FAMILIA

RETROVIRIDAE.
VIRUSUL HIV.
ONCOGENEZA
VIRALA

FAMILIA RETROVIRIDAE. VIRUSUL

HIV I INFECIA HIV/SIDA

Prima descriere clinic a SIDA 1981

1983HIV a fost identificat la Paris, ins. Pasteur
1986 - propus denumirea HIV (Human
Immunodeficiency Virus)
1986 a fost izolat HIV-2, Africa de Vest
n prezent 40-60 mln persoane infectate cu HIV, 25
mln decedati
In 2010 se estimeaza 85 mln infectati
Zilnic se infecteaz 5-6 mii persoane (6 pers/sec)
In RM primul caz de infectare cu HIV nregistrat n
1987 (total 8 persoane)
Nr de infectai perioada 1987-2007 - 4131, n 2007
731 infectai
SIDA 585 persoane, au decedat 155 persoane

Pe parcursul semestrului I al anului 2008 sau nregistrat 371 cazuri noi de infecie HIV,
inclusiv n teritoriul de Est al republicii 142 (6
luni 2007-336 i 142 respectiv).
Continu scderea ponderii UDI n procesul
epidemic al infeciei, constituind 26,20%
(2001 78,6%) i sporirea proporiei celor
infectai pe cale heterosexual 72,05%.
A sporit ponderea femeilor infectate cu HIV
de la 26,72 % n 2001 la 44,97% n
semestrul I, 2008. La 4 copii ( n 6 luni 2008)
s-a confirmat diagnosticul infecia HIV
perinatal.

Vrsta cea mai afectat de virusul HIV este

de 20-34 ani i constituie 62,31%, inclusiv n
rndul utilizatorilor de droguri injectabile 36,14% i pe cale heterosexual - 63,86%.
La 38 de persoane infectate cu virusul HIV sa diagnosticat maladia SIDA.
Procesul epidemic a cuprins toate teritoriile
administrative i se caracterizeaz prin
extinderea infeciei HIV/SIDA att n populaia
urban (64,63%), ct i rural (35,37%).
Cea mai nalt rspndire a infeciei HIV are
loc n mun. Bli i raioanele Basarabeasca,
Cueni, Fleti, Hnceti, Rezina, Glodeni,
Sngerei, tefan-Vod, iar n teritoriile de Est
ale republicii n oraul Tiraspol i raionul
Rbnia.

CLASIFICAREA FAM.
RETROVIRIDAE

Retroviridae familie numeroas de

virusuri ARN dotate cu o enzim numit
transcriptaz invers (reverstranscriptaz).
ARN
ADNd.c
Subfamilia Orthoretrovirinae
Genurile: Alpharetrovirus, Betaretrovirus,
Gammaretrovirus, Deltaretrovirus,
Epsilonretrovirus (induc tumori i leucemii),
Lentivirus (virusul HIV, SIV)
Subfamilia Spumaretrovirinae
Genul: Spumavirus (nepatogeni)

CARACTERE
MORFOSTRUCTURALE
GENERALE ALE FAMILIEI
RETROVIRIDAE
Dimensiuni
80-130 nm

Form sferic
Genom dou molecule de ARN+,
capacitate de integrare n nucleu su b
form de ADN proviral
Enzima reverstranscriptaza
Capsid icosaedric
Supercapsid derivat din MCP,
lipidic cu GP virale nserate
Ciclul replicativ este identic

VIRUSUL HIV. STRUCTURA I

ORGANIZAREA GENOMULUI

HIV-1 i HIV-2 responsabili de Sindromul

Imuno-Deficienei Achiziionate (SIDA)
HIV-1 repartiie mondial
HIV-2 limitat la Africa de Vest
Particule sferice, 80-120 nm
Structura virusului HIV-1
Genomul: diploid 2 molecule de ARN+
identice, nu sunt utilizate n calitate de ARNm
Enzime: reverstranscriptaza (RT, p66),
integraza (p31), proteaza (p9)
Capsida: n form de trunchi de con, constituit
din 2 proteine - p24 (CA, a capsidei, major) i
p7 (NP, a nucleocapsidei, asociat ARN)

Supercapsida: dublu strat lipidic de origine

celular n care sunt nserate 2 GP virale
1. Gp120, de suprafa, asigur fixarea
virusului de receptorul celular CD4 i de
coreceptori. Regiunea V3 (variabil) induce
anticorpi neutralizani specifici
2. Gp41, transmembranar, legat de gp120,
responsabil de fuziunea supercapsidei cu
membrana celular
Proteina p17, (MA), matrice, cptuete
stratul intern al supercapsidei, este
asociat cu proteaza
Genomul, proteinele interne (p24, p7, p17) i
enzimele constituie nucleoidul (core) viral
-

Structura genomului (apr. 10 mii

nucleotide)
Gena gag (group antigens), codeaz
proteinele structurale interne (p24, p7 i
p17)
Gena pol (polimerase), codeaz 3 enzime:
RT (p66), integraza (p31), proteaza (p9)
Gena env (enveloppe), codeaz o protein
precursor gp160, clivat ulterior n gp41 i
gp120
Gene regulatoare tat, rev, nef, vif, vpr i
vpu (HIV-1) sau vpx (HIV-2)

Omologia dintre HIV-1 i HIV-2 este de

42%, mai nalt la nivelul genelor gag i
pol (peste 50%) i redus la nivelul
genelor env (39%)
Se disting 3 grupe genomice ale HIV-1: M
(major), O (outlier) i N (new). Grupul M
comport 10 subtipuri (A-H, J i K),
repartizate geografic neuniform
(majoritatea n Africa, B Europa
occidental i America de Nord, F, B
Romnia, G Rusia, etc)
Structura antigenic toate proteinele
i glicoproteinele virale sunt imunogene.

Rezistena HIV
HIV este sensibil la solveni lipidici i
detergeni, la 56 grade C este inactivat
n 30 min, n 5 minute - 0,2 % hipoclorit
de Na, 70% etanol, 0,2% glutaraldehid.
Labil la pH-uri extreme, radiaii UV i RX
Cultivarea
- Celule mononucleate de la persoane
sntoase
- Linii celulare din LT MT2
- Animale sensibile maimuele
cimpanzei (HIV-1), Rhesus (HIV-2)

CELULELE-INT I REZERVORUL CELULAR

1. Limfocite TCD4+ (Th) (99% de replicare, ECPsinciii)

2. CPA: monocite/macrofage tisulare (replicare redus,
ECP minim), celulele dendritice (prezente n timus,
tegument, mucoase, organe limfoide, SNC i snge
perif.), celulele microgliei. Ele au rol de vector i
rezervor de virus (adsorb HIV la suprafaa lor i-l
transport n organele limfoide, unde el este
prezentat celulelor CD4+ n care se replic).
Se disting tulpini ale HIV cu tropism macrofagic (M,
sau R5), utilizeaz coreceptorul CCR5, i tulpini cu
tropism limfocitar (T, sau X4), coreceptorul CXCR4.
Limfocitele T pot fi infectate cu ambele tulpini
(prezint ambii receptori).
n primo-infecie sue R5, n stadiu de SIDA sue
X4

CICLUL DE REPLICARE

Ataarea HIV la celula-gazd prin legarea

gp120 la receptorul celular CD4. Rezult o
modificare conformaional a gp120, ce permite
buclei V3 a acestei gp s se fixeze de
coreceptorii de pe suprafaa celulei: CCR5 i
CXCR4, CCR3, CCR2b .a.
Penetrarea NC prin fuziunea supercapsidei
(gp41) cu MCP
Decapsidarea i eliberarea ARN viral asociat
cu RT
Retrotranscrierea ARN+ n ADN- (RT). In
continuare RT (funcie de RNA-aza H)
degradeaz ARN+, apoi transcrie ADN- n
ADNd.c., care va fi circularizat, apoi integrat
(integraza) n cromozomul celular, constituind
provirusul.

Transcrierea ADNv n ARNm i ARN viral

prin intermediul ARN-polimerazei II celulare
Sinteza proteinelor virale sub controlul
factorilor celulari i proteinelor reglatoare
Poliproteina gag/pol 160 kd (p17 MA, p24
CA, p7 NC, p9 (proteaza), p66 (RT), p31
(integraza)
Poliproteina env 160 kd (gp41 i gp120)
Asamblarea NC
Eliberarea prin nmugurire la nivelul MCP
modificat prin inserarea gp virale gp120 i
gp41.

1-10 mlrd de virioni/zi/o persoan infectat

Variabilitatea HIV este determinat de erorile
comise de RT (o eroare la fiecare 10 mii baze).
Mutaiile survin n special la nivelul genei env
(bucla V3 din gp120, care intervine n fixarea
HIV de coreceptori, reprezint epitopul major
de neutralizare).
Nu exist 2 tulpini virale identice. La bolnav este
prezent o populaie viral polimorf, cu
genotipuri diferite
Consecine:
- dificultatea de a obine vaccin eficient
- selecia mutantelor rezistente la antiretrovirale

Mecanismele de distrugere a
limfocitelor T CD4:
Liza direct a celulelor infectate (ECP)
Limfocitele T CD8 elimin limfocitele T
CD4 infectate
Apoptoz n urma stimulrii antigenice
a celulelor care au fost n contact cu
Ag HIV
Limfocitele infectate, acoperite cu
gp120 pot provoca fixarea, fuziunea i
moartea limfocitelor neinfectate
Hiperstimulare celular cu dezvoltarea
anergiei celulare

PATOGENEZA I CLINICA INFECIEI

CU HIV

1.
2.

3.

Transmiterea:
Cale sexual (hetero-, homo).
Cale sangvin (toxicomani, hemofili,
transfuzii de snge sau transplante
de organe, manopere medicale
penetrante -injecii, acupunctur,
tatuaj, piercing)
Cale vertical (in utero n ultimele
sptmni de sarcin, n timpul
naterii sau n timpul alptrii)

EVOLUIA MALADIEI

Primo-infecia (perioada de timp de la

infectare pn la apariia Ac). Durata 4-6-8
sptmni. Are loc multiplicarea intens i
diseminarea virusului, scderea numrului
de limfocite T CD4 i creterea numrului
limfocitelor TCD8. Diminuarea ulterioar a
arjei virale i creterea nr LT CD4 este
determinat de rspunsul imun specific
celular (limf TCD8) i umoral (Ac antigp120, anti-gp41, anti-p24, apar la finele
primoinfectiei). Persoana infectat devine
seropozitiv.
Factorii care influeneaz evoluia primoinfeciei: tipul virusului, raspunsul imun al
gazdei i factori genetici (homozigoii cu
mutaie la nivelul genei receptorului CCR5
prezint rezisten la infecia cu HIV 1)

Evoluia poate fi asimptomatic sau

simptomatic (50%): adenopatie
cervical, febr, faringit, ulcere ale
mucoasei bucale, oboseal, mialgie,
artralgie, erupii cutanate.
Durata simptomelor 7 10 zile

 Faza

asimptomatic, de laten clinic

(durata variabil: 3 - 18 ani).
Virusul se replic n organele
limfoide, numrul LT CD4 diminueaz
lent sau rmne stabil. Apar variante
noi de virus care se multiplic, S istemul
Imun le recunoate i reacioneaz
specific, ciclul se repet de multiple ori.
Aceasta duce la diminuarea progresiv
a LT CD4 i LT CD8 i epuizarea
Sistemului Imun, urmat de
multiplicarea necontrolat a HIV i
dispariia complet a LT CD4.

Faza clinic (SIDA)

Numrul LT CD4 - 500-200 celule/ml.
Se manifest clinic prin febr cronic, pierdere
n greutate, diaree, afeciuni ale tuturor
organelor i sistemelor, tumori (sarcomul
Kaposi, limfoame), infecii oportuniste cu:
Parazii: Toxoplasma, Histoplasma, Leishmania
Bacterii: Mycobacterium, Salmonella,
enterobacterii condiionat patogene, etc
Fungi: Pneumocystis carinii, Cryptococcus
neoformans, Cryptosporidium, Candida, etc
Virusuri: HSV, HZV, CMV

Rspunsul imun:
Celular LT CD8 recunosc i elimin celulele infectate (n
special LT CD4) prin citotoxicitate direct (restricie
CMH I) sau prin intermediul citokinelor, chemokinelor.
Imunitatea celulara este crucial pentru controlul
replicrii HIV i are un impact substanial n evoluia
infeciei
Umoral Ac apar precoce n infecie primar, dar
depistarea lor poate fi efectuat dup 6-12 sptmni
de la infectare. Rolul neutralizarea virionilor, Ac antigp120 mpiedic fixarea HIV pe celulele-int. Eficien
maxim n fazele precoce ale infeciei
5-10% din infectai sunt asimptomatici de
lung durat:
- arj viral redus
- Numrul LT CD4 stabil (peste 500 celule/ml)
- Rspuns imun celular i umoral constant
- Absena semnelor clinice

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR
AL INFECIEI HIV/SIDA

Teste indirecte de depistare

Teste ELISA de depistare a Ac (dup minimum
22 zile de la contagiu)
Teste combinate Ag - Ac (detectarea Ag p24 i
Ac anti-p24 prin tehnici ELISA)
Teste rapide (RA cu particule de gelatin
sensibilizate cu Ag)
Teste de confirmare (n caz de reacie
pozitiv) Tehnica de referin Western-blot
(separarea el-for. a proteinelor virale,
transferarea lor pe o band de nitroceluloz,
tratarea cu serul cercetat, apoi efectuarea
RIE). Pot fi detectai Ac contra tuturor Ag HIV.

Testul Western Blot

Criterii de apreciere: un ser este

considerat pozitiv dac sunt prezeni
Ac contra cel puin 2 Ag de suprafa
(gp160, gp120, gp41), asociai cu Ac
contra cel puin o protein intern
(p24, p17 sau a enzimelor)
Teste directe
1. Detectarea Ag p24 (marker direct al
infeciei HIV) prin tehnici ELISA. Poate
fi detectat n primo-infecie pn la
seroconversie. Ag p24 reapare n
momentul evoluiei spre SIDA.

2. Detectarea ARN-lui plasmatic sau ADNv prin

teste de amplificare genic.
Prezena ARNv n ser denot replicarea
constant a virusului. Determinarea arjei
virale este utilizat pentru monitorizarea
unui pacient infectat.
3. Izolarea HIV n cultur

Se realizeaz prin inocularea cu plasm sau

celule mononucleate de la bolnav a unei
culturi de celule mononucleate de la
donatori sntoi.
Replicarea este detectat prin evidenierea Ag
p24, RT sau a ARNv.

Diagnosticul primo-infeciei (markerii

virali)
ARNv plasmatic (apare dup 8-17 zile de la
contagiu)
Ag p24 n ser (pn la apariia Ac anti-p24)
Ac anti-HIV (dup minimum 3 sptmni de la
contagiu)
Monitorizarea seropozitivilor
Parametrii imuno-hematologici - formula
sangvin, determinarea subpopulaiilor de LT
(valori absolute, raport T CD4/T CD8),
dozarea Ig, microglobulinei beta2
Markerii virali - arja viral plasmatic
(ARNv),
Ag p24, Ac anti-p24

CHIMIOTERAPIA
ANTIRETROVIRAL

1.

2.

3.

4.

5.

Dup mecanismul de aciune:

Inhibitori nucleozidici i nucleotidici ai RT
(Abacavir, Didanosin, Lamivudin, Stavudin,
Zalcitabin, Zidovudin, Tenofovir)
Inhibitori nenucleozidici ai RT (Delavirdin,
Efavirenz, Nevirapin)
Inhibitori ai proteazelor (Amprenavir, Indinavir,
Lopinavir, Nelfinavir, Ritonavir, Sanquinavir)
Inhibitorii adeziunii i penetrrii n curs de
evaluare (CD4, T20)
Inhibitor al asamblrii i eliberrii Interferonul alfa

Binding to surface receptors

Fusion of viral and host cell membranes
Uncoating of the nucleocapsid
Reverse transcription of RNA to DNA
Integration of DNA provirus into the host genome
Replication (Host DNA polymerase)
Transcription (Host RNA polymerase II)
RNA splicing in the host cell nucleus (host and
viral factors)
Translation of viral proteins
Proteolysis of viral polyproteins)
Glycosylation of gp 160
Phosphorylation of viral proteins
Fatty acylation of GAG
Assembly of the virus at the host cell membrane
Budding
Maturation of the virus particle after budding

Indicatii pentru TAR

I categorie: pacientii simtpomatici, SIDA sint tratati la
orice valoare a celulelor CD4 sau ARN HIV
II categorie: pacientii asimptomatici sint tratati daca
nivelul celulelor CD4 este < de 350 la orice valoare a ARN
HIV
III categorie: pacientii asimptomatici si CD4 > 350,
sint tratati in functie de nivelul ARN HIV (>50000
copii/ml)

* Pentru identificarea indicatiilor pentru initierea imediata a

TAR se recomanda de utilizat numarul de limfocite
CD4(< de 200- 350 ) si nivelul ARN HIV(>50000 copii/ml) .
De exemplu, tuberculoza pulmonara poate fi prezenta
indiferent de numarul de leucocite CD4 si nivelul ARN HIV
, iar celelalte criterii clinice (diareea cronica, febra
persistenta si al.) pot fi induse de alte cauze care nu sunt
legate cu infectia HIV.

Este indicat asocierea a 3

chimioterapice: 2 INRT + 1 IP; 2 INRT
+ 1 INNRT, 3 INRT, 1 INRT+1 INNRT+IP
zidovudina (300 mg) + lamivudina
(150 mg)+abacavir (300mg)
zidovudina (300 mg) + lamivudina
(150 mg) + nevirapina (200 mg)
stavudina (40 mg) + lamivudina (150
mg) + nevirapina (200 mg)
stavudina (30 mg) + lamivudina (150
mg) + nevirapina (200 mg) pentru
pacientii cu greutatea < 60kg

Dificulti:
- Durata i costul tratamentului
- Toxicitatea preparatelor
- Dezvoltarea rezistenei
Monitorizarea terapiei antiretrovirale:
- Msurarea arjei virale (copii ARNv n
plasm fiecare 6 luni)
- Determinarea numeric a LT CD4+
fiecare 3 luni

Persoanele infectate cu HIV i bolnave de

SIDA sunt asigurate cu tratament
antiretroviral gratuit.
n semestrul I 2008 au iniiat tratamentul
antiretroviral 59 bolnavi, inclusiv din
teritoriile de Est - 4. Ctre 01 iulie curent, n
total beneficiaz de tratament specific
antiretroviral 585 persoane, dintre care 85
din teritoriile de est.
Au primit tratament profilactic 43 femei
gravide i 43 copii, inclusiv din teritoriul de
est al republicii - 12 gravide i 12 copii.
n scopul monitorizrii eficacitii
tratamentului s-au efectuat 1183 teste PCR
i 11259 investigaii ale statusului
imunologic prin metoda de flaucitometrie.

PROFILAXIA INFECIEI
HIV/SIDA

1.

2.

3.
4.

Msuri nespecifice: prevenirea transmiterii

HIV
Profilaxia specific dificil!!!
Existena a 2 virusuri HIV-1 i HIV-2 cu
numeroase subtipuri genetice i antigenice,
variabilitatea genetica
Infecia natural nu este stopat de
rspunsul imun, iar memoria imunologic
este mediocr
Nu este definitif clar rolul LT CD8+ (Tc)
Lipsa unui model animal satisfctor

STRATEGII DE
VACCINARE
1.
2.
3.

4.

5.

6.

Elaborarea vaccinurilor vii atenuate

Elaborarea vaccinurilor inactivate
Vaccinuri recombinante subunitare
(numai imunitate umoral)
Epitopi peptidici anti-gp 120 (numai
imunitate umoral)
Utilizarea vectorilor (inseria genelor
env)
Vaccinuri ADN

VIRUSURILE HTLV
(Human T-cell Lymphotropic Virus)

Genul Deltaretrovirus
Specii HTLV-1 i HTLV-2
Structura comun retrovirusurilor
Transmiterea contact sexual, vertical, prin
snge (cu limfocite).
Puterea oncogen determinat de gena
transactivatoare tax.
Manifestri clinice 1-5% din persoanele
infectate dezvolt peste 20-30 ani leucemie
acut cu celule T.
Diagnostic depistarea virusului prin ELISA i
confirmarea W-B, PCR
Tratament antiretrovirale, IFN

ONCOGENEZA VIRAL

1.

2.

Cancerul este consecina dereglrii

procesului normal de proliferare
celular.
Cile de apariie a cancerului:
Hiperactivitatea genelor de
stimulare a creterii
Blocarea genelor care inhib
creterea

Virusuri cu potenial oncogen:

1. Virusuri cu genom ADN (Papovaviridae,
Adenoviridae, Herpesviridae,
Hepadnaviridae)
2. Virusuri cu genom ARN (Retroviridae)
Caracter comun capacitatea genomului viral
de a se integra n cromosomul celuleigazd, inducnd transformarea ei.
Transformarea celular modificri ale
funciilor biologice ale celulei, ce duc la
multiplicarea necontrolat a celulelor i
capacitatea de invazie a esuturilor.

Virusurile oncogene conin gene care pot

induce tumori v-onc
Toate celulele conin gene omologe: protooncogene / c-onc (induc o protein care
controleaz replicarea ADN i multiplica rea
celular)
V-onc i c-onc nu sunt identice!!! C-onc pot
induce tumori numai n urma unor mutaii.
Mecanismele oncogenezei:
Virusul aduce n celul o oncogen
Virusul activeaz proto-oncogenele celulare