lucrate n ziua recoltrii, serul se pstreaz n frigider sau congelator. Se evit
congelarea i decongelarea repetat. Dup decongelare serul trebuie s se omogenizeze.
Modul de lucru
-Se aduc toi reactivii, plcua, probele i toate materialele necesare la temperatura
camerei nainte de efectuarea testului. Pentru fiecare test se folosete o singur caset.
-Cu pipeta se adaug 3 picturi de soluie de splare (R2) n dispozitivul de testare. Se
las s se absoarb complet soluia naintea continurii testrii.
-Se adaug 300-400 l de ser n situsul de testare.
-Se adaug 2 picturi de Reactiv 1 (Enzima conjugat). Se las reactivul s se absoarb
complet (se ateapt 10 min).
-Se adaug 8 picturi de Reactiv 3 (Soluia de developare) n situsul de testare. Din nou
se las s se absoarb complet
-Se adaug alte 5 picturi de Reactiv 3. Se las 2 min
-Se citete rezultatul
Negativ: sunt vizibile doar cele 3 spoturi mici
Intens pozitiv: Sunt vizibile toate cele 3 spoturi mici i spotul mare. Spotul mare
este intens colorat
Slab pozitiv: Apar cele 3 spoturi mici i spotul mare central, dar spotul mare nu
este foarte intens colorat
Neconcludent: Cnd spotul central este vizibil, dar cele mici nu sunt vizibile sau
cnd nu apare nici un spot. n aceast situaie se recomand repetarea testului.
Testul pentru identificarea anticorpilor anti-HCV

Principiul metodei
Este un test rapid pentru identificarea anticorpilor anti-HCV din ser, care ajut la
diagnosticul infeciei cu virusul hepatitic C.
Se bazeaz pe principiul reaciei imunoenzimatice, determinndu-se anticorpii
anti-HCV n ser. Antigenele sintetice i recombinate HCV sunt folosite pentru
identificarea specific a anticorpilor anti-HCV cu nalt specificitate. Testul dureaz 3
min. Anticorpii anti-HCV nu reacioneaz cu IgM, iar IgG este marker pentru HCV.
Formarea unui spot mare (Ref. A) i o linie cu 3 spoturi mici indic un rezultat
pozitiv sau negativ. Cele 3 spoturi mici servesc ca un control intern. Spotul central mic
indic un control slab pozitiv i cele 2 spoturi laterale indic un control intens pozitiv.
Acestea apar dup ce reacia imunoenzimatic este complet.
Reactivi
25 de teste (fiecare plcu imunocromatografic este pentru un test)
2 flacoane cu soluie conjugat de aur coloidal
Material biologic
Recoltarea probelor nu necesit pacientului o pregtire special.
Recoltarea sngelui se face ntr-o eprubet fr anticoagulant. Se folosete numai ser.
Modul de lucru
-Se aduc toi reactivii, plcua, probele i orice alte materiale necesare la temperatura
camerei nainte de efectuarea testului
-Se adaug 10 picturi de soluie conjugat n spaiul de reacie de pe plcu
-Se adaug 30 l ser peste soluia conjugat i se agit
-Folosind o pipet se transfer toat soluia din spaiul de reacie respectiv peste prefiltrul care acoper spaiul n care se gsete hrtia imunocromatografic
-Se las ca probele s fie absorbite complet de pre-filtru
-Se ateapt s apar spoturile de control nainte de a continua urmtoarea etap.
-Se adaug 10 picturi de soluie conjugat peste prefiltru
-Se las s se absoarb toat soluia
-Se ndeprteaz prefiltrul plcuei
-Se citete rezultatul
Negativ: dac numai cele 3 spoturi mici de pe linia de control sunt vizibile.
Uneori datorit concentraiei crescute a probei poate s apar i un spot superior liniei de
control, mai puin intens colorat
Pozitiv: spotul superior i linia de control sunt vizibile
Slab pozitiv: spotul superior apare mai puin intens, dar este nsoit de linia de
control
Neconcludent: cnd apare doar spotul central i linia de control nu apare sau cnd
att spotul central ct i linia de control nu apare. n acest caz se recomand repetarea
testului.
Testul pentru identificarea anticorpilor anti-Helicobacter pylori
Principiul testului
Este un test vizual, rapid, pentru identificarea calitativ a IgG specifice antiHelicobacter pylori n serul uman.
Acest kit este utilizat pentru diagnosticul infeciei cu Helicobacter pylori la
pacieni cu simptome gastro-intestinale.
Testul este conceput pentru detectarea anticorpilor specifici anti-Helicobacter
pylori din serul uman. Folosirea corect a testului permite detectarea infeciei cu
Helicobacter pylori la pacieni simptomatici. Aceast informaie poate fi folosit n
urmrirea de ctre medic a evoluiei bolii.
Testul este destinat detectrii infeciei prin interpretarea vizual a culorii aprute
n dispozitivul de testare, care este o faz solid de tip sandwich colorat prin
conjugare ntr-o reacie imun neenzimatic. Membrana a fost acoperit cu antigen de
Helicobacter pylori n zona benzii testului i cu anticorpi de capr anti-oarece n
regiunea benzii de control. n timpul testului, serul diluat al pacientului este lsat s
reacioneze cu conjugatul colorat (antigenul de Helicobacter pylori coloidul de aur
conjugat), care a fost precolorat n coninutul din interiorul casetei. Amestecul va circula
in membrana cromatografic prin capilaritate. Cnd anticorpii specifici, adic IgG sunt
prezente n prob, va aprea o band colorat cu complexele antigen-anticorp. Pe de alt
parte, o band colorat va apare intotdeauna n zona de control. Aceast band de control
este un indicator al utilizrii corecte a testului. O culoare distinct aprut n regiunea
benzii-test indic un rezultat pozitiv, iar absena benzii colorate n regiunea testului
reprezint un rezultat negativ
Reactivi
Dispozitivul testului: Fiecare caset conine o bandelet de testare cu antigen
Helicobacter pylori, acoperit cu agentul colorant.
Soluia de diluie: fosfat tamponat salin, cu Tween 20 i conservant
Material biologic
Sngele recoltat prin flebotomie este colectat intr-o eprubet fr anticoagulant.
Se las sngele s se coaguleze. Se separ serul prin centrifugare. Serul se pstreaz la 280C pn la 2 sptmni. Serul poate fi pstrat la 200C pn la 1 an.
Modul de lucru
-Inainte de testare, plcua-test i proba de ser a pacientului se aduc la temperatura
camerei (20-300C).
-Se scoate plcua-test din punga de protecie
-Se eticheteaz testul cu numele sau numrul de identificare al pacientului
-Se pipeteaz 20 l din proba de ser n 180 l soluie de diluie
-Se adaug n dispozitivul de testare 3-4 picturi de soluie peste 20 l ser
-Se citete rezultatul n 5 min
Negativ: cnd apare o singur band roie n zona benzii de control. Nu apare nici
o band roie n zona benzii de testare
Pozitiv: n afara benzii de control, apare o band roie n regiunea liniei de testare
Neconcludent. Cnd nu apare nici o band n nici una din regiuni, procedura de
testare a fost probabil nerespectat sau reactivii au fost probabil alterai
Majoritatea subiecilor care prezint infecia cu Helicobacter pylori au nivelurile
de IgG crescute. Se estimeaz c Helicobacter pylori este prezent la 50% din populaia
globului. Incidena anticorpilor anti-Helicobacter pylori este n funcie de vrst, ras,
zona geografic, starea clinic. O parte relativ mare de pacieni care au valori pozitive ale
nivelurilor de anticorpi sunt asimptomatici, dei sunt infectai cu Helicobacter pylori.
Nivelurile de anticorpi nu se coreleaz cu severitatea simptomelor clinice
Observaii
Kiturile trebuie s fie pstrate la frigider (2-8 0C) sau la temperatura camerei (150
30 C) n punga de garanie cu 1g deshidratant pentru pstrarea valabilitii.
Kitul este folosit numai pentru diagnosticul in vitro. A nu se folosi dup data
expirrii. A nu se deschide punga casetei cu teste pn nu suntei gata s efectuai testul.
Serurile icterice, lipemice, hemolizate sau contaminate pot furniza rezultate
eronate.
Testul imunologic pentru identificarea antigenului de Chlamydia
Principiul metodei
Testul este imunologic, calitativ, rapid, bazat pe principiul imunocromatografiei.
Principiul testului const n plasarea probei ntr-un tub de reacie ce conine
soluia A. Dup 2 min se adaug n tub soluia de extracie B. Dup ce s-a realizat
extracia, se adaug 3 picturi (aprox. 200 l) din proba obinut n locaul pentru prob
al casetei-test. n caseta-test, n regiunea benzii de testare, membrana se acoper n
prealabil cu anticorpi monoclonali anti-antigen specific lipopolizaharidic (LPS), iar n
regiunea benzii de control, cu anticorpi de capr anti-oarece. n timpul testrii, proba va
reaciona cu particulele de aur coloidal care au fost acoperite cu anticorpi monoclonali
anti-Chlamydia, complexul rezultat difuznd lateral n membran prin capilaritate. Dac
proba conine antigenul de Chlamydia, pe membran n regiunea band a testului, se va
forma o band colorat ce conine complexul anticorp Chlamydia-anticorp particul de
aur coloidal. Dac antigenul de Chlamydia nu este prezent, nu se va forma nici o linie n
regiunea band a testului. ntotdeauna, indiferent de prezena Chlamydiei, va aprea n
regiunea de control o band colorat, servind drept control.
Reactivi
Fiecare kit conine tot ce este necesar pentru efectuarea a 20 probe
20 casete-test/kit
1 fiol soluie de extracie A: sticlu picurtoare de plastic (12 ml) cu hidroxid de sodiu
0,2 M
1 fiol soluie de extracie B: sticlu picurtoare de plastic (12 ml) cu acid clorhidric 0,2
M
20 aplicatoare sterile
1 fiol control pozitiv (1 ml): Chlamzdia inactivat termic, n tampon, azid de sodiu
0,1%
1 fiol control negativ (1 ml): Streptococ grupa B inactivat, n tampon, azid de sodiu
0,1%
20 de tuburi de extracie
1 ambalaj
Material biologic
Calitatea probelor recoltate are o mare importan. Detectarea antigenului de
Chlamydia cere ca tehnica de recoltare prin care se obine material celular s fie altfel
dect pentru lichidele biologice (viguroas i suficient).
Recoltarea probei de la nivelul zonei endocervicale
-Se folosete aplicatorul din kit. nainte de recoltarea probelor se nltur excesul de
mucus din zona endocervical cu un tampon de vat
-Se introduce aplicatorul steril n canalul endocervical, trecnd de jonciunea
scuamocilindric, pn cnd cea mai mare poriune a aplicatorului nu mai este vizibil.
Aceasta permite recoltarea de celule cilindrice sau cuboidale, care sunt principalele sedii
ale Chlamydiilor n organism.
-Se rotete ferm aplicatorul 10-15 sec., apoi aplicatorul poate fi scos cu atenie, fr a
contamina proba cu celule exocervicale sau vaginale.
Ca o alternativ, probele endocervicale pot fi recoltate cu ansa citologic. Nu se folosesc
ansele citologice la pacientele nsrcinate. Dup curetarea exocervixului cu aplicatorul, se
introduce ansa citologic n canalul endocervical, depind jonciunea scuamocilindric.
-Se las pe loc 2-3 sec., se rotete ansa citologic de dou ori, apoi se retrage ansa fr s
se ating pereii vaginului.
-Se introduce aplicatorul sau ansa n tubul de extracie numai dac testul se efectueaz
imediat.
Recoltarea probei de la nivelul uretrei
-Se recomand pacientului s nu urineze cu cel puin o or nainte de recoltarea probei.
Aplicatorul sau ansa citologic se pot folosi i pentru recoltarea probei uretrale.
-Se introduce aplicatorul n uretr circa 2-4 cm. Se rotete timp de 3-5 sec., apoi se
retrage.
-Se introduce aplicatorul n tubul de extracie, dac proba trebuie testat imediat. Dac nu
este posibil determinarea imediat, proba pacientului poate fi introdus ntr-un tub uscat
pentru pstrare sau transport. Proba poate fi pstrat 4-6 ore la temperatura camerei (15300C) sau 24-72 de ore la frigider (2-8 0C). Proba nu se congeleaz. Toate probele vor fi
aduse la temperatura camerei nainte de testare.
Recoltarea probelor de urin la brbai
Prima urin de diminea este de preferat, deoarece probabilitatea identificrii
prezenei antigenului de Chlamydia este cea mai mare.
-Se recomand pacientului s recolteze minimum 20-40 ml din prima urin din ziua
analizei ntr-un container steril i fr conservant. Dac probele de urin nu pot fi testate
imediat, acestea trebuie pstrate la frigider pn la 24 de ore.
Modul de lucru
Toi reactivii i probele trebuie aduse la temperatura camerei nainte de nceperea

analizei
Probele urinare trebuie centrifugate pentru a colecta toate particulele ce pot
conine celule cu Chlamydia
-Se centrifugheaz urina (minimum 15 ml) timp de 10 min.
-Se nltur cu atenie supernatantul
-Se adaug 5 picturi de soluie de extracie A n tub i se amestec sedimentul cu o
pipet de unic folosin, pn la omogenizarea suspensiei
-Se las 2 minute la temperatura camerei
-Se transfer suspensia ntr-un tub de extracie folosind o pipet de unic folosin
-Se adaug 5 picturi de soluie de extracie B
-Se scoate testul din folia protectoare i se pune pe o suprafa plan, uscat i curat
-Se eticheteaz testul
-Se adaug 3 picturi (200 l) din proba obinut n caseta de testare
-Se ateapt s apar benzile colorate.
Rezultatul testului trebuie s fie citit n 10 min dup adugarea extractului de
suspensie. n funcie de numrul de microorganisme de Chlamydia prezente pe aplicator
unele rezultate pozitive pot deveni vizibile dup numai 1 min. Totui pentru a confirma
rezultatele negative este necesar un timp de reacie de 10 min. Rezultatele nu se
interpreteaz dup 15 min.
Negativ: n regiunea test nu apare nici o band colorat clar i distinct n roz.
Aceasta arat c nu a fost detectat antigenul de Chlamydia
Pozitiv: n afar de banda roz din regiunea control a testului apare o alt band roz
clar prezent n regiunea test. Aceasta indic c proba conine antigen de Chlamydia
Neconcludent: dac nu apare nici o band n regiunea control, analiza trebuie
repetat. Aceasta indic o posibil eroare n efectuarea testului. n acest caz se poate
recolta o prob nou sau dac nu a trecut mai mult de o or de la recoltarea probei, se
poate efectua nc o determinare pe aceeai prob.
Observaii
Se prelucreaz toate probele chiar dac conin ageni infecioi.
Dup terminarea testrii, se arunc aplicatoarele numai dup autoclavarea
acestora la 1200C, cel puin 20 min. Ca o alternativ, aplicatoarele pot fi tratate cu soluie
de hipoclorit de sodiu 0,5-1,0% o or nainte de a fi aruncate. Persoanele care efectueaz
testul, trebuie s poarte mbrcminte de protecie cum ar fi halat i mnui de unic
folosin n timpul recoltrii i testrii probelor.
Nu se mnnc, nu se bea, nu se fumeaz n aria unde sunt prelucrate probele i
reactivii kitului.
Soluia de extracie A conine hidroxid de sodiu. Soluia de extracie B conine
acid clorhidric. Dac una dintre cele dou soluii vine n contact cu pielea sau cu ochii, se
recomand splarea cu mult ap. Se evit orice contact al minilor cu nasul sau ochii n
timpul recoltrii i testrii probelor.
Controlul pozitiv i negativ din kitul de testare conine azid de sodiu (NaN3)
0,1%, care n contact cu plumbul i cuprul evilor poate forma azid metalic exploziv.
Dup ndeprtarea reactivilor se spal sistemul de scurgere cu un volum mare de ap.
Se recomand folosirea aplicatoarelor ori anselor citologice pentru obinerea
probelor endocervicale.
Nu se amestec reactivii sau componentele din loturi sau kituri diferite. Nu se
schimb dopurile sticlelor ntre ele. Nu se folosete kitul dup expirarea datei indicat pe
cutie. La fel ca n cazul tuturor testelor, diagnosticul definitiv nu trebuie s se bazeze doar
pe rezultatul unui singur test i acesta trebuie coroborat cu datele clinice.
Kitul se va pstra la temperatura camerei (15-200C).
Testul pentru evidenierea Staphylococcus aureus
Principiul metodei
Principala deosebire dintre Staphylococcus aureus i alte tipuri de stafilococi este
existena unui factor de aglutinare. Staphylococcus aureus determin aglutinarea
hematiilor nvelite cu fibrinogen.
Reactivi
Reactiv T
2x2 ml
hematii de oaie nvelite cu fibrinogen
Reactiv C
2x2 ml
hematii de oaie
Pictor 4 buc
Material biologic
Se folosesc colonii bacteriene considerate de Staphylococcus aureus
Modul de lucru
-Se agit bine reactivii
-Se deschid flacoanele i se pun pictoarele
-Se pune o pictur de Reactiv T (test) i o pictur de Reactiv C (control) la fiecare capt
al lamei de sticl
-Folosind o ans, se amestec coloniile bacteriene cu fiecare pictur
-Se nclin uor lamela
Reacie pozitiv: suspensia din prob aglutineaz n primele 15 sec, n timp ce
suspensia de control rmne fin dispersat: Rezultatul este Staphylococcus aureus prezent
Reacie negativ: att suspensia din prob ct i cea de control rmn fin
dispersate, chiar dup 1 min. Rezultatul este Staphylococcus aureus absent.
Reacia echivoc: att suspensia din prob ct i cea de control au semne de
aglutinare. n acest caz trebuie fcute testele clasice pentru identificare
Observaii
Reactivii nedesfcui sunt stabili la 2-80C pn la data de expirare tiprit pe cutie.
Testul imunochimic pentru detectarea sngelui ocult n probele de fecale

Principiul metodei
Hemoglobina uman din probele de fecale reacioneaz cu un amestec de
anticorpi monoclonali/policlonali. n caz de reacie pozitiv apar dou linii roz n zonele
T i C. Dac nu exist hemoglobin apare o singur linie vizibil n zona de control C
Sensibilitatea testului: 0,03 mg Hb/g de materii fecale, 0,2 mg Hb/ml de soluie.
Reactivi
Stripsuri pentru test
Tuburi colectoare (tampon)
5 buc.
5 buc.
Materialul biologic
Recoltarea probelor
-Se colecteaz materii fecale ntr-un recipient curat i uscat
-Se deurubeaz capacul tubului colector i se scoate beiorul aplicator
-Se recolteaz 3 probe de materii fecale folosind beiorul aplicator
-Se nltur excesul de prob de pe beiorul aplicator, tergndu-l cu un material
absorbant
-Se introduce beiorul aplicator napoi n tubul colector.
Proba astfel pregtit poate fi pstrat la 20-300C o sptmn
Modul de lucru
-Se scoate strip-ul de test din ambalaj
-Se amestec bine proba n tubul colector
-Se taie vrful tubului colector i se arunc primele 2-3 picturi de prob
-Se poziioneaz vertical tubul colector i se disperseaz 4 picturi pe suprafaa marcat S
-Se ateapt 5 min. i se citete rezultatul
Pozitiv: apar linii colorate n zonele T (test) i C (control)
Negativ: o linie colorat este vizibil numai n zona C (control)
Neconcludent: nu exist linie colorat nici n zona T nici n zona S. Testul trebuie
repetat
Observaii
-Pentru obinerea rezultatului real nu sunt necesare restricii dietetice
-Probele nu trebuie colectate n timpul ciclului menstrual sau dac pacientul sufer de
hemoroizi sau hematurie (rezultatul apare fals-pozitiv)
-Tratamentul cu medicamente care pot cauza iritaii gastro-intestinale trebuie ntrerupt cu
cel puin 2 zile nainte de recoltarea probei
-Testul este specific pentru hemoglobina uman. Pn la 500 g/ml nu s-au observat
interferene cu hemoglobina de pasre, vac, porc, capr, cal, iepure.
Testul RPR carbon

Principiul metodei
Reactivul RPR Carbon este o suspensie stabilizat cu cristale de colesterol
marcate cu cardiolipin lecitin i particule de mangal (pentru mbuntirea interpretrii
rezultatelor). Reactivul are rolul de antigen fa de anticorpii prezeni n organismul
persoanelor infectate cu Treponema pallidum.
Reactivi
1 set de plcue pe care se efectueaz testul
1 flacon pipeta pentru reactivul latex
Material biologic
Se folosete ser clar, obinut prin centrifugarea sngelui recoltat fr
anticoagulant. Probele pot fi pstrate la 2-80C maximum 48 de ore nainte de efectuarea
testului. Pentru o perioad mai lung, serul trebuie pstrat congelat.
Serurile hemolizate, lipemice sau contaminate pot da erori la interpretarea
rezultatelor.
Modul de lucru
-Se aduc reactivii i probele la temperatura camerei, nainte de folosire
-Se agit uor reactivul pentru dispersarea particulelor
-Se pune cte o pictur din controlul pozitiv i negativ n cte un cercule al plcuei
-Se pune cte o pictur (50 l) de ser nediluat din fiecare prob n cte unul din cercurile
plcuei
-Se adaug o pictur de reactiv RPR Carbon, ori se pipeteaz 20 l de reactiv n fiecare
cercule folosit
-Se amestec ambele picturi, fr s se disperseze pe toat suprafaa cercului
-Se rotete plcua manual ori cu un rotor mecanic de 80-100 rpm, 8 min.
-Se citete prezena aglutinrii vizibile cu ochiul liber. O aglutinare nespecific poate
apare dac testul este citit mai trziu de 8 min.
Testul semicantitativ
-Se poate efectua o diluie succesiv cu soluie salin izotonic
-Titrul serului este diluia cea mai mare care produce reacia pozitiv
Interpretarea rezultatului
Rezultat pozitiv: prezena unor nori cenuii pe albul plcuei
Rezultat negativ: lipsa unei reacii de floculare uniforme i a unei culori cenuii
Sifilisul este o boal cu transmitere sexual, cauzat de Treponema pallidum.
Observaii
Reactivii conin azid de sodiu ce se poate combina cu Pb i Cu putnd deveni
explozibili.
Controlul pozitiv i negativ din ser uman a fost testat folosind metoda liceniat
FDA i s-a demonstrat c nu reacioneaz cu anticorpii fa AgHBs i HIV. Oricum, toate
probele umane pot fi considerate potenial infectate.
Se pune reactivul de RPR Carbon n sticlua special nainte de folosire. Acesta
trebuie foarte bine omogenizat, reactivul se agit bine nainte de folosire. Nu se folosesc
dect picturile care sunt puse perpendicular pe suprafaa plcuei. Dac nu se folosete
sticlua picurtoare, atunci se folosete pipeta automat pentru 20 l. Sensibilitatea
acestui test depinde de volumul picturii. Reactivul i controalele se pstreaz la 2-80C.
Testul pentru depistarea precoce a sarcinii
Principiul metodei
Testul hCG (Gonadotrofina corionic uman) este un test calitativ, o reacie imun
n dou straturi pentru determinarea hCG n urin. Membrana a fost acoprit cu anticorpi
de capr anti-hCG n regiunea benzii de test i anticorpi de capr anti-oarece n regiunea
benzii de control. n timpul testului urina pacientei este lsat s reacioneze cu anticorpii
monoclonali anti-hCG colorai cu coloidul de aur aplicat pe bandeleta de test. Mixtura va
migra n membran prin capilaritate. Absena benzii colorate n regiunea benzii testului
indic rezultatul negativ. Pentru controlul procedurii n regiunea de control va aparea
ntotdeauna o band colorat n prezena hCG n proba de urin.
Reactivi
Bandeletele de testare: bandelet acoperit cu anticorpi anti-hCG de capr i
anticorpi monoclonali anti-hCG de oarece n coloid de aur uscat.
Material biologic
Recoltarea probei
Orice prob de urin este bun pentru testare, dar prima urin de diminea este
cea mai indicat, deoarece conine cele mai mari concentraii de hCG. Probele de urin
pot fi recoltate ntr-un recipient curat, de plastic sau de sticl.
Dac probele nu pot fi prelucrate imediat, acestea pot fi pstrate la frigider (2-80C)
pn la 72 de ore.Nu este necesar s adugm prezervant probei de urin. Proba de urin
trebuie lsat la temperatura camerei nainte de efectuarea reaciei.
Probele de urin tulbure trebuie centrifugate sau filtrate nainte de folosire.
Probele cu precipitate vizibile trebuie lsate s se decanteze i pentru testare se va folosi
numai supernatantul clar.
Modul de lucru
-Se scoate bandeleta de testare din ambalaj
-Se introduce bandeleta n urin, cu vrful sgeii orientat spre urin. Nu se depete
linia max (maximum)
-Se poate lsa bandeleta n urin sau se poate s o scoatem dup min 3 sec i s o lsm
pe o suprafa curat, uscat, neabsorbant (ex: marginea recipientului cu urin)
-Se ateapt s apar banda colorat. Dependent de concentraia de hCG din proba de
urin, rezultate pozitive pot fi obsevate n 10-30 sec. Pentru confirmarea rezultatului
negativ sunt necesare 5 min. pentru reacie.
Nu se interpreteaz rezultatele dup 30 min.
Negativ: doar o singur band colorat aprut n zona de control. Nu apare nici o
band colorat n regiunea de testare
Pozitiv: benzi distincte colorate apar n regiunea de control i n regiunea de
testare. Intensitatea culorii n regiunea de testare poate fi variabil.
Incorect: nici o band vizibil sau nici o band vizibil n regiunea de testare. Se
repet testul
Observaii
Kitul de testare poate fi pstrat la temperatura camerei (20-30 0C) ntr-un container
uscat pn la data expirrii. Bandeletele testului trebuie pstrate departe de umezeal,
cldur i razele soarelui. Capacul containerului de pstrare trebuie s conin desicant
pentru pstrarea bandeletelor uscate. Imediat dup utilizare se repune cu grij capacul.
n anumite situaii, altele dect sarcina, incluznd boala trofoblastic i
neoplasmele netrofoblastice, se pot produce niveluri ridicate de hCG. Aceste diagnostice
trebuie luate n considerare dac tabloul clinic le sugereaz. Dac probele de urin sunt
prea diluate, pot s nu conin niveluri semnificative de hCG. Dac se menine
suspiciunea de sarcin trebuie repetat testul la 48-72 ore. Ca pentru toate testele
diagnostice, un diagnostic clinic definitiv nu se poate baza pe un singur test i trebuie pus
numai de ctre medic dup evaluarea datelor clinice i de laborator.
Testul FSH pentru diagnosticul menopauzei
Principiul metodei
Testul FSH pentru diagnosticul menopauzei este un test calitativ. o analiz
imunologic de tip sandwich prin care se determin concentraia hormonului foliculostimulant (FSH). Pe linia de test a membranei au fost fixai anticorpi anti-FSH, pe linia de
control s-au fixat anticorpi de capr anti.FSH de mgar. n timpul testului, FSH din urina
de la pacient reacioneaz cu conjugatul colorat n auriu (coloid de anticorp monoclonal
anti-FSH) care se afl sub form preuscat pe banda de test. Amestecul migreaz spre
partea superioar a membranei cromatografice prin capilaritate. Dac proba testat
conine FSH (n concentraie semnificativ) va aprea n regiunea de test a membranei o
linie colorat i care reprezint complexul conjugat anticorp FSH-FSH. n acelai timp va
aprea o linie de culoare slab n regiunea de control a membranei. Aceast linie de
control reprezint o referin a intensitii culorii, echivalent cu aprox. 25 mui/ml FSH.
Dac intensitatea liniei de test este egal sau mai puternic dect cea a liniei de control,
atunci rezultatul este pozitiv
Reactivi
20 de casete de test cu membrana marcat cu anticorp de captur anti-FSH i anticorp

monoclonal anti-FSH colorat
Material biologic
Proba de urin trebuie s fie recoltat ntr-un vas curat i uscat. Poate fi folosit
urina din orice moment al zilei, totui se recomand urina de diminea, deoarece conine
concentraia maxim diurn de FSH. Probele de urin pot fi pstrate la frigider (2-8 0C)
cel mult 72 ore naintea efecturii testului. Dac probele au fost inute la frigider nainte
de a efectua testul, acestea vor fi aduse la temperatura camerei.
Acele probe de urin unde se observ o precipitare, se filtreaz sau se
centrifugheaz sau se las s se sedimenteze pn se vor obine eantioane clare care vor
fi testate.
Modul de lucru
-nainte de efectuarea testului, casetele de test, probele pacientelor, controalele i probele
de referin trebuie s fie aduse la temperatura camerei (20-300C).
-Se scoate caseta de test din punga de protecie (adus n prealabil la temperatura
camerei, pentru a evita formarea condensului pe membrana test n momentul deschiderii)
-Se va nscrie pe fiecare caset de test numrul de identificare al pacientului sau al
controalelor
-Se ndeprteaz capacul de plastic roz pentru a avea liber vrful absorbant.
-Se apas cu degetul mare pe caseta de test, astfel nct vrful absorbant s fie direcionat
n jos.
-Se introduce vrful absorbant n urin timp de 10 sec.
-Se reacoper caseta cu capacul roz i se las pe o suprafa plan cu fereastra de test n
sus i se ateapt pn se obine rezultatul
-Se citete rezultatul dup minimum 3 min. (max. 10 min)
Negativ: intensitatea culorii liniei de test este mai mic dect cea a liniei de
control
Pozitiv: intensitatea culorii liniei de test este egal sau mai mare dect a liniei de
control
Dac nici linia de test, nici linia de control nu apar pe membrana casetei, atunci se
elimin testul respectiv. Acest lucru s-a datorat fie unei proceduri neadecvate n timpul
etapelor de testare, fir deteriorrii reactivilor casetei. Se recomand a se repeta testul 5-7
zile mai trziu (preferabil de recoltat urina la aceeai or) pentru a determina dac nivelul
de FSH este nc ridicat
Observaii
Kitul se pstreaz la frigider (2-80C) sau la temperatura camerei (pn la 30 0C) n
punga de plastic cu desicant.
Testul LH de ovulaie
Principiul
Testul este rapid i uor de folosit. Testul este calitativ, putnd preciza cnd are loc
o secreie de hormon luteinizant i cnd este probabil ovulaia. Pentru nceput trebuie
determinat durata ciclului menstrual. Aceasta reprezint numrul de zile cuprins ntre
prima zi a ciclului i ziua premergtoare apariiei ciclului. Dac ciclul este mai scurt de
21 zile ori mai lung de 38 zile, trebuie consultat medicul.. Dac nu se cunoate durata
ciclului, se ncepe testarea din a 11-a zi a ciclului, fcnd o medie a celor 28 de zile. Se
efectueaz un test la fiecare a 5-a zi a perioadei sau dup ce secreia de LH a fost
detectat
Material biologic
Nu se folosete prima urin de diminea, deoarece LH este sintetizat n cursul
nopii i va apare n urin mai trziu, n timpul zilei. Perioada cea mai bun pentru
colectarea urinei este ntre orele 10.00-18.00. Se colecteaz urina la aceeeai or n
fiecare zi.
Modul de lucru
-Se las casetele test, proba de urin i soluia de control s ating temperatura camerei
(18-300C)
-Se extrage urina cu ajutorul unui picurtor pentru urin
-Se adaug 5 picturi de urin n acest loc
-Se las lichidul s migreze
-Se ateapt s se coloreze i s apar benzile
Depinznd de concentraia de LH, rezultatele pozitive pot fi observate dup aprox 40 sec.
Confirmarea rezultatelor negative este dup ce a avut loc reacia complet (10 min)
Nu se secret LH: apare o singur culoare n regiunea de control sau banda este
strlucitoare
Secreie de LH: dac apar 2 benzi colorate vizibile i banda test este egal ca
intensitate cu banda de control, atubnci cu siguran ovulaia va avea loc n urmtoarele
24-48 ore.
Test neconcludent: nu este nici o band vizibil. Se recomand repetarea testului.
Durata
ciclului (zile)
21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38
Testul trebuie
efectuat n ziua
6 6
7 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
Determinarea crioproteinelor
Principiul
Incubarea serului la 40C timp de 24 ore, dup care se urmrete prezena unui
precipitat n ser (crioproteine). Serul cu crioprecipitat se centrifugheaz, apoi sedimentul
este splat la rce de mai multe ori, solubilizat la 37 0C, dup care este testat n dubla
difuzie cu antiseruri monospecifice anti-imunoglobuline.
Prezena crioproteinelor reprezint un semn de disproteinemie ce se manifest n
anumite situaii patologice (ex. afeciuni autoimune).
BIBLIOGRAFIE
Cristea V., Crian M., Costin N., Olinescu A. Imunologie clinic. Editura Casa
Crii de tiin, Cluj-Napoca, 2002
Dejica D. (sub red.) Tratat de imunologie clinic. Vol. I Ed. Dacia, Cluj-Napoca,
1997
Dejica D. (sub red.) Tratat de imunologie clinic. Vol. II Ed. Dacia, ClujNapoca, 1998
Drugrin D., Negru ., Koreck A., Mederle C. Imunologie molecular. Ed.
Mirton, Timioara, 1998
Gluhovschi G. Actualiti n imunologia clinic. Ed. Helicon, Timioara, 1994
Moraru I. Imunologie. Ed. Medical, Bucureti, 1984
Olinescu A. Imunologie. Ed. Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1995
Punescu V., Tatu C.A., Stnescu D.I., Medrea D.P.
Imunologie concepte
fundamentale i aplicative. Ed. Helicon, Timioara, 1996
Pereianu D., Saragea M. Imunologia n teoria i practica medicinei. Vol I Ed.
ALL, Bucureti, 1996
Pereianu D., Saragea M. Imunologia n teoria i practica medicinei. Vol. II Ed.
ALL, Bucureti, 1998
Rpunteanu G. Imunologie Imunopatologie. Ed. Genesis, Cluj-Napoca, 1996
Voiculescu C.(sub red.)
Noiuni de imunologie i imunopatologie. Ed.
Academiei Romne, Bucureti, 1999
Drugrin D., Negru ., Koreck A., Mederle C. Imunologie molecular. Ed.
Mirton, Timioara, 1998
Moraru I. Imunologie. Ed. Medical, Bucureti, 1984
Olinescu A. Imunologie. Ed. Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1995
Punescu V., Tatu C.A., Stnescu D.I., Medrea D.P.
Imunologie concepte
fundamentale i aplicative. Ed. Helicon, Timioara, 1996
Pereianu D., Saragea M. Imunologia n teoria i practica medicinei. Vol I Ed.
ALL, Bucureti, 1996
Pereianu D., Saragea M. Imunologia n teoria i practica medicinei. Vol. II Ed.
ALL, Bucureti, 1998
Voiculescu C.(sub red.)
Noiuni de imunologie i imunopatologie. Ed.
Academiei Romne, Bucureti, 1999

Lucrari Practice Imunologie MG 2008

Încărcat de

Informații document

Titlu original

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Lucrari Practice Imunologie MG 2008

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

UNIVERSITATEA TITU MAIORESCU

A. Reacii imnochimice folosite n laboratorul clinic

B. Metode i tehnici de imunocitologie

C. Principalele reacii antigen-anticorp i aplicaiile acestora

Teste imunologice n laboratorul clinic

interaciunea secundar urmeaz celei primare (dup aprox. 30 min.).

Imunochimia disciplin de grani a imunologiei i biochimiei studiaz

evaluarea cantitativ a Ag i Ac: reacia Ag-Ac este de fapt adaptabil

A. Reacii imnochimice folosite n laboratorul clinic

Reactivii imunochimici sunt produse biologice (Ac, Ag, C, hematii), ce se

Existena unei proporionaliti directe ntre concentraia Ag i diametrul zonei de

Ag), gradul de complexitate crete proporional cu cantitatea de Ag (respectiv de Ac)

Ac care nu pot produce reacii vizibile cu Ag din cauz c se gsesc n ser n

Reacia de fixare a complementului

Reacia de fixare a complementului (RFC), hemoliz direct. J. Bordet a imaginat

5) Reacii cu reactivi marcai

Detectarea, localizarea i identificarea antigenelor se poate realiza utiliznd

Analiza radioimunologic (RIA) este o tehnic de determinare cantitativ a unui

6. Tehnica Western Blot

B. Metode i tehnici de imunocitologie

4. Testul inhibiiei aderenei leucocitelor

Testul inhibiiei aderenei leucocitelor investigheaz rspunsul imun mediat

C. Principalele reacii antigen-anticorp i aplicaiile acestora

Testul pentru determinarea grupelor sanguine ABO i Rh

Testul pentru determinarea anticorpilor antistreptolizina O

Testul ASLO calitativ

-Se aduc reactivii i probele la temperatura camerei naintea folosirii cu 30 min

Testul ASLO cantitativ

-Se aduc reactivii i probele la temperatura camerei, nainte de folosire cu 30 min.

Reactivii i controalele sunt stabile pn la data expirrii, dac sunt pstrate la

n faza iniial a inflamaiei n

-Se aduc reactivii i probele la temperatura camerei naintea folosirii cu 30 min.

Factorii reumatoizi sunt imunoglobuline cu activitate de anticorpi. Factorii

-Pentru fiecare prob se pregtete o eprubet etichetat i se adaug n 2 ml soluie

Testul pentru identificarea anticorpilor anti-HCV

Toi reactivii i probele trebuie aduse la temperatura camerei nainte de nceperea

Testul imunochimic pentru detectarea sngelui ocult n probele de fecale

Testul RPR carbon

20 de casete de test cu membrana marcat cu anticorp de captur anti-FSH i anticorp

S-ar putea să vă placă și