12.11.

2010

FAMILIA RETROVIRIDAE.
VIRUSUL HIV.
ONCOGENEZA VIRALA

FAMILIA RETROVIRIDAE. VIRUSUL HIV I INFECIA

HIV/SIDA

Prima descriere clinic a SIDA 1981

1983HIV a fost identificat la Paris, ins. Pasteur
1986 - propus denumirea HIV (Human Immunodeficiency Virus)
1986 a fost izolat HIV-2, Africa de Vest
n prezent 40-60 mln persoane infectate cu HIV, 25 mln decedati
In 2010 se estimeaza 85 mln infectati
Zilnic se infecteaz 5-6 mii persoane (6 pers/sec)
In RM primul caz de infectare cu HIV nregistrat n 1987 (total 8
persoane)
Nr de infectai perioada 1987-2007 - 4131, n 2007 731
infectai
SIDA 585 persoane, au decedat 155 persoane

Pe parcursul semestrului I al anului 2008 s-au

nregistrat 371 cazuri noi de infecie HIV, inclusiv n
teritoriul de Est al republicii 142 (6 luni 2007-336 i
142 respectiv).
Continu scderea ponderii UDI n procesul
epidemic al infeciei, constituind 26,20% (2001
78,6%) i sporirea proporiei celor infectai pe cale
heterosexual 72,05%.
A sporit ponderea femeilor infectate cu HIV de la
26,72 % n 2001 la 44,97% n semestrul I, 2008. La
4 copii ( n 6 luni 2008) s-a confirmat diagnosticul
infecia HIV perinatal.

12.11.2010

Vrsta cea mai afectat de virusul HIV este de 20-34

ani i constituie 62,31%, inclusiv n rndul utilizatorilor
de droguri injectabile - 36,14% i pe cale
heterosexual - 63,86%.
La 38 de persoane infectate cu virusul HIV s-a
diagnosticat maladia SIDA.
Procesul epidemic a cuprins toate teritoriile
administrative i se caracterizeaz prin extinderea
infeciei HIV/SIDA att n populaia urban (64,63%),
ct i rural (35,37%).
Cea mai nalt rspndire a infeciei HIV are loc n
mun. Bli i raioanele Basarabeasca, Cueni,
Fleti, Hnceti, Rezina, Glodeni, Sngerei, tefanVod, iar n teritoriile de Est ale republicii n oraul
Tiraspol i raionul Rbnia.

CLASIFICAREA FAM. RETROVIRIDAE

Retroviridae familie numeroas de virusuri ARN
dotate cu o enzim numit transcriptaz invers
(reverstranscriptaz).
ARN
ADNd.c
Subfamilia Orthoretrovirinae
Genurile: Alpharetrovirus, Betaretrovirus,
Gammaretrovirus, Deltaretrovirus, Epsilonretrovirus
(induc tumori i leucemii), Lentivirus (virusul HIV, SIV)
Subfamilia Spumaretrovirinae
Genul: Spumavirus (nepatogeni)

VIRUSUL HIV. STRUCTURA I

ORGANIZAREA GENOMULUI

CARACTERE MORFOSTRUCTURALE
GENERALE ALE FAMILIEI RETROVIRIDAE

Dimensiuni 80-130 nm
Form sferic
Genom dou molecule de ARN+, capacitate
de integrare n nucleu sub form de ADN
proviral
Enzima reverstranscriptaza
Capsid icosaedric
Supercapsid derivat din MCP, lipidic cu
GP virale nserate
Ciclul replicativ este identic

HIV-1 i HIV-2 responsabili de Sindromul ImunoDeficienei Achiziionate (SIDA)

HIV-1 repartiie mondial
HIV-2 limitat la Africa de Vest
Particule sferice, 80-120 nm
Structura virusului HIV-1
Genomul: diploid 2 molecule de ARN+ identice, nu sunt
utilizate n calitate de ARNm
Enzime: reverstranscriptaza (RT, p66), integraza (p31),
proteaza (p9)
Capsida: n form de trunchi de con, constituit din 2
proteine - p24 (CA, a capsidei, major) i p7 (NP, a
nucleocapsidei, asociat ARN)

Supercapsida: dublu strat lipidic de origine

celular n care sunt nserate 2 GP virale
1.
Gp120, de suprafa, asigur fixarea virusului de
receptorul celular CD4 i de coreceptori. Regiunea
V3 (variabil) induce anticorpi neutralizani
specifici
2.
Gp41, transmembranar, legat de gp120,
responsabil de fuziunea supercapsidei cu
membrana celular
Proteina p17, (MA), matrice, cptuete stratul intern
al supercapsidei, este asociat cu proteaza
Genomul, proteinele interne (p24, p7, p17) i
enzimele constituie nucleoidul (core) viral
-

12.11.2010

Structura genomului (apr. 10 mii nucleotide)

Gena gag (group antigens), codeaz
proteinele structurale interne (p24, p7 i
p17)
Gena pol (polimerase), codeaz 3 enzime:
RT (p66), integraza (p31), proteaza (p9)
Gena env (enveloppe), codeaz o protein
precursor gp160, clivat ulterior n gp41 i
gp120
Gene regulatoare tat, rev, nef, vif, vpr i vpu
(HIV-1) sau vpx (HIV-2)

12.11.2010

Omologia dintre HIV-1 i HIV-2 este de 42%,

mai nalt la nivelul genelor gag i pol
(peste 50%) i redus la nivelul genelor
env (39%)
Se disting 3 grupe genomice ale HIV-1: M
(major), O (outlier) i N (new). Grupul M
comport 10 subtipuri (A-H, J i K),
repartizate geografic neuniform
(majoritatea n Africa, B Europa
occidental i America de Nord, F, B
Romnia, G Rusia, etc)
Structura antigenic toate proteinele i
glicoproteinele virale sunt imunogene.

Rezistena HIV
HIV este sensibil la solveni lipidici i detergeni,
la 56 grade C este inactivat n 30 min, n 5
minute - 0,2 % hipoclorit de Na, 70% etanol,
0,2% glutaraldehid. Labil la pH-uri extreme,
radiaii UV i RX
Cultivarea
- Celule mononucleate de la persoane
sntoase
- Linii celulare din LT MT2
- Animale sensibile maimuele cimpanzei
(HIV-1), Rhesus (HIV-2)

CELULELE-INT I REZERVORUL CELULAR

1. Limfocite TCD4+ (Th) (99% de replicare, ECP-sinciii)

2. CPA: monocite/macrofage tisulare (replicare redus, ECP
minim), celulele dendritice (prezente n timus, tegument,
mucoase, organe limfoide, SNC i snge perif.), celulele
microgliei. Ele au rol de vector i rezervor de virus (adsorb
HIV la suprafaa lor i-l transport n organele limfoide,
unde el este prezentat celulelor CD4+ n care se replic).
Se disting tulpini ale HIV cu tropism macrofagic (M, sau R5),
utilizeaz coreceptorul CCR5, i tulpini cu tropism
limfocitar (T, sau X4), coreceptorul CXCR4.
Limfocitele T pot fi infectate cu ambele tulpini (prezint
ambii receptori).
n primo-infecie sue R5, n stadiu de SIDA sue X4

12.11.2010

CICLUL DE REPLICARE

Ataarea HIV la celula-gazd prin legarea gp120 la

receptorul celular CD4. Rezult o modificare
conformaional a gp120, ce permite buclei V3 a
acestei gp s se fixeze de coreceptorii de pe
suprafaa celulei: CCR5 i CXCR4, CCR3, CCR2b .a.
Penetrarea NC prin fuziunea supercapsidei (gp41) cu
MCP
Decapsidarea i eliberarea ARN viral asociat cu RT
Retrotranscrierea ARN+ n ADN- (RT). In continuare
RT (funcie de RNA-aza H) degradeaz ARN+, apoi
transcrie ADN- n ADNd.c., care va fi circularizat, apoi
integrat (integraza) n cromozomul celular,
constituind provirusul.

Transcrierea ADNv n ARNm i ARN viral prin

intermediul ARN-polimerazei II celulare
Sinteza proteinelor virale sub controlul factorilor
celulari i proteinelor reglatoare
Poliproteina gag/pol 160 kd (p17 MA, p24 CA, p7
NC, p9 (proteaza), p66 (RT), p31 (integraza)
Poliproteina env 160 kd (gp41 i gp120)
Asamblarea NC
Eliberarea prin nmugurire la nivelul MCP modificat
prin inserarea gp virale gp120 i gp41.

12.11.2010

1-10 mlrd de virioni/zi/o persoan infectat

Variabilitatea HIV este determinat de erorile comise de
RT (o eroare la fiecare 10 mii baze). Mutaiile survin
n special la nivelul genei env (bucla V3 din gp120,
care intervine n fixarea HIV de coreceptori, reprezint
epitopul major de neutralizare).
Nu exist 2 tulpini virale identice. La bolnav este
prezent o populaie viral polimorf, cu genomuri
diferite
Consecine:
- dificultatea de a obine vaccin eficient
- selecia mutantelor rezistente la antiretrovirale

Mecanismele de distrugere a limfocitelor T

CD4:
Liza direct a celulelor infectate (ECP)
Limfocitele T CD8 elimin limfocitele T CD4
infectate
Apoptoz n urma stimulrii antigenice a
celulelor care au fost n contact cu Ag HIV
Limfocitele infectate, acoperite cu gp120 pot
provoca fixarea, fuziunea i moartea
limfocitelor neinfectate
Hiperstimulare celular cu dezvoltarea
anergiei celulare

PATOGENEZA I CLINICA INFECIEI CU HIV

1.
2.

3.

Transmiterea:
Cale sexual (hetero-, homo).
Cale sangvin (toxicomani, hemofili,
transfuzii de snge sau transplante de
organe, manopere medicale penetrante injecii, acupunctur, tatuaj, piercing)
Cale vertical (in utero n ultimele sptmni
de sarcin, n timpul naterii sau n timpul
alptrii)

12.11.2010

EVOLUIA MALADIEI
Incubaia de la cteva zile pn la cteva sptmni
de la expoziie

Factorii care influeneaz evoluia primoinfeciei: tipul virusului, raspunsul imun al gazdei
i factori genetici (homozigoii cu mutaie la
nivelul genei receptorului CCR5 prezint
rezisten la infecia cu HIV 1)
Evoluia poate fi asimptomatic sau
simptomatic (50%): adenopatie cervical,
febr, faringit, ulcere ale mucoasei bucale,
oboseal, mialgie, artralgie, erupii cutanate.
Durata fazei simptomatice 7 10 zile

Primo-infecia (perioada de timp de la infectare

pn la apariia Ac). Durata 4-6-8 sptmni.
Are loc multiplicarea intens i diseminarea
virusului, scderea numrului de limfocite T CD4
i creterea numrului limfocitelor TCD8.
Diminuarea ulterioar a arjei virale i creterea
nr LT CD4 este determinat de rspunsul imun
specific celular (limf TCD8) i umoral (Ac antigp120, anti-gp41, anti-p24, apar la finele
primoinfectiei). Persoana infectat devine
seropozitiv.

Faza asimptomatic, de laten clinic

(durata variabil: 3 - 18 ani).
Virusul se replic n organele limfoide, numrul
LT CD4 diminueaz lent sau rmne stabil.
Apar variante noi de virus care se multiplic,
Sistemul Imun le recunoate i reacioneaz
specific, ciclul se repet de multiple ori.
Aceasta duce la diminuarea progresiv a LT
CD4 i LT CD8 i epuizarea Sistemului Imun,
urmat de multiplicarea necontrolat a HIV
i dispariia complet a LT CD4.

Faza clinic (SIDA)

Numrul LT CD4 - 500-200 celule/ml.
Se manifest clinic prin febr cronic, pierdere n greutate,
diaree, afeciuni ale tuturor organelor i sistemelor,
tumori (sarcomul Kaposi, limfoame), infecii oportuniste
cu:
Parazii: Toxoplasma, Histoplasma, Leishmania
Bacterii: Mycobacterium, Salmonella, enterobacterii
condiionat patogene, etc
Fungi: Pneumocystis carinii, Cryptococcus neoformans,
Cryptosporidium, Candida, etc
Virusuri: HSV, HZV, CMV

12.11.2010

12.11.2010

Rspunsul imun:
Celular LT CD8 recunosc i elimin celulele infectate (n special LT
CD4) prin citotoxicitate direct (restricie CMH I) sau prin
intermediul citokinelor, chemokinelor. Imunitatea celulara este
crucial pentru controlul replicrii HIV i are un impact
substanial n evoluia infeciei
Umoral Ac apar precoce n infecie primar, dar depistarea lor
poate fi efectuat dup 6-12 sptmni de la infectare. Rolul
neutralizarea virionilor, Ac anti-gp120 mpiedic fixarea HIV pe
celulele-int. Eficien maxim n fazele precoce ale infeciei

5-10% din infectai sunt asimptomatici de lung durat:

arj viral redus
Numrul LT CD4 stabil (peste 500 celule/ml)
Rspuns imun celular i umoral constant
Absena semnelor clinice

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR
AL INFECIEI HIV/SIDA

Teste indirecte de depistare

Teste ELISA de depistare a Ac (dup minimum 22 zile
de la contagiu)
Teste combinate Ag - Ac (detectarea Ag p24 i Ac antip24 prin tehnici ELISA)
Teste rapide (RA cu particule de gelatin sensibilizate
cu Ag)
Teste de confirmare (n caz de reacie pozitiv) Tehnica
de referin Western-blot (separarea el-for. a
proteinelor virale, transferarea lor pe o band de
nitroceluloz, tratarea cu serul cercetat, apoi
efectuarea RIE). Pot fi detectai Ac contra tuturor Ag
HIV.

Testul Western Blot

Criterii de apreciere: un ser este considerat

pozitiv dac sunt prezeni Ac contra cel
puin 2 Ag de suprafa (gp160, gp120,
gp41), asociai cu Ac contra cel puin o
protein intern (p24, p17 sau a
enzimelor)
Teste directe
1. Detectarea Ag p24 (marker direct al
infeciei HIV) prin tehnici ELISA. Poate fi
detectat n primo-infecie pn la
seroconversie. Ag p24 reapare n
momentul evoluiei spre SIDA.

12.11.2010

2. Detectarea ARN-lui plasmatic sau ADNv prin teste

de amplificare genic.
Prezena ARNv n ser denot replicarea constant a
virusului. Determinarea arjei virale este utilizat
pentru monitorizarea unui pacient infectat.
3. Izolarea HIV n cultur
Se realizeaz prin inocularea cu plasm sau celule
mononucleate de la bolnav a unei culturi de celule
mononucleate de la donatori sntoi.
Replicarea este detectat prin evidenierea Ag p24,
RT sau a ARNv.

CHIMIOTERAPIA ANTIRETROVIRAL

1.

2.

3.

4.

5.

Dup mecanismul de aciune:

Inhibitori nucleozidici i nucleotidici ai RT (Abacavir,
Didanosin, Lamivudin, Stavudin, Zalcitabin, Zidovudin,
Tenofovir)
Inhibitori nenucleozidici ai RT (Delavirdin, Efavirenz,
Nevirapin)
Inhibitori ai proteazelor (Amprenavir, Indinavir,
Lopinavir, Nelfinavir, Ritonavir, Sanquinavir)
Inhibitorii adeziunii i penetrrii n curs de evaluare
(CD4, T20)
Inhibitor al asamblrii i eliberrii - Interferonul alfa

Indicatii pentru TAR

I categorie: pacientii simtpomatici, SIDA sint tratati la orice
valoare a celulelor CD4 sau ARN HIV
II categorie: pacientii asimptomatici sint tratati daca nivelul
celulelor CD4 este < de 350 la orice valoare a ARN
HIV
III categorie: pacientii asimptomatici si CD4 > 350, sint tratati in
functie de nivelul ARN HIV (>50000 copii/ml)

* Pentru identificarea indicatiilor pentru initierea imediata a TAR se

recomanda de utilizat numarul de limfocite
CD4(< de 200- 350 ) si nivelul ARN HIV(>50000 copii/ml) . De
exemplu, tuberculoza pulmonara poate fi prezenta indiferent de
numarul de leucocite CD4 si nivelul ARN HIV , iar celelalte criterii
clinice (diareea cronica, febra persistenta si al.) pot fi induse de
alte cauze care nu sunt legate cu infectia HIV.

Diagnosticul primo-infeciei (markerii virali)

ARNv plasmatic (apare dup 8-17 zile de la
contagiu)
Ag p24 n ser (pn la apariia Ac anti-p24)
Ac anti-HIV (dup minimum 3 sptmni de la
contagiu)
Monitorizarea seropozitivilor
Parametrii imuno-hematologici - (formula sangvin,
determinarea subpopulaiilor de LT (valori absolute,
raport T CD4/T CD8), dozarea Ig, microglobulinei
beta2
Markerii virali - arja viral plasmatic (ARNv),
Ag p24, Ac anti-p24

Binding to surface receptors

Fusion of viral and host cell membranes
Uncoating of the nucleocapsid
Reverse transcription of RNA to DNA
Integration of DNA provirus into the host genome
Replication (Host DNA polymerase)
Transcription (Host RNA polymerase II)
RNA splicing in the host cell nucleus (host and viral factors)
Translation of viral proteins
Proteolysis of viral polyproteins)
Glycosylation of gp 160
Phosphorylation of viral proteins
Fatty acylation of GAG
Assembly of the virus at the host cell membrane
Budding
Maturation of the virus particle after budding

Este indicat asocierea a 3 chimioterapice:

2 INRT + 1 IP; 2 INRT + 1 INNRT, 3 INRT,
1 INRT+1 INNRT+IP
zidovudina (300 mg) + lamivudina (150
mg)+abacavir (300mg)
zidovudina (300 mg) + lamivudina (150 mg)
+ nevirapina (200 mg)
stavudina (40 mg) + lamivudina (150 mg) +
nevirapina (200 mg)
stavudina (30 mg) + lamivudina (150 mg) +
nevirapina (200 mg) pentru pacientii cu
greutatea < 60kg

10

12.11.2010

Dificulti:
Durata i costul tratamentului
- Toxicitatea preparatelor
- Dezvoltarea rezistenei
Monitorizarea terapiei antiretrovirale:
- Msurarea arjei virale (copii ARNv n plasm
fiecare 6 luni)
- Determinarea numeric a LT CD4+ fiecare 3
luni

PROFILAXIA INFECIEI HIV/SIDA

Persoanele infectate cu HIV i bolnave de SIDA

sunt asigurate cu tratament antiretroviral gratuit.
n semestrul I 2008 au iniiat tratamentul
antiretroviral 59 bolnavi, inclusiv din teritoriile de
Est - 4. Ctre 01 iulie curent, n total beneficiaz
de tratament specific antiretroviral 585 persoane,
dintre care 85 din teritoriile de est.
Au primit tratament profilactic 43 femei gravide
i 43 copii, inclusiv din teritoriul de est al
republicii - 12 gravide i 12 copii.
n scopul monitorizrii eficacitii tratamentului sau efectuat 1183 teste PCR i 11259 investigaii
ale statusului imunologic prin metoda de
flaucitometrie.

STRATEGII DE VACCINARE

Msuri nespecifice: prevenirea transmiterii HIV

Profilaxia specific dificil!!!
Existena a 2 virusuri HIV-1 i HIV-2 cu numeroase
subtipuri genetice i antigenice, variabilitatea genetica
Infecia natural nu este stopat de rspunsul imun, iar
memoria imunologic este mediocr
Nu este definitif clar rolul LT CD8+ (Tc)
Lipsa unui model animal satisfctor

1.

2.

3.
4.

VIRUSURILE HTLV
(Human T-cell Lymphotropic Virus)

1.
2.
3.

4.

5.
6.

Elaborarea vaccinurilor vii atenuate

Elaborarea vaccinurilor inactivate
Vaccinuri recombinante subunitare (numai
imunitate umoral)
Epitopi peptidici anti-gp 120 (numai
imunitate umoral)
Utilizarea vectorilor (inseria genelor env)
Vaccinuri ADN

Genul Deltaretrovirus
Specii HTLV-1 i HTLV-2
Structura comun retrovirusurilor
Transmiterea contact sexual, vertical, prin snge (cu
limfocite).
Puterea oncogen determinat de gena transactivatoare
tax.
Manifestri clinice 1-5% din persoanele infectate
dezvolt peste 20-30 ani leucemie acut cu celule T.
Diagnostic depistarea virusului prin ELISA i
confirmarea W-B, PCR
Tratament antiretrovirale, IFN

11

12.11.2010

ONCOGENEZA VIRAL

1.

2.

Virusuri cu potenial oncogen:

Virusuri cu genom ADN (Papovaviridae, Adenoviridae,
Herpesviridae, Hepadnaviridae)
2.
Virusuri cu genom ARN (Retroviridae)
Caracter comun capacitatea genomului viral de a se
integra n cromosomul celulei-gazd, inducnd
transformarea ei.
Transformarea celular modificri ale funciilor biologice
ale celulei, ce duc la multiplicarea necontrolat a
celulelor i capacitatea de invazie a esuturilor.

1.

Cancerul este consecina dereglrii

procesului normal de proliferare celular.
Cile de apariie a cancerului:
Hiperactivitatea genelor de stimulare a
creterii
Blocarea genelor care inhib creterea

Virusurile oncogene conin gene care pot

induce tumori v-onc
Toate celulele conin gene omologe: protooncogene / c-onc (induc o protein care
controleaz replicarea ADN i multiplicarea
celular)
V-onc i c-onc nu sunt identice!!! C-onc pot
induce tumori numai n urma unor mutaii.
Mecanismele oncogenezei:
Virusul aduce n celul o oncogen
Virusul activeaz proto-oncogenele celulare

12