Evaluarea morfologica a embrionilor

Conf Dr Ștefn Gregore CIORNEI

 Ce este embrionul?

 Embrionul este o ovulă (ou) fecundată de

către spermatozoid (Zigot)

 Este un nou organism în primele stadii viața

si de dezvoltare
100x BF. Ovula nefecundate (ONF) au fost colectate în ziua 7 postestru.
Diferențierea acestui ONF de o morula este că membrana vitelină (MV) a unui ONF este netedă în jurul perimetrului
citoplasmei, spre deosebire de o morula care are mici denivelări (blastomere) care ies din suprafața embrionului
propriu-zis. Un ONF este o entitate cu o singură celulă, iar o morula este multicelulară.
Acest ovul are evident o singură celulă cu o membrană plasmatică foarte netedă (VM).
• Evaluarea embrionilor se face dupa combinarea a doua criterii:

• I. Stadiului de dezvoltare
coduri de clasificare 1-9

• II. Aspectul structural in ansamblu

Coduri de calitate 1-4

– 1 + 2 = codul de calitate a embrionului este o combinatie intre cele doua

– Ex 7-1, 5-2, 5-1 …

De ce clasificăm embrionii !?
 I. Stadiului de dezvoltare
– Evaluarea se face conform stadiului de dezvoltare atins:

» Stadiul 1: ovocită nefertilizată;

» Stadiul 2: 2 la 12 celule;
» Stadiul 3: Morulă timpurie;
» Stadiul 4: Morulă;
» Stadiul 5: Blastocist timpuriu;
» Stadiul 6: Blastocist;
» Stadiul 7: Blastocist expandat;
» Stadiul 8: Blastocist eclozionat;
» Stadiul 9: Blastocist expandat.
 Stadii embrionare pe parcursul segmentării

Stadiul timpuriu al clivajului embrionar - cuprinde procesele de segmentare de la 0 la 8

blastomere
examenul morfologic: numărul de celule prezente, forma, simetria, mărimea acestora.
Stadiul de morulă tânără: încadrarea se face pe baza aspectului blastomerelor şi a
numărului lor
În acest stadiu, blastomerele se prezintă sub forma unor aglomeraţii sferice ce
păstrează conturul individual al fiecărei celule, spaţiul perivitelin fiind bine evidenţiat
Stadiul de morulă compactă: încadrarea se face pe baza aspectului compact
al blastomerelor, fapt ce determină imposibilitatea delimitării celulelor
unele de celelalte. În acest stadiu, embrionul ocupă 60 – 70% din spaţiul
delimitat de membrana pelucida.
Stadiul de blastocistul tânăr (timpuriu) se bazează pe evidenţierea apariţiei
cavităţii lecitocelice care ocupă 50 – 60% din spaţiul intern al zonei pelucida
Se poate observa o uşoară diferenţiere între trofoblast şi ICM care apar mai
compacte.
Stadiul de blastocist matur: se face pe baza observării
trofoblastului care devine mult mai vizibil, ICM devine mai
compactă, de culoare închisă
 ZP

CL

ICM
Stadiul de blastocist expandat: extensia blastocistului, cu modificarea
diametrului de la 150 – 190 microni la 1,2 mm
ZP se subţiază foarte mult ajungând la o treime din grosimea anterioară de 1–
15 microni, fapt datorat sporirii numărului de celule (de la 70 la 180).

✓Blastocist eclozionat: zona rupta partial sau

total și ecloziunea
 Stadiul embrionar Zile estimativ in vivo
Vacă Bivol
Morula 5 4
Morulă compactă 6 5
Blastocist tânăr 7 6
Blastocist 7 6
Blastocist expandat 8 7
Blastocist eclozionat 9 7.5 - 8
 Aspectul structural in ansamblu

– Criterii de calitate de urmărit :

• Regularitatea formei embrionului;
• Gradul de compactare a celulelor;
• Uniformitatea blastomerelor;
• Culoarea şi textura citoplasmei;
• Diametrul embrionului;
• Prezenţa celulelor desprinse;
• Regularitatea zonei pelucida
• Prezenţa de vezicule în citoplasmă.
Criteriile de evaluare a embrionilor

Aspectul
Membranei
Viteline

Aspectul
Trofoblastului
TB

Aspectul
Embrioblastului
ICM

Aspectul
Cavitatii
lecitocelice
 Clasificarea embrionilor

EMBRIONI EXCELENŢI (Clasa I);

perfect sferici, simetrici;

cu blastomere poligonale uniforme;

vezicule citoplasmatice uniforme;

citoplasma agranulară;

spaţiul perivitelin liber, cu diametru regulat.

EMBRIONI BUNI (clasa 1);

sunt asemănători cu cei din clasa I, dar sunt asimetrici, cu

unele celule separate de masa compactă.
EMBRIONI MIJLOCII (SLABI) (clasa 2);
cuprinde embrioni retardaţi cu o zi, cu blastomere
sferice, de mărime variabilă, uneori putându-se
evidenţia vezicule intracelulare în număr redus.
EMBRIONI FOARTE SLABI (clasa3);
cuprinde clasa embrionilor cu dezvoltare retardată
cu 2 zile, cu limitele celulare nedistincte.
EMBRIONI NECORESPUNZĂTORI (dEGENERAT) (clasa 4);
embrioni degeneraţi, cu vacuole intercelulare, zona
pelucidă ruptă, uşor deformată.
– Conform acestor criterii, de calitate, embrionii se
clasifică în (conform IETS):
» Gradul 1: Excelent sau Bun; (conservabili)
» Gradul 2: Acceptabil;
» Gradul 3: Slab;
» Gradul 4: Mort sau degenerat.
EVALUAREA FORMAȚIUNILOR EMBRIONARE
RECOLTATE IN ZIUA 7 DUPA FECUNDATIE
(PRIN FLUSHING)

NOMENCLATOR
40x câmp luminos
Acesta este o ovoita
nefecundată ONF.
Ooplasma nu mai este
condensată și învelită în
interiorul unei membrane
viteline intacte.
Prin urmare, în esență nu există
spațiu perivitelinic. Citoplasma
(ooplasma) a început să
degenereze și apare granular.
Aceste granule minuscule nu
trebuie confundate cu
blastomerele
100x
La această magnificatie se
poate vedea o zonă liberă
(vezi săgeata) care ar putea f
confundată cu o cavitate
blastocoelă.
Cu toate acestea, aceste
ovule sunt o structură
unicelulară care nu conține
blastomere sau celule
trofoblaste.
Dacă placa Petri ar fi fost
zdruncinată, acest ONF ar
apărea turtit sau nesferic.
200x. ONF.
Membrana vitelină a
degenerat și s-a rupt.
Citoplasma a început, de
asemenea, să
degenereze, dând
ovulelor un aspect
granulat.
Este important să știm că
resturile celulare nu sunt
o grămadă de blastomere
minuscule.
Blastomerii sănătoși ar fi
mult mai mari într-un
embrion colectat în ziua 7
postestru și ar fi fuzionați
cu alți blastomeri dacă ar
fi în viață.
10x . Ambele sunt Onf de la
aceeași femeie donatoare.
Cel din stânga are O
citoplasma foarte sănătosa
(ooplasma), cu o membrană
vitelină foarte strânsă care îl
înconjoară.
Ovula din dreapta are
ooplasmă degenerată și
membrană vitelină.
Observați efectul patat al
citoplasmei.
Recoltate în ziua 7 postestru,
ONF- pot avea multe forme ș
aparențe.
400x .
ONF.
Ooplasma este
densă și acoperită
de o MV
sănătoasă și
intactă.
Există un corp
polar la ora 5 în
spațiul perivitelinic
(săgeată).
citoplasma pare a fi în curs de fragmentare în două bucăți distincte.
Există două zone de citoplasmă condensată (zone maro închis), una
de două ori mai mare decât cealaltă,
40x . Toate aceste formatiuni embrionare sunt ovocite Nefecundate
Câteva au citoplasma fragmentata (ooplasmă) (săgeți galbene), iar unul are
citoplasma degenerata (săgeată albastră).
 MORULA NORMALA

400x Etapa 4, clasa 1. Aceasta este o morula din ziua 7 aproape perfectă din punct
de vedere anatomic. Există foarte puține, blastomere extrudate în afara MV.
Factorul de diferențiere între acesta și un ONF este CRESTEREA blastomerilor din
acest embrion, determinând MV să fie neregulată, dar continuă și vizibilă.
O inspecție atentă a embrionului propriu-zis permite să vedeți o masă mare de
40x . Etapa 3 (earlymorula), gradul 1.
Există doar două celule moarte extrudate în această morula.
Acest embrion a fost colectat la 6,5 zile de la debutul estrului.
100x . Etapa 3, gradul 3. Ambii embrioni au fost colectați la 7,0 zile după estru.
Ambele sunt clasificate ca morule timpurii.
Embrionul superior are o masă mai bine definită de blastomeri fuzionați decât
embrionul inferior. Celulele rămase (în afara maselor condensate) sunt blastomere
extrudate.
 O celulă ar fi considerată extrudată sau nefuzionată /
moartă, dacă se pot vedea 360 de grade din diametrul său
exterior (membrana plasmatică).
400x Etapa 4, gradul 2.. Masa principală (în cerc - vezi diapozitivul
următor) are o VM foarte bine definită care acoperă un grup sănătos de
blastomeri bine contopiți.
În planul vizibil sunt două mari blastomere extrudate.
Rularea embrionului a dezvăluit încă două mai mici pe partea din spate.
100x. Etapa 5 embrion de gradul 1.
Blastocistul precoce a fost colectat în ziua 7 după debutul estului.
Observați prezența blastomerilor imediat în interiorul membranei viteline
provocând o umflătură neregulată sau o margine accidentată a MV.
Masa celulară internă plus blastocoele și VM sunt denumite în mod colectiv
embrionul propriu-zis. Comparați umflăturile de pe VM ale acestui blastocist
timpuriu cu VM foarte netedă, fără bombamente, ale ONFECUNDATE.
40x. Embrioni colectați de la o donatore superovulata la 8,0 zile de la
debutul estului.
Săgețile indică embrionii Etapa 7. Observați diametrul crescut și subțierea
zonelor lor. Compararea dintre o etapă 6 avansată și o etapă 7 de început
este subiectivă.
100x . # 1 = Etapa 7, clasa 1 (7-1). # 2 = 6-1, # 3 = 5-1, #
4 = 6-1. # 5 = 6-1, # 6 = 6-1, # 7 = 7-1 (se observă