Permeabilitate i transport

3.1. Structura membranei celulare Membrana celular (sau plasmatic) este n esenta formata din lipide, proteine i carbohidrati, acestia din urma atasati fie de lipide, fie de proteine. Raportul molar dintre lipide i proteine variaza intre 1:4 i 4:1. 3.1.1. Lipidele membranare Principalele lipide ale membranei eucariote sunt fosfolipidele, glicolipidele i colesterolul. Colesterolul lipseste din membrana procariot cu exceptia unui grup restrans de bacterii, paraziti intracelulari, numite micoplasme (care provoaca, de exemplu, unele forme de pneumonii). Lipidele membranare sunt molecule amfipatice, adica au capat polar, hidrofil i unul nepolar, hidrofob .

Structura lipidelor membranare

Proprietatile lipidelor membranare sunt : a) In solutii apoase, membranele lipidice se grupeaza n mod spontan n micelii sau n bistrat. Spre interiorul bistratului se dispun capetele hidrofobe iar spre exterior, cele hidrofile.

b) Lipidele din membrana nu sunt imobile ci executa mai multe tipuri de miscari: de difuzie laterala sau translatie (foarte rapide, ele schimbandu-si locul cu vecinii lor n mai puin de 1s); de rotatie n jurul propriei axe; de flexie a capetelor hidrofobe, respectiv a lanturilor de acizi grasi (cu o mobilitate ridicata pentru acizii grasi saturati n timp ce lanturile de acizi grasi nesaturati, avand duble legaturi cu orientare cis, sunt mai rigide) i miscari de flip-flop sau de difuzie transversala (trecerea unei molecule de pe o fata a bistratului pe alta; este o miscare foarte lenta, putand dura ore). Prezenta colesterolului n diverse concentraii poate reduce mobilitatea translationala i de flexie.

Miscarile lipidelor n membrane plasmatic

c) Lipidele sunt distribuite asimetric pe cele dou fete ale membranei. Membrana prezint o fata extern (de regula bogata n fosfolipide cu colina: fosfatidilcolina) i una interna, citoplasmatic (mai bogata n lipide cu amine: fosfatidiletanolamina). Tot n aceasta idee, glicolipidele sunt dispuse pe fata extern a membranei, cu gruprile glucidice proiectate n afara celulei, aceste glicolipide avand un rol importand n comunicarea celular. 3.1.2. Proteinele membranare Gruparea proteinelor membranare se poate face n funcie de interaciunea lor cu lipidele : a) Proteine integrale. Sunt greu de disociat de lipidele inconjuratoare deoarece interacioneaz puternic cu capetele lor hidrofobe, unele dintre proteine formand
2

adevarate retele n profunzimea membranei. Proteinele transmembranare sunt proteine integrale care sunt expuse atat la exteriorul membranei cat i pe fata citoplasmica, cu alte cuvinte strabat membrana pe toata grosimea ei. Aceste proteine pot prezenta capetele C (carboxi, -COOH) respectiv N (amino, -NH2) orientate spre aceeasi fata a membranei sau spre fete opuse. b) Proteinele periferice (proteine solubile) interacioneaz prin legaturi de hidrogen sau forte electrostatice cu capetele polare ale lipidelor sau cu partea care proemineaza n afara membranei a proteinelor integrale.

Dispunerea proteinelor n membrana lipidic

3.1.3. Miscarea proteinelor n membrane La fel ca lipidele, proteinele nu sunt imobilizate n bistratul lipidic ci executa o serie de miscari. Cea mai improbabila miscare este cea de flip-flop care este puternic restrictionata. Din aceast cauza, membrana lipidic manifesta de asemenea o tendinta de polarizare (distributie inegala) a proteinelor pe cele dou fete. In 1972, Singer i Nicholson au propus modelul "mozaicului fluid" al membranei n care proteinele executa miscari laterale, aceste miscari fiind influentate de fluiditatea membranei .Modelul "mozaicului fluid" este n mare parte valabil cu exceptia faptului ca proteinele nu se misca haotic. Cauzele pentru care miscarile proteinelor n fluidul membranar sunt limitate sunt: cantonarea n anumite domenii membranare, jonctiunile celulare, agregarea i cresterea masei, stabilizarea prin legarea de elemente externe, pe fata citoplasmica unele proteine sunt legate de componente ale citoscheletului. Miscarea glicoproteinelor este la rndul lor limitata de necesitatea ca resturile glucidice s proemine pe fata extracelular a membranei.

Reprezentarea modelului "mozaicului fluid" al membranei celulare.

3.1.4. Fluiditatea membranei Este o proprietate fundamentala a membranelor plasmatice i a celor care delimiteaza organitele celulare, permitand deplasarea proteinelor n bistratul lipidic, miscari care sunt importante pentru indeplinirea multor functii celulare. Fluiditatea membranelor este influenata de urmatorii factori: a) Natura mpachetarii i a interaciunilor dintre lanturile de acizi grasi (AG) aparinand fosfolipidelor membranare. Lanturile lungi ale acizilor grai interacioneaz mai puternic intre ele rezultnd o mpachetare strans, deci o fluiditate mai redus decat n cazul portiunilor membranare cu lanturi scurte de AG. Prin creterea temperaturii se poate de o asemenea crete fluiditatea membranei (legaturile duble trans se rotesc cu 120 ). Exist, de asemenea, o relaie direct proportional ntre temperatura de topire ( Tm) i lungimea lanurilor acil. Lanturile AG nesaturai cu legturi duble cis nu se impacheteaz strans, rezultnd o cretere a fluiditii i scdere a Tm. Cu ct este mai mare numrul de legturi duble, cu att Tm este mai scazut iar fluiditatea mai ridicat. b) La animale, colesterolul se insinueaza intre lanturile de AG reducandu-le mobilitatea i crescand rigiditatea membranei. Aceasta este o adaptare a membranei animale n lipsa peretelui celular (cu rol protector la plante i bacterii). Cercetari recente arata ca efectul colesterolului asupra mobilitatii moleculelor membranare este diferit, n funcie de distanta fata de suprafaa membranei i de temperatura. La temperaturi ridicate (peste temperatura de tranzitie a fosfolipidelor), colesterolul miscoreaza fluiditatea membranei datorita scheletului rigid al inelelor sterolice, n timp ce la temperaturi joase, colesterolul mentine distanta dintre
4

capetele hidofope ale lipidelor, diminuand interaciunile dintre acestea i contribuind la ridicarea gradului de fluiditate a membranei. 3.2. Rolul membranei celulare procese de transport Membrana plasmatic are trei proprietati fundamentale: 1. Este un mozaic fluid permitand miscarea limitata a proteinelor; 2. Este polarizata avand o distributie diferita de lipide i proteine de o parte i alta a ei; 3. Are permeabilitate selectiv, permitand trecerea unor substane i blocand tranzitul altora. Membrana plasmatic indeplineste mai multe roluri, vitale pentru celula : Compartimentalizarea celulelor eucariote (aspect ce va fi discutat n capitolele urmtoare) ; Suport pentru desfurarea unor reacii biochimice Bariera de protectie cu permeabilitate selectiv Transportul nutrientilor (ioni, molecule organice); Mediaza raspunsul la semnalele din mediul extern sau intern Participa la comunicarea intercelular 3.2.1. Permeabilitatea selectiv a membranei pentru neelectroliti i ioni Membrana lipidic bistratificata nu este o structura inerta, impenetrabila ci este un sistem dinamic, care permite trecerea activa sau pasiva a unor categorii de compui. n general prin permeabilitate se pot intelege fenomenele de difuzie simpla, nefacilitata de alte structuri decat de cea a membranei propriu-zise. Difuzia simpla Proprietatea prin care membranele lipidice bistratificate permite trecerea unor substane i blocheaza tranzitul altor substane se numeste permeabilitate selectiv. Aceasta proprietate a fost descoperita experimental, mai intai n modele artificiale, n bistraturi lipidice, apoi n modele naturale, n membranele plasmatice. Primul care a enuntat o regula privind permeabilitatea bistratelor lipidice a fost Overton (1902): coeficientii de permeabilitate se coreleaza cu coeficientii de partitie ulei/apa ai diferitelor substane. Cu alte cuvinte, cu cat o substanta este mai hidrofob cu atat patrund n celula cu o viteza mai mare. Termeni utilizati n relatie cu permeabilitatea bistratelor lipidice : o Coeficientul de permeabilitate este raportul dintre fluxul (J, cantitatea de substanta ce traverseaz suprafaa membranei n unitatea de timp, -2 -1 molcm s ) i diferenta de concentraie (c, a substanei de pe ambele -3 fete ale membranei, molcm ) astfel : P = (cm/s) ; o Coeficientul de difuzie D este direct proportionala cu coeficientul de 2 permeabilitate P i cu grosimea membranei x : D =P (cm /s)

o Coeficientul de partitie (Kp) reprezint raportul de distributie a substanei intre membrana (c ) i solutie (c) : Kp = o Daca integram cele trei ecuatii de mai sus pentru a le aplica unei membrane lipidice bistratificate, obtinem urmtoarea relatie : P = , coeficientul de permeabilitate fiind produsul dintre coeficientii de partitie i difuzie n membrana, impartit la grosimea membranei Cea mai importanta substanta neelectrolitica cu molecula mica este apa. Membranele biologice sunt partial permeabile pentru apa care traverseaz bistratul lipidic prin difuzie libera (avand un coeficient de permeabilitate de 10 -10 cm/s). Difuzia libera este un proces pasiv, care nu necesita consum de energie. Exista cazuri n care circulatia apei de o parte pe alta a membranei este controlata de ctre celula, prin intermediul aquaporinelor (proteinecanal pentru apa) din membrana eritrocitelor (hematii sau globule rosii din sange).
-3 -4 m

In ceea ce priveste electrolitii, masuratorile au evideniat gradul ridicat de impermeabilitate a membranelor lipidice artificiale pentru cationi (cu coeficienti de permeabilitate de cca 10 12 -13 -10 cm/s). Prezenta proteinelor n membranele naturale determina o crestere considerabila (de pn la 1000 de ori) a permeatiei ionilor. Acest lucru dovedeste implicarea proteinelor n transportul electrolitilor, transport care nu se mai realizeaz n mod domi nant prin difuzie pasiva ca n cazul apei, ci prin transport activ. Principala bariera n calea difuziei pasive a ionilor o constituie cel mai probabil interiorul hidrofob al bistratului lipidic. Cresterea temperaturii urmata de o fluidizare mai pronuntata a membranelor lipidice artificiale determina i o crestere a permeabilitatii pentru ioni. Pe de alta parte, anionii sunt mult mai permeanti decat cationii datorita potentialului de dipol care este pozitiv i care favorizeaza trecerea prin scaderea energiei de transfer al anionilor. Cel mai permeant anion anorganic este Cl din motive inca discutate. + In privinta protonilor (H ) respectiv a ionilor hidroxil (HO ), s-a constatat ca n membranele -4 -6 artificiale acestia prezint proprietati de permeare apropiate cu ale apei (P=10 -10 cm/s) n funcie de compozitia lipidic. In schimb, membranele naturale prezint o permeabilitate i -3 mai mare (10 cm/s) fapt care indica din nou implicarea proteinelor n transportul acestor ioni. Difuzia simpla (a apei) are o contributie eseniala la realizarea izotonicitatii celulelor n raport cu mediul extern. 3.2.2. Transportul mediat de structuri speciale Transportul diferitelor substane prin membrana celular poate fi mediat de o serie de molecule numite canale i transportori. Daca transportul nu necesita consum de energie, decurge n sensul gradienilor electrochimici, atunci se numeste transport pasiv (ex. difuzia
6

simpla i difuzia facilitata). n schimb daca transportul reclama consum de energie, i se desfasoara impotriva gradientului chimic sau electric, se numeste activ. Difuzia facilitata Unii compui precum apa dar i alti compui neelectrolitici precum glicerolul sau ureea, protonii, ionii hidroxil i ntr-o foarte mica masura anionii i cationii, pot difuza liber prin bistratul lipidic. Exista ns i alte cai pasive, neconsumatoare de energie, prin care se realizeaz transportul substanelor de o parte i alta a membranei, n sensul gradientilor de concentraie, i anume prin intermediul ionoforilor i a proteinelor-canal. Ionoforii sunt polipeptide din categoria antibioticelor capabili de a realiza trecerea selectiv a unor ioni prin membrane lipidice. Ionoforii incapsuleaza de obicei ionii printr-un proces de ciclizare sau semiciclizare i transporta prin membrana conform gradientului electrochimic, printr-un proces de dute-vino intre fetele membranei. Exemple de ionofori ciclici i ionii + + + transportati sunt : valinomicina (K ) i nigericina (K i H ). Alti ionofori sunt capabili de transportul ionilor prin asamblarea lor sub forma de canale sau pori membranari (gramicidina, nistatina, amfotericina). Ionoforii sunt ns substane de origine artificiala i au semnificatie experimentala, n studiul fenomen elor de transport la nivelul membranelor. O aplicatie practica, direct resimtita de noi este efectul antibiotic al acestor ionofori, prin permeabilizarea totala a celulelor bacteriene patogene, cu consecinte letale pentru acestea (dezechilibru ionic poate fi fatal celulei). O alta categorie de molecule implicate n difuzia facilitata a ionilor i apei este cea a proteinelor-canal. Ei sunt transportori naturali prezenti n membrane i care poti fi operati n cateva moduri : a)Canale operate de voltaj (voltage-gated channels), se deschid sau inchid ca raspuns la o schimbare a potentialului electric transmembranar. n aceasta categorie intra + + + canalele de Na , K i Ca din membranele excitabile (din muschi i sistemul nervos). b)Canale operate chimic care raspund unui stimul chimic (hormoni sau neurotransmitatori). Aceste canale se gasesc la nivelul membranelor postsinaptice din jonctiunile neuromusculare. c)Canale care nu sunt reglate de un factor anume i canale care sunt operate fizic (de exemplu sub aciunea presiunii osmotice). Unii cercetatori le incadreaza n categoria porilor deoarece nu sunt considerate canale propriu-zise. In concluzie, functia majora a canalelor ionice este de a facilita si de a regla pentru o foarte scurta perioada de timp, miscarea ionilor in sensul gradientului de concentratie stabilit initial de o parte si alta a membranei plasmatice (celulare) sau membranei organitelor intracelulare; aceasta disipare temporara a gradientului ionic determina o perturbare a functiilor celulare sau apare ca o necesitate de folosire predominanta a canalelor ionice pentru traducerea semnalelor si transferul de informatie (ex. la nivelul sinapselor nervoase).
7

pe

O a treia categorie de molecule care mediaza transportul pasiv al substanelor este cea a proteinelor-transportor (carriers sau "carausi"). Ele realizeaz trecerea unidirectionala n sensul gradientului chimic (pentru o specie neutra) sau electric (ioni) a unei singure substane (transport uniport). Din punct de vedere enzimatic, difuzia facilitata mediaa de transportori are o cinetica de tip Michaelis-Menten, fiind caracterizata de o viteza maxima (Vmax) i o constanta Michaelis (KM) spre deosebire de difuzia simpla care are o cinetica liniara . Exemple de transportori pasivi de tipul proteinelor-caraus sunt transportorul glucozei din membrana eritrocitara i transportorii unor aminoacizi din membrana bacteriana.

Cinetica difuziei simple i facilitate Difuzia facilitata a glucozei n care proteinacaraus adopta conformaionale mai multe stari

3.2.3. Transportul activ

Cand transportul unei substane este dependent de transportul altei substane, afirmam ca transportul este cuplat. Exista dou categorii de transport cuplat: antiport (contratransport sau difuzia de schimb, substanele sunt transportate n sens opus) i simport (cotransport, ambele specii chimice sunt transportate n acelasi sens) Teoretic, transportul cuplat poate fi pasiv ca n cazul unor ionofori care realizeaz de exemplul contratransportul K /H (nigericina). n realitate, n membranele naturale vii, diferenta (gradientul) electrochimic este mentinut prin procese consumatoare de energie, iar simportul sau antiportul unor compui n sensul gradientului electrochimic este posibil numai n condiiile n care celula mentine activ acest gradient. n acest caz putem spune ca transportul este cuplat secundar cu energia (transport activ secundar). Pe de alta parte, o serie de transportori proteici realizeaz procese de transport cuplate direct cu consumul de energie (in speta cu hidroliza legaturilor macroergice ale ATP). n acest caz transportorii sunt cuplati primar cu energia (transportori activ primar sau pompe primare).
+ +

3.2.3.1. Transportul activ primar In transportul activ primar sunt implicate proteine care cupleaza translocarea unei substane (ioni sau molecule), impotriva gradientului chimic, cu o sursa de energie. Aceste surse de energie pot fi : 1. Hidroliza ATP, iar n acest caz transportorii proteici se numesc "pompe (ionice) activate de ATP". Astfel de pompe cuplate cu activitatea ATP hidrolazica (ATPazica) sunt exemplificate cel mai bine de Na -K -ATPaza, care funcioneaz ca transportor activ al ionilor de Na dintr-un compartiment intracelular (cu concentraie mica de Na ) spre compartimentul extracelular (cu concentraie ridicata de Na ) la schimb cu ionii de K care sunt translocati dinspre o concentraie redusa din fluidul extracelular spre o
+ + + + + + +

concentraie de K ridicata din compartimentul intracelular (citosolic). Aceasta pompa este una dintre sursele majore de mentinere a potentialului electrochimic transmembranar. 2. Razele luminoase. Proteinele a caror funcie transportoare este energizata sub aciunea luminii se numesc pompe (ionice) activate de lumina. Pompele activate de lumina se intalnesc n membranele unor bacterii (de exemplu proteinele numite halorodopsina i bacteriorodopsina). Pompele ATPazice Transportorii primari de tipul ATPazelor indeplinesc roluri vitale pentru celula i sunt raspanditi n toate organismele vii (procariote i eucariote: celule vegetale i animale
9

deopotriva). Pompele activate de ATP pot fi impartite n patru clase n funcie de caracteristicile lor structural-functionale: P-ATPaze, V-ATPaze, F-ATPaze i proteine de tip ABC. A. P-ATPazele sunt o clasa de transportori inruditi genetic i structural. Ele includ + + + + antiportorul Na -K -ATPaza (al carui rol a fost explicat mai sus), antiportorul K -H ATPaza (implicat n generarea aciditatii din stomac prin transportul de protoni spre + exteriorul celulei, n cavitatea stomacala, la schimb cu ionii de K care patrund n celula) 2+ i Ca -ATPaza (prezenta n membrana celular i membrana reticului endoplasmic, 2+ transporta ionii de Ca din citosol spre exteriorul celulei sau spre interiorul RE, 2+ mentinand concentraia Ca din citosol la un nivel redus, astfel ca acesti ioni pot actiona ca semnale celulare). P-ATPazele sunt astfel denumite (P) deoarece translocarea ionilor de o parte pe alta a membranei implica o modificare temporara, covalenta, a proteinei, cu transferul fosfatului de pe ATP la gruparea carboxilica a acidului glutamatic (Glu) sau aspartic (Asp) din situsul activ. Se formeaza o legtur cu energie inalta. ntr-o etap ulterioara, fosfatul anorganic (Pi) este eliberat, la fel i ionul, proteina revenind la starea initiala. Pentru ca aceste pro teine adopta dou stari conformaionale diferite (denumite E1 i E2), ele au mai fost numite i E1.E2.ATPaze. + + Mai jos va fi detaliaa structura i functionarea antiportorului Na -K -ATPaza: Na+-K+-ATPaza Este un complex proteic membranar larg raspandit n celulele eucariote. Se estimeaza ca circa 25% din totalul ATP citosolic din celulele umane n repaus este consumat de pompele de sodiu n vreme ce n celulele nervoase acest procent atinge 70% din ATP total. + + Na -K -ATPaza este un tetramer compus din patru subuniti, dou subuniti alfa (~113 kD) care sunt responsabile pentru transportul propriu-zis al ionilor i de legarea ATP, continand situsul de fosforilare, i dou subuniti mai mici, beta (~35 kDa). Subunitile beta sunt glicoproteine necesare activitii complexului, facilitand localizarea membranara i activarea subunitilor alfa . Transportul cationilor decurge prin intermediul unui ciclu de modificri conformaionale datorate fosforilarii de la nivelul situsului activ din subunitatea alfa: + Pompa cu ATP legat (starea conformaionala E1), capteaza 3 ioni de Na de pe fata citosolic. ATP este hidrolizat, fosfatul este transferat unei grupri carboxil din situsul de fosforilare aflat pe fata citosolic a pompei, cu eliberare de ADP. Prntr-o modificare conformaionala (starea E2) a carui mecanism este inca incert, + pompa expune ionii de Na pe fata extracelular, unde ei sunt eliberati. + Pompa leag 2 ioni de K din mediul extracelular, iar subunitatea alfa este defosforilata. + ATP se leag din nou iar pompa se reorienteaza eliberand ionii de K n citosol. + Cu ATP legat de subunitatea alfa, pompa (E1~ATP) este pregatita s lege ionii de Na iar ciclul se repeta.

10

B. V-ATPazele au fost initial identificate la eucariote i mai exact, n membrana vacuolelor (V) din celulele vegetale. Ulterior V-ATPazele au fost descrise i la bacterii. Ele funcioneaz ca pompe primare ce transporta protoni (in majoritatea cazurilor) sau ioni de + Na . Ele contribuie la realizarea gradientilor transmembranari de protoni. C. F-ATPazele se deosebesc de celelalte pompe ATPazice prin faptul ca sunt capabile nu numai de hidroliza ATP ci i de sinteza ATP, reprezentand enzime care contribuie la procesul de fosforilare (F) oxidativ (sinteza ATP cuplata cu respiratia). F-ATPazele sunt prezente la eucariote, exclusiv n membrana mitocondriala i cloroplastidiala interna, n membranele bacteriilor i arhebacteriilor (unde poarta numele de A-ATPaze). Desi funcia principala este de a genera ATP pe seama gradientului electrochimic transmembranar susinut n urma respiraiei, la unele bacteriui funcia s este predominat hidrolazica, generand potential electrochimic pe baza consumului de ATP. n laborator (in vitro) FATPazele pot functiona n ambele directii depinzand de condiiile experimentale.

11

D. Proteinele transportoare de tip ABC ("ATP-binding Cassette) au fost relativ recent descoperite i reprezint o clasa de proteine localizate atat n membrana plasmatic cat i n membranele organitelor celulare. Ele mediaza translocarea unor substrate variate: ioni, molecule organice (lipide, acizi biliari, conjugati glutationici i glucuronici, peptide mici), compui de sinteza (medicamente, droguri). Majoritatea proteinelor ABC utilizeaz energia furnizata de hidroliza ATP (transport activ) ns unele pot forma canale membranare specifice (de exemplu proteina CFTR, reglatorul de conductanta transmembranara al fibrozei cistice care este un canal de clor). Aceste proteine sunt prezente la toate organismele vii, de la bacterii la om (din cele peste 1000 de proteine ABC identificate, 48 sunt tipic umane). Mutatii ale genelor ce codific aceste proteine ABC au fost asociate cu numeroase maladii genetice (ex. fibroza cistica). Avand posibilitatea de a lega i transporta medicamente din i inspre interiorul celulei, proteinele ABC sunt raspunzatoare pentru esecul majoritatii tratamentelor medicale asupra bolnavilor de cancer care manifesta rezistenta la o serie de substane citotoxice (utilizate n chimioterapie), n rezistenta unor forme de malarie, n dificultatea tratarii SIDA. Aceste proteine ABC capabile de transportul medicamentelor i apariia rezistentei la tratamentele medicamentoase se numesc proteine MDR (Multi-drug resistance). Un alt rol atribuit transportorilor de tip ABC este de facilitare a miscarii flip-flop (difuzie transversala) a lipidelor membranare i de aceea aceste grup de proteine ABC se mai numesc flipaze dependente de ATP. n general, aceste translocaze de lipide transporta lipide din stratul intern, pe fata extern a bistratului membranei cuplat cu transportul altor compui (acizi biliari, medicamente). Structura tipica a unei proteine de tip ABC const din cel puin 2 domenii transmembranare (TMD, Transmembrane domains) i minimum 2 domenii de legare a ATP (ABC). Regiunile TMD ancoreaza proteina n membrana formand un por prin care trec o varietate remarcabila de substane Domeniul de legare al ATP este orientat spre fata citoplasmica i la
12

nivelul ei se elibereaza energia ATP. Nu se cunoaste modalitatea prin care energia este convertita de situsul ABC pentru a fi utilizat n transport i nici mecanismul exact al transportului. Structura transportorilor de tip ABC n sectiune transversala (A) i dispunerea peptidelor n spatiu (B)

Transportul activ secundar Transportorii activi secundari cupleaza miscarea unei substane impotriva gradientului de concentraie la schimb cu transportul altui ion n sensul gradientului sau de concentraie. Transportul activ secundar este intotdeauna un proces de co-transport: fie de tip simport (ex. + + + + simportorii de Na /glucoza i Na /aminoacizi) sau antiport (ex. antiportorul Na /H ). Activitatea acestor transportori nu este, asadar, direct energizata de ATP ci indirect, prin functionarea unor pompe primare de ATP care genereaza gradienti electrochimici. Acesti gradienti constituie apoi motorul pentru transportorii secundari. Cinetica transportului activ secundar este similara cu cea a difuziei facilitate. La concentraii foarte mari de substrat, transportul este franat de lipsa unui numr suficient de proteine capabile s lege substratul existent. Dou exemple importante merita s fie amintite aici: Simportorul Na+/glucoza Transportorii secundari ai hexozelor sunt proteine transmembranare localizate n principal n celulele intestinale i renale. O semnificatie deosebita o au transportorii hexozelor (glucoza, galactoza) de la polul apical al celulelor din invelisul inestinal intern. Simportorul Na /glucoza (prescurtat, SGLUT) faciliteaza preluarea specifica a unei molecule de glucoza (si galactozei) din lumenul (cavitatea) intestinal(a) unde monozaharidele apar ca urmare a procesarii digestive a hranei.
13
+

Glucoza este transportata din exteriorul celulei spre interior, unde concentraia acesteia este mult mai mare (impotriva gradientului de concentraie) la schimb cu 2 ioni de sodiu. Acest transport este posibil numai cu consum de energie iar forta motrice a functionarii simportului este gradientul chimic de Na stabilit n urma functionarii pompelor primare dependente de ATP .Glucoza este ulterior descarcata n sange de unde ajunge la toate celulele organismului, asigurand nutritia lor. Antiportorul Na+/H+ O parte din echilibrul ionic al celulelor este mentinut i cu ajutorul unei clase de proteine + + care transporta ionii de sodiu la schimb cu protoni. Acestia sunt antiportorii Na /H (sau prescurtat Nha) care sunt prezenti n membrana plasmatic a celulelor bacteriene, l a celulele vegetale i animale. Forta motrice pentru functionarea acestor antiportori il reprezint gradientul de pH generat n urma activitii lantului respirator sau n urma functionarii unor + pompe primare de H . Astfel, 2 protoni sunt introdusi n citosol (in sensul gradientului de concentraie) la schimb cu 3 ioni de sodiu care sunt expulzati impotriva gradientului de concentraie. Acest antiport are o semnificatie deosebita n cursul adaptarii la condiii saline, cnd concentraia de saruri (NaCl sau NaHCO3/Na2CO3) din mediul extern este foarte mare. Celula bacteriana i vegetala au tendinta de a mentine concentraia intern de ioni de sodiu n limite normale tocmai prin activitatea intensa a acestor antiportori. + + In celulele animale, antiportorii de Na /H sunt distribuiti predominant la nivelul polului apical al celulelor renale implicate n formarea urinei. Aceste celule au capacitatea de + a recupera Na din urina (la nivelul membranei apicale) printr-un mecanism activ secundar + + de simport Na /H . Preluarea sodiului este posibila datorita aciditatii mediului intern celular care constituie motorul de deplasare a ionilor de sodiu spre interior (impotriva gradientului de concentraie) .Ionii de sodiu sunt mai departe transportati spre sange pentru a + se asigura tonicitatea acestuia prin polul bazal printr-un antiportor secundar Na /HCO3 . Mecanismele de transport ale Na , K , H , apei, glucozei sunt ns mult mai subtile la acest nivel, celulele renale avand capacitatea de a orienta migrarea acestor compui pentru asigurarea unui echilibru chimic, electric i de pH intre sange i urina . Orice dezechilibru genetic i metabolic la acest nivel declanseaza boli ale rinichiului numite nefropatii i boli ale sistemului cardiovascular (ex. hipertensiune).
+ + + +

14