1.

4 Aspectele economice ale pigmenților din plante

Oamenii folosesc pigmenții extrași din plante încă de la începutul istoriei. Cele mai
cunoscute aplicații ale pigmenților precum henna pentru tatuare și chartamin , indigo și alți
pigmenți pentru a oferi strălucire hainelor. De exemplu, antrachinonă, indigoizii ai
flavonoidele au fost descoperite în secolul IV în textilele egiptene (textiles (Orska-Gawrys et
al., 2003)). Înainte , extractul de chartamin ( din șofrănel , Carthamus tinctorius) se folosea
pentru a vopsi veșmintele mumiilor, fiind raportate și existând și evidente scrise a folosirii
oamenilor cu 4600 de ani în urmă a indigoului (Gilbert & Cooke, 2001).
În plus, un lucru essential în fabricarea îmbrăcămintei încă din timpul societății a fost
tabacirea pieilor de animale cu fenoli polimerici, această utilizare fiind înregistrată de 10.000
de ani (Bohm, 1998).
Astăzi, încă există tăbăcării care efectuează pieilor tratamente și vopsire cu pigmenți din
plante în aceeași măsură în care au fost făcute de secole (Fig. 1.2).
Din punct vedere economic, dând la o parte rolul esențial al clorofilelor și carotenoizilor în
fotosinteză, contribuția cea evidentă a pigmenților din plante este pentru agricultură alegerea
consumatorilor de fructe proaspete, legume și produse floricole. Cu toate acestea, impactul
pigmenților non-fotosintetici este de multe ori mai considerabil . De exemplu, o importantă
economică o au și aroma și culoarea componentelor din ceaiuri, vinuri și alte băuturi , precum
colorantii naturali alimentari pentru sănătatea animalelor rumegătoare că și agenți de apărare a
plantelor și pentru ameliorarea luminii UV dăunătoare. Gamă mare de flavonoide incolore și
alcaloizi produse de plantă sunt adesea cheia în apărarea plantei, iar biosinteză acestor
compuși, importantă lor în apărarea plantei, agriculturii și industriei farmaceutice au fost larg
prezentați în"Recenzii anuale despre plante" (Wink, 1999a, 1999b).
Fig1.2 Vopsirea tradițională a pieilor, incluzand utilizarea multor compusi derivati din plante,
în orașul marocan Fez. (Fotografie facuta de autor, în 2002.)

1.4.1. Coloranți alimentari naturali

Calitatea produselor alimentare este mai întâi evaluată prin caracteristicile sale vizuale, cum
ar fi culoarea. Alimentele proaspete sunt adesea foarte colorate de grupurile de pigmenți din
plante, de exemplu, carotenoide și antociani în sectorul fructelor și clorofilă în legumele verzi.
Cu toate acestea, pentru produsele alimentare prelucrate pigmentarea este adesea pierdută în
timpul prelucrării, iar impactul vizual al produsului final este imbunătătit prin utilizarea
colorantilor adăugati. Pană la descoperirea colorantilor sintetici la mijlocul secolului al XIX-
lea, industria alimentară se bază exclusiv pe coloranți alimentari naturali. Deși utilizarea lor
în multe aplicații a fost inlocuită de coloranți sintetici, în ultimii ani, a existat o revenire la
utilizarea de coloranți naturali, precum și un interes sporit în noi surse și imbunătătirea
performanțelor efectuatate în aplicațiile alimentare. Patru tipuri de pigmenți de plante sunt
utilizate pe scară largă că și coloranți: annatto, antociani, betalains (pigment din sfeclă) și
Curcumină (pigmentul principal de curcuma condiment).
Împreună cu derivate de pigment din instecte cochineale, ele reprezintă peste 90% din piață
colorantilor alimentari naturali (Hendry, 1996). Utilizarea clorofilei ca și colorant alimentar
este foarte limitat în comparație cu acești pigmenți, în principal datorită stabilitătii sale
scăzute în timpul procesării produselor alimentare sau ca răspuns la condițiile de lumină sau
aciditate în produsul alimentar final.
Pigmenții din plante utilizați că și coloranți în cantităti mici se numără carotenoidele,
xantofilă și luteină, Carthamus galben din petalele C. tinctorius, iridoide derivate din fructe
de Gardenia și derivații carotenoizi crocin și crocetin de Crocus sativus (șofran).
Unul dintre cei mai importanți coloranți naturali este caramelul, care este folosit pe scară
largă atât în industria alimentară și a băuturilor, în special în băuturile răcoritoare. Cu toate
acestea, deoarece nu este un pigment extras din plantă, fiind derivat direct din zahăr de
prelucrare, această nu este luat în considerare . Pigmenți de plante sunt, de asemenea
componente cheie ale condimentelor vândute în cantităti mari, în special boia de ardei (care
conține un amestec de carotenoide), turmeric și șofran.
În plus față de utilizarea lor ca și coloranți alimentari, există o utilizare extensivă a
extractelor de pigment sub formă de supliment pentru hrana animalelor. De exemplu,
carotenoidele, cum ar fi luteina sunt utilizate pentru păsările de curte / producția de ouă și
acvacultură. În plus, sunt utilizate cantități mari de pigmenți sintetici identici natural, în
special b-carotenul. Tipurile de pigmenții utilizați în diferite aplicații alimentare sunt
determinati de solubilitatea lor, și pentru pigmenți solubili în apă, comportamentul or la pH.
Antocianinele și betalains sunt solubile în apă, iar clorofila, curcumină și carotenoizii solubili
în ulei.
Annatto este unul dintre cei mai vechi coloranți cunoscuți utilizat pentru alimente, textile și
produse cosmetice. Se extrage din învelișul rasinos al semințelor arbustului tropical B.
Orellana. Specia apare , în salbaticiile tropicale din America de Nord și a fost folosită de
nativii americani din perioada pre-columbiana ca o sursă de pigment. Astăzi, în jurul de 7000
de tone de semințe sunt procesate anual de către industria pigmenților. Principalul pigment de
annatto este cis-bixină, un ester monometilic al acidului norbixină diapocarotenoic (Fig. 1.3),
și rezerve de galben pentru culoarea portocaliu. Este greu solubil în ulei și este utilizat în
principal în produse lactate și alimente pe bază de grăsime. Prezent în cantități mai mici in
pigmentul extras este un carotenoid solubil în apă, cis-norbixina, care poate fi, de asemenea,
generată prin tratament alcalin al bixinei (Britton, 1996).
Curcumina (Fig. 1.3) este pigmentul principal în condimentul curcumă, care este extras din
rizomii de Curcuma longa, un membru peren din familia ghimbir (Zingiberaceae), care a fost
cultivat în Asia de mai multe secole. Acesta furnizează culori puternice de galben și este, în
general solubil în ulei. Tradițional, curcuma a fost utilizată pentru colorarea și aromatizarea
mâncării; este încă folosită în cantități mari, în acest scop, precum și pe scară largă în o gamă
extinsă de alimente prelucrate. În jur de 300 000 de tone sunt produse anual în India, mai ales
ca și condiment cu o cantitate mică de preparare a curcuminei pure (Francis, 1996).
Antocienii sunt utilizati pe scară largă ca si coloranti in alimente. (Jackman & Smith, 1996).
Descrisi pentru prima data ca indicatori de pH, culorile antocianinelor variază foarte mult in
pH-ul produse alimentare, dar, în general sunt utilizate numai în alimentele acide și oferă
culoare roșie pana la albastru.

Fig. 1.3 Reprezentare schematică a majoritatii elementelor constitutive colorate ai celor

mai comuni coloranti pe bază de plante. Bixina este pigmentul principal al anato,
curcumina pigmentul principal în turmeric, malvidina 3,5-O-glucozida un reprezentant al
antocienilor obtinut din extract de struguri și betanină din extract de sfeclă roșie.
Deși sunt prezenti prin multe surse, extractele comerciale de antociani sunt predominant
extrase din speciile Vitis (struguri) / pielita fructelor de padure sau sedimente din butoi din
industria vinului, care este ieftin și în cantități mari. Aproximativ 10 000 de tone de pielita
de struguri sunt prelucrati anual in Europa rezultând aproximativ 50 de tone de antociani.
Cu toate acestea, deși în jur de 20 de antociani diferiti din struguri sunt cunoscuti, alimentele
comerciale comune conține în principal numai 3 și 3,5-diglucozitului de cianidina, delfinidina
și malvidina (Fig. 1.3). Acestea au stabilitate limitată a culorii în ceea ce privește pH-ul, și,
prin urmare sunt limitate în adaugarea lor in alimente..
Acest lucru a dus la cercetarea în surse mai complexe, și mai stabile, antocianii să se extindă
in cererile alimentare (Jackman & Smith, 1996; Giusti și Wrolstad, 2003; Schwarz et al.,
2003). Extracte comerciale sunt acum disponibile de la specii, precum Ribes nigrum (coacăz
negru), Sambucus nigra (soc) și Brassica oleracea (varza rosie). În plus, extrasele din
Raphanus sativus (ridiche rosie) și Solanum tuberosum (cartofi roșii) sunt potențiale surse
pentru a înlocui colorantul sintetic roșu Allura (Giusti și Wrolstad, 2003). Interesul in surse de
antociani a fost intensificat de dovezile cu privire la beneficiile aduse sanatatii de catre
antociani.
Sfecla roșie este principala sursă de coloranți alimentari, în principal betanină roșu (fig. 1.3)
și cantități mici de galben betaxanthin. În Europa 20 000 de tone de sfeclă roșie sunt
prelucrate anual pentru suc și extragerea de pigment, și betalainele pot cumula 2% de solide
solubile de sfeclă -(Jackman & Smith, 1996). Betalainele sunt pigmenți solubili în apă, fiind
instabile la caldura si lumina, sunt utilizate în principal în produsele alimentare valabilitate
scazuta care nu au nevoie de tratament termic ridicat.
În prezent, cei mai multi coloranti derivati din plante sunt obținuti direct din materialul
vegetal generate prin reproducere tradiționala a plantelor . Cu toate acestea, cantitatea
tipurilor de pigmenti din plante precum și variația structurală în fiecare tip, este afectată de
factori sezonieri și de mediu, ceea ce face disponibilitatea surselor sa fie variabilă. În plus,
sursa curenta este limitată in producerea tipului de pigment , în special pentru antociani.
Astfel, există un mare interes în aplicarea biotehnologiei asupra plantelor pentru obtinerea
de coloranti, atât pentru modificarea tipului de pigment produs și pentru dezvoltarea unor cai
alternative de producție. Până în prezent, cele mai multe de cercetari au fost cu privire la
metodologiile culturi de țesuturi, și modificarea genetică (GM) care nu a fost aplicată în
aceeași măsură în care se aplica pentru culturile alimentare și floricultură.
Fermentatiile microbiene au fost aplicate pentru productia de coloranti alimentari, incluzand
GM a tulpinilor de dezvoltare . Ea se bazează în principal pe pigmenți microbieni endogeni,
de exemplu producția de b-caroten în algele Dunaliella salina , pigmentul albastru ficocianina
în alge filamentoase albastre-verzi Spirulina platensis, și astaxantin în algele Haematococcus
pluvialis și drojdia Phaffia rhodozyma (O'Callaghan, 1996).
Recent, Bouvier și colab. (2003b) au raportat producerea bixinei apocarotenoid în
Escherichia coli. Producția de flavonoide în sistemele microbiene a fost de asemenea realizata
(Hwang și colab., 2003), dar până în prezent acest lucru nu a fost extins la flavonoidelor
colorate. Primul sistem de succes al biotehnologie pentru pigmenții derivati din plante a fost
producția de culturi celulare de plante din pigmentul shikonin naftochinonă. Sisteme de
culturi celulare de plante au fost, de asemenea, dezvoltate pentru betalaine (Strack și colab.,
2003) și antociani (Do¨rensburg & Knorr, 1996).
Cu toate acestea, producția comercială nu a avut loc pentru oricare dintre aceste grupuri de
pigmenti, în principal datorită economiei dintre producția biotehnologica în comparație cu
extracția culturilor de câmp. Aplicarea tehnicilor modificate genetic pot imbunatati
economia, permițând producția de pigmenți cu structuri proiectate pentru aplicații specifice
ale produselor alimentare. Aspecte negative ale utilizării tehnicilor de modificare genetica
includ necesitatea aprobarii reglementarilor suplimentare și incertitudinea de acceptare
publică a produselor modificate genetic.

1.4.2 Modificarea biosintezei de pigment în plantele transgenice

Disponibilitatea genelor biosintetice pentru cei mai multi pigmenti duin plante, platformele
precum și genele de reglementare pentru flavonoide, a permis abordari in modificarea
genetică pentru modificarea producției de pigment în plantele transgenice. Cartea se adresează
atât biosintezei și funcției pigmenților din plante și perspectivelor de modificare realizat de
caile lor biosintetice. Modificarea pigmentului prin biosinteza folosind tehnologii genetice pot
fi defalcate în câteva abordări majore: abolirea sau reducerea fluxului în secțiuni prin
orientarea genelor biosintetice cu construcții anti-sens / sens-suprimare; cresterea nivelui de
compuși ale cailor specifice supraproductiei activității de biosinteză endogena; redirecționarea
caii de a produce noi compuși prin introducerea de noi activități enzimatice; și schimbarea
unei cai reglementate folosind gene constructive pentru factorii de reglementare.
Toate aceste abordări au fost folosite cu succes pentru modificarea biosintezei, iar unele au
avut succes în modificarea cailor pigmentilor, în special carotenoide și shikonin. Până în
prezent, o cultură transgenica cu producție de pigment modificat este comercială - garoafe
care conțin transgene care permit acumularea de delfinidină – antociani derivați pentru
culoarea mov a florilor .(Lu et al., 2003).
Acest lucru este probabil să fie primul din multe astfel de produse ornamentale, după cum a
sugerat prin încercări de teren cel puțin o duzină de plante ornamentale modificate genetic cu
modificari pigmentare care au fost efectuate recent de către diverse companii de
biotehnologie, universități și institute de cercetare. Obiectivele sunt recoltarea culturilor de
flori, plante în ghiveci, ingrasamânt și specii de gradină.
Există, de asemenea, oportunități de modificare a culorii plantelor folosind gene ale non-
plantelor codul pentru activități biosintetice pentru pigmenții noi, dintre care unii sunt pe bază
de proteine. Există doar câteva exemple publicate de acest fel de abordări până în prezent, și
că sursa pigmenților nu este de origine vegetală, acestea sunt menționate doar pe scurt aici,
mai degrabă decât în principalele capitole ale acestei cărți. Proteina fluorescentă verde (GFP)
de la meduza Aequorea victoria a fost utilizată pe scară largă ca un marker molecular (Tsien,
1998; Stewart, 2001), și a existat un studiu privind producerea florilor GFP ca produse
ornamentale (. Mercuri et al, 2001) .

Studiile de mutageneză au generat variante GFP cu noi culori și îmbunătățirea fluorescentei

în plante ( Stewart , 2001 ) , și căutările pentru secvențele înrudite au condus la obtinerea unei
fluorescente rosii ( Campbell et al., 2002 ) . Într-adevăr , există o gamă largă de - GFP ca
cromofori pe baza de proteine din organismele acvatice ale phylum Cnidaria , care include
clasa Hydrozoa care conține A. Victoria .Grupul cel mai notabil dee proteine cromofore din
încrengătură furnizează culori strălucitoare în coral , în special pigmenții pocilloporin ( Dove
et al . , 2001) . Brugliera. (2002 ) au identificat proteine - GFP într-o gamă de organganisme
de recifi de corali ca posibile surse de gene care ar putea conferi culori plantelor , deși
rapoarte privind performanțele lor în transgenetică nu au fost încă publicate . De preferință ,
acești pigmenți ar oferi cu ușurință culoare în lumină vizibilă , fără a fi nevoie de surse de
lumina specială

În prezent, există un interes răspândit în aplicarea tehnicilor modificarii genetice la

îmbunătățirea atributelor de sănătate a culturii , prin schimbarea conținutului de pigment de
plante . Mai multe abordări au fost luate pentru a modifica biosinteza de carotenoide in
plantele alimentare , iar acestea sunt analizate în Capitolul 3. De notat special până în
prezent este linia " de aur Rice " dezvoltate pentru a avea niveluri mai ridicate de b - caroten
, un precursor de vitamina A ( Hoa și colab . , 2003 ) . Aceasta cercetare prezentate pe larg
în mass-media internațională , cu liderul de proiect , .