METABOLISMUL AMINOACIZILOR

Biosinteza aminoacizilor n organismele superioare

Biosinteza acidului glutamic i a acidului aspartic
Biosinteza alaninei
Biosinteza serinei, cisteinei i glicocolului
Biosinteza argininei prolinei i hidroxiprolinei
Biosinteza histidinei

Biotehnologii aplicate n sinteza unor aminoacizi

Catabolismul aminoacizilor
Ci generale de catabolizare ale aminoacizilor:
transaminarea, deaminarea, decarboxilarea
Ci specifice de catabolizare ale aminoacizilor
1

Metabolismul amoniacului. Ciclul ureogenetic

Relaiile metabolice ntre aminaocizi, glucide, lipide,
compui azotai neproteici
Catabolizarea AA cu formare de substrate ale ciclului ATC
Gluconeogeneza pornind de la aminoacizi
Lipogeneza pornind de la aminoacizi
Cetogeneza pornind de la aminoacizi
Aminoacizi precursori au unor compui azotati neproteici:
Biosinteza creatinei
Biosinteza glutationului

Dereglri n metabolismul aminoacizilor

2

BIOSINTEZA
AMINOACIZILOR
IN ORGANISMELE ANIMALE

 intermediari metabolici
- ciclul Krebs (ATC)
- catabolizarea aeroba si anaeroba a glucozei
- catabolismul glicerolului si a AG

precursori:
-cetoacizi = acid piruvic
acid oxalilacetic
acid -cetoglutaric

via reactii:
- transminare
- aminare reductiva
4

BIOSINTEZA AMINOACIZILOR IN
ORGANISMELE ANIMALE
Asparagina
OXALILACETAT

Acid
aspartic

Metionina
Treonina

Izoleucina

Lizina
Fenilalanina
FOSFOENOLPIRUVAT

Tirozina

Tirozina
Triptofan
Glutamina

-CETOGLUTARAT

Acid
glutamic
Alanina

PIRUVAT

Arginina

Valina
Leucina

3-FOSFO-GLICERAT

Prolina

Glicocol

Serina
Cisteina

RIBOZO-5-FOSFAT

Histidina

Biosinteza acidului glutamic

precursor acidul -cetoglutaric
reacii transaminarea
COOH

COOH
(CH2)2
H2N

CH

Acid glutamic

COOH

COOH

CH2

(CH2)2
CH

COOH
Acid piruvic

COOH

H2N

CH3

(CH2)2

CH3

+ H2N

CH
COOH

COOH
Acid -cetoglutaric

-Alanina

COOH

COOH

CH2

(CH2)2
O

COOH

COOH

Acid glutamic

Acid oxalilacetic

COOH
Acid -cetoglutaric

+ H2N

CH
COOH
Acid aspartic
6

reacii aminare reductiv

COOH

NADPH+H+

(CH2)2
+
C

COOH

NADP+

(CH2)2

+
NH4

COOH
Acid -cetoglutaric

H2N
NADH+H+

NAD+

CH

+ H2O

COOH
Acid glutamic

funcii n organism
- sinteza proteinelor
- neurotransmitor n creier
- precursor al GABA
- transformat n glutamin (utilizat de creier ca un carburant
celular pentru sinteza proteic)
- intervine n funciile cerebrale de nvare i memorizare

concentraii prea mari este toxic pentru neuroni

observaiile post-mortem - pacientilor epileptici sau cu boala Alzheimer
- aflux excesiv i necontrolat de ioni de calciu n celule alterarea funciei
mitocondriale tradus prin eliberarea citocromilor P450 implicai n apoptoz
- supra-expresie a factorilor de transcripie a genelor pro-apoptotice sau la
inhibarea factorilor anti-apoptotici (factori mediai de glutamat i ionii de calciu)
8

Biosinteza acidului aspartic

precursori acidul oxalil-acetic; acidul fumaric
reacii aminare reductiv
COOH
NADH+H+

CH2
C

NH4

O
COOH

COOH
Acid oxalilacetic

NAD+

H2O
NADH+H +

COOH

CH2
H2N

CH
COOH

Acid aspartic
C
HOOC
H
Acid fumaric

NAD+
9

Biosinteza alaninei
precursor acidul piruvic
nivelul hepatocitelor
reacia de transaminare a acidului glutamic
cu acidul piruvic, sub aciunea GPT
nivelul esutului muscular
aminarea reductiv a acidului piruvic

10

 Ciclul glucoz alanin

cuplarea procesului de transfer a alaninei din muchi la ficat
cu cel de transfer al glucozei de la ficat la muchi
FICAT
Glucoza

MUSCHI
SANGE

Glucoz
2 ATP

6 ATP
Piruvat

Piruvat

glutamat

NH4+

ALT

Uree
Alanina

Lactat

-cetoglutarat

SANGE
Alanina

11

Biosinteza serinei, cisteinei i glicocolului

Serina
- precursori = intermediari metabolici din cadrul catabolismului
glucozei ( acidul 3-fosfo-gliceric)
gliceric
H2C O
HC

NAD+

H2C O

OH

COOH
Acid 3- fosfo
gliceric

GLU

H2C O
H2N

C O
NADH+H+

COOH

CH
COOH

-cetoglutarat

Serin-3-fosfat

Acid 3- fosfohidroxi piruvic

Pi

H2O
H2C
H2N

OH

CH
COOH
Serina

12

 Cisteina
- precursori = serina i homocistein ( formata din metionina)
THF

N-metil-THF
Metionin-sintetaza

H 2C

C H3

H2 C
ATP

C H2
H 2N

H 2O

SAM

CH
PPa+Pa

COOH
METIONINA

adenozina

H 2C

C H2
H 2N

-CH 3

SH

CH

OH

CH

H 2N

COOH
SERINA

COOH
HOMOCISTEINA

H 2O
H 2C

C H3
H 2C

C H2
C

COOH
ACID -CETOBUTIRIC

SH
Cistin-liaza

H 2N

CH
COOH
CISTEINA

H 2N
N H4

H 2O

C H2

C H2

CH

CH

COOH

N H2

COOH
CISTINA
13

 Glicocol
- precursori = serina
serinhidroximetiltransferaza

H2C
H2N

OH

THF

H2N

CH
COOH
Serina

THF-CH2OH

THF

THF-CH2OH

CH2
COOH
Glicocol

14

Biosinteza ornitinei, argininei i prolinei

O
COOH
(CH2)2
H2N

C
ATP

Acid glutamic

ADP

GLU

CH2

Glutamat-5-fosfat

CH
COOH

NADH+H

CH2

H2N

CH2
CH2

CH2
NAD + Pi

NH2

-cetoglutarat H2N

CH

CH
COOH

COOH
-semialdehida glutamica

Ornitina

spontan

COOH
N

NADH+H

NAD

COOH
N
H
Prolina

15

 Arginina
sintetizata din citrulina 2 enzime citozolice
argininosuccinat sintetaza (ASS)
argininosuccinat liaza (ASL)
hidroliza ATP
Citrulina :
- arginina - nitric oxid sintetaza (NOS)
- ornitina - catabolismul prolinei si glutaminei

16

SINTEZA ARGININEI
axa intestin subire - rinichi

celule epiteliale ale

intestinului subtire
obin citrulina pornind
de la glutamina i
glutamat

celulele tubului proximal

renal
extract citrulina din
circulaia sanguin i o
transform n arginin

arginina preluat
apoi n circulaia
sanguin

DEREGLARI ale functiei renale sau intestinale pot reduce

sinteza endogena de arginina suplimentarea prin dieta

17

BIOTEHNOLOGII DE OBINERE
A AMINOACIZILOR
totalul de AA produi industrial :
66% - industria alimentar
31% - furaje
4% - ind.cosmetic i medicin
Hidroliza proteinelor vegetale i animale
Sinteza chimic amestecuri racemice
Biosinteza microbiologic
Sinteza enzimatic
18

1. Hidroliza proteinelor vegetale i animale

- L-glutamatul din faina de gru, soia sau din melas
2. Sinteza chimica
- metod mai laborioas i costisitoare
- se obin amestecuri racemice (amestec de izomeri optici)
3. Biosinteza microbiologic
+ folosesc materie prim ieftin
- necesit un timp mare de sintez
- AA rezultai trebuiesc separai de ali AA din
mediu precum i de impuritile existente
4. Sinteza enzimatic
+ este rapid, eficient, nu produce impuriti i deeuri
- materia prim utilizat i enzimele sunt scumpe
19

 Plantele i microorganismele pot sintetiza

aproximativ 200 AA, dar dintre acestia doar
aproximativ 25 pot participa la biosinteza proteinelor

Cile de biosintez
- identice cu cele din organismele animale
transaminarea i aminarea reductiv
- deosebiri eseniale:
plantele pot utiliza N anorganic preluat din mediul
nconjurtor
varietatea scheletului carbonic pe care l sintetizeaz este
mai mare
20

 Scheletul AA - metabolii glucidici:

- acidul -cetoglutaric
- acidul piruvic
- triozele
- pentozo-fosfaii
Reglarea biosintezei AA
- mecanisme allosterice de tip feed-back
- mecanism ce implic inhibarea biosintezei
enzimelor ce particip la procesul de sintez a AA
21

Biosinteza microbiologic
Tulpini productoare de AA - bacteriile din genul
Microccocus
Mycobacterium
Corynebacterium
Brevibacterium
Utiliznd aceste tulpini se obin de obicei mai muli AA

i doar foarte rar un singur AA

Gli, Ala, Ser, Val, Glu, Asp
22

Condiii obligatorii de ndeplinit pentru

producerea microbiologic a AA
1. stimularea sintezei enzimelor implicate n obinerea AA
2. stimularea potrivit n celule a substanelor nutritive utilizate ca
materii prime n biosintez
3. stoparea reaciilor secundare
4. inhibarea activitii enzimelor care produc degradarea AA
5. stimularea excreiei de AA n mediul exterior

23

Biotehnologia obinerii acidului glutamic

1956 - Japonia, s-a izolat un microorganism capabil sa produc acid
glutamic ntr-un mediu cu glucoz i amoniu (Microccocus
glutamicus)

Mecanismul de sinteza
glucoza este oxidat la acid citric ciclul ATC acid -ceto glutaric

condiii aerobe acid glutamic

-ceto glutarat
condiii anaerobe - acidul lactic
producia mondial de glutamat - estimat la 250.000 tone / an
24

- alimentatie - 2 forme:
o forma legata de ali AA pentru a forma o proteina
carne, peste, vegetale, cereale
o forma libera (glutamat de sodiu) care joaca un rol important
in gustul mncrii arome de baz - umami (savuros)
- forma libera - rosii, cartofi, sos de soia, branza
- aditiv alimentar
sursa principala de energie a intestinului
Glutamatul prezent n alimente este transformat n intestin n
glutamat liber iar dupa absorbie i vehiculare pe cale
sanguin ajunge la creier unde are rol de neurotransmitor
25

L - Acidul aspartic

obtinere prin extracie din hidrolizatul unor proteine

sinteza pornind de la amoniac i acid fumaric, n
prezen de Escherichia coli

L-Fenilalanina

Sinteza enzimatica
Fermentaie bazat pe mutani de nalt performan
Rhodotorula glutinis (50 g/l cu un randament estimat la 83%)
Flavobacterium ammoniagenes
mutante de E.coli i Corynebacterium, sursa de carbon fiind glucoza

26

Aspartamul

L-a-aspatil-L-fenilalanil-metil-ester
ndulcitor sintetic caracterizat printr-o putere caloric mai mic
dar cu putere de ndulcire de 200 de ori mai puternic dect a
zahrului
considerat un aditiv alimentar, producia sa fiind estimat la
10000 tone/an
a fost descoperit accidental in 1965, cand James Schlatter,
chimist la compania G.D. Searle, testa un medicament anti-ulcer
Codul european pentru aspartam este E 951
27

Denumire

Compoziie chimic

Putere de
ndulcire

zahr

diglucid (glucoz + fructoz)

ciclamat de sodiu

ciclohexilsulfamid de Na (sintetic)

40

aspartam

dipeptid

200

zaharin

sarea de Na a imidei acidului

2-sulfobenzoic (sintetic)

450

taumatin

protein neglicozilat format din 208

aminoacizi

2500

dr. Russell Blaylock

500 de referine tiinifice - excesul de
aminoacizi liberi n alimentaie
perturbri neurologice cronice

28