Reacia sumar.

Bilanul
energetic

CH3COSCoA +3NAD+FAD+GDP+Pi+2H2O
+

2CO2 +3NADH+H +FADH2+GTP+2H

+HSCoA

Reglarea ciclului Krebs

Citrat sintaza:
Inhibat - succinil CoA; AG; NADH; citrat
Activat: S- OA, Acetil CoA
IzocitratDH:
Activat: ADP, Mg, Mn
Inhibat: NADH2 i NADPH2, ATP
Alfa cetoglutaratDH
Inhibat: succinil CoA; NADH2; Se mare

Reaciile anaplerotice
Reaciile ce furnizeaz produii
intermediari ai ciclului Krebs
1. Formarea de OA
Piruvat +CO2+ATPOA+ADP+Pi
E- piruvatcarboxilaza (biotin dependent)
Asp+cetoglutarat OA+Glu
n miocard i muchi:
Fosfoenolpiruvat +CO2+GDP OA +GTP
E- fosfoenolpiruvatcarboxikinaza

Reaciile anaplerotice
2. Formarea alfa cetoglutaratului:
Glu+Piruvat Ala + cetoglutarat +
Ala
3. Formarea lui succinil CoA din
propionil CoA (1. din oxidarea AG cu
numr impar de atomi de C; 2. din
catabolismul Val, Ile, Met)
4. Formarea fumaratului (din
catabolismul Fen i Tyr)

Oxidarea
biologic
Lanul respirator
Fosforilarea
oxidativ

OBIECTIVELE

Oxidarea biologic. Dehidrogenarea substratelor - sursa energetic pentru

sinteza ATP - ului. Enziniele dehidrogenni.
Lanul respirator (schema). Complexele enzimatice. Acceptorii principali de
electroni i protoni, structura lor chimic.
Potenialul de oxido-reducere a componentelor lanului respirator.
Fosforilarea oxidativ. Locurile de fosforilare. Produsele finale ale oxidrii.
Reglarea intensitii funcionrii lanului respirator. Coeficientul
P/O, controlul respirator.
Decuplarea produselor de oxidare i fosforilare, principalii ageni
decuplani. Rolul biologic al produsului de decuplare, respiraia liber.
Mitocondriile, structura i permeabilitatea selectiv a membranelor pentru
diferii cumpui.. Sistemele-navet de transport al echivalenilor de
reducere.
Ipotezele principale, care explic procesele fosforilrii oxidative. Ipoteza lui
Mitchell.
Oxidarea microzomal, rolul citocromului P450 n reaciile de oxidoreducere.
Vitaminele i rolul lor n procesele de oxidare biologic.
Noiune de radicali liberi. Oxidarea peroxidic a acizilor grai nesaturai
din membrane. Sistemele de protecie a celulei de acumilarea radicalilor
liberi.

Oxidarea biologic. Dehidrogenarea

substratelor. Enzimele
dehidrogenrii.

Oxidarea biologic (OB) reprezint

totalitatea reaciilor de oxido-reducere ce
decurg n celule i esuturi.
Rolul: asigur organismul cu energie
accesibil n form de ATP.
OB are loc prin reacii de dehidrogenare
donarea atomilor de H2 sub form de
protoni i electroni: H22H +2 .
Are loc sub aciunea enzimelor
dehidrogenaze, ale cror Co sunt NAD+ i
FAD

SUBSTRATELE NAD
Izocitrat +NAD alfa-cetoglutarat +NADH+H
E- izocitratDH
2. Alfa-cetoglutarat +NAD succinil Coa +NADH+H
E-alfacetoglutaratDH
3.Malat +NAD OA+NADH+H
E-malatDH
4.Lactat +NAD Piruvat +NADH+H
E-lactatDH
5. Gliceraldehidfosfat +NAD +H3PO41,3
difosfoglicerat +NADH+H
E- GAP DH
6. Hidroxiacil CoA +NAD cetoacil Co-A +NADH+H
E-hidroxiacil -CoA DH
1.

SUBSTRATELE FAD
dependente
Succinat +FAD Fumarat +FADH2
E- succinat DH
Acil CoA + FAD enoil-CoA+FADH2
E- acil CoA DH
NADH+H+ i FADH2 rezultai n
reaciile de oxidare a acestor
substrate transfer p i n lanul
respirator.

Lanul respirator (LR). Rolul.

Structura.

1.

2.

LR - un ansamblu (complex) de enzime

i sisteme de oxido-reducere, ce
particip la transferul H+ i de la Co
reduse (NADH, FADH2) la O2 cu
formarea H2O.
Este ultima etap a degradrii aerobe.
Este localizat n membrana intern a MC
Funcia LR:
Prin transferul protonilor i electronilor
Co se reoxideaz, putnd asigura
dehidrogenri n continuare.
Cnd Co se reoxideaz, se elibereaz
energie ce servete la sinteza ATP.

Componentele LR
1. NADH+H sau FADH2
2. Flavoproteinele FP: preiau p i e- de la NADH+H
sau FADH2

FPN (NADH DH) - ca Co FMN - preia H2 de la

NADH+H

FPs (succinatDH)- ca Co FAD- preia H2 de la

FADH2
3. CoQ-ubichinona pn la CoQ sunt transportai
att p ct i e4. Sistemul de citocromi: b, c1, c, a i a3
1.
2.

Sunt compui heteroproteici,a cror grupare prostetic

este hemul
Transport doar e Fe+++ + e- Fe++
1 citocrom transport doar 1e- - 2 e- sunt transportai
de 2 citocromi

5. Fe-S proteinele sunt localizate :

a. ntre FP i CoQ
b. ntre cit b i citc1

Schema LR

Structura componentelor
LR

O
CH3O

CH3
CH3

CH3O

(CH2 CH
O

CH2)nH

coenzyme Q

2 e + 2 H+
OH
CH3O

CH3
CH3

CH3O

(CH2 CH
OH

CH2)nH

coenzyme QH2

CH3
CH3

H3C
N

OOC

CH2 CH2

HC

Fe

CH3
N
CH

CH2

CH2 protein

CH2 protein

CH3

CH3

CH2
COO

Heme c

Potenialul de O/R

Transferul p i de la NADH sau FADH2 pn

la O2 se face prin intermediul mai multor
sisteme redox.
Fiecare sistem redox (O/R) este alctuit
dintr-un donor i acceptor de echivaleni
reductori.
Fiecare sistem redox din LR posed un potenial de
oxido-reducere (potenial redox), care se msoar
n voli.
Potenialul redox standard E0 mrime egal cu
fora electromotoare exprimat n voli, ce apare
n semiconductor, n care donorul de e- i
acceptorul acioneaz n concentraie de 1,0 mol,
la t =25 *c, i pH 7,0 formnd un echilibru cu
elecrodul ce adiioneaz e- de la donor i-i
transfer la acceptor.

Cu ct potenialul redox este mai electronegativ

cu att este mai nalt capacitatea de a ceda , i
invers, cu ct potenialul este mai electropozitiv,
cu att este mai nalt capacitatea sistemului de
a adiiona electroni.
Sistemele redox sunt aranjate n ordinea creterii
potenialului de oxido-reducere.

transferul n trepte permite eliberarea energiei n

pachete a crei valoare este n jurul lui 7,3
kcal/mol (ct necesit sinteza unui mol de ATP din
ADP i H3PO4).
Torentul de e orientat n direcia micorrii
energiei libere a sistemului
Cu ct e mai mare diferena potenialului dintre 2
redox perechi cu att mai mare e diminuarea
energiei libere la transferul .
tiind potenialul redox al fiecrei perechi se
pot calcula modificarea energiei libere standard.
G = -nFE
n-numrul de
F-constanta lui Faraday (23062 cal/Vmol)
E0-diferena de potenial
G = -223062[+0,82-(-0,32)] = -52,6 kcal
7,3 x 3 = 21,9 cal
Randamentul utilizrii energiei libere 42%

FOSFORILAREA
OXIDATIV

reprezint sinteza ATP din ADP i Pi

(cuplat cu LR), pe seama energiei eliberate
la transferul echivalenilor reductori n LR
de la coenzimele reduse la O2.
Deoarece transferul de are loc treptat,
energia se elibereaz n pachete n
trepte . Pentru a se forma ATP diferena de
potenial trebuie s fie nu mai mic de
0,22V.
Funcionarea cuplat a LR i FO este
asigurat de 5 complexe

Composition of Respiratory
Chain Complexes
No. of
Proteins

Gruprile
prostetice

Complex

denumirea

Complexul I

NADH
Dehidrogenaza

46

FMN,
Fe-S

Complexul
II

Succinat-CoQ
Reductaza

FAD, cit b560,

Fe-S

Complexul
III

CoQ-cit c
Reductaza

11

cit b562, cit b566,

Fe-S, cit c1,

Complexul
IV

Citochrom
Oxidaza

13

cit a, cit a3, Cu

Complexul I- NADH CoQ

reductaz

Cderea de potenail 0,42V

G0 = -19,4 kcal/mol - 1mol ATP, restul se
degaj sub form de cldur
Inhibat: rotenon(otrav pentru peti), Na
amital (barbiturat); pericidin (antibiotic)

Complexul II- succinat - CoQreductaza

Variaia de potenial este de 0,07V;

G0 = -3,2 kcal/mol nu se sintetizeaz
ATP
Inhibat malonat (inhibiie competitiv)

Complexul III- CoQ- citocrom c

reductaza

Variaia de potenial este de 0,21V;

G0 = -7,75 kcal se sintetizeaz 1mol de ATP.
Inhibat antimicina A

Complexul IVcitocromoxidaz
Catalizeaz adiia a 4 la O2 molecular (a 2 la O).
O2 + 4 + 4H+ 2H2O
Cderea de potenial de 0,54V.
G = -24,8 kcal se sintetizeaz 1mol de ATP
Inhibat: CO, ozide, cianide.

Complexul V ATPsintetaz

1.

2.
a.
b.
c.

alctuit din:
F0 strbate membrana intern a MC, const din
4 tipuri de protein ce formeaz un sistem de pori
transmembranari prin care trec protonii- canal de
protoni
F1- partea catalitic - factor de cuplare 1:
se afl n intregime n matrixul mitocondrial (form
de sfer).
e alctuit din cinci tipuri de proteine (3),
(3), , , .
la acest nivel are loc reacia de condensare a ADP
+ Pi ATP+H2O
Inhibat: oligomicin, atractilatul (glicozid)

Mitochondrial ATP Synthase E. coli ATP Synthase

These images depicting models of ATP Synthase subunit
structure were provided by John Walker. Some equivalent
subunits from different organisms have different names.

Toate componentele LR sunt dispuse n

membrana intern a mitocondriilor.
CoQ i cit c funcioneaz individual, iar
celelalte componente se grupeaz n
complexe.

1.
2.
3.

Locusurile unde are loc sinteza ATP

se numesc puncte de fosforilare.
n LR (lanul respirator)
deosebim 3 puncte de fosforilare:
NADH+H----CoQ
Cit b----citc
cita--cita3

Lanul respirator
Mal

OAA Suc Fum

MDH
2H+
2H+
+
NADH
2H+
matrix NAD
FAD
FADH2
C II
SDH

CI

membrana
intern

NADHDH

2e-

2H

spaiul
intermembranar

2H+
O2 H2O

C III

C IV

Cyt bc1

Cyt c ox

+
3H
ATP
H
+

ATPase

QH2

2H

cyt cox cyt cred

2H

H+

2H
2H+
10H+ims/4H+m = 2.5H+ per ATP

3H+

ATP

Bilanul general n
procesele LR-FO.

NADH + H+ + O2 + 3ADP + 3Pi NAD+ + 3ATP +

4H2O
FADH + H+ + O2 + 2ADP + 2Pi FAD + 2ATP +
3H2O
Raportul ntre numrul de moli de ATP produi i O2
consumat este numit ct de fosforilare P/O.
De la NADH+H pn la O2 - P/O = 3/1 ramura
lung,
De la FADH2 pn la O2 - P/O = 2/1 ramura medie.
P/O reflect cuplarea transportului H+ i (respiraia)
i fosforilarea (sinteza ATP). Coeficient indic ce
cantitate de P anorganic (H3PO4) se transform n P
organic (ATP) la transportul unei perechi de H+ i n
LR.

Ipoteze principale cu privire la

procesele de FO. Ipoteza lui Mitchell

Prin ce mecanism energia eliberat n LR

este cuplat cu formarea ATP?
Teoria chimic, numit i a
intermediatorilor comuni (produi
intermediatori macroergici, precursori de
ATP).
Teoria conformaional (energia este
preluat de o protein ntr-o conformaie
activ, ce stimuleaz ATP).
Teoria chemiosmotic (Mitchell, 1961).

Ipoteza lui Mitchell

Ce postuleaz c starea intermediar

energetic care determin sinteza ATP din
ADP+Pi e reprezentat de gradientul de
protoni, ce se stabilete ntre faa interioar i
cea exterioar a membranei interne a MC n
timpul transferului de electroni.
la transferul unei perechi de (energia
eliberat) pompeaz 3 perechi de H2+ din
interiorul MC spre exterior(spaiu
intermembranar).
Astfel partea extern a membranei interne a
MC pozitiv, dar cea intern negativ
apare gradient de c%/ potenialul
transmembranar

Gradientul protonilor are 2 componente :

1. Electric (potenial de membran -
2 de pH ( pH)gradientul H+
Protonii revin din spaiu intermembranar n mitocondrii
prin partea F0 (deoarece restul membranei este
impermiabil).

Acest flux de protoni este fora morice care determin

la nivelul subunitii F1 sinteza de ATP din ADP+Pi
Unul din postulatele teoriei chemiosmotice prevede c apa
rezultat n reacia de formare a ATP din ADP i Pi se
ionizeaz spontan, ionii H+fiind dirijati spre interiorul
mitocondriei (ei urmnd s creeze gradientul protonic) n
timp ce ionii OH- snt dirijati spre spapul intermembranar

Datele experimentale ce
confirm:

S-a confirmat generarea gradientului de

protoni n cele 3 puncte ale LR. Anume
gradientul de protoni se utilizeaz la
sinteza ATP.
S-a demonstrat ca pH matrixului
mitocondrial crete, iar cel al mediului
extern al membranei MC scade (acid).
S-a argumentat c transferul H+ din MC
n timpul transportului de i revenirii
lor prin ATP-sintetaza sunt comparabile
cu viteza lor din cadrul FO n MC
intacte.

Transportul mitocondrial al
ATP i ADP

ATP/ADPtranslocazeiasigur transferul
ADP din citozol n
MC n schimbul ATP
din MC- citozol.
Fosfattranslocaza
transfer Pi n MC,
nsoit de deplasarea
ionilor de H2.

ADP + Pi ATP
ATP4

matrix
lower [H+]

__
++

3 H+

ATP4 ADP3 H2PO4 H+

energy
requiring
reactions

ADP + Pi

higher [H+]
cytosol

Controlul respirator

1.
2.
3.

Organismele vii sintetizeaz ATP n raport cu

necesititatea lui de aceea FO cuplat cu LR este
riguros controlat.
Deoarece LR i FO etapa final a degradrii G, L, P
controlul respirator se poate efectua att prin
compui direct implicai n LR i FO, ct i prin
intermediatorii degradrii celor 3 clase.
Rolul primordial i revine ADP.
F1 din ATP - sintetaz rmne blocat n lips de ADP.
Intensitatea transferului de protoni prin F0
deasemenea e determinat de nivelul ADP.
ADP reglator alosteric (+) pentru mai multe E ce
sunt implicate n degradarea G, L i P.

Controlul respirator

Controlul respiraiei se nfptuiete

prin intermediul acceptorului - ADP.
Lipsa de ADP - inhib respiraia i
stopeaz fosforilarea. La adugarea
de ADP crete brusc consumul de 02
---- se activeaza lantul respirator i
ADP se fosforileaz la ATP.

Decuplarea produselor de oxidare i

fosforilare, principalii ageni decuplani.

1.

2.

AD

La FO contribue:
Integritatea membranei interne a MC orice
leziune duce la perderea capacitii de FO (n
timp ce transferul de poate continua).
Impermeabilitatea membranei interne pentru
ionii H+ OH- K+ Cl-.
FO poate fi decuplat cu ajutorul unor
substane chimice, ce inhib sinteza ATP dar
neafectnd decuplani ageni decuplani. La
aciunea lor respiraia crete, iar FO este
inhibat.
protonofori
ionoforele

Protonoforii mresc permeabilitatea

membranei pentru protoni(H+), lichidnd
potenialul transmembranar.
1.
a.g. liberi
2.
2,4 dinitrofenol
3.
salicilaii (antiinflamatoare)
4.
dicumarol (anticoagulant)
5.
T3 i T4 (h.gl.tiroide)

Ionoforele ei leag i transfer ionii prin

membran:
- valinomicina ( K+) , nigericina ( K+),
gramicidina A Na+, K+; H+.

Decuplanii

H+

2,4Dinitrophenol
OH
NO2

O
NO2

H+

NO2

NO2

+ H+

H+

Inhibitorii ai fosforilrii acioneaz asupra

ATP-sintetazei. Oligomicina blocheaz
ptrunderea H+ prin FO (nchide canalul)
cu ncetul slbete respiraia
ntrerupere.

Inhibitorii
Fosorilrii de
ADP

Oligomycin
Atractyloside

Fosforilarea oxidativ este influenat de o

serie de ageni clasai n 3 grupe :
- agenti de decuplare- permit transportul
electronilordar blocheaz fosforilarea. Ex.2,4
dinitrofenolul faciliteaz trecerea prin
membran a H+
- inhibitorii fosforilrii oxidative Ex Oligomicina
-mpedic i transportul i fosforilarea
oxidativ.
- Ionoforii - formeaz complexe liposolubile cu
cationi specifici trecndui prin membran.

Respiraia liber

are loc decuplarea FO de LR i toat

energia este convertit n cldur, care nu
se utilizeaz la executarea funciilor
celulare.
Astfel MC devin o sob, ce produc cldur.
E necesar n situaii, cnd necesitatea
cldurii este mai mare dect ATP.
n esutul adipos brun MC sunt
specializate la producerea cldurii (nounscui, animale n hibernare)
termogenina.

Oxidarea microsomal

Un alt tip de reacii de OB este cel oxigenazic.

Acestea sunt catalizate de monooxigenaze.
Lanurile monooxigenazice de oxidare sunt
lanuri scurte de transport al H+ i a cror
surs sunt NADPH+H
SH + O2 +NADPH + H+ S-OH + H2O +
NADP+ reducerea O2 i incorporarea lui n
anumii compui chimici (include un atom de O,
cellalt este redus la H2O).
un asemenea lan este microsomial - localizat
n RE al celulelor hepatice i suprarenale. Rol
esenial l are cit P450 (activatorul O2). El
cuprinde o FP (FAD) la nivelul creia H2 este
disproporionat n H+ i .

Rolul OM

Rolul: plastic i dezintoxicare.

n ficat hidroxilarea medicamentelor,
neutralizarea toxinelor, hormonilor
(sunt eliminai).
n medulosuprarenale sinteza
noradrenalinei i adrenalinei.
n corticosuprarenale sinteza
colesterolului, hormonilor gluco- i
mineralocorticoizi.

Noiune de radicali liberi. Oxidarea

peroxidic a AG nesaturai. Sistemul de
protecie.

La reducerea incomplet a O2 se
formeaz forme reactogene i
agresive ale substanei cum ar fi:
superoxidanionul, peroxid; hidroxil
sau peroxidul de hidrogen.

Aceti produi iniiaz OPL, ce se petrece n lan cu

generarea de peroxizi a AG nesaturai.
n condiii fiziologice ORL i OPL sunt implicate n
rennoirea membranelor biologice, degradarea
substanelor fagocitare; biosinteza icosanoizilor.
Amplificarea lor poate condiiona moartea celulei
(lezarea membranelor).
SAO sistem de protecie AO (enzimatic,
neenzimatic)
SOD transformarea O2- n H2O2
2 O2- +2H+ O2- + H2O2
Catalaza 2H2O2 2H2O + O2
Glutation reductaza
glutationperoxidaza

Oh my!
Now what?

Alcohol Metabolism
Peroxisome
H2O2
H2O

CAT

Aminotriazole

EtOH
O2
NADPH
NADP+

ER

MEOS
P450

Cytosol

NAD+

ADH

NADH

Pyrazole

Acetaldehyde
NAD+

NADH

Mitochondrion

AlDH
Acetate

Disulfiram
(antabuse)

Extra-hepatic tissue

Chlorpropamide
(diabetes)

Eric Niederhoffer