NUTRI{IE

Hibridizarea fluorescent/ in situ (FISH)

Hibridizarea fluorescenta in situ

(FISH) este o tehnic/ de citogenetic/ molecular/ utilizat/ \n scopul
identific/rii anomaliilor cromozomiale, numerice ]i structurale (care nu
pot fi detectate prin cariotipare).
Principiul acestei metode const n ataarea la
secvena-int a unei sonde de ADN monocatenar
(de circa 40 kb), marcat fluorescent, pe baza complementaritii, de o secven-int a unui cromozom. Hibridizarea sondei cu ADN-ul celular este vizualizat la microscopul cu fluorescen echipat cu
filtre de excitaie i emisie, ceea ce permite citirea
semnalelor specifice zonei-int. Se numr i se
analizeaz semnalele prezente n o sut de celule
(de ex., trei semnale fluorescente specifice pentru
cromozomul 21 indic sindromul Down).
Tehnica FISH permite detectarea mozaicismelor,
identificarea rearanjrilor cromozomiale complexe.
Mai multe sindroame dismorfice (sindromul
Williams, Prader Willi, Angelman, Di George) produse de microdeleii sau microduplicaii, suspectate
clinic, imposibil de observat prin tehnicile citogenetice convenionale, pot fi evideniate prin FISH metafazic. ntruct aceast metod presupune ca prim
etap de lucru obinerea unor culturi celulare (limfocite din snge periferic sau amniocite recoltate prin
amniocentez n sptmnile 15-17 de sarcin), rezultatul investigaiei este obinut n dou sptmni.
FISH-ul interfazic permite punerea n eviden a
anomaliilor numerice, detecia sexului genetic ntr-un

14

FISH interfazic prezenta a trei semnale

roii indica trisomia 21 (Down)

FISH metafazic Prader Willi del (15)

(q11-q13)
timp scurt (48-72 h). Se realizeaz pe nuclei interfazici fr s fie nevoie de efectuarea de culturi
celulare. Se folosesc sonde de ADN corespunztoare regiunilor centromerice ale cromozomilor
18, X, Y (CEP18, CEPX, CEPY), respectiv sonde
locus specifice pentru cromozomii 13 i 21
(LSI13, LSI21). Metoda este mai puin informativ
n cazul contaminrii cu celule materne (comparativ cu alte tehnici).
Analiza FISH este o metod specific, performant, dar laborioas, care necesit celule
intacte; nu se substituie celorlalte metode de
analiz cromozomial i are indicaii foarte precise. FISH-ul interfazic este indicat a fi folosit ca
test de screening rapid atunci cnd exist semne
de alert ecografic sau biochimic (dublu test,
triplu test), iar ulterior se recomand o evaluare
citogenetic complet.

Nr. 99
13 - 26 ianuarie 2010