Adjuvanii pentru vaccinuri

Dezvoltarea de noi vaccinuri, coninnd antigene protectoare din ce

n ce mai bine caracterizate, se heurte an manque adjuvani
permind de a amplifica rspunsul imun generat tout en controlant
din punct de vedere calitativ.
Termenul de adjuvant deriv din latinescul adjuvare care
semnific a ajuta, a asista. Acesta desemneaz toate substanele
capabile de a intensifica rspunsul imun ndreptat mpotriva unui
antigen administrat mpreun cu una din aceste substane. Exist o
multitudine de adjuvani de natur i origini extrem de diverse.
Printre acetia se disting agenii imunostimulani i vehiculele.
Primii, activeaz direct celulele imunitare, legndu-se la diferii
receptori n timp ce vehiculele leag antigenul i determin maniera
prin care acesta va fi prezentat sistemului imunitar. Cu toate
acestea, vehiculele au adesea proprieti imunostimulante deoarece
i ele reprezint corpi strini.

 Testai n cadrul a numeroase imunoterapii,

adjuvanii sunt folosii mai ales n calitate de
constitueni de vaccinuri. De obicei ei sunt
indispensabili pentru instalarea unui rspuns
imun protector. S-a observat c, puterea
imunogen a unui vaccin neadjuvantat mai ales
dac acesta este inactivat, este mult mai slab,
deoarece vaccinarea nu poate imita perfect o
infecie natural. Vaccinurile subunitare n curs
de dezvoltare, care sunt reprezentate uneori de
simple peptide, se refer n particular i ele la
aceast problem.

 Adjuvanii se folosesc att n vaccinurile veterinare ct i

n cele de uz uman. Pentru medicina uman, de
exemplu, alaunul este actualmente singurul adjuvant
nregistrat, fiind utilizat n numeroase vaccinuri. n scop
experimental, ambele categorii de vaccinuri beneficiaz
de dezvoltarea continu a noilor adjuvani ca saponinele,
oligonucleotidele CpG, .a. n acelai timp dac
exigenele n materie de inocuitate i eficacitate sunt
asemntoare pentru ambele categorii, n dezvoltarea
noilor vaccinuri de uz veterinar trebuie s se in absolut
cont i de alte constrngeri precum costul de producie i
mai ales limitele reziduurilor n produsele de origine
animal destinate consumului uman.

 Dintre categoriile de substanele adjuvante

utilizate n activitatea de producie i n cea de
dezvoltare de noi vaccinuri menionm
urmtoarele: adjuvanii uleioi, adjuvanii
minerali, constituenii bacterieni, toxinele
bacteriene, oligodezoxinucleotidele (CpG),
saponinele i complexele imunostimulante,
adjuvanii veziculari, copolimerii sintetici,
aminele lipofile, citokinele, imidazoquinolonele i
polizaharidele.

Adjuvanii uleioi
Sub aceast denumire sunt regrupate diferite
tipuri de emulsii. Adjuvanii uleioi clasici sunt
emulsii ap n ulei sau picturi de soluie
apoas de antigen hidrofil cu diametrul de
ordinul nanometru sau milimetru, nglobai ntr-o
faz lipofil continu. Exemplul tipic printre
aceste formule este antigenul Freund incomplet
(AIF), reprezentat printr-o emulsie de ulei de
parafin ce conine ca emulsifiant Arlacel A
(mannide monoleate).

Adjuvanii uleioi
Interesul crescut pentru bunstarea animalelor
de laborator a condus la dezvoltarea de
adjuvani echivaleni adjuvantului Freund
complet i incomplet ACF i AIF), dar cu un nivel
de toxicitate mult mai sczut (Jensen i col.
1998). n aceste formule noi, Mycobacterium
tuberculosis a fost spre exemplu nlocuit prin
componenii de perete ai micobacteriilor iar
uleiurile vegetale au fost nlocuite cu parafin;
totui ele sunt n aceiai msur potenial
cancerigene.

Adjuvanii uleioi
Adjuvanii noi de tipul Titer Max, Ribi Adjuvant
System sau SAF (Syntex Adjuvant Formulation)
sunt emulsii ulei n ap n care uleiurile sunt
nlocuite printr-un copolimer sintetic i un ulei
netoxic metabolizabil scualenul sau forma sa
natural de skalen, skalanul. Compuii de
perete bacterian ce intr n compoziia acestor
adjuvani sunt reprezentai prin MPL
(monofosforil lipidul A), TDM (dimicolatul de
trehaloz) sau treonil-MDP (treonil muramil
dipeptidul).

Adjuvanii minerali
Aceast categorie cuprinde ca principali reprezentani:
hidroxidul de aluminiu, fosfatul de aluminiu sau alaunul,
fosfatul de potasiu i fosfatul de calciu. Ei se prezint
sub forma unui precipitat insolubil de tip gel, pe care sunt
adsorbite proteinele antigenice n soluie apoas. Aceste
proteine interacioneaz cu ionii din gel prin intermediul
forelor electrostatice.

n Romnia, la prepararea unor vaccinuri de uz

veterinar se folosete hidroxidul de aluminiu, Al(OH)
obinut dup tehnica lui Georgescu (1958), care const
n precipitarea alaunului, urmat de splarea cu ap
pentru ndeprtarea anionului SO4. Este o soluie
coloidal alb-lptoas, care lsat n repaus formeaz
sediment.

Adjuvanii minerali
Produsul are nsemnate proprieti
adsorbante fa de bacterii, virusuri, toxine
bacteriene, proteine serice, fermeni, .a.,
i adjuvante, sporind mult imunogenitatea
suspensiilor virale i bacteriene inactivate.

Constiuenii bacterieni
La nceput aceti adjuvani au fost reprezentai
prin constituenii bacteriilor ntregi, inactivate de
exemplu diferite specii de Salmonella.

Adjuvantul Freund complet (ACF) folosit nc

n experimentare n pofida efectelor sale
secundare, considerabile are n formula sa
constitueni bacterieni reprezentai de o tulpin
de Mycobacterium tuberculosis inactivat prin
cldur.

Constiuenii bacterieni
Preparatele de perete bacterian disponibile azi pe pia
sunt reprezentate prin extracte din bacilul lui CalmetteGuerin (BCG). Dintre acestea muramil dipeptidul (MDP)
este cel mai mic component din peretele micobacteriilor
cu proprieti de adjuvant iar dimicolatul de trehaloz
(TDM) este un alt component de perete eficient ca
adjuvant i relativ puin toxic. Au fost puse pe pia i
derivate sintetice de MDP numite peptide adjuvani. Din
lipopolizaharidul (LPS) bacteriilor Gram negative care
ndeplinete rol de endotoxin i este activ i ca adjuvant
se poate obine prin tratament cu HCl monofosforil lipidul
A compus mult mai puin toxic ce i conserv
eficacitatea ca adjuvant.

Toxinele bacteriene
Toxina holeric (CT) produs de Vibrio
cholerae este un puternic adjuvant utilizat
la vaccinurile de uz veterinar, omul fiind n
mod natural mult mai sensibil la aceast
toxin. Din molecula de toxin subunitatea
B purificat (CTB) servete ca adjuvant.
Toxina pertusic de Bordetella pertusis
(PT) sub form inactivat servete i ea ca
adjuvant ca de altfel i enterotoxina
termolabil (LT) de Escherichia coli.

Oligodezoxinucleotidele CpG
Reprezint un tip de adjuvant apropiat de constiuenii
bacterieni. Contrar ADN-ului de vertebrate, genoamele
de procariote sunt bogate n dinucleotide CpG (CytidineGuanosine). Cu secvenele lor specifice, aceste
dinucleotide formeaz mobilul CpG recunoscut de
ctre sistemul imunitar de manier nespecific. Mobilele
CpG grupnd n interiorul lor oligonucleotide sintetice
sunt din ce n ce mai mult folosite ca adjuvani.
Capacitatea de recunoatere a mobilelor CpG pare
conservat la speciile animale; totodat activitatea
fiecrui mobil variaz considrabil n funcie de specia
vizat.

Saponinele i complexele
imunostimulante
Saponinele sunt substane de origine vegetal
cu proprieti de ageni tensioactivi amfipatici
utilizate n diverse sectoare industriale ca
detergeni i emulsifiani. Sunt extrase din
scoara arborelui Quilleja saponaria molina ce
crete n America de Sud. Extractele brute
heterogene au efecte puin previzibile ceea ce a
condus la obinerea de preparate standardizate
precum Quil-A sau saponinele pure (QS-7, QS21, .a.).

Saponinele i complexele
imunostimulante
Au capacitatea de a interaciona cu colesterolul
producnd pori n membranele celulare,
proprietate ce le confer efecte toxice. Aceast
proprietate st la baza obinerii ISOCOMs
(Immuno Stimulating CoMplexes), structuri
veziculare de aproximativ 35 nm diametru,
avnd aspectul unei cuti sunt uor de preparat
prin amestecarea Quil-A cu colesterol i
fosfatidilcolin. Quil-A i colesterolul formeaz
structura complexului iar fosfatidilcolina mai
puin rigid, permite ncorporarea unui antigen
amfipatic prin domeniul su hidrofob.

Adjuvanii veziculari
Structura de baz a acestor adjuvani este
o dubl cuc lipidic variabil ca i
compoziie, ce delimiteaz o microsfer
apoas, a cror proprieti fizico-chimice
pot fi modificate prin adugarea de ageni
tensioactivi. Ei includ mai ales lipozomi i
nveliurile virale reconstituite sau
virosomi.

Copolimerii sintetici
Aceti polimeri amfipatici sunt cel mai adesea compuii
lanurilor hidrofile de polioxietilen (POE) i de lanuri
hidrofobe de polioxipropilen (POP). Ei sunt utilizai
ndeosebi ca ageni de suprafa n snul emulsiilor ulei
n ap, unde ei permit prezentarea imunogenului la
suprafaa picturilor uleioase, n acelai timp prin
stabilirea de puni de hidrogen cu POE i prin interaciuni
hidrofobe cu POP. Fcnd s varieze lungimea relativ
i aranjamental a blocurilor de POP i POE, este posibil
de a genera orice serie de compui i de ai reine pe cei
care au cele mai bune proprieti tensioactive.

Aminele lipofile
Sunt compui ce poart pe de-o parte una sau
mai multe grupri aminate ncrcate pozitiv i pe
de alta lanuri lungi hidrocarbonate cu 10 atomi
de carbon sau mai muli. Aceast structur le
permite formarea de micele n soluie apoas.
Cele mai cunoscute sunt DDA
(dimetildioctadecilamonium bromide sau cloride,
o amin cuaternar), care s-a dovedit foarte
activ i un alt compus asemntor avidina.

Citokinele
Proteine cu mas molecular mic,
acioneaz direct n calitatea lor de
mediatori ai rspunsului imun. Aceast
calitate poate permite orientarea acestui
rspuns de manier foarte precis.

Imidazoquinolonele
Imiquimodul, precum i ali membri ai
acestei familii sunt molecule mici capabile
de a aciona asupra numeroilor receptori
membranari ai macrofagelor i a altor
celule imunitare (n principal a receptorilor
de tip Toll), modulnd astfel sinteza de
citokine prin aceste celule.

Polizaharidele
Grup numeroas de substane din care
menionm: dextranii, mananii, glucanii,
.a., au fost utilizate n calitate de
adjuvani. Chitozanii sunt polimeri
obinui prin deacetilarea chitinei, par s
constituie n prezent vehicule eficace la
nivelul mucoaselor prin capacitatea lor de
a permeabiliza mucoasele la antigene
(Van der Lubben i col., 2001).