UNIVERSITATEA DE TIINE AGRONOMICE I MEDICIN

VETERINAR BUCURETI
TEMA PROIECTULUI: BIOTEHNICI DE REPRODUCIE

CARACTERE BIOLOGICE ALE

BUBALINELOR

Caracterele morfologice ale bubalinelor

Sub aspectul nfirii bubalinele prezint
urmtoarele caractere:
dezvoltare corporal mare;
format corporal scurt;
profil corporal specific ( cap mare, coarne
semilunare orientate napoi i n lturi, fruntea
larg i bombat, fa mai lung ca la taurine,
maxilare puternice, gt subire i fr salb,
trunchi scurt dar adnc, membre solide ) ;
pielea foarte groas, cu structura specific
( lipsit de glande sudoripare )i glandele
sebacee dezvoltate;
pr scurt, rar i gros.
Caractere anatomo-fiziologice ale bubalinelor
tardivitate i longevitate ridicat ( dezvoltarea
corporal de adult o atinge la 6-7 ani i
longevitatea pn la 30 de ani );
dimorfism sexual slab dezvoltat;
caracterul blnd dar uor iritabil i ncpnat
( se supune greu omului i se freest de oameni
necunoscui );
rusticitatea, rezisten la boli i sntatea sunt
remarcabile ( se mbolnvete foarte rar de
tuberculoz i febra aftoas);
mecanismul de termoreglare este mai slab
( reacioneaz necorespunztor la cldur
extrem i frig );

CARACTERISTICI I PARTICULARITI ALE FIZIOLOGIEI REPRODUCIEI

MASCULII
La turmacii din tipul de balt, lungimea scrotului este
n jur de 10 cm cnd este complet extins i lipsit de
constricie n punctul de ataare la planeul
abdominal.
La turmacii de tipul riveran scrotul este mai
voluminos i mai atrnnd, la locul de prindere
continundu-se cu o uoar trangulare.
Cu mas inferioar de peste 5 ori fa de tauri,
testiculele au la turmaci cca 78g ( 75g cel stng i 79g
cel drept ), cu diametrul tubului seminifer ntre 0,17 i
0,2 mm. n stare de relaxare, testiculele atrn n sacul
scrotal cu axa longitudinal orientate perpendicular pe
lungimea corpului i care, prin contractarea
muschiului Cremaster, i modific orientarea craniocaudal. Menionm c la bivolii indieni testiculele
coboar n scrot nainte de natere iar la celelalte
populaii testiculele coboar pn la vrst de 6 luni.
Penisul este cilindric i foarte bogat n esut erectile cu
vrful ascuit i glandul slab dezvoltat.
Maturitatea de reproducie se realizeaz destul de
trziu, vrst de utilizare la reproducie prezentnd
variaii foarte largi de la o ar la alt, fiind influenat
ndeosebi prin tehnologia de cretere.
Vrst de utilizare la reproducie n medie este de 3,7
n Egipt; 3,6 ani n Pakistan i India; n jur de 2 ani n
Italia iar n Romnia variaz ntre 2,6 ani i 3 ani.

CARACTERISTICI I PARTICULARITI ALE FIZIOLOGIEI REPRODUCIEI

FEMELELE
Dei asemntor vacilor organul genital
la bivolie prezint unele diferene
importante n ceea ce privete centura
pelvin i structura vascular a acesteia,
dimensiunea i masa diferitelor
segmente ale aparatului reproductiv.
Maturitatea sexual sau vrsta pubertii
reprezint momentul n care femela este
capabil s produc gamei fecundabili.
Din punct de vedere biologic, aceast
poate fi definit n funcie de diferite
criterii, astfel:
sub raportul comportamentului sexual,
care este marcat de apariia primului
estru la femele i de dorina de
mperechere la masculi;
n funcie de apariia i producerea
primului gamet;
n raport cu starea de steroidogeneza,
marcat de apariia primei secreii de
estrogeni.
Maturitatea de reproducie, echivalent
cu vrst de utilizare la reproducie este
o nsuire cu implicaii nemijlocite asupra
intervalului dintre generaii i a
economicitii n exploatare. Cu durata
diferit, vrst de utilizare la reproducie
a tineretului femel din Egipt este de 22,5 ani, n Italia 28-30 de luni, n Bulgaria

MANAGEMENTUL ACTIVITII DE REPRODUCIE

Programarea activitii de reproducie

Una din msurile pentru sporirea efectivelor o reprezint utilizarea managamentului
strategic corespunztor particularitilor de reproducie a bubalinelor n reproducia
bivolielor i al tineretului femel. Un management eficient trebuie s aib la baz
sistemul de programare stabilit n funcie de o serie de factori i anume: baza tehnico
material, de structura pe stri fiziologice a efectivului matc, nivelul de producie
urmrit i cerinele economiei de pia.
Organizarea i planificarea reproduciei n fermele sau cresctoriile de exploatare a
bivolielor urmrete obinerea unor producii mari i ct mai uniforme pe ntreag
perioada a anului fiind posibil atunci cnd 80% din efectivul matc este n perioada
de producie iar peste 50% sunt femele gestante.
Coordonarea activitii de reproducie se realizeaz prin elaborarea anual a planului
de monte i ftri n care se are n vedere starea fiziologic a fiecrui individ. Planul
de mont-nsmnri artificiale se stabilete pe baza catagrafiei, pe categorii de
vrst, iar n cadrul acestora pe categorii ginecologice.
Catagrafia reprezint lucrarea tehnic anual cu ajutorul creia se fundamenteaz i
elaboreaz planul de monta i produi pentru anul urmtor. Derularea normal a
activitii de reproducie presupune stabilirea sistemului de programare a montelor i
produilor, stabilirea momentului optim de nsmnare, urmrirea i pregtirea
materialului de reproducie.
Se cunosc dou sisteme de programare a bivolielor la mont i respectiv la ftare:
sistemul de mont i ftri sezoniere i sistemul de monte i ftri ealonate.

IDENTIFICAREA FEMELELOR N CLDURI I STABILIREA MOMENTULUI

OPTIM AL NSMNRII
Identificarea femelelor n clduri
trebuie fcut cu mare grij pentru a
evita pierderile de ciclu care se pot
ridica la peste 20%. Apariia i modul
de manifestare a cldurilor sunt
influenate de condiiile de cretere i
exploatare, dar i de starea de
sntate a femelelor. Pentru depistarea
femelelor n clduri este necesar s se
cunoasc timpul, locul, metodele i
procedeele de depistare. Timpul de
manifestare al cldurilor este n medie
de 16 ore i se recomand s se fac
dou observaii zilnice a cte 30 de
minute, dimineaa i seara.
Pentru depistarea femelelor n clduri
se folosesc metode biochimice,
etologice, bilologico-chimice i de
laborator.
Metode biochimice
se bazeaz pe modificri anatomo
fiziologice ce apar n timpul cldurilor.
Mucoasa vaginal se nroete i se
edematiaza, vulv se nroete i din
ea se scurge un lichid sticlos, ugerul

PREGTIREA TAURULUI PENTRU RECOLTARE

Operaiunea const n plimbarea taurului apoi urmat de
toaleta regiunii prepuiale.
Plimbarea se face timp de 10-15 minute cu baston i inel nazal
dar recomandat este ca plimbarea s se fac cu diferite modele
de carusele.
nainte de recoltare ntr-o alt ncpere regiunea furoului se
spal bine cu ap cldu i spun iar apoi se usuc. Cavitatea
furoului este recomandat s fie splat cu o soluie de
antibiotice cum ar fi penicilin i streptomicin. Este necesar
respectarea practic a unui regim naional de recoltare, care s
asigure meninerea potenialului de reproducie i
exteriorizarea lui prin valori corespunztoare ale parametrilor
spermogramei.
Dup elaborarea etapelor de mai sus se trece la recoltarea
propriu zis care presupune:
-introducerea i fixarea n stand a taurului manechin;
-aducerea taurului donator n sala de recoltare;
-taurul donator la vederea manechinului v-a executa saltul,
moment n care operatorul v-a dirija penisul taurului n vaginul
artificial. Dup cteva micri taurul v-a ejacula printr-o
micare caracteristic crupei.
Alte metode de recoltare: recoltarea materialului seminal prin
masajul veziculelor seminale i a ampulelor canalelor
deferente, recoltarea prin electroejaculare.
Dup recoltare, materialul seminal este supus unor serii de
evaluri pentru determinarea principalilor indicatori
spermatici.

BIOTEHNICA RECOLTRII MATERIALULUI SEMINAL LA BIVOL

Recoltarea materialului seminal la bivol se
face prin mai multe metode, printre care:
Recoltarea materialului seminal cu ajutorul
vaginului artificial
- este o metod folosit cu succes n prezent,
fiind folosit n centrele de nsmnri
artificiale ct i pe teren.
Principiul metodei const n realizarea
artificial a condiiilor existente n vaginul
natural al femelei n clduri ( temperatura,
presiune, lubrifiere ), condiii necesare
pentru declanarea reflexului de ejaculare.
Tehnic de lucru
Pentru recoltarea materialului seminal cu
vaginul artificial este necesar efectuarea
urmtoarelor operaiuni: pregtirea vaginului
artificial, pregtirea taurului, recoltarea
propriu zis, dezinfectarea materialelor
folosite i a slii de recoltare.
Pregtirea vaginului artificial necesit o
atenie deosebit deoarece numai un vagin
corect pregtit poate s realizeze condiiile
existente n vaginul natural.

BIOTEHNICA INOCULRII MATERIALULUI SEMINAL LA BIVOLI

S-a relatat despre obinerea unui produs de la un armsar valoros (secolul XIV) dup preluarea spermei cu un tampon de vat dup
monta unei iepe i intoducerea lui imediat n vaginul unei alte iepe n clduri.
nsmnrile artificiale reprezint o biotehnic a reproducerii animalelor, component a manipulrilor genetice care asigura procesul
genetic al efectivelor. Datorit creterii semnificative a eficienei utilizrii materialului seminal prin aplicarea nsmnrilor artificiale
este posibil utilizarea la reproducere a celor mai valoroi genitori masculi testai dup descenden i cu nsuiri morfo-productive care
mresc presiunea de ameliorare a efectivelor. Astfel, un taur testat, poate avea pe durata vieii ntre 100.000 i 200.000 produi , vierul,
peste 1.000 ntr-un an, iar un armsar, peste 100 mnji pe sezon.
Inocularea materialului seminal la bivoli se poate realiza prin dou metode: metod cu speculum vaginal i metod bimanual sau
recto-vaginal
METODA RECTO-VAGINAL DE NLOCUIRE A SPERMEI
Ecipamentul necesar pentru aceast metod const din pipete de nsmnare i mnuile de cauciuc, sau din material plastic. Metod
recto-vaginal este foarte rspndit. Tehnica de lucru const n introducerea minii protejate de o mnu n rectul animalului i
fixarea cervixului prin traversul rectal. Pipeta de insamntare se introduce apoi, cu cealalalta mna n vagin, i de aici este ghidat cu
ajutorul minii introduse n rect, n canalul cervical. Vrful pipetei se introduce dirijat n sus sub un unghi de 20-30 grade , n canalul
cervixului. Pentru nsuirea practic a acestei metode este necesar o practic ct mai bun a tehnicienilor insamantatori. Aceast
metod s-a impus c o metod curent deoarece nu necesit o aparatur complicat. Pipeta de nsmnare se schimb dup fiecare
vac, iar mnuile se pot spala i dezinfecta uor. Prin aceast metod se stimuleaz activitatea uterului i altor segmente ale organelor
genitale, fapt care probabil contribuie la obinerea unei fecunditi mai ridicate, dect prin metoda speculumului.
INOCULAREA SPERMEI CU AUTORUL SPECUMULUI
Echipamentul necesar pentru aplicarea acestei metode este format din : speculum vaginal, model PALANSKY, modificat de
FILCOIANU, sau speculum tubular de metal, sticl sau material plastic,prevzut cu suzeta de cauciuc (sau material plastic) i o lamp
frontal . Pentru imobilizarea bivolielor n clduri se utilizeaz un stand de nsmnri.
Tehnic de lucru const n efectuarea unei toalete sumare a vulvei i a regiunii perivulvare i introducerea speculumului vaginal dup
metod cunoscut. Prin introducerea i deschiderea speculumului i apoi iluminarea orificiului vaginal al gtului cu ajutorul sursei
luminoase se fixeaz locul de depunere a spermei. Pipeta ce conine sperm pentru nsmnare se introduce pe canalul cervical, pe o
distan de 1-3 cm. nsminarea cervical cu ajutorul speculumului este destul de simpl i uoar. Inconvenientul pe care-l prezint
aceast metod const n faptul c dup fiecare vac, speculumul trebuie curat i sterilizat. n cazul n care nu se face sterilizarea
specumului se pot rspndi unele boli genitale.

BIOTEHNICA TRANSFERULUI DE EMBRIONI LA BUBALINE

Embriotransferul reprezint o biotehnic de
reproducie care cuprinde o serie de tehnici ce
urmresc obinerea de produse din embrioni recoltai
de la femele donatoare de ovule i sincronizate n
clduri care se transfer n stare proaspt sau
congelat la femele receptoare cu ciclu estral
sincronizat.
Importana zooeconomic
Lucrrile lucrrile de selecie i ameliorare a
efectivelor de animale sunt limitate de numrul redus
de produi care se obin de la o femel n cursul vieii
sexuale i de intervalul dintre generaii. Asupra
animalelor valoroase ambii factori sunt frenatori,
treptele ameliorrii numrndu-se n generaii
succesive.Transferul de embrioni d posibilitatea
folosirii cu eficien crescut a rezervelor de ovocite
de la animale de nalta valoare zootehnic numite
donatoare, prin provocarea maturrii i eliberrii mai
multor gamei femeli ( poliovulatie ) cu obinerea
unui numr mai mare de produi de la aceeai femel
prin transferul embrionilor n uterul femelelor
receptoare.
Embriotransferul necesit dou perioade de gestaie.
Transferul de embrioni la bivoli se afl n stadiul de
cercetare i dezvoltare, a fost printre primele cercetri
care au fost efectuate de specialiti americani,
continuate de cercettori din Bulgaria i cei din
Romnia

TEHNICA TRANSFERULUI DE EMBRIONI

Aceast necesit fluxul urmtor:
alegerea donatorilor i poliovulaia lor;
sincronizarea cldurilor;
fecundarea ovulelor in vitro prin nsmnarea artificial a donatoarelor;
prelevarea embrionilor i controlul calitii lor;
alegerea donatoarelor;
Prin donatoare se nelege femela din specia bubaline care produce embrioni dup ce a fost n prealabil supus tratamentului
hormonal ( poliovulaie sau superovulaie ) expulznd n acelai timp mai multe ovule susceptibile de a fi fecundate.
CRITERII DE ALEGERE A DONATOARELOR
Acestea sunt urmtoarele:
valoarea genetic -reprezint criteriul principal de selectare a donatorilor ntruct transferul de embrioni constituie un
mijloc important de intensivizare a produciei i mai ales de maximizare a progresului genetic la bubaline;
starea de ntreinere i de sntate a bivolielor care trebuie s fie bun;
funcia de reproducie normal la bivolie att n privina aparatului genital ct i a sistemului neuro-endocrin;
absena genelor nedorite cu deosebire letale;
Pregtirea donatoarelor const n urmtoarele :
urmrirea desfurrii parturiiei i asistarea acesteia;
executare examenului preliminar i observarea cldurilor timp de 9-14 zile;
anunarea telefonic a acestora i recoltarea unor probe de lapte n vederea examinrii lor;
aplicarea tratamentului hormonal pentru pentru inducerea poliovulaiei ( utilizarea PSMG n doz de 500 UI/100kg sau
FSH-40mg n a 10-a zi a ciclului estral sau folosirea progesteronului n doz de 100mg/zi, timp de 10 zile urmat de
tratamentul poliovular cu PMSG sau FSH ).
Alegerea receptoarelor
Prin receptoare se nelege tineretul femel sau bivolie care nu au fost supuse transferului hormonal pentru inducerea
poliovulatiei.
Criterii de alegere a receptoarelor :
femele cu sntate bun, n special uterul neafectat i cu dezvoltare corporal optim;
femele capabile de a asigura eficient embriotransferului, echilibrate fiziologici cu aptitudini maternale.

TEHNICA DE LUCRU
Embrionii sunt colectai atunci cnd se gasec n
cornul uterin,dup ieirea lor din oviduct (ntre
zilele 4-5). Cel mai frecvent, colectarea se
realizeaz ntre zilele 6-8 dup fecundatie, de
regul n ziua a 7-a. Recoltarea embrionilor se face
chirurgical i nechirurgical. Mult timp, metoda
chirurgical a fost singura utilizat. Tehnica
operatorie presupunea parcurgerea a dou etape:
laparotomia, cu exteriorizarea aparatului genital n
plag i recoltarea propriu-zis a embrionilor prin
splarea cu un lichid cu o compoziie special, a
oviductelor (dup un interval de timp mai mic de 3
zile dup nsmnare) sau a coarnelor uterine
(dup un interval de timp mai mare de 4 zile de la
nsmnare). n prezent, metoda chirurgical de
recuperare a embrionilor la bivoli este
abandonat, datorit inconvenientelor pe care le
prezint. Astzi, este generalizat metoda
nechirurgical de prelevare a embrionilor, a crei
principiu const n splarea coarnelor uterine cu un
mediu special preparat, splare care se realizeaz n
condiii de asepsie n a 7-a zi de la nsmnare.
Tehnica nechirurgical de colectare a embrionilor
s-a perfecionat continuu, firme specializate produc
pe scar industrial mediul de recoltare, congelare,
decongelare i ntreaga aparatur necesar
recoltrii i transferului embrionilor.

Tehnicile nechirurgicale de recoltare a embrionilor presupun mai multe operaii: contenia femelei, anestezia, vidarea rectului, toaleta vulvei, identificarea
prezenei corpilor galbeni pe ovar, introducerea lichidului de splare n lumenul coarnelor uterine,splarea acestora, recuperarea lichidului mpreun cu
embrionii,identificarea i recuperarea embrionilor din lichidul recuperat i supus decantrii i aprecierea morfologic a acestora. n condiii de ferm,
recoltarea embrionilor se face la locul undese gsete femela donatoare, dup ce n prealabil, vecinele acesteia au fost ndeprtate. Femela se
contentioneaza adecvat, astfel nct s-i fie limitate micrile, trecerea sondei prin canalul cervical care este nchis, provocnd dureri animalului i
implicit, reacie de aprare. Pentru a suprima durerea, se practic anestezia epidural cu 4-6 ml procain 2% sau cu 10 ml ludocain 1%, care blocheaz
nervii coccidieni i ultimele perechi de nervi sacrali . Acul se introduce ntre prima i a dou vertebr coccigian sau ntre ultima vertebr sacral i prima
vertebr coccigian, anestezia instalndu-se dup circa 10-15 minute i dureaz n jur de 90 de minute, zonele insensibilizate fiind: coada,anusul, rectul,
vulv, vaginul i uterul.Se introduce, cu precauiile de rigoare, mna n rect, acesta se videaz de coninut, apoi se apreciaz rspunsul femelei la
tratamentul poliovulator, palpandu-se cu atenie ambele ovare i numaradu-se corpii galbeni.
n cazul n care rspunsul la tratamentul de superovulare este pozitiv, se procedeaz cu precauie la introducerea cateterului de tip Folley cu dou sau trei
ci, prin conductul cervical pn n cornul uterin. Pentru rigidizarea cateterului, se introduce pe lumenul acestuia un mandren (tij metalic), care se
menine pn se ajunge n lumenul cornului uterin, apoi se retrage. Cateterul este introdus circa 5-8 cm de la bifurcaia coarnelor uterine, pe unul dintre
acestea, apoi se introduce de la exterior, cu sering, 8-15 ml de aer n scopul fixrii cateterului i pentru a mpiedica refularea din cervix a lichidului de
splare.Vasul din sticl, ce conine lichidul de splare se suspend la 1,5 m de la sol i, prin cdere, acesta ajunge prin calea de admisie a cateterului n
coarnele uterine. Irigarea acestora se face continuu, calea de evacuare a lichidului este conectat, printr-un tub de plastic,la vasul de colectare a mediului
recuperat (de splare). Recuperarea lichidului de splare se face prin calea de admisie (n cazul cateterului cu dou ci la care s-a adaptat o pies n form
literei S.
Recoltarea embrionilor prin metoda nechirurgical prevzut cu canal de admisie i evacuare al lichidului, ramur de evacuarea lichidului fiind conectat
la un filtru de colectare a crui orificii au un diametru de 75cm, care are rolul de reinere a embrionilor, lichidul ce traverseaz filtrul fiind colectat ntr-un
recipient situat sub filtru.
Mediul folosit la splarea unui corn uterin: se folosete la splarea, n acelai mod, a celui de-al doilea corn uterin. Cantitatea de mediu care se folosete
pentru splarea unui corn uterin este de 300-500 ml, efectundu-se irigri repetate i un masaj transrectal permanent al cornului uterin perfuzat.Exist
diverse sonde de recuperare a embrionilor, imaginate de diveri cercettori, care se bazeaz pe acelai principiu constructiv.
ntre momentul recuperrii embrionilor i cel al inoculri lor n uterul receptoarelor, zigoii trebuie s fie meninui n via n condiii speciale i s fie
manipulai n cele mai bune condiii tehnice i igienice.Compoziia mediilor de recoltare i cultivare a embrionilor s-a modificat frecvent n decursul
timpului, pe msur ce cunotinele n domeniu au avansat i pe baza multiplelor experiene ntreprinse.n ultimii ani s-a generalizat folosirea unei soluii
tampon fosfat -PBS (Fosfat bufferet salin) pentru splarea coarnelor uterine i pentru pstrarea embrionilor recuperai. Acest lichid are un pH de 7,2, o
presiune osmotic de 290 miliosmoli ce conine multe iruri minerale,glucoz i protein (albumin bovin seric, 2-4 g/l, sau ser de viel fetal de
complementat 10% ).
Toate mediile, soluiile, serurile, enzimele i substanele crioprotectoare care vin n contact cu embrionii trebuie s fie sterile. Tot materialul care nu se
arunc (sonde colectoare, filtre, recipieni din sticl,sonde de transfer, etc.) care necesit a fi sterilizate, se spal cu o soluie de detergent netoxic, se
cltete n ap distilat, se usuc i se nvelete n hrtie n vederea sterilizrii. Alegerea metodei de sterilizare depinde de natur materialului (cldur
uscat, cldur umed, substane antiseptice,vapori de formol etc.). Rezultatele recuperrii embrionilor depind n cea mai mare msur de abilitatea i
antrenamentul operatorului. Proporia embrionilor recuperai, oscileaz n medie, ntre 60-70% comparativ cu numrul de corpi galbeni identificai pe
ambele ovare. Dup colectarea embrionilor se injecteaz donatoarei o doz de PGF 2, care are rolul de a liza corpii galbeni, evitndu-se astfel gestaia
multipl.

SFRIT