32.

EFECTUAREA EXPERTIZELOR ADN

- Analiza profilului ADN , in laboratoarele de specialitate se desfasoara prin doua

metode: metoda analizei amprentei genetice prin enzime de restrictie si metoda
reactiei in lant in fracmente de marimi diferite.

1. Analiza amprentei genetice prin enzime de restrictie

- In cazul utilizarii metodei prin enzime de restrictie, este necesara o cantitate suficienta
de ADN ce este supusa izolarii si purificarii cu ajutorul unor detergenti si enzime cu
mare specificitate cum ar fi proteinaza K2; cea de-a doua etapa o costituie decuparea
ADN -ului cu ajutorul unor enzime de restrictie, in fracmente de marimi diferite;
urmatoarea etapa consta in trasferarea de pe gel pe o membrana de nailon urmata de
denaturarea adn-ului ce consta in ruperea punctilor de hidrogen dintre bazele
complementare si apoi reunirea ADN.
- -rezultatul analizei il contituie vizualizarea fragmentelor adn sub forma unor benzi
intunecate, benzile obtinute pot fi folosite pentru comparatie cu cele rezultate prin
prelucrarea probelor ridicate de la fata locului;
2. Analiza prin metoda reactiei in lant a polimerazei
- Avantajul acestei metode fata de metoda 1 consta in sensibilitatea acesteia , putandu-
se folosi o singura molecula pentru a fi amplificata;
- Metoda consta in amplificarea in vitro a secventelor adn prin cicluri de denaturare adn
, fixarea primerilor si extinderea cu polimeraza adn.
- Este rapida, simpla,necesita fracmente de dimensiuni mici si permite reanalizari
multiple